共通のＴｏｌｌ様受容体を通じて媒介される細胞活性の選択的活性化
共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法が提供される。一般に、この方法はＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するアッセイを提供するステップと、ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するアッセイを提供するステップと、試験化合物を使用して各アッセイを実施するステップと、試験化合物が第２のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として、試験化合物を同定するステップとを含む。このような方法によって同定される化合物、このような化合物を含む医薬品組成物、およびこのような医薬品組成物を対象に投与することで病状を処置する方法もまた提供される。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
免疫反応調整剤（「ＩＲＭ」）としては、例えば抗ウィルスおよび抗腫瘍活性などをはじめとする、強力な免疫調節活性を有する化合物が挙げられる。特定のＩＲＭはサイトカインの生成および分泌を調節する。例えば特定のＩＲＭ化合物は、例えばタイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１などのサイトカインの生成および分泌を誘導する。別の例として特定のＩＲＭ化合物は、ＩＬ−４およびＩＬ−５などの特定のＴH２サイトカインの生成および分泌を阻害できる。さらにいくつかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制すると言われている（米国特許第６，５１８，２６５号明細書）。
【０００２】
特定のＩＲＭは、例えば米国特許第４，６８９，３３８号明細書、同第４，９２９，６２４号明細書、同第４，９８８，８１５号明細書、同第５，０３７，９８６号明細書、同第５，１７５，２９６号明細書、同第５，２３８，９４４号明細書、同第５，２６６，５７５号明細書、同第５，２６８，３７６号明細書、同第５，３４６，９０５号明細書、同第５，３５２，７８４号明細書、同第５，３６７，０７６号明細書、同第５，３８９，６４０号明細書、同第５，３９５，９３７号明細書、同第５，４４６，１５３号明細書、同第５，４８２，９３６号明細書、同第５，６９３，８１１号明細書、同第５，７４１，９０８号明細書、同第５，７５６，７４７号明細書、同第５，９３９，０９０号明細書、同第６，０３９，９６９号明細書、同第６，０８３，５０５号明細書、同第６，１１０，９２９号明細書、同第６，１９４，４２５号明細書、同第６，２４５，７７６号明細書、同第６，３３１，５３９号明細書、同第６，３７６，６６９号明細書、同第６，４５１，８１０号明細書、同第６，５２５，０６４号明細書、同第６，５４１，４８５号明細書、同第６，５４５，０１６号明細書、同第６，５４５，０１７号明細書、同第６，５５８，９５１号明細書、同第６，５７３，２７３号明細書、同第６，６５６，９３８号明細書、同第６，６６０，７３５号明細書、同第６，６６０，７４７号明細書、同第６，６６４，２６０号明細書、同第６，６６４，２６４号明細書、同第６，６６４，２６５号明細書、同第６，６６７，３１２号明細書、同第６，６７０，３７２号明細書、同第６，６７７，３４７号明細書、同第６，６７７，３４８号明細書、同第６，６７７，３４９号明細書、同第６，６８３，０８８号明細書、欧州特許第０ ３９４ ０２６号明細書、米国特許公報第２００２／００１６３３２号明細書、同第２００２／００５５５１７号明細書、同第２００２／０１１０８４０号明細書、同第２００３／０１３３９１３号明細書、同第２００３／０１９９５３８号明細書、および同第２００４／００１４７７９号明細書、および国際公開第０１／７４３４３号パンフレット、同第０２／４６７４９号パンフレット、同第０２／１０２３７７号パンフレット、同第０３／０２０８８９号パンフレット、同第０３／０４３５７２号パンフレット、同第０３／０４５３９１号パンフレット、および同第０３／１０３５８４号パンフレットで開示されるもののような、タンパク質、ペプチドなどの大型生体分子とは対照的な小型有機分子である（例えば分子量約１０００ダルトン未満、好ましくは約５００ダルトン未満）。
【０００３】
小型分子ＩＲＭの追加的な例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、および同第６，０２８，０７６号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号明細書で述べられるものなど）、特定のベンゾイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号明細書で述べられるものなど）、五員環窒素含有ヘテロ環に縮合した４−アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、同第６，０２８，０７６号明細書および同第６，３２９，３８１号明細書、および国際公開第０２／０８５９５号パンフレットで述べられるアデニン誘導体など）、および特定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ[４，５−ｄ]ピリミジン（米国特許公報第２００３／０１９９４６１号明細書で述べられるものなど）が挙げられる。
【０００４】
その他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大型生体分子が挙げられる。いくつかのＩＲＭオリゴヌクレオチド配列は、シトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、例えば米国特許第６，１９４，３８８号明細書、同第６，２０７，６４６号明細書、同第６，２３９，１１６号明細書、同第６，３３９，０６８号明細書、および同第６，４０６，７０５号明細書で述べられる。いくつかのＣｐＧ−含有オリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第６，４２６，３３４号明細書、および同第６，４７６，０００号明細書で述べられるもののような合成免疫調節構造モチーフを含むことができる。その他のＣｐＧが欠如したＩＲＭヌクレオチド配列については、例えば国際公開第００／７５３０４号パンフレットで述べられている。
【０００５】
その他のＩＲＭとしては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩（ＡＧＰ）などの生物学的分子が挙げられ、例えば米国特許第６，１１３，９１８号明細書、同第６，３０３，３４７号明細書、同第６，５２５，０２８号明細書、および同第６，６４９，１７２号明細書で述べられている。
【０００６】
免疫系の特定の側面を刺激し、ならびにその他の側面を抑制することで（例えば米国特許第６，０３９，９６９号明細書、および同第６，２００，５９２号明細書を参照されたい）、ＩＲＭは多くの疾患を処置するのに使用されても良い。例えばＩＲＭ化合物を使用して処置されても良い疾患としては、ヒト乳頭腫ウィルスによって引き起こされる外性器および肛門周囲疣贅、基底細胞癌、湿疹、本態性血小板血症、肝炎Ｂ、多発性硬化症、新生物疾患、乾癬、関節リウマチ、タイプＩ単純疱疹、およびタイプＩＩ単純疱疹が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０００７】
ＩＲＭ化合物は、サイトカインなどの特定の免疫系調節分子の分泌を誘導することで、細胞媒介免疫を調節できる。例えばイミキモドまたはレシキモドによって誘導されるサイトカインとしては、タイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、およびＭＣＰ−１が挙げられるが、これに限定されるものではない。多くのＩＲＭ化合物はいくつかの細胞活性を共有し、例えば同時刺激マーカー誘導、単球／マクロファージ細胞における炎症誘発性サイトカイン誘導、および転写調節因子ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１の活性化など、その多くが種を越えて保存される。
【０００８】
ＩＲＭ化合物はまた、Ｂ細胞によって抗体生成を刺激することで体液性免疫を調節できる。さらに様々なＩＲＭが、ワクチンアジュバントとして有用であることが示されている（例えば米国特許第６，０８３，５０５号明細書および同第６，４０６，７０５号明細書を参照されたい）。
【０００９】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、免疫系細胞が、外来性抗原によって呈示される特異的分子パターンを認識できるようにする、免疫系受容体のファミリーである。様々なＴＬＲの活性化は、例えばサイトカインおよび抗菌ペプチドの分泌をはじめとする、一連の生物学的効果を誘導する。種々のＴＬＲの発見は、リガンドによるＴＬＲ活性化とＴＬＲ活性化の生物学的効果とを結びつける、ＴＬＲ−媒介細胞活性の同定をもたらした。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するステップと、ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するステップと、試験化合物が、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として、試験化合物を同定するステップとを含む。
【００１１】
本発明はまた、このようにして同定される化合物、ならびにこのような化合物またはこのような化合物のプロ−ドラッグを含む医薬品組成物を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを有する、標的化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、標的調節プロフィールを選択するステップと、調節プロフィールを判定するステップと、試験化合物の調節プロフィールが標的調節プロフィールと合致する場合、試験化合物を標的化合物として同定するステップとを含む。
【００１３】
本発明はまた、このようにして同定される化合物、ならびにこのような化合物またはこのような化合物のプロ−ドラッグを含む医薬品組成物を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、免疫系細胞を選択的に調節する方法を提供する。一般に方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性を有する第１の免疫系細胞集団、およびＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を有する第２の免疫系細胞集団を同定するステップと、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する化合物を選択するステップと、免疫系細胞と、細胞活性の少なくとも１つを調節するのに効果的な量の選択される化合物とを接触させることにより、少なくとも１つの細胞集団の細胞を調節するステップを含む。
【００１５】
細胞活性を調節するステップは、検知できる程に細胞活性を増大させ、または検知できる程に細胞活性を低下させるステップを含むことができる。さらに細胞集団は、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）または生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）のいずれかにおいて調節されても良い。
【００１６】
別の態様では、本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の選択的調節で処置できる病状を有する対象を処置する方法を提供する。一般に方法は、病状を処置するのに効果的な、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを同定するステップと、標的調節プロフィールと合致する調節プロフィールを有する化合物を選択するステップと、病状を処置するのに効果的な量の化合物を対象に投与するステップを含む。
【００１７】
特定の実施形態では、病状はウィルス性疾患、真菌疾患、寄生生物症、細菌疾患、またはプリオン媒介疾患などの感染症であっても良い。その他の実施形態では、病状は上皮内新生物、前癌新生物、または癌などの新生物性病状であっても良い。
【００１８】
本発明のその他の様々な特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、および特許請求の範囲を参照して容易に明らかになるであろう。明細書全体において数カ所で、実施例の一覧を通じてガイダンスが提供される。各事例において列挙した一覧は、代表的なグループとしてのみ機能し、排他的一覧と見なすべきではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
特定のＩＲＭ化合物が、共通のＴＬＲによって媒介される１つ以上の細胞活性を選択的に調節できることが見いだされている。すなわち特定のＩＲＭ化合物は、特定のＴＬＲによって媒介される１つの細胞活性を調製でき、同一ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を異なる程度に調節できる。そうできる能力は、例えば特定の病状を処置するために望ましいかもしれない。例えば１つの細胞活性は望ましい治療的または予防的な利点を提供するかもしれないが、第２の細胞活性は例えば副作用などの望ましくない効果を生じるかもしれない。双方の細胞活性が同一ＴＬＲによって媒介される場合、例えば処置を最適化する（すなわち望ましい利点を最大化する）か、または副作用を最小化するか、選択せざるを得なくなるかもしれない。しかし最適処置は、望ましくない効果を制限しながら、望ましい細胞活性を誘導することを伴うかもしれない。本発明は、双方の細胞活性が共通のＴＬＲによって媒介される場合でも、例えば望ましい細胞活性を誘導でき、望ましくない活性誘導を制限できる化合物を同定する方法、ならびに化合物それ自体を提供する。
【００２０】
特定の免疫系細胞では、ＴＬＲ活性化は、転写因子ＮＦ−κＢの活性化と関係することができる。ＮＦ−κＢ活性化は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、およびＭＣＰ−１などの炎症誘発性サイトカインの生成および分泌などの免疫学的チャレンジに対する特定の細胞応答に関係する。このような細胞応答のＩＲＭ誘導は、細胞のＩＲＭ化合物への暴露に対する応答において、転写因子ＮＦ−κＢの活性化を測定することで実証できる（例えばチャング（Ｃｈｕａｎｇ）ら、Ｊｏｕｒｎ．ｏｆ Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．、第７１巻、ｐ．５３８〜５４４（２００２）、およびヘンミ（Ｈｅｍｍｉ）ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻（２）、ｐ．１９６〜２００（２００２）を参照されたい）。したがってＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現は、ＴＬＲ活性化のレポーターとして使用できる。しかし下流細胞応答は１つ以上の追加的要因によって調節されていても良いので、ＮＦ−κＢ活性化の程度は下流細胞応答の程度と必ずしも相関しない。
【００２１】
特定のＮＦ−κＢ−非依存性細胞経路の誘導もまた、ＴＬＲ活性化のレポーターとして有用であることができる。例えばＩＦＮ−αは、その誘導がＮＦ−κＢ−非依存性であるサイトカインである。ＩＦＮ−αは、Ｔリンパ球、マクロファージ、形質細胞様単球、樹状細胞、および天然キラー細胞などの免疫系細胞によって分泌される。ＩＦＮ−αは、おそらくは２つの応答間にリンクを提供することで、免疫学的チャレンジに対する宿主の生得および適応免疫応答を制御することに関与する［ブラサード（Ｂｒａｓｓａｒｄ）ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、７１：５６５〜５８１（２００２）］。生得免疫応答は、非自己（例えば新生物）または外来性（例えばウィルス性）抗原に対する天然キラー（ＮＫ）細胞の細胞媒介応答を含むことができる。ＩＦＮ−αはまた、ＴH１およびＴH２細胞集団間、ひいては生得および適応免疫応答間のバランスを間接的に制御しても良い。
【００２２】
ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現の誘導、およびＩＦＮ−α生成の誘導は、それぞれＴＬＲ−媒介性であることができる。さらに双方の細胞活性は、例えばＴＬＲ７などの単一ＴＬＲによって媒介されても良い。
【００２３】
ここでの用法では、「共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性」とは、その活性が同一ＴＬＲによって制御される特徴的な細胞活性を指し、特定の細胞活性を媒介するかもしれない異なるＴＬＲの総数を指すものでは決してない。例えばＮＦ−κＢ活性化およびＩＦＮ−α誘導のそれぞれが、ＴＬＲ７を通じて媒介できる。それぞれはまた、１つ以上の追加的ＴＬＲによって媒介されても良い。それぞれがＴＬＲ７によって媒介されることができるので、ＮＦ−κＢ活性化およびＩＦＮ−α誘導は共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性と見なされる。
【００２４】
場合によっては、選択的調節は、１つのＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するが、別のＴＬＲ−媒介細胞活性を検知できる程に調節しないことを伴う。別の場合では、選択的調節は、別のＴＬＲ−媒介細胞活性が調節される様式または程度とは異なる様式または程度で、１つのＴＬＲ−媒介細胞活性を調節することを伴う。
【００２５】
したがって本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法、このようにして同定される化合物、およびこのような化合物を含む医薬品組成物と、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の特定の活性調節プロフィールを有する化合物を同定する方法、このようにして同定される化合物、およびこのような化合物を含む医薬品組成物と、特定の免疫細胞集団を選択的に調節する方法と、共通のＴＬＲによって調節される複数の活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を対象に投与することで対象を処置する方法とを提供する。
【００２６】
この発明の目的では、以下の用語は次のような意味を有するものとする。
「活性化する」およびそのバリエーションは、細胞活性におけるあらゆる測定できる増大を指す。
【００２７】
「作動薬」とは、受容体（例えばＴＬＲ）と組み合わさって細胞活性を生じることができる化合物を指す。作動薬は受容体に直接結合するリガンドであっても良い。代案としては、例えば（ａ）受容体に直接結合する別の分子との複合体を形成させることで、または（ｂ）さもなければ別の化合物が受容体に直接結合するように別の化合物の修飾をもたらすことで、作動薬と受容体とを間接的に組み合わせても良い。作動薬は特定のＴＬＲの作動薬（例えばＴＬＲ７作動薬）、または特定のＴＬＲの組み合わせ（例えばＴＬＲ７／８作動薬−ＴＬＲ７作動薬およびＴＬＲ８作動薬の双方）として述べられても良い。
【００２８】
「細胞活性」とは、作動薬と受容体との相互作用から帰結する生物学的活性（例えばサイトカイン生成）を指す。
【００２９】
「誘導する」およびそのバリエーションは、細胞活性におけるあらゆる測定できる増大を指す。例えば特定のサイトカインの誘導は、サイトカイン生成の増大を指す。別の例としては、ヌクレオチド配列の誘導は、ヌクレオチド配列の転写（例えばコーディング配列）の増大、またはヌクレオチド配列からの転写（例えばプロモーターなどの制御配列）の増大を指す。
【００３０】
「阻害する」およびそのバリエーションは、あらゆる測定できる細胞活性低下を指す。例えば特定のサイトカインの阻害とは、サイトカイン生成の低下を指す。別の例としては、ヌクレオチド配列の阻害は、ヌクレオチド配列の転写（例えばコーディング配列）の低下、またはヌクレオチド配列からの転写（例えばプロモーターなどの制御配列）の低下を指す。「阻害する」または「阻害」は、正常な活性レベルの百分率で述べられても良い。
【００３１】
「ＩＲＭ化合物」とは、ＩＲＭ−応答性細胞に投与すると、１つ以上の免疫制御分子（例えばサイトカイン、同時刺激マーカー、または成熟マーカー）のレベルを変化させる化合物を指す。代表的なＩＲＭ化合物としては、上述の小型有機分子、プリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、オリゴヌクレオチド配列、およびアミノアルキルグルコサミニドリン酸塩が挙げられる。
【００３２】
「調節する」およびそのバリエーションは、生物学的活性における相当の増大または低下を指す。生物学的活性における相当の増大または低下とは、生物学的活性における所望の閾値増大または低下を超える増大または低下である。
【００３３】
「調節プロフィール」とは、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性のセット、およびＩＲＭ化合物を使用してセット中の各細胞活性が調節される、または調節できる程度を指す。標的調節プロフィールとは、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の特定の所望のプロフィール、すなわちスクリーニングアッセイで同定される標的化合物、または免疫細胞の生物学的活性を特定の様式で調節する化合物などの理論的なまたは理想化された調節プロフィールを指す。特定の化合物の調節プロフィールとは、特定の化合物によって調節される共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の観察されるプロフィール、およびそれぞれの活性が調節される程度を指す。観察される調節プロフィールは、単一情報源または複数情報源から集計されても良く、例えば実験アッセイ結果、臨床または事例観察、またはあらゆるその他の適切な情報源に由来しても良い。
【００３４】
「プロドラッグ」とは、活性親薬剤を体内に放出するために、化学的または酵素的生体内転換を必要とする薬剤分子の誘導体を指す。
【００３５】
「選択的」およびそのバリエーションは、生物学的活性に対して特異なまたは一般的でない影響を有することを指す。共通のＴＬＲを通じて媒介される細胞活性を選択的に調節する化合物は、「選択的活性」化合物と称しても良い。
【００３６】
「ＴＬＲ発現プロフィール」とは、特定の細胞によって発現されるＴＬＲのアイデンティティを指す。特定の細胞のＴＬＲ発現プロフィールは、特定の細胞タイプによって自然に発現されるＴＬＲのセットを含んでも良い。代案としては、遺伝子改変細胞のＴＬＲ発現プロフィールは、遺伝子改変されていない場合に細胞が自然に発現するよりも多いまたは少ないＴＬＲを含んでも良い。
【００３７】
「ＴＬＲ−媒介」とは、ＴＬＲ機能から直接にまたは間接的に帰結する、生物学的または生化学的活性を指す。特定の生物学的または生化学的活性は、特定のＴＬＲによって媒介される（例えば「ＴＬＲ７−媒介」）と述べられても良い。
【００３８】
一態様では、本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するアッセイを提供するステップと、ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するアッセイを提供するステップと、試験化合物を使用して各アッセイを実施するステップと、試験化合物が第２のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として試験化合物を同定するステップを含む。
【００３９】
方法は、ＴＬＲ−媒介細胞活性の増大、ＴＬＲ−媒介細胞活性の低下、または双方を検出することで、ＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出しても良い。例えばいくつかの実施形態では、方法のために選択されるアッセイは、例えば第１のＴＬＲ７−媒介細胞活性誘導を検出するアッセイ、例えば第２のＴＬＲ７−媒介細胞活性誘導を検出する第２のアッセイを含むことができる。このような方法は、（ａ）第１のＴＬＲ７−媒介細胞活性および第２のＴＬＲ７−媒介細胞活性の双方を異なる程度で誘導する化合物、または（ｂ）１つのＴＬＲ７−媒介細胞活性を誘導するが、もう一つのＴＬＲ７−媒介細胞活性は誘導しない化合物のいずれかを同定できる。さらに、または代案としては、方法はＴＬＲ−媒介細胞活性の阻害を検出する１つ以上のアッセイを含むかもしれない。
【００４０】
当業者は、あらゆるＴＬＲによって媒介される細胞活性の誘導および／または阻害を検出できるアッセイをデザインおよび実施するために、標準的な技術を利用できる。適切な技術については、例えば米国特許公報第２００４／００１４７７９ Ａ１号明細書、２００３年１２月１０日に出願された米国特許出願第１０／７３２，５６３号明細書、２００３年１２月１０日に出願された米国特許出願第１０／７３２，７９６号、および２００４年２月１２日に出願された米国特許出願第１０／７７７，３１０号で述べられる。
【００４１】
特に断りのない限り、細胞活性の増大または低下とは、適切な対照において観察されるものと比較した特定の細胞活性の増大または低下を指す。アッセイは、適切な対照と併せて実施されてもされなくても良い。経験の蓄積とともに、当業者は特定のアッセイ（例えば特定のアッセイ条件下で、適切な対照において観察される値の範囲）を十分熟知するようになるので、特定のアッセイで化合物がＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するかどうかを判定するために対照を実施することは必ずしも必要でない。
【００４２】
それが相当量であり、ひいては本発明の目的のために調節されていると見なされる前に、ＴＬＲ−媒介細胞活性が増大または低下する正確な程度は、技術分野で知られている要因次第で変動しても良い。このような要因としては、例えばアッセイ終点として観察される細胞活性、ＴＬＲ作動薬の濃度、アッセイ終点を測定または検出するのに使用される方法、アッセイの信号対雑音比、アッセイの精度、および種々のＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するのに使用される種々のアッセイの性質が挙げられる。したがってあらゆる可能なアッセイについて、特定のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節しているとして化合物を同定するのに必要とされるＴＬＲ−媒介細胞活性の閾値増大を一般に述べることは、実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮することで、適切な閾値を容易に判定できる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、例えば細胞活性の変化が「相当」であり、ひいては調節されていると見なされる閾値は、ＴＬＲ作動薬が特定の濃度で提供される場合、少なくとも２倍であっても良い。その他の実施形態では、細胞活性の変化が「相当」であり、ひいては調節されていると見なされる閾値は、少なくとも３倍であっても良い。さらに別の実施形態では、閾値変化は少なくとも５倍であっても良い。閾値変化に満たないＴＬＲ−媒介細胞活性の増大または低下は、実質がなく（すなわち実質的に無変化）、ひいては本発明の目的のために調節されていないと見なされても良い。したがって例えば化合物が、共通のＴＬＲを通じて媒介される各細胞活性を対照に比べて増大させるが、１つの細胞活性を閾値を超える程度に増大させ（すなわち調節している）、第２の細胞活性を相当と見なされるのに必要な閾値未満の程度に増大させる（すなわち調節していない）場合、化合物は２つのＴＬＲ−媒介活性の間で選択的であると見なされても良い。
【００４４】
本発明の方法を実施するのに使用される細胞は、１つ以上のＴＬＲを発現し、ＴＬＲ−媒介生物学的活性の検出を可能にするいかなる細胞であっても良い。場合によっては、細胞は１つ以上のＴＬＲを自然に発現しても良い。１つ以上のＴＬＲを自然に発現する細胞としては、単球などの一次免疫細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、樹状細胞、天然キラー細胞、多形核細胞（例えば好中球、好塩基球、または好酸球）、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、および前出のいずれかから誘導される細胞が挙げられるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では細胞を遺伝子改変して、それらの１つ以上のＴＬＲの発現を増大させても良い。いくつかの遺伝子改変細胞は、１つ以上のＴＬＲを自然に発現するが改変されて、遺伝子改変細胞によって発現される１つ以上のＴＬＲの発現が増大し、またはＴＬＲの数が増大している宿主細胞から誘導されても良い。その他の遺伝子改変細胞は、あらゆる検出可能なＴＬＲ−媒介生物学的活性が、遺伝子改変によって細胞に導入された１つ以上のＴＬＲに起因すると見なせるように、検出可能なＴＬＲ活性を欠いている宿主細胞から誘導されても良い。
【００４５】
本発明の方法で使用するのに適したいくつかのアッセイは、１つ以上のサイトカイン、ケモカイン、同時刺激マーカー、または増殖／成熟マーカーの発現および／または生成を検出するステップを含む。このような誘導は、例えば細胞培養中で、培養液中のまたは培養細胞内に隔離される、１つ以上のこのような分子の存在の増大を検出することで検出されても良い。代案としては、本発明に従った方法に適したいくつかのアッセイは、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で起きる１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するステップを含む。適切なアッセイは、例えば細胞成熟を検出（これには生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で成熟した細胞の生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）での組織学的検査が必要かもしれない）、またはサイトカイン生成を検出しても良い。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＴＬＲ−媒介細胞活性は、例えばＴＮＦ−α、タイプＩインターフェロン（例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ωなど）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、またはそれらのあらゆる組み合わせなどをはじめとする、少なくとも１つのサイトカインの生成を含んでも良い。その他の実施形態では、ＴＬＲ−媒介細胞活性は、１つ以上の同時刺激マーカー（例えばＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６など）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ、例えばＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、Ｉ−ＣＡＭ−３など）、または例えばＣＤ８３またはＣＣＲ７などの増殖／成熟マーカーの生成を含んでも良い。
【００４７】
代案としては、ＴＬＲ−媒介細胞活性は、１つ以上のサイトカイン、ケモカイン、同時刺激マーカー、または成熟マーカーの発現をコントロールする、プロモーターからの遺伝子転写の誘導を検出することで検出されても良い。例えばアッセイは、ＮＦ−κＢプロモーターまたはＩＦＮ−α１プロモーターなどのプロモーターのＴＬＲ−媒介活性化を検出するように、デザインされても良い。上述のようにいくつかの実施形態では、これらのプロモーターのＴＬＲ−媒介活性化を検出することは、誘導された遺伝子から生成される分子の検出を含んでも良い。代案としては、いくつかのアッセイは、プロモーターのＴＬＲ−媒介誘導が容易に検出できるように、例えばＮＦ−κＢプロモーターまたはＩＦＮ−α１プロモーターなどのＴＬＲ−誘導されたプロモーターにレポーター遺伝子が作動可能に連結するように、デザインされても良い。多くの遺伝子発現レポーターコンストラクトは市販される。一実施形態では、得られるルシフェラーゼシグナルを検出することでプロモーターのＴＬＲ−媒介誘導が検出できるように、ＮＦ−κＢプロモーターまたはＩＦＮ−α１プロモーターなどのＴＬＲ−誘導可能プロモーターに、ルシフェラーゼレポーターシステムが作動可能に連結されても良い。
【００４８】
実施例１で例証される一実施形態では、ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ活性化およびＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導の選択的調節が分析された。ＮＦ−κＢ活性化は、ルシフェラーゼレポーターのＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存転写を検出することで、遺伝子改変ＨＥＫ２９３細胞（Ｈ−ＴＬＲ７）において測定された。ＩＦＮ−α１誘導は、ルシフェラーゼレポーターのＴＬＲ−媒介ＩＦＮ−α１−誘導転写を検出することで、遺伝子改変ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞（Ｎ−ＴＬＲ７）において測定された。結果を表２に示し、その中で細胞がＩＲＭ化合物を含有しないビヒクルで処理される対照についてそれぞれ正規化された、ＴＬＲ７−媒介ルシフェラーゼシグナル−（Ｈ−ＴＬＲ７／Ｈ−ベクター）および（Ｎ−ＴＬＲ７／Ｎ−ベクター）の増大倍数で表す。このアッセイでは、ベクター対照と比較して、化合物がルシフェラーゼシグナルに少なくとも２倍の増大を生じた場合、化合物はＴＬＲ７−媒介細胞活性を誘導すると見なされた。
【００４９】
アッセイは、（１）ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を選択的に調節した化合物、（２）ＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導を選択的に調節した化合物、および（３）ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現およびＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導の双方を調節した化合物を同定した。
【００５０】
表１に列挙した化合物は、実施例１（表３）に示すいくつかの化合物に加えて、選択的活性化合物であると同定されている化合物であり、この場合は、実施例１のアッセイにおいてＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導を調節するが、ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を調節しない化合物である。
【００５１】
【表１】
【００５２】
本発明の方法は、あらゆるＴＬＲによって媒介される細胞活性を調節するステップを含むことができる。１０個のヒトＴＬＲの構造遺伝子がクローン化され、配列決定されていた。したがって１０個のヒトＴＬＲのいずれかの１つの構造遺伝子を宿主細胞に導入して、本発明に従った方法のアッセイで使用するための遺伝子改変細胞系を提供しても良い。いくつかの実施形態では、特定のＴＬＲの構造遺伝子は、ＨＥＫ２９３細胞、ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞、マウスＲＡＷ細胞、または線維芽細胞などの細胞系内にクローン化されても良い。このように遺伝子改変されたＨＥＫ２９３細胞およびナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞を使用して、上述のようにクローン化されたＴＬＲによって媒介される細胞活性の調節を検出しても良い。
【００５３】
特定の実施形態では、アッセイはアッセイが適切に実施されるのを確実にするために、１つ以上の適切な対照を含んでも良い。しかし十分な経験を蓄積して、特定のアッセイまたは特定のアッセイにおける特定の細胞の動態を熟知すれば、アッセイを実施するたびに適切な対照は必要ないかもしれない。
【００５４】
いくつかの実施形態では、化合物は共通のＴＬＲによって媒介される２つ以上の細胞活性を調製できるが、１つの活性を別の活性とは異なる程度に調節する。例えば化合物は２つの異なる細胞活性を反対の様式で調節しても良く、すなわち１つの活性を誘導し、その他の活性を阻害しても良い。代案としては、化合物は２つの細胞活性を同一様式で調節しても良いが（すなわち双方の活性を誘導または阻害する）、１つの活性をその他の活性よりも大きく調節する。代案としては、化合物は１つの細胞活性を検知できる程に調節しても良いが、第２の細胞活性を実質的に検出可能な程度に調節できない。
【００５５】
本発明はまた、上述の方法のあらゆる実施形態によって同定される化合物を提供する。特に断りのない限り、本文献全体を通して化合物への言及は、あらゆる異性体（例えばジアステレオマーまたは鏡像異性体）、塩、溶媒和化合物、多形体などをはじめとする、あらゆる薬剤的に許容可能な形態の化合物を含むことができる。特に化合物が光学活性の場合、化合物への言及は、化合物の各鏡像異性体ならびに鏡像異性体のラセミ混合物を含むことができる。
【００５６】
上述の方法では、あらゆるＴＬＲによって媒介される、あらゆる細胞活性のあらゆる調節を検出するあらゆるアッセイを用いることができる。したがって上述の方法は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性から、１つ以上の細胞活性を選択的に調節する広範な化合物を同定する強力なツールたり得る。このようにして同定された化合物は、医薬品組成物中に組み込んでも良い。このような医薬品組成物については、下で詳細に述べる。
【００５７】
別の態様では、本発明は共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性について特定の調節プロフィールを有する、標的化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、標的調節プロフィールを選択するステップと、調節プロフィールを判定するステップと、試験化合物の調節プロフィールが標的調節プロフィールに合致する場合、試験化合物を標的化合物として同定するステップを含む。
【００５８】
ここでの用法では、調節プロフィールは１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性に関する情報を含む。標的調節プロフィールの文脈で、プロフィールは、１つ以上の所望の調節されるＴＬＲ−媒介生物学的活性を含んでも良い。例えば特定の病状は、例えばＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現およびＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−非依存性ＩＦＮ−α発現など、共通のＴＬＲによって媒介される生物学的活性を差別的に調節することで効果的に処置されても良い。その病状を処置するための標的調節プロフィールとしては、例えば（ａ）１つのＴＬＲ７−媒介細胞活性を調節するが、その他の活性を検知できる程に調節しない、（ｂ）反対様式で２つの異なる細胞活性を調節する（すなわち１つの活性を誘導しその他の活性を阻害する）、または（ｃ）２つの細胞活性を同一様式で調節する（すなわち双方の活性を誘導または阻害する）が、１つの活性をその他の活性よりも大きく調節することが挙げられる。
【００５９】
標的調節プロフィールは、所望の結果を提供するのに知られているおよび／または必要とされる情報を全て、またはわずかに含んでも良い。場合によっては、標的調節プロフィールの当該部分は、ＴＬＲによって媒介されるあらゆるその他の細胞活性、またはあらゆるその他のＴＬＲによって媒介されるあらゆる細胞活性に関係なく、共通のＴＬＲ（例えばＴＬＲ７）によって媒介される１つ以上の細胞活性を含んでも良い。これは処置する病状、またはその生物学的活性を調節することが意図される標的細胞集団に関連した特定要因のためかもしれない。このような要因としては、標的細胞によって発現されるＴＬＲのアイデンティティ、標的細胞によって発現されるＴＬＲの発現の相対レベル、１つ以上の細胞活性を調節するかもしれない追加的要因の存在または不在、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）の標的細胞の位置、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）である場合は標的細胞が位置する組織または器官、および生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）である場合は対象の免疫系の一般的状態（例えば抑制される、損なわれる、刺激される）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００６０】
試験化合物の調節プロフィールは、あらゆる適切な様式で判定しても良い。化合物の調節プロフィールを判定する一方法は、上で詳述したアッセイなどの１つ以上のアッセイを実施して、試験化合物が、特定のＴＬＲによって媒介される生物学的活性を検知できる程に調節するかどうかを判定することである。代案としては、特定の化合物は１つ以上のＴＬＲの作動薬であることが知られており、免疫細胞とこのような化合物とを接触させることの生物学的効果もまた、知られていても良い。場合によっては、例えば観察される効果が特定のＴＬＲ−媒介生物学的活性に相関しているかもしれない場合、試験化合物の調節プロフィールの少なくとも一部は、対象に化合物を投与する効果の臨床または事例観察に由来しても良い。
【００６１】
試験化合物の調節プロフィールは、標的調節プロフィールとの比較のために所望される情報を全て、またはわずかに含んでも良い。試験化合物の調節プロフィールのために所望される情報の程度は、標的調節プロフィールの判定に関して上で列挙した要因をはじめとするが、これに限定されるものではないいくつかの要因に、少なくともある程度左右されても良い。
【００６２】
特定の標的調節プロフィールに合致するとして、試験化合物を同定することは、試験化合物の調節プロフィールと標的調節プロフィールとを比較することを伴う。場合によっては、標的調節プロフィールおよび試験化合物の調節プロフィールは、実質的に同一またはほぼ同一であっても良い。このような場合、試験化合物は標的調節プロフィールに合致すると容易に同定できる。
【００６３】
標的調節プロフィールおよび試験化合物の調節プロフィールがいくらか異なる特定の場合、試験化合物はなおも所望の調節プロフィールに合致すると同定されても良い。例えば試験化合物は、標的調節プロフィールの目的に、わずかな関連性しか持たない特定のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するかもしれない。代案としては、場合によっては、標的調節プロフィールは、試験化合物によって検知できる程には調節されない、１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性を含むことができる。標的調節プロフィールの異なる部分は、主要なおよび二次的重要性があると見なされても良く、試験化合物の調節プロフィールが主要な調節活性を含んでいれば、たとえ標的調節プロフィールの二次的調節活性を含まなくても、試験化合物は標的調節プロフィールに合致すると同定されても良い。例えば標的調節プロフィールは、ＩＦＮ−α１発現を誘導する主要な調節活性、およびＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を阻害する二次的調節活性を含んでも良い。しかし適切にＩＦＮ−α１発現を誘導するが、例えばＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を調節しない試験化合物は、特定の状況では標的調節プロフィールに合致すると見なされても良い。当業者は全ての関連要因を考慮して、試験化合物プロフィールが二次的調節活性を満たさなくても、標的調節プロフィールの主要な調節活性を十分満たして、試験化合物の調節プロフィールが標的調節プロフィールと合致する場合を判断できるであろう。
【００６４】
標的調節プロフィールは、標的調節プロフィールに合致すると同定される化合物が使用される特定の用途次第で変動しても良い。例えば特定のウィルス性感染の処置は、タイプＩインターフェロンのＴＬＲ７−媒介生成を選択的に誘導して、特定の抗原呈示細胞（ＡＰＣ）を活性化する化合物の投与から恩恵を被るかもしれない。
【００６５】
代案としては、特定のタイプの腫瘍の処置は、ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を選択的に誘導する化合物を使用することから、恩恵を被るかもしれない。このような化合物は、化合物が投与される領域に局在する、例えばＩＬ−１２分泌および強い炎症性応答の誘導をはじめとする免疫系活性を誘導しても良い。
【００６６】
別の代案としては、いくつかの病状の処置は、タイプＩインターフェロン生成、およびＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を誘導する化合物の投与から恩恵を被るかもしれない。このような処置は、一緒に相乗的にＩＦＮ−γ生成を増進する、タイプＩインターフェロン生成およびＩＬ−１２生成を誘導しても良い。ＩＦＮ−γ生成は、メラノーマおよび腎臓細胞癌をはじめとするが、これに限定されるものではない、悪性癌に対する免疫応答を促進するのを助けるかもしれない。
【００６７】
本発明はまた、上述の方法に従って、標的化合物として同定される化合物を提供する。上述の方法では、共通のＴＬＲによって調節される細胞活性のあらゆる適切な標的調節プロフィールを用いることができ、ＴＬＲのいずれかによって調節されるいくつもの細胞活性の調節に関連した情報が組み合わされる。したがって上述の方法は、共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の特定の標的調節プロフィールに合致する広範な化合物を同定する、強力なツールたり得る。このようにして同定された化合物は、医薬品組成物中に組み込まれても良い。このような医薬品組成物については下で詳述する。
【００６８】
別の態様では、本発明は、免疫系細胞を選択的に調節する方法を提供する。概して方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性を有する第１の免疫系細胞集団、同一ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を有する第２の免疫系細胞集団を同定するステップと、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する化合物を選択するステップと、免疫系細胞と、少なくとも１つの細胞活性を調節するのに効果的な量の選択される化合物とを接触させることで、少なくとも１つの細胞集団の細胞を選択的に調節するステップを含む。
【００６９】
免疫系は様々な細胞集団を含み、各集団は、免疫学的チャレンジに対する効果的な免疫応答の開始を促進する１つ以上の機能を果たす。様々な細胞集団は、血液、皮膚、骨髄、胸線、リンパ系、および間質内領域をはじめとするが、これに限定されるものではない、体内の異なる領域に存在する。様々な免疫細胞集団はまた、様々なＴＬＲを異なる程度に発現する。例えば単球は相対的に大量のＴＬＲ２およびＴＬＲ４を発現し、顕著なレベルの例えばＴＬＲ１およびＴＬＲ８発現も示す。Ｂリンパ球は、相対的に高いＴＬＲ１、ＴＬＲ６、およびＴＬＲ１０発現を示すが、例えばＴＬＲ７およびＴＬＲ９もまた発現する。形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）はＴＬＲ９を優性に発現するが、いくつかのＴＬＲ１、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、およびＴＬＲ１０もまた発現する。
【００７０】
いくつかの化合物が、ＴＬＲによって媒介される少なくとも１つの生物学的活性を調節するが、同一ＴＬＲによって媒介される別の活性は調節しないという発見により、本発明は、それによって免疫系細胞が選択的に調節できる手段を提供する。選択的調節は、１つのＴＬＲ−媒介細胞の活性または免疫細胞集団を調節しながら、同一ＴＬＲによって媒介される別の細胞活性の活性、または別の免疫細胞集団を実質的に調節しない形態を取っても良い（すなわち質的または「オン・オフ」調節）。代案としては、選択的調節は、共通のＴＬＲによって調節される２つの以上の生物学的活性、または２つ以上の免疫細胞集団群を異なる程度に調節するステップを伴っても良い（すなわち量的調節）。
【００７１】
特定の実施形態では、本発明の方法は、各細胞集団の細胞のＴＬＲ発現プロフィールを判定するステップを含む。ＴＬＲ発現プロフィールは、ＰＣＲ分析などによるＴＬＲ発現の検出と、ＴＬＲタンパク質合成のパルス−チェイス分析と、免疫組織化学、ウエスタンブロット、またはフローサイトメトリーなどであるがこれに限定されるものではない分析のためのＴＬＲ−特異的抗体を使用したＴＬＲの標識をはじめとするが、これに限定されるものではないあらゆる適切な方法によって判定しても良い。
【００７２】
免疫細胞の選択的調節は、細胞を検知できる程に活性化または誘導するステップ、または細胞を検知できる程に阻害するステップを含んでも良い。免疫系細胞は、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）または生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）のどちらかで、選択的に調節されても良い。生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での選択的調節は、対象から免疫細胞のサンプルを収集するステップと、収集された免疫細胞を生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で培養するステップと、選択された化合物を細胞培養に添加するステップを含んでも良い。対象から収集される免疫細胞のサンプルは異種起源細胞サンプルであっても良く、すなわちサンプルは１つを超える免疫細胞集団の細胞を含んでも良い。細胞が選択的に調節された後、処理済み細胞を対象に再度導入して、それによって予防的なまたは治療的な処置を提供しても良い。代案としては、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で選択的に調節された細胞は診断用用途を有するかもしれない。
【００７３】
いくつかの実施形態では、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で選択的に調節される細胞は、対象から採取されるのでなく遺伝的に改変されても良い。このような細胞は、例えばＴＬＲ−媒介生物学的活性をさらに解明するなど、実験ツールとしての有用性を持つかもしれない。
【００７４】
生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）での選択的調節は、選択された化合物を対象に投与するステップを含んでも良い。選択された化合物は、局所、注射（例えば静脈内、皮下、腹腔内、皮内）、吸入、摂取、経皮、または経粘膜デリバリをはじめとするが、これに限定されるものではない、あらゆる適切な様式で投与されても良い。
【００７５】
対象中で免疫細胞を選択的に調節するのに効果的な選択される化合物の特定の量は、少なくともある程度１つ以上の要因に左右されても良い。このような要因としては、投与される特定の化合物、対象の免疫系の状態（例えば抑制されている、損なわれている、刺激されている）、調節される細胞のアイデンティティと位置、化合物を投与する経路、調節される細胞のＴＬＲ発現プロフィール、および所望の結果（例えば予防的なまたは治療的な処置）が挙げられるが、これに限定されるものではない。したがって化合物の効果的な量を構成する量を一般的に述べることは、実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮して、適切な量を容易に判定できる。
【００７６】
免疫系細胞を選択的に調節するのに効果的な選択される化合物の量は、標的細胞集団または集団群（例えば単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞など）に、少なくとも１つのＴＬＲ−媒介生物学的活性（例えばサイトカイン生成）の変更を引き起こさせるのに十分な量である。
【００７７】
免疫細胞を選択的に調節するのに効果的な選択される化合物の正確な量は、技術分野で知られている要因に従って変動するが、特定の実施形態では、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ用量の量であることができる。その他の実施形態では、量は、約０．００１μＭ〜約１００μＭの選択される化合物の最終濃度を適切な溶液中に提供するのに、十分な量であっても良い。選択される化合物の最小量は上述の要因次第で変動しても良いが、特定の実施形態では０．００１μＭ、０．００３μＭ、０．０１μＭ、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１．０μＭ、３．０μＭ、または１０μＭであっても良い。同様に、選択される化合物の最大量は上述の要因次第で変動しても良いが、特定の実施形態では１００μＭ、３０μＭ、１０μＭ、３μＭ、１．０μＭ、０．３μＭ、または０．１μＭであっても良い。
【００７８】
いくつかの実施形態では、選択される化合物は、下で詳述する小型有機ＩＲＭ分子をはじめとする既知のＩＲＭ化合物、または上述のプリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列であることができる。代案としては、選択される化合物は、本発明に従った方法のいくつかをはじめとする、このような化合物を同定するあらゆる適切な方法によって同定される、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節できる化合物であっても良い。
【００７９】
上述のように、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性から細胞活性を選択的に調節する化合物（「選択的活性」化合物）は、医薬品組成物に組み込まれても良い。このような組成物は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性から１つ以上の細胞活性を選択的に調節することによって処置できる、病状の処置のために有用であっても良い。
【００８０】
選択的活性化合物は、治療計画において単一処置薬として投与できる。代案としては、選択的活性化合物は、別の選択的活性化合物と組み合わせて、または追加的なＩＲＭ化合物、免疫原、アジュバント、抗ウィルス剤、抗生物質、抗癌剤などをはじめとする１つ以上の活性薬剤との組み合わせで投与されても良い。
【００８１】
したがって本発明はまた、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の選択的調節で処置できる病状を処置する方法を提供する。一般に、方法は病状の処置に効果的な、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを同定するステップと、標的調節プロフィールに合致する、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性調節プロフィールを有する選択的活性化合物を選択するステップと、病状を処置するのに効果的な量の選択的活性化合物を対象に投与するステップを含む。
【００８２】
病状を処置することは、予防的なまたは治療的な処置のいずれかを伴っても良い。ここでの用法では、予防的な処置とは病状の症状または徴候の発現前に開始される処置を指す。したがって予防的な処置は、処置を受ける対象が病状を発する可能性を低下させ、発症した場合は病状の激しさを低下させ、またはその双方であるように一般にデザインされる。ここでの用法では、治療的な処置とは、症状または病状の徴候の発症後に開始される処置を指す。したがって治療的な処置は、病状の進行を制限または低下させるようにデザインされる。場合によっては、治療的な処置は、完全な寛解に至るまでの病状の逆転をもたらすことができる。
【００８３】
共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の標的調節プロフィールを同定することは、病状に予防的なまたは治療的な処置を提供するために、いずれの免疫系細胞集団または集団群が良く適しているかを判定するステップと、次に同定された細胞集団群のいずれのＴＬＲ−媒介細胞活性が調節されて所望の処置を提供するかを判定するステップを伴っても良い。
【００８４】
選択的活性化合物の共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の調節プロフィールは、ＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するようにデザインされた１つ以上のアッセイを実施して判定しても良い。代案としては、ＩＲＭ化合物の共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の調節プロフィールは、臨床または事例観察によって判定されても良い。
【００８５】
標的調節プロフィールに合致する、共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の調節プロフィールを有する選択的活性化合物を選択することは、特定の調節プロフィールを有する標的化合物を同定するアッセイに関して上述したのと同一の考察を伴う。
【００８６】
選択的活性化合物を投与することで処置されても良い病状としては、以下が挙げられるが、これに限定されるものではない。
（ａ）例えばアデノウィルス、ヘルペスウィルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウィルス（例えば痘瘡またはワクシニア、または伝染性軟属腫などのオルトポックスウィルス）、ピコルナウィルス（例えばライノウィルスまたはエンテロウィルス）、オルトミクソウィルス（例えばインフルエンザウィルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウィルス、おたふく風邪ウィルス、はしかウィルス、および呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ））、コロナウィルス（例えばＳＡＲＳ）、パポバウィルス（例えば生殖器疣、尋常性肬贅、または足底疣贅を引き起こすものなどの乳頭腫ウィルス）、ヘパドナウィルス（例えば肝炎Ｂウィルス）、フラビウイルス（例えば肝炎Ｃウィルスまたはデングウィルス）、またはレトロウィルス（例えばＨＩＶなどのレンチウイルス）による感染から帰結する疾患などのウィルス性疾患。
（ｂ）例えばエシェリキア属、エンテロバクター、サルモネラ、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア、アエロバクター、ヘリコバクター、クレブシエラ、プロテウス、シュードモナス、連鎖球菌、クラミジア、マイコプラズマ、肺炎球菌、ナイセリア、クロストリジウム、バシラス、コリネバクテリウム、マイコバクテリウム、カンピロバクター、ビブリオ、セラチア、プロビデンシア、クロモバクテリウム、ブルセラ、エルシニア、ヘモフィルス、またはボルデテラの細菌による感染から帰結する疾患などの細菌疾患。
（ｃ）クラミジアと、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎をはじめとするがこれに限定されるものではない真菌疾患と、またはマラリア、ニューモシスティスカリニ肺炎、レーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染をはじめとするが、これに限定されるものではない寄生生物症などのその他の感染症。
（ｄ）上皮内新生物形成、子宮頚部異形成、光線性角化症、基底細胞癌、扁平細胞癌、腎臓細胞癌、カポジ肉腫、メラノーマ、腎臓細胞癌などの新生物疾患と、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、複数骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚のＴ−細胞リンパ腫、Ｂ−細胞リンパ腫、および毛様細胞白血病はじめとするが、これに限定されるものではない白血病、およびその他の癌。
（ｅ）アトピー性皮膚炎または湿疹、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群などのＴH２−媒介、アトピー性疾患。
（ｆ）全身性エリテマトーデス、本態性血小板血症、多発性硬化症、円板状エリテマトーデス、円形脱毛症どの特定の自己免疫疾患。
（ｇ）例えばケロイドおよびその他のタイプの瘢痕形成の阻害（例えば慢性創傷をはじめとする創傷治癒の促進）などの創傷修復に関連する疾患。
【００８７】
さらに選択的活性化合物は、例えばＢＣＧ、コレラ、ペスト、腸チフス、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、パラインフルエンザ、ポリオ、狂犬病、はしか、おたふく風邪、風疹、黄熱病、破傷風、ジフテリア、ヘモフィルスインフルエンザｂ、結核、髄膜炎菌性および肺炎球菌ワクチン、アデノウィルス、ＨＩＶ、水痘、サイトメガロウィルス、デング、ネコ白血病、家禽ペスト、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、豚コレラ、日本脳炎、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウィルス、乳頭腫ウィルス、黄熱病、およびアルツハイマー疾患に関連して使用するための、例えば生ウィルス、細菌、または寄生虫免疫原と、不活性化ウィルス、腫瘍−由来、原生動物、生物体−由来、真菌、または細菌免疫原、類毒素、毒素と、自己抗原と、多糖類と、タンパク質と、糖タンパク質と、ペプチドと、細胞ワクチンと、ＤＮＡワクチンと、自己ワクチンと、組み換えタンパク質と、糖タンパク質と、ペプチドなどの体液性および／または細胞性いずれかの媒介免疫応答を生じるあらゆる材料との組み合わせで使用するためのワクチンアジュバントとして有用かもしれない。
【００８８】
特定の選択的活性化合物は、損なわれた免疫機能を有する個人において特に有用であるかもしれない。例えば特定の化合物は、例えば移植患者、癌患者、およびＨＩＶ患者において、細胞媒介免疫の抑制後に生じる日和見感染および腫瘍を処置するために使用されても良い。
【００８９】
選択的活性化合物は、対象への投与に適したあらゆる調合物中で提供されても良い。適切なタイプの調合物については、例えば米国特許第５，７３６，５５３号明細書、同第５，２３８，９４４号明細書、同第５，９３９，０９０号明細書、同第６，３６５，１６６号明細書、同第６，２４５，７７６号明細書、同第６，４８６，１８６号明細書、欧州特許第ＥＰ０３９４０２６号明細書、および米国特許公報第２００３／０１９９５３８号明細書で述べられる。選択的活性化合物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、またはあらゆる混合物の形態をはじめとするがこれに限定されるものではないあらゆる適切な形態で提供されても良い。選択的活性化合物は、あらゆる薬剤的に許容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクルと共に調合物中でデリバリされても良い。例えば調合物は、例えばクリーム、軟膏、煙霧剤調合物、非煙霧剤スプレー、ゲル、ローションなどの従来の局所用調剤中でデリバリされても良い。調合物は、例えばアジュバント、皮膚透過賦活剤、着色剤、芳香剤、香料、保湿剤、増粘剤などの１つ以上の添加剤をさらに含むことができる。
【００９０】
調合物は、例えば非−非経口または非経口でなどのあらゆる適切な様式で投与されても良い。ここでの用法では、非−非経口とは経口摂取をはじめとする、消化管を通した投与を指す。非経口とは、例えば静脈内、筋肉内、経皮、皮下、経粘膜（例えば吸入）、または局所などの消化管を通した以外の投与を指す。
【００９１】
いくつかの実施形態では、選択的活性化合物は、対象に例えば約０．０００１％〜約１０％（特に断りのない限りここで提供されるあらゆる百分率は、全調合物に対する重量／重量である）の調合物で対象に投与できるが、いくつかの実施形態では、選択的活性化合物は、この範囲外の濃度で選択的活性化合物を提供する調合物を使用して投与されても良い。特定の実施形態では、方法は、例えば約０．１％〜約０．５％の選択的活性化合物を含む調合物などをはじめとする、約０．０１％〜約１％の選択的活性化合物を含む調合物を対象に投与するステップを含む。
【００９２】
病状を処置するのに効果的な選択的活性化合物の量は、所望の治療的なまたは予防的な利点を提供するのに十分な量である。病状を処置するための選択的活性化合物の正確な量は、病状、選択的活性化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制されている、損なわれている、刺激されている）、選択的活性化合物を投与する方法、および調合物が投与される種をはじめとするが、これに限定されるものではない、技術分野で既知の要因次第で変動する。したがってあらゆる可能な用途において、病状を処置するために効果的な選択的活性化合物の量を構成する量を一般に述べることは実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮して、適切な量を容易に判定できる。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、例えば対象に約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を提供するのに十分な選択的活性化合物を投与するステップを含むが、いくつかの実施形態では、方法はこの範囲外の濃度で選択的活性化合物を投与して実施されても良い。これらの実施形態のいくつかでは、方法は、例えば約１００μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの用量などの約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を提供するのに十分な選択的活性化合物を対象に投与するステップを含む。
【００９４】
投与計画は、少なくともある程度、病状、選択的活性化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、投与される選択的活性化合物の量、対象の免疫系の状態（例えば抑制されている、損なわれている、刺激されている）、選択的活性化合物を投与する方法、および調合物が投与される種をはじめとするが、これに限定されるものではない、技術分野で既知の多くの要因に左右されても良い。したがってあらゆる可能な用途において、病状を処置するために効果的な投与計画を一般に述べることは実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮して、適切な量を容易に判定できる。
【００９５】
本発明のいくつかの実施形態では、選択的活性化合物は、例えば毎日単回の投与から複数回の投与で投与されても良いが、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、この範囲外の頻度で選択的活性化合物を投与して実施されても良い。特定の実施形態では、選択的活性化合物は、例えば選択的活性化合物を毎日１回投与するなど、週約１回から毎日約３回で投与されても良い。
【００９６】
病状を処置される生物体は、植物または動物、特に脊椎動物であっても良い。好ましくは傷害を処置される生物体は、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどであるが、これに限定されるものではない哺乳類である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、選択される化合物は、以下で詳細に述べられる小型有機ＩＲＭ分子をはじめとする既知のＩＲＭ化合物、または上述のプリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列であることができる。代案としては、選択される化合物は、本発明に従った方法のいくつかをはじめとする、このような化合物を同定するあらゆる適切な方法によって同定される、少なくとも１つのＴＬＲ−媒介細胞活性を選択的に調節できる化合物であっても良い。
【００９８】
本発明で使用するのに適したＩＲＭ化合物としては、五員環窒素含有ヘテロ環に縮合した２−アミノピリジンを有する化合物が挙げられる。例えばこのような化合物としては、例えばアミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、および６−、７−、８−、または９−アリールまたはヘテロアリール置換イミダゾキノリンアミンなどの置換イミダゾキノリンアミンをはじめとするが、これに限定されるものではないイミダゾキノリンアミンと、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、およびチオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミンをはじめとするが、これに限定されるものではないテトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンをはじめとするが、これに限定されるものではないイミダゾピリジンアミンと、１，２−架橋イミダゾキノリンアミンと、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミンと、イミダゾナフチリジンアミンと、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミンと、オキサゾロキノリンアミンと；チアゾロキノリンアミンと、オキサゾロピリジンアミンと、チアゾロピリジンアミンと、オキサゾロナフチリジンアミンと、チアゾロナフチリジンアミンと、ピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンに縮合した１Ｈ−イミダゾ二量体とが挙げられる。
【００９９】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、置換イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであっても良い。
【０１００】
ここでの用法では、置換イミダゾキノリンアミンとは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、または６−、７−、８−、または９−アリールまたはヘテロアリール置換イミダゾキノリンアミンを指す。ここでの用法では置換イミダゾキノリンアミンは、具体的におよび明示的に１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを除外する。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、選択される化合物は、上で詳述した小型有機ＩＲＭ分子をはじめとする既知のＩＲＭ化合物、または上述のプリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列であることができる。代案としては、選択される化合物は、共通のＴＬＲによって媒介され、本発明に従ったいくつかの方法をはじめとするこのような化合物を同定するあらゆる適切な方法で同定される、複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節できる化合物であっても良い。
【実施例】
【０１０２】
以下の実施例は、単に本発明の特徴、利点、およびその他の詳細をさらに例証するために選択されている。しかし実施例はこの目的を果たしながら、使用する特定の材料および量ならびにその他条件および詳細は、本発明の範囲を不当に制限するものではないことが明示的に理解されるものとする。
【０１０３】
以下に提供する実施例で使用されるＩＲＭ化合物を表２で特定する。
【０１０４】
【表２】
【表３】
【表４】
【０１０５】
細胞
ＨＥＫ２９３細胞：不死化ヒト胎生期腎細胞は、バージニア州マナッサスの米国微生物系統保存機関から入手できる（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１５７３）。
【０１０６】
ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞：バーキットリンパ腫リンパ芽球腫細胞は、バージニア州マナッサスのＡＴＣＣ米国微生物系統保存機関から入手できる（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１４３２）。
【０１０７】
ＨＥＫ２９３細胞におけるＴＬＲ７活性化
２ｍＭのＬ−グルタミン添加９０％最小基本培地（ＭＥＭ）と、１．５ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウム、０．１ｍＭの非必須アミノ酸、および１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含有するように調整されたメリーランド州ロックビルのインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ））からのアール平衡塩溶液と、１０％熱不活性化ウシ胎児血清とからＨＥＫ２９３培地を調製した。細胞をＨＥＫ２９３培地中で一晩３７℃、８％ＣＯ2でインキュベートして、ＨＥＫ２９３細胞を培養した。
【０１０８】
形質移入の２４時間前に、３７℃、８％ＣＯ2でＨＥＫ２９３細胞をニューヨーク州コーニングのコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ））からの１０ｃｍ皿（コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）４３０１６７）に付着させた。製造元の指示に従って（１）１０：１の比率である、ａ）未変性の（Ｈ−ベクター）、または（ｂ）発現性ヒトＴＬＲ７遺伝子（Ｈ−ＴＬＲ７）含有のいずれかであるカリフォルニア州パロ・アルトのＢＤバイオサイエンス・クロンテック（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ））からのｐＩＲＥＳ、および（２）カリフォルニア州ラ・ホーヤのストタラジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ））からのＮＦ−ｋＢ−ｌｕｃレポーターと、インディアナ州インディアナポリスのロシェ・ダイアグノスティックスからのフュージーン（Ｆｕｇｅｎｅ）６形質移入試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ））とで、細胞を同時形質移入した。形質移入に続いてプレートを２４時間インキュベートし、次にＧ−４１８（４００μｇ／ｍＬ）中で２週間選択した。刺激実験のために、発現性ＴＬＲ７遺伝子または空のベクターのいずれかを含有するＧ−４１８抵抗性細胞をＧ−４１８を補ったＨＥＫ２９３培地中で増殖させた。
【０１０９】
形質移入された細胞をウェル当たり１００μＬのＨＥＫ２９３培地中の５×１０4個の細胞の濃度で、ニューヨーク州コーニングのコスター、（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ））からの白色不透明な９６ウェルプレート（コスター（Ｃｏｓｔａｒ）３９１７）に蒔いて、３７℃、８％ＣＯ2で４時間インキュベートした。ＤＭＳＯ中１ｍＭの１μＬのＩＲＭ化合物（最終ＩＲＭ濃度１０μＭ）で、または対照として１μＬのＤＭＳＯで細胞を刺激した。次にプレートを３７℃、５％ＣＯ2でさらに１６時間インキュベートした。コネチカット州メリデンのパッカード・インターナショナル（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．（Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ）からのラックライト（ＬｕｃＬｉｔｅ）キットを使用してルシフェラーゼシグナルを読みとった。カリフォルニア州サニーベールモレキュラー・デバイシズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ））からのＬＭＡＸ照度計上でルミネッセンスを測定した。
【０１１０】
ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞におけるＴＬＲ７活性化
特に断りのない限り、あらゆるインキュベーションは３７℃および湿度９８％で５％のＣＯ2と共に実施した。
【０１１１】
カリフォルニア州カマルリロのバイオソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、ＣＡ））からの完全ＲＰＭＩ １６４０培地から培養液を調製した。コロラド州フォートコリンズのアトラス・バイオロジカルズ（Ａｔｌａｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｔ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ））からのウシ胎仔血清を最終濃度７．５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）で添加し、バイオソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）からのＬ−グルタミンを５ｍＭで添加し、ピルビン酸ナトリウム（バイオソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．））を１ｍＭで添加した。
【０１１２】
培養液中で一晩のインキュベーションによりナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞を培養した。卓上遠心分離（１２００ＲＰＭで５分間）によって細胞を収集し、次に１．３×１０7細胞／ｍＬの濃度でリン酸緩衝スクロースに再懸濁した。
【０１１３】
各形質移入のために、７５０μＬのアリコートの細胞懸濁液を４ｍｍのギャップを残して電気穿孔キュベットに入れた。各アリコートは形質移入ＤＮＡ、ＢｇｌＩＩ部位（ｐＩＦＮ−α１−ｌｕｃ）にクローンされたヒトＩＦＮ−α１プロモーターを含有するウィスコンシン州マジソンのプロメガ・コープ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））からの１０μｇのｐＧＬ３−促進ベクター、および（１）未変性（Ｎ−ベクター）の、または（２）発現性ヒトＴＬＲ７遺伝子（Ｎ−ＴＬＲ７）を含有する、プロメガ・コープ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）からの１０μｇのｐＣＩ−ネオ哺乳類発現ベクターを受容した。細胞とベクターの混合物を室温で５分間インキュベートした。５００μＦの電気容量および０．２７ボルトに設定した、カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラドラ・ボラトリーズ（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ））からのバイオラドジーンパルサー（ＢｉｏＲａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ）を使用して細胞を電気穿孔し、次に室温で５分間インキュベートした。
【０１１４】
電気穿孔細胞を１０ｍＬの培養液に懸濁して、一晩インキュベートした。カリフォルニア州オーバーンのミルテニィ・バイオテック（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ））からのＭＡＣＳ死滅細胞除去キットを使用して、死滅細胞および残骸を２４時間後に除去した。細胞を１０ｍＬの培養液に再懸濁して、さらに２４時間インキュベートした。
【０１１５】
ウィスコンシン州マジソンのプロメガ・コープ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））からのＧ４１８を最終濃度１ｍｇ／ｍＬで添加し、細胞を７日間インキュベートすることによって、形質移入細胞を選択した。
【０１１６】
形質移入細胞を選択して計数し、１ｍＬあたり１×１０6細胞の濃度で培養液中に再懸濁した。１００μｌの細胞のアリコートをニューヨーク州コーニングのコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ））からの白色壁白色底の９６−ウェルプレートのウェルに入れた。表１からの１．０μＬのＩＲＭ化合物（１００％ＤＭＳＯ中１ｍＭに調製された）をＩＲＭ化合物が１０μＭの最終濃度になるように、いくつかの細胞アリコートに添加した。正の対照として、ＩＲＭ化合物の代わりにセンダイウィルスと共にいくつかの細胞アリコートをインキュベートした。負の対照として、ＩＲＭ化合物なしのＤＭＳＯと共にいくつかの細胞アリコートをインキュベートした。全ての場合で細胞を１８時間インキュベートした。
【０１１７】
コネチカット州メリデンのパッカード・インストゥルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ））からの水で戻した１容積のＬｕｃＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓを細胞の各アリコートに添加する前に、プレートを室温で平衡化した。５分間暗順応に設定したカリフォルニア州サニーベールのＬＪＬバイオシステムズ（ＬＪＬ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ））からのＬＪＬアナリスト（Ａｎａｌｙｓｔ）上で、プレートの各ウェルを読み取った。
【０１１８】
結果を表３に報告する。データをそれぞれ、化合物なしのＤＭＳＯ対照に正規化した（Ｈ−ＴＬＲ７／Ｈ−ベクター）および（Ｎ−ＴＬＲ７／Ｎ−ベクター）のＴＬＲ７−媒介ルシフェラーゼシグナルにおける増大倍数として表す。
【０１１９】
【表５】
【０１２０】
本発明の範囲と精神を逸脱することなく、本発明の様々な修正と変更が可能であることは業者には明らかである。例証的な実施形態および実施例は例としてのみ提供され、本発明の範囲を制限することを意図しない。本発明の範囲は以下で述べる特許請求の範囲によってのみ制限されるものとする。
【背景技術】
【０００１】
免疫反応調整剤（「ＩＲＭ」）としては、例えば抗ウィルスおよび抗腫瘍活性などをはじめとする、強力な免疫調節活性を有する化合物が挙げられる。特定のＩＲＭはサイトカインの生成および分泌を調節する。例えば特定のＩＲＭ化合物は、例えばタイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、および／またはＭＣＰ−１などのサイトカインの生成および分泌を誘導する。別の例として特定のＩＲＭ化合物は、ＩＬ−４およびＩＬ−５などの特定のＴH２サイトカインの生成および分泌を阻害できる。さらにいくつかのＩＲＭ化合物は、ＩＬ−１およびＴＮＦを抑制すると言われている（米国特許第６，５１８，２６５号明細書）。
【０００２】
特定のＩＲＭは、例えば米国特許第４，６８９，３３８号明細書、同第４，９２９，６２４号明細書、同第４，９８８，８１５号明細書、同第５，０３７，９８６号明細書、同第５，１７５，２９６号明細書、同第５，２３８，９４４号明細書、同第５，２６６，５７５号明細書、同第５，２６８，３７６号明細書、同第５，３４６，９０５号明細書、同第５，３５２，７８４号明細書、同第５，３６７，０７６号明細書、同第５，３８９，６４０号明細書、同第５，３９５，９３７号明細書、同第５，４４６，１５３号明細書、同第５，４８２，９３６号明細書、同第５，６９３，８１１号明細書、同第５，７４１，９０８号明細書、同第５，７５６，７４７号明細書、同第５，９３９，０９０号明細書、同第６，０３９，９６９号明細書、同第６，０８３，５０５号明細書、同第６，１１０，９２９号明細書、同第６，１９４，４２５号明細書、同第６，２４５，７７６号明細書、同第６，３３１，５３９号明細書、同第６，３７６，６６９号明細書、同第６，４５１，８１０号明細書、同第６，５２５，０６４号明細書、同第６，５４１，４８５号明細書、同第６，５４５，０１６号明細書、同第６，５４５，０１７号明細書、同第６，５５８，９５１号明細書、同第６，５７３，２７３号明細書、同第６，６５６，９３８号明細書、同第６，６６０，７３５号明細書、同第６，６６０，７４７号明細書、同第６，６６４，２６０号明細書、同第６，６６４，２６４号明細書、同第６，６６４，２６５号明細書、同第６，６６７，３１２号明細書、同第６，６７０，３７２号明細書、同第６，６７７，３４７号明細書、同第６，６７７，３４８号明細書、同第６，６７７，３４９号明細書、同第６，６８３，０８８号明細書、欧州特許第０ ３９４ ０２６号明細書、米国特許公報第２００２／００１６３３２号明細書、同第２００２／００５５５１７号明細書、同第２００２／０１１０８４０号明細書、同第２００３／０１３３９１３号明細書、同第２００３／０１９９５３８号明細書、および同第２００４／００１４７７９号明細書、および国際公開第０１／７４３４３号パンフレット、同第０２／４６７４９号パンフレット、同第０２／１０２３７７号パンフレット、同第０３／０２０８８９号パンフレット、同第０３／０４３５７２号パンフレット、同第０３／０４５３９１号パンフレット、および同第０３／１０３５８４号パンフレットで開示されるもののような、タンパク質、ペプチドなどの大型生体分子とは対照的な小型有機分子である（例えば分子量約１０００ダルトン未満、好ましくは約５００ダルトン未満）。
【０００３】
小型分子ＩＲＭの追加的な例としては、特定のプリン誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、および同第６，０２８，０７６号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾキノリンアミド誘導体（米国特許第６，０６９，１４９号明細書で述べられるものなど）、特定のイミダゾピリジン誘導体（米国特許第６，５１８，２６５号明細書で述べられるものなど）、特定のベンゾイミダゾール誘導体（米国特許第６，３８７，９３８号明細書で述べられるものなど）、五員環窒素含有ヘテロ環に縮合した４−アミノピリミジンの特定の誘導体（米国特許第６，３７６，５０１号明細書、同第６，０２８，０７６号明細書および同第６，３２９，３８１号明細書、および国際公開第０２／０８５９５号パンフレットで述べられるアデニン誘導体など）、および特定の３−β−Ｄ−リボフラノシルチアゾロ[４，５−ｄ]ピリミジン（米国特許公報第２００３／０１９９４６１号明細書で述べられるものなど）が挙げられる。
【０００４】
その他のＩＲＭとしては、オリゴヌクレオチド配列などの大型生体分子が挙げられる。いくつかのＩＲＭオリゴヌクレオチド配列は、シトシン−グアニンジヌクレオチド（ＣｐＧ）を含有し、例えば米国特許第６，１９４，３８８号明細書、同第６，２０７，６４６号明細書、同第６，２３９，１１６号明細書、同第６，３３９，０６８号明細書、および同第６，４０６，７０５号明細書で述べられる。いくつかのＣｐＧ−含有オリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第６，４２６，３３４号明細書、および同第６，４７６，０００号明細書で述べられるもののような合成免疫調節構造モチーフを含むことができる。その他のＣｐＧが欠如したＩＲＭヌクレオチド配列については、例えば国際公開第００／７５３０４号パンフレットで述べられている。
【０００５】
その他のＩＲＭとしては、アミノアルキルグルコサミニドリン酸塩（ＡＧＰ）などの生物学的分子が挙げられ、例えば米国特許第６，１１３，９１８号明細書、同第６，３０３，３４７号明細書、同第６，５２５，０２８号明細書、および同第６，６４９，１７２号明細書で述べられている。
【０００６】
免疫系の特定の側面を刺激し、ならびにその他の側面を抑制することで（例えば米国特許第６，０３９，９６９号明細書、および同第６，２００，５９２号明細書を参照されたい）、ＩＲＭは多くの疾患を処置するのに使用されても良い。例えばＩＲＭ化合物を使用して処置されても良い疾患としては、ヒト乳頭腫ウィルスによって引き起こされる外性器および肛門周囲疣贅、基底細胞癌、湿疹、本態性血小板血症、肝炎Ｂ、多発性硬化症、新生物疾患、乾癬、関節リウマチ、タイプＩ単純疱疹、およびタイプＩＩ単純疱疹が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【０００７】
ＩＲＭ化合物は、サイトカインなどの特定の免疫系調節分子の分泌を誘導することで、細胞媒介免疫を調節できる。例えばイミキモドまたはレシキモドによって誘導されるサイトカインとしては、タイプＩインターフェロン、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、およびＭＣＰ−１が挙げられるが、これに限定されるものではない。多くのＩＲＭ化合物はいくつかの細胞活性を共有し、例えば同時刺激マーカー誘導、単球／マクロファージ細胞における炎症誘発性サイトカイン誘導、および転写調節因子ＮＦ−κＢおよびＡＰ−１の活性化など、その多くが種を越えて保存される。
【０００８】
ＩＲＭ化合物はまた、Ｂ細胞によって抗体生成を刺激することで体液性免疫を調節できる。さらに様々なＩＲＭが、ワクチンアジュバントとして有用であることが示されている（例えば米国特許第６，０８３，５０５号明細書および同第６，４０６，７０５号明細書を参照されたい）。
【０００９】
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、免疫系細胞が、外来性抗原によって呈示される特異的分子パターンを認識できるようにする、免疫系受容体のファミリーである。様々なＴＬＲの活性化は、例えばサイトカインおよび抗菌ペプチドの分泌をはじめとする、一連の生物学的効果を誘導する。種々のＴＬＲの発見は、リガンドによるＴＬＲ活性化とＴＬＲ活性化の生物学的効果とを結びつける、ＴＬＲ−媒介細胞活性の同定をもたらした。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するステップと、ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するステップと、試験化合物が、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として、試験化合物を同定するステップとを含む。
【００１１】
本発明はまた、このようにして同定される化合物、ならびにこのような化合物またはこのような化合物のプロ−ドラッグを含む医薬品組成物を提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを有する、標的化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、標的調節プロフィールを選択するステップと、調節プロフィールを判定するステップと、試験化合物の調節プロフィールが標的調節プロフィールと合致する場合、試験化合物を標的化合物として同定するステップとを含む。
【００１３】
本発明はまた、このようにして同定される化合物、ならびにこのような化合物またはこのような化合物のプロ−ドラッグを含む医薬品組成物を提供する。
【００１４】
別の態様では、本発明は、免疫系細胞を選択的に調節する方法を提供する。一般に方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性を有する第１の免疫系細胞集団、およびＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を有する第２の免疫系細胞集団を同定するステップと、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する化合物を選択するステップと、免疫系細胞と、細胞活性の少なくとも１つを調節するのに効果的な量の選択される化合物とを接触させることにより、少なくとも１つの細胞集団の細胞を調節するステップを含む。
【００１５】
細胞活性を調節するステップは、検知できる程に細胞活性を増大させ、または検知できる程に細胞活性を低下させるステップを含むことができる。さらに細胞集団は、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）または生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）のいずれかにおいて調節されても良い。
【００１６】
別の態様では、本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の選択的調節で処置できる病状を有する対象を処置する方法を提供する。一般に方法は、病状を処置するのに効果的な、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを同定するステップと、標的調節プロフィールと合致する調節プロフィールを有する化合物を選択するステップと、病状を処置するのに効果的な量の化合物を対象に投与するステップを含む。
【００１７】
特定の実施形態では、病状はウィルス性疾患、真菌疾患、寄生生物症、細菌疾患、またはプリオン媒介疾患などの感染症であっても良い。その他の実施形態では、病状は上皮内新生物、前癌新生物、または癌などの新生物性病状であっても良い。
【００１８】
本発明のその他の様々な特徴および利点は、以下の詳細な説明、実施例、および特許請求の範囲を参照して容易に明らかになるであろう。明細書全体において数カ所で、実施例の一覧を通じてガイダンスが提供される。各事例において列挙した一覧は、代表的なグループとしてのみ機能し、排他的一覧と見なすべきではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
特定のＩＲＭ化合物が、共通のＴＬＲによって媒介される１つ以上の細胞活性を選択的に調節できることが見いだされている。すなわち特定のＩＲＭ化合物は、特定のＴＬＲによって媒介される１つの細胞活性を調製でき、同一ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を異なる程度に調節できる。そうできる能力は、例えば特定の病状を処置するために望ましいかもしれない。例えば１つの細胞活性は望ましい治療的または予防的な利点を提供するかもしれないが、第２の細胞活性は例えば副作用などの望ましくない効果を生じるかもしれない。双方の細胞活性が同一ＴＬＲによって媒介される場合、例えば処置を最適化する（すなわち望ましい利点を最大化する）か、または副作用を最小化するか、選択せざるを得なくなるかもしれない。しかし最適処置は、望ましくない効果を制限しながら、望ましい細胞活性を誘導することを伴うかもしれない。本発明は、双方の細胞活性が共通のＴＬＲによって媒介される場合でも、例えば望ましい細胞活性を誘導でき、望ましくない活性誘導を制限できる化合物を同定する方法、ならびに化合物それ自体を提供する。
【００２０】
特定の免疫系細胞では、ＴＬＲ活性化は、転写因子ＮＦ−κＢの活性化と関係することができる。ＮＦ−κＢ活性化は、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、およびＭＣＰ−１などの炎症誘発性サイトカインの生成および分泌などの免疫学的チャレンジに対する特定の細胞応答に関係する。このような細胞応答のＩＲＭ誘導は、細胞のＩＲＭ化合物への暴露に対する応答において、転写因子ＮＦ−κＢの活性化を測定することで実証できる（例えばチャング（Ｃｈｕａｎｇ）ら、Ｊｏｕｒｎ．ｏｆ Ｌｅｕｋ．Ｂｉｏｌ．、第７１巻、ｐ．５３８〜５４４（２００２）、およびヘンミ（Ｈｅｍｍｉ）ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３巻（２）、ｐ．１９６〜２００（２００２）を参照されたい）。したがってＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現は、ＴＬＲ活性化のレポーターとして使用できる。しかし下流細胞応答は１つ以上の追加的要因によって調節されていても良いので、ＮＦ−κＢ活性化の程度は下流細胞応答の程度と必ずしも相関しない。
【００２１】
特定のＮＦ−κＢ−非依存性細胞経路の誘導もまた、ＴＬＲ活性化のレポーターとして有用であることができる。例えばＩＦＮ−αは、その誘導がＮＦ−κＢ−非依存性であるサイトカインである。ＩＦＮ−αは、Ｔリンパ球、マクロファージ、形質細胞様単球、樹状細胞、および天然キラー細胞などの免疫系細胞によって分泌される。ＩＦＮ−αは、おそらくは２つの応答間にリンクを提供することで、免疫学的チャレンジに対する宿主の生得および適応免疫応答を制御することに関与する［ブラサード（Ｂｒａｓｓａｒｄ）ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ、７１：５６５〜５８１（２００２）］。生得免疫応答は、非自己（例えば新生物）または外来性（例えばウィルス性）抗原に対する天然キラー（ＮＫ）細胞の細胞媒介応答を含むことができる。ＩＦＮ−αはまた、ＴH１およびＴH２細胞集団間、ひいては生得および適応免疫応答間のバランスを間接的に制御しても良い。
【００２２】
ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現の誘導、およびＩＦＮ−α生成の誘導は、それぞれＴＬＲ−媒介性であることができる。さらに双方の細胞活性は、例えばＴＬＲ７などの単一ＴＬＲによって媒介されても良い。
【００２３】
ここでの用法では、「共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性」とは、その活性が同一ＴＬＲによって制御される特徴的な細胞活性を指し、特定の細胞活性を媒介するかもしれない異なるＴＬＲの総数を指すものでは決してない。例えばＮＦ−κＢ活性化およびＩＦＮ−α誘導のそれぞれが、ＴＬＲ７を通じて媒介できる。それぞれはまた、１つ以上の追加的ＴＬＲによって媒介されても良い。それぞれがＴＬＲ７によって媒介されることができるので、ＮＦ−κＢ活性化およびＩＦＮ−α誘導は共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性と見なされる。
【００２４】
場合によっては、選択的調節は、１つのＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するが、別のＴＬＲ−媒介細胞活性を検知できる程に調節しないことを伴う。別の場合では、選択的調節は、別のＴＬＲ−媒介細胞活性が調節される様式または程度とは異なる様式または程度で、１つのＴＬＲ−媒介細胞活性を調節することを伴う。
【００２５】
したがって本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法、このようにして同定される化合物、およびこのような化合物を含む医薬品組成物と、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の特定の活性調節プロフィールを有する化合物を同定する方法、このようにして同定される化合物、およびこのような化合物を含む医薬品組成物と、特定の免疫細胞集団を選択的に調節する方法と、共通のＴＬＲによって調節される複数の活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を対象に投与することで対象を処置する方法とを提供する。
【００２６】
この発明の目的では、以下の用語は次のような意味を有するものとする。
「活性化する」およびそのバリエーションは、細胞活性におけるあらゆる測定できる増大を指す。
【００２７】
「作動薬」とは、受容体（例えばＴＬＲ）と組み合わさって細胞活性を生じることができる化合物を指す。作動薬は受容体に直接結合するリガンドであっても良い。代案としては、例えば（ａ）受容体に直接結合する別の分子との複合体を形成させることで、または（ｂ）さもなければ別の化合物が受容体に直接結合するように別の化合物の修飾をもたらすことで、作動薬と受容体とを間接的に組み合わせても良い。作動薬は特定のＴＬＲの作動薬（例えばＴＬＲ７作動薬）、または特定のＴＬＲの組み合わせ（例えばＴＬＲ７／８作動薬−ＴＬＲ７作動薬およびＴＬＲ８作動薬の双方）として述べられても良い。
【００２８】
「細胞活性」とは、作動薬と受容体との相互作用から帰結する生物学的活性（例えばサイトカイン生成）を指す。
【００２９】
「誘導する」およびそのバリエーションは、細胞活性におけるあらゆる測定できる増大を指す。例えば特定のサイトカインの誘導は、サイトカイン生成の増大を指す。別の例としては、ヌクレオチド配列の誘導は、ヌクレオチド配列の転写（例えばコーディング配列）の増大、またはヌクレオチド配列からの転写（例えばプロモーターなどの制御配列）の増大を指す。
【００３０】
「阻害する」およびそのバリエーションは、あらゆる測定できる細胞活性低下を指す。例えば特定のサイトカインの阻害とは、サイトカイン生成の低下を指す。別の例としては、ヌクレオチド配列の阻害は、ヌクレオチド配列の転写（例えばコーディング配列）の低下、またはヌクレオチド配列からの転写（例えばプロモーターなどの制御配列）の低下を指す。「阻害する」または「阻害」は、正常な活性レベルの百分率で述べられても良い。
【００３１】
「ＩＲＭ化合物」とは、ＩＲＭ−応答性細胞に投与すると、１つ以上の免疫制御分子（例えばサイトカイン、同時刺激マーカー、または成熟マーカー）のレベルを変化させる化合物を指す。代表的なＩＲＭ化合物としては、上述の小型有機分子、プリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、オリゴヌクレオチド配列、およびアミノアルキルグルコサミニドリン酸塩が挙げられる。
【００３２】
「調節する」およびそのバリエーションは、生物学的活性における相当の増大または低下を指す。生物学的活性における相当の増大または低下とは、生物学的活性における所望の閾値増大または低下を超える増大または低下である。
【００３３】
「調節プロフィール」とは、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性のセット、およびＩＲＭ化合物を使用してセット中の各細胞活性が調節される、または調節できる程度を指す。標的調節プロフィールとは、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の特定の所望のプロフィール、すなわちスクリーニングアッセイで同定される標的化合物、または免疫細胞の生物学的活性を特定の様式で調節する化合物などの理論的なまたは理想化された調節プロフィールを指す。特定の化合物の調節プロフィールとは、特定の化合物によって調節される共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の観察されるプロフィール、およびそれぞれの活性が調節される程度を指す。観察される調節プロフィールは、単一情報源または複数情報源から集計されても良く、例えば実験アッセイ結果、臨床または事例観察、またはあらゆるその他の適切な情報源に由来しても良い。
【００３４】
「プロドラッグ」とは、活性親薬剤を体内に放出するために、化学的または酵素的生体内転換を必要とする薬剤分子の誘導体を指す。
【００３５】
「選択的」およびそのバリエーションは、生物学的活性に対して特異なまたは一般的でない影響を有することを指す。共通のＴＬＲを通じて媒介される細胞活性を選択的に調節する化合物は、「選択的活性」化合物と称しても良い。
【００３６】
「ＴＬＲ発現プロフィール」とは、特定の細胞によって発現されるＴＬＲのアイデンティティを指す。特定の細胞のＴＬＲ発現プロフィールは、特定の細胞タイプによって自然に発現されるＴＬＲのセットを含んでも良い。代案としては、遺伝子改変細胞のＴＬＲ発現プロフィールは、遺伝子改変されていない場合に細胞が自然に発現するよりも多いまたは少ないＴＬＲを含んでも良い。
【００３７】
「ＴＬＲ−媒介」とは、ＴＬＲ機能から直接にまたは間接的に帰結する、生物学的または生化学的活性を指す。特定の生物学的または生化学的活性は、特定のＴＬＲによって媒介される（例えば「ＴＬＲ７−媒介」）と述べられても良い。
【００３８】
一態様では、本発明は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するアッセイを提供するステップと、ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するアッセイを提供するステップと、試験化合物を使用して各アッセイを実施するステップと、試験化合物が第２のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として試験化合物を同定するステップを含む。
【００３９】
方法は、ＴＬＲ−媒介細胞活性の増大、ＴＬＲ−媒介細胞活性の低下、または双方を検出することで、ＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出しても良い。例えばいくつかの実施形態では、方法のために選択されるアッセイは、例えば第１のＴＬＲ７−媒介細胞活性誘導を検出するアッセイ、例えば第２のＴＬＲ７−媒介細胞活性誘導を検出する第２のアッセイを含むことができる。このような方法は、（ａ）第１のＴＬＲ７−媒介細胞活性および第２のＴＬＲ７−媒介細胞活性の双方を異なる程度で誘導する化合物、または（ｂ）１つのＴＬＲ７−媒介細胞活性を誘導するが、もう一つのＴＬＲ７−媒介細胞活性は誘導しない化合物のいずれかを同定できる。さらに、または代案としては、方法はＴＬＲ−媒介細胞活性の阻害を検出する１つ以上のアッセイを含むかもしれない。
【００４０】
当業者は、あらゆるＴＬＲによって媒介される細胞活性の誘導および／または阻害を検出できるアッセイをデザインおよび実施するために、標準的な技術を利用できる。適切な技術については、例えば米国特許公報第２００４／００１４７７９ Ａ１号明細書、２００３年１２月１０日に出願された米国特許出願第１０／７３２，５６３号明細書、２００３年１２月１０日に出願された米国特許出願第１０／７３２，７９６号、および２００４年２月１２日に出願された米国特許出願第１０／７７７，３１０号で述べられる。
【００４１】
特に断りのない限り、細胞活性の増大または低下とは、適切な対照において観察されるものと比較した特定の細胞活性の増大または低下を指す。アッセイは、適切な対照と併せて実施されてもされなくても良い。経験の蓄積とともに、当業者は特定のアッセイ（例えば特定のアッセイ条件下で、適切な対照において観察される値の範囲）を十分熟知するようになるので、特定のアッセイで化合物がＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するかどうかを判定するために対照を実施することは必ずしも必要でない。
【００４２】
それが相当量であり、ひいては本発明の目的のために調節されていると見なされる前に、ＴＬＲ−媒介細胞活性が増大または低下する正確な程度は、技術分野で知られている要因次第で変動しても良い。このような要因としては、例えばアッセイ終点として観察される細胞活性、ＴＬＲ作動薬の濃度、アッセイ終点を測定または検出するのに使用される方法、アッセイの信号対雑音比、アッセイの精度、および種々のＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するのに使用される種々のアッセイの性質が挙げられる。したがってあらゆる可能なアッセイについて、特定のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節しているとして化合物を同定するのに必要とされるＴＬＲ−媒介細胞活性の閾値増大を一般に述べることは、実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮することで、適切な閾値を容易に判定できる。
【００４３】
いくつかの実施形態では、例えば細胞活性の変化が「相当」であり、ひいては調節されていると見なされる閾値は、ＴＬＲ作動薬が特定の濃度で提供される場合、少なくとも２倍であっても良い。その他の実施形態では、細胞活性の変化が「相当」であり、ひいては調節されていると見なされる閾値は、少なくとも３倍であっても良い。さらに別の実施形態では、閾値変化は少なくとも５倍であっても良い。閾値変化に満たないＴＬＲ−媒介細胞活性の増大または低下は、実質がなく（すなわち実質的に無変化）、ひいては本発明の目的のために調節されていないと見なされても良い。したがって例えば化合物が、共通のＴＬＲを通じて媒介される各細胞活性を対照に比べて増大させるが、１つの細胞活性を閾値を超える程度に増大させ（すなわち調節している）、第２の細胞活性を相当と見なされるのに必要な閾値未満の程度に増大させる（すなわち調節していない）場合、化合物は２つのＴＬＲ−媒介活性の間で選択的であると見なされても良い。
【００４４】
本発明の方法を実施するのに使用される細胞は、１つ以上のＴＬＲを発現し、ＴＬＲ−媒介生物学的活性の検出を可能にするいかなる細胞であっても良い。場合によっては、細胞は１つ以上のＴＬＲを自然に発現しても良い。１つ以上のＴＬＲを自然に発現する細胞としては、単球などの一次免疫細胞、マクロファージ、ランゲルハンス細胞、樹状細胞、天然キラー細胞、多形核細胞（例えば好中球、好塩基球、または好酸球）、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、および前出のいずれかから誘導される細胞が挙げられるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では細胞を遺伝子改変して、それらの１つ以上のＴＬＲの発現を増大させても良い。いくつかの遺伝子改変細胞は、１つ以上のＴＬＲを自然に発現するが改変されて、遺伝子改変細胞によって発現される１つ以上のＴＬＲの発現が増大し、またはＴＬＲの数が増大している宿主細胞から誘導されても良い。その他の遺伝子改変細胞は、あらゆる検出可能なＴＬＲ−媒介生物学的活性が、遺伝子改変によって細胞に導入された１つ以上のＴＬＲに起因すると見なせるように、検出可能なＴＬＲ活性を欠いている宿主細胞から誘導されても良い。
【００４５】
本発明の方法で使用するのに適したいくつかのアッセイは、１つ以上のサイトカイン、ケモカイン、同時刺激マーカー、または増殖／成熟マーカーの発現および／または生成を検出するステップを含む。このような誘導は、例えば細胞培養中で、培養液中のまたは培養細胞内に隔離される、１つ以上のこのような分子の存在の増大を検出することで検出されても良い。代案としては、本発明に従った方法に適したいくつかのアッセイは、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で起きる１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するステップを含む。適切なアッセイは、例えば細胞成熟を検出（これには生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）で成熟した細胞の生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）での組織学的検査が必要かもしれない）、またはサイトカイン生成を検出しても良い。
【００４６】
いくつかの実施形態では、ＴＬＲ−媒介細胞活性は、例えばＴＮＦ−α、タイプＩインターフェロン（例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−ωなど）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１、またはそれらのあらゆる組み合わせなどをはじめとする、少なくとも１つのサイトカインの生成を含んでも良い。その他の実施形態では、ＴＬＲ−媒介細胞活性は、１つ以上の同時刺激マーカー（例えばＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６など）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ、例えばＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、Ｉ−ＣＡＭ−３など）、または例えばＣＤ８３またはＣＣＲ７などの増殖／成熟マーカーの生成を含んでも良い。
【００４７】
代案としては、ＴＬＲ−媒介細胞活性は、１つ以上のサイトカイン、ケモカイン、同時刺激マーカー、または成熟マーカーの発現をコントロールする、プロモーターからの遺伝子転写の誘導を検出することで検出されても良い。例えばアッセイは、ＮＦ−κＢプロモーターまたはＩＦＮ−α１プロモーターなどのプロモーターのＴＬＲ−媒介活性化を検出するように、デザインされても良い。上述のようにいくつかの実施形態では、これらのプロモーターのＴＬＲ−媒介活性化を検出することは、誘導された遺伝子から生成される分子の検出を含んでも良い。代案としては、いくつかのアッセイは、プロモーターのＴＬＲ−媒介誘導が容易に検出できるように、例えばＮＦ−κＢプロモーターまたはＩＦＮ−α１プロモーターなどのＴＬＲ−誘導されたプロモーターにレポーター遺伝子が作動可能に連結するように、デザインされても良い。多くの遺伝子発現レポーターコンストラクトは市販される。一実施形態では、得られるルシフェラーゼシグナルを検出することでプロモーターのＴＬＲ−媒介誘導が検出できるように、ＮＦ−κＢプロモーターまたはＩＦＮ−α１プロモーターなどのＴＬＲ−誘導可能プロモーターに、ルシフェラーゼレポーターシステムが作動可能に連結されても良い。
【００４８】
実施例１で例証される一実施形態では、ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ活性化およびＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導の選択的調節が分析された。ＮＦ−κＢ活性化は、ルシフェラーゼレポーターのＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存転写を検出することで、遺伝子改変ＨＥＫ２９３細胞（Ｈ−ＴＬＲ７）において測定された。ＩＦＮ−α１誘導は、ルシフェラーゼレポーターのＴＬＲ−媒介ＩＦＮ−α１−誘導転写を検出することで、遺伝子改変ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞（Ｎ−ＴＬＲ７）において測定された。結果を表２に示し、その中で細胞がＩＲＭ化合物を含有しないビヒクルで処理される対照についてそれぞれ正規化された、ＴＬＲ７−媒介ルシフェラーゼシグナル−（Ｈ−ＴＬＲ７／Ｈ−ベクター）および（Ｎ−ＴＬＲ７／Ｎ−ベクター）の増大倍数で表す。このアッセイでは、ベクター対照と比較して、化合物がルシフェラーゼシグナルに少なくとも２倍の増大を生じた場合、化合物はＴＬＲ７−媒介細胞活性を誘導すると見なされた。
【００４９】
アッセイは、（１）ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を選択的に調節した化合物、（２）ＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導を選択的に調節した化合物、および（３）ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現およびＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導の双方を調節した化合物を同定した。
【００５０】
表１に列挙した化合物は、実施例１（表３）に示すいくつかの化合物に加えて、選択的活性化合物であると同定されている化合物であり、この場合は、実施例１のアッセイにおいてＴＬＲ７−媒介ＩＦＮ−α１誘導を調節するが、ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を調節しない化合物である。
【００５１】
【表１】
【００５２】
本発明の方法は、あらゆるＴＬＲによって媒介される細胞活性を調節するステップを含むことができる。１０個のヒトＴＬＲの構造遺伝子がクローン化され、配列決定されていた。したがって１０個のヒトＴＬＲのいずれかの１つの構造遺伝子を宿主細胞に導入して、本発明に従った方法のアッセイで使用するための遺伝子改変細胞系を提供しても良い。いくつかの実施形態では、特定のＴＬＲの構造遺伝子は、ＨＥＫ２９３細胞、ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞、マウスＲＡＷ細胞、または線維芽細胞などの細胞系内にクローン化されても良い。このように遺伝子改変されたＨＥＫ２９３細胞およびナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞を使用して、上述のようにクローン化されたＴＬＲによって媒介される細胞活性の調節を検出しても良い。
【００５３】
特定の実施形態では、アッセイはアッセイが適切に実施されるのを確実にするために、１つ以上の適切な対照を含んでも良い。しかし十分な経験を蓄積して、特定のアッセイまたは特定のアッセイにおける特定の細胞の動態を熟知すれば、アッセイを実施するたびに適切な対照は必要ないかもしれない。
【００５４】
いくつかの実施形態では、化合物は共通のＴＬＲによって媒介される２つ以上の細胞活性を調製できるが、１つの活性を別の活性とは異なる程度に調節する。例えば化合物は２つの異なる細胞活性を反対の様式で調節しても良く、すなわち１つの活性を誘導し、その他の活性を阻害しても良い。代案としては、化合物は２つの細胞活性を同一様式で調節しても良いが（すなわち双方の活性を誘導または阻害する）、１つの活性をその他の活性よりも大きく調節する。代案としては、化合物は１つの細胞活性を検知できる程に調節しても良いが、第２の細胞活性を実質的に検出可能な程度に調節できない。
【００５５】
本発明はまた、上述の方法のあらゆる実施形態によって同定される化合物を提供する。特に断りのない限り、本文献全体を通して化合物への言及は、あらゆる異性体（例えばジアステレオマーまたは鏡像異性体）、塩、溶媒和化合物、多形体などをはじめとする、あらゆる薬剤的に許容可能な形態の化合物を含むことができる。特に化合物が光学活性の場合、化合物への言及は、化合物の各鏡像異性体ならびに鏡像異性体のラセミ混合物を含むことができる。
【００５６】
上述の方法では、あらゆるＴＬＲによって媒介される、あらゆる細胞活性のあらゆる調節を検出するあらゆるアッセイを用いることができる。したがって上述の方法は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性から、１つ以上の細胞活性を選択的に調節する広範な化合物を同定する強力なツールたり得る。このようにして同定された化合物は、医薬品組成物中に組み込んでも良い。このような医薬品組成物については、下で詳細に述べる。
【００５７】
別の態様では、本発明は共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性について特定の調節プロフィールを有する、標的化合物を同定する方法を提供する。一般に方法は、標的調節プロフィールを選択するステップと、調節プロフィールを判定するステップと、試験化合物の調節プロフィールが標的調節プロフィールに合致する場合、試験化合物を標的化合物として同定するステップを含む。
【００５８】
ここでの用法では、調節プロフィールは１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性に関する情報を含む。標的調節プロフィールの文脈で、プロフィールは、１つ以上の所望の調節されるＴＬＲ−媒介生物学的活性を含んでも良い。例えば特定の病状は、例えばＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現およびＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−非依存性ＩＦＮ−α発現など、共通のＴＬＲによって媒介される生物学的活性を差別的に調節することで効果的に処置されても良い。その病状を処置するための標的調節プロフィールとしては、例えば（ａ）１つのＴＬＲ７−媒介細胞活性を調節するが、その他の活性を検知できる程に調節しない、（ｂ）反対様式で２つの異なる細胞活性を調節する（すなわち１つの活性を誘導しその他の活性を阻害する）、または（ｃ）２つの細胞活性を同一様式で調節する（すなわち双方の活性を誘導または阻害する）が、１つの活性をその他の活性よりも大きく調節することが挙げられる。
【００５９】
標的調節プロフィールは、所望の結果を提供するのに知られているおよび／または必要とされる情報を全て、またはわずかに含んでも良い。場合によっては、標的調節プロフィールの当該部分は、ＴＬＲによって媒介されるあらゆるその他の細胞活性、またはあらゆるその他のＴＬＲによって媒介されるあらゆる細胞活性に関係なく、共通のＴＬＲ（例えばＴＬＲ７）によって媒介される１つ以上の細胞活性を含んでも良い。これは処置する病状、またはその生物学的活性を調節することが意図される標的細胞集団に関連した特定要因のためかもしれない。このような要因としては、標的細胞によって発現されるＴＬＲのアイデンティティ、標的細胞によって発現されるＴＬＲの発現の相対レベル、１つ以上の細胞活性を調節するかもしれない追加的要因の存在または不在、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）の標的細胞の位置、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）である場合は標的細胞が位置する組織または器官、および生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）である場合は対象の免疫系の一般的状態（例えば抑制される、損なわれる、刺激される）が挙げられるが、これに限定されるものではない。
【００６０】
試験化合物の調節プロフィールは、あらゆる適切な様式で判定しても良い。化合物の調節プロフィールを判定する一方法は、上で詳述したアッセイなどの１つ以上のアッセイを実施して、試験化合物が、特定のＴＬＲによって媒介される生物学的活性を検知できる程に調節するかどうかを判定することである。代案としては、特定の化合物は１つ以上のＴＬＲの作動薬であることが知られており、免疫細胞とこのような化合物とを接触させることの生物学的効果もまた、知られていても良い。場合によっては、例えば観察される効果が特定のＴＬＲ−媒介生物学的活性に相関しているかもしれない場合、試験化合物の調節プロフィールの少なくとも一部は、対象に化合物を投与する効果の臨床または事例観察に由来しても良い。
【００６１】
試験化合物の調節プロフィールは、標的調節プロフィールとの比較のために所望される情報を全て、またはわずかに含んでも良い。試験化合物の調節プロフィールのために所望される情報の程度は、標的調節プロフィールの判定に関して上で列挙した要因をはじめとするが、これに限定されるものではないいくつかの要因に、少なくともある程度左右されても良い。
【００６２】
特定の標的調節プロフィールに合致するとして、試験化合物を同定することは、試験化合物の調節プロフィールと標的調節プロフィールとを比較することを伴う。場合によっては、標的調節プロフィールおよび試験化合物の調節プロフィールは、実質的に同一またはほぼ同一であっても良い。このような場合、試験化合物は標的調節プロフィールに合致すると容易に同定できる。
【００６３】
標的調節プロフィールおよび試験化合物の調節プロフィールがいくらか異なる特定の場合、試験化合物はなおも所望の調節プロフィールに合致すると同定されても良い。例えば試験化合物は、標的調節プロフィールの目的に、わずかな関連性しか持たない特定のＴＬＲ−媒介細胞活性を調節するかもしれない。代案としては、場合によっては、標的調節プロフィールは、試験化合物によって検知できる程には調節されない、１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性を含むことができる。標的調節プロフィールの異なる部分は、主要なおよび二次的重要性があると見なされても良く、試験化合物の調節プロフィールが主要な調節活性を含んでいれば、たとえ標的調節プロフィールの二次的調節活性を含まなくても、試験化合物は標的調節プロフィールに合致すると同定されても良い。例えば標的調節プロフィールは、ＩＦＮ−α１発現を誘導する主要な調節活性、およびＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を阻害する二次的調節活性を含んでも良い。しかし適切にＩＦＮ−α１発現を誘導するが、例えばＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を調節しない試験化合物は、特定の状況では標的調節プロフィールに合致すると見なされても良い。当業者は全ての関連要因を考慮して、試験化合物プロフィールが二次的調節活性を満たさなくても、標的調節プロフィールの主要な調節活性を十分満たして、試験化合物の調節プロフィールが標的調節プロフィールと合致する場合を判断できるであろう。
【００６４】
標的調節プロフィールは、標的調節プロフィールに合致すると同定される化合物が使用される特定の用途次第で変動しても良い。例えば特定のウィルス性感染の処置は、タイプＩインターフェロンのＴＬＲ７−媒介生成を選択的に誘導して、特定の抗原呈示細胞（ＡＰＣ）を活性化する化合物の投与から恩恵を被るかもしれない。
【００６５】
代案としては、特定のタイプの腫瘍の処置は、ＴＬＲ７−媒介ＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を選択的に誘導する化合物を使用することから、恩恵を被るかもしれない。このような化合物は、化合物が投与される領域に局在する、例えばＩＬ−１２分泌および強い炎症性応答の誘導をはじめとする免疫系活性を誘導しても良い。
【００６６】
別の代案としては、いくつかの病状の処置は、タイプＩインターフェロン生成、およびＮＦ−κＢ−依存遺伝子発現を誘導する化合物の投与から恩恵を被るかもしれない。このような処置は、一緒に相乗的にＩＦＮ−γ生成を増進する、タイプＩインターフェロン生成およびＩＬ−１２生成を誘導しても良い。ＩＦＮ−γ生成は、メラノーマおよび腎臓細胞癌をはじめとするが、これに限定されるものではない、悪性癌に対する免疫応答を促進するのを助けるかもしれない。
【００６７】
本発明はまた、上述の方法に従って、標的化合物として同定される化合物を提供する。上述の方法では、共通のＴＬＲによって調節される細胞活性のあらゆる適切な標的調節プロフィールを用いることができ、ＴＬＲのいずれかによって調節されるいくつもの細胞活性の調節に関連した情報が組み合わされる。したがって上述の方法は、共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の特定の標的調節プロフィールに合致する広範な化合物を同定する、強力なツールたり得る。このようにして同定された化合物は、医薬品組成物中に組み込まれても良い。このような医薬品組成物については下で詳述する。
【００６８】
別の態様では、本発明は、免疫系細胞を選択的に調節する方法を提供する。概して方法は、ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性を有する第１の免疫系細胞集団、同一ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を有する第２の免疫系細胞集団を同定するステップと、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する化合物を選択するステップと、免疫系細胞と、少なくとも１つの細胞活性を調節するのに効果的な量の選択される化合物とを接触させることで、少なくとも１つの細胞集団の細胞を選択的に調節するステップを含む。
【００６９】
免疫系は様々な細胞集団を含み、各集団は、免疫学的チャレンジに対する効果的な免疫応答の開始を促進する１つ以上の機能を果たす。様々な細胞集団は、血液、皮膚、骨髄、胸線、リンパ系、および間質内領域をはじめとするが、これに限定されるものではない、体内の異なる領域に存在する。様々な免疫細胞集団はまた、様々なＴＬＲを異なる程度に発現する。例えば単球は相対的に大量のＴＬＲ２およびＴＬＲ４を発現し、顕著なレベルの例えばＴＬＲ１およびＴＬＲ８発現も示す。Ｂリンパ球は、相対的に高いＴＬＲ１、ＴＬＲ６、およびＴＬＲ１０発現を示すが、例えばＴＬＲ７およびＴＬＲ９もまた発現する。形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）はＴＬＲ９を優性に発現するが、いくつかのＴＬＲ１、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、およびＴＬＲ１０もまた発現する。
【００７０】
いくつかの化合物が、ＴＬＲによって媒介される少なくとも１つの生物学的活性を調節するが、同一ＴＬＲによって媒介される別の活性は調節しないという発見により、本発明は、それによって免疫系細胞が選択的に調節できる手段を提供する。選択的調節は、１つのＴＬＲ−媒介細胞の活性または免疫細胞集団を調節しながら、同一ＴＬＲによって媒介される別の細胞活性の活性、または別の免疫細胞集団を実質的に調節しない形態を取っても良い（すなわち質的または「オン・オフ」調節）。代案としては、選択的調節は、共通のＴＬＲによって調節される２つの以上の生物学的活性、または２つ以上の免疫細胞集団群を異なる程度に調節するステップを伴っても良い（すなわち量的調節）。
【００７１】
特定の実施形態では、本発明の方法は、各細胞集団の細胞のＴＬＲ発現プロフィールを判定するステップを含む。ＴＬＲ発現プロフィールは、ＰＣＲ分析などによるＴＬＲ発現の検出と、ＴＬＲタンパク質合成のパルス−チェイス分析と、免疫組織化学、ウエスタンブロット、またはフローサイトメトリーなどであるがこれに限定されるものではない分析のためのＴＬＲ−特異的抗体を使用したＴＬＲの標識をはじめとするが、これに限定されるものではないあらゆる適切な方法によって判定しても良い。
【００７２】
免疫細胞の選択的調節は、細胞を検知できる程に活性化または誘導するステップ、または細胞を検知できる程に阻害するステップを含んでも良い。免疫系細胞は、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）または生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）のどちらかで、選択的に調節されても良い。生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）での選択的調節は、対象から免疫細胞のサンプルを収集するステップと、収集された免疫細胞を生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で培養するステップと、選択された化合物を細胞培養に添加するステップを含んでも良い。対象から収集される免疫細胞のサンプルは異種起源細胞サンプルであっても良く、すなわちサンプルは１つを超える免疫細胞集団の細胞を含んでも良い。細胞が選択的に調節された後、処理済み細胞を対象に再度導入して、それによって予防的なまたは治療的な処置を提供しても良い。代案としては、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で選択的に調節された細胞は診断用用途を有するかもしれない。
【００７３】
いくつかの実施形態では、生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で選択的に調節される細胞は、対象から採取されるのでなく遺伝的に改変されても良い。このような細胞は、例えばＴＬＲ−媒介生物学的活性をさらに解明するなど、実験ツールとしての有用性を持つかもしれない。
【００７４】
生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）での選択的調節は、選択された化合物を対象に投与するステップを含んでも良い。選択された化合物は、局所、注射（例えば静脈内、皮下、腹腔内、皮内）、吸入、摂取、経皮、または経粘膜デリバリをはじめとするが、これに限定されるものではない、あらゆる適切な様式で投与されても良い。
【００７５】
対象中で免疫細胞を選択的に調節するのに効果的な選択される化合物の特定の量は、少なくともある程度１つ以上の要因に左右されても良い。このような要因としては、投与される特定の化合物、対象の免疫系の状態（例えば抑制されている、損なわれている、刺激されている）、調節される細胞のアイデンティティと位置、化合物を投与する経路、調節される細胞のＴＬＲ発現プロフィール、および所望の結果（例えば予防的なまたは治療的な処置）が挙げられるが、これに限定されるものではない。したがって化合物の効果的な量を構成する量を一般的に述べることは、実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮して、適切な量を容易に判定できる。
【００７６】
免疫系細胞を選択的に調節するのに効果的な選択される化合物の量は、標的細胞集団または集団群（例えば単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞など）に、少なくとも１つのＴＬＲ−媒介生物学的活性（例えばサイトカイン生成）の変更を引き起こさせるのに十分な量である。
【００７７】
免疫細胞を選択的に調節するのに効果的な選択される化合物の正確な量は、技術分野で知られている要因に従って変動するが、特定の実施形態では、約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、例えば約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ用量の量であることができる。その他の実施形態では、量は、約０．００１μＭ〜約１００μＭの選択される化合物の最終濃度を適切な溶液中に提供するのに、十分な量であっても良い。選択される化合物の最小量は上述の要因次第で変動しても良いが、特定の実施形態では０．００１μＭ、０．００３μＭ、０．０１μＭ、０．０３μＭ、０．１μＭ、０．３μＭ、１．０μＭ、３．０μＭ、または１０μＭであっても良い。同様に、選択される化合物の最大量は上述の要因次第で変動しても良いが、特定の実施形態では１００μＭ、３０μＭ、１０μＭ、３μＭ、１．０μＭ、０．３μＭ、または０．１μＭであっても良い。
【００７８】
いくつかの実施形態では、選択される化合物は、下で詳述する小型有機ＩＲＭ分子をはじめとする既知のＩＲＭ化合物、または上述のプリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列であることができる。代案としては、選択される化合物は、本発明に従った方法のいくつかをはじめとする、このような化合物を同定するあらゆる適切な方法によって同定される、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節できる化合物であっても良い。
【００７９】
上述のように、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性から細胞活性を選択的に調節する化合物（「選択的活性」化合物）は、医薬品組成物に組み込まれても良い。このような組成物は、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性から１つ以上の細胞活性を選択的に調節することによって処置できる、病状の処置のために有用であっても良い。
【００８０】
選択的活性化合物は、治療計画において単一処置薬として投与できる。代案としては、選択的活性化合物は、別の選択的活性化合物と組み合わせて、または追加的なＩＲＭ化合物、免疫原、アジュバント、抗ウィルス剤、抗生物質、抗癌剤などをはじめとする１つ以上の活性薬剤との組み合わせで投与されても良い。
【００８１】
したがって本発明はまた、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の選択的調節で処置できる病状を処置する方法を提供する。一般に、方法は病状の処置に効果的な、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを同定するステップと、標的調節プロフィールに合致する、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性調節プロフィールを有する選択的活性化合物を選択するステップと、病状を処置するのに効果的な量の選択的活性化合物を対象に投与するステップを含む。
【００８２】
病状を処置することは、予防的なまたは治療的な処置のいずれかを伴っても良い。ここでの用法では、予防的な処置とは病状の症状または徴候の発現前に開始される処置を指す。したがって予防的な処置は、処置を受ける対象が病状を発する可能性を低下させ、発症した場合は病状の激しさを低下させ、またはその双方であるように一般にデザインされる。ここでの用法では、治療的な処置とは、症状または病状の徴候の発症後に開始される処置を指す。したがって治療的な処置は、病状の進行を制限または低下させるようにデザインされる。場合によっては、治療的な処置は、完全な寛解に至るまでの病状の逆転をもたらすことができる。
【００８３】
共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の標的調節プロフィールを同定することは、病状に予防的なまたは治療的な処置を提供するために、いずれの免疫系細胞集団または集団群が良く適しているかを判定するステップと、次に同定された細胞集団群のいずれのＴＬＲ−媒介細胞活性が調節されて所望の処置を提供するかを判定するステップを伴っても良い。
【００８４】
選択的活性化合物の共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の調節プロフィールは、ＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するようにデザインされた１つ以上のアッセイを実施して判定しても良い。代案としては、ＩＲＭ化合物の共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の調節プロフィールは、臨床または事例観察によって判定されても良い。
【００８５】
標的調節プロフィールに合致する、共通のＴＬＲによって調節される細胞活性の調節プロフィールを有する選択的活性化合物を選択することは、特定の調節プロフィールを有する標的化合物を同定するアッセイに関して上述したのと同一の考察を伴う。
【００８６】
選択的活性化合物を投与することで処置されても良い病状としては、以下が挙げられるが、これに限定されるものではない。
（ａ）例えばアデノウィルス、ヘルペスウィルス（例えばＨＳＶ−Ｉ、ＨＳＶ−ＩＩ、ＣＭＶ、またはＶＺＶ）、ポックスウィルス（例えば痘瘡またはワクシニア、または伝染性軟属腫などのオルトポックスウィルス）、ピコルナウィルス（例えばライノウィルスまたはエンテロウィルス）、オルトミクソウィルス（例えばインフルエンザウィルス）、パラミクソウイルス（例えばパラインフルエンザウィルス、おたふく風邪ウィルス、はしかウィルス、および呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ））、コロナウィルス（例えばＳＡＲＳ）、パポバウィルス（例えば生殖器疣、尋常性肬贅、または足底疣贅を引き起こすものなどの乳頭腫ウィルス）、ヘパドナウィルス（例えば肝炎Ｂウィルス）、フラビウイルス（例えば肝炎Ｃウィルスまたはデングウィルス）、またはレトロウィルス（例えばＨＩＶなどのレンチウイルス）による感染から帰結する疾患などのウィルス性疾患。
（ｂ）例えばエシェリキア属、エンテロバクター、サルモネラ、ブドウ球菌、赤痢菌、リステリア、アエロバクター、ヘリコバクター、クレブシエラ、プロテウス、シュードモナス、連鎖球菌、クラミジア、マイコプラズマ、肺炎球菌、ナイセリア、クロストリジウム、バシラス、コリネバクテリウム、マイコバクテリウム、カンピロバクター、ビブリオ、セラチア、プロビデンシア、クロモバクテリウム、ブルセラ、エルシニア、ヘモフィルス、またはボルデテラの細菌による感染から帰結する疾患などの細菌疾患。
（ｃ）クラミジアと、カンジダ症、アスペルギルス症、ヒストプラスマ症、クリプトコックス髄膜炎をはじめとするがこれに限定されるものではない真菌疾患と、またはマラリア、ニューモシスティスカリニ肺炎、レーシュマニア症、クリプトスポリジウム症、トキソプラズマ症、およびトリパノソーマ感染をはじめとするが、これに限定されるものではない寄生生物症などのその他の感染症。
（ｄ）上皮内新生物形成、子宮頚部異形成、光線性角化症、基底細胞癌、扁平細胞癌、腎臓細胞癌、カポジ肉腫、メラノーマ、腎臓細胞癌などの新生物疾患と、骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、複数骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚のＴ−細胞リンパ腫、Ｂ−細胞リンパ腫、および毛様細胞白血病はじめとするが、これに限定されるものではない白血病、およびその他の癌。
（ｅ）アトピー性皮膚炎または湿疹、好酸球増加症、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、およびオーメン症候群などのＴH２−媒介、アトピー性疾患。
（ｆ）全身性エリテマトーデス、本態性血小板血症、多発性硬化症、円板状エリテマトーデス、円形脱毛症どの特定の自己免疫疾患。
（ｇ）例えばケロイドおよびその他のタイプの瘢痕形成の阻害（例えば慢性創傷をはじめとする創傷治癒の促進）などの創傷修復に関連する疾患。
【００８７】
さらに選択的活性化合物は、例えばＢＣＧ、コレラ、ペスト、腸チフス、肝炎Ａ、肝炎Ｂ、肝炎Ｃ、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、パラインフルエンザ、ポリオ、狂犬病、はしか、おたふく風邪、風疹、黄熱病、破傷風、ジフテリア、ヘモフィルスインフルエンザｂ、結核、髄膜炎菌性および肺炎球菌ワクチン、アデノウィルス、ＨＩＶ、水痘、サイトメガロウィルス、デング、ネコ白血病、家禽ペスト、ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２、豚コレラ、日本脳炎、呼吸器合胞体ウイルス、ロタウィルス、乳頭腫ウィルス、黄熱病、およびアルツハイマー疾患に関連して使用するための、例えば生ウィルス、細菌、または寄生虫免疫原と、不活性化ウィルス、腫瘍−由来、原生動物、生物体−由来、真菌、または細菌免疫原、類毒素、毒素と、自己抗原と、多糖類と、タンパク質と、糖タンパク質と、ペプチドと、細胞ワクチンと、ＤＮＡワクチンと、自己ワクチンと、組み換えタンパク質と、糖タンパク質と、ペプチドなどの体液性および／または細胞性いずれかの媒介免疫応答を生じるあらゆる材料との組み合わせで使用するためのワクチンアジュバントとして有用かもしれない。
【００８８】
特定の選択的活性化合物は、損なわれた免疫機能を有する個人において特に有用であるかもしれない。例えば特定の化合物は、例えば移植患者、癌患者、およびＨＩＶ患者において、細胞媒介免疫の抑制後に生じる日和見感染および腫瘍を処置するために使用されても良い。
【００８９】
選択的活性化合物は、対象への投与に適したあらゆる調合物中で提供されても良い。適切なタイプの調合物については、例えば米国特許第５，７３６，５５３号明細書、同第５，２３８，９４４号明細書、同第５，９３９，０９０号明細書、同第６，３６５，１６６号明細書、同第６，２４５，７７６号明細書、同第６，４８６，１８６号明細書、欧州特許第ＥＰ０３９４０２６号明細書、および米国特許公報第２００３／０１９９５３８号明細書で述べられる。選択的活性化合物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、またはあらゆる混合物の形態をはじめとするがこれに限定されるものではないあらゆる適切な形態で提供されても良い。選択的活性化合物は、あらゆる薬剤的に許容可能な賦形剤、キャリア、またはビヒクルと共に調合物中でデリバリされても良い。例えば調合物は、例えばクリーム、軟膏、煙霧剤調合物、非煙霧剤スプレー、ゲル、ローションなどの従来の局所用調剤中でデリバリされても良い。調合物は、例えばアジュバント、皮膚透過賦活剤、着色剤、芳香剤、香料、保湿剤、増粘剤などの１つ以上の添加剤をさらに含むことができる。
【００９０】
調合物は、例えば非−非経口または非経口でなどのあらゆる適切な様式で投与されても良い。ここでの用法では、非−非経口とは経口摂取をはじめとする、消化管を通した投与を指す。非経口とは、例えば静脈内、筋肉内、経皮、皮下、経粘膜（例えば吸入）、または局所などの消化管を通した以外の投与を指す。
【００９１】
いくつかの実施形態では、選択的活性化合物は、対象に例えば約０．０００１％〜約１０％（特に断りのない限りここで提供されるあらゆる百分率は、全調合物に対する重量／重量である）の調合物で対象に投与できるが、いくつかの実施形態では、選択的活性化合物は、この範囲外の濃度で選択的活性化合物を提供する調合物を使用して投与されても良い。特定の実施形態では、方法は、例えば約０．１％〜約０．５％の選択的活性化合物を含む調合物などをはじめとする、約０．０１％〜約１％の選択的活性化合物を含む調合物を対象に投与するステップを含む。
【００９２】
病状を処置するのに効果的な選択的活性化合物の量は、所望の治療的なまたは予防的な利点を提供するのに十分な量である。病状を処置するための選択的活性化合物の正確な量は、病状、選択的活性化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、意図される投与計画、対象の免疫系の状態（例えば抑制されている、損なわれている、刺激されている）、選択的活性化合物を投与する方法、および調合物が投与される種をはじめとするが、これに限定されるものではない、技術分野で既知の要因次第で変動する。したがってあらゆる可能な用途において、病状を処置するために効果的な選択的活性化合物の量を構成する量を一般に述べることは実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮して、適切な量を容易に判定できる。
【００９３】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、例えば対象に約１００ｎｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの用量を提供するのに十分な選択的活性化合物を投与するステップを含むが、いくつかの実施形態では、方法はこの範囲外の濃度で選択的活性化合物を投与して実施されても良い。これらの実施形態のいくつかでは、方法は、例えば約１００μｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇの用量などの約１０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇの用量を提供するのに十分な選択的活性化合物を対象に投与するステップを含む。
【００９４】
投与計画は、少なくともある程度、病状、選択的活性化合物の物理的および化学的性質、キャリアの性質、投与される選択的活性化合物の量、対象の免疫系の状態（例えば抑制されている、損なわれている、刺激されている）、選択的活性化合物を投与する方法、および調合物が投与される種をはじめとするが、これに限定されるものではない、技術分野で既知の多くの要因に左右されても良い。したがってあらゆる可能な用途において、病状を処置するために効果的な投与計画を一般に述べることは実用的でない。しかし当業者はこのような要因を十分考慮して、適切な量を容易に判定できる。
【００９５】
本発明のいくつかの実施形態では、選択的活性化合物は、例えば毎日単回の投与から複数回の投与で投与されても良いが、いくつかの実施形態では、本発明の方法は、この範囲外の頻度で選択的活性化合物を投与して実施されても良い。特定の実施形態では、選択的活性化合物は、例えば選択的活性化合物を毎日１回投与するなど、週約１回から毎日約３回で投与されても良い。
【００９６】
病状を処置される生物体は、植物または動物、特に脊椎動物であっても良い。好ましくは傷害を処置される生物体は、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、またはウシなどであるが、これに限定されるものではない哺乳類である。
【００９７】
いくつかの実施形態では、選択される化合物は、以下で詳細に述べられる小型有機ＩＲＭ分子をはじめとする既知のＩＲＭ化合物、または上述のプリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列であることができる。代案としては、選択される化合物は、本発明に従った方法のいくつかをはじめとする、このような化合物を同定するあらゆる適切な方法によって同定される、少なくとも１つのＴＬＲ−媒介細胞活性を選択的に調節できる化合物であっても良い。
【００９８】
本発明で使用するのに適したＩＲＭ化合物としては、五員環窒素含有ヘテロ環に縮合した２−アミノピリジンを有する化合物が挙げられる。例えばこのような化合物としては、例えばアミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、および６−、７−、８−、または９−アリールまたはヘテロアリール置換イミダゾキノリンアミンなどの置換イミダゾキノリンアミンをはじめとするが、これに限定されるものではないイミダゾキノリンアミンと、アミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、尿素置換テトラヒドロイミダゾキノリンエーテル、およびチオエーテル置換テトラヒドロイミダゾキノリンアミンをはじめとするが、これに限定されるものではないテトラヒドロイミダゾキノリンアミン、アミド置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミド置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンアミン、アリールエーテル置換イミダゾピリジンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾピリジンアミン、アミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾピリジンアミン、尿素置換イミダゾピリジンエーテル、およびチオエーテル置換イミダゾピリジンアミンをはじめとするが、これに限定されるものではないイミダゾピリジンアミンと、１，２−架橋イミダゾキノリンアミンと、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミンと、イミダゾナフチリジンアミンと、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミンと、オキサゾロキノリンアミンと；チアゾロキノリンアミンと、オキサゾロピリジンアミンと、チアゾロピリジンアミンと、オキサゾロナフチリジンアミンと、チアゾロナフチリジンアミンと、ピリジンアミン、キノリンアミン、テトラヒドロキノリンアミン、ナフチリジンアミン、またはテトラヒドロナフチリジンアミンに縮合した１Ｈ−イミダゾ二量体とが挙げられる。
【００９９】
特定の実施形態では、ＩＲＭ化合物は、置換イミダゾキノリンアミン、テトラヒドロイミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、１，２−架橋イミダゾキノリンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、イミダゾナフチリジンアミン、テトラヒドロイミダゾナフチリジンアミン、オキサゾロキノリンアミン、チアゾロキノリンアミン、オキサゾロピリジンアミン、チアゾロピリジンアミン、オキサゾロナフチリジンアミン、またはチアゾロナフチリジンアミンであっても良い。
【０１００】
ここでの用法では、置換イミダゾキノリンアミンとは、アミド置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミド置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンアミン、アリールエーテル置換イミダゾキノリンアミン、ヘテロ環式エーテル置換イミダゾキノリンアミン、アミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、スルホンアミドエーテル置換イミダゾキノリンアミン、尿素置換イミダゾキノリンエーテル、チオエーテル置換イミダゾキノリンアミン、または６−、７−、８−、または９−アリールまたはヘテロアリール置換イミダゾキノリンアミンを指す。ここでの用法では置換イミダゾキノリンアミンは、具体的におよび明示的に１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミンおよび４−アミノ−α，α−ジメチル−２−エトキシメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノールを除外する。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、選択される化合物は、上で詳述した小型有機ＩＲＭ分子をはじめとする既知のＩＲＭ化合物、または上述のプリン誘導体、小型ヘテロ環式化合物、アミド誘導体、およびオリゴヌクレオチド配列であることができる。代案としては、選択される化合物は、共通のＴＬＲによって媒介され、本発明に従ったいくつかの方法をはじめとするこのような化合物を同定するあらゆる適切な方法で同定される、複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節できる化合物であっても良い。
【実施例】
【０１０２】
以下の実施例は、単に本発明の特徴、利点、およびその他の詳細をさらに例証するために選択されている。しかし実施例はこの目的を果たしながら、使用する特定の材料および量ならびにその他条件および詳細は、本発明の範囲を不当に制限するものではないことが明示的に理解されるものとする。
【０１０３】
以下に提供する実施例で使用されるＩＲＭ化合物を表２で特定する。
【０１０４】
【表２】
【表３】
【表４】
【０１０５】
細胞
ＨＥＫ２９３細胞：不死化ヒト胎生期腎細胞は、バージニア州マナッサスの米国微生物系統保存機関から入手できる（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１５７３）。
【０１０６】
ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞：バーキットリンパ腫リンパ芽球腫細胞は、バージニア州マナッサスのＡＴＣＣ米国微生物系統保存機関から入手できる（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−１４３２）。
【０１０７】
ＨＥＫ２９３細胞におけるＴＬＲ７活性化
２ｍＭのＬ−グルタミン添加９０％最小基本培地（ＭＥＭ）と、１．５ｇ／Ｌの炭酸水素ナトリウム、０．１ｍＭの非必須アミノ酸、および１．０ｍＭのピルビン酸ナトリウムを含有するように調整されたメリーランド州ロックビルのインビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ））からのアール平衡塩溶液と、１０％熱不活性化ウシ胎児血清とからＨＥＫ２９３培地を調製した。細胞をＨＥＫ２９３培地中で一晩３７℃、８％ＣＯ2でインキュベートして、ＨＥＫ２９３細胞を培養した。
【０１０８】
形質移入の２４時間前に、３７℃、８％ＣＯ2でＨＥＫ２９３細胞をニューヨーク州コーニングのコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ））からの１０ｃｍ皿（コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）４３０１６７）に付着させた。製造元の指示に従って（１）１０：１の比率である、ａ）未変性の（Ｈ−ベクター）、または（ｂ）発現性ヒトＴＬＲ７遺伝子（Ｈ−ＴＬＲ７）含有のいずれかであるカリフォルニア州パロ・アルトのＢＤバイオサイエンス・クロンテック（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ））からのｐＩＲＥＳ、および（２）カリフォルニア州ラ・ホーヤのストタラジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ））からのＮＦ−ｋＢ−ｌｕｃレポーターと、インディアナ州インディアナポリスのロシェ・ダイアグノスティックスからのフュージーン（Ｆｕｇｅｎｅ）６形質移入試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ））とで、細胞を同時形質移入した。形質移入に続いてプレートを２４時間インキュベートし、次にＧ−４１８（４００μｇ／ｍＬ）中で２週間選択した。刺激実験のために、発現性ＴＬＲ７遺伝子または空のベクターのいずれかを含有するＧ−４１８抵抗性細胞をＧ−４１８を補ったＨＥＫ２９３培地中で増殖させた。
【０１０９】
形質移入された細胞をウェル当たり１００μＬのＨＥＫ２９３培地中の５×１０4個の細胞の濃度で、ニューヨーク州コーニングのコスター、（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ））からの白色不透明な９６ウェルプレート（コスター（Ｃｏｓｔａｒ）３９１７）に蒔いて、３７℃、８％ＣＯ2で４時間インキュベートした。ＤＭＳＯ中１ｍＭの１μＬのＩＲＭ化合物（最終ＩＲＭ濃度１０μＭ）で、または対照として１μＬのＤＭＳＯで細胞を刺激した。次にプレートを３７℃、５％ＣＯ2でさらに１６時間インキュベートした。コネチカット州メリデンのパッカード・インターナショナル（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．（Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ）からのラックライト（ＬｕｃＬｉｔｅ）キットを使用してルシフェラーゼシグナルを読みとった。カリフォルニア州サニーベールモレキュラー・デバイシズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ））からのＬＭＡＸ照度計上でルミネッセンスを測定した。
【０１１０】
ナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞におけるＴＬＲ７活性化
特に断りのない限り、あらゆるインキュベーションは３７℃および湿度９８％で５％のＣＯ2と共に実施した。
【０１１１】
カリフォルニア州カマルリロのバイオソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ、ＣＡ））からの完全ＲＰＭＩ １６４０培地から培養液を調製した。コロラド州フォートコリンズのアトラス・バイオロジカルズ（Ａｔｌａｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（Ｆｔ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、ＣＯ））からのウシ胎仔血清を最終濃度７．５％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）で添加し、バイオソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）からのＬ−グルタミンを５ｍＭで添加し、ピルビン酸ナトリウム（バイオソース・インターナショナル（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．））を１ｍＭで添加した。
【０１１２】
培養液中で一晩のインキュベーションによりナマルワ（Ｎａｍａｌｗａ）細胞を培養した。卓上遠心分離（１２００ＲＰＭで５分間）によって細胞を収集し、次に１．３×１０7細胞／ｍＬの濃度でリン酸緩衝スクロースに再懸濁した。
【０１１３】
各形質移入のために、７５０μＬのアリコートの細胞懸濁液を４ｍｍのギャップを残して電気穿孔キュベットに入れた。各アリコートは形質移入ＤＮＡ、ＢｇｌＩＩ部位（ｐＩＦＮ−α１−ｌｕｃ）にクローンされたヒトＩＦＮ−α１プロモーターを含有するウィスコンシン州マジソンのプロメガ・コープ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））からの１０μｇのｐＧＬ３−促進ベクター、および（１）未変性（Ｎ−ベクター）の、または（２）発現性ヒトＴＬＲ７遺伝子（Ｎ−ＴＬＲ７）を含有する、プロメガ・コープ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）からの１０μｇのｐＣＩ−ネオ哺乳類発現ベクターを受容した。細胞とベクターの混合物を室温で５分間インキュベートした。５００μＦの電気容量および０．２７ボルトに設定した、カリフォルニア州ハーキュリーズのバイオラドラ・ボラトリーズ（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ））からのバイオラドジーンパルサー（ＢｉｏＲａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ）を使用して細胞を電気穿孔し、次に室温で５分間インキュベートした。
【０１１４】
電気穿孔細胞を１０ｍＬの培養液に懸濁して、一晩インキュベートした。カリフォルニア州オーバーンのミルテニィ・バイオテック（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ））からのＭＡＣＳ死滅細胞除去キットを使用して、死滅細胞および残骸を２４時間後に除去した。細胞を１０ｍＬの培養液に再懸濁して、さらに２４時間インキュベートした。
【０１１５】
ウィスコンシン州マジソンのプロメガ・コープ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））からのＧ４１８を最終濃度１ｍｇ／ｍＬで添加し、細胞を７日間インキュベートすることによって、形質移入細胞を選択した。
【０１１６】
形質移入細胞を選択して計数し、１ｍＬあたり１×１０6細胞の濃度で培養液中に再懸濁した。１００μｌの細胞のアリコートをニューヨーク州コーニングのコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．（Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ））からの白色壁白色底の９６−ウェルプレートのウェルに入れた。表１からの１．０μＬのＩＲＭ化合物（１００％ＤＭＳＯ中１ｍＭに調製された）をＩＲＭ化合物が１０μＭの最終濃度になるように、いくつかの細胞アリコートに添加した。正の対照として、ＩＲＭ化合物の代わりにセンダイウィルスと共にいくつかの細胞アリコートをインキュベートした。負の対照として、ＩＲＭ化合物なしのＤＭＳＯと共にいくつかの細胞アリコートをインキュベートした。全ての場合で細胞を１８時間インキュベートした。
【０１１７】
コネチカット州メリデンのパッカード・インストゥルメンツ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｍｅｒｉｄｅｎ、ＣＴ））からの水で戻した１容積のＬｕｃＬｉｇｈｔ Ｐｌｕｓを細胞の各アリコートに添加する前に、プレートを室温で平衡化した。５分間暗順応に設定したカリフォルニア州サニーベールのＬＪＬバイオシステムズ（ＬＪＬ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ））からのＬＪＬアナリスト（Ａｎａｌｙｓｔ）上で、プレートの各ウェルを読み取った。
【０１１８】
結果を表３に報告する。データをそれぞれ、化合物なしのＤＭＳＯ対照に正規化した（Ｈ−ＴＬＲ７／Ｈ−ベクター）および（Ｎ−ＴＬＲ７／Ｎ−ベクター）のＴＬＲ７−媒介ルシフェラーゼシグナルにおける増大倍数として表す。
【０１１９】
【表５】
【０１２０】
本発明の範囲と精神を逸脱することなく、本発明の様々な修正と変更が可能であることは業者には明らかである。例証的な実施形態および実施例は例としてのみ提供され、本発明の範囲を制限することを意図しない。本発明の範囲は以下で述べる特許請求の範囲によってのみ制限されるものとする。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するステップと、
（２）上記ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するステップと、
（３）試験化合物が、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として、上記試験化合物を同定するステップと、を含んでなる、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法。
【請求項２】
前記試験化合物が前記第１の細胞活性を調節し、前記第２の細胞活性を調節しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法に従って同定される化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の方法に従って同定される化合物を含んでなる、医薬品組成物またはそのプロドラッグ。
【請求項５】
（１）共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを選択するステップと、
（２）共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の調節プロフィールを試験化合物について判定するステップと、
（３）上記試験化合物の調節プロフィールが上記標的調節プロフィールに合致する場合、該試験化合物を標的化合物として同定するステップと、を含んでなる、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを有する標的化合物を同定する方法。
【請求項６】
前記標的調節プロフィールが、検知できる程に標的化合物によって調節されない１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
試験化合物の調節プロフィールを判定することが、ＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するための少なくとも１つのアッセイを実施することを含んでなる、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
請求項５に記載の方法に従って、標的化合物として同定される化合物。
【請求項９】
請求項５に記載の方法に従って同定される標的化合物を含んでなる、医薬品組成物またはそのプロドラッグ。
【請求項１０】
（１）ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性を有する第１の免疫系細胞集団、および上記ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を有する第２の免疫系細胞集団を同定するステップと、
（２）上記第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に上記第１の細胞活性を調節する化合物を選択するステップと、
（３）免疫系細胞と、少なくとも１つの細胞活性を調節するのに効果的な量の上記選択された化合物とを接触させることにより、少なくとも１つの細胞集団の細胞を調節するステップと、を含んでなる、免疫系細胞を選択的に調節する方法。
【請求項１１】
前記第１の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィール、および前記第２の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィールを判定するステップをさらに含んでなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
化合物を選択するステップが、前記第１の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィールおよび前記第２の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィールと、化合物のＴＬＲ−媒介細胞活性調節プロフィールとを比較するステップを含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞活性を調節することが、検知できる程に細胞活性を増大させる、または検知できる程に細胞活性を低下させることを含んでなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が前記第１の細胞活性を調節して、前記第２の細胞活性を検知できる程に調節しない、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が双方の細胞活性を調節する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つの細胞集団が生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で調節される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの細胞集団が生体内で（ｉｎ ｖｉｖｏ）で調節される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
（１）病状を処置するのに効果的な、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを同定するステップと、
（２）上記標的調節プロフィールに合致する、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の調節プロフィールを有する化合物を選択するステップと、
（３）上記病状を処置するのに効果的な量の上記化合物を対象に投与するステップと、を含んでなる、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の選択的調節で処置できる病状を有する対象を処置する方法。
【請求項１９】
前記病状が感染症または新生物性病状である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記感染症がウィルス性疾患、真菌疾患、寄生生物症、細菌疾患、またはプリオン媒介疾患である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記新生物性病状が上皮内新生物、前癌新生物、または癌である、請求項１９に記載の方法。
【請求項１】
（１）ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性の調節を検出するステップと、
（２）上記ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性の調節を検出するステップと、
（３）試験化合物が、第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に第１の細胞活性を調節する場合、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物として、上記試験化合物を同定するステップと、を含んでなる、共通のＴＬＲによって媒介される複数の細胞活性の少なくとも１つの細胞活性を選択的に調節する化合物を同定する方法。
【請求項２】
前記試験化合物が前記第１の細胞活性を調節し、前記第２の細胞活性を調節しない、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法に従って同定される化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の方法に従って同定される化合物を含んでなる、医薬品組成物またはそのプロドラッグ。
【請求項５】
（１）共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを選択するステップと、
（２）共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の調節プロフィールを試験化合物について判定するステップと、
（３）上記試験化合物の調節プロフィールが上記標的調節プロフィールに合致する場合、該試験化合物を標的化合物として同定するステップと、を含んでなる、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを有する標的化合物を同定する方法。
【請求項６】
前記標的調節プロフィールが、検知できる程に標的化合物によって調節されない１つ以上のＴＬＲ−媒介細胞活性を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
試験化合物の調節プロフィールを判定することが、ＴＬＲ−媒介細胞活性の調節を検出するための少なくとも１つのアッセイを実施することを含んでなる、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
請求項５に記載の方法に従って、標的化合物として同定される化合物。
【請求項９】
請求項５に記載の方法に従って同定される標的化合物を含んでなる、医薬品組成物またはそのプロドラッグ。
【請求項１０】
（１）ＴＬＲによって媒介される第１の細胞活性を有する第１の免疫系細胞集団、および上記ＴＬＲによって媒介される第２の細胞活性を有する第２の免疫系細胞集団を同定するステップと、
（２）上記第２の細胞活性を調節するのとは異なる程度に上記第１の細胞活性を調節する化合物を選択するステップと、
（３）免疫系細胞と、少なくとも１つの細胞活性を調節するのに効果的な量の上記選択された化合物とを接触させることにより、少なくとも１つの細胞集団の細胞を調節するステップと、を含んでなる、免疫系細胞を選択的に調節する方法。
【請求項１１】
前記第１の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィール、および前記第２の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィールを判定するステップをさらに含んでなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
化合物を選択するステップが、前記第１の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィールおよび前記第２の細胞集団のＴＬＲ発現プロフィールと、化合物のＴＬＲ−媒介細胞活性調節プロフィールとを比較するステップを含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞活性を調節することが、検知できる程に細胞活性を増大させる、または検知できる程に細胞活性を低下させることを含んでなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記化合物が前記第１の細胞活性を調節して、前記第２の細胞活性を検知できる程に調節しない、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記化合物が双方の細胞活性を調節する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
少なくとも１つの細胞集団が生体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）で調節される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの細胞集団が生体内で（ｉｎ ｖｉｖｏ）で調節される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
（１）病状を処置するのに効果的な、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の標的調節プロフィールを同定するステップと、
（２）上記標的調節プロフィールに合致する、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の調節プロフィールを有する化合物を選択するステップと、
（３）上記病状を処置するのに効果的な量の上記化合物を対象に投与するステップと、を含んでなる、共通のＴＬＲによって媒介される細胞活性の選択的調節で処置できる病状を有する対象を処置する方法。
【請求項１９】
前記病状が感染症または新生物性病状である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記感染症がウィルス性疾患、真菌疾患、寄生生物症、細菌疾患、またはプリオン媒介疾患である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記新生物性病状が上皮内新生物、前癌新生物、または癌である、請求項１９に記載の方法。
【公表番号】特表２００６−５２３４５２（Ｐ２００６−５２３４５２Ａ）
【公表日】平成１８年１０月１９日（２００６．１０．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０７５２５（Ｐ２００６−５０７５２５）
【出願日】平成１６年３月２４日（２００４．３．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８９７９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８７０４９
【国際公開日】平成１６年１０月１４日（２００４．１０．１４）
【出願人】（５９９０５６４３７）スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー (1,802)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１０月１９日（２００６．１０．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年３月２４日（２００４．３．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８９７９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８７０４９
【国際公開日】平成１６年１０月１４日（２００４．１０．１４）
【出願人】（５９９０５６４３７）スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー (1,802)
【Ｆターム（参考）】
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