分析方法
【課題】抗原および抗体に比して大きい粒子を用いた免疫学的反応において、抗原と抗体との反応効率を向上させることができる分析方法を提供すること。
【解決手段】抗原Ａ１に対して、抗原Ａ１の特定部位を認識し、光学的に認識可能なＳＥＲＳ活性粒子１４２と結合可能な第１の抗体１１、および抗原Ａ１の他の特定部位を認識し、磁性粒子Ｂと結合可能な第２の抗体１２を接触させて、抗原Ａ１、第１の抗体１１および第２の抗体１２からなる第１複合体１３を形成させる第１形成ステップと、第１複合体１３に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および磁性粒子Ｂを第１の抗体１１および第２の抗体１２に接触させて、第１複合体１３を含む第２複合体１７を形成させる第２形成ステップと、を含む。
【解決手段】抗原Ａ１に対して、抗原Ａ１の特定部位を認識し、光学的に認識可能なＳＥＲＳ活性粒子１４２と結合可能な第１の抗体１１、および抗原Ａ１の他の特定部位を認識し、磁性粒子Ｂと結合可能な第２の抗体１２を接触させて、抗原Ａ１、第１の抗体１１および第２の抗体１２からなる第１複合体１３を形成させる第１形成ステップと、第１複合体１３に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および磁性粒子Ｂを第１の抗体１１および第２の抗体１２に接触させて、第１複合体１３を含む第２複合体１７を形成させる第２形成ステップと、を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体と磁性粒子を含む試薬との反応物の光学的特性を測定して検体の分析処理を行う分析方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ラマン分光分析は、検体にレーザ光を照射することにより発生するラマン散乱光を検出する分析法であり、検出対象物の分子構造に関する情報を得ることができるため、ウィルス、蛋白質等の生化学物質や環境化学物質の検出、バイオセンサ等に有効な分析方法として知られている。しかしながら、このラマン分光分析は、ラマン散乱光が極めて微弱であることから、微量分析には適さないという問題があった。
【０００３】
一方、原子レベルの粗さを持つ金、銀などの金属表面における吸着種のラマン散乱強度は、非吸着種に比較して１０２−１０６倍増強される場合があることが知られており、この現象は表面増強ラマン散乱（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒｍａｎ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ；ＳＥＲＳ）と呼ばれている。さらに、金属ナノ粒子を凝集させることによって、非吸着種と比較してラマン散乱強度を１０１４倍程度まで増強させることができることが発見された。そこで、近年、原子レベルの粗さを持つ金・銀などの金属ナノ粒子を標識物質として用い、さらに、この標識物質と検出対象物との複合体を凝集させてラマン散乱強度を増強させることによって、検出対象物を分析する分析方法が注目されている。
【０００４】
ところで、上述したＳＥＲＳによる分析方法は、抗原抗体反応による反応産物に対して、標識物質を光学的に測定することで、検体の分析処理が行われる。なお、この反応産物は、抗原を認識し、標識物質で標識された第１抗体と、抗原を認識し、固相に結合可能な第２抗体とを抗原と反応させることで光学的測定可能な反応産物を得ることができる（たとえば、特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００９−８５７５３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１に示す分析方法をＳＥＲＳ活性粒子等、粒子を用いる反応系に応用すると、粒子の大きさが抗原および抗体に対して大きい粒子同士の反応となってしまうため、目的である抗原と抗体との反応の親和性が低下し、反応効率を低下させてしまうという問題があった。
【０００７】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであって、抗原および抗体に比して大きい粒子を用いた免疫学的反応において、抗原と抗体との反応効率を向上させることができる分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明にかかる分析方法は、抗原に対して、該抗原の特定部位を認識し、光学的に認識可能な標識物質と結合可能な第１の抗体、および該抗原の他の特定部位を認識し、磁性粒子と結合可能な第２の抗体を接触させて、前記抗原、前記第１の抗体および前記第２の抗体からなる第１複合体を形成させる第１形成ステップと、前記第１複合体に対して、前記標識物質および前記磁性粒子を前記第１の抗体および前記第２の抗体に接触させて、前記第１複合体を含む第２複合体を形成させる第２形成ステップと、を含むことを特徴とする。
【０００９】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記標識物質は、ＳＥＲＳ活性粒子であることを特徴とする。
【００１０】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第１形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする。
【００１１】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第２形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第１形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする。
【００１３】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第２形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第１の抗体は、抗原に対応して複数の種類を含み、前記標識物質は、前記第１の抗体に対応した複数の種類の標識物質を含むことを特徴とする。
【００１５】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第２複合体の前記磁性粒子を集磁する集磁ステップと、前記第２複合体の前記光学的に識別可能な標識物質を含む領域に対して光学的測定処理を行う測光ステップと、をさらに含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１６】
本発明にかかる分析方法は、抗原抗体反応をサイズの小さい状態で行なわせた後にサイズの大きい物質を結合させるようしたので、抗原抗体反応の反応効率を向上させ、感度の高い分析処理を行うことができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、本発明の実施の形態にかかる分析方法を示す模式図である。
【図２】図２は、本発明の実施の形態にかかる分析方法における集磁処理および測光処理を示す模式図である。
【図３】図３は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例１を示す模式図である。
【図４】図４は、従来の分析方法である比較例１−１を示す模式図である。
【図５】図５は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例２である比較例１−２を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、図面を参照して本発明にかかる分析方法を実施するための形態について説明する。本発明は、以下に例示する実施の形態や変形例に限らず、本発明の趣旨を逸脱しない範囲であれば、種々の変形が可能である。また、図面の記載において、同一部分には同一符号を付している。
【００１９】
図１は、本発明の実施の形態にかかる分析方法を示す模式図である。図１に示す分析方法は、反応容器内に収容された検体および試薬の挙動を示しており、一検体（抗原）に対する各試薬の結合（会合）の様子を図化したものである。
【００２０】
まず、図１（ａ）において、抗原Ａ１に対し、第１の抗体１１と第２の抗体１２とを接触させて反応させる。ここで、第１の抗体１１は、抗原Ａ１の特定部位を認識して反応する抗原認識部１１１および、標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子に結合した認識部位を認識して反応する標識物質認識部１１２を有し、第２の抗体１２は、抗原Ａ１の他の特定部位を認識して反応する抗原認識部１２２および、磁性粒子に結合した認識部位を認識して反応する磁性粒子認識部１２１を有する。
【００２１】
つぎに、抗原Ａ１に対して、第１の抗体１１と第２の抗体１２とを反応させた後、この反応産物である第１複合体１３に対して、標識物質認識部１１２と反応する抗体認識部１４１および、光学的に認識可能な標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子１４２を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４を接触させ、反応させる（図１（ｂ））。
【００２２】
さらに、第１複合体１３と抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４とを反応させた後、この反応産物である標識結合体１５に対して、磁性粒子認識部１２１と反応する抗体認識部１６１および磁性粒子Ｂを有する抗体認識磁性粒子１６を接触させ、反応させる（図１（ｃ））。
【００２３】
標識結合体１５と抗体認識磁性粒子１６とが反応すると、抗原Ａ１に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２と磁性粒子Ｂとが結合した第２複合体１７が形成される（図１（ｄ））。
【００２４】
上述した流れで抗原Ａ１に対して第１の抗体１１、第２の抗体１２、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および磁性粒子Ｂを結合させることによって、高い反応効率を維持して第２複合体１７を形成させることが可能となる。
【００２５】
ここで、本実施の形態に用いられる標識物質は、ＳＥＲＳ活性粒子の他、ラテックス粒子やシリカ粒子等を用いた蛍光粒子が挙げられる。その他、光学的に認識可能な粒子にも対応可能である。
【００２６】
また、第１の抗体１１の標識物質認識部１１２と抗体認識部１４１との結合、および第２の抗体１２の磁性粒子認識部１２１と抗体認識部１６１との結合に用いられる各認識部の組み合わせとしては、ビオチン−アビジンまたはストレプトアビジン、ハプテン−抗ハプテン抗体（ジニトロフェノール（ＤＮＰ）−抗ＤＮＰ抗体、ジコキシゲニン（ＤＩＧ）−抗ＤＩＧ抗体、フルオロセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−抗ＦＩＴＣ抗体）、ニッケル−ヒスチジンタグ、グルタチオン−（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）が挙げられる。
【００２７】
なお、第１の抗体、第２の抗体、ＳＥＲＳ活性粒子、磁性粒子の抗原に対する接触の順序は、各物質のサイズの小さいものから先に接触させることが好ましい。図１に示す接触順序は、抗体（２〜１０ｎｍ）、ＳＥＲＳ活性粒子（２０〜２００ｎｍ）、磁性粒子（１０００ｎｍ）の順となっており、小さいものから順に接触させ、反応させている。括弧内の数値は、一例として示す各物質の一般的なサイズである。第１の抗体および第２の抗体は、同時に接触させるようにしてもよく、サイズの小さい方を先に接触させるようにしてもよい。ＳＥＲＳ活性粒子および磁性粒子においても、反応効率が低下しなければ、同時に第１複合体に対して接触させるようにしてもよい。
【００２８】
また、第１の抗体、第２の抗体、ＳＥＲＳ活性粒子、磁性粒子の抗原に対する接触の順序を、各反応における結合強度としての結合定数をもとに、結合定数の小さいものから先に反応させるようにしてもよく、結合定数の大きいものから先に反応させるようにしてもよい。たとえば、抗原抗体反応の結合定数は、１０５Ｍ−１〜１０９Ｍ−１であり、ビオチン−アビジンの結合定数は、１０１５Ｍ−１である。これらの値をもとに、接触の順序を決定することができる。また、抗原抗体反応を先に行い、ＳＥＲＳ活性粒子と磁性粒子との接触の順序を、粒子の大きさまたは結合定数によって決定してもよい。なお、結合強度として、各結合の解離定数をもとに順序を決定してもよい。
【００２９】
つぎに、図１に示す分析方法によって得られた第２複合体に対する光学的な測定について、図２を参照して説明する。図２は、本発明の実施の形態にかかる分析方法における集磁処理および測光処理を示す模式図である。
【００３０】
まず、図２（ａ）において、磁性体Ｍを第２複合体１７に接近させて、第２複合体１７の磁性粒子Ｂを磁性体Ｍ側に引き付けて集磁する。このとき、磁性体Ｍは、永久磁石を接近させてもよく、電磁石によってオンとオフとの切り替えによって第２複合体１７を引き付けるようにしてもよい。また、磁性体Ｍは、第２複合体１７を収容する反応容器側面から接近させてもよく、磁性体Ｍを反応容器内に挿入して、直接的に引き付けるようにしてもよい。
【００３１】
磁性体Ｍによって第２複合体１７を集磁した後、レーザ光Ｌ１を照射して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２から散乱する表面増強されたラマン散乱光Ｌ２に対して測光処理することで、検体の分析処理を行うことができる（図２（ｂ））。
【００３２】
なお、図２（ａ）において、第２複合体１７を磁性体Ｍによって集磁した際に、未反応の他の抗原、抗体およびＳＥＲＳ活性粒子を回収する。このとき、反応容器内の液体を回収し、生理食塩水等の新たな液体を注入して、未反応のＳＥＲＳ活性粒子を除去するとともに、集磁されている状態の第２複合体１７の乾燥を防ぐことによって、測光処理を行った場合に、抗原と未反応のＳＥＲＳ活性粒子から散乱するラマン散乱光を誤って測定することなく、反応したＳＥＲＳ活性粒子のラマン散乱光のみに対して測光処理することができる。
【００３３】
また、第２複合体１７を集磁した磁性粒子Ｍを反応容器外に移送し、集磁された第２複合体１７に対してレーザ光Ｌ１を照射し、測光処理を行ってもよい。
【００３４】
つづいて、図１に示す分析方法の変形例１について、図３を参照して説明する。図３は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例１を示す模式図である。図３に示す変形例１では、同一の系において存在する複数種の抗原に対して、それぞれ異なるＳＥＲＳ活性粒子を結合させて分析を行う分析方法である。
【００３５】
まず、図３（ａ）において、抗原Ａ１，Ａ２に対して、抗原Ａ１，Ａ２をそれぞれ認識可能な抗原認識部１１１，２１１および、標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子に結合した認識部位を認識する標識物質認識部１１２，２１２を有する第１の抗体１１，２１と、抗原Ａ１，Ａ２をそれぞれ認識可能な抗原認識部１２２，２２１および、磁性粒子に結合した認識部位を認識する磁性粒子認識部１２１を有する第２の抗体１２，２２とをそれぞれ接触させ、反応させる。
【００３６】
図３（ａ）で得られた第１複合体１３，２３に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および、標識物質認識部１１２を認識して反応する抗体認識部１４１を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４と、ＳＥＲＳ活性粒子１４２とは異なる振動数の散乱光を散乱するＳＥＲＳ活性粒子２４２および、標識物質認識部２１２を認識して反応する抗体認識部２４１を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子２４とをそれぞれ第１複合体１３，２３に接触させ、反応させる（図３（ｂ））。
【００３７】
その後、図３（ｂ）で得られた標識結合体１５，２５に対して、磁性粒子Ｂおよび、磁性粒子認識部１２１を認識して反応する抗体認識部１６１を有する抗体認識磁性粒子１６を各標識結合体１５，２５に接触させて、反応させ（図３（ｃ））、第２複合体１７，２６を形成させる（図３（ｄ））。
【００３８】
図３に示した処理によって、同一の反応容器内に存在する複数の抗原に対して、同一の処理手順で、異なるＳＥＲＳ活性粒子を結合させることによって分析を行うことができる。また、図２に示したような、磁性粒子によって一箇所に集磁し、測光処理する場合においても、各ＳＥＲＳ活性粒子から散乱するラマン散乱光を分光器等によって所定波長の強度をそれぞれ測定することで、一検体における複数項目（抗原）を同時に分析することが可能となる。
【００３９】
上述した実施の形態にかかる分析方法によって、抗原と抗体との反応を確実に行なわせた後に、ＳＥＲＳ活性粒子等の標識物質および磁性粒子を結合させるため、抗原抗体反応の反応効率を向上させ、一層精度の高い分析処理を行うことが可能となる。特に、標識物質に粒子等のサイズの大きいものを用いる場合に有効である。
【００４０】
なお、本実施の形態は、検体と試薬との反応物の光学的特性を測定して検体の分析処理を行う自動分析装置にも適用可能である。検体および各試薬を分注する分注機構と光学的測定を行なう測光機構を設けることによって、自動的に分析処理を行うことが可能となる。
【００４１】
＜分析例１＞
ここで、上述した分析方法と従来の分析方法とを比較する分析処理を行った。後述する実施例１、比較例１−１および比較例１−２について、それぞれの分析方法によって反応させて、集磁・洗浄処理および測光処理を行う分析処理を１０回行い、得られたラマン信号強度の平均値と標準偏差％とを算出した。
【００４２】
（実施例１）
抗原としての甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）に対して、図１に示す分析方法の手順に従い、第１の抗体としてのビオチン標識抗ＴＳＨ抗体と、ＤＮＰ標識ＴＳＨ抗体とを接触させて反応させた後、ストレプトアビジン標識ＳＥＲＳ活性粒子と抗ＤＮＰ抗体標識磁性粒子とを接触させて反応させることによって、実施例１にかかる複合体を形成させた。
【００４３】
（比較例１−１）
従来の分析方法として実施した分析方法を、図４を参照して説明する。図４は、従来の分析方法である比較例１−１を示す模式図である。まず、図４（ａ）において、抗原Ａ１に対して、磁性粒子Ｂおよび、抗原Ａ１の特定部位を認識して反応する抗原認識部１２２を有する抗原認識磁性粒子３１を接触させて反応させる。
【００４４】
その後、図４（ａ）で得られた磁性粒子結合体３２に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および、抗原Ａ１の他の特定部位を認識して反応する抗原認識部１１１を有する抗原認識標識物質３３を接触させて反応させ（図４（ｂ））、抗原Ａ１に磁性粒子ＢとＳＥＲＳ活性粒子１４２とが結合した複合体３４を形成させる（図４（ｃ））。ここで、比較例１−１で用いた抗原はＴＳＨであり、磁性粒子、ＳＥＲＳ活性粒子も実施例１と同様のものである。
【００４５】
（比較例１−２）
さらに、比較のため、磁性粒子が予め抗体に結合されている抗原認識磁性粒子を用いて反応処理を行った。図５は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例２である比較例１−２を示す模式図である。
【００４６】
まず、抗原Ａ１に対して、抗原Ａ１の特定部位を認識して反応する抗原認識部１１１および、標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子を認識して反応する標識物質認識部１１２を有する上述した第１の抗体１１と、磁性粒子Ｂおよび、抗原Ａ１の他の特定部位を認識して反応する抗原認識部１２２を有する抗原認識磁性粒子４１とを接触させ、反応させる（図５（ａ））。
【００４７】
その後、図５（ａ）で得られた磁性粒子結合体４２に対して、標識物質認識部１１２と反応する抗体認識部１４１および、光学的に認識可能な標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子１４２を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４を接触させて反応させ（図５（ｂ））、複合体４３を形成させる（図５（ｃ））。ここで、比較例１−２で用いた抗原はＴＳＨであり、磁性粒子、ＳＥＲＳ活性粒子も実施例１と同様のものである。
【００４８】
上述した処理によって得られた実施例１、比較例１−１、比較例１−２の各複合体に対して、１０回のラマン信号強度平均値と標準偏差％とを表１に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】
ここで、ラマン信号強度平均値は、実施例１の平均値が最も大きく、比較例１−１の平均値が最も小さい。このラマン信号強度平均値は、抗原抗体反応の反応効率に直接的に関わる数値であり、本実施の形態にかかる分析方法が最も高い反応効率であることを示している。また、各数値の偏差を示す標準偏差％においても、実施例１が最も小さく、ラマン信号強度が安定して得られていることを示している。
【００５１】
なお、比較例１−２は、磁性粒子が予め結合された抗体を用いて反応処理を行ったものであるが、比較例１−１と比して、ラマン信号強度平均値は大きく、標準偏差％は小さい。従って、抗原を介して抗体が結合した粒子−粒子での結合（比較例１−１）よりサイズの小さい反応である粒子−抗体での結合の方が、反応効率が高いことが理解できる。
【００５２】
＜分析例２＞
さらに、上述した複数の抗原に対する分析方法と従来の分析方法とを比較する分析処理を行った。後述する実施例２および比較例２について、それぞれの分析方法によって反応させて、集磁・洗浄処理および測光処理を行う分析処理を１０回行い、得られたラマン信号強度の平均値と標準偏差％とを算出した。
【００５３】
（実施例２）
抗原Ａ１としての甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）に対して、図３に示す分析方法の手順に従い、第１の抗体としてのビオチン標識抗ＴＳＨ抗体と、ＤＮＰ標識ＴＳＨ抗体とを接触させて反応させた後、ストレプトアビジン標識第１ＳＥＲＳ活性粒子と抗ＤＮＰ抗体標識磁性粒子とを接触させて反応させることによって、実施例２にかかる第１ＳＥＲＳ活性粒子複合体を形成させた。
【００５４】
また、抗原Ａ２としてのαフェトプロテイン（ＡＦＰ）に対して、図３に示す分析方法の手順に従い、第１の抗体としてのＤＩＧ標識抗ＡＦＰ抗体と、ＤＮＰ標識ＡＦＰ抗体とを接触させて反応させた後、抗ＤＩＧ標識第２ＳＥＲＳ活性粒子と抗ＤＮＰ抗体標識磁性粒子とを接触させて反応させることによって、実施例２にかかる第２ＳＥＲＳ活性粒子複合体を形成させた。
【００５５】
（比較例２）
図４に示すように、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）およびαフェトプロテイン（ＡＦＰ）の各抗原に対して、磁性粒子標識抗ＴＳＨ抗体および磁性粒子標識抗ＡＦＰ抗体をそれぞれ接触させて反応させた後、第１ＳＥＲＳ活性粒子標識ＴＳＨ抗体および第２ＳＥＲＳ活性粒子標識ＡＦＰ抗体をそれぞれ接触させて反応させて、比較例２にかかる第１ＳＥＲＳ活性粒子複合体および第２ＳＥＲＳ活性粒子複合体を形成させた。
【００５６】
上述した処理によって得られた実施例２および比較例２の各複合体に対して、１０回のラマン信号強度平均値と標準偏差％とを表２に示す。
【００５７】
【表２】
【００５８】
ここで、実施例２の各ＳＥＲＳ活性粒子のラマン信号強度平均値は、比較例２のラマン信号強度平均値と比して大きく、標準偏差％は小さくなっている。この結果からも、本実施の形態にかかる分析方法によって、複数の抗原を同一の系内で反応させた場合においても、安定した高い反応効率で分析処理を行うことが可能となる。
【００５９】
以上のように、上述の実施の形態にかかる分析方法は、たとえば、磁性粒子を用いた分析処理を行うことに有用であり、特に、ＳＥＲＳ活性粒子等、比較的大きな粒子を用いた分析処理に適している。
【符号の説明】
【００６０】
１１，２１ 第１の抗体
１２，２２ 第２の抗体
１３，２３ 第１複合体
１４，２４ 抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子
１５，２５ 標識結合体
１７，２６ 第２複合体
３１，４１ 抗原認識磁性粒子
３２，４２ 磁性粒子結合体
３３ 抗原認識標識物質
３４，４３ 複合体
１１１，１２２，２１１，２２１ 抗原認識部
１１２，２１２ 標識物質認識部
１２１ 磁性粒子認識部
１４１，２４１ 抗体認識部
１４２，２４２ ＳＥＲＳ活性粒子
Ａ１，Ａ２ 抗原
Ｂ 磁性粒子
Ｍ 磁性体
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体と磁性粒子を含む試薬との反応物の光学的特性を測定して検体の分析処理を行う分析方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ラマン分光分析は、検体にレーザ光を照射することにより発生するラマン散乱光を検出する分析法であり、検出対象物の分子構造に関する情報を得ることができるため、ウィルス、蛋白質等の生化学物質や環境化学物質の検出、バイオセンサ等に有効な分析方法として知られている。しかしながら、このラマン分光分析は、ラマン散乱光が極めて微弱であることから、微量分析には適さないという問題があった。
【０００３】
一方、原子レベルの粗さを持つ金、銀などの金属表面における吸着種のラマン散乱強度は、非吸着種に比較して１０２−１０６倍増強される場合があることが知られており、この現象は表面増強ラマン散乱（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒｍａｎ ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇ；ＳＥＲＳ）と呼ばれている。さらに、金属ナノ粒子を凝集させることによって、非吸着種と比較してラマン散乱強度を１０１４倍程度まで増強させることができることが発見された。そこで、近年、原子レベルの粗さを持つ金・銀などの金属ナノ粒子を標識物質として用い、さらに、この標識物質と検出対象物との複合体を凝集させてラマン散乱強度を増強させることによって、検出対象物を分析する分析方法が注目されている。
【０００４】
ところで、上述したＳＥＲＳによる分析方法は、抗原抗体反応による反応産物に対して、標識物質を光学的に測定することで、検体の分析処理が行われる。なお、この反応産物は、抗原を認識し、標識物質で標識された第１抗体と、抗原を認識し、固相に結合可能な第２抗体とを抗原と反応させることで光学的測定可能な反応産物を得ることができる（たとえば、特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００９−８５７５３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１に示す分析方法をＳＥＲＳ活性粒子等、粒子を用いる反応系に応用すると、粒子の大きさが抗原および抗体に対して大きい粒子同士の反応となってしまうため、目的である抗原と抗体との反応の親和性が低下し、反応効率を低下させてしまうという問題があった。
【０００７】
本発明は、上記に鑑みてなされたものであって、抗原および抗体に比して大きい粒子を用いた免疫学的反応において、抗原と抗体との反応効率を向上させることができる分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した課題を解決し、目的を達成するために、本発明にかかる分析方法は、抗原に対して、該抗原の特定部位を認識し、光学的に認識可能な標識物質と結合可能な第１の抗体、および該抗原の他の特定部位を認識し、磁性粒子と結合可能な第２の抗体を接触させて、前記抗原、前記第１の抗体および前記第２の抗体からなる第１複合体を形成させる第１形成ステップと、前記第１複合体に対して、前記標識物質および前記磁性粒子を前記第１の抗体および前記第２の抗体に接触させて、前記第１複合体を含む第２複合体を形成させる第２形成ステップと、を含むことを特徴とする。
【０００９】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記標識物質は、ＳＥＲＳ活性粒子であることを特徴とする。
【００１０】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第１形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする。
【００１１】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第２形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする。
【００１２】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第１形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする。
【００１３】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第２形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする。
【００１４】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第１の抗体は、抗原に対応して複数の種類を含み、前記標識物質は、前記第１の抗体に対応した複数の種類の標識物質を含むことを特徴とする。
【００１５】
また、本発明にかかる分析方法は、上記の発明において、前記第２複合体の前記磁性粒子を集磁する集磁ステップと、前記第２複合体の前記光学的に識別可能な標識物質を含む領域に対して光学的測定処理を行う測光ステップと、をさらに含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１６】
本発明にかかる分析方法は、抗原抗体反応をサイズの小さい状態で行なわせた後にサイズの大きい物質を結合させるようしたので、抗原抗体反応の反応効率を向上させ、感度の高い分析処理を行うことができるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】図１は、本発明の実施の形態にかかる分析方法を示す模式図である。
【図２】図２は、本発明の実施の形態にかかる分析方法における集磁処理および測光処理を示す模式図である。
【図３】図３は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例１を示す模式図である。
【図４】図４は、従来の分析方法である比較例１−１を示す模式図である。
【図５】図５は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例２である比較例１−２を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、図面を参照して本発明にかかる分析方法を実施するための形態について説明する。本発明は、以下に例示する実施の形態や変形例に限らず、本発明の趣旨を逸脱しない範囲であれば、種々の変形が可能である。また、図面の記載において、同一部分には同一符号を付している。
【００１９】
図１は、本発明の実施の形態にかかる分析方法を示す模式図である。図１に示す分析方法は、反応容器内に収容された検体および試薬の挙動を示しており、一検体（抗原）に対する各試薬の結合（会合）の様子を図化したものである。
【００２０】
まず、図１（ａ）において、抗原Ａ１に対し、第１の抗体１１と第２の抗体１２とを接触させて反応させる。ここで、第１の抗体１１は、抗原Ａ１の特定部位を認識して反応する抗原認識部１１１および、標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子に結合した認識部位を認識して反応する標識物質認識部１１２を有し、第２の抗体１２は、抗原Ａ１の他の特定部位を認識して反応する抗原認識部１２２および、磁性粒子に結合した認識部位を認識して反応する磁性粒子認識部１２１を有する。
【００２１】
つぎに、抗原Ａ１に対して、第１の抗体１１と第２の抗体１２とを反応させた後、この反応産物である第１複合体１３に対して、標識物質認識部１１２と反応する抗体認識部１４１および、光学的に認識可能な標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子１４２を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４を接触させ、反応させる（図１（ｂ））。
【００２２】
さらに、第１複合体１３と抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４とを反応させた後、この反応産物である標識結合体１５に対して、磁性粒子認識部１２１と反応する抗体認識部１６１および磁性粒子Ｂを有する抗体認識磁性粒子１６を接触させ、反応させる（図１（ｃ））。
【００２３】
標識結合体１５と抗体認識磁性粒子１６とが反応すると、抗原Ａ１に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２と磁性粒子Ｂとが結合した第２複合体１７が形成される（図１（ｄ））。
【００２４】
上述した流れで抗原Ａ１に対して第１の抗体１１、第２の抗体１２、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および磁性粒子Ｂを結合させることによって、高い反応効率を維持して第２複合体１７を形成させることが可能となる。
【００２５】
ここで、本実施の形態に用いられる標識物質は、ＳＥＲＳ活性粒子の他、ラテックス粒子やシリカ粒子等を用いた蛍光粒子が挙げられる。その他、光学的に認識可能な粒子にも対応可能である。
【００２６】
また、第１の抗体１１の標識物質認識部１１２と抗体認識部１４１との結合、および第２の抗体１２の磁性粒子認識部１２１と抗体認識部１６１との結合に用いられる各認識部の組み合わせとしては、ビオチン−アビジンまたはストレプトアビジン、ハプテン−抗ハプテン抗体（ジニトロフェノール（ＤＮＰ）−抗ＤＮＰ抗体、ジコキシゲニン（ＤＩＧ）−抗ＤＩＧ抗体、フルオロセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−抗ＦＩＴＣ抗体）、ニッケル−ヒスチジンタグ、グルタチオン−（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）が挙げられる。
【００２７】
なお、第１の抗体、第２の抗体、ＳＥＲＳ活性粒子、磁性粒子の抗原に対する接触の順序は、各物質のサイズの小さいものから先に接触させることが好ましい。図１に示す接触順序は、抗体（２〜１０ｎｍ）、ＳＥＲＳ活性粒子（２０〜２００ｎｍ）、磁性粒子（１０００ｎｍ）の順となっており、小さいものから順に接触させ、反応させている。括弧内の数値は、一例として示す各物質の一般的なサイズである。第１の抗体および第２の抗体は、同時に接触させるようにしてもよく、サイズの小さい方を先に接触させるようにしてもよい。ＳＥＲＳ活性粒子および磁性粒子においても、反応効率が低下しなければ、同時に第１複合体に対して接触させるようにしてもよい。
【００２８】
また、第１の抗体、第２の抗体、ＳＥＲＳ活性粒子、磁性粒子の抗原に対する接触の順序を、各反応における結合強度としての結合定数をもとに、結合定数の小さいものから先に反応させるようにしてもよく、結合定数の大きいものから先に反応させるようにしてもよい。たとえば、抗原抗体反応の結合定数は、１０５Ｍ−１〜１０９Ｍ−１であり、ビオチン−アビジンの結合定数は、１０１５Ｍ−１である。これらの値をもとに、接触の順序を決定することができる。また、抗原抗体反応を先に行い、ＳＥＲＳ活性粒子と磁性粒子との接触の順序を、粒子の大きさまたは結合定数によって決定してもよい。なお、結合強度として、各結合の解離定数をもとに順序を決定してもよい。
【００２９】
つぎに、図１に示す分析方法によって得られた第２複合体に対する光学的な測定について、図２を参照して説明する。図２は、本発明の実施の形態にかかる分析方法における集磁処理および測光処理を示す模式図である。
【００３０】
まず、図２（ａ）において、磁性体Ｍを第２複合体１７に接近させて、第２複合体１７の磁性粒子Ｂを磁性体Ｍ側に引き付けて集磁する。このとき、磁性体Ｍは、永久磁石を接近させてもよく、電磁石によってオンとオフとの切り替えによって第２複合体１７を引き付けるようにしてもよい。また、磁性体Ｍは、第２複合体１７を収容する反応容器側面から接近させてもよく、磁性体Ｍを反応容器内に挿入して、直接的に引き付けるようにしてもよい。
【００３１】
磁性体Ｍによって第２複合体１７を集磁した後、レーザ光Ｌ１を照射して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２から散乱する表面増強されたラマン散乱光Ｌ２に対して測光処理することで、検体の分析処理を行うことができる（図２（ｂ））。
【００３２】
なお、図２（ａ）において、第２複合体１７を磁性体Ｍによって集磁した際に、未反応の他の抗原、抗体およびＳＥＲＳ活性粒子を回収する。このとき、反応容器内の液体を回収し、生理食塩水等の新たな液体を注入して、未反応のＳＥＲＳ活性粒子を除去するとともに、集磁されている状態の第２複合体１７の乾燥を防ぐことによって、測光処理を行った場合に、抗原と未反応のＳＥＲＳ活性粒子から散乱するラマン散乱光を誤って測定することなく、反応したＳＥＲＳ活性粒子のラマン散乱光のみに対して測光処理することができる。
【００３３】
また、第２複合体１７を集磁した磁性粒子Ｍを反応容器外に移送し、集磁された第２複合体１７に対してレーザ光Ｌ１を照射し、測光処理を行ってもよい。
【００３４】
つづいて、図１に示す分析方法の変形例１について、図３を参照して説明する。図３は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例１を示す模式図である。図３に示す変形例１では、同一の系において存在する複数種の抗原に対して、それぞれ異なるＳＥＲＳ活性粒子を結合させて分析を行う分析方法である。
【００３５】
まず、図３（ａ）において、抗原Ａ１，Ａ２に対して、抗原Ａ１，Ａ２をそれぞれ認識可能な抗原認識部１１１，２１１および、標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子に結合した認識部位を認識する標識物質認識部１１２，２１２を有する第１の抗体１１，２１と、抗原Ａ１，Ａ２をそれぞれ認識可能な抗原認識部１２２，２２１および、磁性粒子に結合した認識部位を認識する磁性粒子認識部１２１を有する第２の抗体１２，２２とをそれぞれ接触させ、反応させる。
【００３６】
図３（ａ）で得られた第１複合体１３，２３に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および、標識物質認識部１１２を認識して反応する抗体認識部１４１を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４と、ＳＥＲＳ活性粒子１４２とは異なる振動数の散乱光を散乱するＳＥＲＳ活性粒子２４２および、標識物質認識部２１２を認識して反応する抗体認識部２４１を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子２４とをそれぞれ第１複合体１３，２３に接触させ、反応させる（図３（ｂ））。
【００３７】
その後、図３（ｂ）で得られた標識結合体１５，２５に対して、磁性粒子Ｂおよび、磁性粒子認識部１２１を認識して反応する抗体認識部１６１を有する抗体認識磁性粒子１６を各標識結合体１５，２５に接触させて、反応させ（図３（ｃ））、第２複合体１７，２６を形成させる（図３（ｄ））。
【００３８】
図３に示した処理によって、同一の反応容器内に存在する複数の抗原に対して、同一の処理手順で、異なるＳＥＲＳ活性粒子を結合させることによって分析を行うことができる。また、図２に示したような、磁性粒子によって一箇所に集磁し、測光処理する場合においても、各ＳＥＲＳ活性粒子から散乱するラマン散乱光を分光器等によって所定波長の強度をそれぞれ測定することで、一検体における複数項目（抗原）を同時に分析することが可能となる。
【００３９】
上述した実施の形態にかかる分析方法によって、抗原と抗体との反応を確実に行なわせた後に、ＳＥＲＳ活性粒子等の標識物質および磁性粒子を結合させるため、抗原抗体反応の反応効率を向上させ、一層精度の高い分析処理を行うことが可能となる。特に、標識物質に粒子等のサイズの大きいものを用いる場合に有効である。
【００４０】
なお、本実施の形態は、検体と試薬との反応物の光学的特性を測定して検体の分析処理を行う自動分析装置にも適用可能である。検体および各試薬を分注する分注機構と光学的測定を行なう測光機構を設けることによって、自動的に分析処理を行うことが可能となる。
【００４１】
＜分析例１＞
ここで、上述した分析方法と従来の分析方法とを比較する分析処理を行った。後述する実施例１、比較例１−１および比較例１−２について、それぞれの分析方法によって反応させて、集磁・洗浄処理および測光処理を行う分析処理を１０回行い、得られたラマン信号強度の平均値と標準偏差％とを算出した。
【００４２】
（実施例１）
抗原としての甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）に対して、図１に示す分析方法の手順に従い、第１の抗体としてのビオチン標識抗ＴＳＨ抗体と、ＤＮＰ標識ＴＳＨ抗体とを接触させて反応させた後、ストレプトアビジン標識ＳＥＲＳ活性粒子と抗ＤＮＰ抗体標識磁性粒子とを接触させて反応させることによって、実施例１にかかる複合体を形成させた。
【００４３】
（比較例１−１）
従来の分析方法として実施した分析方法を、図４を参照して説明する。図４は、従来の分析方法である比較例１−１を示す模式図である。まず、図４（ａ）において、抗原Ａ１に対して、磁性粒子Ｂおよび、抗原Ａ１の特定部位を認識して反応する抗原認識部１２２を有する抗原認識磁性粒子３１を接触させて反応させる。
【００４４】
その後、図４（ａ）で得られた磁性粒子結合体３２に対して、ＳＥＲＳ活性粒子１４２および、抗原Ａ１の他の特定部位を認識して反応する抗原認識部１１１を有する抗原認識標識物質３３を接触させて反応させ（図４（ｂ））、抗原Ａ１に磁性粒子ＢとＳＥＲＳ活性粒子１４２とが結合した複合体３４を形成させる（図４（ｃ））。ここで、比較例１−１で用いた抗原はＴＳＨであり、磁性粒子、ＳＥＲＳ活性粒子も実施例１と同様のものである。
【００４５】
（比較例１−２）
さらに、比較のため、磁性粒子が予め抗体に結合されている抗原認識磁性粒子を用いて反応処理を行った。図５は、本発明の実施の形態にかかる分析方法の変形例２である比較例１−２を示す模式図である。
【００４６】
まず、抗原Ａ１に対して、抗原Ａ１の特定部位を認識して反応する抗原認識部１１１および、標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子を認識して反応する標識物質認識部１１２を有する上述した第１の抗体１１と、磁性粒子Ｂおよび、抗原Ａ１の他の特定部位を認識して反応する抗原認識部１２２を有する抗原認識磁性粒子４１とを接触させ、反応させる（図５（ａ））。
【００４７】
その後、図５（ａ）で得られた磁性粒子結合体４２に対して、標識物質認識部１１２と反応する抗体認識部１４１および、光学的に認識可能な標識物質であるＳＥＲＳ活性粒子１４２を有する抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子１４を接触させて反応させ（図５（ｂ））、複合体４３を形成させる（図５（ｃ））。ここで、比較例１−２で用いた抗原はＴＳＨであり、磁性粒子、ＳＥＲＳ活性粒子も実施例１と同様のものである。
【００４８】
上述した処理によって得られた実施例１、比較例１−１、比較例１−２の各複合体に対して、１０回のラマン信号強度平均値と標準偏差％とを表１に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】
ここで、ラマン信号強度平均値は、実施例１の平均値が最も大きく、比較例１−１の平均値が最も小さい。このラマン信号強度平均値は、抗原抗体反応の反応効率に直接的に関わる数値であり、本実施の形態にかかる分析方法が最も高い反応効率であることを示している。また、各数値の偏差を示す標準偏差％においても、実施例１が最も小さく、ラマン信号強度が安定して得られていることを示している。
【００５１】
なお、比較例１−２は、磁性粒子が予め結合された抗体を用いて反応処理を行ったものであるが、比較例１−１と比して、ラマン信号強度平均値は大きく、標準偏差％は小さい。従って、抗原を介して抗体が結合した粒子−粒子での結合（比較例１−１）よりサイズの小さい反応である粒子−抗体での結合の方が、反応効率が高いことが理解できる。
【００５２】
＜分析例２＞
さらに、上述した複数の抗原に対する分析方法と従来の分析方法とを比較する分析処理を行った。後述する実施例２および比較例２について、それぞれの分析方法によって反応させて、集磁・洗浄処理および測光処理を行う分析処理を１０回行い、得られたラマン信号強度の平均値と標準偏差％とを算出した。
【００５３】
（実施例２）
抗原Ａ１としての甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）に対して、図３に示す分析方法の手順に従い、第１の抗体としてのビオチン標識抗ＴＳＨ抗体と、ＤＮＰ標識ＴＳＨ抗体とを接触させて反応させた後、ストレプトアビジン標識第１ＳＥＲＳ活性粒子と抗ＤＮＰ抗体標識磁性粒子とを接触させて反応させることによって、実施例２にかかる第１ＳＥＲＳ活性粒子複合体を形成させた。
【００５４】
また、抗原Ａ２としてのαフェトプロテイン（ＡＦＰ）に対して、図３に示す分析方法の手順に従い、第１の抗体としてのＤＩＧ標識抗ＡＦＰ抗体と、ＤＮＰ標識ＡＦＰ抗体とを接触させて反応させた後、抗ＤＩＧ標識第２ＳＥＲＳ活性粒子と抗ＤＮＰ抗体標識磁性粒子とを接触させて反応させることによって、実施例２にかかる第２ＳＥＲＳ活性粒子複合体を形成させた。
【００５５】
（比較例２）
図４に示すように、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）およびαフェトプロテイン（ＡＦＰ）の各抗原に対して、磁性粒子標識抗ＴＳＨ抗体および磁性粒子標識抗ＡＦＰ抗体をそれぞれ接触させて反応させた後、第１ＳＥＲＳ活性粒子標識ＴＳＨ抗体および第２ＳＥＲＳ活性粒子標識ＡＦＰ抗体をそれぞれ接触させて反応させて、比較例２にかかる第１ＳＥＲＳ活性粒子複合体および第２ＳＥＲＳ活性粒子複合体を形成させた。
【００５６】
上述した処理によって得られた実施例２および比較例２の各複合体に対して、１０回のラマン信号強度平均値と標準偏差％とを表２に示す。
【００５７】
【表２】
【００５８】
ここで、実施例２の各ＳＥＲＳ活性粒子のラマン信号強度平均値は、比較例２のラマン信号強度平均値と比して大きく、標準偏差％は小さくなっている。この結果からも、本実施の形態にかかる分析方法によって、複数の抗原を同一の系内で反応させた場合においても、安定した高い反応効率で分析処理を行うことが可能となる。
【００５９】
以上のように、上述の実施の形態にかかる分析方法は、たとえば、磁性粒子を用いた分析処理を行うことに有用であり、特に、ＳＥＲＳ活性粒子等、比較的大きな粒子を用いた分析処理に適している。
【符号の説明】
【００６０】
１１，２１ 第１の抗体
１２，２２ 第２の抗体
１３，２３ 第１複合体
１４，２４ 抗体認識ＳＥＲＳ活性粒子
１５，２５ 標識結合体
１７，２６ 第２複合体
３１，４１ 抗原認識磁性粒子
３２，４２ 磁性粒子結合体
３３ 抗原認識標識物質
３４，４３ 複合体
１１１，１２２，２１１，２２１ 抗原認識部
１１２，２１２ 標識物質認識部
１２１ 磁性粒子認識部
１４１，２４１ 抗体認識部
１４２，２４２ ＳＥＲＳ活性粒子
Ａ１，Ａ２ 抗原
Ｂ 磁性粒子
Ｍ 磁性体
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原に対して、該抗原の特定部位を認識し、光学的に認識可能な標識物質と結合可能な第１の抗体、および該抗原の他の特定部位を認識し、磁性粒子と結合可能な第２の抗体を接触させて、前記抗原、前記第１の抗体および前記第２の抗体からなる第１複合体を形成させる第１形成ステップと、
前記第１複合体に対して、前記標識物質および前記磁性粒子を前記第１の抗体および前記第２の抗体に接触させて、前記第１複合体を含む第２複合体を形成させる第２形成ステップと、
を含むことを特徴とする分析方法。
【請求項２】
前記標識物質は、ＳＥＲＳ活性粒子であることを特徴とする請求項１に記載の分析方法。
【請求項３】
前記第１形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする請求項１または２に記載の分析方法。
【請求項４】
前記第２形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項５】
前記第１形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする請求項１または２に記載の分析方法。
【請求項６】
前記第２形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする請求項１，２または５のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項７】
前記第１の抗体は、抗原に対応して複数の種類を含み、
前記標識物質は、前記第１の抗体に対応した複数の種類の標識物質を含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項８】
前記第２複合体の前記磁性粒子を集磁する集磁ステップと、
前記第２複合体の前記光学的に識別可能な標識物質を含む領域に対して光学的測定処理を行う測光ステップと、
をさらに含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項１】
抗原に対して、該抗原の特定部位を認識し、光学的に認識可能な標識物質と結合可能な第１の抗体、および該抗原の他の特定部位を認識し、磁性粒子と結合可能な第２の抗体を接触させて、前記抗原、前記第１の抗体および前記第２の抗体からなる第１複合体を形成させる第１形成ステップと、
前記第１複合体に対して、前記標識物質および前記磁性粒子を前記第１の抗体および前記第２の抗体に接触させて、前記第１複合体を含む第２複合体を形成させる第２形成ステップと、
を含むことを特徴とする分析方法。
【請求項２】
前記標識物質は、ＳＥＲＳ活性粒子であることを特徴とする請求項１に記載の分析方法。
【請求項３】
前記第１形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする請求項１または２に記載の分析方法。
【請求項４】
前記第２形成ステップは、サイズの小さい方を先に接触させることを特徴とする請求項１〜３のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項５】
前記第１形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする請求項１または２に記載の分析方法。
【請求項６】
前記第２形成ステップは、結合強度をもとに接触させる順序が決定されることを特徴とする請求項１，２または５のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項７】
前記第１の抗体は、抗原に対応して複数の種類を含み、
前記標識物質は、前記第１の抗体に対応した複数の種類の標識物質を含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一つに記載の分析方法。
【請求項８】
前記第２複合体の前記磁性粒子を集磁する集磁ステップと、
前記第２複合体の前記光学的に識別可能な標識物質を含む領域に対して光学的測定処理を行う測光ステップと、
をさらに含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一つに記載の分析方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１１−１２８１２２（Ｐ２０１１−１２８１２２Ａ）
【公開日】平成２３年６月３０日（２０１１．６．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２８９７２１（Ｐ２００９−２８９７２１）
【出願日】平成２１年１２月２１日（２００９．１２．２１）
【出願人】（５１０００５８８９）ベックマン コールター， インコーポレイテッド (174)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月３０日（２０１１．６．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月２１日（２００９．１２．２１）
【出願人】（５１０００５８８９）ベックマン コールター， インコーポレイテッド (174)
【Ｆターム（参考）】
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