本明細書は、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素；ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子；及びＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素の産生方法を開示している。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ） ＰＡＲリガンドドメイン；
ｂ） クロストリジウム毒素酵素ドメイン；
ｃ） クロストリジウム毒素転移ドメイン；及び
ｄ） クロストリジウム毒素結合ドメイン、
を含む修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２】
ＰＡＲリガンドドメインが、クロストリジウム毒素酵素ドメインのアミノ末端に作動的に連結されている、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項３】
修飾クロストリジウム毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む、請求項２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４】
修飾クロストリジウム毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素結合ドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む、請求項２に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５】
ＰＡＲリガンドドメインがクロストリジウム毒素転移ドメインのアミノ末端に対し作動的に連結されている、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項６】
修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウム毒素結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、ＰＡＲリガンドドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む、請求項５に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項７】
修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む、請求項５に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項８】
ＰＡＲリガンドドメインがクロストリジウム毒素結合ドメインのアミノ末端に作動的に連結されている、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項９】
修飾クロストリジウム毒素が、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素結合ドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む、請求項８に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１０】
修飾クロストリジウム毒素が、プロテアーゼ切断部位をさらに含み；プロテアーゼ切断部位がＰＡＲリガンドドメインをアンマスクする、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１１】
ＰＡＲリガンドドメインがＰＡＲ１リガンドドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１２】
ＰＡＲ１リガンドドメインが配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３又は配列番号１３３を含む、請求項１１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１３】
ＰＡＲリガンドドメインがＰＡＲ２リガンドドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１４】
ＰＡＲ２リガンドドメインが配列番号２４又は配列番号２５を含む、請求項１３に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１５】
ＰＡＲリガンドドメインがＰＡＲ３リガンドドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１６】
ＰＡＲ３リガンドドメインが配列番号２６、配列番号２７又は配列番号１３４を含む、請求項１５に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１７】
ＰＡＲリガンドドメインがＰＡＲ４リガンドドメインを含む、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１８】
ＰＡＲ４リガンドドメインが配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号１３５又は配列番号１６０を含む、請求項１７に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項１９】
修飾クロストリジウム毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ボツリヌス毒素酵素ドメイン、ボツリヌス毒素転移ドメイン及びボツリヌス毒素結合ドメインを含む修飾ボツリヌス毒素である、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２０】
修飾ボツリヌス毒素がＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ａ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａである、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２１】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転移ドメイン、及びＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂである、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２２】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１である、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２３】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転移ドメイン、及びＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄである、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２４】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅである、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２５】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転移ドメイン、及びＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆである、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２６】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇである、請求項１９に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２７】
修飾ボツリヌス毒素が、ＰＡＲリガンドドメイン、破傷風毒素酵素ドメイン、破傷風毒素転移ドメイン及び破傷風毒素結合ドメインを含む修飾破傷風毒素である、請求項１に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項２８】
修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子であって、
ａ） ＰＡＲリガンドドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｂ） クロストリジウム毒素酵素ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；
ｃ） クロストリジウム毒素転移ドメインをコードするポリヌクレオチド分子；および
ｄ） クロストリジウム毒素結合ドメインをコードするポリヌクレオチド分子、
を含むポリヌクレオチド分子。
【請求項２９】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウム毒素酵素ドメインのアミノ末端に対して作動的に連結されたＰＡＲリガンドドメインを含むポリペプチドをコードする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３０】
ポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む、修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項２９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３１】
ポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素結合ドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項２９に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３２】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウム毒素転移ドメインのアミノ末端に作動的に連結されたＰＡＲリガンドドメインを含むポリペプチドをコードする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３３】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウム毒素結合ドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、ＰＡＲリガンドドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項３２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３４】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項３２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３５】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウム毒素結合ドメインのアミノ末端に対し作動的に連結されたＰＡＲリガンドドメインを含むポリペプチドをコードする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３６】
ポリヌクレオチド分子が、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、ＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素結合ドメイン及びクロストリジウム毒素転移ドメインを含むアミノからカルボキシルまでの単一ポリペプチド線形順序を含む修飾クロストリジウム毒素をコードする、請求項３５に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３７】
ポリヌクレオチド分子がさらにプロテアーゼ切断部位をコードし、プロテアーゼ切断部位の分割がＰＡＲリガンドドメインをアンマスクする、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３８】
ＰＡＲリガンドドメインをコードするポリヌクレオチド分子がＰＡＲ１リガンドドメインを含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項３９】
ポリヌクレオチド分子が配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３又は配列番号１３３を含むＰＡＲ１リガンドドメインをコードする、請求項３８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４０】
ＰＡＲリガンドドメインをコードするポリヌクレオチド分子がＰＡＲ２リガンドドメインを含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４１】
ポリヌクレオチド分子が、配列番号２４又は配列番号２５を含むＰＡＲ２リガンドドメインをコードする、請求項４０に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４２】
ＰＡＲリガンドドメインをコードするポリヌクレオチド分子がＰＡＲ３リガンドドメインを含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４３】
ポリヌクレオチド分子が、配列番号２６、配列番号２７又は配列番号１３４を含むＰＡＲ３リガンドドメインをコードする請求項４２に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４４】
ＰＡＲリガンドドメインをコードするポリヌクレオチド分子がＰＡＲ４リガンドドメインを含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４５】
ポリヌクレオチド分子が、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号１３５又は配列番号１６０を含むＰＡＲ４リガンドドメインをコードする、請求項４４に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４６】
修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ボツリヌス毒素酵素ドメイン、ボツリヌス毒素転移ドメイン及びボツリヌス毒素結合ドメインを含む修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項２８に記載のポリヌクレオチド分子。
【請求項４７】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ａ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ａ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ａ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ａをコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４８】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｂ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｂ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｂをコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項４９】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｃ１転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｃ１結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｃ１をコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５０】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｄ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｄ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｄをコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５１】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｅ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｅ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｅをコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５２】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｆ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｆ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｆをコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５３】
修飾ボツリヌス毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ酵素ドメイン、ＢｏＮＴ／Ｇ転移ドメイン及びＢｏＮＴ／Ｇ結合ドメインを含む修飾ＢｏＮＴ／Ｇをコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項４６に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５４】
修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子が、ＰＡＲリガンドドメイン、破傷風毒素酵素ドメイン、破傷風毒素転移ドメイン及び破傷風毒素結合ドメインを含む修飾破傷風毒素をコードするポリヌクレオチド分子を含む、請求項２８に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５５】
細胞内のポリヌクレオチド分子によりコードされた修飾クロストリジウム毒素を発現するステップを含む修飾クロストリジウム毒素の産生方法であって、修飾クロストリジウム毒素がＰＡＲリガンドドメイン、クロストリジウム毒素酵素ドメイン、クロストリジウム毒素転移ドメイン及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含む方法。
【請求項５６】
ａ． ＰＡＲリガンドドメイン；クロストリジウム毒素酵素ドメイン；クロストリジウム毒素転移ドメイン；及びクロストリジウム毒素結合ドメインを含む修飾クロストリジウム毒素をコードするポリヌクレオチド分子を細胞内に導入するステップ、及び
ｂ． 前記ポリヌクレオチド分子によりコードされる修飾クロストリジウム毒素を発現させるステップ、
を含む、修飾クロストリジウム毒素を産生する方法。
【請求項５７】
ａ） ＰＡＲリガンドドメイン；
ｂ） クロストリジウム毒素酵素ドメイン；
ｃ） クロストリジウム毒素転移ドメイン；及び
ｄ） 非クロストリジウム毒素結合ドメイン、
を含む修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５８】
非クロストリジウム毒素結合ドメインが、神経成長因子（ＮＧＦ）、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、多頭活性化ペプチド（ＨＨＡＰ）、形質転換成長因子１（ＴＧＦ−１）、形質転換成長因子２（ＴＧＦ−２）、形質転換成長因子３（ＴＧＦ−３）、表皮成長因子（ＥＧＦ）又は毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）からなる群から選択される、請求項５７に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項５９】
非クロストリジウム毒素結合ドメインが腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−）、インタロイキン−１（ＩＬ−１）、インタロイキン−１（ＩＬ−１）又はインタロイキン−８（ＩＬ−８）からなる群から選択される、請求項５７に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項６０】
非クロストリジウム毒素結合ドメインがブラジキニン、ダイノルフィン、β−エンドルフィン、エトルフィン、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、Leu−エンケファリン、Met−エンケファリン、ガラニン、ロフェンタニル又はノシセプチンからなる群から選択される、請求項５７に記載の修飾クロストリジウム毒素。
【請求項６１】
非クロストリジウム毒素結合ドメインが、後根神経節ニューロンの表面上に見出されるラクト系炭水化物エピトープに対する抗体（例えばモノクローナル抗体１Ｂ２及びＬＡ４）、上述の結合ドメインについてのレセプターのいずれかに対する抗体又は表面発現抗原Ｔｈｙ１に対する抗体（例えばモノクローナル抗体ＭＲＣＯＸ７）からなる群から選択される請求項５７に記載の修飾クロストリジウム毒素。

【図１】

【図２】

【図３ａ】

【図３ｂ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図４Ｄ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【公表番号】特表２００８−５１１３３８（Ｐ２００８−５１１３３８Ａ）
【公表日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３０４６１（Ｐ２００７−５３０４６１）
【出願日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３１６１３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２６７８０
【国際公開日】平成１８年３月９日（２００６．３．９）
【出願人】（５９１０１８２６８）アラーガン、インコーポレイテッド (293)
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＬＥＲＧＡＮ，ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【Ｆターム（参考）】