反応性官能基を提示する刺激性ポリマー粒子、その製造方法、及び使用
本発明は、単環又は多環アルケン重合により得られる約３０〜１００００のモノマーを含むポリマー鎖により形成される球状粒子であって、ここで少なくとも１のモノマーユニットが、場合により加水分解性のブリッジを介して当該ポリマーユニットに共有結合されるエチレンポリオキシドを含むＲ鎖により置換され、そして場合により活性成分又はタンパク質などの生体成分と結合され、ここで当該Ｒ鎖がモノマーユニットに共有結合される、前記球状粒子に関する。医薬及び化粧品組成物、又は表面被覆剤を製造するための本発明の球状粒子の使用も開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、刺激性、つまりｐＨ又は温度の変化などの外部刺激に対して感受性であるポリマー粒子、より具体的にはポリマーナノ粒子であって、末梢において反応性官能基、特に酸、アミン、アルコール、又は酸クロリドなどのタイプの反応性官能基を提示するもの、並びにそれらを１ステップで合成する方法、及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性成分を直接材料中に封入又は吸着させるか、又は当該材料に吸着又は移植させるビーズ中に封入又は吸着させることにより得られる反応性官能基を提示する刺激性ポリマーは開示されていた。
【０００３】
しかしながら、吸着は、活性成分の制御放出を可能にしない。封入に関しては、活性成分の制御放出を可能にする場合であっても、当該物質が高いストレス(流動性、摩擦等)にかけられる場合、長期間の使用には適合しないことが証明された。
【０００４】
官能基化されたナノ粒子上に活性成分を共有結合することにより得られる反応性ポリマー・ナノ粒子も既に記載されていた。しかしながら、こうしたナノ粒子の合成は、２つのステップで行われ(ラテックスの合成の後に活性成分と反応させる)、そしてその結果結合を直接的に制御できなかった(ランダムな数の官能基が導入される)。さらに、これらのナノ粒子は、特定部位において活性成分の放出を許容するアンカー部位と活性成分との結合を有することはない。これらの物質は、しばしば、ベクター化(vectorisation)又は免疫学的試験を対象とした。
【発明の開示】
【０００５】
本発明は、反応性官能基を有する新たなポリマー粒子であって、場合により活性成分又は生体分子、例えばタンパク質と結合で繋がれており、当該反応性官能基が当該ポリマーに共有結合され、当該ポリマーが１のステップで得られる、前記ポリマー粒子を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明は、１０ｎｍ〜１００μｍの直径を有する球状粒子に関し、当該粒子は、同一又は異なる約３０〜１００００個のモノマー・ユニットを含むポリマー鎖により形成され、当該モノマーユニットは、環を構成する炭素原子数が約４〜１２である単環アルケン又は環を構成する炭素原子の総数が約６〜２０個である多環アルケン環の重合により得られ、当該モノマー・ユニットの少なくとも１つは、加水分解性ブリッジを介して当該モノマーユニットに場合により共有結合される以下の式(Ａ)：
【化１】
[式中、ｎは、約５０〜３４０、特に７０〜２００の整数を表し、そしてＸは、約１〜１０個の炭素原子を有するアルキル又はアルコキシ鎖であって、反応性官能基ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ2、Ｃ(Ｏ)Ｘ1タイプ｛ここで、Ｘ1は水素原子、ハロゲン原子、ＯＲ’又はＮＨＲ’基、(ここでＲ’は水素原子を表すか又は約１〜１０個の炭素原子を有する置換又は非置換炭化水素鎖を表す)を含む鎖を表す｝を含み、Ｘは、ポリエンなどの光反応性の官能基を含む基を表し、当該反応性官能基は、場合により、活性成分又は生体分子、例えばタンパク質との結合で場合により繋がれている]
で表されるエチレン・ポリオキシドを含むＲ鎖により置換され、当該Ｒ鎖は当該モノマーに共有結合される。
【０００７】
本発明は、より具体的に、上に定義される球状粒子であって、モノマー・ユニットが単環アルケンの重合から得られ、そして以下の式(Ｚ１)：
【化２】
[式中、Ｒ1は、２〜１０個の炭素原子を有する飽和又は不飽和炭化水素を表す]
で表され、当該モノマーが場合により、上で定義されるＲ鎖、又はＸ基により直接置換されることを特徴とする粒子に関する。
【０００８】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、そのモノマー・ユニットの由来元の単環アルケンが、以下の：
【化３】
式(Ｚ１ａ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロブテン、
【化４】
式(Ｚ１ｂ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンテン、
【化５】
式(Ｚ１ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンタジエン、
【化６】
式(Ｚ１ｄ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキセン、
【化７】
式(Ｚ１ｅ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキサジエン、
【化８】
式(Ｚ１ｆ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロへプテン、
【化９】
式(Ｚ１ｈ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクテン、
【化１０】
式(Ｚ１ｉ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクタポリエン、特にシクロオクタ-１,５-ジエン、
【化１１】
式(Ｚ１ｊ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノネン、
【化１２】
式(Ｚ１ｋ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノナジエン、
【化１３】
式(Ｚ１ｌ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデセン、
【化１４】
式(Ｚ１ｍ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデカ-１,５-ジエン、
【化１５】
式(Ｚ１ｎ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロドデセン、又は２,３,４,５-テトラヒドロオキセピン-２-イル・アセタート、シクロペンタデセン、パラシクロファン、フェロセノファン
であることを特徴とする、粒子に関する。
【０００９】
本発明は、上で定義される球状粒子であって、前記モノマー・ユニットが多環アルケンの重合に由来し、そして以下の式(Ｚ２)：
【化１６】
[式中、Ｒ2は：
以下の：
【化１７】
｛式中、
Ｙは、-ＣＨ2-、又はヘテロ原子、又は-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここで、Ｒ及びＸは、上で定義されるとおりであり、
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ又は上述のＲ鎖若しくはＸ基を表し、又はそれらを有する炭素原子と一緒になって４〜８個の炭素原子を有する環を形成し、当該環は、上記のようにＲ鎖又はＸ基により場合により置換され、
ａは、単結合又は二重結合を表す｝
で表される環、或いは以下の：
【化１８】
｛式中、
Ｙ’は、-ＣＨ2-、ヘテロ原子、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ’1及びＹ’2は、互いに独立して、-ＣＨ2-、又は-ＣＯＲ基又は-Ｃ-ＯＸ基の-Ｃ(Ｏ)基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環を表す]
で表わされるユニットであり、又は、
以下の式(Ｚ３)：
【化１９】
[式中Ｒ3は、以下の：
【化２０】
｛式中、
ｎ1及びｎ2は、互いに独立して、０又は１を表し、
Ｙ”は、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ”1及びＹ”2は、互いに独立して、０〜１０個の炭素原子を有する炭化水素鎖を表す｝
で表される環、又は
以下の式：
【化２１】
｛式中、
Ｙ”及びＹ”aは、互いに独立して、-ＣＨ2-、又は-ＣＨＲ-基若しくは-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環、又は
以下の式：
【化２２】
｛式中、Ｙ”及びＹ”aは、互いに独立して、-ＣＨ2-又は-ＣＨＲ-基若しくは-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環を表す]
で表わされるユニットであることを特徴とする粒子に関する。
【００１０】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、モノマーユニットの由来元である多環アルケンが、以下の：
【化２３】
式(Ｚ２ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロブテン環を含むモノマー；
以下の：
【化２４】
式(Ｚ２ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロペンテンを含むモノマー；
以下の：
【化２５】
式(Ｚ２ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)ノルボルネン；
以下の：
【化２６】
式(Ｚ２ｄ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエン(norbornadiene)；
以下の：
【化２７】
式(Ｚ２ｅ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノボルネン；
以下の：
【化２８】
式(Ｚ２ｆ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノルボルナジエン；
以下の：
【化２９】
式(Ｚ３ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンの二量体；
【化３０】
式(Ｚ３ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン；
以下の：
【化３１】
式(Ｚ３ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くテトラシクロドデカジエン；又は
ビシクロ[５.１.０]オクタ-２-エン、ビシクロ[６.１.０]ノナ-４-エン
であることを特徴とする粒子に関する。
【００１１】
本発明は、より具体的に、上で定義される好ましい球状粒子であって、そのモノマーユニットの由来元である単環又は多環アルケンが、以下の：
式(Ｚ２ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルネン(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)
式(Ｚ３ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くテトラシクロドデカジエン
式(Ｚ３ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン
式(Ｚ３ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンの二量体
式(Ｚ１ｉ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロオクタ-１,５-ジエン
であることを特徴とするものに関する。
【００１２】
有利なことに、上で定義された球状粒子は、少なくとも０.５％、最大で１００％のモノマー・ユニットが、上で定義されるＲ鎖により置換されるといことを特徴とする。本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、それらが、以下の：
上で定義されるＲ鎖により置換される約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット、ここで当該Ｒ鎖は当該モノマーについて同一である
上で定義されるＲ鎖により置換される約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット、ここで当該モノマーのＲ鎖は、前述のモノマーのＲ鎖とは異なっている
及び/又は上で定義されるＸ基により直接置換される約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット、ここで当該モノマーのＸ基が、前述のモノマーのＲ鎖のＸ基と同一又は異なっているモノマーのＸ基である
及び/又は約０.５％〜約９９.５％の非置換モノマーユニット
を含み、上記様々なモノマーの割合の合計は１００％であることを特徴とする、前記粒子に関する。
【００１３】
本発明は、より具体的に上で定義される球状粒子であって、モノマーを置換するＲ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３２】
[式中、ｎは上で定義されるとおりであり、そしてＸが、Ｈ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、-ＣＨ2ＣＯＹを表し、ここでＹは活性成分、又はタンパク質などの生体分子を指す]
により表されることを特徴とする、粒子に関する。
【００１４】
本発明は、上で定義される球状粒子であって、当該鎖(単数又は複数)が、加水分解性のブリッジにより当該モノマー・ユニットに共有結合された式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含むということにより特徴付けられる、上記粒子にも関する。
【００１５】
かかる球状粒子は、当該球状粒子が、ｉｎ ｖｉｖｏで安定又は不安定である活性成分の制御放出を可能にする場合、特に利点がある。本戦略に従うと、粒子内にとり込まれ、その結果外部の媒質から分離されており、そして粒子に共有結合されている活性成分の放出は、外部刺激(例えば、ｐＨ、高温)を介してモノマーユニットとＲ鎖との間の結合を破壊することにより当該粒子を不安定化させる第一ステップにより行われる。当該ステップは、安定性のＲ鎖を塩析することを含む。第二の反応時間において、活性成分により官能化されているか又はされていない結果として生じたＲ鎖又はＺ１は、加水分解反応をうけ、そして活性成分を放出する。
【００１６】
本発明に記載される球状粒子は、刺激性粒子であり、つまり、当該粒子は、ｐＨ又は温度の変化などの外部の刺激に反応性であり、これらの粒子内に取り込まれる活性成分の放出を許容する。
【００１７】
好ましくは、上で記載される加水分解可能なブリッジは、約１〜１０ユニットのε-カプロラクトン、又は以下の-ＯＣ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｏ)ＯＣ(Ｏ)-、Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-などから選ばれる官能基を有する鎖形態のなかから選ばれる。
【００１８】
この関係で、本発明は、より具体的に上で定義される球状粒子であって、約１〜１０ユニットのε-カプロラクトンを有する鎖形態のなかから選ばれる加水分解可能なブリッジに共有結合する式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含むＲ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３３】
[式中、ｔが１〜１０の整数を表し、そしてＸが、Ｈ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、又は-ＣＨ2-ＣＯＹを表し、ここでＹは活性成分又はタンパク質などの生体分子を表す]
により表される。
【００１９】
本発明は、上で定義される球状粒子であって、当該活性成分が、治療、化粧品、香水、又は表面塗装剤、例えば塗料及び防汚被膜などにおいて使用される分子から選ばれるということを特徴とする、上記球状粒子に関する。
【００２０】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、前記活性成分が、治療において使用される医薬であって、以下の治療薬のクラス：抗炎症剤、特にインドメタシン、抗癌治療薬、抗生物質、抗凝結剤、又は抗有糸分裂剤のなかから特に選ばれる医薬であることを特徴とする、前記球状粒子に関する。
【００２１】
本発明はより具体的に、上で定義される球状粒子であって、生体分子が、細胞内又は細胞外生物標的、又は抗体若しくは任意の他の特定のリガンドに結合できるタンパク質のなかから選ばれることを特徴とする、当該球状粒子に関する。
【００２２】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、上記生体分子が、以下のタンパク質：アビジン、アルブミン、成長因子、例えば、ＶＥＧＦのなかから選ばれることを特徴とする、当該球状粒子に関する。
【００２３】
本発明は、上で定義される球状粒子を含む医薬組成物であって、ここで異なるＸ基(単数又は複数)が、場合により医薬として許容される担体を伴って医薬として活性な成分を含み、特に非経口形態で使用される当該医薬組成物に関する。
【００２４】
本発明はまた、上で定義される球状粒子を含む化粧品組成物であって、ここでＸ基(単数又は複数)が、場合により適切な担体を伴って化粧品において使用される活性成分を含み、特に乳濁液、クリームの形態で適用される当該化粧品組成物にも関する。
【００２５】
本発明はまた、上で定義される球状粒子を含む表面被覆用の組成物であって、Ｘ基(単数又は複数)が、場合により適切な担体を伴って表面被覆用に用いられる活性成分を含む、当該組成物にも関する。
【００２６】
本発明はまた、上で定義される球状粒子の製造方法であって、上で定義されたＲ鎖により置換された上記単環又は多環アルケンを、場合により以下の：
- 上で定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は相違しており、そして上で定義されるＲ鎖により置換され、ここで当該Ｒ鎖は、前述の単環又は多環アルケンを置換する鎖とは相違している、単環又は多環アルケン、
- 上で定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は相違しており、そして上で定義されるＸ基により置換され、ここで当該Ｘ基は、前述のアルケンのＲ鎖のＸ基と同一であるか又は相違している、単環又は多環アルケン、及び/又は
- 上で定義される１以上の単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は相違しており、置換されていないもの
の存在下で重合するステップ；
を含み、当該重合は、反応開始物質として第ＩＶ族、第ＶＩ族、又は第ＶＩＩ族の金属、例えば、ルテニウム、オスミウム、モリブデン、タングステン、イリジウム、チタンなどの中から特に選ばれる遷移金属複合体の存在下で、極性又は非極性溶媒中で、特に以下のルテニウムに基づく複合体：ＲｕＣｌ3、ＲｕＣｌ2(ＰＣｙ3)2ＣＨＰｈの助けを借りて、攪拌している間に行われることを特徴とする前記方法に関する。
【００２７】
本発明は、単環又は多環アルケンであって、それらが上で定義されるＲ鎖又はＸ基により置換さることを特徴とする当該単環又は多環アルケンに関する。但し以下の式：
【化３４】
[式中、ｚは１〜３４０の整数を表す]
で表されるアルケンを除く。
【００２８】
上で定義される好ましい単環又は多環アルケンは、上で記載されるもののなかから選ばれる。
【００２９】
本発明は、上で定義される単環又は多環アルケンであって、以下の式：
【化３５】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３６】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３７】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３８】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３９】
[式中、ｔは１〜１０の整数を表し、そしてｎは約５０〜３４０の間の自然数である]
により特徴付けられるアルケンに関する。
【００３０】
本発明は、上で定義される方法により上で定義される球状粒子の製造方法を実施するために上で定義される単環又は多環アルケンを使用することにも関する。
本発明は、本発明に記載される球状粒子の取得、及び当該粒子の物理化学的性質については以下の詳細な記載に支持されて記載されよう。
【実施例】
【００３１】
Ａ) 以下の式Ａ及びＢのマクロモノマーの合成
マクロモノマー(Ａ及びＢ)は、７０００ｇ/ｍｏｌのモル質量(Ｍn)を有するポリ(エチレン・オキシド)オリゴマーである。これらは、鎖の長さ及び官能基の制御を可能にする「リビング」アニオン重合から得られる。マクロモノマー（Ａ及びＢ）は、その１の末端でノルボルネニル・ユニット、メタセシスによる重合における高い反応性のために選択された部分、により官能基化され、そしてもう一方の末端でアルコール、酸、アミンなどの反応性官能基(Ａ)により、又は活性成分(インドメタシン)(Ｂ)により、分解性のブリッジ(酸無水物、エステル、アミドなど)を介して官能基化される。
【００３２】
１.α-ノルボルネニル-ω-カルボン酸-ポリ(エチレン・オキシド)；式Ａ
化学式：
【化４０】
[式中、ｎは、想定される適用の要件に応じて、５０〜３４０である。]
【００３３】
レファレンス： ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯＯＨ
合成スキーム：
【化４１】
【００３４】
合成方法：
まず最初にテトラヒドロフラン(ＴＨＦ)(２００ｍｌ)に溶解している５-ノルボルネン-２-メタノール(０.５ｍｌ)に、モル当量のジフェニルメチル・カリウムを加えることにより脱プロトン化する。得られたラジカルは、次に「リビング」の様式で(４８時間)、メタノール(１ｍｌ)を加えることにより活性中心が破壊されるまで、エチレンオキシド(２８ｍｌ)の重合を始める。得られたポリ(エチレン・オキシド)のアルコール官能基（Ａ０）は、ＴＨＦ(１５ｍｌ)に溶解しているＮａＨ(０.１７ｇ)で、Ａ０(１０ｇ)を脱プロトン化し、続いてブロモ酢酸(０.４２ｇ)を加えることにより、酸官能基へと変換されよう。生成物を、塩酸(１８ｍｌ、１Ｍ)で洗浄したのちに、エーテル中で沈殿させ、マクロモノマーＡを純粋な形態で得る。
【００３５】
２. α-ノルボルネニル-ω-インドメタシン-ポリ(エチレンオキシド)；式Ｂ
化学式：
【化４２】
[式中、ｎは、想定される適用の要件に応じて７０〜２００である]
【００３６】
レファレンス： ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯ(Ｏ)-ＩＮＤ
合成スキーム：
【化４３】
【００３７】
合成方法：
触媒量のジメチルホルムアミドの存在下で、ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯＯＨ(Ａ) (５.２ｇ)を、オキサリル・クロリド(０.０８ｍｌ)を溶解するＴＨＦ(２５ｍｌ)中で２４時間反応させることにより、（Ａ）の酸官能基を酸クロリド(Ａ２)へと変換させる。インドメタシン(０.６ｇ)及びトリエチルアミン(０.２４ｍｌ)を次にＡ２の溶液に加え、そして攪拌して１５時間置いた。エーテル中で沈殿させた後にマクロモノマーＢを得た。
【００３８】
３. ノルボルネンのインドメタシン誘導体
前述の反応において使用されるモノマーは、ノルボルネン(ＮＢＨ)又は活性成分により官能基化されたノルボルネン(ＮＢＤ)である。後者は、次に、エステル、無水物、アミドなどのタイプの加水分解性のブリッジを介して導入される。
【００３９】
インドメタシンにより官能基化されたノルボルネンの合成は以下に記載される。
【００４０】
化学式：
【化４４】
【００４１】
レファレンス：ＮＢＤ
合成スキーム：
【化４５】
【００４２】
合成方法
モノマーＮＢＤの合成
典型的な反応の間、オキサリル・クロリド(０.８７ｍｌ)を、インドメタシン(１.１ｇ)を溶解したジクロロメタン(２０ｍｌ)に加える。２時間反応させ、そして未反応のオキサリルクロリドを取り除いた後に、得られた化合物Ｉを次に、５-ノルボルネン-２-メタノール(０.３６ｍｌ)及びトリエチルアミン(０．８４ｍｌ)を含むジクロロメタン(２０ｍｌ)溶液中に加え、そして攪拌しながら１５時間４５℃で置いた。抽出により精製した後に、モノマーＮＢＤを得た(ρ＞９５％)。
【００４３】
Ｂ. 粒子の合成
本発明に記載される粒子は、分散溶媒(エマルジョン、ミニ-エマルジョン及びマイクロエマルジョン、分散、懸濁液)中で、重合性物質と反応性官能基又は活性成分(医薬、有機分子など)によりα,ω-官能基化されたマクロモノマーと、ビニルモノマー(シクロ-オレフィン)とを共重合することにより得られる。重合は、遷移金属により開始され、そして水又は有機溶媒(ジクロロエタン/エタノール)中で行われうる。マクロモノマーは、安定剤及び官能基化剤の役割を果たす。安定剤の能力において、マクロモノマーは、反応溶媒中でのポリマーの形成の間、当該ポリマーを球状ナノ粒子の形態で分散させることを可能にする。純粋な立体の視点から、安定化は、溶媒のｐＨ変化に感受性ではない。さらに、マクロモノマーによるラテックスの官能基化は、ラテックスの表面の反応性官能基の利用能を改善し、そしてその反応性を保持する。
【００４４】
重合の開始剤は、極性溶媒中で安定であるルテニウムに基づく複合体：ＲｕＣｌ3、ＲｕＣｌ2(ＰＣｙ3)2ＣＨＰｈ、及びそれらのホモログである。これらの条件において合成されるラテックスは、粒子を安定化するように働くポリ(エチレン・オキシド)グラフトを有するポリアルケナマー(polyalkenamer)鎖からなるであろう。
【００４５】
得られた粒子は、水性及び/又は油性溶媒中で安定である。その大きさは、使用される重合方法に応じて、数ナノメートル〜数マイクロメートルである。ナノ粒子は、ほぼ等しい大きさの球である。
【００４６】
合成スキーム
【化４６】
【００４７】
合成方法
マクロモノマーＡ及びＢは、モノマー(ＮＢＨ及び/又はＮＢＤ)の存在下で共重合させる。典型的な反応において、あらかじめ１４ｍｌのジクロロメタン/エタノール混合液(３５％/６５％)中に溶解された０.８ｇのモノマーと１ｇのマクロモノマー(０.２ｇのＡ及び０.８ｇのＢ)の溶液を、窒素雰囲気下で強く攪拌しながら、２０ｍｇの開始剤を含む１０ｍｌのジクロロメタン／エタノール(５０％／５０％)中に加えた。重合時間は１時間である。完全に均一な開始溶媒は、重合が行われるにつれて次第に濁ってくる。ガスクロマトグラフィーによる重合のモニタリングは、１分以内に、モノマーが完全に変換することを明らかにした。マクロモノマーＡ及びＢをラテックス中にとり込むことは完全である。
【００４８】
Ｃ.反応性活性成分の輸送用のバリアント
ラテックスは、前に記載されるように、活性成分(インドメタシン)を有する又は有さないシクロオレフィン(ノルボルネン)と、安定化ポリマー(ＮＢ-ＰＣＬ-ＰＯＥ-ＯＭｅ)との間の共重合により調製される。酸、酸クロリド、アルコール、アミン・タイプの反応性官能基により官能基化されているか又はされていない安定化ポリマーは、加水分解性のブリッジ、特に、以下のスキーム：
【化４７】
に記載される重合性官能基とエチレン・ポリオキシドとの間のε-カプロラクトン(ＰＣＬ)のユニットを有する。
【００４９】
この方法によると、粒子内に取り込まれ、そしてそれらに共有結合される活性成分の放出は、ラテックスの不安定化の第一ステップを必要とする。これは、安定鎖の塩析による外部刺激(ｐＨ、高温等)を介して達成されうる。
【００５０】
第二の反応時間において、活性成分により官能基化されたポリアルケナマーの直線状の鎖は、加水分解反応を引き起こし、そして活性成分を放出する(図１４)。
【００５１】
１) コポリマー、ポリ(カプロラクトン-β-エチレン・グリコール)-α-ノルボルネン-ω-メチル・エーテルＮＢ-ＰＣＬ-ＰＯＥ-ＯＭｅの合成方法
ポリ(カプロラクトン)α-ノルボルネニル(ＮＢ-Ｐｃａｐｒｏ)の製造
トリエチル・アルミニウム(１.３×１０-2モル)を、-８０℃に冷却されたトルエン(１００ｍｌ)に溶解された２-ヒドロキシメチル-５-ノルボルネン(１.３×１０-2ｍｏｌ)の溶液に滴下して加える。少しずつ室温に戻した後に、反応を２.５時間続ける。カプロラクトン(３.９ｍｏｌ)を次に、強く攪拌しながら反応溶媒に加える。反応１８時間後、５０ｍｌの塩酸(０.１Ｎ)を加える。冷ヘプタン中で中性のポリ(ε-カプロラクトン)α-ノルボルネニルが沈殿するまで洗浄した後、フリット(frit)Ｎｏ.４でろ過した。ヘプタンの残りを、真空内で１０時間熱することにより取り除く。得られたポリマーを、次にジオキサンを溶媒として３回凍結乾燥する。
【００５２】
ポリ(エチレン・グリコール)-α-カルボン酸-ω-メチルエーテルの製法
３.８９×１０-3ｍｏｌの無水コハク酸及び４.１０×１０-3モルのトリエチルアミンを、４５ｍｌの無水アセトンに溶解する。攪拌しながら、１５ｍｌの無水ＣＨ2Ｃｌ2に溶解したポリ(エチレン・グリコール)モノメチル・エーテル(６×１０-4モル)の溶液を滴下して加える。反応１６時間後、１ｍｌのメタノールを加える。ロータリー・エバポレーター中で濃縮した後に、ポリマーをエチルエーテル中で沈殿させた。さらに２回溶解／沈殿ステップを行う。ポリマーを強い吸引下に１０時間おき、全ての残った溶媒を取り除く。
【００５３】
コポリマー、ポリ(カプロラクトン-ｂ-エチレングリコール)-α-ノルボルネン-ω-メチル・エーテル(ＮＢ-Ｐｃａｐｒｏ-ＰＥＧ-ＯＭｅ)の製造
４×１０-4ｍｏｌのポリ(エチレングリコール)-α-カルボン酸-ω-メチルエーテルを、無水ＣＨ2Ｃｌ2に溶解する。塩化オキサリル(８×１０-4ｍｏｌ)を、当該溶液に加えて、５℃に冷却する。１５時間の反応後、過剰量の未反応の塩化オキサリル及びＣＨ2Ｃｌ2を減圧下で取り除く。得られた黄色残渣を次に４０ｍｌのジクロロメタンに溶解する。トリエチルアミン(４.３×１０-4ｍｏｌ)を加えた後に、α-ノルボルネニル・ポリ(カプロラクトン)を加える。ロータリーエバポレーターで濃縮した後に、ポリマーをエチルエーテルで沈殿する。溶解／沈殿のステップをさらに２回行う。ポリマーを減圧下に１０時間置いて、全ての残った溶媒を取り除く。
【００５４】
α-ノルボルネニル・ポリ(カプロラクトン)の合成を、以下のスキームに従って行う：
【化４８】
【００５５】
ポリ(ε-カプロラクトン-ｂ-エチレン・グリコール)-α-ノルボルネン-ω-メチル・エーテルの合成が、以下のスキームに従って行われる：
【化４９】
【００５６】
２)活性成分の放出
粒子が合成されると、我々は紫外可視分光法により、単にｐＨを下げることにより医薬を放出する可能性を確証した。得られた結果は、インドメタシンを少しずつ制御して放出することを確認した。さらにｐＨを３にすると、その８５％超が４８時間のうちに塩析することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】式ＡのマクロモノマーのＲＭＮ1Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図２】式ＡのマクロモノマーのＲＭＮ13Ｃ ＮＭＲスペクトル。
【図３】ＴＨＦに溶解した式Ａのマクロモノマーの立体排除クロマトグラフィー。
【図４】式ＢのマクロモノマーのＲＭＮ1Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図５】ＴＨＦに溶解した式Ｂのマクロモノマーの立体排除クロマトグラフィー。
【図６】化合物ＮＢＤのＲＭＮ1Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図７】化合物ＮＢＤのＲＭＮ13Ｃ ＮＭＲスペクトル。
【図８】重合反応の間におけるＮＢへの及びＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯ(Ｏ)-ＩＮＤへの変換研究。時間に対する関数としてのノルボルネン(◆、ＮＢ)、及びマクロモノマー(●、ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯ(Ｏ)-ＩＮＤ)の漸進的変化。
【図９】モノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の走査型電子顕微鏡の画像。
【図１０】モノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の透過型電子顕微鏡の画像。
【図１１】モノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の、光の動的拡散によって得た大きさ及び粒度分布。
【図１２】ＴＨＦに溶解したモノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の立体排除クロマトグラフィー。
【図１３】活性成分が粒子内に取り込まれ、かつ粒子に共有結合されている本発明に記載される球状粒子の描写。
【図１４】本発明に記載される球状粒子の不安定化、及び医薬の塩析の図。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、刺激性、つまりｐＨ又は温度の変化などの外部刺激に対して感受性であるポリマー粒子、より具体的にはポリマーナノ粒子であって、末梢において反応性官能基、特に酸、アミン、アルコール、又は酸クロリドなどのタイプの反応性官能基を提示するもの、並びにそれらを１ステップで合成する方法、及びその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性成分を直接材料中に封入又は吸着させるか、又は当該材料に吸着又は移植させるビーズ中に封入又は吸着させることにより得られる反応性官能基を提示する刺激性ポリマーは開示されていた。
【０００３】
しかしながら、吸着は、活性成分の制御放出を可能にしない。封入に関しては、活性成分の制御放出を可能にする場合であっても、当該物質が高いストレス(流動性、摩擦等)にかけられる場合、長期間の使用には適合しないことが証明された。
【０００４】
官能基化されたナノ粒子上に活性成分を共有結合することにより得られる反応性ポリマー・ナノ粒子も既に記載されていた。しかしながら、こうしたナノ粒子の合成は、２つのステップで行われ(ラテックスの合成の後に活性成分と反応させる)、そしてその結果結合を直接的に制御できなかった(ランダムな数の官能基が導入される)。さらに、これらのナノ粒子は、特定部位において活性成分の放出を許容するアンカー部位と活性成分との結合を有することはない。これらの物質は、しばしば、ベクター化(vectorisation)又は免疫学的試験を対象とした。
【発明の開示】
【０００５】
本発明は、反応性官能基を有する新たなポリマー粒子であって、場合により活性成分又は生体分子、例えばタンパク質と結合で繋がれており、当該反応性官能基が当該ポリマーに共有結合され、当該ポリマーが１のステップで得られる、前記ポリマー粒子を提供することを目的とする。
【０００６】
本発明は、１０ｎｍ〜１００μｍの直径を有する球状粒子に関し、当該粒子は、同一又は異なる約３０〜１００００個のモノマー・ユニットを含むポリマー鎖により形成され、当該モノマーユニットは、環を構成する炭素原子数が約４〜１２である単環アルケン又は環を構成する炭素原子の総数が約６〜２０個である多環アルケン環の重合により得られ、当該モノマー・ユニットの少なくとも１つは、加水分解性ブリッジを介して当該モノマーユニットに場合により共有結合される以下の式(Ａ)：
【化１】
[式中、ｎは、約５０〜３４０、特に７０〜２００の整数を表し、そしてＸは、約１〜１０個の炭素原子を有するアルキル又はアルコキシ鎖であって、反応性官能基ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ2、Ｃ(Ｏ)Ｘ1タイプ｛ここで、Ｘ1は水素原子、ハロゲン原子、ＯＲ’又はＮＨＲ’基、(ここでＲ’は水素原子を表すか又は約１〜１０個の炭素原子を有する置換又は非置換炭化水素鎖を表す)を含む鎖を表す｝を含み、Ｘは、ポリエンなどの光反応性の官能基を含む基を表し、当該反応性官能基は、場合により、活性成分又は生体分子、例えばタンパク質との結合で場合により繋がれている]
で表されるエチレン・ポリオキシドを含むＲ鎖により置換され、当該Ｒ鎖は当該モノマーに共有結合される。
【０００７】
本発明は、より具体的に、上に定義される球状粒子であって、モノマー・ユニットが単環アルケンの重合から得られ、そして以下の式(Ｚ１)：
【化２】
[式中、Ｒ1は、２〜１０個の炭素原子を有する飽和又は不飽和炭化水素を表す]
で表され、当該モノマーが場合により、上で定義されるＲ鎖、又はＸ基により直接置換されることを特徴とする粒子に関する。
【０００８】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、そのモノマー・ユニットの由来元の単環アルケンが、以下の：
【化３】
式(Ｚ１ａ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロブテン、
【化４】
式(Ｚ１ｂ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンテン、
【化５】
式(Ｚ１ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンタジエン、
【化６】
式(Ｚ１ｄ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキセン、
【化７】
式(Ｚ１ｅ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキサジエン、
【化８】
式(Ｚ１ｆ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロへプテン、
【化９】
式(Ｚ１ｈ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクテン、
【化１０】
式(Ｚ１ｉ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクタポリエン、特にシクロオクタ-１,５-ジエン、
【化１１】
式(Ｚ１ｊ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノネン、
【化１２】
式(Ｚ１ｋ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノナジエン、
【化１３】
式(Ｚ１ｌ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデセン、
【化１４】
式(Ｚ１ｍ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデカ-１,５-ジエン、
【化１５】
式(Ｚ１ｎ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロドデセン、又は２,３,４,５-テトラヒドロオキセピン-２-イル・アセタート、シクロペンタデセン、パラシクロファン、フェロセノファン
であることを特徴とする、粒子に関する。
【０００９】
本発明は、上で定義される球状粒子であって、前記モノマー・ユニットが多環アルケンの重合に由来し、そして以下の式(Ｚ２)：
【化１６】
[式中、Ｒ2は：
以下の：
【化１７】
｛式中、
Ｙは、-ＣＨ2-、又はヘテロ原子、又は-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここで、Ｒ及びＸは、上で定義されるとおりであり、
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立して、Ｈ又は上述のＲ鎖若しくはＸ基を表し、又はそれらを有する炭素原子と一緒になって４〜８個の炭素原子を有する環を形成し、当該環は、上記のようにＲ鎖又はＸ基により場合により置換され、
ａは、単結合又は二重結合を表す｝
で表される環、或いは以下の：
【化１８】
｛式中、
Ｙ’は、-ＣＨ2-、ヘテロ原子、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ’1及びＹ’2は、互いに独立して、-ＣＨ2-、又は-ＣＯＲ基又は-Ｃ-ＯＸ基の-Ｃ(Ｏ)基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環を表す]
で表わされるユニットであり、又は、
以下の式(Ｚ３)：
【化１９】
[式中Ｒ3は、以下の：
【化２０】
｛式中、
ｎ1及びｎ2は、互いに独立して、０又は１を表し、
Ｙ”は、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ”1及びＹ”2は、互いに独立して、０〜１０個の炭素原子を有する炭化水素鎖を表す｝
で表される環、又は
以下の式：
【化２１】
｛式中、
Ｙ”及びＹ”aは、互いに独立して、-ＣＨ2-、又は-ＣＨＲ-基若しくは-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環、又は
以下の式：
【化２２】
｛式中、Ｙ”及びＹ”aは、互いに独立して、-ＣＨ2-又は-ＣＨＲ-基若しくは-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環を表す]
で表わされるユニットであることを特徴とする粒子に関する。
【００１０】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、モノマーユニットの由来元である多環アルケンが、以下の：
【化２３】
式(Ｚ２ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロブテン環を含むモノマー；
以下の：
【化２４】
式(Ｚ２ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロペンテンを含むモノマー；
以下の：
【化２５】
式(Ｚ２ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)ノルボルネン；
以下の：
【化２６】
式(Ｚ２ｄ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエン(norbornadiene)；
以下の：
【化２７】
式(Ｚ２ｅ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノボルネン；
以下の：
【化２８】
式(Ｚ２ｆ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノルボルナジエン；
以下の：
【化２９】
式(Ｚ３ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンの二量体；
【化３０】
式(Ｚ３ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン；
以下の：
【化３１】
式(Ｚ３ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くテトラシクロドデカジエン；又は
ビシクロ[５.１.０]オクタ-２-エン、ビシクロ[６.１.０]ノナ-４-エン
であることを特徴とする粒子に関する。
【００１１】
本発明は、より具体的に、上で定義される好ましい球状粒子であって、そのモノマーユニットの由来元である単環又は多環アルケンが、以下の：
式(Ｚ２ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルネン(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)
式(Ｚ３ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くテトラシクロドデカジエン
式(Ｚ３ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン
式(Ｚ３ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンの二量体
式(Ｚ１ｉ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロオクタ-１,５-ジエン
であることを特徴とするものに関する。
【００１２】
有利なことに、上で定義された球状粒子は、少なくとも０.５％、最大で１００％のモノマー・ユニットが、上で定義されるＲ鎖により置換されるといことを特徴とする。本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、それらが、以下の：
上で定義されるＲ鎖により置換される約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット、ここで当該Ｒ鎖は当該モノマーについて同一である
上で定義されるＲ鎖により置換される約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット、ここで当該モノマーのＲ鎖は、前述のモノマーのＲ鎖とは異なっている
及び/又は上で定義されるＸ基により直接置換される約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット、ここで当該モノマーのＸ基が、前述のモノマーのＲ鎖のＸ基と同一又は異なっているモノマーのＸ基である
及び/又は約０.５％〜約９９.５％の非置換モノマーユニット
を含み、上記様々なモノマーの割合の合計は１００％であることを特徴とする、前記粒子に関する。
【００１３】
本発明は、より具体的に上で定義される球状粒子であって、モノマーを置換するＲ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３２】
[式中、ｎは上で定義されるとおりであり、そしてＸが、Ｈ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、-ＣＨ2ＣＯＹを表し、ここでＹは活性成分、又はタンパク質などの生体分子を指す]
により表されることを特徴とする、粒子に関する。
【００１４】
本発明は、上で定義される球状粒子であって、当該鎖(単数又は複数)が、加水分解性のブリッジにより当該モノマー・ユニットに共有結合された式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含むということにより特徴付けられる、上記粒子にも関する。
【００１５】
かかる球状粒子は、当該球状粒子が、ｉｎ ｖｉｖｏで安定又は不安定である活性成分の制御放出を可能にする場合、特に利点がある。本戦略に従うと、粒子内にとり込まれ、その結果外部の媒質から分離されており、そして粒子に共有結合されている活性成分の放出は、外部刺激(例えば、ｐＨ、高温)を介してモノマーユニットとＲ鎖との間の結合を破壊することにより当該粒子を不安定化させる第一ステップにより行われる。当該ステップは、安定性のＲ鎖を塩析することを含む。第二の反応時間において、活性成分により官能化されているか又はされていない結果として生じたＲ鎖又はＺ１は、加水分解反応をうけ、そして活性成分を放出する。
【００１６】
本発明に記載される球状粒子は、刺激性粒子であり、つまり、当該粒子は、ｐＨ又は温度の変化などの外部の刺激に反応性であり、これらの粒子内に取り込まれる活性成分の放出を許容する。
【００１７】
好ましくは、上で記載される加水分解可能なブリッジは、約１〜１０ユニットのε-カプロラクトン、又は以下の-ＯＣ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｏ)ＯＣ(Ｏ)-、Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-などから選ばれる官能基を有する鎖形態のなかから選ばれる。
【００１８】
この関係で、本発明は、より具体的に上で定義される球状粒子であって、約１〜１０ユニットのε-カプロラクトンを有する鎖形態のなかから選ばれる加水分解可能なブリッジに共有結合する式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含むＲ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３３】
[式中、ｔが１〜１０の整数を表し、そしてＸが、Ｈ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、又は-ＣＨ2-ＣＯＹを表し、ここでＹは活性成分又はタンパク質などの生体分子を表す]
により表される。
【００１９】
本発明は、上で定義される球状粒子であって、当該活性成分が、治療、化粧品、香水、又は表面塗装剤、例えば塗料及び防汚被膜などにおいて使用される分子から選ばれるということを特徴とする、上記球状粒子に関する。
【００２０】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、前記活性成分が、治療において使用される医薬であって、以下の治療薬のクラス：抗炎症剤、特にインドメタシン、抗癌治療薬、抗生物質、抗凝結剤、又は抗有糸分裂剤のなかから特に選ばれる医薬であることを特徴とする、前記球状粒子に関する。
【００２１】
本発明はより具体的に、上で定義される球状粒子であって、生体分子が、細胞内又は細胞外生物標的、又は抗体若しくは任意の他の特定のリガンドに結合できるタンパク質のなかから選ばれることを特徴とする、当該球状粒子に関する。
【００２２】
本発明は、より具体的に、上で定義される球状粒子であって、上記生体分子が、以下のタンパク質：アビジン、アルブミン、成長因子、例えば、ＶＥＧＦのなかから選ばれることを特徴とする、当該球状粒子に関する。
【００２３】
本発明は、上で定義される球状粒子を含む医薬組成物であって、ここで異なるＸ基(単数又は複数)が、場合により医薬として許容される担体を伴って医薬として活性な成分を含み、特に非経口形態で使用される当該医薬組成物に関する。
【００２４】
本発明はまた、上で定義される球状粒子を含む化粧品組成物であって、ここでＸ基(単数又は複数)が、場合により適切な担体を伴って化粧品において使用される活性成分を含み、特に乳濁液、クリームの形態で適用される当該化粧品組成物にも関する。
【００２５】
本発明はまた、上で定義される球状粒子を含む表面被覆用の組成物であって、Ｘ基(単数又は複数)が、場合により適切な担体を伴って表面被覆用に用いられる活性成分を含む、当該組成物にも関する。
【００２６】
本発明はまた、上で定義される球状粒子の製造方法であって、上で定義されたＲ鎖により置換された上記単環又は多環アルケンを、場合により以下の：
- 上で定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は相違しており、そして上で定義されるＲ鎖により置換され、ここで当該Ｒ鎖は、前述の単環又は多環アルケンを置換する鎖とは相違している、単環又は多環アルケン、
- 上で定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は相違しており、そして上で定義されるＸ基により置換され、ここで当該Ｘ基は、前述のアルケンのＲ鎖のＸ基と同一であるか又は相違している、単環又は多環アルケン、及び/又は
- 上で定義される１以上の単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は相違しており、置換されていないもの
の存在下で重合するステップ；
を含み、当該重合は、反応開始物質として第ＩＶ族、第ＶＩ族、又は第ＶＩＩ族の金属、例えば、ルテニウム、オスミウム、モリブデン、タングステン、イリジウム、チタンなどの中から特に選ばれる遷移金属複合体の存在下で、極性又は非極性溶媒中で、特に以下のルテニウムに基づく複合体：ＲｕＣｌ3、ＲｕＣｌ2(ＰＣｙ3)2ＣＨＰｈの助けを借りて、攪拌している間に行われることを特徴とする前記方法に関する。
【００２７】
本発明は、単環又は多環アルケンであって、それらが上で定義されるＲ鎖又はＸ基により置換さることを特徴とする当該単環又は多環アルケンに関する。但し以下の式：
【化３４】
[式中、ｚは１〜３４０の整数を表す]
で表されるアルケンを除く。
【００２８】
上で定義される好ましい単環又は多環アルケンは、上で記載されるもののなかから選ばれる。
【００２９】
本発明は、上で定義される単環又は多環アルケンであって、以下の式：
【化３５】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３６】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３７】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３８】
[式中、ｎは、約５０〜３４０の整数である]
【化３９】
[式中、ｔは１〜１０の整数を表し、そしてｎは約５０〜３４０の間の自然数である]
により特徴付けられるアルケンに関する。
【００３０】
本発明は、上で定義される方法により上で定義される球状粒子の製造方法を実施するために上で定義される単環又は多環アルケンを使用することにも関する。
本発明は、本発明に記載される球状粒子の取得、及び当該粒子の物理化学的性質については以下の詳細な記載に支持されて記載されよう。
【実施例】
【００３１】
Ａ) 以下の式Ａ及びＢのマクロモノマーの合成
マクロモノマー(Ａ及びＢ)は、７０００ｇ/ｍｏｌのモル質量(Ｍn)を有するポリ(エチレン・オキシド)オリゴマーである。これらは、鎖の長さ及び官能基の制御を可能にする「リビング」アニオン重合から得られる。マクロモノマー（Ａ及びＢ）は、その１の末端でノルボルネニル・ユニット、メタセシスによる重合における高い反応性のために選択された部分、により官能基化され、そしてもう一方の末端でアルコール、酸、アミンなどの反応性官能基(Ａ)により、又は活性成分(インドメタシン)(Ｂ)により、分解性のブリッジ(酸無水物、エステル、アミドなど)を介して官能基化される。
【００３２】
１.α-ノルボルネニル-ω-カルボン酸-ポリ(エチレン・オキシド)；式Ａ
化学式：
【化４０】
[式中、ｎは、想定される適用の要件に応じて、５０〜３４０である。]
【００３３】
レファレンス： ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯＯＨ
合成スキーム：
【化４１】
【００３４】
合成方法：
まず最初にテトラヒドロフラン(ＴＨＦ)(２００ｍｌ)に溶解している５-ノルボルネン-２-メタノール(０.５ｍｌ)に、モル当量のジフェニルメチル・カリウムを加えることにより脱プロトン化する。得られたラジカルは、次に「リビング」の様式で(４８時間)、メタノール(１ｍｌ)を加えることにより活性中心が破壊されるまで、エチレンオキシド(２８ｍｌ)の重合を始める。得られたポリ(エチレン・オキシド)のアルコール官能基（Ａ０）は、ＴＨＦ(１５ｍｌ)に溶解しているＮａＨ(０.１７ｇ)で、Ａ０(１０ｇ)を脱プロトン化し、続いてブロモ酢酸(０.４２ｇ)を加えることにより、酸官能基へと変換されよう。生成物を、塩酸(１８ｍｌ、１Ｍ)で洗浄したのちに、エーテル中で沈殿させ、マクロモノマーＡを純粋な形態で得る。
【００３５】
２. α-ノルボルネニル-ω-インドメタシン-ポリ(エチレンオキシド)；式Ｂ
化学式：
【化４２】
[式中、ｎは、想定される適用の要件に応じて７０〜２００である]
【００３６】
レファレンス： ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯ(Ｏ)-ＩＮＤ
合成スキーム：
【化４３】
【００３７】
合成方法：
触媒量のジメチルホルムアミドの存在下で、ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯＯＨ(Ａ) (５.２ｇ)を、オキサリル・クロリド(０.０８ｍｌ)を溶解するＴＨＦ(２５ｍｌ)中で２４時間反応させることにより、（Ａ）の酸官能基を酸クロリド(Ａ２)へと変換させる。インドメタシン(０.６ｇ)及びトリエチルアミン(０.２４ｍｌ)を次にＡ２の溶液に加え、そして攪拌して１５時間置いた。エーテル中で沈殿させた後にマクロモノマーＢを得た。
【００３８】
３. ノルボルネンのインドメタシン誘導体
前述の反応において使用されるモノマーは、ノルボルネン(ＮＢＨ)又は活性成分により官能基化されたノルボルネン(ＮＢＤ)である。後者は、次に、エステル、無水物、アミドなどのタイプの加水分解性のブリッジを介して導入される。
【００３９】
インドメタシンにより官能基化されたノルボルネンの合成は以下に記載される。
【００４０】
化学式：
【化４４】
【００４１】
レファレンス：ＮＢＤ
合成スキーム：
【化４５】
【００４２】
合成方法
モノマーＮＢＤの合成
典型的な反応の間、オキサリル・クロリド(０.８７ｍｌ)を、インドメタシン(１.１ｇ)を溶解したジクロロメタン(２０ｍｌ)に加える。２時間反応させ、そして未反応のオキサリルクロリドを取り除いた後に、得られた化合物Ｉを次に、５-ノルボルネン-２-メタノール(０.３６ｍｌ)及びトリエチルアミン(０．８４ｍｌ)を含むジクロロメタン(２０ｍｌ)溶液中に加え、そして攪拌しながら１５時間４５℃で置いた。抽出により精製した後に、モノマーＮＢＤを得た(ρ＞９５％)。
【００４３】
Ｂ. 粒子の合成
本発明に記載される粒子は、分散溶媒(エマルジョン、ミニ-エマルジョン及びマイクロエマルジョン、分散、懸濁液)中で、重合性物質と反応性官能基又は活性成分(医薬、有機分子など)によりα,ω-官能基化されたマクロモノマーと、ビニルモノマー(シクロ-オレフィン)とを共重合することにより得られる。重合は、遷移金属により開始され、そして水又は有機溶媒(ジクロロエタン/エタノール)中で行われうる。マクロモノマーは、安定剤及び官能基化剤の役割を果たす。安定剤の能力において、マクロモノマーは、反応溶媒中でのポリマーの形成の間、当該ポリマーを球状ナノ粒子の形態で分散させることを可能にする。純粋な立体の視点から、安定化は、溶媒のｐＨ変化に感受性ではない。さらに、マクロモノマーによるラテックスの官能基化は、ラテックスの表面の反応性官能基の利用能を改善し、そしてその反応性を保持する。
【００４４】
重合の開始剤は、極性溶媒中で安定であるルテニウムに基づく複合体：ＲｕＣｌ3、ＲｕＣｌ2(ＰＣｙ3)2ＣＨＰｈ、及びそれらのホモログである。これらの条件において合成されるラテックスは、粒子を安定化するように働くポリ(エチレン・オキシド)グラフトを有するポリアルケナマー(polyalkenamer)鎖からなるであろう。
【００４５】
得られた粒子は、水性及び/又は油性溶媒中で安定である。その大きさは、使用される重合方法に応じて、数ナノメートル〜数マイクロメートルである。ナノ粒子は、ほぼ等しい大きさの球である。
【００４６】
合成スキーム
【化４６】
【００４７】
合成方法
マクロモノマーＡ及びＢは、モノマー(ＮＢＨ及び/又はＮＢＤ)の存在下で共重合させる。典型的な反応において、あらかじめ１４ｍｌのジクロロメタン/エタノール混合液(３５％/６５％)中に溶解された０.８ｇのモノマーと１ｇのマクロモノマー(０.２ｇのＡ及び０.８ｇのＢ)の溶液を、窒素雰囲気下で強く攪拌しながら、２０ｍｇの開始剤を含む１０ｍｌのジクロロメタン／エタノール(５０％／５０％)中に加えた。重合時間は１時間である。完全に均一な開始溶媒は、重合が行われるにつれて次第に濁ってくる。ガスクロマトグラフィーによる重合のモニタリングは、１分以内に、モノマーが完全に変換することを明らかにした。マクロモノマーＡ及びＢをラテックス中にとり込むことは完全である。
【００４８】
Ｃ.反応性活性成分の輸送用のバリアント
ラテックスは、前に記載されるように、活性成分(インドメタシン)を有する又は有さないシクロオレフィン(ノルボルネン)と、安定化ポリマー(ＮＢ-ＰＣＬ-ＰＯＥ-ＯＭｅ)との間の共重合により調製される。酸、酸クロリド、アルコール、アミン・タイプの反応性官能基により官能基化されているか又はされていない安定化ポリマーは、加水分解性のブリッジ、特に、以下のスキーム：
【化４７】
に記載される重合性官能基とエチレン・ポリオキシドとの間のε-カプロラクトン(ＰＣＬ)のユニットを有する。
【００４９】
この方法によると、粒子内に取り込まれ、そしてそれらに共有結合される活性成分の放出は、ラテックスの不安定化の第一ステップを必要とする。これは、安定鎖の塩析による外部刺激(ｐＨ、高温等)を介して達成されうる。
【００５０】
第二の反応時間において、活性成分により官能基化されたポリアルケナマーの直線状の鎖は、加水分解反応を引き起こし、そして活性成分を放出する(図１４)。
【００５１】
１) コポリマー、ポリ(カプロラクトン-β-エチレン・グリコール)-α-ノルボルネン-ω-メチル・エーテルＮＢ-ＰＣＬ-ＰＯＥ-ＯＭｅの合成方法
ポリ(カプロラクトン)α-ノルボルネニル(ＮＢ-Ｐｃａｐｒｏ)の製造
トリエチル・アルミニウム(１.３×１０-2モル)を、-８０℃に冷却されたトルエン(１００ｍｌ)に溶解された２-ヒドロキシメチル-５-ノルボルネン(１.３×１０-2ｍｏｌ)の溶液に滴下して加える。少しずつ室温に戻した後に、反応を２.５時間続ける。カプロラクトン(３.９ｍｏｌ)を次に、強く攪拌しながら反応溶媒に加える。反応１８時間後、５０ｍｌの塩酸(０.１Ｎ)を加える。冷ヘプタン中で中性のポリ(ε-カプロラクトン)α-ノルボルネニルが沈殿するまで洗浄した後、フリット(frit)Ｎｏ.４でろ過した。ヘプタンの残りを、真空内で１０時間熱することにより取り除く。得られたポリマーを、次にジオキサンを溶媒として３回凍結乾燥する。
【００５２】
ポリ(エチレン・グリコール)-α-カルボン酸-ω-メチルエーテルの製法
３.８９×１０-3ｍｏｌの無水コハク酸及び４.１０×１０-3モルのトリエチルアミンを、４５ｍｌの無水アセトンに溶解する。攪拌しながら、１５ｍｌの無水ＣＨ2Ｃｌ2に溶解したポリ(エチレン・グリコール)モノメチル・エーテル(６×１０-4モル)の溶液を滴下して加える。反応１６時間後、１ｍｌのメタノールを加える。ロータリー・エバポレーター中で濃縮した後に、ポリマーをエチルエーテル中で沈殿させた。さらに２回溶解／沈殿ステップを行う。ポリマーを強い吸引下に１０時間おき、全ての残った溶媒を取り除く。
【００５３】
コポリマー、ポリ(カプロラクトン-ｂ-エチレングリコール)-α-ノルボルネン-ω-メチル・エーテル(ＮＢ-Ｐｃａｐｒｏ-ＰＥＧ-ＯＭｅ)の製造
４×１０-4ｍｏｌのポリ(エチレングリコール)-α-カルボン酸-ω-メチルエーテルを、無水ＣＨ2Ｃｌ2に溶解する。塩化オキサリル(８×１０-4ｍｏｌ)を、当該溶液に加えて、５℃に冷却する。１５時間の反応後、過剰量の未反応の塩化オキサリル及びＣＨ2Ｃｌ2を減圧下で取り除く。得られた黄色残渣を次に４０ｍｌのジクロロメタンに溶解する。トリエチルアミン(４.３×１０-4ｍｏｌ)を加えた後に、α-ノルボルネニル・ポリ(カプロラクトン)を加える。ロータリーエバポレーターで濃縮した後に、ポリマーをエチルエーテルで沈殿する。溶解／沈殿のステップをさらに２回行う。ポリマーを減圧下に１０時間置いて、全ての残った溶媒を取り除く。
【００５４】
α-ノルボルネニル・ポリ(カプロラクトン)の合成を、以下のスキームに従って行う：
【化４８】
【００５５】
ポリ(ε-カプロラクトン-ｂ-エチレン・グリコール)-α-ノルボルネン-ω-メチル・エーテルの合成が、以下のスキームに従って行われる：
【化４９】
【００５６】
２)活性成分の放出
粒子が合成されると、我々は紫外可視分光法により、単にｐＨを下げることにより医薬を放出する可能性を確証した。得られた結果は、インドメタシンを少しずつ制御して放出することを確認した。さらにｐＨを３にすると、その８５％超が４８時間のうちに塩析することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１】式ＡのマクロモノマーのＲＭＮ1Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図２】式ＡのマクロモノマーのＲＭＮ13Ｃ ＮＭＲスペクトル。
【図３】ＴＨＦに溶解した式Ａのマクロモノマーの立体排除クロマトグラフィー。
【図４】式ＢのマクロモノマーのＲＭＮ1Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図５】ＴＨＦに溶解した式Ｂのマクロモノマーの立体排除クロマトグラフィー。
【図６】化合物ＮＢＤのＲＭＮ1Ｈ ＮＭＲスペクトル。
【図７】化合物ＮＢＤのＲＭＮ13Ｃ ＮＭＲスペクトル。
【図８】重合反応の間におけるＮＢへの及びＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯ(Ｏ)-ＩＮＤへの変換研究。時間に対する関数としてのノルボルネン(◆、ＮＢ)、及びマクロモノマー(●、ＮＢ-ＰＯＥ-ＣＯ(Ｏ)-ＩＮＤ)の漸進的変化。
【図９】モノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の走査型電子顕微鏡の画像。
【図１０】モノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の透過型電子顕微鏡の画像。
【図１１】モノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の、光の動的拡散によって得た大きさ及び粒度分布。
【図１２】ＴＨＦに溶解したモノマーＮＢＨ及び／又はＮＢＤの存在下でマクロモノマーＡ及びＢを共重合することにより得られる球状粒子の立体排除クロマトグラフィー。
【図１３】活性成分が粒子内に取り込まれ、かつ粒子に共有結合されている本発明に記載される球状粒子の描写。
【図１４】本発明に記載される球状粒子の不安定化、及び医薬の塩析の図。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１０ｎｍ〜１００μｍの直径を有する球状粒子であって、当該粒子が、単環アルケン(環を構成する炭素原子の数が約４〜１２個である)又は多環アルケン(環を構成する炭素原子の総数は約６〜２０個である)の重合により得られる同一又は異なる約３０〜１００００個のモノマーユニットを含むポリマー鎖により形成され、少なくとも１の当該モノマーユニットは、加水分解性のブリッジを介して当該モノマーユニットに場合により共有結合される以下の式(Ａ)：
【化１】
[式中、ｎは、約５０〜３４０、特に７０〜２００の整数であり、そしてＸは約１〜１０個の炭素原子を有するアルキル又はアルコキシ鎖を表し、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ2、Ｃ(Ｏ)Ｘ1型の反応性官能基を含み、ここでＸ1は、水素原子、ハロゲン原子、ＯＲ’、又はＮＨＲ’基を表し、ここでＲ’は、水素原子又は約１〜１０個の炭素原子を有する置換又は非置換の炭化水素鎖を表し、ここでＸは、ポリエンなどの光感受性官能基を含む基を表し、当該反応性官能基は、場合により活性成分又はタンパク質などの生体分子と結合で繋がっている]
で表されるエチレンポリオキシドを含むＲ鎖(当該Ｒ鎖は、当該モノマーに共有結合する)により置換される、前記球状粒子。
【請求項２】
前記モノマーユニットが、単環アルケンの重合に由来し、そして以下の式(Ｚ１)：
【化２】
[式中、Ｒ1は、飽和又は不飽和の２〜１０個の炭素原子を有する炭化水素鎖を表し、当該モノマーは、Ｒ鎖により場合により置換されるか、又は直接請求項１に定義されるＸ基により置換される]
のユニットであることを特徴とする、請求項１に記載の球状粒子。
【請求項３】
前記モノマー・ユニットの由来元の単環アルケンが：
以下の式(Ｚ１ａ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロブテンであり：
【化３】
以下の式(Ｚ１ｂ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンテンであり：
【化４】
以下の式(Ｚ１ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンタジエンであり：
【化５】
以下の式(Ｚ１ｄ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキセンであり：
【化６】
以下の式(Ｚ１ｅ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキサジエンであり：
【化７】
以下の式(Ｚ１ｆ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘプテンであり：
【化８】
以下の式(Ｚ１ｈ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクテンであり：
【化９】
以下の式(Ｚ１ｉ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクタポリエン、特にシクロオクタ-１,５-ジエンであり：
【化１０】
以下の式(Ｚ１ｊ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノネンであり：
【化１１】
以下の式(Ｚ１ｋ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノナジエンであり：
【化１２】
以下の式(Ｚ１ｌ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデセンであり：
【化１３】
以下の式(Ｚ１ｍ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデカ-１,５-ジエンであり：
【化１４】
以下の式(Ｚ１ｎ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロドデセンであり：
【化１５】
又は２,３,４,５-テトラヒドロオキセピン-２-イル・アセタート、シクロペンタデセン、パラシクロファン、フェロセノファン
であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の球状粒子。
【請求項４】
前記モノマーユニットが、多環アルケンの重合から生じ、そして以下の式(Ｚ２)：
【化１６】
[式中、
Ｒ2は、以下の式：
【化１７】
｛式中、
Ｙは、-ＣＨ2-、へテロ原子、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立してＨ、又は上で記載されるＲ鎖若しくはＸ基を表すか、又はそれらを有する炭素原子と一緒になって４〜８個の炭素原子を有する環を形成し、当該環は、場合により上で記載されるＲ鎖又はＸ基により置換され、
ａは単結合又は二重結合を表す｝
で表される環を表すか、又は
以下の式：
【化１８】
｛式中、
Ｙ’は、-ＣＨ2-、へテロ原子、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ’1及びＹ’2は、互いに独立して-ＣＨ2-、-Ｃ(Ｏ)基、-ＣＯＲ基、又は-ＣＯＸ基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環を表す]
で表されるユニットであり、又は以下の式(Ｚ３)：
【化１９】
[式中、
Ｒ3は、以下の式：
【化２０】
｛式中、
ｎ1及びｎ2は、互いに独立して、０又は１を表し、
Ｙ”は、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義される通りであり、
Ｙ”1及びＹ”2は、互いに独立して０〜１０個の炭素原子を有する炭化水素鎖を表す｝
で表される環、又は
以下の式：
【化２１】
｛式中、Ｙ”及びＹ”ａは、互いに独立して、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義される通りである｝
で表される環、又は、
以下の式：
【化２２】
｛式中、
Ｙ”及びＹ”ａは、互いに独立して、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは、上で定義される通りである｝
で表される環を表す]
で表されるユニットであることを特徴とする、請求項１に記載の球状粒子。
【請求項５】
前記モノマーユニットの由来元である多環アルケンが、以下の：
以下の式(Ｚ２ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロブテン環を含むモノマー：
【化２３】
以下の式(Ｚ２ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロペンテン環を含むモノマー：
【化２４】
以下の式(Ｚ２ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)ノルボルネン：
【化２５】
以下の式(Ｚ２ｄ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエン：
【化２６】
以下の式(Ｚ２ｅ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノルボルネン：
【化２７】
以下の式(Ｚ２ｆ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノルボルナジエン：
【化２８】
以下の式(Ｚ３ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンのダイマー：
【化２９】
以下の式(Ｚ３ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン：
【化３０】
以下の式(Ｚ３ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くテトラシクロデカジエン：
【化３１】
又はビシクロ[５.１.０]オクタ-２-エン、ビシクロ[６.１.０]ノナ-４-エンであることを特徴とする、請求項１又は４に記載の球状粒子。
【請求項６】
前記モノマーユニットの由来元である単環又は多環アルケンが、以下の：
式(Ｚ２ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くノルボルネン(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)、
式(Ｚ３ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くテトラシクロドデカジエン、
式(Ｚ３ｂ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン、
式(Ｚ３ａ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンのダイマー、
式(Ｚ１ｉ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクタ-１,５-ジエン
であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項７】
少なくとも０.５％〜１００％のモノマーユニットが、請求項１に定義されるＲ鎖により置換されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項８】
前記球状粒子が、以下の：
前記Ｒ鎖により置換された約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット(ここで当該Ｒ鎖はこれらのモノマーについて同一である)、及び
前記Ｒ鎖により置換された約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット(ここで当該モノマーのＲ鎖が、上記モノマーのＲ鎖とは異なっている)、及び／又は
前記Ｘ基により直接置換された約０.５〜９９.５％のモノマーユニット(ここで当該モノマーのＸ基が、前記モノマーのＲ鎖のＸ基と同一又は異なっている)、及び／又は
１％〜９９.５％の非置換モノマーユニット
を含み、上記様々なモノマーの全体の割合が１００％であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項９】
モノマーを置換する前記Ｒ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３２】
[式中、
ｎは上で定義されるとおりであり、そして
ＸはＨ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、-ＣＨ2-ＣＯＹを表し、
ここでＹは、活性成分又はタンパク質などの生体分子を表す]
により表されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１０】
前記鎖(単数又は複数)が、約１〜１０ユニットのε-カプロラクトン、又は-ＯＣ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｏ)ＯＣ(Ｏ)-、Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-基を有する鎖形態の中から選ばれる加水分解性のブリッジにより当該モノマーユニットに共有結合される式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含ことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１１】
約１〜１０ユニットのεーカプロラクトンを有する鎖形態の中から選ばれる加水分解性のブリッジに共有結合する式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含む前記Ｒ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３３】
[式中、ｔは、１〜１０の整数を表し、そしてＸは、Ｈ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、又は-ＣＨ2-ＣＯＹを表し、ここでＹは活性成分を表し、又はタンパク質などの生体分子を表す]
により表されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１２】
前記活性成分が、治療、化粧品、香水、又は塗料及び防汚被膜などの表面被覆に使用される分子から選ばれることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１３】
前記活性成分が、以下の治療カテゴリー：抗炎症剤、特にインドメタシン、抗癌治療剤、抗生物質、抗凝結薬、又は抗有糸分裂薬の中から特に選ばれる治療において使用される医薬であることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１４】
前記生体分子が、細胞内又は細胞外の生体標的、又は抗体若しくは他の任意の特異的リガンドに結合できるタンパク質の中から選ばれることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１５】
前記生体分子が、以下のタンパク質：アビジン、アルブミン、ＶＥＧＦなどの成長因子のなかから選ばれることを特徴とする、請求項１４に記載の球状粒子。
【請求項１６】
前記Ｘ基(単数又は複数)が、特に非経口形態で使用するため、医薬として許容される担体と組み合わせて医薬として活性な成分を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の球状粒子を含む医薬組成物。
【請求項１７】
前記Ｘ基(単数又は複数)が、特に乳濁液、クリームの形態で適用するため、場合により適切な担体と組み合わせて、化粧品において使用される活性成分を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載される球状粒子を含む化粧品組成物。
【請求項１８】
前記Ｘ基が、表面被覆のために使用される活性成分を、適切な担体と組み合わせて含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の球状粒子を含む、表面被覆用組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１５のいずれか一項に定義される球状粒子を製造方法であって、当該方法が、請求項１及び９〜１１に定義されるＲ鎖により置換される請求項１〜５のいずれか一項に定義される単環又は多環アルケンの重合ステップを含み、当該重合ステップが場合により以下の：
請求項１〜５のいずれか一項に定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は異なり、そして請求項１、９〜１１に定義されるＲ鎖により置換され、当該Ｒ鎖が前述の単環又は多環アルケンを置換する鎖と異なっている上記単環又は多環アルケン
及び／又は請求項１〜５のいずれか一項に定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は異なり、そして請求項１に定義されるＸ基により置換され、当該Ｘ基は、前述のアルケンのＲ鎖のＸ基と同一又は異なっている、上記単環又は多環アルケン
及び／又は請求項１〜５のいずれか一項に定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は異なり、当該アルケンが置換されていない上記単環又は多環アルケン
の存在下で行われることを特徴とし、当該重合が、特に以下のルテニウムに基づく複合体：ＲｕＣｌ3、ＲｕＣｌ2(ＰＣｙ3)2ＣＨＰｈの助けを借りて、極性又は非極性溶媒中で、反応の開始剤としてルテニウム、オスミウム、モリブデン、タングステン、イリジウム、チタンなどの第ＩＶ族、第ＶＩ族、又は第ＶＩＩ族の金属の中から特に選ばれる遷移金属複合体の存在下で攪拌して行われる、前記製造方法。
【請求項２０】
単環又は多環アルケンが、請求項１に定義されるＲ鎖又はＸ基により置換されるということを特徴とする、単環又は多環アルケン。但し、以下の式：
【化３４】
[式中、ｚは、１〜３４０の整数を表す]
で表されるアルケンを除く。
【請求項２１】
単環又は多環アルケンが、請求項３又は５に記載されるアルケンの中から選ばれることを特徴とする、請求項２０に記載の単環又は多環アルケン。
【請求項２２】
以下の式：
【化３５】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３６】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３７】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３８】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３９】
[式中、ｔは１〜１０の整数を表し、そしてｎは約５０〜３４０の整数を表す]
により特徴付けられる、請求項２０又は２１に記載の単環又は多環アルケン。
【請求項２３】
特に請求項１９に記載される方法により、請求項１〜１５のいずれか一項に定義される球状粒子の製造方法を実施するための、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載される単環又は多環アルケンの使用。
【請求項１】
１０ｎｍ〜１００μｍの直径を有する球状粒子であって、当該粒子が、単環アルケン(環を構成する炭素原子の数が約４〜１２個である)又は多環アルケン(環を構成する炭素原子の総数は約６〜２０個である)の重合により得られる同一又は異なる約３０〜１００００個のモノマーユニットを含むポリマー鎖により形成され、少なくとも１の当該モノマーユニットは、加水分解性のブリッジを介して当該モノマーユニットに場合により共有結合される以下の式(Ａ)：
【化１】
[式中、ｎは、約５０〜３４０、特に７０〜２００の整数であり、そしてＸは約１〜１０個の炭素原子を有するアルキル又はアルコキシ鎖を表し、ＯＨ、ハロゲン、ＮＨ2、Ｃ(Ｏ)Ｘ1型の反応性官能基を含み、ここでＸ1は、水素原子、ハロゲン原子、ＯＲ’、又はＮＨＲ’基を表し、ここでＲ’は、水素原子又は約１〜１０個の炭素原子を有する置換又は非置換の炭化水素鎖を表し、ここでＸは、ポリエンなどの光感受性官能基を含む基を表し、当該反応性官能基は、場合により活性成分又はタンパク質などの生体分子と結合で繋がっている]
で表されるエチレンポリオキシドを含むＲ鎖(当該Ｒ鎖は、当該モノマーに共有結合する)により置換される、前記球状粒子。
【請求項２】
前記モノマーユニットが、単環アルケンの重合に由来し、そして以下の式(Ｚ１)：
【化２】
[式中、Ｒ1は、飽和又は不飽和の２〜１０個の炭素原子を有する炭化水素鎖を表し、当該モノマーは、Ｒ鎖により場合により置換されるか、又は直接請求項１に定義されるＸ基により置換される]
のユニットであることを特徴とする、請求項１に記載の球状粒子。
【請求項３】
前記モノマー・ユニットの由来元の単環アルケンが：
以下の式(Ｚ１ａ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロブテンであり：
【化３】
以下の式(Ｚ１ｂ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンテンであり：
【化４】
以下の式(Ｚ１ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロペンタジエンであり：
【化５】
以下の式(Ｚ１ｄ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキセンであり：
【化６】
以下の式(Ｚ１ｅ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘキサジエンであり：
【化７】
以下の式(Ｚ１ｆ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロヘプテンであり：
【化８】
以下の式(Ｚ１ｈ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクテンであり：
【化９】
以下の式(Ｚ１ｉ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクタポリエン、特にシクロオクタ-１,５-ジエンであり：
【化１０】
以下の式(Ｚ１ｊ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノネンであり：
【化１１】
以下の式(Ｚ１ｋ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロノナジエンであり：
【化１２】
以下の式(Ｚ１ｌ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデセンであり：
【化１３】
以下の式(Ｚ１ｍ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロデカ-１,５-ジエンであり：
【化１４】
以下の式(Ｚ１ｎ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロドデセンであり：
【化１５】
又は２,３,４,５-テトラヒドロオキセピン-２-イル・アセタート、シクロペンタデセン、パラシクロファン、フェロセノファン
であることを特徴とする、請求項１又は２に記載の球状粒子。
【請求項４】
前記モノマーユニットが、多環アルケンの重合から生じ、そして以下の式(Ｚ２)：
【化１６】
[式中、
Ｒ2は、以下の式：
【化１７】
｛式中、
Ｙは、-ＣＨ2-、へテロ原子、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ1及びＹ2は、互いに独立してＨ、又は上で記載されるＲ鎖若しくはＸ基を表すか、又はそれらを有する炭素原子と一緒になって４〜８個の炭素原子を有する環を形成し、当該環は、場合により上で記載されるＲ鎖又はＸ基により置換され、
ａは単結合又は二重結合を表す｝
で表される環を表すか、又は
以下の式：
【化１８】
｛式中、
Ｙ’は、-ＣＨ2-、へテロ原子、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりであり、
Ｙ’1及びＹ’2は、互いに独立して-ＣＨ2-、-Ｃ(Ｏ)基、-ＣＯＲ基、又は-ＣＯＸ基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義されるとおりである｝
で表される環を表す]
で表されるユニットであり、又は以下の式(Ｚ３)：
【化１９】
[式中、
Ｒ3は、以下の式：
【化２０】
｛式中、
ｎ1及びｎ2は、互いに独立して、０又は１を表し、
Ｙ”は、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義される通りであり、
Ｙ”1及びＹ”2は、互いに独立して０〜１０個の炭素原子を有する炭化水素鎖を表す｝
で表される環、又は
以下の式：
【化２１】
｛式中、Ｙ”及びＹ”ａは、互いに独立して、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは上で定義される通りである｝
で表される環、又は、
以下の式：
【化２２】
｛式中、
Ｙ”及びＹ”ａは、互いに独立して、-ＣＨ2-、-ＣＨＲ-基、又は-ＣＨＸ-基を表し、ここでＲ及びＸは、上で定義される通りである｝
で表される環を表す]
で表されるユニットであることを特徴とする、請求項１に記載の球状粒子。
【請求項５】
前記モノマーユニットの由来元である多環アルケンが、以下の：
以下の式(Ｚ２ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロブテン環を含むモノマー：
【化２３】
以下の式(Ｚ２ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くシクロペンテン環を含むモノマー：
【化２４】
以下の式(Ｚ２ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)ノルボルネン：
【化２５】
以下の式(Ｚ２ｄ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエン：
【化２６】
以下の式(Ｚ２ｅ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノルボルネン：
【化２７】
以下の式(Ｚ２ｆ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導く７-オキサノルボルナジエン：
【化２８】
以下の式(Ｚ３ａ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンのダイマー：
【化２９】
以下の式(Ｚ３ｂ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン：
【化３０】
以下の式(Ｚ３ｃ)のモノマー・ユニットを含むポリマーを導くテトラシクロデカジエン：
【化３１】
又はビシクロ[５.１.０]オクタ-２-エン、ビシクロ[６.１.０]ノナ-４-エンであることを特徴とする、請求項１又は４に記載の球状粒子。
【請求項６】
前記モノマーユニットの由来元である単環又は多環アルケンが、以下の：
式(Ｚ２ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くノルボルネン(ビシクロ[２.２.１]ヘプタ-２-エン)、
式(Ｚ３ｃ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くテトラシクロドデカジエン、
式(Ｚ３ｂ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くジシクロペンタジエン、
式(Ｚ３ａ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くノルボルナジエンのダイマー、
式(Ｚ１ｉ)のモノマーユニットを含むポリマーを導くシクロオクタ-１,５-ジエン
であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項７】
少なくとも０.５％〜１００％のモノマーユニットが、請求項１に定義されるＲ鎖により置換されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項８】
前記球状粒子が、以下の：
前記Ｒ鎖により置換された約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット(ここで当該Ｒ鎖はこれらのモノマーについて同一である)、及び
前記Ｒ鎖により置換された約０.５％〜９９.５％のモノマーユニット(ここで当該モノマーのＲ鎖が、上記モノマーのＲ鎖とは異なっている)、及び／又は
前記Ｘ基により直接置換された約０.５〜９９.５％のモノマーユニット(ここで当該モノマーのＸ基が、前記モノマーのＲ鎖のＸ基と同一又は異なっている)、及び／又は
１％〜９９.５％の非置換モノマーユニット
を含み、上記様々なモノマーの全体の割合が１００％であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項９】
モノマーを置換する前記Ｒ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３２】
[式中、
ｎは上で定義されるとおりであり、そして
ＸはＨ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、-ＣＨ2-ＣＯＹを表し、
ここでＹは、活性成分又はタンパク質などの生体分子を表す]
により表されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１０】
前記鎖(単数又は複数)が、約１〜１０ユニットのε-カプロラクトン、又は-ＯＣ(Ｏ)-、-Ｃ(Ｏ)ＯＣ(Ｏ)-、Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-基を有する鎖形態の中から選ばれる加水分解性のブリッジにより当該モノマーユニットに共有結合される式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含ことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１１】
約１〜１０ユニットのεーカプロラクトンを有する鎖形態の中から選ばれる加水分解性のブリッジに共有結合する式(Ａ)のエチレンポリオキシドを含む前記Ｒ鎖(単数又は複数)が、以下の式：
【化３３】
[式中、ｔは、１〜１０の整数を表し、そしてＸは、Ｈ、-ＣＨ2-ＣＯＯＨ、-ＣＨ2-ＣＯＣｌ、又は-ＣＨ2-ＣＯＹを表し、ここでＹは活性成分を表し、又はタンパク質などの生体分子を表す]
により表されることを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１２】
前記活性成分が、治療、化粧品、香水、又は塗料及び防汚被膜などの表面被覆に使用される分子から選ばれることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１３】
前記活性成分が、以下の治療カテゴリー：抗炎症剤、特にインドメタシン、抗癌治療剤、抗生物質、抗凝結薬、又は抗有糸分裂薬の中から特に選ばれる治療において使用される医薬であることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１４】
前記生体分子が、細胞内又は細胞外の生体標的、又は抗体若しくは他の任意の特異的リガンドに結合できるタンパク質の中から選ばれることを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の球状粒子。
【請求項１５】
前記生体分子が、以下のタンパク質：アビジン、アルブミン、ＶＥＧＦなどの成長因子のなかから選ばれることを特徴とする、請求項１４に記載の球状粒子。
【請求項１６】
前記Ｘ基(単数又は複数)が、特に非経口形態で使用するため、医薬として許容される担体と組み合わせて医薬として活性な成分を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の球状粒子を含む医薬組成物。
【請求項１７】
前記Ｘ基(単数又は複数)が、特に乳濁液、クリームの形態で適用するため、場合により適切な担体と組み合わせて、化粧品において使用される活性成分を含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載される球状粒子を含む化粧品組成物。
【請求項１８】
前記Ｘ基が、表面被覆のために使用される活性成分を、適切な担体と組み合わせて含む、請求項１〜１５のいずれか一項に記載の球状粒子を含む、表面被覆用組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１５のいずれか一項に定義される球状粒子を製造方法であって、当該方法が、請求項１及び９〜１１に定義されるＲ鎖により置換される請求項１〜５のいずれか一項に定義される単環又は多環アルケンの重合ステップを含み、当該重合ステップが場合により以下の：
請求項１〜５のいずれか一項に定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は異なり、そして請求項１、９〜１１に定義されるＲ鎖により置換され、当該Ｒ鎖が前述の単環又は多環アルケンを置換する鎖と異なっている上記単環又は多環アルケン
及び／又は請求項１〜５のいずれか一項に定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は異なり、そして請求項１に定義されるＸ基により置換され、当該Ｘ基は、前述のアルケンのＲ鎖のＸ基と同一又は異なっている、上記単環又は多環アルケン
及び／又は請求項１〜５のいずれか一項に定義される１又は幾つかの単環又は多環アルケンであって、前述のものと同一であるか又は異なり、当該アルケンが置換されていない上記単環又は多環アルケン
の存在下で行われることを特徴とし、当該重合が、特に以下のルテニウムに基づく複合体：ＲｕＣｌ3、ＲｕＣｌ2(ＰＣｙ3)2ＣＨＰｈの助けを借りて、極性又は非極性溶媒中で、反応の開始剤としてルテニウム、オスミウム、モリブデン、タングステン、イリジウム、チタンなどの第ＩＶ族、第ＶＩ族、又は第ＶＩＩ族の金属の中から特に選ばれる遷移金属複合体の存在下で攪拌して行われる、前記製造方法。
【請求項２０】
単環又は多環アルケンが、請求項１に定義されるＲ鎖又はＸ基により置換されるということを特徴とする、単環又は多環アルケン。但し、以下の式：
【化３４】
[式中、ｚは、１〜３４０の整数を表す]
で表されるアルケンを除く。
【請求項２１】
単環又は多環アルケンが、請求項３又は５に記載されるアルケンの中から選ばれることを特徴とする、請求項２０に記載の単環又は多環アルケン。
【請求項２２】
以下の式：
【化３５】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３６】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３７】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３８】
[式中、ｎは約５０〜３４０の整数を表す]
【化３９】
[式中、ｔは１〜１０の整数を表し、そしてｎは約５０〜３４０の整数を表す]
により特徴付けられる、請求項２０又は２１に記載の単環又は多環アルケン。
【請求項２３】
特に請求項１９に記載される方法により、請求項１〜１５のいずれか一項に定義される球状粒子の製造方法を実施するための、請求項２０〜２２のいずれか一項に記載される単環又は多環アルケンの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２００８−５０３６３３（Ｐ２００８−５０３６３３Ａ）
【公表日】平成２０年２月７日（２００８．２．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１７３５６（Ｐ２００７−５１７３５６）
【出願日】平成１７年６月２１日（２００５．６．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００１５４６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００８３８７
【国際公開日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【出願人】（５０１０８９８６３）サントル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシェサイアンティフィク（セエヌエールエス） (173)
【出願人】（５０４２１７０７４）アンスティテュ ナシナル ドゥ ラ サントゥ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル−イ．エヌ．エス．ウ．エール．エム． (3)
【出願人】（５０６４２４２０９）ユニベルシテ ドゥ ボルドー アン (3)
【出願人】（５０６４２３８５５）エコール ナシオナル スペリウール ドゥ シミ エ ドゥ フィジック ドゥ ボルドー アン (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年２月７日（２００８．２．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年６月２１日（２００５．６．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００５／００１５４６
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００８３８７
【国際公開日】平成１８年１月２６日（２００６．１．２６）
【出願人】（５０１０８９８６３）サントル ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシェサイアンティフィク（セエヌエールエス） (173)
【出願人】（５０４２１７０７４）アンスティテュ ナシナル ドゥ ラ サントゥ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル−イ．エヌ．エス．ウ．エール．エム． (3)
【出願人】（５０６４２４２０９）ユニベルシテ ドゥ ボルドー アン (3)
【出願人】（５０６４２３８５５）エコール ナシオナル スペリウール ドゥ シミ エ ドゥ フィジック ドゥ ボルドー アン (2)
【Ｆターム（参考）】
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