本発明は、配列番号2のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる黄色ブドウ球菌の走化性阻害タンパク質(「CHIPS」)の生物活性を有するポリペプチド、またはCHIPSの生物活性を有するそのフラグメントもしくはバリアントであって、該フラグメントまたはバリアントが、配列番号1の野生型CHIPSタンパク質に対してK40E、D42V、N77H、K100R、K105R、N111Kおよび/またはG112Aのアミノ酸置換を保持するポリペプチドを提供する。ある実施形態において、ポリペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列からなる。本発明の関連する態様は、本発明のポリペプチドを含む医薬組成物を、それを作製する方法および使用する方法とともに提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号2のアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる黄色ブドウ球菌の走化性阻害タンパク質(「CHIPS」)の生物活性を有するポリペプチド、またはCHIPSの生物活性を有するそのフラグメントもしくはバリアントであって、バリアントが、配列番号1の野生型CHIPSタンパク質に対してK40E、D42V、N77H、K100R、K105R、N111Kおよび/またはG112Aのアミノ酸置換を保持するポリペプチド。
【請求項２】
C5aにより誘導される好中球の活性化を阻害できる、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項３】
C5aにより誘導される好中球の活性化を少なくとも10%、例えば少なくとも20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%および好ましくは100%阻害できる、請求項1または2に記載のポリペプチド。
【請求項４】
ポリペプチドの生物活性が、配列番号1によるポリペプチドの生物活性より大きい、請求項1から3のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項５】
ポリペプチドが、500アミノ酸長未満、例えば400、300、200、150、140、130、125、121、120、119、118、117、116、115、114、113、112、111、110、109、108、107、106、105、104、103、102、101、100、95、90、85、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、65、60、55、50、40、30以下のアミノ酸長未満である、請求項1から4のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項６】
70〜110アミノ酸長、例えば75〜90アミノ酸長である、請求項5に記載のポリペプチド。
【請求項７】
83アミノ酸長である、請求項6に記載のポリペプチド。
【請求項８】
配列番号2のアミノ酸配列のフラグメントもしくはそのバリアントを含むかまたはそれからなる、請求項1から7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列番号2のアミノ酸配列の少なくとも10、20、30、40、50、60、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81または82の隣接アミノ酸を含む、請求項8に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号2のアミノ酸配列のNおよび/もしくはC末端ならびに/または内部に挿入された1または複数のさらなるアミノ酸を含むかあるいはそれからなる、請求項1から9のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9、10、15または20のさらなるアミノ酸を含むかまたはそれからなる、請求項10に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号2のアミノ酸配列のバリアントもしくはそのフラグメントからなる、請求項1から11のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
バリアントが、配列番号2のアミノ酸配列と少なくとも60%の同一性、より好ましくは前記配列と少なくとも70%もしくは80%もしくは85%もしくは90%の同一性、最も好ましくは前記アミノ酸配列と少なくとも95%、96%、97%、98%もしくは99%の同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項12に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
バリアントが、1または複数のアミノ酸が保存的に置換された配列番号2のアミノ酸配列もしくはそのフラグメントを含むかまたはそれからなる、請求項12または13に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
1または複数の表面エピトープが改変された配列番号2によるポリペプチドのバリアントである、請求項12から14のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
配列番号1によるポリペプチドよりもヒトにおいて免疫原性が低い、請求項1から15のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
以下の特性の1または複数:
(a)1nM未満、好ましくは0.5nM以下の好中球遊走(走化性)の阻害についてのIC₅₀(実施例を参照されたい);
(b)野生型CHIPSについてのものの2%以下の血清IgG力価(実施例を参照されたい);
(c)野生型CHIPSのものの4倍未満のC5aR遮断についてのIC₅₀(実施例を参照されたい);
(d)50℃より高い、好ましくは60℃より高い融解温度T_m(実施例を参照されたい)
を示す、請求項1から16のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号2のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項1から17のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
N末端メチオニンを有する配列番号2によるポリペプチドからなる、請求項1から18のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
請求項1から19のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする核酸分子。
【請求項２１】
核酸分子が、DNA分子である、請求項20に記載の核酸分子。
【請求項２２】
請求項19または20に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項２３】
発現ベクターである、請求項22に記載のベクター。
【請求項２４】
pET系のベクターおよびpRSETからなる群より選択される、請求項22または23に記載のベクター。
【請求項２５】
請求項20もしくは21に記載の核酸分子または請求項22から24のいずれか一項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２６】
請求項20もしくは21に記載の核酸分子または請求項22から24のいずれか一項に記載のベクターを含む宿主細胞の集団を、ポリペプチドが発現される条件下で培養するステップと、そこからポリペプチドを単離するステップとを含む、請求項1から19のいずれか一項に記載のポリペプチドを生成するための方法。
【請求項２７】
請求項1から19のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項２８】
医薬で用いるための請求項1から19のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
補体5a(C5a)の生物活性の阻害において用いるための請求項1から19のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
C5a受容体の機能の阻害において用いるための請求項29に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
C5a受容体が、好中球、単球および/または内皮細胞上にある、請求項30に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
補体5a(C5a)により誘導される好中球の活性化の阻害において用いるための請求項29から31のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
炎症の治療において用いるための請求項29から32のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
急性反応性関節炎、急性移植拒絶、成人呼吸窮迫症候群(ARDS)、アルコール性肝炎、同種移植、アルツハイマー病、動脈硬化症、アルサス反応、喘息、アテローム動脈硬化症、アトピー性皮膚炎、細菌性髄膜炎、気管支原性肺癌、水泡性類天疱瘡、熱傷、心肺バイパス、循環器疾患、慢性気管支炎、慢性リンパ性白血病、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、接触性皮膚炎、クローン病、皮膚T細胞リンパ腫、嚢胞性線維症、皮膚疾患、中枢神経系の疾患、子宮内膜症、実験的アレルギー性脳脊髄炎(EAE)、実験的アレルギー性神経炎(EAN)、凍傷、胃癌、胃腸疾患、泌尿生殖器疾患、痛風、ヘリコバクター・ピロリ胃炎、血液透析、遺伝性血管浮腫、過敏性肺炎、特発性肺線維症、免疫複合体(IC)誘導血管炎、虚血性ショック、虚血性再灌流エピソード、虚血性再灌流傷害、関節症、(大)血管手術、金属熱、多発性硬化症、多系統臓器不全、重症筋無力症、心筋梗塞、膵炎、腹膜炎、胸膜肺気腫、心肺バイパス後(CPB)炎症、乾癬、反復性緊張外傷(RSI)、呼吸器疾患、関節リウマチ、敗血症、敗血症性ショック、副鼻腔炎、皮膚病、脳卒中、全身性エリテマトーデス(SLE)、移植、(外傷性)脳損傷、潰瘍性大腸炎、尿路感染症、血管漏出症候群、血管炎および異種移植からなる群より選択される疾患または状態の治療において用いるための請求項29から33のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
再灌流傷害の治療において用いるための請求項34に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
再灌流傷害が、急性心筋梗塞(AMI)、冠動脈バイパス移植(CABG)、脳卒中および/または臓器移植に付随する、請求項35に記載のポリペプチド。
【請求項３７】
急性呼吸窮迫症候群(ARDS)の治療において用いるための請求項34に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
以下の
(a)配列番号2によるポリペプチドをコードする1または複数の親のポリヌクレオチド分子を準備するステップと、
(b)1または複数の親のポリヌクレオチド分子をヌクレアーゼで消化して、ポリヌクレオチドフラグメントを作製するステップと、
(c)ステップ(b)で作製された前記ポリヌクレオチドフラグメントを互いに接触させるステップと、
(d)互いにアニールするフラグメントを増幅させて、1または複数の親のポリヌクレオチド分子によりコードされるものと比較して変更されたアミノ酸配列を有するバリアントCHIPSポリペプチドをコードする少なくとも1つのポリヌクレオチド配列を作製するステップと
を含む、請求項1から19のいずれか一項に記載のポリペプチドを生成するための方法。
【請求項３９】
ステップ(d)において生成された少なくとも1つのポリヌクレオチド配列を発現させ、野生型CHIPSタンパク質の生物活性について、得られたポリペプチドをスクリーニングするステップ(e)をさらに含む、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
野生型CHIPSタンパク質の生物活性が、C5aにより誘導される好中球の活性化を阻害する能力である、請求項39に記載の方法。
【請求項４１】
配列番号1によるポリペプチドと比べて低減した免疫原性について、得られたポリペプチドをスクリーニングするステップ(f)をさらに含む、請求項38から40のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
ステップ(a)における1または複数の親のポリヌクレオチド分子が、1本鎖である、請求項38から41のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
ステップ(b)におけるヌクレアーゼが、エキソヌクレアーゼである、請求項41または42に記載の方法。
【請求項４４】
ステップ(d)が、予め規定された変動性のオリゴヌクレオチドを加えるステップを含む、請求項38から43のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
ステップ(e)が、C5aRと結合する能力について、得られたポリペプチドを試験するステップを含む、請求項39から44のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載されるポリペプチド。
【請求項４７】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載される核酸分子。
【請求項４８】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載されるベクター。
【請求項４９】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載される宿主細胞。
【請求項５０】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載されるポリペプチドを生成するための方法。
【請求項５１】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載される医薬組成物。
【請求項５２】
明細書を参照して本出願中に実質的に記載されるポリペプチドの使用。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４（Ａ）】

【図２４（Ｂ）】

【図２５】

【公表番号】特表２０１２−５１４４６５（Ｐ２０１２−５１４４６５Ａ）
【公表日】平成２４年６月２８日（２０１２．６．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４４９１７（Ｐ２０１１−５４４９１７）
【出願日】平成２１年１１月３０日（２００９．１１．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００９／００２７８２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０７９３１４
【国際公開日】平成２２年７月１５日（２０１０．７．１５）
【出願人】（５０３２１１５２９）アリゲーター・バイオサイエンス・アーベー (4)
【Ｆターム（参考）】