新規化合物
【課題】本発明は、ローヤルゼリーに含まれる有用な新規化合物を単離同定することを目的とする。
【解決手段】下記の化合物Ａ〜化合物Ｄからなる群から選ばれるいずれかの化合物又はその塩：
化合物Ａ：４，１０‐Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐（Ｅ）‐２‐ｄｅｃｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物Ｂ：４，９‐Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐（Ｅ）‐２‐ｄｅｃｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物Ｃ：３，９‐Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物Ｄ：１０‐Ｈｙｄｒｏｘｙｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ １０‐Ｏ‐β‐Ｄ‐ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ。
【解決手段】下記の化合物Ａ〜化合物Ｄからなる群から選ばれるいずれかの化合物又はその塩：
化合物Ａ：４，１０‐Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐（Ｅ）‐２‐ｄｅｃｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物Ｂ：４，９‐Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐（Ｅ）‐２‐ｄｅｃｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物Ｃ：３，９‐Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物Ｄ：１０‐Ｈｙｄｒｏｘｙｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ １０‐Ｏ‐β‐Ｄ‐ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物又はその塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
ミツバチの生産物であるローヤルゼリーは、タンパク質、糖質、脂質をはじめ、アミノ酸、ビタミン、ミネラルを豊富に含む食品として注目されている。ローヤルゼリーの生理活性としては、血清コレステロールおよび脂質低下作用、成長促進作用、血圧降下作用、インスリン様作用等が知られており、抗菌作用および抗腫瘍作用を示すことも報告されている（例えば、非特許文献１、２及び３）。ローヤルゼリーは、これらの効果に基づき、疾病の予防、改善又は治療を目的とした健康食品及び機能性食品等の原料として実用化されつつある。
【０００３】
また、特許文献１は、ローヤルゼリー由来のデセン酸誘導体を開示する。
【特許文献１】特開２００５-３０６８４８
【非特許文献１】Ｔｏｗｎｓｅｎｄ， Ｇ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．， １９５９． Ｎａｔｕｒｅ， １８３，１２７０
【非特許文献２】Ｔｏｗｎｓｅｎｄ， Ｇ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．， １９５９． Ｐｒｏｃ． Ａｍ． Ａｓｓｏｃ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ３， ６９
【非特許文献３】Ｔｏｗｎｓｅｎｄ， Ｇ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．， １９６０． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０， ５０３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、ローヤルゼリーに含まれる物質の多くは、未だ単離同定されておらず、有用な新規化合物が含まれている可能性があると考えられている。
【０００５】
従って、本発明は、ローヤルゼリーに含まれる有用な新規化合物を単離同定することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ローヤルゼリーからの抽出液中に新規化合物が含まれることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
本発明は、以下の４種の化合物Ａ〜Ｄまたはその塩を提供する：
【０００８】
【化１】
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、滋養強壮作用、抗腫瘍作用、抗菌作用に関連した効果を有する新規化合物及びその塩を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の化合物は、化学的に合成する方法、天然ローヤルゼリーから物理的又は化学的性質を利用して単離する方法のいずれによっても得ることができる。これらの方法は、特に限定的ではなく、従来公知の方法を用いることができるが、例えば天然ローヤルゼリーから単離する場合には、以下のパーコレーション法を用いることができる。
【００１１】
パーコレーション法には、ローヤルゼリーの凍結乾燥粉末をクロマト管につめ、ＣＨＣｌ3を徐々に加えて抽出する工程、この抽出残渣にＣＨＣｌ3−アセトンを加えてＣＨＣｌ3−アセトンエキスを得、化合物Ａ〜Ｄで表される化合物を得る工程が含まれる。
【００１２】
本発明の化合物の塩として、ＣＯＯＨ基の塩が含まれる。該塩としては、生理的に許容されるものであれば特に限定されないが、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウム、バリウム等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；トリエチルアミン、トリエタノールアミン等の有機アミン塩；リジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。また、これらの塩を１種又は２種以上、組み合わせて用いても良い。これらの塩は、常法により当該化合物から容易に製造することができる。
【００１３】
本発明の化合物及びその塩を合成又は単離した後、当業者によって通常用いられる方法に従って、精製することができる。精製方法は、特に限定されるものではないが、例えば、抽出、クロマトグラフ、蒸留等が例示される
これらの精製工程を、複数回行っても良い。
【００１４】
さらに、本発明の化合物は、当業者によって通常使用される方法を用いて、化学的に合成することができ、必要であれば上記の精製工程を通して精製することができる。
【００１５】
また、本発明の化合物を、例えば、α−ヒドロキシデセン酸又はα−ヒドロキシデカン酸の産生能を有する微生物による発酵から得ることもできる。該微生物としては、天然に存在するものを用いてもよく、又は公知の遺伝子操作技術によって目的の化合物の産生が可能になった微生物を用いてもよい。微生物による発酵を利用した場合、該微生物を培養後、培養液を活性炭処理、ろ過等を行って除菌し、アルコール等の有機溶剤による析出、限外濾過による脱塩等の公知の精製方法によって精製することで本発明の化合物を得ることができる。
【００１６】
本発明の化合物は、その化学的構造から天然ローヤルゼリーに含まれる１０−ハイドロキシ−δ−２デセン酸と類似の効果が期待できる。すなわち、本発明の化合物を、滋養強壮作用、抗腫瘍作用、抗菌作用に関連した効果を期待して使用することができる。また、該化合物の塩についても、その化学的構造から上記の効果を期待して用いることができる。具体的な薬効としては、滋養強壮、病中病後、発熱性消耗性疾患、栄養障害などの栄養補給、虚弱体質の改善が挙げられる。
【００１７】
本発明の化合物及びその塩は、前述の効果を目的として、様々な用途に適用することができる。用途としては、例えば、食品、健康食品、機能性食品、サプリメント、特定用途食品、特定保健用食品、ペットフード、ペット用サプリメント等の食品組成物、治療薬、試薬(研究用、テストキット用)、トイレタリー（化粧品及び浴用化粧品）が挙げられる。
【００１８】
食品組成物としては、酸化防止剤、矯味矯臭剤、増粘剤、乳化安定剤、防腐剤、呈味剤、甘味剤、酸味剤等の任意成分と本発明の化合物を常法に従って処理することにより、本発明の食品組成物を製造することができる。
【００１９】
食品組成物に配合される該化合物又はその塩の配合割合は、該化合物又はその塩の期待される効果が得られるのであれば、特に制限されないが、通常、一回あたりの摂取量が０．０００１〜２０ｍｇ程度である。
【００２０】
該化合物を配合した食品組成物を製造する場合、ローヤルゼリーからの抽出過程で得られる、化合物Ａ〜Ｄ又は該化合物を含む画分を、それぞれ単独で、又は組み合わせて食品組成物の原料に加えることができる。
【００２１】
化合物Ａ〜Ｄを含む画分を食品組成物中に配合する場合、該画分を得る方法は、本発明の新規化合物としての所期の効果が得られれば特に限定されないが、例えば、ローヤルゼリー粉末をクロロホルム抽出した後、その残渣をクロロホルム−アセトンで抽出して残渣を得、さらにメタノールで抽出して得られたエキスからＯＤＳカラム等で脂溶性物質を除去し、濃縮する方法が挙げられる。
【００２２】
トイレタリーとしては、化粧料成分として一般に使用されている界面活性剤、油分、保湿剤、皮膜形成剤、色素、香料等の成分と任意に組み合わせて配合することにより、種々の形態、例えばクリーム、化粧乳液、化粧水、スキンコンディショナー、下地化粧料、口紅、リップクリーム、コンシーラー、アイカラー、ファンデーション、ネイルエナメル、洗顔剤、パック剤、マッサージ剤、クレンジング剤、美容液、ボディーソープ等とすることができる。また、毛髪化粧料成分として一般に使用されている界面活性剤、増粘剤、油ゲル化剤、金属酸化物、色素、香料等の成分と任意に組み合わせて配合することにより、毛髪化粧料一般、すなわちシャンプー、ヘアリンス、ヘアトリートメント、ヘアコンディショナー、パック剤等とすることもできる。
【００２３】
トイレタリーに配合される該化合物又はその塩の配合割合は、該化合物又はその塩の期待される効果が得られるのであれば特に制限されないが、通常、０．０００１〜１０重量％程度である。また、本発明の化合物Ａ〜Ｄをそれぞれ単独で、又は組み合わせてトイレタリーの原料に加えることができる。
【００２４】
本発明の化合物又はその塩を医薬組成物として用いる場合、該化合物の塩は、薬学的に許容される塩であることが好ましい。このような塩としては、該化合物のナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエチルアミンやトリエタノールアミン等の有機アミン塩、リジンやアルギニン等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。また、これらの塩を１種又は２種以上、組み合わせて用いても良い。
【００２５】
該医薬組成物として用いる場合の摂取量は、通常、成人１人１日あたり０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度である。
【００２６】
本発明の化合物又はその塩を含む医薬組成物は、賦形剤、担体または添加剤を含んでいても良い。賦形剤、担体および添加剤としては、通常使用され、かつ薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、その種類および組成は、適宜変更が可能である。
【００２７】
賦形剤としては、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム等があげられ、担体としては、滅菌水、生理食塩水、および各種緩衝溶液等があげられる。添加剤としては、粘稠剤、緩衝剤、保存剤または防腐剤等があげられる。
【００２８】
本発明の化合物は、天然ローヤルゼリーに含有される経口的に安全な物質であり、上記範囲を超えて摂取されても特に身体に悪影響を及ぼすものではない。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例によって限定されないことは言うまでもない。
実施例１
以下、ローヤルゼリー化合物Ａ〜Ｄを抽出する方法を示す。実施例１〜２を通して、減圧濃縮は、ロータリーエバポレーターを用いた。
［ローヤルゼリーからの化合物Ａ〜Ｄを含むエキスの抽出］
ローヤルゼリー（１ｋｇ）をパーコレーション法によりＣＨＣｌ３（３Ｌ）、ＣＨＣｌ３‐アセトン（１：１、３Ｌ）で順次抽出し、抽出液をそれぞれ減圧濃縮して、ＣＨＣｌ３エキス（５２．１ｇ）、ＣＨＣｌ３‐アセトンエキス（３６．１ｇ）を得た。
【００３０】
操作方法：ローヤルゼリー（１ｋｇ）をクロマト管（内径８．０×４５．０ｃｍ）に詰め、コックを開いたままローヤルゼリー全体が覆われるまで上方から徐々にＣＨＣｌ３を加えた。抽出液が滴下し始めたときコックを閉じ、室温下にて１日放置後、毎分３ｍＬの速度で抽出液を流出させた。さらに、ＣＨＣｌ３（計３Ｌ）を適時加えて流出を続け、得られた抽出液を減圧濃縮し、ＣＨＣｌ３エキス（５２．１ｇ）を得た。次に、抽出残渣にＣＨＣｌ３‐アセトン（１：１）を抽出残渣全体が覆われるまで上方から徐々に加え、抽出液が滴下し始めたときコックを閉じた。そのまま室温下にて１日放置後、毎分３ｍＬの速度で抽出液を流出させた。その後、ＣＨＣｌ３‐アセトン（１：１、計３Ｌ）を適時加えて流出を続け、得られた抽出液を減圧濃縮し、ＣＨＣｌ３‐アセトンエキス（３６．１ｇ）を得た。
【００３１】
ローヤルゼリーからの抽出方法を図１に示す。
【００３２】
実施例２
［化合物Ａ〜Ｄの単離方法］
実施例１で得られたＣＨＣｌ３‐アセトンエキス（３６．１ｇ）を図２に示した操作に従い、シリカゲルクロマトグラフィー（分離条件１参照）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ‐２０（分離条件２参照）、ＯＤＳ（分離条件３参照）に順に付し、順相薄層クロマトグラフィー及び逆相薄層クロマトグラフィーにおけるスポットの溶出パターンをモニターしながらフラクション（以下ｆｒ．）１からｆｒ．４に分画した。
【００３３】
ｆｒ．１（６８．８ｍｇ）を高速液体クロマトグラフィー（分離条件４参照）で精製し、化合物Ａ（１８．４ｍｇ、保持時間４３分、収率１．８４×１０−３％）、化合物Ｂ（１．３ｍｇ、保持時間３６分、収率１．３×１０−４％）を得た。
【００３４】
ｆｒ．２（４９９．３ｍｇ）にＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）を加え、溶解部を高速液体クロマトグラフィー（分離条件５参照）で精製し、化合物Ｃ（５．４ｍｇ、保持時間２６分、収率５．４×１０−４％）を得た。
【００３５】
ｆｒ．３（４２．６ｍｇ）を高速液体クロマトグラフィー（分離条件６参照）で精製し、化合物Ｄ（０．４ｍｇ、保持時間１９分、収率０．４×１０−４％）を得た。
【００３６】
化合物Ａの測定結果は以下の通りである。
―（１）油状、無色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：２０１．１１１８［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１７Ｏ４：２０１．１１２７）
１Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
１．１４〜１．５８（１０Ｈ、ｍ、ＣＨ２×５）
３．５４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ２‐１０）
４．２２（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐４）
５．９７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１５．６Ｈｚ、Ｈ‐２）
６．９２（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝４．８、１５．６Ｈｚ、Ｈ‐３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
２６．５、２６．９、３０．５、３３．６（Ｃ‐９）、３７．６（Ｃ‐５）、６３．０（Ｃ‐１０）、７１．６（Ｃ‐４）、１２０．９（Ｃ‐２）、１５２．９（Ｃ‐３）、１７０．０（Ｃ‐１）
【００３７】
化合物Ｂの測定結果は以下の通りである。
―（１）油状、無色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：２０１．１１１７［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１７Ｏ４：２０１．１１２７）
１Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
１．１４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ３‐１０）
１．３４〜１．５８（８Ｈ、ｍ、ＣＨ２×４）
３．７２（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐９）
４．２２（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐４）
５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５．６Ｈｚ、Ｈ‐２）
６．８９（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝４．８、１５．６Ｈｚ、Ｈ‐３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
２３．５（Ｃ‐１０）、２６．５、２６．８、３７．７（Ｃ‐５）、４０．１（Ｃ‐８）、６８．６（Ｃ‐９）、７１．６（Ｃ‐４）、１２１．７（Ｃ‐２）、１５２．２（Ｃ‐３）、１７０．６（Ｃ‐１）
【００３８】
化合物Ｃの測定結果は以下の通りである。
―（１）無晶形、無色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：２０３．１２９１［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１９Ｏ４：２０３．１２８３）
１Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
１．１４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ３‐１０）
１．３４〜１．４８（１０Ｈ、ｍ、ＣＨ２×５）
２．３９（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝８．４、１５．０Ｈｚ、Ｈ‐２ａ）
２．４８（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝４．８、１５．０Ｈｚ、Ｈ‐２ｂ）
３．７１（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐９）
３．９７（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
２３．５（Ｃ‐１０）、２６．７、２６．８、３０．７、３８．１（Ｃ‐４）、４０．２（Ｃ‐８）、４３．３（Ｃ‐２）、６８．６（Ｃ‐９）、６９．４（Ｃ‐３）、１７４．１（Ｃ‐１）
【００３９】
化合物Ｄの測定結果は以下の通りである。
―（１）無晶形、微黄色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：３４９．１８６９［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈ２９Ｏ８：３４９．１８６２）
１Ｈ‐ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ：
１．０７〜１．６７（１４Ｈ、ｍ、ＣＨ２×７）
２．３２（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、Ｈ２‐２）
３．６８（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐１０ａ）
３．９９（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐５′）
４．０７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．８、７．８Ｈｚ、Ｈ‐２′）
４．１１（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐１０ｂ）
４．２４〜４．２９（２Ｈ，ｍ、Ｈ‐３′、４′）
４．４１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．８、１１．４Ｈｚ、Ｈ‐６′ａ）
４．５９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４、１１．４Ｈｚ、Ｈ‐６′ｂ）
４．８７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、Ｈ‐１′）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ：
２５．２、２６．４、２９．３、２９．６、２９．６、２９．６、３４．１、３４．９、６２．９（Ｃ‐６′）、６９．８（Ｃ‐１０）、７１．８（Ｃ‐４′）、７５．３（Ｃ‐２′）、７８．６（Ｃ‐３′）、７８．６（Ｃ‐５′）、１０４．８（Ｃ‐１′）、１７４．０（Ｃ‐１）
【００４０】
本実施例において、化合物Ａ〜Ｄの物性の測定に使用した機器及び試薬類は以下の通りである。
［核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルの測定］
ＪＥＯＬ ＪＮＭ‐ＧＸ４００及びＥＣＡ‐６００ＳＮ核磁気共鳴装置（日本電子株式会社）を用いて測定した。ケミカルシフトの値は、ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（ＴＭＳ）を内部標準としたδ値（ｐｐｍ）で表示し、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表した。またシグナルの表示は、次の略語を用いた。（ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ、ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ、ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ、ｄｄ：ｄｏｕｂｌｅ ｄｏｕｂｌｅｔ、ｍ：ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ）
【００４１】
［質量分析（ＭＳ）の測定］
ＪＥＯＬ ＪＭＳ‐７００Ｔシステム（日本電子株式会社）を用い、ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳを、Ｇａｓ：Ｘｅ、マトリックス：ｔｒｉｅｈｔａｎｏｌａｍｉｎｅの条件で測定した。
【００４２】
［高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）］
ポンプにＪＡＳＣＯ ＰＵ‐２０８６（日本分光株式会社）を用い、検出器としてＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ５０４Ｒ型示差屈折計（ジーエルサイエンス株式会社）を用いた。
【００４３】
［薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）］
順相薄層クロマトグラフィー（順相ＴＬＣ）の条件は、以下の通りである。
薄層種：ＴＬＣ ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｓｈｅｅｔｓ Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４（ＭＥＲＣＫ社）
展開溶媒：ＣＨＣｌ３‐ＭｅＯＨ‐Ｈ２Ｏ ７：３：０．５
検出法：５％ Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨを噴霧後、加熱呈色させた。
【００４４】
逆相薄層クロマトグラフィー（逆相ＴＬＣ）の条件は、以下の通りである。
薄層種：ＴＬＣ ｐｌａｔｅｓ ＲＰ−１８ Ｆ２５４Ｓ（ＭＥＲＣＫ社）
展開溶媒：８０％ＭｅＯＨ
検出法：５％ Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨを噴霧後、加熱呈色させた。
【００４５】
化合物Ａ〜Ｄの分離条件は、以下の通りである。
［分離条件］
条件１
カラム種類：ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ＃７７３４（ＭＥＲＣＫ社）
カラム寸法：内径５．０×６０．０ｃｍ （７００ｇ）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＣＨＣｌ３‐ＭｅＯＨ‐Ｈ２Ｏ ７：３：０．５→６：４：１
流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４６】
条件２
カラム種類：Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ‐２０（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）
カラム寸法：内径２．０×４５．０ｃｍ （４０ｇ）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：１００％ ＭｅＯＨ
流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４７】
条件３
カラム種類：カラムクロマトグラフ用 Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ７５Ｃ１８‐ＯＰＮ（ナカライテスク株式会社）
カラム寸法：内径４．０×１５．０ｃｍ （８０ｇ）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＭｅＯＨ‐Ｈ２Ｏ １：９→３：７→５：５
→１００％ＭｅＯＨ
流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４８】
条件４
カラム種類：Ｃａｔ．Ｎｏ．２５４１５‐９６ Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ‐１８ ＧＰ ２５０‐４．６（５μｍ） Ｃｉｃａ‐Ｒｅａｇｅｎｔ（関東化学株式会社）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＭｅＯＨ‐Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（以下ＴＦＡ）‐Ｈ２Ｏ ２５：０．５：７５
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
【００４９】
条件５
カラム種類：（Ｃａｔ．Ｎｏ．５０２０‐０４６４４ Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ‐３ ４μｍ ４．６×１００ｍｍ（ジーエルサイエンス株式会社））×３本
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＣＨ３ＣＮ‐ＴＦＡ‐Ｈ２Ｏ ２５：０．５：７５
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
【００５０】
条件６
カラム種類：（Ｃａｔ．Ｎｏ．５０２０‐０４６４４ Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ‐３ ４μｍ ４．６×１００ｍｍ（ジーエルサイエンス株式会社））×３本
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＣＨ３ＣＮ‐ＴＦＡ‐Ｈ２Ｏ ２５：０．５：７５
流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】ローヤルゼリーからの抽出方法を示す。
【図２】化合物Ａ〜Ｄの単離方法を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物又はその塩に関する。
【背景技術】
【０００２】
ミツバチの生産物であるローヤルゼリーは、タンパク質、糖質、脂質をはじめ、アミノ酸、ビタミン、ミネラルを豊富に含む食品として注目されている。ローヤルゼリーの生理活性としては、血清コレステロールおよび脂質低下作用、成長促進作用、血圧降下作用、インスリン様作用等が知られており、抗菌作用および抗腫瘍作用を示すことも報告されている（例えば、非特許文献１、２及び３）。ローヤルゼリーは、これらの効果に基づき、疾病の予防、改善又は治療を目的とした健康食品及び機能性食品等の原料として実用化されつつある。
【０００３】
また、特許文献１は、ローヤルゼリー由来のデセン酸誘導体を開示する。
【特許文献１】特開２００５-３０６８４８
【非特許文献１】Ｔｏｗｎｓｅｎｄ， Ｇ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．， １９５９． Ｎａｔｕｒｅ， １８３，１２７０
【非特許文献２】Ｔｏｗｎｓｅｎｄ， Ｇ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．， １９５９． Ｐｒｏｃ． Ａｍ． Ａｓｓｏｃ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ３， ６９
【非特許文献３】Ｔｏｗｎｓｅｎｄ， Ｇ．Ｆ． ｅｔ ａｌ．， １９６０． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ２０， ５０３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、ローヤルゼリーに含まれる物質の多くは、未だ単離同定されておらず、有用な新規化合物が含まれている可能性があると考えられている。
【０００５】
従って、本発明は、ローヤルゼリーに含まれる有用な新規化合物を単離同定することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、ローヤルゼリーからの抽出液中に新規化合物が含まれることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
本発明は、以下の４種の化合物Ａ〜Ｄまたはその塩を提供する：
【０００８】
【化１】
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、滋養強壮作用、抗腫瘍作用、抗菌作用に関連した効果を有する新規化合物及びその塩を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の化合物は、化学的に合成する方法、天然ローヤルゼリーから物理的又は化学的性質を利用して単離する方法のいずれによっても得ることができる。これらの方法は、特に限定的ではなく、従来公知の方法を用いることができるが、例えば天然ローヤルゼリーから単離する場合には、以下のパーコレーション法を用いることができる。
【００１１】
パーコレーション法には、ローヤルゼリーの凍結乾燥粉末をクロマト管につめ、ＣＨＣｌ3を徐々に加えて抽出する工程、この抽出残渣にＣＨＣｌ3−アセトンを加えてＣＨＣｌ3−アセトンエキスを得、化合物Ａ〜Ｄで表される化合物を得る工程が含まれる。
【００１２】
本発明の化合物の塩として、ＣＯＯＨ基の塩が含まれる。該塩としては、生理的に許容されるものであれば特に限定されないが、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩；カルシウム、マグネシウム、バリウム等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩；トリエチルアミン、トリエタノールアミン等の有機アミン塩；リジン、アルギニン等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。また、これらの塩を１種又は２種以上、組み合わせて用いても良い。これらの塩は、常法により当該化合物から容易に製造することができる。
【００１３】
本発明の化合物及びその塩を合成又は単離した後、当業者によって通常用いられる方法に従って、精製することができる。精製方法は、特に限定されるものではないが、例えば、抽出、クロマトグラフ、蒸留等が例示される
これらの精製工程を、複数回行っても良い。
【００１４】
さらに、本発明の化合物は、当業者によって通常使用される方法を用いて、化学的に合成することができ、必要であれば上記の精製工程を通して精製することができる。
【００１５】
また、本発明の化合物を、例えば、α−ヒドロキシデセン酸又はα−ヒドロキシデカン酸の産生能を有する微生物による発酵から得ることもできる。該微生物としては、天然に存在するものを用いてもよく、又は公知の遺伝子操作技術によって目的の化合物の産生が可能になった微生物を用いてもよい。微生物による発酵を利用した場合、該微生物を培養後、培養液を活性炭処理、ろ過等を行って除菌し、アルコール等の有機溶剤による析出、限外濾過による脱塩等の公知の精製方法によって精製することで本発明の化合物を得ることができる。
【００１６】
本発明の化合物は、その化学的構造から天然ローヤルゼリーに含まれる１０−ハイドロキシ−δ−２デセン酸と類似の効果が期待できる。すなわち、本発明の化合物を、滋養強壮作用、抗腫瘍作用、抗菌作用に関連した効果を期待して使用することができる。また、該化合物の塩についても、その化学的構造から上記の効果を期待して用いることができる。具体的な薬効としては、滋養強壮、病中病後、発熱性消耗性疾患、栄養障害などの栄養補給、虚弱体質の改善が挙げられる。
【００１７】
本発明の化合物及びその塩は、前述の効果を目的として、様々な用途に適用することができる。用途としては、例えば、食品、健康食品、機能性食品、サプリメント、特定用途食品、特定保健用食品、ペットフード、ペット用サプリメント等の食品組成物、治療薬、試薬(研究用、テストキット用)、トイレタリー（化粧品及び浴用化粧品）が挙げられる。
【００１８】
食品組成物としては、酸化防止剤、矯味矯臭剤、増粘剤、乳化安定剤、防腐剤、呈味剤、甘味剤、酸味剤等の任意成分と本発明の化合物を常法に従って処理することにより、本発明の食品組成物を製造することができる。
【００１９】
食品組成物に配合される該化合物又はその塩の配合割合は、該化合物又はその塩の期待される効果が得られるのであれば、特に制限されないが、通常、一回あたりの摂取量が０．０００１〜２０ｍｇ程度である。
【００２０】
該化合物を配合した食品組成物を製造する場合、ローヤルゼリーからの抽出過程で得られる、化合物Ａ〜Ｄ又は該化合物を含む画分を、それぞれ単独で、又は組み合わせて食品組成物の原料に加えることができる。
【００２１】
化合物Ａ〜Ｄを含む画分を食品組成物中に配合する場合、該画分を得る方法は、本発明の新規化合物としての所期の効果が得られれば特に限定されないが、例えば、ローヤルゼリー粉末をクロロホルム抽出した後、その残渣をクロロホルム−アセトンで抽出して残渣を得、さらにメタノールで抽出して得られたエキスからＯＤＳカラム等で脂溶性物質を除去し、濃縮する方法が挙げられる。
【００２２】
トイレタリーとしては、化粧料成分として一般に使用されている界面活性剤、油分、保湿剤、皮膜形成剤、色素、香料等の成分と任意に組み合わせて配合することにより、種々の形態、例えばクリーム、化粧乳液、化粧水、スキンコンディショナー、下地化粧料、口紅、リップクリーム、コンシーラー、アイカラー、ファンデーション、ネイルエナメル、洗顔剤、パック剤、マッサージ剤、クレンジング剤、美容液、ボディーソープ等とすることができる。また、毛髪化粧料成分として一般に使用されている界面活性剤、増粘剤、油ゲル化剤、金属酸化物、色素、香料等の成分と任意に組み合わせて配合することにより、毛髪化粧料一般、すなわちシャンプー、ヘアリンス、ヘアトリートメント、ヘアコンディショナー、パック剤等とすることもできる。
【００２３】
トイレタリーに配合される該化合物又はその塩の配合割合は、該化合物又はその塩の期待される効果が得られるのであれば特に制限されないが、通常、０．０００１〜１０重量％程度である。また、本発明の化合物Ａ〜Ｄをそれぞれ単独で、又は組み合わせてトイレタリーの原料に加えることができる。
【００２４】
本発明の化合物又はその塩を医薬組成物として用いる場合、該化合物の塩は、薬学的に許容される塩であることが好ましい。このような塩としては、該化合物のナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、トリエチルアミンやトリエタノールアミン等の有機アミン塩、リジンやアルギニン等の塩基性アミノ酸塩等が好ましく例示できる。また、これらの塩を１種又は２種以上、組み合わせて用いても良い。
【００２５】
該医薬組成物として用いる場合の摂取量は、通常、成人１人１日あたり０．０００１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度である。
【００２６】
本発明の化合物又はその塩を含む医薬組成物は、賦形剤、担体または添加剤を含んでいても良い。賦形剤、担体および添加剤としては、通常使用され、かつ薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、その種類および組成は、適宜変更が可能である。
【００２７】
賦形剤としては、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム等があげられ、担体としては、滅菌水、生理食塩水、および各種緩衝溶液等があげられる。添加剤としては、粘稠剤、緩衝剤、保存剤または防腐剤等があげられる。
【００２８】
本発明の化合物は、天然ローヤルゼリーに含有される経口的に安全な物質であり、上記範囲を超えて摂取されても特に身体に悪影響を及ぼすものではない。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、これらの実施例によって限定されないことは言うまでもない。
実施例１
以下、ローヤルゼリー化合物Ａ〜Ｄを抽出する方法を示す。実施例１〜２を通して、減圧濃縮は、ロータリーエバポレーターを用いた。
［ローヤルゼリーからの化合物Ａ〜Ｄを含むエキスの抽出］
ローヤルゼリー（１ｋｇ）をパーコレーション法によりＣＨＣｌ３（３Ｌ）、ＣＨＣｌ３‐アセトン（１：１、３Ｌ）で順次抽出し、抽出液をそれぞれ減圧濃縮して、ＣＨＣｌ３エキス（５２．１ｇ）、ＣＨＣｌ３‐アセトンエキス（３６．１ｇ）を得た。
【００３０】
操作方法：ローヤルゼリー（１ｋｇ）をクロマト管（内径８．０×４５．０ｃｍ）に詰め、コックを開いたままローヤルゼリー全体が覆われるまで上方から徐々にＣＨＣｌ３を加えた。抽出液が滴下し始めたときコックを閉じ、室温下にて１日放置後、毎分３ｍＬの速度で抽出液を流出させた。さらに、ＣＨＣｌ３（計３Ｌ）を適時加えて流出を続け、得られた抽出液を減圧濃縮し、ＣＨＣｌ３エキス（５２．１ｇ）を得た。次に、抽出残渣にＣＨＣｌ３‐アセトン（１：１）を抽出残渣全体が覆われるまで上方から徐々に加え、抽出液が滴下し始めたときコックを閉じた。そのまま室温下にて１日放置後、毎分３ｍＬの速度で抽出液を流出させた。その後、ＣＨＣｌ３‐アセトン（１：１、計３Ｌ）を適時加えて流出を続け、得られた抽出液を減圧濃縮し、ＣＨＣｌ３‐アセトンエキス（３６．１ｇ）を得た。
【００３１】
ローヤルゼリーからの抽出方法を図１に示す。
【００３２】
実施例２
［化合物Ａ〜Ｄの単離方法］
実施例１で得られたＣＨＣｌ３‐アセトンエキス（３６．１ｇ）を図２に示した操作に従い、シリカゲルクロマトグラフィー（分離条件１参照）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ‐２０（分離条件２参照）、ＯＤＳ（分離条件３参照）に順に付し、順相薄層クロマトグラフィー及び逆相薄層クロマトグラフィーにおけるスポットの溶出パターンをモニターしながらフラクション（以下ｆｒ．）１からｆｒ．４に分画した。
【００３３】
ｆｒ．１（６８．８ｍｇ）を高速液体クロマトグラフィー（分離条件４参照）で精製し、化合物Ａ（１８．４ｍｇ、保持時間４３分、収率１．８４×１０−３％）、化合物Ｂ（１．３ｍｇ、保持時間３６分、収率１．３×１０−４％）を得た。
【００３４】
ｆｒ．２（４９９．３ｍｇ）にＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）を加え、溶解部を高速液体クロマトグラフィー（分離条件５参照）で精製し、化合物Ｃ（５．４ｍｇ、保持時間２６分、収率５．４×１０−４％）を得た。
【００３５】
ｆｒ．３（４２．６ｍｇ）を高速液体クロマトグラフィー（分離条件６参照）で精製し、化合物Ｄ（０．４ｍｇ、保持時間１９分、収率０．４×１０−４％）を得た。
【００３６】
化合物Ａの測定結果は以下の通りである。
―（１）油状、無色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：２０１．１１１８［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１７Ｏ４：２０１．１１２７）
１Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
１．１４〜１．５８（１０Ｈ、ｍ、ＣＨ２×５）
３．５４（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ２‐１０）
４．２２（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐４）
５．９７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝１．８、１５．６Ｈｚ、Ｈ‐２）
６．９２（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝４．８、１５．６Ｈｚ、Ｈ‐３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
２６．５、２６．９、３０．５、３３．６（Ｃ‐９）、３７．６（Ｃ‐５）、６３．０（Ｃ‐１０）、７１．６（Ｃ‐４）、１２０．９（Ｃ‐２）、１５２．９（Ｃ‐３）、１７０．０（Ｃ‐１）
【００３７】
化合物Ｂの測定結果は以下の通りである。
―（１）油状、無色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：２０１．１１１７［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１７Ｏ４：２０１．１１２７）
１Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
１．１４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ３‐１０）
１．３４〜１．５８（８Ｈ、ｍ、ＣＨ２×４）
３．７２（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐９）
４．２２（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐４）
５．９７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝１５．６Ｈｚ、Ｈ‐２）
６．８９（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝４．８、１５．６Ｈｚ、Ｈ‐３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
２３．５（Ｃ‐１０）、２６．５、２６．８、３７．７（Ｃ‐５）、４０．１（Ｃ‐８）、６８．６（Ｃ‐９）、７１．６（Ｃ‐４）、１２１．７（Ｃ‐２）、１５２．２（Ｃ‐３）、１７０．６（Ｃ‐１）
【００３８】
化合物Ｃの測定結果は以下の通りである。
―（１）無晶形、無色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：２０３．１２９１［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１０Ｈ１９Ｏ４：２０３．１２８３）
１Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
１．１４（３Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、Ｈ３‐１０）
１．３４〜１．４８（１０Ｈ、ｍ、ＣＨ２×５）
２．３９（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝８．４、１５．０Ｈｚ、Ｈ‐２ａ）
２．４８（１Ｈ，ｄｄ、Ｊ＝４．８、１５．０Ｈｚ、Ｈ‐２ｂ）
３．７１（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐９）
３．９７（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐３）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：
２３．５（Ｃ‐１０）、２６．７、２６．８、３０．７、３８．１（Ｃ‐４）、４０．２（Ｃ‐８）、４３．３（Ｃ‐２）、６８．６（Ｃ‐９）、６９．４（Ｃ‐３）、１７４．１（Ｃ‐１）
【００３９】
化合物Ｄの測定結果は以下の通りである。
―（１）無晶形、微黄色、無臭
―（２）同定条件
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳ ｍ／ｚ：３４９．１８６９［Ｍ−Ｈ］−（Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ１６Ｈ２９Ｏ８：３４９．１８６２）
１Ｈ‐ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ：
１．０７〜１．６７（１４Ｈ、ｍ、ＣＨ２×７）
２．３２（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、Ｈ２‐２）
３．６８（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐１０ａ）
３．９９（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐５′）
４．０７（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝７．８、７．８Ｈｚ、Ｈ‐２′）
４．１１（１Ｈ、ｍ、Ｈ‐１０ｂ）
４．２４〜４．２９（２Ｈ，ｍ、Ｈ‐３′、４′）
４．４１（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝４．８、１１．４Ｈｚ、Ｈ‐６′ａ）
４．５９（１Ｈ、ｄｄ、Ｊ＝２．４、１１．４Ｈｚ、Ｈ‐６′ｂ）
４．８７（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、Ｈ‐１′）
１３Ｃ‐ＮＭＲ（Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ：
２５．２、２６．４、２９．３、２９．６、２９．６、２９．６、３４．１、３４．９、６２．９（Ｃ‐６′）、６９．８（Ｃ‐１０）、７１．８（Ｃ‐４′）、７５．３（Ｃ‐２′）、７８．６（Ｃ‐３′）、７８．６（Ｃ‐５′）、１０４．８（Ｃ‐１′）、１７４．０（Ｃ‐１）
【００４０】
本実施例において、化合物Ａ〜Ｄの物性の測定に使用した機器及び試薬類は以下の通りである。
［核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルの測定］
ＪＥＯＬ ＪＮＭ‐ＧＸ４００及びＥＣＡ‐６００ＳＮ核磁気共鳴装置（日本電子株式会社）を用いて測定した。ケミカルシフトの値は、ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｓｉｌａｎｅ（ＴＭＳ）を内部標準としたδ値（ｐｐｍ）で表示し、結合定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で表した。またシグナルの表示は、次の略語を用いた。（ｓ：ｓｉｎｇｌｅｔ、ｄ：ｄｏｕｂｌｅｔ、ｔ：ｔｒｉｐｌｅｔ、ｄｄ：ｄｏｕｂｌｅ ｄｏｕｂｌｅｔ、ｍ：ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ）
【００４１】
［質量分析（ＭＳ）の測定］
ＪＥＯＬ ＪＭＳ‐７００Ｔシステム（日本電子株式会社）を用い、ｎｅｇａｔｉｖｅ ｉｏｎ ＨＲ‐ＦＡＢ‐ＭＳを、Ｇａｓ：Ｘｅ、マトリックス：ｔｒｉｅｈｔａｎｏｌａｍｉｎｅの条件で測定した。
【００４２】
［高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）］
ポンプにＪＡＳＣＯ ＰＵ‐２０８６（日本分光株式会社）を用い、検出器としてＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ５０４Ｒ型示差屈折計（ジーエルサイエンス株式会社）を用いた。
【００４３】
［薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）］
順相薄層クロマトグラフィー（順相ＴＬＣ）の条件は、以下の通りである。
薄層種：ＴＬＣ ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｓｈｅｅｔｓ Ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ６０ Ｆ２５４（ＭＥＲＣＫ社）
展開溶媒：ＣＨＣｌ３‐ＭｅＯＨ‐Ｈ２Ｏ ７：３：０．５
検出法：５％ Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨを噴霧後、加熱呈色させた。
【００４４】
逆相薄層クロマトグラフィー（逆相ＴＬＣ）の条件は、以下の通りである。
薄層種：ＴＬＣ ｐｌａｔｅｓ ＲＰ−１８ Ｆ２５４Ｓ（ＭＥＲＣＫ社）
展開溶媒：８０％ＭｅＯＨ
検出法：５％ Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨを噴霧後、加熱呈色させた。
【００４５】
化合物Ａ〜Ｄの分離条件は、以下の通りである。
［分離条件］
条件１
カラム種類：ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ＃７７３４（ＭＥＲＣＫ社）
カラム寸法：内径５．０×６０．０ｃｍ （７００ｇ）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＣＨＣｌ３‐ＭｅＯＨ‐Ｈ２Ｏ ７：３：０．５→６：４：１
流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４６】
条件２
カラム種類：Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ‐２０（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）
カラム寸法：内径２．０×４５．０ｃｍ （４０ｇ）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：１００％ ＭｅＯＨ
流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４７】
条件３
カラム種類：カラムクロマトグラフ用 Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ７５Ｃ１８‐ＯＰＮ（ナカライテスク株式会社）
カラム寸法：内径４．０×１５．０ｃｍ （８０ｇ）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＭｅＯＨ‐Ｈ２Ｏ １：９→３：７→５：５
→１００％ＭｅＯＨ
流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ
【００４８】
条件４
カラム種類：Ｃａｔ．Ｎｏ．２５４１５‐９６ Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ‐１８ ＧＰ ２５０‐４．６（５μｍ） Ｃｉｃａ‐Ｒｅａｇｅｎｔ（関東化学株式会社）
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＭｅＯＨ‐Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（以下ＴＦＡ）‐Ｈ２Ｏ ２５：０．５：７５
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
【００４９】
条件５
カラム種類：（Ｃａｔ．Ｎｏ．５０２０‐０４６４４ Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ‐３ ４μｍ ４．６×１００ｍｍ（ジーエルサイエンス株式会社））×３本
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＣＨ３ＣＮ‐ＴＦＡ‐Ｈ２Ｏ ２５：０．５：７５
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
【００５０】
条件６
カラム種類：（Ｃａｔ．Ｎｏ．５０２０‐０４６４４ Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ‐３ ４μｍ ４．６×１００ｍｍ（ジーエルサイエンス株式会社））×３本
カラム温度：２５℃（室温）
溶媒：ＣＨ３ＣＮ‐ＴＦＡ‐Ｈ２Ｏ ２５：０．５：７５
流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：示差屈折計
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】ローヤルゼリーからの抽出方法を示す。
【図２】化合物Ａ〜Ｄの単離方法を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化合物Ａ〜化合物Ｄからなる群から選ばれるいずれかの化合物又はその塩：
【化１】
【請求項１】
下記の化合物Ａ〜化合物Ｄからなる群から選ばれるいずれかの化合物又はその塩：
【化１】
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００８−１５０３４８（Ｐ２００８−１５０３４８Ａ）
【公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−３４２５３９（Ｐ２００６−３４２５３９）
【出願日】平成１８年１２月２０日（２００６．１２．２０）
【出願人】（５９８１６２６６５）株式会社山田養蜂場本社 (32)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年７月３日（２００８．７．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月２０日（２００６．１２．２０）
【出願人】（５９８１６２６６５）株式会社山田養蜂場本社 (32)
【Ｆターム（参考）】
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