毛包形成を増強するための表皮刺激
本発明は、毛包細胞の移植による毛髪形成の効率を改善する方法を特徴とする。この方法は、被験体の皮膚中の角化細胞を刺激することにより、移植毛包細胞（例えば、真皮乳頭細胞、真皮鞘細胞および／または外毛根鞘細胞）由来の毛髪誘導シグナルに対して、角化細胞の受容性を高めるための表皮刺激（ＥＳ）の使用を含む。一実施形態において、受容者の外皮表面に移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強するための方法が提供され、この方法は、表皮刺激（ＥＳ）によって該受容者の外皮表面から角化細胞を除去するステップ、および該ＥＳの前または後に、該受容者の外皮表面下に該毛包細胞を移植するステップを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真皮乳頭（ＤＰ細胞）などの毛包細胞（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ）の移植後の毛包形成に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＤＰ細胞などの培養毛包細胞の移植による毛の再生が、げっ歯類モデルにおいて実証されている。それに加え、こうした細胞は、ヒトに移植することにより、毛髪形成を誘発して脱毛を治療できるという原理の証拠が存在する。
【０００３】
移植できる他の型の毛包細胞には、真皮鞘（ｄｅｒｍａｌ ｓｈｅａｔｈ）（ＤＳ）細胞および／または外毛根鞘（ｏｕｔｅｒ ｒｏｏｔ ｓｈｅａｔｈ）（ＯＲＳ）細胞が挙げられる。
【０００４】
毛幹自体は、ＤＰ細胞の指示の下で特殊化した表皮細胞から形成される。
【０００５】
これは、１つの過程または２つの過程の組合せによって起こることが示唆されている。毛幹は、表皮細胞シグナル伝達過程に寄与することにより、小さい産毛を更新し、毛幹の肥厚を生じるＤＰ細胞によって形成し得る。いわゆる「毛包新生」は、ＤＰ細胞が、毛包間表皮角化細胞を動員し、該細胞を毛包表皮細胞に分化転換（ｔｒａｎｓ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ）させ、次いで分化細胞が毛包に発達し、毛幹を産生する場合に起こり得る。
【０００６】
したがって、この過程には、今のところ同定されていないシグナルを生じる活性な毛包（例えば、ＤＰ／ＤＳ／ＯＲＳ）細胞、およびそのシグナル（複数可）に適当に応答できるコンピテントな表皮細胞が必要である。
【０００７】
げっ歯類モデルにおける毛髪誘導の実証は、成功しているとは言え、非効率的であり、ヒトに細胞を移植する方法を直接教示するものではない。これは、両種間の皮膚構造の本質的差異による。ヒト被験体にＤＰ細胞を移植し、高度の毛髪形成を後に効率的に起こす方法が、必要とされている。
【０００８】
「テープ剥がし（ｔａｐｅ ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）」による角化細胞の増殖刺激が、実証されている。この方法は、粘着テープを用いて角化細胞の外部角質層を除去し、角化細胞の下層における細胞分裂を刺激する（参考として本明細書に援用される、非特許文献１を参照のこと）。
【０００９】
「テープ剥がし」は、毛球が除いた毛髪に依然として付着しているように、成長期の無損傷毛髪を１つまたは複数のドナー領域から除去するためにも使用されている（参考として本明細書に援用されるＧＨＯ’ＳＴ ＨＯＬＤＩＮＧ Ｂ．Ｖ．：特許文献１）。
【００１０】
ＤＰ細胞の移植と同時に起こる創傷治癒は、マウスにおける毛髪形成を刺激するであろうと文献中に述べられている（参考として本明細書に援用される、非特許文献２）。しかし、創傷形成（針で切傷し、表皮下にトンネルを作ること）に使用する当該方法は、ヒト被験体に使用するには適当ではない。同様に、全層切除創傷およびメス切傷による創傷形成も、適切ではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第９８／４７４７１号パンフレット
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｐｏｔｔｅｎら、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ（２０００年）３３巻（４号）：２３１〜２４６頁
【非特許文献２】ＭｃＥｌｗｅｅら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２００３年）１２１巻：１２１２６７〜１２１２７５頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、毛包細胞の移植による毛髪形成の効率を改善する方法である。
【００１４】
本発明によれば、受容者の外皮表面中に（例えば、毛髪を生成する上皮細胞に密接して）移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強する方法が提供され、この方法は、表皮刺激（ＥＳ）によって受容者の外皮表面から角化細胞を除去するステップ、およびＥＳの前または後に、受容者の外皮表面下に毛包細胞を移植するステップを含む。
【００１５】
別の態様では、受容者の外皮表面中に（例えば、毛髪を生成する上皮細胞に密接して）移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強する方法が提供され、ここで、ＥＳが、外皮表面から角化細胞を除去することにより達成され、この細胞が、ＥＳを実施する前または後に、外皮表面下に移植される。
【００１６】
この方法は、被験体の皮膚内角化細胞を刺激するためにＥＳを使用することにより、角化細胞が、移植毛包細胞に由来する毛髪誘導シグナルを受容し易くする。驚くべきことに、この方法は、（ｉ）毛包形成の増強、および（ｉｉ）発毛の改善を生じる。
【００１７】
本発明による毛包形成の増強は、ＥＳを用いない移植と比較して、毛包細胞の移植後に形成される毛髪が、多くおよび／または濃くなり得る。
【００１８】
理論に拘束されずに、本発明者らは、活発に増殖している角化細胞が、移植した真皮乳頭（ＤＰ）細胞および／または真皮鞘（ＤＳ）細胞および／または外毛根鞘（ＯＲＳ）細胞による毛髪誘導をより受容し易いと考えている。増殖中の角化細胞は、休止中の角化細胞より動き易い（表皮中で運動し、移動できる）。角化細胞の増殖および移動は、毛髪形成の特質である。
【００１９】
本発明によれば、ＥＳは、皮膚表面から一部の角化細胞を除去することにより達成される。「角化細胞の除去」という用語は、角化細胞層の完全な除去を必要としない。
【００２０】
ＥＳは、細胞移植の直前に行うことができ、または移植後まもなく行うことができる（例えば、数日以内から１週間後まで）。
【００２１】
好ましくは、ＥＳは、移植細胞を受け容れようとする（または最近受け容れた）被験体の頭皮上に実施される。他の皮膚領域をＥＳで処置して、毛包の形成を増強し、発毛を改善してもよい。
【００２２】
ＥＳの一法は、テープ剥がしによる。この方法は、皮膚表面から角化細胞を除去するために、粘着テープ（例えば、Ｇｏｒｉｌｌａ ｔａｐｅＲＴＭまたはＳｅｌｌｏｔａｐｅＲＴＭ）を使用する。特に、テープ剥がしに粘着性のテープまたはパッチを用いて、角質層（死んだ角化細胞で形成される外皮層）を除去し、ＥＳを生じ得る。
【００２３】
テープ剥がしに代わる方法は、剥離（「皮膚擦傷法」と称することもある）であり、その方法では、研磨材（例えば、紙やすり、またはＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｌｅｃｔｒｏ−Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｔｉｐ Ｃｌｅａｎｅｒ［Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＪ、製品コード：ＵＮ５８２００］のような手術用チップクリーナーなどの類似品）を用いて皮膚を剥離する。皮膚擦傷法は、外部側の角化細胞層（例えば、角質層および／または角質層下にある他の角化細胞層、（順に）淡明層、顆粒層、有棘層および／または基底層などを含む）を除去する。これによって、テープ剥がしと同じ結果、即ち、失われた層に代わって補填するような角化細胞の増殖および移動が達成される。
【００２４】
ＥＳを達成する更なる代替手段は、化学的表皮剥離、および創傷形成（例えば、引掻き、掻き取りまたは削り取り）による皮膚表面の小損傷である。
【００２５】
本発明は、厳密に美容目的のために行ってもよい。法律上許されれば、本発明は、医療処置の一部であってもよい。
【００２６】
本発明の方法は、ＤＰ細胞の移植によって行い得る。
【００２７】
移植できる他の型の毛包細胞には、ＤＳ細胞および／またはＯＲＳ細胞が挙げられる。
【００２８】
ＤＰ細胞および／またはＤＳ細胞および／またはＯＲＳ細胞の移植以外に、他の毛包細胞（例えば、追加の角化細胞）も細胞混合物に添加して、毛髪形成の効率を改善することができよう。
【００２９】
好ましい実施形態では、毛包細胞（例えば、ＤＰ細胞、ＤＳ細胞および／またはＯＲＳ細胞）は、例えば、共に参考として本明細書に援用される米国特許出願第２００３／０１６１８１５号および同第２００５／０１４７６５２号において教示される方法を用いて、ヒトに移植される。例えば、毛包細胞は、反復ディスペンサー（例えばＧａｓｔｉｇｈｔ（登録商標）ＬＴシリンジなどのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジと共に使用される、例えばＰＢ６００−１反復ディスペンサー）を取り付けたシリンジ（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジ）を用いて移植し得る。
【００３０】
本発明の具体的実施形態を、限定せずに、添付の図を参照しながら以下に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の方法において送達デバイスと共に使用する、先行技術の反復ディスペンサーの透視図である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
（実施例１）毛包形成の増強
先ず、剥がそうとする領域から毛髪を刈り取る、または剃り取る。次いで、この領域を清浄にして、汚れおよび油を除くと共に刈り込んだ毛髪を除く。テープ剥がしは、テープ（好ましくは、Ｇｏｒｉｌｌａ ｔａｐｅＲＴＭまたはＳｅｌｌｏｔａｐｅＲＴＭなどの皮膚に強く粘着する粘着剤の付いたテープ）の粘着面を皮膚に当てることにより行う。そのテープを、急激に引張ることにより除く。この過程は、テープが清浄に見え、皮膚から見掛上まったく物質が除かれなくなるまで、反復する。普通、皮膚が赤くなり、ひりひりしているように見える。
【００３３】
テープ剥がしは、細胞移植の直前に行うことができ、または移植後まもなく行うことができる（例えば、数日以内から１週間後まで）。
【００３４】
（実施例２）毛包形成の増強に対するテープ剥がし法と皮膚擦傷法との比較
方法および材料
必要な材料
以下の詳細な方法説明で言及する材料に加え、制御送達の改良品を備えたＨａｍｉｌｔｏｎシリンジ（例えば、米国特許出願第２００３／０１６１８１５号および第２００５／０１４７６５２号に例示され、図１に示されるような「制御送達デバイス」）、針（使用者によって決定される）およびネジ回しが必要であった。
【００３５】
図１に描出した制御送達の改良品は、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＰＢ６００−１反復ディスペンサー（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＵＳ）であり、これは、プランジャー（２）および目盛ロッド（３）を有するディスペンサーアセンブリー（１）を備える。目盛ロッドは、プランジャーアーム（４）に取り付けられ、該アームは、プランジャーアームネジ（５）によってＨａｍｉｌｔｏｎシリンジのプランジャー（輪郭９で示す）に固定する。フランジネジ（６）は、シリンジの外筒（輪郭８で示す）をディスペンサーアセンブリー中に固定する。シリンジおよびディスペンサーアセンブリーの連結部は、Ｏリング（７）で密封する。
【００３６】
患者
患者グループは、男性型脱毛症を示す志願者からなっていた。実験開始の８週前に、自家ＤＰ細胞を培養するために、各患者から頭皮生検を採取した。注入プロトコール（下記を参照）の後、毛髪成長を１、６、１２、２４、３６および４８週にモニターし、記録した。
【００３７】
ＩＣＸ−ＴＲＣ送達デバイスの準備
ポリプロピレンチューブ中にＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物を含有し、プラスチック外袋中に密封したバイアルを開放し、棚に入れた適当な媒体と共に、使用するまで冷蔵庫に保存した。ＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物は、ＨｙｐｏｔｈｅｒｍｏｓｏｌＲＴＭ中のヒト自家ＤＰ細胞の２００μｌ懸濁物であった。各バイアルは、各患者から培養した４×１０７個ＤＰ細胞／ｍｌの原液から調製した、約８×１０６個のＤＰ細胞を含有していた。
【００３８】
送達デバイスに針を取り付ける前に、媒体でシリンジを２回満たし、分注することにより、その注入デバイスを前処理した。ＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物がバイアルの底に沈降した場合、細胞を再懸濁させるために、バイアルを振り落とし、または「はじいた」。図１を参照すると、注入デバイス上のプランジャー先端が、目盛ロッド（３）を完全に伸ばしたとき、５０μｌの印より僅かに上に位置していることを確実にするためにチェックした。プランジャーの位置が不適正な場合、プランジャーアームネジ（５）を滅菌ネジ回しで緩め、プランジャーを再配置し、そのネジをネジ回しで再び締めた。
【００３９】
未だ針を取り付けないまま、シリンジにＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物を注意深く満たした。満たした後のシリンジに適当な針を取り付け、針の先端を上に向けて、ＩＣＸ−ＴＲＣの一定の量が針先端に丁度現れ始めるまで、ディスペンスボタンを押し入れた。針のハブはおよそ３０〜３５μｌの容量を有する。
【００４０】
針を取り付けた状態で、シリンジ外筒がＩＣＸ−ＴＲＣを４５〜５０μｌ含有するようにシリンジを満たした。ＩＣＸ−ＴＲＣは、バイアルを開放してから１５分以内に使用した。
【００４１】
針が鈍らになったとき、該デバイスに新しい針をあてがい、デバイスを再び前処理した後に続けた。
【００４２】
ＩＣＸ−ＴＲＣの分注および取扱い手順
（ｉ）ＩＣＸ−ＴＲＣ注入用の頭皮の準備
ＩＣＸ−ＴＲＣパッケージを開放する前に、目標処置領域を準備した。手術前に、生検創傷を乱さないように注意を払って、手洗い消毒液（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｓｃｒｕｂ）で頭皮を注意深く洗浄し、清潔なタオルで半乾燥にした。必要であれば、手順中の鎮静のために経口用ジアゼパムを投与した。
【００４３】
１ｃｍ２の区画注入部位を同定するために、入れ墨（小さい黒色点）を用いた。次いで、各被験体について選択した領域、ならびに領域の位置およびサイズを症例記録表（ＣＲＦ）の図上に記録し、写真を撮った（下記を参照）。
【００４４】
ゲンチアナバイオレットのペンを用いて、１ｃｍ２の円（中心に入れ墨点のある）を打点し、下記に記載するように半々に分割した。
【００４５】
次いで、選択領域を囲む頭皮中にアドレナリン２０万分の１を含む０．５〜１％リグノカインを注射することにより、その領域を麻酔し、穿刺試験を行って、その領域が麻痺していることを確実にした。
【００４６】
適用できる場合には、ＩＣＸ−ＴＲＣ細胞の注入直前に、下記のように選択領域に表皮刺激を施した。
【００４７】
使用時には、存在するチューブ数、媒体の色、包装などをＣＲＦ中に記録した。
【００４８】
ＩＣＸ−ＴＲＣの滅菌状態に疑義がある場合、またはパッケージから材料を取り出す際もしくはそれを取り扱う際に、滅菌状態が危うい場合は、それを使用しなかった。
【００４９】
（ｉｉ）ＩＣＸ−ＴＲＣの送達／分注
ＩＣＸ−ＴＲＣ包装の開放が許容できることを確認する際に、ＩＣＸ−ＴＲＣをパッケージから取り出すために、以下の指示を適用した。
【００５０】
消毒し、手袋をはめた手で密封プラスチック外袋を開放し、ポリプロピレンチューブを取り出し、滅菌野の中へ移した。チューブスタンドにチューブを置く前に、チューブを激しく振って、できる限り多くのＩＣＸ−ＴＲＣをチューブの底まで動かした。
【００５１】
チューブの蓋を静かにネジ開け、前記のように注入デバイスを前処理し、装填した。
【００５２】
次いで、ＩＣＸ−ＴＲＣを選択した処置領域中に注入した。
【００５３】
以下の注入法を用いた（すべての注入が２ｍｍを超える深さにならないことを確実にした）。
【００５４】
区画注入領域の右半分では、２７Ｇ−４ｍｍ針を用いた５０回の注入を含む１段階毛包間注入手順を行った。
【００５５】
区画注入領域の左半分では、以下３通りの注入手順のうち１つを行った：
（１）２０Ｇまたは２１Ｇ針で孔あけ後、２７Ｇ−４ｍｍ針を用いた注入の２段階による５０×１μｌ注入；
（２）２７Ｇ−４ｍｍ針を用いた現存毛包中への５０×１μｌ毛包内注入；
（３）２７Ｇ−１／２インチ針を用いた１×５０μｌ皮内注入。
【００５６】
注入手順を以下により詳細に説明する。
【００５７】
注入手順
１段階毛包間について：
Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジおよび２７Ｇ−４ｍｍ針を用いて、注意深く毛包をすべて回避しながら針を頭皮に押し込んだ。ディスペンサーボタンを押して細胞を送入した後、余分な吸引をしないようにゆっくり針を引き抜いた。注入する際に注入デバイスを保持しながら、手で頭皮上に押し下げることは、皮膚を圧迫し、以前の注入から細胞を搾り出す恐れがあるので、避けるようにした。拭き取りまたは軽い叩き当ても避けた。出血／浸出が新たな注入に流入しないように、底部から上方に作業することが好ましかった。拭き取り前に待つことは、細胞を凝血などにより針跡中に固定できるので、好ましかった。プランジャーが進んでいることを保証するために、該デバイスを定期的にチェックした。必要があれば、そのネジを締め付けた。このチェックは、開始時および定期的に（例えば、再充填の都度その後に）行った。
【００５８】
２段階毛包間について：
鋭い針（２０Ｇまたは２１Ｇ）を用いて孔をあけ、約２ｍｍの深さに制御するために、斜めになった部分（ｂｅｖｅｌ）の上端までに挿入を留めた。始めに孔を作り、その後上記の１段階毛包間技術を用いた。上記の１段階毛包間法の鈍らな針の方が、孔へ挿入し易かったので、これを使用した。
【００５９】
１段階毛包内（現存毛包）について：
これは、針を現存ミニチュア毛包に直接挿入する以外、１段階毛包間法と同じであった。これは、鈍らな針を用いて最も容易に成し遂げられた。一部の患者では、ミニチュア化毛包の密度が、目標領域で５０回注入を行うには不十分であった。できる限り多数回（５０回まで）の注入を行い、注入回数を記録した。
【００６０】
１段階皮内について：
針を注入領域の中線上にあって円端部にある点に挿入した。針の先端が、中線と９０°をなす半径の中間点に達するまで、針を皮内に押し込んだ。針の輪郭が皮膚の下に見えるように、皮膚の下にできる限り浅くおよそ０．５ｃｍ針を挿入した。プランジャーを押し下げると、抵抗があり、皮膚は白くなり、小水胞が出現した。プランジャー（ディスペンサーボタンではない）を完全に押し下げて、シリンジの中味全５０μｌを１回の注入で注入した。
【００６１】
すべての注入を頭の頂部の選択領域内に行った。注入の回数、深さおよび角度をＣＲＦ上に書き記し、記録した。それ以外に、注入を行うのに要した時間、およびチューブ数も記録した。かゆみ、浮腫および紅斑の存在を含む皮膚の質も、記録した。
【００６２】
処置直後に、被験体が手順中の疼痛を感じたか否かを記録し、および起こった出血量も記録した。
【００６３】
使用しなかったＩＣＸ−ＴＲＣは、適切に処分した。
【００６４】
次の薬剤：シプロフロキサシン（点滴薬）、ムピロシン（局所薬）および硫酸ネオマイシン（局所薬）は、ＩＣＸ−ＴＲＣとの直接接触が許容された。
【００６５】
粘着テープを用いた刺激：
粘着テープ（Ｇｏｒｉｌｌａ ｔａｐｅＲＴＭまたはＳｅｌｌｏｔａｐｅＲＴＭ）を皮膚に当て、急激に引張ることにより除いた。この過程は、テープが清浄になり、皮膚からもはや更なる物質がまったく除かれないように見えるまで、反復した。
【００６６】
皮膚擦傷法を用いた刺激：
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｌｅｃｔｒｏ−Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｔｉｐ Ｃｌｅａｎｅｒ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＪ、製品コード：ＵＮ５８２００）を用いて皮膚を剥離し、外部角化細胞層を除去した。剥離は、ピンポイント出血が観察されるまで継続した。
【００６７】
結果：
試験した大多数の患者において、表皮刺激は、非表皮刺激対照と比較して、ＩＣＸ−ＴＲＣ毛包細胞の注入後の患者に認められる毛髪の本数を増加させることが判明した。毛髪形成の増強を示した代表的患者が、テープ剥がし（１〜３番患者）または皮膚擦傷法（４〜７番患者）による表皮刺激について表１に示してあり、注入から１週、６週、１２週、２４週、３６週および４８週後に記録されている（利用できる場合）。
【００６８】
【表１】
更に、上記患者について、直径３０ミクロンを超える毛髪の本数は、表２に示すように、表皮刺激を用いた方が多くの場合高かった。
【００６９】
【表２】
この実施例は、本発明による表皮刺激が、毛包の形成を増強し、生成する毛髪の数および／または太さを増加させることを示している。
【００７０】
他の実施形態
本明細書で引用したすべての刊行物および特許出願は、独自の各刊行物または特許出願が、参照により組み込まれていることを具体的に個別に示されている場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれている。
【００７１】
本発明は、その具体的な実施形態に関して説明してきたが、それは更に改変することができ、本出願は、本発明の原理一般に従っており、しかも、本発明が関係し、本明細書に示した必須の特徴に適用し得る、当技術分野内の公知または慣例の実施に入るような本開示からの逸脱を含む、本発明の任意の変更、使用または適合を包含することを意図していることは理解されよう。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、真皮乳頭（ＤＰ細胞）などの毛包細胞（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ）の移植後の毛包形成に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＤＰ細胞などの培養毛包細胞の移植による毛の再生が、げっ歯類モデルにおいて実証されている。それに加え、こうした細胞は、ヒトに移植することにより、毛髪形成を誘発して脱毛を治療できるという原理の証拠が存在する。
【０００３】
移植できる他の型の毛包細胞には、真皮鞘（ｄｅｒｍａｌ ｓｈｅａｔｈ）（ＤＳ）細胞および／または外毛根鞘（ｏｕｔｅｒ ｒｏｏｔ ｓｈｅａｔｈ）（ＯＲＳ）細胞が挙げられる。
【０００４】
毛幹自体は、ＤＰ細胞の指示の下で特殊化した表皮細胞から形成される。
【０００５】
これは、１つの過程または２つの過程の組合せによって起こることが示唆されている。毛幹は、表皮細胞シグナル伝達過程に寄与することにより、小さい産毛を更新し、毛幹の肥厚を生じるＤＰ細胞によって形成し得る。いわゆる「毛包新生」は、ＤＰ細胞が、毛包間表皮角化細胞を動員し、該細胞を毛包表皮細胞に分化転換（ｔｒａｎｓ−ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ）させ、次いで分化細胞が毛包に発達し、毛幹を産生する場合に起こり得る。
【０００６】
したがって、この過程には、今のところ同定されていないシグナルを生じる活性な毛包（例えば、ＤＰ／ＤＳ／ＯＲＳ）細胞、およびそのシグナル（複数可）に適当に応答できるコンピテントな表皮細胞が必要である。
【０００７】
げっ歯類モデルにおける毛髪誘導の実証は、成功しているとは言え、非効率的であり、ヒトに細胞を移植する方法を直接教示するものではない。これは、両種間の皮膚構造の本質的差異による。ヒト被験体にＤＰ細胞を移植し、高度の毛髪形成を後に効率的に起こす方法が、必要とされている。
【０００８】
「テープ剥がし（ｔａｐｅ ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ）」による角化細胞の増殖刺激が、実証されている。この方法は、粘着テープを用いて角化細胞の外部角質層を除去し、角化細胞の下層における細胞分裂を刺激する（参考として本明細書に援用される、非特許文献１を参照のこと）。
【０００９】
「テープ剥がし」は、毛球が除いた毛髪に依然として付着しているように、成長期の無損傷毛髪を１つまたは複数のドナー領域から除去するためにも使用されている（参考として本明細書に援用されるＧＨＯ’ＳＴ ＨＯＬＤＩＮＧ Ｂ．Ｖ．：特許文献１）。
【００１０】
ＤＰ細胞の移植と同時に起こる創傷治癒は、マウスにおける毛髪形成を刺激するであろうと文献中に述べられている（参考として本明細書に援用される、非特許文献２）。しかし、創傷形成（針で切傷し、表皮下にトンネルを作ること）に使用する当該方法は、ヒト被験体に使用するには適当ではない。同様に、全層切除創傷およびメス切傷による創傷形成も、適切ではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】国際公開第９８／４７４７１号パンフレット
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｐｏｔｔｅｎら、Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ（２０００年）３３巻（４号）：２３１〜２４６頁
【非特許文献２】ＭｃＥｌｗｅｅら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ（２００３年）１２１巻：１２１２６７〜１２１２７５頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、毛包細胞の移植による毛髪形成の効率を改善する方法である。
【００１４】
本発明によれば、受容者の外皮表面中に（例えば、毛髪を生成する上皮細胞に密接して）移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強する方法が提供され、この方法は、表皮刺激（ＥＳ）によって受容者の外皮表面から角化細胞を除去するステップ、およびＥＳの前または後に、受容者の外皮表面下に毛包細胞を移植するステップを含む。
【００１５】
別の態様では、受容者の外皮表面中に（例えば、毛髪を生成する上皮細胞に密接して）移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強する方法が提供され、ここで、ＥＳが、外皮表面から角化細胞を除去することにより達成され、この細胞が、ＥＳを実施する前または後に、外皮表面下に移植される。
【００１６】
この方法は、被験体の皮膚内角化細胞を刺激するためにＥＳを使用することにより、角化細胞が、移植毛包細胞に由来する毛髪誘導シグナルを受容し易くする。驚くべきことに、この方法は、（ｉ）毛包形成の増強、および（ｉｉ）発毛の改善を生じる。
【００１７】
本発明による毛包形成の増強は、ＥＳを用いない移植と比較して、毛包細胞の移植後に形成される毛髪が、多くおよび／または濃くなり得る。
【００１８】
理論に拘束されずに、本発明者らは、活発に増殖している角化細胞が、移植した真皮乳頭（ＤＰ）細胞および／または真皮鞘（ＤＳ）細胞および／または外毛根鞘（ＯＲＳ）細胞による毛髪誘導をより受容し易いと考えている。増殖中の角化細胞は、休止中の角化細胞より動き易い（表皮中で運動し、移動できる）。角化細胞の増殖および移動は、毛髪形成の特質である。
【００１９】
本発明によれば、ＥＳは、皮膚表面から一部の角化細胞を除去することにより達成される。「角化細胞の除去」という用語は、角化細胞層の完全な除去を必要としない。
【００２０】
ＥＳは、細胞移植の直前に行うことができ、または移植後まもなく行うことができる（例えば、数日以内から１週間後まで）。
【００２１】
好ましくは、ＥＳは、移植細胞を受け容れようとする（または最近受け容れた）被験体の頭皮上に実施される。他の皮膚領域をＥＳで処置して、毛包の形成を増強し、発毛を改善してもよい。
【００２２】
ＥＳの一法は、テープ剥がしによる。この方法は、皮膚表面から角化細胞を除去するために、粘着テープ（例えば、Ｇｏｒｉｌｌａ ｔａｐｅＲＴＭまたはＳｅｌｌｏｔａｐｅＲＴＭ）を使用する。特に、テープ剥がしに粘着性のテープまたはパッチを用いて、角質層（死んだ角化細胞で形成される外皮層）を除去し、ＥＳを生じ得る。
【００２３】
テープ剥がしに代わる方法は、剥離（「皮膚擦傷法」と称することもある）であり、その方法では、研磨材（例えば、紙やすり、またはＵｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｌｅｃｔｒｏ−Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｔｉｐ Ｃｌｅａｎｅｒ［Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＪ、製品コード：ＵＮ５８２００］のような手術用チップクリーナーなどの類似品）を用いて皮膚を剥離する。皮膚擦傷法は、外部側の角化細胞層（例えば、角質層および／または角質層下にある他の角化細胞層、（順に）淡明層、顆粒層、有棘層および／または基底層などを含む）を除去する。これによって、テープ剥がしと同じ結果、即ち、失われた層に代わって補填するような角化細胞の増殖および移動が達成される。
【００２４】
ＥＳを達成する更なる代替手段は、化学的表皮剥離、および創傷形成（例えば、引掻き、掻き取りまたは削り取り）による皮膚表面の小損傷である。
【００２５】
本発明は、厳密に美容目的のために行ってもよい。法律上許されれば、本発明は、医療処置の一部であってもよい。
【００２６】
本発明の方法は、ＤＰ細胞の移植によって行い得る。
【００２７】
移植できる他の型の毛包細胞には、ＤＳ細胞および／またはＯＲＳ細胞が挙げられる。
【００２８】
ＤＰ細胞および／またはＤＳ細胞および／またはＯＲＳ細胞の移植以外に、他の毛包細胞（例えば、追加の角化細胞）も細胞混合物に添加して、毛髪形成の効率を改善することができよう。
【００２９】
好ましい実施形態では、毛包細胞（例えば、ＤＰ細胞、ＤＳ細胞および／またはＯＲＳ細胞）は、例えば、共に参考として本明細書に援用される米国特許出願第２００３／０１６１８１５号および同第２００５／０１４７６５２号において教示される方法を用いて、ヒトに移植される。例えば、毛包細胞は、反復ディスペンサー（例えばＧａｓｔｉｇｈｔ（登録商標）ＬＴシリンジなどのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジと共に使用される、例えばＰＢ６００−１反復ディスペンサー）を取り付けたシリンジ（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジ）を用いて移植し得る。
【００３０】
本発明の具体的実施形態を、限定せずに、添付の図を参照しながら以下に説明する。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】本発明の方法において送達デバイスと共に使用する、先行技術の反復ディスペンサーの透視図である。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
（実施例１）毛包形成の増強
先ず、剥がそうとする領域から毛髪を刈り取る、または剃り取る。次いで、この領域を清浄にして、汚れおよび油を除くと共に刈り込んだ毛髪を除く。テープ剥がしは、テープ（好ましくは、Ｇｏｒｉｌｌａ ｔａｐｅＲＴＭまたはＳｅｌｌｏｔａｐｅＲＴＭなどの皮膚に強く粘着する粘着剤の付いたテープ）の粘着面を皮膚に当てることにより行う。そのテープを、急激に引張ることにより除く。この過程は、テープが清浄に見え、皮膚から見掛上まったく物質が除かれなくなるまで、反復する。普通、皮膚が赤くなり、ひりひりしているように見える。
【００３３】
テープ剥がしは、細胞移植の直前に行うことができ、または移植後まもなく行うことができる（例えば、数日以内から１週間後まで）。
【００３４】
（実施例２）毛包形成の増強に対するテープ剥がし法と皮膚擦傷法との比較
方法および材料
必要な材料
以下の詳細な方法説明で言及する材料に加え、制御送達の改良品を備えたＨａｍｉｌｔｏｎシリンジ（例えば、米国特許出願第２００３／０１６１８１５号および第２００５／０１４７６５２号に例示され、図１に示されるような「制御送達デバイス」）、針（使用者によって決定される）およびネジ回しが必要であった。
【００３５】
図１に描出した制御送達の改良品は、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＰＢ６００−１反復ディスペンサー（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ，ＵＳ）であり、これは、プランジャー（２）および目盛ロッド（３）を有するディスペンサーアセンブリー（１）を備える。目盛ロッドは、プランジャーアーム（４）に取り付けられ、該アームは、プランジャーアームネジ（５）によってＨａｍｉｌｔｏｎシリンジのプランジャー（輪郭９で示す）に固定する。フランジネジ（６）は、シリンジの外筒（輪郭８で示す）をディスペンサーアセンブリー中に固定する。シリンジおよびディスペンサーアセンブリーの連結部は、Ｏリング（７）で密封する。
【００３６】
患者
患者グループは、男性型脱毛症を示す志願者からなっていた。実験開始の８週前に、自家ＤＰ細胞を培養するために、各患者から頭皮生検を採取した。注入プロトコール（下記を参照）の後、毛髪成長を１、６、１２、２４、３６および４８週にモニターし、記録した。
【００３７】
ＩＣＸ−ＴＲＣ送達デバイスの準備
ポリプロピレンチューブ中にＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物を含有し、プラスチック外袋中に密封したバイアルを開放し、棚に入れた適当な媒体と共に、使用するまで冷蔵庫に保存した。ＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物は、ＨｙｐｏｔｈｅｒｍｏｓｏｌＲＴＭ中のヒト自家ＤＰ細胞の２００μｌ懸濁物であった。各バイアルは、各患者から培養した４×１０７個ＤＰ細胞／ｍｌの原液から調製した、約８×１０６個のＤＰ細胞を含有していた。
【００３８】
送達デバイスに針を取り付ける前に、媒体でシリンジを２回満たし、分注することにより、その注入デバイスを前処理した。ＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物がバイアルの底に沈降した場合、細胞を再懸濁させるために、バイアルを振り落とし、または「はじいた」。図１を参照すると、注入デバイス上のプランジャー先端が、目盛ロッド（３）を完全に伸ばしたとき、５０μｌの印より僅かに上に位置していることを確実にするためにチェックした。プランジャーの位置が不適正な場合、プランジャーアームネジ（５）を滅菌ネジ回しで緩め、プランジャーを再配置し、そのネジをネジ回しで再び締めた。
【００３９】
未だ針を取り付けないまま、シリンジにＩＣＸ−ＴＲＣ細胞懸濁物を注意深く満たした。満たした後のシリンジに適当な針を取り付け、針の先端を上に向けて、ＩＣＸ−ＴＲＣの一定の量が針先端に丁度現れ始めるまで、ディスペンスボタンを押し入れた。針のハブはおよそ３０〜３５μｌの容量を有する。
【００４０】
針を取り付けた状態で、シリンジ外筒がＩＣＸ−ＴＲＣを４５〜５０μｌ含有するようにシリンジを満たした。ＩＣＸ−ＴＲＣは、バイアルを開放してから１５分以内に使用した。
【００４１】
針が鈍らになったとき、該デバイスに新しい針をあてがい、デバイスを再び前処理した後に続けた。
【００４２】
ＩＣＸ−ＴＲＣの分注および取扱い手順
（ｉ）ＩＣＸ−ＴＲＣ注入用の頭皮の準備
ＩＣＸ−ＴＲＣパッケージを開放する前に、目標処置領域を準備した。手術前に、生検創傷を乱さないように注意を払って、手洗い消毒液（ａｎｔｉｓｅｐｔｉｃ ｓｃｒｕｂ）で頭皮を注意深く洗浄し、清潔なタオルで半乾燥にした。必要であれば、手順中の鎮静のために経口用ジアゼパムを投与した。
【００４３】
１ｃｍ２の区画注入部位を同定するために、入れ墨（小さい黒色点）を用いた。次いで、各被験体について選択した領域、ならびに領域の位置およびサイズを症例記録表（ＣＲＦ）の図上に記録し、写真を撮った（下記を参照）。
【００４４】
ゲンチアナバイオレットのペンを用いて、１ｃｍ２の円（中心に入れ墨点のある）を打点し、下記に記載するように半々に分割した。
【００４５】
次いで、選択領域を囲む頭皮中にアドレナリン２０万分の１を含む０．５〜１％リグノカインを注射することにより、その領域を麻酔し、穿刺試験を行って、その領域が麻痺していることを確実にした。
【００４６】
適用できる場合には、ＩＣＸ−ＴＲＣ細胞の注入直前に、下記のように選択領域に表皮刺激を施した。
【００４７】
使用時には、存在するチューブ数、媒体の色、包装などをＣＲＦ中に記録した。
【００４８】
ＩＣＸ−ＴＲＣの滅菌状態に疑義がある場合、またはパッケージから材料を取り出す際もしくはそれを取り扱う際に、滅菌状態が危うい場合は、それを使用しなかった。
【００４９】
（ｉｉ）ＩＣＸ−ＴＲＣの送達／分注
ＩＣＸ−ＴＲＣ包装の開放が許容できることを確認する際に、ＩＣＸ−ＴＲＣをパッケージから取り出すために、以下の指示を適用した。
【００５０】
消毒し、手袋をはめた手で密封プラスチック外袋を開放し、ポリプロピレンチューブを取り出し、滅菌野の中へ移した。チューブスタンドにチューブを置く前に、チューブを激しく振って、できる限り多くのＩＣＸ−ＴＲＣをチューブの底まで動かした。
【００５１】
チューブの蓋を静かにネジ開け、前記のように注入デバイスを前処理し、装填した。
【００５２】
次いで、ＩＣＸ−ＴＲＣを選択した処置領域中に注入した。
【００５３】
以下の注入法を用いた（すべての注入が２ｍｍを超える深さにならないことを確実にした）。
【００５４】
区画注入領域の右半分では、２７Ｇ−４ｍｍ針を用いた５０回の注入を含む１段階毛包間注入手順を行った。
【００５５】
区画注入領域の左半分では、以下３通りの注入手順のうち１つを行った：
（１）２０Ｇまたは２１Ｇ針で孔あけ後、２７Ｇ−４ｍｍ針を用いた注入の２段階による５０×１μｌ注入；
（２）２７Ｇ−４ｍｍ針を用いた現存毛包中への５０×１μｌ毛包内注入；
（３）２７Ｇ−１／２インチ針を用いた１×５０μｌ皮内注入。
【００５６】
注入手順を以下により詳細に説明する。
【００５７】
注入手順
１段階毛包間について：
Ｈａｍｉｌｔｏｎシリンジおよび２７Ｇ−４ｍｍ針を用いて、注意深く毛包をすべて回避しながら針を頭皮に押し込んだ。ディスペンサーボタンを押して細胞を送入した後、余分な吸引をしないようにゆっくり針を引き抜いた。注入する際に注入デバイスを保持しながら、手で頭皮上に押し下げることは、皮膚を圧迫し、以前の注入から細胞を搾り出す恐れがあるので、避けるようにした。拭き取りまたは軽い叩き当ても避けた。出血／浸出が新たな注入に流入しないように、底部から上方に作業することが好ましかった。拭き取り前に待つことは、細胞を凝血などにより針跡中に固定できるので、好ましかった。プランジャーが進んでいることを保証するために、該デバイスを定期的にチェックした。必要があれば、そのネジを締め付けた。このチェックは、開始時および定期的に（例えば、再充填の都度その後に）行った。
【００５８】
２段階毛包間について：
鋭い針（２０Ｇまたは２１Ｇ）を用いて孔をあけ、約２ｍｍの深さに制御するために、斜めになった部分（ｂｅｖｅｌ）の上端までに挿入を留めた。始めに孔を作り、その後上記の１段階毛包間技術を用いた。上記の１段階毛包間法の鈍らな針の方が、孔へ挿入し易かったので、これを使用した。
【００５９】
１段階毛包内（現存毛包）について：
これは、針を現存ミニチュア毛包に直接挿入する以外、１段階毛包間法と同じであった。これは、鈍らな針を用いて最も容易に成し遂げられた。一部の患者では、ミニチュア化毛包の密度が、目標領域で５０回注入を行うには不十分であった。できる限り多数回（５０回まで）の注入を行い、注入回数を記録した。
【００６０】
１段階皮内について：
針を注入領域の中線上にあって円端部にある点に挿入した。針の先端が、中線と９０°をなす半径の中間点に達するまで、針を皮内に押し込んだ。針の輪郭が皮膚の下に見えるように、皮膚の下にできる限り浅くおよそ０．５ｃｍ針を挿入した。プランジャーを押し下げると、抵抗があり、皮膚は白くなり、小水胞が出現した。プランジャー（ディスペンサーボタンではない）を完全に押し下げて、シリンジの中味全５０μｌを１回の注入で注入した。
【００６１】
すべての注入を頭の頂部の選択領域内に行った。注入の回数、深さおよび角度をＣＲＦ上に書き記し、記録した。それ以外に、注入を行うのに要した時間、およびチューブ数も記録した。かゆみ、浮腫および紅斑の存在を含む皮膚の質も、記録した。
【００６２】
処置直後に、被験体が手順中の疼痛を感じたか否かを記録し、および起こった出血量も記録した。
【００６３】
使用しなかったＩＣＸ−ＴＲＣは、適切に処分した。
【００６４】
次の薬剤：シプロフロキサシン（点滴薬）、ムピロシン（局所薬）および硫酸ネオマイシン（局所薬）は、ＩＣＸ−ＴＲＣとの直接接触が許容された。
【００６５】
粘着テープを用いた刺激：
粘着テープ（Ｇｏｒｉｌｌａ ｔａｐｅＲＴＭまたはＳｅｌｌｏｔａｐｅＲＴＭ）を皮膚に当て、急激に引張ることにより除いた。この過程は、テープが清浄になり、皮膚からもはや更なる物質がまったく除かれないように見えるまで、反復した。
【００６６】
皮膚擦傷法を用いた刺激：
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｅｌｅｃｔｒｏ−Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｔｉｐ Ｃｌｅａｎｅｒ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＪ、製品コード：ＵＮ５８２００）を用いて皮膚を剥離し、外部角化細胞層を除去した。剥離は、ピンポイント出血が観察されるまで継続した。
【００６７】
結果：
試験した大多数の患者において、表皮刺激は、非表皮刺激対照と比較して、ＩＣＸ−ＴＲＣ毛包細胞の注入後の患者に認められる毛髪の本数を増加させることが判明した。毛髪形成の増強を示した代表的患者が、テープ剥がし（１〜３番患者）または皮膚擦傷法（４〜７番患者）による表皮刺激について表１に示してあり、注入から１週、６週、１２週、２４週、３６週および４８週後に記録されている（利用できる場合）。
【００６８】
【表１】
更に、上記患者について、直径３０ミクロンを超える毛髪の本数は、表２に示すように、表皮刺激を用いた方が多くの場合高かった。
【００６９】
【表２】
この実施例は、本発明による表皮刺激が、毛包の形成を増強し、生成する毛髪の数および／または太さを増加させることを示している。
【００７０】
他の実施形態
本明細書で引用したすべての刊行物および特許出願は、独自の各刊行物または特許出願が、参照により組み込まれていることを具体的に個別に示されている場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれている。
【００７１】
本発明は、その具体的な実施形態に関して説明してきたが、それは更に改変することができ、本出願は、本発明の原理一般に従っており、しかも、本発明が関係し、本明細書に示した必須の特徴に適用し得る、当技術分野内の公知または慣例の実施に入るような本開示からの逸脱を含む、本発明の任意の変更、使用または適合を包含することを意図していることは理解されよう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
受容者の外皮表面に移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強するための方法であって、該方法は、表皮刺激（ＥＳ）によって該受容者の外皮表面から角化細胞を除去するステップ、および該ＥＳの前または後に、該受容者の外皮表面下に該毛包細胞を移植するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記ＥＳが移植の前に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＥＳが移植の後に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＥＳが、前記外皮表面から角化細胞を除去するために、粘着テープを用いるテープ剥がしにより達成される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記毛包細胞が、真皮乳頭（ＤＰ）細胞を含む、またはそれからなる、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記毛包細胞が、真皮鞘（ＤＳ）細胞を含む、またはそれからなる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記毛包細胞が、外毛根鞘（ＯＲＳ）細胞を含む、またはそれからなる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記毛包細胞が、真皮乳頭（ＤＰ）細胞、真皮鞘（ＤＳ）細胞および外毛根鞘（ＯＲＳ）細胞からなる群から選択される毛包細胞の混合物を含む、またはそれからなる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記毛包細胞が角化細胞を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＥＳが皮膚擦傷法により達成される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＥＳが化学的表皮剥離により達成される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＥＳが創傷形成により達成される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
美容処置である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
医療処置である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記毛包細胞が、制御送達デバイス（例えば、ＰＢ６００−１反復ディスペンサーを取り付けたＨａｍｉｌｔｏｎシリンジなどの、反復ディスペンサーを取り付けたシリンジ）を用いて移植される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
実質的に本明細書に記載するような、受容者の外皮表面に移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強するための方法。
【請求項１】
受容者の外皮表面に移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強するための方法であって、該方法は、表皮刺激（ＥＳ）によって該受容者の外皮表面から角化細胞を除去するステップ、および該ＥＳの前または後に、該受容者の外皮表面下に該毛包細胞を移植するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記ＥＳが移植の前に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＥＳが移植の後に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＥＳが、前記外皮表面から角化細胞を除去するために、粘着テープを用いるテープ剥がしにより達成される、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記毛包細胞が、真皮乳頭（ＤＰ）細胞を含む、またはそれからなる、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記毛包細胞が、真皮鞘（ＤＳ）細胞を含む、またはそれからなる、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記毛包細胞が、外毛根鞘（ＯＲＳ）細胞を含む、またはそれからなる、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記毛包細胞が、真皮乳頭（ＤＰ）細胞、真皮鞘（ＤＳ）細胞および外毛根鞘（ＯＲＳ）細胞からなる群から選択される毛包細胞の混合物を含む、またはそれからなる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記毛包細胞が角化細胞を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＥＳが皮膚擦傷法により達成される、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＥＳが化学的表皮剥離により達成される、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＥＳが創傷形成により達成される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
美容処置である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
医療処置である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記毛包細胞が、制御送達デバイス（例えば、ＰＢ６００−１反復ディスペンサーを取り付けたＨａｍｉｌｔｏｎシリンジなどの、反復ディスペンサーを取り付けたシリンジ）を用いて移植される、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
実質的に本明細書に記載するような、受容者の外皮表面に移植した際の毛包細胞により、毛包の形成を増強するための方法。
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５４０４２５（Ｐ２０１０−５４０４２５Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２５４３０（Ｐ２０１０−５２５４３０）
【出願日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００３１８６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３７４７４
【国際公開日】平成２１年３月２６日（２００９．３．２６）
【出願人】（５０７０６９３４６）インターサイテックス リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１８日（２００８．９．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００８／００３１８６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３７４７４
【国際公開日】平成２１年３月２６日（２００９．３．２６）
【出願人】（５０７０６９３４６）インターサイテックス リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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