治療剤
本発明は、ミセル粒子内にカプセル化された１７−ＡＡＧを提供する。該ミセルは、安全なポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）（ＰＥＧ−ＰＬＡ）で構成され得る。担体としてのＰＥＧ−ＰＬＡの大きな利点は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬまたはＤＭＳＯよりも毒性が低いことである。さらに、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、ＤＭＳＯより取り扱いが簡単であり、現在臨床試験中である１７−ＡＡＧ処方物に付随する問題である悪臭がない。また、本発明は、ミセルにカプセル化された活性剤を製造する方法、および該ミセルおよびそれらの対応する処方物を使用する治療方法、例えば、Ｈｓｐ９０の阻害および／または癌の処置のための方法も提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００７年７月９日に出願された米国仮特許出願第６０／９４８，６４２号および２００８年４月１４日に出願された同第６１／０４４，８１３号に対する優先権を主張し、これらは本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（政府の援助）
本発明は、ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより授与される契約番号ＡＩ０４３３４６の下による政府の援助がなされた。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）は、腫瘍細胞の増殖に関連するタンパク質の調節に重要な役割を果たすため、癌治療のための重要な標的である。ベンゾキノンアンサマイシン抗生物質であるゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０のＡＴＰ／ＡＤＰ結合ポケットに強く結合し、多様な腫瘍ファミリーの生存および増殖を妨げることができることが見出された。ゲルダナマイシンは、有望な新しい抗癌剤であるが、その臨床的な開発は、高い肝毒性および難溶解性によって妨げられている。２種の類縁体、１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ；タネスピマイシン）および１７−ジメチルアミノ−エチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＤＭＡＧ）が開発され、これらの問題を軽減した。
【０００４】
１７−ＤＭＡＧは１７−ＡＡＧに比べてより優れた水溶性およびより大きな経口バイオアベイラビリティを有するため、臨床解釈のためのいくつかの有望な先例では、医薬的により実用的な処方として、１７−ＤＭＡＧの開発が対象とされてきた。しかし、１７−ＡＧＧより優れた明らかな利点にもかかわらず、１７−ＤＭＡＧは、動物への投与時の分布容積が大きいことを特徴とする。１７−ＤＭＡＧの最大許容用量は、１７−ＡＧＧの最大許容用量よりかなり少ない（イヌにおいて、それぞれ、８ｍｇ／ｍ２／日および１００〜２００ｍｇ／ｍ２／日）ので、この広い分布により、望ましくない毒性が引き起こされる可能性がある。
【０００５】
１７−ＡＡＧ送達の主な障害は、その限られた水溶解度（約０．１ｍｇ／ｍＬ）であり、このため、非経口投与の前に、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（ＣｒＥＬ）、ＤＭＳＯおよび／またはエタノールを含む複雑な処方物を使用する結果となっていた。ＣｒＥＬは、過敏性反応およびアナフィラキシーを誘発することが知られているため、これは、患者の忍容性の点から望ましくなく、投与前に、抗ヒスタミン剤およびステロイド剤により患者を処置する必要がある。
【０００６】
従って、より安全でより効果的な１７−ＡＡＧの送達は、きつい界面活性剤を使用することなく薬物を可溶化することができる生体適合性送達システムの開発に依存する。従って、１７−ＡＡＧを患者に送達する改良された組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本発明は、安全なポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）（「ＰＥＧ−ＰＬＡ」）ミセルによってカプセル化された１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）のような活性剤を提供する。従って、本発明の組成物は、活性剤の効果的な可溶化を提供する。担体としてのＰＥＧ−ＰＬＡの大きな利点は、現在公知の組成物に使用されているＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬまたはＤＭＳＯより毒性が低いということである。さらに、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、ＤＭＳＯより取り扱いが簡単であり、現在臨床試験中の１７−ＡＡＧ処方物の問題である悪臭もない。また、ミセルによるカプセル化によって、体の標的範囲に送達されるまでミセル内に薬剤が保持されることによって起こる特定の薬剤の副作用（例えば、肝毒性、好中球減少症、神経障害など）の発生を減らすこともできる。
【０００８】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、１７−ＡＡＧおよび／または第２活性剤をカプセル化し、医薬組成物を提供するために使用することができる。第２活性剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、テニポシドまたはエトポシドのような化学療法剤であり得る。該組成物は、静脈内（ＩＶ）注射または輸液投与のような、さまざまな形態の体内投与に適合するように処方することができる。そのような処方物は、１７−ＡＡＧ濃度が約２０ｍｇ／ｍＬ以下の１７−ＡＡＧ含有ミセルを含み得る。該処方物は、生理食塩水またはデキストロース溶液のような適切な水性担体を含み得る。
【０００９】
また本発明は、有効量のミセル内にカプセル化された１７−ＡＡＧを含む組成物を投与することを含む、投与を必要とする患者に１７−ＡＡＧを投与する方法を提供する。ミセルは、ポリ（エチレングリコール）およびポリ（乳酸）のブロックを１つ以上含有するブロック共重合体を含み得る。
【００１０】
本発明は、有効量の１７−ＡＡＧ含有ミセルを含有する組成物を癌細胞に接触させることにより、癌細胞を死滅させる方法をさらに提供する。接触は、インビボでもインビトロでもよい。１７−ＡＡＧ含有ミセルは、有効量の１７−ＡＡＧ含有ミセルを含有する組成物を腫瘍に接触させる、または投与することにより、癌腫瘍の成長を予防する、緩慢にする、あるいは阻害するために使用することもできる。
【００１１】
本発明は、１７−ＡＡＧ含有ミセルを製造する方法であって、先ず、１７−ＡＡＧおよびユニマー（ミセル配置にはないブロックポリマー鎖）を水混和性溶剤（例えば、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に溶解する方法をさらに提供する。次いで、該溶液を透析装置（例えば、バッグまたはチューブ）に加えることができる。次いで、該透析装置を水浴中に配置し、透析バッグ内に１７−ＡＡＧ含有ミセルを得ることができる。次いで、該ミセルを、例えば遠心分離し、取り込まれていない薬物を沈殿させることができる。ナノろ過を使用して、単離された１７−ＡＡＧ含有ミセルを得ることができる。
【００１２】
また本発明は、１７−ＡＡＧおよびＰＥＧ−ＰＬＡ（２０００ｍｗ；５０：５０）がアセトニトリルまたはＤＭＡｃのような適切な溶剤に溶解している１７−ＡＡＧ含有ミセルを製造する方法を提供する。一実施形態では、ＰＥＧ−ＰＬＡブロックは、約５０：５０の分子量２，０００のブロックであり得る。該溶液を超音波処理して、次いで溶剤除去により濃縮することができる。次いで、温水（５０〜７０℃、または約６０℃）を加えて、混合物を周囲温度（約２３℃）に放冷することができる。次いで、例えば遠心分離により沈降物を除去（例えば、約１３，０００ｒｐｍで約１分間）して、該混合物を分離することができる。上澄み液を捕集し、例えば０．２μｍＰＴＦＥフィルターを通してろ過して、単離された１７−ＡＡＧ含有ミセル処方物を得ることができる。得られたミセル医薬溶液は、例えば約４℃の低温で長期間保存することができる。
【００１３】
以下の図面は、本明細書の一部を構成するものであり、本発明のある実施形態または種々の態様をさらに実証するために含まれるものである。ある場合には、本発明の実施形態は、添付の図面を本明細書に提示する詳細な説明と組み合わせて参照することによって、最もよく理解することができる。説明および添付の図面は、ある具体例あるいは本発明のある態様を強調することがあるが、当業者であれば、例または態様の一部を、本発明の他の例または態様と組み合わせて使用してもよいことを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の一実施形態によるミセルの特性評価を示し、（ａ）は、現れた平均径が２４２±５ｎｍの無負荷ミセルの動的光散乱（ＤＬＳ）であり、（ｂ）は、３５０ｎＭで測定したＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）の臨界ミセル濃度である。
【図２】図２は、一実施形態による、３７℃およびｐＨ７．４でのｄｄＨ２Ｏ中での、０．３ｍＭのＰＥＧ−ＰＬＡミセルからの１７−ＡＡＧのインビトロ放出を示す。ミセルは、表１に記載するように、ＰＥＧ−ＰＬＡ含量に対して１１．４％ ｗ／ｗの１７−ＡＡＧで調製した：ＰＥＧ−ＰＬＡ薬物負荷ミセル（●）；薬物のみ（▽）；およびＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００に処方された１７−ＡＡＧ（■）。
【図３−１】図３は、一実施形態によるラットにおける薬物動態学的プロファイルを示し、（ａ）血清、（ｂ）尿中に残存する１７−ＡＡＧの量、（ｃ）１７−ＡＡＧの尿排泄速度、および（ｄ）尿によって排泄された１７−ＡＡＧの総量を含む。投与された処方物は、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇの１７−ＡＡＧ（ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）を含んでいた。
【図３−２】図３は、一実施形態によるラットにおける薬物動態学的プロファイルを示し、（ａ）血清、（ｂ）尿中に残存する１７−ＡＡＧの量、（ｃ）１７−ＡＡＧの尿排泄速度、および（ｄ）尿によって排泄された１７−ＡＡＧの総量を含む。投与された処方物は、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇの１７−ＡＡＧ（ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）を含んでいた。
【図４】図４は、（ａ）注射後、該投薬（１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）から３時間後のラットにおける１７−ＡＡＧの組織内分布、および（ｂ）１７−ＡＡＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）のラットへの静脈内投与後、該投薬（ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）から３時間後の血清に対する組織比（Ｋｐ）を示す。星印（＊）は、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方とＰＥＧ−ＰＬＡミセル内にカプセル化された１７−ＡＡＧとの間の統計的な有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【図５】図５（ａ）および５（ｂ）は、本発明の実施形態による１７−ＡＡＧミセルの調製手順を示す。
【図６】図６は、一実施形態による、３３７ｎｍでのＵＶ測定によって決定された１７−ＡＡＧをカプセル化したＰＥＧ−ＰＬＡミセルの薬物負荷の特性評価を示す。
【図７】図７は、一実施形態による、６３２．８ｎｍでのＤＬＳ測定によって決定されたＰＥＧ−ＰＬＡミセルにおける粒度分布を示し、（ａ）は数−重量ガウス分布であり、（ｂ）は容積−重量ガウス分布である。
【図８】図８は、ＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＡミセルの透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）画像（１８，０００×）を示す。
【図９】図９は、一実施形態によるミセル負荷および形成手順を示す。ナノろ過後、処方物は、ＵＶおよｂＲＩ検出モート゛によるＨＰＬＣを使用して分析することができる。
【図１０】図１０は、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルへのパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧ両方の可溶化を示す。
【図１１】図１１は、１７−ＡＡＧ／パクリタキセルＰＥＧ−ＰＬＡミセルに関する物理的安定性の結果を示す。
【図１２−１】図１２は、（ａ）パクリタキセル（ＰＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＰＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のパクリタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのパクリタキセルのみのミセル中のパクリタキセル濃度の比較を示す。
【図１２−２】図１２は、（ａ）パクリタキセル（ＰＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＰＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のパクリタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのパクリタキセルのみのミセル中のパクリタキセル濃度の比較を示す。
【図１３−１】図１３は、（ａ）エトポシド（ＥＴＯ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のエトポシドおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＥＴＯ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のエトポシド濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのエトポシドのみのミセル中のエトポシドの濃度の比較を示す。
【図１３−２】図１３は、（ａ）エトポシド（ＥＴＯ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のエトポシドおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＥＴＯ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のエトポシド濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのエトポシドのみのミセル中のエトポシドの濃度の比較を示す。
【図１４−１】図１４は、（ａ）ドセタキセル（ＤＣＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のドセタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＤＣＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のドセタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのドセタキセルのみのミセル中のドセタキセルの濃度の比較を示す。
【図１４−２】図１４は、（ａ）ドセタキセル（ＤＣＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のドセタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＤＣＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のドセタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのドセタキセルのみのミセル中のドセタキセルの濃度の比較を示す。
【図１５Ａ】図１５は、（ａ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル（ＰＴＸ）単一薬剤ミセルの物理的安定性、および（ｂ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの物理的安定性を示す。
【図１５Ｂ】図１５は、（ａ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル（ＰＴＸ）単一薬剤ミセルの物理的安定性、および（ｂ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの物理的安定性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（詳細な説明）
ゲルダナマイシンは、産生微生物であるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｖａｒ．ｇｅｌｄａｎｕｓ ＮＲＲＬ３６０２を培養することによって得ることのできる周知の天然物である。化合物１７−ＡＡＧは、米国特許第４，２６１，９８９号明細書（Ｓａｓａｋｉら）に記載されるように、ゲルダナマイシンとアリルアミンとの反応によって、半合成的にゲルダナマイシンから製造される。該米国特許の開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００１６】
ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０のＡＴＰ／ＡＤＰ結合ポケットに強く結合し、そのため、ＨＥＲ−２／ｅｒｂＢ−２を過剰発現するパクリタキセル耐性乳癌を始めとするさまざまなファミリーの腫瘍の生存および増殖を妨げる。ゲルダナマイシンの臨床開発は、その難溶解性および高い肝毒性によって妨げられてきた（Ｇｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９（１５）（２００６）４６０６〜４６１５）。従って、ゲルダナマイシン、またはその誘導体、例えば１７−アリルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ、以下のスキーム１）を含有する医薬処方物の調製における重大な障害は、これらの親油性薬物の水溶性が非常に低いことである。
【００１７】
スキーム１
【００１８】
【化１】
適切な水溶性は、非経口投与に関して特に重要な要件である。１７−ＡＡＧの水溶性は、中性ｐＨで約０．１ｍｇ／ｍＬしかなく、これでは安全で効果的な様式で投与することは難しい。溶解性の問題に対処すべく試みがなされたが、各処方物には、それ自身の欠点、例えば、ＤＭＳＯ、エタノール、または種々の望ましくない界面活性剤の使用が付随していた。
【００１９】
化合物１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、またはタネスピマイシン）は、現在癌の治療のための臨床試験に供されている有望な熱ショックタンパク質９０阻害剤である。癌細胞に対する作用の選択的メカニズムにもかかわらず、１７−ＡＡＧは、その低い水溶性のために難しい課題に直面している。現在の１７−ＡＧＧ組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（ＣｒＥＬ）、ＤＭＳＯおよび／またはエタノールを含む処方が必要である。米国特許出願公開第２００５／０２５６０９７号公報（Ｚｈｏｎｇら）参照。
【００２０】
Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬは、ひまし油誘導体であり、一般に、３５モルのエチレンオキシドをひまし油の各モルと反応させることによって、ポリエトキシ化ひまし油（ＣＡＳ番号６１７９１−１２−６）を得ることによって調製される。非経口処方物のためにＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（例えば、ＫＯＳ−９５３）またはＤＭＳＯを使用することは、副作用の可能性があるため、患者の忍容性の点から望ましくない。種々の有害作用として、急性過敏性反応、末梢神経毒性、高脂血症および／またはＰ糖タンパク質の阻害を挙げることができる。さらに、１７−ＡＡＧは、大きい分布容積（Ｖｄ）、および低用量（２０ｍｇ／ｋｇ未満）での重大な全身毒性を有する。従って、１７−ＡＡＧをそのような治療を必要とする患者に安全に投与するように改良された処方物が必要である。
【００２１】
本明細書の開示は、ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＥＧ−ＰＬＡ）で構成される両親媒性ジブロックミセルを使用して製造される、ＣｒＥＬを含有しない１７−ＡＡＧの処方物を提供する。動的光散乱（ＤＬＳ）により、約２５７ｎｍの平均直径および約３５０ｎＭの臨界ミセル濃度を持つＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルが明らかになった。該ミセルは、有意な量の特定の活性剤、例えば約１．５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧを可溶化することができる。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの曲線下面積（ＡＵＣ）は、標準的な処方物の１．３倍であった。ミセル処方物を使用することによって、ＣｒＥＬを使用する標準的なビヒクルに比べて、腎クリアランス（腎ＣＬ）が増加し、肝クリアランス（肝ＣＬ）が減少した。従って、本明細書に記載するミセル処方物は、現在知られている組成物よりも優れたいくつかの利点を持つ１７−ＡＡＧ用の送達ビヒクルを提供する。
【００２２】
さらに、１７−ＡＡＧミセル処方物は、血清中の薬物の半減期（ｔ１／２）において２．７倍の延長、および尿中のｔ１／２において１．３倍の増加を示した。予想されるように、１７−ＡＡＧはより長い期間にわたって血中を循環したため、分布容積（Ｖｄ）の１．７倍の増加がこのミセル処方物でも観察された。これは、より迅速に除去される標準的な処方物に比べて非特異性（標的部位がない）であるためである。ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル中の１７−ＡＡＧの新しい処方物は、溶解性において、１７−ＡＡＧ単独の場合と比較して１５０倍の増加という良好な結果となった。このデータは、本発明のナノキャリアシステムが、ＣｒＥＬおよびＥｔＯＨのような毒性薬剤を必要とすることなく、１７−ＡＡＧの薬物動態的性質を保持することができることを示している。
【００２３】
用語ＰＥＧ−ＰＬＡは、ポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ（乳酸）を意味する。ポリ（乳酸）ブロックとして、（Ｄ−乳酸）、（Ｌ−乳酸）、（Ｄ，Ｌ−乳酸）、およびそれらの組合せが挙げられ得る。ＰＥＧ−ＰＬＡの種々の形態は、例えば、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ，Ｉｎｃ．、モントリオール、ケベックから市販されており、あるいは当業者に周知の方法により調製することができる。ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は、約１，０００〜約３５，０００ｇ／ｍｏｌであり得、あるいは該範囲内の約５００ｇ／ｍｏｌおきの数字であることもできる。ポリ（乳酸）の適切なブロックは、約１，０００〜約１５，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有し得、あるいは該範囲内の約５００ｇ／ｍｏｌおきの数字であることもできる。ＰＥＧブロックは、アルキル基、例えばメチル基（例えば、メトキシエーテル）、あるいは任意の適切な保護基、キャッピング基、またはブロック基を終端とすることができる。
【００２４】
本明細書中の「一実施形態」、「１つの実施形態」、「１つの例示実施形態」その他の記載は、記載された実施形態が、特定の特性、構造または特徴を含み得ることを示すが、必ずしも全ての実施形態がその特定の特性、構造または特徴を含むとは限らないことに注意すべきである。さらに、該語句は、同じ実施形態を意味するとも限らない。さらに、特定の特性、構造または特徴がある実施形態に関連して記載されている場合、明確に記載されていてもそうでなくても、他の実施形態と関連して、そのような特性、構造または特徴に作用することは、当業者の知識の範囲内であることを示している。
【００２５】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセルを調製する方法
臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える量の溶剤中に存在する両親媒性ユニマー（一本鎖）は、内部が疎水性であり外部が親水性であるコア−コロナ構造、もしくはシェルであるミセルに凝集している。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、実施例１に記載し、図５（ａ）に模式的に図示するように調製することができる。図５（ｂ）は、１７−ＡＡＧミセル処方物を調製する具体的な一手順を示す。この手順は、一実施形態のための単なる例示であり、該手順は、当業者には容易に認識されるように、目的の調製規模に応じて変更することができる。図５に図示した手順の一利点は、ミセル溶液の透析を必要としないことである。
【００２６】
本開示のミセルは、さまざまなブロックサイズ（例えば、先に記載した範囲のグロックサイズ）のＰＥＧ−ＰＬＡポリマーを、さまざまな比（例えば、ＰＥＧ：ＰＬＡが約１：１０〜約１０：１、あるいは該範囲内の任意の整数の比）で使用して調製することができる。例えば、ＰＥＧ−ＰＬＡポリマーの分子量（Ｍｎ）としては、２Ｋ−２Ｋ、３Ｋ−５Ｋ、５Ｋ−３Ｋ、５Ｋ−６Ｋ、６Ｋ−５Ｋ、６Ｋ−６Ｋ、８Ｋ−４Ｋ、４Ｋ−８Ｋ、１２Ｋ−３Ｋ、３Ｋ−１２Ｋ、１２Ｋ−６Ｋおよび／または６Ｋ−１２Ｋを挙げることができるが、これらに限定されない。薬物−ポリマー比も、約１：２０〜約１０：１、あるいは該範囲内の任意の整数の比とすることができる。適切な薬物−ポリマー比の具体例として、約１：２．５、約１：５、約１：７．５および／または約１：１０が挙げられるが、これらに限定されない。適切なポリマーの１つは、約５０：５０の割合で約１〜３ｋＤａ（例えば、約２Ｋドルトン）のブロックを含むＰＥＧ−ＰＬＡである。この手順を使用することによって、ミセル内に予想外に高いレベルの薬物負荷が得られた。例えば、図５の手順を採用した場合、約５ｍｇ／ｍＬの薬物負荷が達成された（約９ｍＭ、約１７ｗｔ％）（図６参照）。
【００２７】
ミセルカプセル化活性剤処方物は、透析法によっても製造することができる。薬剤およびＰＥＧ−ＰＬＡは、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）のような適切な水混和性有機溶剤に溶解させることができる。次いで、溶液を透析バッグに移す。透析培養液は、０．９％生理食塩水のような水溶液を含有する。透析バッグとしては、例えば、３５００ＭＷＣＯチューブ（ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ（登録商標））透析バッグが使用できる。溶解した薬剤およびポリマーを水性混合物に添加すると、活性剤を含有したミセルが形成する。次いで、ミセルをカプセル化した薬剤を単離することができる。例えば、取り込まれていない薬物は、遠心分離によって沈殿させることができる。残存する上澄み液のナノろ過により、単離されたミセルカプセル化活性剤の処方物を得る。図９参照。ミセルは、例えば、ＵＶおよびＲＩ検出モードを備えたＨＰＬＣを使用して測定および分析することができる（Ｙａｓｕｇｉらによって記載された手法、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，１９９９，６２，９９〜１００参照）。準備方法は、水中油乳液の使用、溶液キャスティングおよび／または凍結乾燥を含み得る。Ｇａｕｃｈｅｒら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、１０９（２００５）１６９〜１８８参照。
【００２８】
一旦調製されると、ミセル−薬物組成物は、冷蔵下、好ましくは約−２０℃〜約４℃の温度で、長期間貯蔵することができる。ミセル−薬物組成物を光から保護するために、茶色のガラスバイアルまたは他の適切な容器を使用することにより、それらの有効期間を延長することができる。ミセル−薬物組成物は、凍結乾燥して固体処方物にすることができ、この処方物を、薬物投与の前に水性ビヒクルに溶かすことができる。
【００２９】
処方物
１７−ＡＡＧをＰＥＧ−ＰＬＡミセルに含有させることによって、薬物を、ミセルを使用せずに溶解できる量より多くの量の流体、例えば、医薬担体もしくは血液または間質液のような体液に溶解することができる。従って、ミセルは、そうでない場合よりも高い程度に１７−ＡＡＧを効果的に可溶化する。ミセルがフィルターを通過できるようにミセルを溶解する医薬担体は、医薬「溶液」に溶解し、本発明の実施形態による処方物を提供すると考えられる。
【００３０】
ある実施形態では、ミセルは、１５ｍｇ／ｍＬまでの１７−ＡＡＧ、もしくは２０ｍｇ／ｍＬまでの１７−ＡＡＧを可溶化することができる。いくつかの実施形態では、ミセルは、約３ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬまたは約２５ｍｇ／ｍＬの活性剤を可溶化することができる。いくつかの実施形態では、処方物は、ミセルの容積、あるいは好ましくは水性担体の容積に関して、約０．５〜約５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧ濃度、約０．７５〜約３ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧ濃度、約１〜約２ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧ濃度、または約１．５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し得る。同様の量の他の活性剤も、ある他の実施形態のミセル中に含まれ得る。
【００３１】
一実施形態では、１７−ＡＡＧカプセル化ミセルは、生理食塩水またはデキストロースのような水性担体などを含む混合物に処方される。例えば、適切な担体として、０．９％ＮａＣｌ溶液、もしくはデキストロースまたはグルコース溶液のような５％糖水溶液が可能である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（第２１編、２００５）８０３−８４９ページ参照。
【００３２】
投与、例えば、非経口投与の目的のため、水溶性塩類（例えば、ＮａＣｌ）の無菌水溶液を使用することができる。付加的な、または代替の担体として、ゴマ油、ピーナッツ油、および含水プロピレングリコールが挙げられ得る。水溶液は、緩衝化されているのが適切な場合があり、必要であれば、該液状希釈剤は、先ず、十分な生理食塩水またはグルコースで等張化され得る。これらの水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内および腫瘍内（ＩＴ）注射に特に適している。腫瘍内注射は、前立腺癌を始めとする癌の治療のようなある種の治療に特に有用であり得る。適切な無菌水性媒体は、購入することができ（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、あるいは当業者に周知の標準的な手法によって調製することができる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、組成物は、エタノール、ジメチルスルホキシド、または他の有機溶剤、リン脂質、ひまし油、およびひまし油誘導体の１つ以上のような添加剤を全く含まない。他の実施形態では、組成物は、上記の成分を実質的に含まない。本明細書で使用する場合、「実質的に含まない」とは、組成物が、約２．５重量％未満、約２重量％未満、約１．５重量％未満、約１重量％未満、約０．５重量％未満、または約０．２５重量％未満を含むことを意味する。いくつかの実施形態では、ある添加剤が、ミセルの安定性を高め得る。一実施形態では、界面活性剤をミセル中に（例えば、約０．２５重量％〜約２．５重量％）含有させることができる。例えば、適切な界面活性剤として、ポリエチレングリコール共役ジステアロイルホスファチジル−エタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）のような負電荷のリン脂質が挙げられ得る。
【００３４】
ミセル処方物を使用する治療
ミセルを医薬溶液に処方し、患者に投与することができる。医薬溶液処方物は、必要量の１７−ＡＡＧの、許容し得る時間内、例えば、約１０分〜約３時間、一般には約１〜約２時間、例えば約９０分以内での体内への送達を可能にする。
【００３５】
投与は、非経口、例えば、輸液、注射またはＩＶによって行うことができ、患者は、哺乳類、例えばヒトであってもよい。投与時には、ミセルは無処理で循環し、個々のポリマー鎖に解離し、活性剤を放出し（拡散あるいはミセル解離によって）、組織内に分布し、および／または腎クリアランスを経ることができる。これらの事象の予定は、はっきりとは予測することはできず、これらの事象は、１７−ＡＡＧのような活性剤の抗腫瘍活性に有意に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、薬物負荷ミセルは、腫瘍間質に血管外遊出することができる。活性剤含有ミセルは、加水分解して１７−ＡＡＧを放出することができ、次いで、該ミセルから活性剤を放出することができる。次いで、活性剤は腫瘍細胞に拡散することができる。本発明の別の態様は、漏出性脈管構造を横断し、腫瘍細胞に取り込まれ、腫瘍細胞の増殖を阻害し、および／または腫瘍細胞を死滅させるミセルを包含する。
【００３６】
疾患、障害または状態は、１７−ＡＡＧを含有するミセルの医薬処方物を投与することによって処置することができる。本明細書に記載する組成物の投与により、患者における癌性増殖の大きさおよび／または数を減らし、そして／または１つ以上の対応する関連症状を減らすことができる。本明細書に記載された方法によって有効量を投与した場合、本発明の組成物は、癌細胞増殖の阻害、癌または腫瘍の大きさの縮小、さらなる転移の阻止、腫瘍血管新生の阻害および／または癌性細胞の死のような病理学的に適切な応答を生み出すことができる。以下に記載するような、上記の疾患および状態を処置する方法は、治療有効量の本発明の組成物を患者に投与することを含む。該方法は、必要に応じて、例えば、毎日、毎週または毎月、あるいはこれらを何度か繰り返してもよい。
【００３７】
処置することができる状態としては、頭および首の癌を始めとする過剰増殖性疾患（これには、頭、首、鼻腔、副鼻腔、鼻咽頭、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺の腫瘍、およびパラガングリオーマが含まれる）；肝臓および胆樹の癌、特に肝細胞癌；腸の癌、特に結腸直腸癌；卵巣癌；小細胞肺癌および非小細胞肺癌；前立腺癌；膵臓癌；乳癌肉腫、例えば、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、胎児性横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、神経線維肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫および胞状軟部肉腫；中枢神経系の腫瘍、特に脳癌；および／またはリンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ系統大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはＴ細胞未分化大細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
細胞の過剰増殖を特徴とする非癌状態も、本明細書に記載の方法を使用することによって処置することができる。例えば、１７−ＡＡＧを、細胞の過剰増殖を特徴とする状態を処置するために、本明細書に記載する方法に従って投与することができる。該非癌状態、障害または疾患の例として、萎縮性胃炎、炎症性溶血性貧血、移植片拒絶反応、炎症性好中球減少症、水疱性類天疱瘡、セリアック病、脱髄性神経障害、皮膚筋炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎および／またはクローン病）、多発性硬化症、心筋炎、筋炎、鼻ポリープ、慢性副鼻腔炎、尋常性天疱瘡、原発性糸球体腎炎、乾癬、外科手術後の癒着、狭窄または再狭窄、強膜炎、強皮症、湿疹（アトピー性皮膚炎、刺激性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎を含む）、歯周疾患（すなわち、歯周炎）、多発性嚢胞腎疾患、およびＩ型糖尿病が挙げられるが、これらに限定されない。他の例として、脈管炎、例えば、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎、高安動脈炎）、結節性多発動脈炎、アレルギー性血管炎および肉芽腫症（チャーグ・ストラウス病）、多発性血管炎重複症候群、過敏性血管炎（ヘノッホ・シェーンライン紫斑病）、血清病、薬物誘発性脈管炎、感染性脈管炎、腫瘍性脈管炎、結合組織障害に関連する脈管炎、補体系の先天性欠損に関連する脈管炎、ウェゲナー肉芽腫症、川崎病、中枢神経系の脈管炎、バージャー病および全身性硬化症；胃腸管疾患、例えば、膵臓炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍性直腸炎、原発性硬化性胆管炎、特発性のものを含む任意の原因の良性狭窄（例えば、胆管、食道、十二指腸および小腸または大腸の狭窄）；呼吸器疾患（例えば、喘息、過敏性肺臓炎、石綿肺症、ケイ肺症、および他の形態のじん肺症、慢性気管支炎および慢性閉塞性気道疾患）；鼻涙管疾患（例えば、特発性のものを含む全ての原因の狭窄）；耳管疾患（例えば、特発性のものを含む全ての原因の狭窄）；ならびに神経性疾患、真菌性疾患、ウィルス感染および／またはマラリアが挙げられる。
【００３９】
用語「処置する」および「処置」は、ヒトを含む哺乳類を、その状態を直接または間接的に改善する目的で、医療扶助に供する任意のプロセス、作用、適用、療法などを意味する。処置は、一般に、有効量の本明細書に記載するミセル組成物の投与を意味する。
【００４０】
用語「有効量」または「治療有効量」は、状態、疾患または障害の症状の１つ以上をある程度軽減すること、例えば、１）癌細胞の数の減少、２）腫瘍の大きさの縮小、３）癌細胞の周辺器官への浸潤の阻害（すなわち、ある程度緩慢にする、好ましくは停止する）、３）腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度緩慢にする、好ましくは停止する）、４）腫瘍増殖のある程度の阻害、５）該障害に関連する１つ以上の症状をある程度軽減または減らすこと、および／または６）活性剤の投与に伴う副作用を軽減または減らすこと（これらに限定されない）に必要な治療剤の量を特定するものである。
【００４１】
用語「阻害」は、腫瘍形成、腫瘍増殖または腫瘍細胞増殖をいう場合、特に、原発性または二次性腫瘍の出現の遅延、原発性または二次性腫瘍の発達の遅延、原発性または二次性腫瘍の発生の減少、疾患の二次的影響の遅延または重症度の減少、腫瘍増殖の阻止、および腫瘍の退行によって評価してもよい。極端な場合、完全な阻害は、予防または化学的予防ということができる。阻害は、処置をしない場合に起こり得る進行に対して、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％または約９０％の阻害であり得る。
【００４２】
本発明の医薬溶液処方物を使用して、１７−ＡＡＧおよび／または抗癌剤または細胞毒性剤のような活性剤を、投与の回数に応じて、約４ｍｇ／ｍ２〜約４０００ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与することができる。一実施形態では、１７−ＡＡＧのための投薬計画は、１週あたり約４００〜５００ｍｇ／ｍ２、あるいは１週あたり約４５０ｍｇ／ｍ２とすることができる。Ｂａｎｅｒｊｉら，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２２，１９９（２００３，ａｂｓｔｒａｃｔ７９７）参照。あるいは、１週あたり約３００ｍｇ／ｍ２〜約３２５ｍｇ／ｍ２、または約３０８ｍｇ／ｍ２の用量を患者に投与することができる。Ｇｏｅｔｚら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３８（Ｓｕｐｐ．７），Ｓ５４−Ｓ５５（２００２）参照。別の投薬計画として、週に２回の注射であって、約２００ｍｇ／ｍ２〜約３６０ｍｇ／ｍ２（例えば、患者の状態の重症度および健康状態によって、約２００ｍｇ／ｍ２、約２２０ｍｇ／ｍ２、約２４０ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約２６０ｍｇ／ｍ２、約２８０ｍｇ／ｍ２、約３００ｍｇ／ｍ２、約３２５ｍｇ／ｍ２、３４０ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２または約３６０ｍｇ／ｍ２）が挙げられる。ドセタキセルのような別の薬剤との併用療法のために使用することがでドセタキセルのような他の薬剤との併用療法のために使用することができる投薬計画は、２種類の薬物を３週おきに投与することであり得、１７−ＡＡＧの用量は、各投与につき、約５００ｍｇ／ｍ２〜約７００ｍｇ／ｍ２、あるいは最大約６５０ｍｇ／ｍ２である。
【００４３】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセルにおける薬物の組合せ
１７−ＡＡＧに加えて他の活性剤を、同じ準備手順で本明細書に記載したミセル中にカプセル化することができる。例えば、パクリタキセル含有ミセルを、１７−ＡＡＧ含有ミセルと共に処方物中に使用することができる（各ミセルが異なる活性剤を含有する「単純に混合された」ミセル処方物）。従って、本発明は、１７−ＡＡＧと第２活性剤とを含む組成物であって、１７−ＡＡＧと第２活性剤との両方がＰＥＧ−ＰＬＡミセル内でカプセル化によって水溶液中に可溶化されている組成物を提供する。例えば、該組成物は、パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧを、単純に混合されたミセル処方物中に含有することができる。また、１７−ＡＡＧおよび第２活性剤の両方がミセル調製手順で溶解している場合も処方物を調製することができ、この処方物は、１７−ＡＡＧおよび第２活性剤の両方を含有する個々のミセルを形成し、その結果、１個以上のミセルが２種の異なる活性剤を含有する「物理的に混合された」ミセルを提供する。
【００４４】
従って、１７−ＡＡＧは、他の活性剤（例えば、抗癌剤または細胞毒性剤）と組み合わせて（例えば、本明細書に記載するようなミセルにおいて）投与することができ、他の活性剤としては、アルキル化剤、血管新生阻害剤、代謝拮抗薬、ＤＮＡクリーバー、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ干渉物質、ＤＮＡ小溝結合剤、熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、微小管安定剤、ヌクレオシド（プリンまたはピリミジン）類縁体、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤が挙げられる。具体的な活性剤として、β−ラパコン、１７−ＤＭＡＧ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カリチアマイシン、カリスタチンＡ、カンプトセシン、カペシタビン、カルゼレシン、ＣＣ−１０６５、シスプラチン、クランフェヌル、クリプトフィシン、シクロスポリンＡ、ダウノルビシン、ジアゼパム、ディスコデルモリド、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ディネマイシンＡ、エポチロン、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲルダナマイシン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、インターフェロン、インターロイキン、イトラコナゾール、イリノテカン、レプトマイシンＢ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、オキサリプラチン、パクリタキセル、スポンギスタチン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、テニポシド、チオテパ、トポテカン、トリコスタチンＡ、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンが挙げられる。また、同時投与される抗癌剤または細胞毒性剤も、プロテインキナーゼ阻害剤であり得る。プロテインキナーゼ阻害剤の例としては、ラパマイシン；キナゾリン、特に４−アニリノキナゾリン類、例えば、イレッサ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−４−キナゾリンアミン）またはタルセバ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−ｍ−エトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン一塩酸塩）；フェニルアミノピリミジン類、例えば、グリベック（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］−ベンズアミド）；ピロロ−またはピラゾロピリミジン類、例えば、ＢＩＢＸ１３８２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ−２−（１−メチル−４−ピペリジニル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン）；インドール類またはオキシインドール類、例えば、セマキシニブ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン）；ベンジリデンマロノニトリル類；フラボン類、例えば、フラボピリドール（Ａｖｅｎｔｉｓ；２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；スタウロスポリン類、例えば、ＣＥＰ−７０１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）；抗体、例えば、ハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；および／またはリボザイム、例えば、アンギオザイム（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
【００４５】
１７−ＡＡＧおよびある他の活性剤の組合せは、相乗的抗癌活性を有する。例えば、相乗効果は、１７−ＡＡＧをパクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドならびに先に挙げた数種の他の薬剤と組み合わせて投与した時に観察される。種々の実施形態で、これらの２種の薬剤を同じミセル中に組み合わせる（物理的に混合された処方）ことができ、あるいはパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧを別々のミセル中に別個に含有するミセルを、患者への投与のために、１つの治療用処方物に組み合わせる（単純に混合された処方）こともできる。他の実施形態では、１７−ＡＡＧミセルを１７−ＡＡＧ以外の薬物の投与より前、それと同時もしくはその後に投与することができる。１７−ＡＡＧ以外の薬物は、本明細書に記載するミセルによるカプセル化による投与を始めとする、任意の効果的な手段によって投与することができる。１７−ＡＡＧは、有効な処置のために、他の薬物の必要量が少なくなるように、患者を感作することができる。
【００４６】
さらに、二重薬剤ミセルは、薬物負荷が単剤ミセルで得られる最大負荷の約２０％以内になるように調製できることが、意外にも見出された。この驚くべき結果に加えて、コア内に両方の活性剤を含有するＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、一方の活性剤の損失に対する安定性が高いことが見出された。従って、２種の活性剤を含有するミセルでは、該活性剤は、活性剤の放出に関して、ミセルの安定性を増すような様式で相互作用し得ることが見出された。従って、１７−ＡＡＧ、およびパクリタキセル、ドセタキセルまたはエトポシドのような第２活性剤を含有するミセルは、該活性剤を１つしか含有しないミセルよりも安定であることが見出されている。
【００４７】
これらの発見は、治療用処方物中での相当量の有機溶剤または界面活性剤の使用に頼ることなく、Ｈｓｐ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）および化学療法剤（例えば、特にパクリタキセル、ドセタキセルまたはエトポシド）の投与を可能にする。臨床試験では、１７−ＡＡＧとパクリタキセルとの組合せは、ＤＭＳＯと、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬを必要とし、これはすなわち４成分混合剤である。このような処方物の成分は、患者に重大な望ましくない副作用を引き起こすことがあることがわかっている。また、２つの薬物を混合して一緒に輸液することはできず、同時薬物投与によって薬物の相乗効果が得られることはない（Ｓｏｌｉｔら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００３；６３：２１３９−２１４４）。パクリタキセル／ＰＥＧ−ＰＬＡは、安全に患者に投与できることが知られている。例えば、Ｇｅｎｅｘｏｌ−ＰＭは、現在臨床試験のフェーズＩＩにある。また、１７−ＡＡＧを、ミセルの数をあまり増加させる必要なく、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルに共負荷することができる。このような処方物は、有機溶剤または他の界面活性剤の使用を避けることもできる。
【００４８】
従って、本明細書に記載する両親媒性ブロック共重合体（ＡＢＣ）ミセル系を使用して、種々の状態を処置することができる。薬物相乗作用は、ミセルの使用によって達成することができ、ミセル送達ビヒクル内に薬物をカプセル化しているため、投薬計画の毒性を低下させることができる。活性剤の組合せを、該ミセルにおいて使用することができる。単純混合および物理的混合処方物は、２種の異なる活性剤の投与を、例えばＩＶ輸液によって、１回に投与することを可能にする。ある有用な組合せおよび手法は、米国特許第７，２２１，５６２号明細書（Ｒｏｓｅｎら）に記載されている。本発明の実施形態で使用することができる他の両親媒性共重合体としては、米国特許第４，７４５，１６０号明細書（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌら）に記載されたものが挙げられる。
【００４９】
本明細書に開示されるミセル組成物は、１７−ＡＡＧの負荷能力が予想外に高く、制御放出処方物を調製するのに使用することができる、改良された処方物を提供する。また、薬物負荷二重活性ミセルは、単一薬剤ミセルに近いか、それと同等の薬物負荷能力を持つことも見出された。さらに、二重活性ミセル中の活性剤同士の相互作用は、そのようなミセルの安定性を高め得る。例えば、１７−ＡＡＧは、単純混合処方物および物理的混合処方物の両方について、二重薬剤ミセル処方物の安定剤として作用することができる。
【００５０】
以下の実施例は、上記の発明を説明するためのものであり、その範囲を狭めるものと解釈すべきではない。当業者であれば、実施例は、本発明を実施し得る種々の他の様式を提示していることを容易に理解するであろう。本発明の範囲内で、多くの変更および修正がなされ得ることが理解されよう。
【実施例】
【００５１】
実施例１． ＰＥＧ−ＰＬＡミセルにおける１７−ＡＡＧカプセル化
１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシンの調製 （１７−ＡＡＧ）をゲルダナマイシン（ＧＡ）から実験室で合成した（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）。つまり、１００ｍｇのＧＡ（０．２ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。次に、５当量のアリルアミン（５７．１ｇ／ｍｏｌ，ｄ＝０．７６３ｇ／ｍＬ）をフラスコに滴下した。反応系を、弱光下、室温（ＲＴ；約２３℃）で、ＴＣＬ分析が完了するまで（約２日間）（９５：５ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ，Ｒｆ０．２１）攪拌し、ヘキサン（３×）で沈殿させ、２０００ｇ’ｓで１５分間遠心分離し、蒸発乾固した。収量：９５ｍｇ、９５％；ＭＳ ｍ／ｚ ５８４（Ｍ−）；1HNMR (CDCl3) d 0.99 (m, 6H, 10-Me, 14-Me), 1.25(t, 1H, H-13), 1.60-1.85 (br m, 6H, H-13, H-14, 8-Me), 2.05 (s, 3H, 2-Me), 2.46(br m, 2H, H-15), 2.83-2.90 (br m, 3H, H-10), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.36 (s,3H, OMe), 3.40 (t, 1H, H-12), 3.58-3.68 (br m, 2H, H-11, H-23), 4.31 (d, 1H,H-7), 5.10 (br s, 1H), 5.21-5.55 (br m, 3H, H-9, H-24), 5.86-5.99 (br t, 2H,H-5, H-23) , 6.59 (t, 1H, H-4), 6.94 (d, 1H, H-3), 7.28 (br s, 1H, H-19).
薬物負荷ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの調製および特性評価
Ｋａｔａｏｋａおよび共同研究者（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ６２（１−２）（１９９９）８９−１００）の手順に従って、１７−ＡＡＧを、ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）とともにジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に溶解し、Ｈ２Ｏに対して透析することによって処方した。例えば、５ｍｇの１７−ＡＡＧおよび４５ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＡ（１０：９０ｗ／ｗ）を１０ｍＬのＤＭＡｃに溶解した。得られた溶液を、３５００ＭＷＣＯチューブ（ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ）中で、Ｈ２Ｏに対して透析した。得られたミセルを５０００ｇ’ｓで１０分間遠心分離して、取り込まれていない薬物を沈殿させた。ミセルへの取込みを、水性ＧＰＣ（Ｓｈｏｄｅｘ ＳＢ−８０６Ｍ）を使用して、ミセルの屈折率および１７−ＡＡＧの吸光度（ＵＶλ３３２）に基づく等価保持時間を確認することによって検証した。ミセル溶液を、減圧、室温下で回転蒸発によって濃縮し、次いで遠心分離（５０００ｇ’ｓで１０分間）した。図８に、単離されたＰＥＧ−ＰＬＡミセルの透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）画像（１８，０００×）を示す。
【００５２】
ミセル中に負荷された薬物の量を、逆相ＨＰＬＣ（Ｓｈｏｄｅｘ Ｃ１８カラム、６５−８２．５：３５−１７．５ＭｅＯＨ〜５５％ＭｅＯＨ＋０．２％ギ酸勾配、４０℃、３３２ｎｍ検出）によって、１７−ＡＡＧの曲線下面積（ＡＵＣ）（１７−ＡＡＧ検量線に基づく）を監視することによって測定した。薬物が存在する場合としない場合のＰＥＧ−ＰＬＡミセルの有効径を、ガウス強度装置を備えるＢｒｏｏｋｈａｖｅｎ動的光散乱装置（１００ｍＷ、５３２ｎｍレーザー）を用いて測定した。これらのＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＬＡミセルの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を、種々の濃度（３×１０−５ｍｇ・ｍＬ−１〜１ｍｇ・ｍＬ−１）のＰＥＧ−ＰＬＡの存在下で、ピレンの３３９／３３４ｎｍ励起比を測定することによって決定した。
【００５３】
つまり、ＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＬＡミセルを、連続的に希釈して先に記載したように調製し、０．６μＭのピレンを用いて８０℃で１時間培養し、暗所に室温で１５時間放置し、ピレンの蛍光発光を３９０ｎｍで測定した（ＲＦ−５３０１ＰＣ分光蛍光光度計、Ｓｈｉｍａｄｚｕ）。ピレンは、微小環境極性に応答して周知の光物理的変化を受ける（Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ．，Ａ Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐ．１１８（１９９６）１−３９）。ピレンが優先的にＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＬＡミセルの疎水性コアに分割すると、ＣＭＣの急増が３３９／３３４ｎｍ励起の比内で起こる（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ７７（１−２）（２００１）１５５−１６０）。
【００５４】
実施例２． ＰＥＧ−ＰＬＡミセルを使用する、１７−ＡＡＧのＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）非含有処方物：ラットにおける特性評価および薬物動態
１７−ＡＡＧを可溶化するためのナノ担体としてのポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＥＧ−ＰＬＡ）で構成される分解性両親媒性ジブロックポリマーのような両親媒性ブロック共重合体（ＡＢＣ）ミセルの調製を、実施例１に上記した。この実施例では、これらのナノ担体の薬物動態挙動を、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００中の１７−ＡＡＧの現在の処方物と比較する。
【００５５】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセル薬物放出実験 先に記載した温度およびｐＨ制御の修正（Ｆｏｒｒｅｓｔら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１１６（２）（２００６）１３９−１４９）を加えて、放出実験は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇおよび共同研究者の方法（Ｓｏｏら、Ｌａｎｇｍｕｉｒ１８（２００２）９９９６−１０００４）をもとにした。ミセル薬物溶液を、先に記載したように、１０％ｗ／ｗ薬物を含む０．３ｍＭのＰＥＧ−ＰＬＡポリマーで調製し、ミセル溶液の２．０ｍＬを、１０，０００個のＭＷＣＯ透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）（ｎ＝３）に注入した。透析カセットを、よく混合した、温度３７℃に調整した水浴中に配置し、浴槽水を１５〜２０分ごとに新しくした。別個に、コンピュータ制御下にあるぜん動ポンプから５０ｇ／Ｌの二塩基性および一塩基性リン酸塩溶液を注入し、ｐＨを７．４±０．１に維持した（一体化された装置）。一定の時点で、必要であれば、透析カセット内容物をｄｄＨ２Ｏで２ｍＬとし、１００μＬのアリコートを取り除いた。これを１００μＬのＭｅＯＨと混合し、該混合物の４０μＬを逆相ＨＰＬＣ（ＳｈｏｄｅｘＣ１８カラム；６５−８２．５：３５：１７．５のＡ〜Ｂ、ここで、Ａ：ＭｅＯＨおよびＢ：５５％ＭｅＯＨ＋０．２％ギ酸；４０℃；３３２ｎｍ検出）によって分析した。
【００５６】
インビトロ細胞毒性実験． ＰＣ−３ヒト前立腺細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１４３５）をＲＰＭＩ１６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）で成長させ、ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−２２）をＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）で培養した。ここで、両方とも、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μｇ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン（Ｃａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）、および２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｃａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が添加されていた。細胞株を、９０μＬの適切な培養液中で、１ウェル当たり３０００細胞の初期密度で９６ウェルプレートに置き、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃に維持した。２４時間後、ＤＭＳＯ中の１７−ＡＡＧを成長培養液で１０倍に希釈し、１０μＬのアリコート（１％ｖ／ｖの最終ＤＭＳＯ濃度）としてウェル（３つのウェルが２組、ｎ＝６）に加えた。薬物負荷ミセルまたはミセル単体を、ミリＱ水で処方した（ＤＭＳＯの透析に倣って、ミセルを形成した）。ウェルへの添加前にさらに試料を希釈する必要はなかった。細胞を全ての試験化合物とともに７２時間培養した。その後、細胞の代謝速度をレサズリン染料（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定した。データをヒル−スロープ曲線（Ｓｉｇｍａ Ｐｌｏｔ９．０、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）に合わせることによって、対照に対して細胞増殖を５０％阻害する濃度（ＩＣ５０）を測定し、別々の測定の平均値±標準偏差として報告する。
【００５７】
薬物動態実験． １７−ＡＡＧの標準的なビヒクルをＺｈｏｎｇら（米国特許出願公開第２００５／０２５６０９７号公報）に従って処方した。ここで、注入の直前に２：１：１ ＥｔＯＨ：ＣｒＥＬ：ＰＥＧ４００中の１５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧを、３ｍｇ／ｍＬに希釈した。これらのミセルの取込みおよび薬物放出の方法は、記載されている方法に僅かな変更を加えて行った（Ｆｏｒｒｅｓｔら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１１０（２）（２００６）３７０−３７７）。オスのスプラーグ・ドーレイラットに右頸静脈経由でカニューレを挿入し、新しい処方物（１．５ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ−ＰＬＡ中の１７−ＡＡＧ）またはＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方物のいずれかを、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇ（各処置群についてｎ＝５）で静脈内に投薬した。投薬後、連続した血液試料（約０．３０ｍＬ）および尿試料を２４時間まで採取した。
【００５８】
１００μＬの血清または尿に、１００μＬの内部標準を加えた（２５μｇ／ｍＬのゲルダナマイシン）。試料を１ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出し、有機画分を乾燥、濃縮した。残渣を４００μＬの初期移動相中に溶かし、遠心分離し、１５０μＬをＲＰ−ＨＰＬＣに注入した。Ａ：５０ｍＭの酢酸＋１０ｍＭのＴＥＡ、およびＢ：ＭｅＯＨ＋１０ｍＭのＴＥＡ（０〜３分 ４０％ Ｂ、３．０１〜１１分 ８０％ Ｂ、１１．０１〜１８分 ４０％ Ｂ）中で、１７−ＡＡＧを、３０５ｎｍの内部標準を用いて、Ｇｅｎｅｓｉｓ３μｍＣ１８ ３３ｍｍ×４．６ｍｍカラム、１ｍＬ／分を使用して、３３２ｎｍで分析した。薬物動態パラメータを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ソフトウェア（ｖｅｒ．５．０１）および非区画モデリングを使用して計算した。動物実験は全て「実験動物の飼育に関する原則」（ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．８５−２３，１９８５年に改訂）に従って行った。
【００５９】
生体内分布実験． １７−ＡＡＧの組織内分布に対する処方物の効果を評価するために、ラット（各群につきｎ＝５、２００〜２４０ｇ）にカニューレを挿入し、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００中の１７−ＡＡＧ、またはＰＥＧ−ＰＬＡミセル中の１７−ＡＡＧを静脈内に投与した。これらは全て、先行する薬物動態実験と同等であった。処方物の注入から３時間後、各動物（各時点に関してｎ＝５）を麻酔し、心穿刺によって放血した。脳、肺、心臓、肝臓、ひ臓、腎臓、膀胱、筋肉および骨、ならびに全血および血清の試料を収集した。組織試料をペーパータオルでふき、氷冷した生理食塩水中で洗浄し、ビンに入れて過剰の流体を除去し、秤量し、液体窒素中で迅速に冷凍し、液体窒素下、乳鉢および乳棒で微粉末に粉砕し、ＨＰＬＣ分析により薬物濃度を評価するまで−７０℃で保存した。
【００６０】
データ分析． 収集したデータは、平均、および平均の標準誤差（平均±ＳＥＭ）、または別途に指示がある場合は、平均および標準偏差（平均±ＳＤ）として示す。可能な場合は、ＮＣＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｏｗｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＣＳＳ、Ｋａｙｓｖｉｌｌｅ、ＵＴ）を使用して、データの統計学的有意性を分析した。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を、不対試料用に使用した。ｐ＜０．０５の値は、統計的に有意であると考えられる。
【００６１】
結果および検討
ゲルダナマイシン（ＧＡ）は、水溶性が低い。一般的な医薬担体中のＧＡ処方物は、肝毒性が著しく高い。これは、肝臓が主な排出経路であるためである。１７−ＤＭＡＧおよび１７−ＡＡＧのような類縁体は、ＧＡより低い肝毒性を示すが、一つにはそれらの広い分布のため、非特異的毒性の上昇を特徴とする。従って、ナノ担体処方物が強く求められる。生体適合性、製造の容易さ、動力学的および熱力学的安定性、および大量の親油性薬物を可溶化するＰＥＧ−ＰＬＡミセルの能力によって、本発明のミセル処方物と組み合わせて使用することができるナノ担体系が提供され得るかどうかを、これらの実験は決定しようとしている。種々の量の１７−ＡＡＧが、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルに可溶化された（表１）。
【００６２】
【表１】
１７−ＡＡＧの送達のための高い溶解性およびきつい界面活性剤の欠如は、このミセル処方物が、ＣｒＥＬを含む現在の送達ビヒクルよりもはるかに優れていることを実証している。
【００６３】
ミセルの物理的特性評価．動的光散乱（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により、薬物を含有しない平均寸法２４２±５ｎｍのＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル、および薬物を負荷した平均寸法２５７±２ｎｍのＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルは、最大１．５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧを可溶化することが実証された。ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）は、３５０ｎＭの低い臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する（図１（ｂ））ことがわかり、これは、以下のＧｉｂｂｓのミセル形成の自由エネルギーに示されるように、該ミセルの熱力学的安定性が高かったことを示唆する。
【００６４】
ΔG＝RTln(CMC)
ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルに関してここで報告した大きさおよびＣＭＣは、Ｋａｔａｏｋａらによって先に報告されているものよりもかなり大きい（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ６２（１−２）（１９９９）８９−１００）。ミセルへの１７−ＡＡＧのカプセル化は、有機溶剤としてＤＭＳＯを使用して行われていたが、透析法でミセルを形成する場合は、ＤＭＡｃの使用が有利であることがわかった。１７−ＡＡＧを可溶化するＰＥＧ−ＰＬＡミセルの適合性を評価するために、１０％ｗ／ｗで負荷実験を行った。
【００６５】
表１における１７−ＡＡＧ負荷の報告値は、ＰＥＧ−ＰＬＡに基づく１７−ＡＡＧの１０％ｗ／ｗ負荷を示す。薬物のミセルへの取り込みは、水性ＧＰＣ（Ｓｈｏｄｅｘ ＳＢ−８０６Ｍ）を使用して、屈折率（ミセル）および１７−ＡＡＧ（ＵＶλ３３２）において、等価保持時間を監視することによって検証した。ＰＥＧ−ＰＬＡに対する１７−ＡＡＧのモル比は、０．７３±０．０９〜１の範囲であり、１７−ＡＡＧ負荷効率は１９±３％ｗ／ｗであった。回転蒸発による濃縮の後、０．３ｍＭのＰＥＯ６０００−ｂ−ＰＤＬＬＡ１２０００中の１７−ＡＡＧの最大溶解度は、約１．５±０．２ｍｇ／ｍＬであり、１７−ＡＡＧに比べて約１５０倍改善した（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに従い約１０μｇ／ｍＬ）。ラパマイシンに関して先に報告したように、薬物に対して１：１の比のα−トコフェロールを取り込むことにより、負荷を改良することが試みられた（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１１０（２）（２００６）３７０−３７７）が、得られたミセルは大きく（＞５００ｎｍ）、不安定であった。４℃でも、４〜５時間後に、薬物は溶液から析出した。ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：１２ｋＤａ）ミセル中の薬物負荷は、ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル（１．５ｍｇ／ｍＬ）、およびα−トコフェロール含有および非含有の場合と比べて、非常に少ない（＜０．５ｍｇ／ｍＬ）こともわかった。
【００６６】
１７−ＡＡＧ放出実験．正常な体温でのＰＥＧ−ＰＬＡミセルからの１７−ＡＡＧのインビトロ放出動力学を、３７℃の水に対する薬物負荷ミセルの透析によって調べた。１７−ＡＡＧの溶解性が低いことから、放出媒体は、浴を連続的にパージしなくても素早く飽和していたであろう。従って、放出データの分析における制約とは、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルから直接１７−ＡＡＧの放出を測定できないことであった。一旦薬物がＰＥＧ−ＰＬＡミセルから放出されると、薬物は透析膜を通って拡散するしかなく、第２の拡散バリアを生じて分析を複雑にした。透析膜が放出速度全体に大きな影響を与えるかどうかを測定するために、カセットに遊離の１７−ＡＡＧ（水で希釈する前に、最小量のＭｅＯＨに初期に溶解させたもの）を負荷し、等価保持時間を測定した。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、約４時間の半減期での放出を示し（図２）、これは薬物のみの場合と比べて２倍の改善であった。
【００６７】
インビトロ細胞毒性実験．ミセルにカプセル化された１７−ＡＡＧのＭＣＦ−７ヒト乳癌およびＰＣ−３前立腺癌細胞に対する増殖阻害活性を、レサズリン染料を使用してインビトロで測定し、代謝活性を検査した。１７−ＡＡＧは、ＭＣＦ−７における２２±１４ｎＭのＩＣ５０、およびＰＣ−３細胞における７４±１４ｎＭのＩＣ５０のサブマイクロモル濃度で活性であった。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって報告された範囲内の全ての数字は、それぞれ、ＭＣＦ−７についてのＩＣ５０として１２．６ｎＭ、およびＰＣ−３についての５０．１ｎＭであった。比較として、薬物にカプセル化されたミセルは、ＭＣＦ−７においてＩＣ５０が１６０±５６ｎＭ、ＰＣ−３細胞において５３６±１３ｎＭであった（表２）。
【００６８】
【表２】
ＩＣ５０値におけるこの相違は、ミセルからの長時間にわたる薬物の放出のため、および放出と、閉ざされた系内のミセルのコアへと戻る薬物分配との間で達した偶発的な均衡状態のためであり得る。ミセル単独では、調べた細胞株内において明らかな毒性は示さなかった（ＩＣ５０＞１０，０００ｎＭ）。カプセル化された薬物は、１７−ＡＡＧより活性が低いように思われるが、ナノカプセル化は、腫瘍蓄積が促進されるため、インビボでの１７−ＡＡＧ送達の全体的な効力を増大させると考えられる。同じように、Ｌｉらは、ポリ−（Ｌ−グルタミン酸）−パクリタキセル複合物の効力が、インビトロではパクリタキセルよりも有意に低かったが、腫瘍中で蓄積が促進されるため、インビボでは優れた活性を実証したと報告した（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１９９８）２４０４−２４０９）。
【００６９】
薬物動態実験．ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方物と比較した、ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル処方物の薬物動態学的プロファイルの相違を図３に示す。対照処方物と比べたミセル処方物からの２４時間以内の１７−ＡＡＧの効果的な定量化（定量化限界値を下回る前の最大１２時間のみの効果的な定量化）によって観察されるように、ミセル処方物は、注入から２４時間後に血清ＡＵＣの増加を示した（図３ａ）。また、ミセル処方物は、２４時間後、尿中に存在する１７−ＡＡＧの増加（図３ｂ）、３６時間にわたる腎クリアランスのより早い速度（図３ｃ）、および注入から４８時間後の尿中の高い薬物濃度（図３ｄ）も示した。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの血清の曲線下面積（ＡＵＣ）は、標準的な処方物の１．３倍であった。１０ｍｇ／ｋｇ（表３）で、ミセル処方剤の総クリアランス（総ＣＬ）は、標準的なビヒクルと比べて１．３倍減少し、ミセル処方剤の薬物の腎クリアランス（腎ＣＬ）は、より高い（１．５倍）肝クリアランス（肝ＣＬ）を示した標準的なビヒクルと比べて増加した（４．３倍）。
【００７０】
【表３】
ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル処方物では、薬物の血清半減期（ｔ１／２）が２．７倍延長した。対照の標準的なビヒクル処方物に比べて、総クリアランスの低下（１．３倍減少）によって観察されたように、長時間血中に存在するため、ミセル処方物の分布容積（Ｖｄ）の増加（１．７倍）、および血清における半減期の延長（２．７倍延長）および尿中における半減期の延長（１．２倍延長）が観察された。ミセル処方物に関する薬物の腎クリアランス（腎ＣＬ）は、標準ビヒクルに比べて増加し（４．３倍）、肝クリアランス（肝ＣＬ）がより高い（１．５倍）ことを示した。最後に、２種の処方物の間に、平均滞留時間（ＭＲＴ）の有意な相違はないことがわかった。
【００７１】
２種の処方物の間の薬物動態パラメータ全体には大きな相違はないが、ここでの結果により、好ましくない副作用における大きな減少が、１７−ＡＡＧ ＰＥＧ−ＰＬＡミセルナノ担体処方物によってもたらされ得ることが示されている。標準的な処方物は、ＣｒＥＬ、すなわち患者にアナフィラキシーを起こすことが知られている有害な界面活性剤を含む。ＣｒＥＬ処方物の使用は、抗ヒスタミン類およびステロイド類で予備処置を必要とする（Ｓｙｄｏｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、２００６；１０３（４６）、１７４０８−１３）。本発明によるミセル処方物は、そのような予備処置を必要としない。
【００７２】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセル中の１７−ＡＡＧは、ラットにおいて良好な忍容性を示した。該実験の期間中、激しい毒性の徴候は観察されなかった。また、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方物について観察された２４時間以内の死亡率が３５％であったのに比べて、ナノ担体処方物について観察された死亡率は０であった。従って、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルナノ担体処方物中の１７−ＡＡＧは、ＥｔＯＨおよびＣｒＥＬのような毒性薬剤を必要とすることなく、１７−ＡＡＧの薬物動態的性質を保持することができる。従って、該処方物は、癌治療において、有望な化学療法剤１７−ＡＡＧを使用する新しい方法を提供する。
【００７３】
生体内分布実験．定量可能な量の１７−ＡＡＧを、測定した全ての組織で観察した（図４（ａ））。組織採取を、１０ｍｇ／ｋｇの異なる処方物のＩＶ投与から３時間後に行った。対照処方物に関して、１７−ＡＡＧ濃度の最も高いものから最も低いものの順序は、肺＞腎臓＞肝臓＞ひ臓＞心臓＞脳＞膀胱＞骨＞筋肉＞血清＞全血であった。ミセル処方物に関して、最も高い濃度から最も低い濃度の順序は、肺＞腎臓＞肝臓＞ひ臓＞脳＞骨＞膀胱＞心臓＞筋肉＞血清＞全血であった。ミセル系は、１７−ＡＡＧの脳、心臓、および膀胱への組織内分布において、いくらかの違いを示したが、分析された他の組織においては、標準的な処方物に類似する濃度が見られた。ミセル処方物に関して、全ての組織における組織対血清比（Ｋｐ）の値（図４（ｂ））は、対照より低かった。標準的な処方物（ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００）およびミセル処方物にカプセル化された１７−ＡＡＧの投与後のＫｐ値（図４、下のパネル）は、脳、心臓、膀胱および全血に関して、統計的に相違し、このことは、組織の間で分配に何らかの優先性があることを示唆する（図４（ｂ））。いくつかの組織のうち、処方物間のＫｐ値の相違は、対照と本発明によるミセル処方物との間の担体の特性、分配、クリアランス、および１７−ＡＡＧの分布容積の相違を始めとするいくつかの要因に起因するものであろう。
【００７４】
結論
適切な処方物がないために、１７−ＡＡＧの臨床試験への移行が妨げられてきた。１７−ＤＭＡＧ（アルベスピマイシン）のようなより新しい誘導体は、水溶性に関連するいくつかの問題を克服している。しかし、肝臓によるこれらの誘導体の優先的かつ迅速なクリアランスは、腫瘍への薬物分布を限定し、そのため、薬物の効力を大きく制限している。有機共溶剤またはきつい界面活性剤を必要としない１７−ＡＡＧの処方物が調製されている。該処方物は、１．５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧをＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルに可溶化することができる。有機共溶剤または界面活性剤を必要としない１７−ＡＡＧの第２の処方物が調製されている。この処方物は、約５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧをＰＥＧ−ＰＬＡ（２：２ｋＤａ）ミセルに可溶化することができる。パクリタキセルのＰＥＧ−ＰＬＡミセルへのカプセル化に関する類似の研究は、このより安全なミセル処方物が、ＣｒＥＬを患者に投与した後に該薬物に関連する有害な副作用を最小限にできることを実証している。さらに、ナノスケールの寸法は、たとえ標的リガンドが存在しなくても、ＥＰＲ効果により薬物の腫瘍特異性にさらなる利点を与える。
【００７５】
実施例３．ポリマー組成物および薬物負荷
本発明によるある特定のミセルを、表４および５のデータに示すように調製した。
【００７６】
【表４】
表４で製造したミセルの各試料に関して、０．５ｍＬのアセトニトリル（ＡｃＣＮ）を使用して薬物およびポリマー（約６０℃で）を溶解し、その後溶液を濃縮し、０．５ｍＬの脱イオン水（ＤＷ）を加えてミセルを形成した。０．４５μｍ孔フィルターを使用して、ろ過によりミセルを単離した。パクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル（ＰＡＸ＋ＡＡＧ）に関して、薬剤のポリマーに対する比を、各薬剤の質量によって計算した。例えば、２ｍｇのパクリタキセルと２ｍｇの１７−ＡＡＧとを、５ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＡポリマー（２Ｋ−２Ｋ）で可溶化し、１：２．５の薬物：ポリマー比のミセルとした（すなわち、この比は、薬剤の合計ではなく、１つの薬剤の質量によって計算した）。
【００７７】
【表５】
表５は、パクリタキセル（ＰＡＸ）、１７−ＡＡＧ、または２つの薬剤を一緒に負荷してカプセル化した種々のＰＥＧ−ＰＬＡミセルの物理的安定性を示す。表中の値は、室温で蒸留水中に２４時間保存された後、ミセルによって保持された活性剤の量を示す。１７−ＡＡＧを単独で、またはパクリタキセルと組み合わせてカプセル化したミセルは、パクリタキセル単一薬剤ミセルよりも有意に安定であった。類似の安定性結果が、１７−ＡＡＧ／ドセタキセルまたは１７−ＡＡＧ／エトポシドの組合せを含有するミセルに関しても得られた（図１２〜１５参照）。図１０に、脱イオン水に溶解することができる薬物処方物の量（ｍｇ／ｍＬ）を示す。
【００７８】
５Ｋ：６Ｋ（それぞれＰＥＧ：ＰＬＡ）のブロックサイズのＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、パクリタキセル単独あるいは１７−ＡＡＧ単独を、約５ｍｇ／ｍＬで適切に可溶化する。しかし、パクリタキセルミセルは、パクリタキセルがミセルから析出することによって（例えば、パクリタキセルの水溶性の喪失）、１７−ＡＡＧミセルよりも速くミセルのコアから薬物を失った（２４時間で）。１７−ＡＡＧミセルは、特定の他の活性剤（例えば、パクリタキセル）だけを含むミセルよりも、有意に安定であり溶解性が高いことがわかった。従って、１７−ＡＡＧは、ミセル安定剤と考えることができる。
【００７９】
パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧの両方を同時にＰＥＧ−ＰＬＡミセルに負荷した場合、予想外の効果が見出された。これらのミセルにおいて、各薬物の可溶化は、各薬物を単独でＰＥＧ−ＰＬＡミセルに負荷した場合に得られるレベルに近づいた。例えば、５Ｋ：６Ｋミセルでは、両薬剤のそれぞれに関して、（薬剤のみの場合の約５ｍｇ／ｍＬと比較して）約４〜５ｍｇ／ｍＬの負荷が達成された。
【００８０】
これらの画期的な結果に加えて、両薬剤をコア内に含有するＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、非１７−ＡＡＧ活性剤の損失について安定性が高いことが示された（図１１参照）。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルのコア内の活性剤、例えば、１７−ＡＡＧとパクリタキセルとの間の相互作用により、ミセルの安定性が増すことが見出された。５Ｋ−６Ｋおよび１２Ｋ−６ＫのＰＥＧ−ＰＬＡを有するポリマーミセルは、ミセルの薬物：ポリマー比が１：７．５で、さらなる安定性を示した。同じ結果が、１７−ＡＡＧと共にドセタキセルまたはエトポシドを含有するミセルにも見られた。従って、１７−ＡＡＧ（Ｈｓｐ９０阻害剤および化学療法剤（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、テニポシドおよび／またはエトポシド）の組合せを、有機溶剤、界面活性剤などに頼ることなく投与することができる。
【００８１】
これらの結果を、ＰＥＧ−ＰＬＡミセル（ＰＥＧ−ＰＬＡ ５Ｋ６Ｋ、薬物：ポリマー比＝１：７．５）による、１７−ＡＡＧとエトポシド、ドセタキセルおよびパクリタキセルとの共可溶化の結果を示す図１０および１１にさらに示す。具体的には、図１０は、ＰＥＧ−ＰＬＡミセル中でのパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧを合わせた可溶化を示す。２Ｋ−２Ｋおよび１２Ｋ−３Ｋ ＰＥＧ−ＰＬＡから調製されたミセルは、薬物：ポリマー比が１：５未満で、より低い薬物可溶化結果をもたらした。５Ｋ−３Ｋ、５Ｋ−６Ｋおよび１２Ｋ−６Ｋ ＰＥＧ−ＰＬＡから調製されたミセルは、１：７．５の薬物：ポリマー比で、最も高い可溶化をもたらした。
【００８２】
エトポシドおよびドセタキセルは、パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧと同じ方法で、１７−ＡＡＧと共可溶化することができる。また、１７−ＡＡＧの存在下で、より多くのエトポシドが２４時間にわたって溶液中にとどまる。図１２〜１５に、水中でのＰＥＧ−ＰＬＡミセルからの薬物放出を始めとする、ある量の分解に起因する、第２活性剤（パクリタキセル、ドセタキセルまたはエトポシド）の析出時の光学密度の変化を示す。１７−ＡＡＧを含有するミセルは、この分解の発生を予防および／または阻害する。
【００８３】
図１２（ａ）〜（ｄ）に、パクリタキセル／１７−ＡＡＧミセルの溶解度、およびそれらの２４時間後の安定性（ＰＥＧ−ＰＬＡ ５Ｋ：６Ｋ、薬物：ポリマー比＝１：７．５）を示す。Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを、粒子径データを作成するために使用した。図１２（ｃ）は、２４時間後に、９８％を超えるＰＡＸと９７％を超える１７−ＡＡＧがミセル内に残留したことを示す。図１２（ｄ）は、２４時間後に、わずか８％のＰＡＸがＰＡＸ単独ミセル中に残留したことを示し、これは、１７−ＡＡＧの存在が、物理的に混合されたミセルに対して有意な安定性を提供することを示唆している。
【００８４】
類似の結果が、エトポシド（ＥＴＯ）およびエトポシド／１７−ＡＡＧミセル（図１３（ａ）〜（ｄ））、ならびにドセタキセル（ＤＣＴＸ）およびドセタキセル／１７−ＡＡＧミセル（図１４（ａ）〜（ｄ））について観察された。ＰＥＧ−ＰＬＡ ５Ｋ：６Ｋから調製されたミセルを使用して、１：７．５（ｗｔ．／ｗｔ．）の薬物：ポリマー比で、図１３および１４のデータを得た。図１３（ｃ）は、２４時間後に、ほぼ１００％のエトポシドおよび１７−ＡＡＧがミセル内に残留したことを示し、一方、エトポシド単独ミセルでは、エトポシドの大量の損失が観察された（図１３（ｄ）：平均で７０％を超える損失（ｎ＝３））。エトポシドは、わずか１〜２時間後には、エトポシド単独ミセルから析出し始めた。
【００８５】
図１４（ｃ）は、ドセタキセルを含むミセル内に１７−ＡＡＧを含有させることが、ドセタキセル単独ミセルと比較して有意な安定性の向上をもたらしたことを示す。２４時間後、ドセタキセルおよび１７−ＡＡＧは両方ともミセル内に９５％を超える量で残留し、一方ドセタキセル単独ミセルでは、ドセタキセルの大量の損失が観察された（図１４（ｄ）：平均で７３．２％を超える損失（ｎ＝３））。ドセタキセルは、わずか２時間後には、ドセタキセル単独ミセルから析出し始めた。
【００８６】
図１５（ａ）および１６（ｂ）は、パクリタキセルに加えて、１７−ＡＡＧをミセルに取り込むと、さらなる安定性がミセルに与えられることをさらに示す。薬物−ミセルにおける光学密度（ＯＤ）変化の測定は、ディッププローブを備えるＶａｒｉａｎ（登録商標）Ｃａｒｙ５０（０〜１４４０分；１５分ごと；獲得：０．１秒）を使用して、６５０ｎｍ（ＲＴ）で行った。１：７．５の薬物：ポリマー比を、５Ｋ：６Ｋ ＰＥＧ−ＰＬＡミセルで使用した。パクリタキセルカプセル化ミセルに１３．４％パクリタキセル（ｗｔ．／ｗｔ．）を負荷し、パクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルに２６．８％の薬剤を負荷した（組合せ；各薬物につき１３．４％）。図１５（ａ）は、大量のパクリタキセルがパクリタキセルカプセル化ミセルから失われたことを示し、一方、パクリタキセル／１７−ＡＡＧミセルは、２４時間にわたって実質的に安定であった（図１５（ｂ））。
【００８７】
さらに、単純混合ミセル組成物を調製したときに、予想外な結果が観察された。例えば、１つの試料のミセルがパクリタキセルをカプセル化し、第２の試料のミセルが１７−ＡＡＧをカプセル化したＰＥＧ−ＰＬＡミセルを調製した。ミセルの２種類の試料を組み合わせて単一の水性処方物とした場合、パクリタキセル単一薬剤ミセルは、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの純粋なパクリタキセル単一薬剤処方物よりも、析出に対して安定であった。従って、１７−ＡＡＧミセルを有する処方物におけるパクリタキセルカプセル化ミセルは、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルにパクリタキセルだけを取り込んだ処方物に比べて、安定性が向上した。いくつかの実施形態では、処方物中のミセル間で活性剤の平衡が起こり得る。他の単一薬剤ミセルは、１７−ＡＡＧカプセル化ＰＥＧ−ＰＬＡミセルで単純混合処方物を形成することによって、同様に安定化することができる。
【００８８】
全ての公報、特許および特許文献は、参照によって個別に組み込まれているかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明を、種々の特的の好ましい実施形態および手法に言及して記載した。しかし、本発明の精神および範囲内にある限り、多くの変更および修正がなされてもよいことが理解されよう。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、米国特許法§１１９（ｅ）の下、２００７年７月９日に出願された米国仮特許出願第６０／９４８，６４２号および２００８年４月１４日に出願された同第６１／０４４，８１３号に対する優先権を主張し、これらは本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（政府の援助）
本発明は、ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈにより授与される契約番号ＡＩ０４３３４６の下による政府の援助がなされた。米国政府は本発明において一定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）は、腫瘍細胞の増殖に関連するタンパク質の調節に重要な役割を果たすため、癌治療のための重要な標的である。ベンゾキノンアンサマイシン抗生物質であるゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０のＡＴＰ／ＡＤＰ結合ポケットに強く結合し、多様な腫瘍ファミリーの生存および増殖を妨げることができることが見出された。ゲルダナマイシンは、有望な新しい抗癌剤であるが、その臨床的な開発は、高い肝毒性および難溶解性によって妨げられている。２種の類縁体、１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ；タネスピマイシン）および１７−ジメチルアミノ−エチルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン（１７−ＤＭＡＧ）が開発され、これらの問題を軽減した。
【０００４】
１７−ＤＭＡＧは１７−ＡＡＧに比べてより優れた水溶性およびより大きな経口バイオアベイラビリティを有するため、臨床解釈のためのいくつかの有望な先例では、医薬的により実用的な処方として、１７−ＤＭＡＧの開発が対象とされてきた。しかし、１７−ＡＧＧより優れた明らかな利点にもかかわらず、１７−ＤＭＡＧは、動物への投与時の分布容積が大きいことを特徴とする。１７−ＤＭＡＧの最大許容用量は、１７−ＡＧＧの最大許容用量よりかなり少ない（イヌにおいて、それぞれ、８ｍｇ／ｍ２／日および１００〜２００ｍｇ／ｍ２／日）ので、この広い分布により、望ましくない毒性が引き起こされる可能性がある。
【０００５】
１７−ＡＡＧ送達の主な障害は、その限られた水溶解度（約０．１ｍｇ／ｍＬ）であり、このため、非経口投与の前に、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（ＣｒＥＬ）、ＤＭＳＯおよび／またはエタノールを含む複雑な処方物を使用する結果となっていた。ＣｒＥＬは、過敏性反応およびアナフィラキシーを誘発することが知られているため、これは、患者の忍容性の点から望ましくなく、投与前に、抗ヒスタミン剤およびステロイド剤により患者を処置する必要がある。
【０００６】
従って、より安全でより効果的な１７−ＡＡＧの送達は、きつい界面活性剤を使用することなく薬物を可溶化することができる生体適合性送達システムの開発に依存する。従って、１７−ＡＡＧを患者に送達する改良された組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
本発明は、安全なポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）（「ＰＥＧ−ＰＬＡ」）ミセルによってカプセル化された１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン）のような活性剤を提供する。従って、本発明の組成物は、活性剤の効果的な可溶化を提供する。担体としてのＰＥＧ−ＰＬＡの大きな利点は、現在公知の組成物に使用されているＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬまたはＤＭＳＯより毒性が低いということである。さらに、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、ＤＭＳＯより取り扱いが簡単であり、現在臨床試験中の１７−ＡＡＧ処方物の問題である悪臭もない。また、ミセルによるカプセル化によって、体の標的範囲に送達されるまでミセル内に薬剤が保持されることによって起こる特定の薬剤の副作用（例えば、肝毒性、好中球減少症、神経障害など）の発生を減らすこともできる。
【０００８】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、１７−ＡＡＧおよび／または第２活性剤をカプセル化し、医薬組成物を提供するために使用することができる。第２活性剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、テニポシドまたはエトポシドのような化学療法剤であり得る。該組成物は、静脈内（ＩＶ）注射または輸液投与のような、さまざまな形態の体内投与に適合するように処方することができる。そのような処方物は、１７−ＡＡＧ濃度が約２０ｍｇ／ｍＬ以下の１７−ＡＡＧ含有ミセルを含み得る。該処方物は、生理食塩水またはデキストロース溶液のような適切な水性担体を含み得る。
【０００９】
また本発明は、有効量のミセル内にカプセル化された１７−ＡＡＧを含む組成物を投与することを含む、投与を必要とする患者に１７−ＡＡＧを投与する方法を提供する。ミセルは、ポリ（エチレングリコール）およびポリ（乳酸）のブロックを１つ以上含有するブロック共重合体を含み得る。
【００１０】
本発明は、有効量の１７−ＡＡＧ含有ミセルを含有する組成物を癌細胞に接触させることにより、癌細胞を死滅させる方法をさらに提供する。接触は、インビボでもインビトロでもよい。１７−ＡＡＧ含有ミセルは、有効量の１７−ＡＡＧ含有ミセルを含有する組成物を腫瘍に接触させる、または投与することにより、癌腫瘍の成長を予防する、緩慢にする、あるいは阻害するために使用することもできる。
【００１１】
本発明は、１７−ＡＡＧ含有ミセルを製造する方法であって、先ず、１７−ＡＡＧおよびユニマー（ミセル配置にはないブロックポリマー鎖）を水混和性溶剤（例えば、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に溶解する方法をさらに提供する。次いで、該溶液を透析装置（例えば、バッグまたはチューブ）に加えることができる。次いで、該透析装置を水浴中に配置し、透析バッグ内に１７−ＡＡＧ含有ミセルを得ることができる。次いで、該ミセルを、例えば遠心分離し、取り込まれていない薬物を沈殿させることができる。ナノろ過を使用して、単離された１７−ＡＡＧ含有ミセルを得ることができる。
【００１２】
また本発明は、１７−ＡＡＧおよびＰＥＧ−ＰＬＡ（２０００ｍｗ；５０：５０）がアセトニトリルまたはＤＭＡｃのような適切な溶剤に溶解している１７−ＡＡＧ含有ミセルを製造する方法を提供する。一実施形態では、ＰＥＧ−ＰＬＡブロックは、約５０：５０の分子量２，０００のブロックであり得る。該溶液を超音波処理して、次いで溶剤除去により濃縮することができる。次いで、温水（５０〜７０℃、または約６０℃）を加えて、混合物を周囲温度（約２３℃）に放冷することができる。次いで、例えば遠心分離により沈降物を除去（例えば、約１３，０００ｒｐｍで約１分間）して、該混合物を分離することができる。上澄み液を捕集し、例えば０．２μｍＰＴＦＥフィルターを通してろ過して、単離された１７−ＡＡＧ含有ミセル処方物を得ることができる。得られたミセル医薬溶液は、例えば約４℃の低温で長期間保存することができる。
【００１３】
以下の図面は、本明細書の一部を構成するものであり、本発明のある実施形態または種々の態様をさらに実証するために含まれるものである。ある場合には、本発明の実施形態は、添付の図面を本明細書に提示する詳細な説明と組み合わせて参照することによって、最もよく理解することができる。説明および添付の図面は、ある具体例あるいは本発明のある態様を強調することがあるが、当業者であれば、例または態様の一部を、本発明の他の例または態様と組み合わせて使用してもよいことを理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、本発明の一実施形態によるミセルの特性評価を示し、（ａ）は、現れた平均径が２４２±５ｎｍの無負荷ミセルの動的光散乱（ＤＬＳ）であり、（ｂ）は、３５０ｎＭで測定したＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）の臨界ミセル濃度である。
【図２】図２は、一実施形態による、３７℃およびｐＨ７．４でのｄｄＨ２Ｏ中での、０．３ｍＭのＰＥＧ−ＰＬＡミセルからの１７−ＡＡＧのインビトロ放出を示す。ミセルは、表１に記載するように、ＰＥＧ−ＰＬＡ含量に対して１１．４％ ｗ／ｗの１７−ＡＡＧで調製した：ＰＥＧ−ＰＬＡ薬物負荷ミセル（●）；薬物のみ（▽）；およびＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００に処方された１７−ＡＡＧ（■）。
【図３−１】図３は、一実施形態によるラットにおける薬物動態学的プロファイルを示し、（ａ）血清、（ｂ）尿中に残存する１７−ＡＡＧの量、（ｃ）１７−ＡＡＧの尿排泄速度、および（ｄ）尿によって排泄された１７−ＡＡＧの総量を含む。投与された処方物は、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇの１７−ＡＡＧ（ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）を含んでいた。
【図３−２】図３は、一実施形態によるラットにおける薬物動態学的プロファイルを示し、（ａ）血清、（ｂ）尿中に残存する１７−ＡＡＧの量、（ｃ）１７−ＡＡＧの尿排泄速度、および（ｄ）尿によって排泄された１７−ＡＡＧの総量を含む。投与された処方物は、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇの１７−ＡＡＧ（ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）を含んでいた。
【図４】図４は、（ａ）注射後、該投薬（１０ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）から３時間後のラットにおける１７−ＡＡＧの組織内分布、および（ｂ）１７−ＡＡＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）のラットへの静脈内投与後、該投薬（ｎ＝１０、平均±ＳＥＭ）から３時間後の血清に対する組織比（Ｋｐ）を示す。星印（＊）は、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方とＰＥＧ−ＰＬＡミセル内にカプセル化された１７−ＡＡＧとの間の統計的な有意差（ｐ＜０．０５）を示す。
【図５】図５（ａ）および５（ｂ）は、本発明の実施形態による１７−ＡＡＧミセルの調製手順を示す。
【図６】図６は、一実施形態による、３３７ｎｍでのＵＶ測定によって決定された１７−ＡＡＧをカプセル化したＰＥＧ−ＰＬＡミセルの薬物負荷の特性評価を示す。
【図７】図７は、一実施形態による、６３２．８ｎｍでのＤＬＳ測定によって決定されたＰＥＧ−ＰＬＡミセルにおける粒度分布を示し、（ａ）は数−重量ガウス分布であり、（ｂ）は容積−重量ガウス分布である。
【図８】図８は、ＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＡミセルの透過型電子顕微鏡法（ＴＥＭ）画像（１８，０００×）を示す。
【図９】図９は、一実施形態によるミセル負荷および形成手順を示す。ナノろ過後、処方物は、ＵＶおよｂＲＩ検出モート゛によるＨＰＬＣを使用して分析することができる。
【図１０】図１０は、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルへのパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧ両方の可溶化を示す。
【図１１】図１１は、１７−ＡＡＧ／パクリタキセルＰＥＧ−ＰＬＡミセルに関する物理的安定性の結果を示す。
【図１２−１】図１２は、（ａ）パクリタキセル（ＰＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＰＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のパクリタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのパクリタキセルのみのミセル中のパクリタキセル濃度の比較を示す。
【図１２−２】図１２は、（ａ）パクリタキセル（ＰＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＰＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のパクリタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのパクリタキセルのみのミセル中のパクリタキセル濃度の比較を示す。
【図１３−１】図１３は、（ａ）エトポシド（ＥＴＯ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のエトポシドおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＥＴＯ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のエトポシド濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのエトポシドのみのミセル中のエトポシドの濃度の比較を示す。
【図１３−２】図１３は、（ａ）エトポシド（ＥＴＯ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のエトポシドおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＥＴＯ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のエトポシド濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのエトポシドのみのミセル中のエトポシドの濃度の比較を示す。
【図１４−１】図１４は、（ａ）ドセタキセル（ＤＣＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のドセタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＤＣＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のドセタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのドセタキセルのみのミセル中のドセタキセルの濃度の比較を示す。
【図１４−２】図１４は、（ａ）ドセタキセル（ＤＣＴＸ）および１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度（初期）、（ｂ）２４時間後のドセタキセルおよび１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの溶解度、（ｃ）０時間および２４時間でのＤＣＴＸ／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル中のドセタキセル濃度の比較、および（ｄ）０時間および２４時間でのドセタキセルのみのミセル中のドセタキセルの濃度の比較を示す。
【図１５Ａ】図１５は、（ａ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル（ＰＴＸ）単一薬剤ミセルの物理的安定性、および（ｂ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの物理的安定性を示す。
【図１５Ｂ】図１５は、（ａ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル（ＰＴＸ）単一薬剤ミセルの物理的安定性、および（ｂ）光学密度（ＯＤ）変化によって分析した、時間経過によるパクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルの物理的安定性を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
（詳細な説明）
ゲルダナマイシンは、産生微生物であるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｖａｒ．ｇｅｌｄａｎｕｓ ＮＲＲＬ３６０２を培養することによって得ることのできる周知の天然物である。化合物１７−ＡＡＧは、米国特許第４，２６１，９８９号明細書（Ｓａｓａｋｉら）に記載されるように、ゲルダナマイシンとアリルアミンとの反応によって、半合成的にゲルダナマイシンから製造される。該米国特許の開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。
【００１６】
ゲルダナマイシンは、Ｈｓｐ９０のＡＴＰ／ＡＤＰ結合ポケットに強く結合し、そのため、ＨＥＲ−２／ｅｒｂＢ−２を過剰発現するパクリタキセル耐性乳癌を始めとするさまざまなファミリーの腫瘍の生存および増殖を妨げる。ゲルダナマイシンの臨床開発は、その難溶解性および高い肝毒性によって妨げられてきた（Ｇｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９（１５）（２００６）４６０６〜４６１５）。従って、ゲルダナマイシン、またはその誘導体、例えば１７−アリルアミノ−１７−デメトキシ−ゲルダナマイシン（１７−ＡＡＧ、以下のスキーム１）を含有する医薬処方物の調製における重大な障害は、これらの親油性薬物の水溶性が非常に低いことである。
【００１７】
スキーム１
【００１８】
【化１】
適切な水溶性は、非経口投与に関して特に重要な要件である。１７−ＡＡＧの水溶性は、中性ｐＨで約０．１ｍｇ／ｍＬしかなく、これでは安全で効果的な様式で投与することは難しい。溶解性の問題に対処すべく試みがなされたが、各処方物には、それ自身の欠点、例えば、ＤＭＳＯ、エタノール、または種々の望ましくない界面活性剤の使用が付随していた。
【００１９】
化合物１７−ＡＡＧ（１７−アリルアミノ−１７−デメトキシゲルダナマイシン、またはタネスピマイシン）は、現在癌の治療のための臨床試験に供されている有望な熱ショックタンパク質９０阻害剤である。癌細胞に対する作用の選択的メカニズムにもかかわらず、１７−ＡＡＧは、その低い水溶性のために難しい課題に直面している。現在の１７−ＡＧＧ組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（ＣｒＥＬ）、ＤＭＳＯおよび／またはエタノールを含む処方が必要である。米国特許出願公開第２００５／０２５６０９７号公報（Ｚｈｏｎｇら）参照。
【００２０】
Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬは、ひまし油誘導体であり、一般に、３５モルのエチレンオキシドをひまし油の各モルと反応させることによって、ポリエトキシ化ひまし油（ＣＡＳ番号６１７９１−１２−６）を得ることによって調製される。非経口処方物のためにＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬ（例えば、ＫＯＳ−９５３）またはＤＭＳＯを使用することは、副作用の可能性があるため、患者の忍容性の点から望ましくない。種々の有害作用として、急性過敏性反応、末梢神経毒性、高脂血症および／またはＰ糖タンパク質の阻害を挙げることができる。さらに、１７−ＡＡＧは、大きい分布容積（Ｖｄ）、および低用量（２０ｍｇ／ｋｇ未満）での重大な全身毒性を有する。従って、１７−ＡＡＧをそのような治療を必要とする患者に安全に投与するように改良された処方物が必要である。
【００２１】
本明細書の開示は、ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）（ＰＥＧ−ＰＬＡ）で構成される両親媒性ジブロックミセルを使用して製造される、ＣｒＥＬを含有しない１７−ＡＡＧの処方物を提供する。動的光散乱（ＤＬＳ）により、約２５７ｎｍの平均直径および約３５０ｎＭの臨界ミセル濃度を持つＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルが明らかになった。該ミセルは、有意な量の特定の活性剤、例えば約１．５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧを可溶化することができる。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの曲線下面積（ＡＵＣ）は、標準的な処方物の１．３倍であった。ミセル処方物を使用することによって、ＣｒＥＬを使用する標準的なビヒクルに比べて、腎クリアランス（腎ＣＬ）が増加し、肝クリアランス（肝ＣＬ）が減少した。従って、本明細書に記載するミセル処方物は、現在知られている組成物よりも優れたいくつかの利点を持つ１７−ＡＡＧ用の送達ビヒクルを提供する。
【００２２】
さらに、１７−ＡＡＧミセル処方物は、血清中の薬物の半減期（ｔ１／２）において２．７倍の延長、および尿中のｔ１／２において１．３倍の増加を示した。予想されるように、１７−ＡＡＧはより長い期間にわたって血中を循環したため、分布容積（Ｖｄ）の１．７倍の増加がこのミセル処方物でも観察された。これは、より迅速に除去される標準的な処方物に比べて非特異性（標的部位がない）であるためである。ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル中の１７−ＡＡＧの新しい処方物は、溶解性において、１７−ＡＡＧ単独の場合と比較して１５０倍の増加という良好な結果となった。このデータは、本発明のナノキャリアシステムが、ＣｒＥＬおよびＥｔＯＨのような毒性薬剤を必要とすることなく、１７−ＡＡＧの薬物動態的性質を保持することができることを示している。
【００２３】
用語ＰＥＧ−ＰＬＡは、ポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ（乳酸）を意味する。ポリ（乳酸）ブロックとして、（Ｄ−乳酸）、（Ｌ−乳酸）、（Ｄ，Ｌ−乳酸）、およびそれらの組合せが挙げられ得る。ＰＥＧ−ＰＬＡの種々の形態は、例えば、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ，Ｉｎｃ．、モントリオール、ケベックから市販されており、あるいは当業者に周知の方法により調製することができる。ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は、約１，０００〜約３５，０００ｇ／ｍｏｌであり得、あるいは該範囲内の約５００ｇ／ｍｏｌおきの数字であることもできる。ポリ（乳酸）の適切なブロックは、約１，０００〜約１５，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有し得、あるいは該範囲内の約５００ｇ／ｍｏｌおきの数字であることもできる。ＰＥＧブロックは、アルキル基、例えばメチル基（例えば、メトキシエーテル）、あるいは任意の適切な保護基、キャッピング基、またはブロック基を終端とすることができる。
【００２４】
本明細書中の「一実施形態」、「１つの実施形態」、「１つの例示実施形態」その他の記載は、記載された実施形態が、特定の特性、構造または特徴を含み得ることを示すが、必ずしも全ての実施形態がその特定の特性、構造または特徴を含むとは限らないことに注意すべきである。さらに、該語句は、同じ実施形態を意味するとも限らない。さらに、特定の特性、構造または特徴がある実施形態に関連して記載されている場合、明確に記載されていてもそうでなくても、他の実施形態と関連して、そのような特性、構造または特徴に作用することは、当業者の知識の範囲内であることを示している。
【００２５】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセルを調製する方法
臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を超える量の溶剤中に存在する両親媒性ユニマー（一本鎖）は、内部が疎水性であり外部が親水性であるコア−コロナ構造、もしくはシェルであるミセルに凝集している。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、実施例１に記載し、図５（ａ）に模式的に図示するように調製することができる。図５（ｂ）は、１７−ＡＡＧミセル処方物を調製する具体的な一手順を示す。この手順は、一実施形態のための単なる例示であり、該手順は、当業者には容易に認識されるように、目的の調製規模に応じて変更することができる。図５に図示した手順の一利点は、ミセル溶液の透析を必要としないことである。
【００２６】
本開示のミセルは、さまざまなブロックサイズ（例えば、先に記載した範囲のグロックサイズ）のＰＥＧ−ＰＬＡポリマーを、さまざまな比（例えば、ＰＥＧ：ＰＬＡが約１：１０〜約１０：１、あるいは該範囲内の任意の整数の比）で使用して調製することができる。例えば、ＰＥＧ−ＰＬＡポリマーの分子量（Ｍｎ）としては、２Ｋ−２Ｋ、３Ｋ−５Ｋ、５Ｋ−３Ｋ、５Ｋ−６Ｋ、６Ｋ−５Ｋ、６Ｋ−６Ｋ、８Ｋ−４Ｋ、４Ｋ−８Ｋ、１２Ｋ−３Ｋ、３Ｋ−１２Ｋ、１２Ｋ−６Ｋおよび／または６Ｋ−１２Ｋを挙げることができるが、これらに限定されない。薬物−ポリマー比も、約１：２０〜約１０：１、あるいは該範囲内の任意の整数の比とすることができる。適切な薬物−ポリマー比の具体例として、約１：２．５、約１：５、約１：７．５および／または約１：１０が挙げられるが、これらに限定されない。適切なポリマーの１つは、約５０：５０の割合で約１〜３ｋＤａ（例えば、約２Ｋドルトン）のブロックを含むＰＥＧ−ＰＬＡである。この手順を使用することによって、ミセル内に予想外に高いレベルの薬物負荷が得られた。例えば、図５の手順を採用した場合、約５ｍｇ／ｍＬの薬物負荷が達成された（約９ｍＭ、約１７ｗｔ％）（図６参照）。
【００２７】
ミセルカプセル化活性剤処方物は、透析法によっても製造することができる。薬剤およびＰＥＧ−ＰＬＡは、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）のような適切な水混和性有機溶剤に溶解させることができる。次いで、溶液を透析バッグに移す。透析培養液は、０．９％生理食塩水のような水溶液を含有する。透析バッグとしては、例えば、３５００ＭＷＣＯチューブ（ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ（登録商標））透析バッグが使用できる。溶解した薬剤およびポリマーを水性混合物に添加すると、活性剤を含有したミセルが形成する。次いで、ミセルをカプセル化した薬剤を単離することができる。例えば、取り込まれていない薬物は、遠心分離によって沈殿させることができる。残存する上澄み液のナノろ過により、単離されたミセルカプセル化活性剤の処方物を得る。図９参照。ミセルは、例えば、ＵＶおよびＲＩ検出モードを備えたＨＰＬＣを使用して測定および分析することができる（Ｙａｓｕｇｉらによって記載された手法、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，１９９９，６２，９９〜１００参照）。準備方法は、水中油乳液の使用、溶液キャスティングおよび／または凍結乾燥を含み得る。Ｇａｕｃｈｅｒら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、１０９（２００５）１６９〜１８８参照。
【００２８】
一旦調製されると、ミセル−薬物組成物は、冷蔵下、好ましくは約−２０℃〜約４℃の温度で、長期間貯蔵することができる。ミセル−薬物組成物を光から保護するために、茶色のガラスバイアルまたは他の適切な容器を使用することにより、それらの有効期間を延長することができる。ミセル−薬物組成物は、凍結乾燥して固体処方物にすることができ、この処方物を、薬物投与の前に水性ビヒクルに溶かすことができる。
【００２９】
処方物
１７−ＡＡＧをＰＥＧ−ＰＬＡミセルに含有させることによって、薬物を、ミセルを使用せずに溶解できる量より多くの量の流体、例えば、医薬担体もしくは血液または間質液のような体液に溶解することができる。従って、ミセルは、そうでない場合よりも高い程度に１７−ＡＡＧを効果的に可溶化する。ミセルがフィルターを通過できるようにミセルを溶解する医薬担体は、医薬「溶液」に溶解し、本発明の実施形態による処方物を提供すると考えられる。
【００３０】
ある実施形態では、ミセルは、１５ｍｇ／ｍＬまでの１７−ＡＡＧ、もしくは２０ｍｇ／ｍＬまでの１７−ＡＡＧを可溶化することができる。いくつかの実施形態では、ミセルは、約３ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬまたは約２５ｍｇ／ｍＬの活性剤を可溶化することができる。いくつかの実施形態では、処方物は、ミセルの容積、あるいは好ましくは水性担体の容積に関して、約０．５〜約５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧ濃度、約０．７５〜約３ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧ濃度、約１〜約２ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧ濃度、または約１．５ｍｇ／ｍＬの濃度を有し得る。同様の量の他の活性剤も、ある他の実施形態のミセル中に含まれ得る。
【００３１】
一実施形態では、１７−ＡＡＧカプセル化ミセルは、生理食塩水またはデキストロースのような水性担体などを含む混合物に処方される。例えば、適切な担体として、０．９％ＮａＣｌ溶液、もしくはデキストロースまたはグルコース溶液のような５％糖水溶液が可能である。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｄ．Ｂ．Ｔｒｏｙ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（第２１編、２００５）８０３−８４９ページ参照。
【００３２】
投与、例えば、非経口投与の目的のため、水溶性塩類（例えば、ＮａＣｌ）の無菌水溶液を使用することができる。付加的な、または代替の担体として、ゴマ油、ピーナッツ油、および含水プロピレングリコールが挙げられ得る。水溶液は、緩衝化されているのが適切な場合があり、必要であれば、該液状希釈剤は、先ず、十分な生理食塩水またはグルコースで等張化され得る。これらの水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内および腫瘍内（ＩＴ）注射に特に適している。腫瘍内注射は、前立腺癌を始めとする癌の治療のようなある種の治療に特に有用であり得る。適切な無菌水性媒体は、購入することができ（例えば、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、あるいは当業者に周知の標準的な手法によって調製することができる。
【００３３】
いくつかの実施形態では、組成物は、エタノール、ジメチルスルホキシド、または他の有機溶剤、リン脂質、ひまし油、およびひまし油誘導体の１つ以上のような添加剤を全く含まない。他の実施形態では、組成物は、上記の成分を実質的に含まない。本明細書で使用する場合、「実質的に含まない」とは、組成物が、約２．５重量％未満、約２重量％未満、約１．５重量％未満、約１重量％未満、約０．５重量％未満、または約０．２５重量％未満を含むことを意味する。いくつかの実施形態では、ある添加剤が、ミセルの安定性を高め得る。一実施形態では、界面活性剤をミセル中に（例えば、約０．２５重量％〜約２．５重量％）含有させることができる。例えば、適切な界面活性剤として、ポリエチレングリコール共役ジステアロイルホスファチジル−エタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）のような負電荷のリン脂質が挙げられ得る。
【００３４】
ミセル処方物を使用する治療
ミセルを医薬溶液に処方し、患者に投与することができる。医薬溶液処方物は、必要量の１７−ＡＡＧの、許容し得る時間内、例えば、約１０分〜約３時間、一般には約１〜約２時間、例えば約９０分以内での体内への送達を可能にする。
【００３５】
投与は、非経口、例えば、輸液、注射またはＩＶによって行うことができ、患者は、哺乳類、例えばヒトであってもよい。投与時には、ミセルは無処理で循環し、個々のポリマー鎖に解離し、活性剤を放出し（拡散あるいはミセル解離によって）、組織内に分布し、および／または腎クリアランスを経ることができる。これらの事象の予定は、はっきりとは予測することはできず、これらの事象は、１７−ＡＡＧのような活性剤の抗腫瘍活性に有意に影響を及ぼす。いくつかの実施形態では、薬物負荷ミセルは、腫瘍間質に血管外遊出することができる。活性剤含有ミセルは、加水分解して１７−ＡＡＧを放出することができ、次いで、該ミセルから活性剤を放出することができる。次いで、活性剤は腫瘍細胞に拡散することができる。本発明の別の態様は、漏出性脈管構造を横断し、腫瘍細胞に取り込まれ、腫瘍細胞の増殖を阻害し、および／または腫瘍細胞を死滅させるミセルを包含する。
【００３６】
疾患、障害または状態は、１７−ＡＡＧを含有するミセルの医薬処方物を投与することによって処置することができる。本明細書に記載する組成物の投与により、患者における癌性増殖の大きさおよび／または数を減らし、そして／または１つ以上の対応する関連症状を減らすことができる。本明細書に記載された方法によって有効量を投与した場合、本発明の組成物は、癌細胞増殖の阻害、癌または腫瘍の大きさの縮小、さらなる転移の阻止、腫瘍血管新生の阻害および／または癌性細胞の死のような病理学的に適切な応答を生み出すことができる。以下に記載するような、上記の疾患および状態を処置する方法は、治療有効量の本発明の組成物を患者に投与することを含む。該方法は、必要に応じて、例えば、毎日、毎週または毎月、あるいはこれらを何度か繰り返してもよい。
【００３７】
処置することができる状態としては、頭および首の癌を始めとする過剰増殖性疾患（これには、頭、首、鼻腔、副鼻腔、鼻咽頭、口腔、中咽頭、喉頭、下咽頭、唾液腺の腫瘍、およびパラガングリオーマが含まれる）；肝臓および胆樹の癌、特に肝細胞癌；腸の癌、特に結腸直腸癌；卵巣癌；小細胞肺癌および非小細胞肺癌；前立腺癌；膵臓癌；乳癌肉腫、例えば、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、胎児性横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、神経線維肉腫、骨肉腫、滑膜肉腫、脂肪肉腫および胞状軟部肉腫；中枢神経系の腫瘍、特に脳癌；および／またはリンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、ろ胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、Ｂ系統大細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、またはＴ細胞未分化大細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
細胞の過剰増殖を特徴とする非癌状態も、本明細書に記載の方法を使用することによって処置することができる。例えば、１７−ＡＡＧを、細胞の過剰増殖を特徴とする状態を処置するために、本明細書に記載する方法に従って投与することができる。該非癌状態、障害または疾患の例として、萎縮性胃炎、炎症性溶血性貧血、移植片拒絶反応、炎症性好中球減少症、水疱性類天疱瘡、セリアック病、脱髄性神経障害、皮膚筋炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎および／またはクローン病）、多発性硬化症、心筋炎、筋炎、鼻ポリープ、慢性副鼻腔炎、尋常性天疱瘡、原発性糸球体腎炎、乾癬、外科手術後の癒着、狭窄または再狭窄、強膜炎、強皮症、湿疹（アトピー性皮膚炎、刺激性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎を含む）、歯周疾患（すなわち、歯周炎）、多発性嚢胞腎疾患、およびＩ型糖尿病が挙げられるが、これらに限定されない。他の例として、脈管炎、例えば、巨細胞性動脈炎（側頭動脈炎、高安動脈炎）、結節性多発動脈炎、アレルギー性血管炎および肉芽腫症（チャーグ・ストラウス病）、多発性血管炎重複症候群、過敏性血管炎（ヘノッホ・シェーンライン紫斑病）、血清病、薬物誘発性脈管炎、感染性脈管炎、腫瘍性脈管炎、結合組織障害に関連する脈管炎、補体系の先天性欠損に関連する脈管炎、ウェゲナー肉芽腫症、川崎病、中枢神経系の脈管炎、バージャー病および全身性硬化症；胃腸管疾患、例えば、膵臓炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、潰瘍性直腸炎、原発性硬化性胆管炎、特発性のものを含む任意の原因の良性狭窄（例えば、胆管、食道、十二指腸および小腸または大腸の狭窄）；呼吸器疾患（例えば、喘息、過敏性肺臓炎、石綿肺症、ケイ肺症、および他の形態のじん肺症、慢性気管支炎および慢性閉塞性気道疾患）；鼻涙管疾患（例えば、特発性のものを含む全ての原因の狭窄）；耳管疾患（例えば、特発性のものを含む全ての原因の狭窄）；ならびに神経性疾患、真菌性疾患、ウィルス感染および／またはマラリアが挙げられる。
【００３９】
用語「処置する」および「処置」は、ヒトを含む哺乳類を、その状態を直接または間接的に改善する目的で、医療扶助に供する任意のプロセス、作用、適用、療法などを意味する。処置は、一般に、有効量の本明細書に記載するミセル組成物の投与を意味する。
【００４０】
用語「有効量」または「治療有効量」は、状態、疾患または障害の症状の１つ以上をある程度軽減すること、例えば、１）癌細胞の数の減少、２）腫瘍の大きさの縮小、３）癌細胞の周辺器官への浸潤の阻害（すなわち、ある程度緩慢にする、好ましくは停止する）、３）腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度緩慢にする、好ましくは停止する）、４）腫瘍増殖のある程度の阻害、５）該障害に関連する１つ以上の症状をある程度軽減または減らすこと、および／または６）活性剤の投与に伴う副作用を軽減または減らすこと（これらに限定されない）に必要な治療剤の量を特定するものである。
【００４１】
用語「阻害」は、腫瘍形成、腫瘍増殖または腫瘍細胞増殖をいう場合、特に、原発性または二次性腫瘍の出現の遅延、原発性または二次性腫瘍の発達の遅延、原発性または二次性腫瘍の発生の減少、疾患の二次的影響の遅延または重症度の減少、腫瘍増殖の阻止、および腫瘍の退行によって評価してもよい。極端な場合、完全な阻害は、予防または化学的予防ということができる。阻害は、処置をしない場合に起こり得る進行に対して、約１０％、約２５％、約５０％、約７５％または約９０％の阻害であり得る。
【００４２】
本発明の医薬溶液処方物を使用して、１７−ＡＡＧおよび／または抗癌剤または細胞毒性剤のような活性剤を、投与の回数に応じて、約４ｍｇ／ｍ２〜約４０００ｍｇ／ｍ２の範囲の用量で投与することができる。一実施形態では、１７−ＡＡＧのための投薬計画は、１週あたり約４００〜５００ｍｇ／ｍ２、あるいは１週あたり約４５０ｍｇ／ｍ２とすることができる。Ｂａｎｅｒｊｉら，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２２，１９９（２００３，ａｂｓｔｒａｃｔ７９７）参照。あるいは、１週あたり約３００ｍｇ／ｍ２〜約３２５ｍｇ／ｍ２、または約３０８ｍｇ／ｍ２の用量を患者に投与することができる。Ｇｏｅｔｚら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３８（Ｓｕｐｐ．７），Ｓ５４−Ｓ５５（２００２）参照。別の投薬計画として、週に２回の注射であって、約２００ｍｇ／ｍ２〜約３６０ｍｇ／ｍ２（例えば、患者の状態の重症度および健康状態によって、約２００ｍｇ／ｍ２、約２２０ｍｇ／ｍ２、約２４０ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約２６０ｍｇ／ｍ２、約２８０ｍｇ／ｍ２、約３００ｍｇ／ｍ２、約３２５ｍｇ／ｍ２、３４０ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２または約３６０ｍｇ／ｍ２）が挙げられる。ドセタキセルのような別の薬剤との併用療法のために使用することがでドセタキセルのような他の薬剤との併用療法のために使用することができる投薬計画は、２種類の薬物を３週おきに投与することであり得、１７−ＡＡＧの用量は、各投与につき、約５００ｍｇ／ｍ２〜約７００ｍｇ／ｍ２、あるいは最大約６５０ｍｇ／ｍ２である。
【００４３】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセルにおける薬物の組合せ
１７−ＡＡＧに加えて他の活性剤を、同じ準備手順で本明細書に記載したミセル中にカプセル化することができる。例えば、パクリタキセル含有ミセルを、１７−ＡＡＧ含有ミセルと共に処方物中に使用することができる（各ミセルが異なる活性剤を含有する「単純に混合された」ミセル処方物）。従って、本発明は、１７−ＡＡＧと第２活性剤とを含む組成物であって、１７−ＡＡＧと第２活性剤との両方がＰＥＧ−ＰＬＡミセル内でカプセル化によって水溶液中に可溶化されている組成物を提供する。例えば、該組成物は、パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧを、単純に混合されたミセル処方物中に含有することができる。また、１７−ＡＡＧおよび第２活性剤の両方がミセル調製手順で溶解している場合も処方物を調製することができ、この処方物は、１７−ＡＡＧおよび第２活性剤の両方を含有する個々のミセルを形成し、その結果、１個以上のミセルが２種の異なる活性剤を含有する「物理的に混合された」ミセルを提供する。
【００４４】
従って、１７−ＡＡＧは、他の活性剤（例えば、抗癌剤または細胞毒性剤）と組み合わせて（例えば、本明細書に記載するようなミセルにおいて）投与することができ、他の活性剤としては、アルキル化剤、血管新生阻害剤、代謝拮抗薬、ＤＮＡクリーバー、ＤＮＡ架橋剤、ＤＮＡ干渉物質、ＤＮＡ小溝結合剤、熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、微小管安定剤、ヌクレオシド（プリンまたはピリミジン）類縁体、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼ（ＩまたはＩＩ）阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤が挙げられる。具体的な活性剤として、β−ラパコン、１７−ＤＭＡＧ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブスルファン、カリチアマイシン、カリスタチンＡ、カンプトセシン、カペシタビン、カルゼレシン、ＣＣ−１０６５、シスプラチン、クランフェヌル、クリプトフィシン、シクロスポリンＡ、ダウノルビシン、ジアゼパム、ディスコデルモリド、ドセタキセル、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、ディネマイシンＡ、エポチロン、エトポシド、フロクスウリジン、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲフィチニブ、ゲルダナマイシン、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、インターフェロン、インターロイキン、イトラコナゾール、イリノテカン、レプトマイシンＢ、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、オキサリプラチン、パクリタキセル、スポンギスタチン、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、テニポシド、チオテパ、トポテカン、トリコスタチンＡ、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンが挙げられる。また、同時投与される抗癌剤または細胞毒性剤も、プロテインキナーゼ阻害剤であり得る。プロテインキナーゼ阻害剤の例としては、ラパマイシン；キナゾリン、特に４−アニリノキナゾリン類、例えば、イレッサ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］−４−キナゾリンアミン）またはタルセバ（Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−ｍ−エトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン一塩酸塩）；フェニルアミノピリミジン類、例えば、グリベック（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル］−Ｎ−［４−メチル−３−［［４−（３−ピリジニル）−２−ピリミジニル］アミノ］フェニル］−ベンズアミド）；ピロロ−またはピラゾロピリミジン類、例えば、ＢＩＢＸ１３８２（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ；Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−Ｎ−２−（１−メチル−４−ピペリジニル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン）；インドール類またはオキシインドール類、例えば、セマキシニブ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；３−［（３，５−ジメチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）メチレン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン）；ベンジリデンマロノニトリル類；フラボン類、例えば、フラボピリドール（Ａｖｅｎｔｉｓ；２−（２−クロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−［（３Ｓ，４Ｒ）−３−ヒドロキシ−１−メチル−４−ピペリジニル］−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）；スタウロスポリン類、例えば、ＣＥＰ−７０１（Ｃｅｐｈａｌｏｎ）；抗体、例えば、ハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；および／またはリボザイム、例えば、アンギオザイム（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
【００４５】
１７−ＡＡＧおよびある他の活性剤の組合せは、相乗的抗癌活性を有する。例えば、相乗効果は、１７−ＡＡＧをパクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドならびに先に挙げた数種の他の薬剤と組み合わせて投与した時に観察される。種々の実施形態で、これらの２種の薬剤を同じミセル中に組み合わせる（物理的に混合された処方）ことができ、あるいはパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧを別々のミセル中に別個に含有するミセルを、患者への投与のために、１つの治療用処方物に組み合わせる（単純に混合された処方）こともできる。他の実施形態では、１７−ＡＡＧミセルを１７−ＡＡＧ以外の薬物の投与より前、それと同時もしくはその後に投与することができる。１７−ＡＡＧ以外の薬物は、本明細書に記載するミセルによるカプセル化による投与を始めとする、任意の効果的な手段によって投与することができる。１７−ＡＡＧは、有効な処置のために、他の薬物の必要量が少なくなるように、患者を感作することができる。
【００４６】
さらに、二重薬剤ミセルは、薬物負荷が単剤ミセルで得られる最大負荷の約２０％以内になるように調製できることが、意外にも見出された。この驚くべき結果に加えて、コア内に両方の活性剤を含有するＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、一方の活性剤の損失に対する安定性が高いことが見出された。従って、２種の活性剤を含有するミセルでは、該活性剤は、活性剤の放出に関して、ミセルの安定性を増すような様式で相互作用し得ることが見出された。従って、１７−ＡＡＧ、およびパクリタキセル、ドセタキセルまたはエトポシドのような第２活性剤を含有するミセルは、該活性剤を１つしか含有しないミセルよりも安定であることが見出されている。
【００４７】
これらの発見は、治療用処方物中での相当量の有機溶剤または界面活性剤の使用に頼ることなく、Ｈｓｐ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）および化学療法剤（例えば、特にパクリタキセル、ドセタキセルまたはエトポシド）の投与を可能にする。臨床試験では、１７−ＡＡＧとパクリタキセルとの組合せは、ＤＭＳＯと、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬを必要とし、これはすなわち４成分混合剤である。このような処方物の成分は、患者に重大な望ましくない副作用を引き起こすことがあることがわかっている。また、２つの薬物を混合して一緒に輸液することはできず、同時薬物投与によって薬物の相乗効果が得られることはない（Ｓｏｌｉｔら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２００３；６３：２１３９−２１４４）。パクリタキセル／ＰＥＧ−ＰＬＡは、安全に患者に投与できることが知られている。例えば、Ｇｅｎｅｘｏｌ−ＰＭは、現在臨床試験のフェーズＩＩにある。また、１７−ＡＡＧを、ミセルの数をあまり増加させる必要なく、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルに共負荷することができる。このような処方物は、有機溶剤または他の界面活性剤の使用を避けることもできる。
【００４８】
従って、本明細書に記載する両親媒性ブロック共重合体（ＡＢＣ）ミセル系を使用して、種々の状態を処置することができる。薬物相乗作用は、ミセルの使用によって達成することができ、ミセル送達ビヒクル内に薬物をカプセル化しているため、投薬計画の毒性を低下させることができる。活性剤の組合せを、該ミセルにおいて使用することができる。単純混合および物理的混合処方物は、２種の異なる活性剤の投与を、例えばＩＶ輸液によって、１回に投与することを可能にする。ある有用な組合せおよび手法は、米国特許第７，２２１，５６２号明細書（Ｒｏｓｅｎら）に記載されている。本発明の実施形態で使用することができる他の両親媒性共重合体としては、米国特許第４，７４５，１６０号明細書（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌら）に記載されたものが挙げられる。
【００４９】
本明細書に開示されるミセル組成物は、１７−ＡＡＧの負荷能力が予想外に高く、制御放出処方物を調製するのに使用することができる、改良された処方物を提供する。また、薬物負荷二重活性ミセルは、単一薬剤ミセルに近いか、それと同等の薬物負荷能力を持つことも見出された。さらに、二重活性ミセル中の活性剤同士の相互作用は、そのようなミセルの安定性を高め得る。例えば、１７−ＡＡＧは、単純混合処方物および物理的混合処方物の両方について、二重薬剤ミセル処方物の安定剤として作用することができる。
【００５０】
以下の実施例は、上記の発明を説明するためのものであり、その範囲を狭めるものと解釈すべきではない。当業者であれば、実施例は、本発明を実施し得る種々の他の様式を提示していることを容易に理解するであろう。本発明の範囲内で、多くの変更および修正がなされ得ることが理解されよう。
【実施例】
【００５１】
実施例１． ＰＥＧ−ＰＬＡミセルにおける１７−ＡＡＧカプセル化
１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシンの調製 （１７−ＡＡＧ）をゲルダナマイシン（ＧＡ）から実験室で合成した（ＬＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）。つまり、１００ｍｇのＧＡ（０．２ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。次に、５当量のアリルアミン（５７．１ｇ／ｍｏｌ，ｄ＝０．７６３ｇ／ｍＬ）をフラスコに滴下した。反応系を、弱光下、室温（ＲＴ；約２３℃）で、ＴＣＬ分析が完了するまで（約２日間）（９５：５ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ，Ｒｆ０．２１）攪拌し、ヘキサン（３×）で沈殿させ、２０００ｇ’ｓで１５分間遠心分離し、蒸発乾固した。収量：９５ｍｇ、９５％；ＭＳ ｍ／ｚ ５８４（Ｍ−）；1HNMR (CDCl3) d 0.99 (m, 6H, 10-Me, 14-Me), 1.25(t, 1H, H-13), 1.60-1.85 (br m, 6H, H-13, H-14, 8-Me), 2.05 (s, 3H, 2-Me), 2.46(br m, 2H, H-15), 2.83-2.90 (br m, 3H, H-10), 3.27 (s, 3H, OMe), 3.36 (s,3H, OMe), 3.40 (t, 1H, H-12), 3.58-3.68 (br m, 2H, H-11, H-23), 4.31 (d, 1H,H-7), 5.10 (br s, 1H), 5.21-5.55 (br m, 3H, H-9, H-24), 5.86-5.99 (br t, 2H,H-5, H-23) , 6.59 (t, 1H, H-4), 6.94 (d, 1H, H-3), 7.28 (br s, 1H, H-19).
薬物負荷ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの調製および特性評価
Ｋａｔａｏｋａおよび共同研究者（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ６２（１−２）（１９９９）８９−１００）の手順に従って、１７−ＡＡＧを、ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｏｕｒｃｅ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）とともにジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）に溶解し、Ｈ２Ｏに対して透析することによって処方した。例えば、５ｍｇの１７−ＡＡＧおよび４５ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＡ（１０：９０ｗ／ｗ）を１０ｍＬのＤＭＡｃに溶解した。得られた溶液を、３５００ＭＷＣＯチューブ（ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ）中で、Ｈ２Ｏに対して透析した。得られたミセルを５０００ｇ’ｓで１０分間遠心分離して、取り込まれていない薬物を沈殿させた。ミセルへの取込みを、水性ＧＰＣ（Ｓｈｏｄｅｘ ＳＢ−８０６Ｍ）を使用して、ミセルの屈折率および１７−ＡＡＧの吸光度（ＵＶλ３３２）に基づく等価保持時間を確認することによって検証した。ミセル溶液を、減圧、室温下で回転蒸発によって濃縮し、次いで遠心分離（５０００ｇ’ｓで１０分間）した。図８に、単離されたＰＥＧ−ＰＬＡミセルの透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）画像（１８，０００×）を示す。
【００５２】
ミセル中に負荷された薬物の量を、逆相ＨＰＬＣ（Ｓｈｏｄｅｘ Ｃ１８カラム、６５−８２．５：３５−１７．５ＭｅＯＨ〜５５％ＭｅＯＨ＋０．２％ギ酸勾配、４０℃、３３２ｎｍ検出）によって、１７−ＡＡＧの曲線下面積（ＡＵＣ）（１７−ＡＡＧ検量線に基づく）を監視することによって測定した。薬物が存在する場合としない場合のＰＥＧ−ＰＬＡミセルの有効径を、ガウス強度装置を備えるＢｒｏｏｋｈａｖｅｎ動的光散乱装置（１００ｍＷ、５３２ｎｍレーザー）を用いて測定した。これらのＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＬＡミセルの臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を、種々の濃度（３×１０−５ｍｇ・ｍＬ−１〜１ｍｇ・ｍＬ−１）のＰＥＧ−ＰＬＡの存在下で、ピレンの３３９／３３４ｎｍ励起比を測定することによって決定した。
【００５３】
つまり、ＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＬＡミセルを、連続的に希釈して先に記載したように調製し、０．６μＭのピレンを用いて８０℃で１時間培養し、暗所に室温で１５時間放置し、ピレンの蛍光発光を３９０ｎｍで測定した（ＲＦ−５３０１ＰＣ分光蛍光光度計、Ｓｈｉｍａｄｚｕ）。ピレンは、微小環境極性に応答して周知の光物理的変化を受ける（Ｃｏｌｌｏｉｄｓ Ｓｕｒｆ．，Ａ Ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐ．１１８（１９９６）１−３９）。ピレンが優先的にＰＥＯ−ｂ−ＰＤＬＬＡミセルの疎水性コアに分割すると、ＣＭＣの急増が３３９／３３４ｎｍ励起の比内で起こる（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ７７（１−２）（２００１）１５５−１６０）。
【００５４】
実施例２． ＰＥＧ−ＰＬＡミセルを使用する、１７−ＡＡＧのＣｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）非含有処方物：ラットにおける特性評価および薬物動態
１７−ＡＡＧを可溶化するためのナノ担体としてのポリ（エチレンオキシド）−ブロック−ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ＰＥＧ−ＰＬＡ）で構成される分解性両親媒性ジブロックポリマーのような両親媒性ブロック共重合体（ＡＢＣ）ミセルの調製を、実施例１に上記した。この実施例では、これらのナノ担体の薬物動態挙動を、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００中の１７−ＡＡＧの現在の処方物と比較する。
【００５５】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセル薬物放出実験 先に記載した温度およびｐＨ制御の修正（Ｆｏｒｒｅｓｔら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１１６（２）（２００６）１３９−１４９）を加えて、放出実験は、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇおよび共同研究者の方法（Ｓｏｏら、Ｌａｎｇｍｕｉｒ１８（２００２）９９９６−１０００４）をもとにした。ミセル薬物溶液を、先に記載したように、１０％ｗ／ｗ薬物を含む０．３ｍＭのＰＥＧ−ＰＬＡポリマーで調製し、ミセル溶液の２．０ｍＬを、１０，０００個のＭＷＣＯ透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）（ｎ＝３）に注入した。透析カセットを、よく混合した、温度３７℃に調整した水浴中に配置し、浴槽水を１５〜２０分ごとに新しくした。別個に、コンピュータ制御下にあるぜん動ポンプから５０ｇ／Ｌの二塩基性および一塩基性リン酸塩溶液を注入し、ｐＨを７．４±０．１に維持した（一体化された装置）。一定の時点で、必要であれば、透析カセット内容物をｄｄＨ２Ｏで２ｍＬとし、１００μＬのアリコートを取り除いた。これを１００μＬのＭｅＯＨと混合し、該混合物の４０μＬを逆相ＨＰＬＣ（ＳｈｏｄｅｘＣ１８カラム；６５−８２．５：３５：１７．５のＡ〜Ｂ、ここで、Ａ：ＭｅＯＨおよびＢ：５５％ＭｅＯＨ＋０．２％ギ酸；４０℃；３３２ｎｍ検出）によって分析した。
【００５６】
インビトロ細胞毒性実験． ＰＣ−３ヒト前立腺細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１４３５）をＲＰＭＩ１６４０（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ）で成長させ、ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ−２２）をＤＭＥＭ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）で培養した。ここで、両方とも、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μｇ／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシン（Ｃａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ）、および２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｃａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が添加されていた。細胞株を、９０μＬの適切な培養液中で、１ウェル当たり３０００細胞の初期密度で９６ウェルプレートに置き、５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃に維持した。２４時間後、ＤＭＳＯ中の１７−ＡＡＧを成長培養液で１０倍に希釈し、１０μＬのアリコート（１％ｖ／ｖの最終ＤＭＳＯ濃度）としてウェル（３つのウェルが２組、ｎ＝６）に加えた。薬物負荷ミセルまたはミセル単体を、ミリＱ水で処方した（ＤＭＳＯの透析に倣って、ミセルを形成した）。ウェルへの添加前にさらに試料を希釈する必要はなかった。細胞を全ての試験化合物とともに７２時間培養した。その後、細胞の代謝速度をレサズリン染料（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して測定した。データをヒル−スロープ曲線（Ｓｉｇｍａ Ｐｌｏｔ９．０、Ｓｙｓｔａｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．）に合わせることによって、対照に対して細胞増殖を５０％阻害する濃度（ＩＣ５０）を測定し、別々の測定の平均値±標準偏差として報告する。
【００５７】
薬物動態実験． １７−ＡＡＧの標準的なビヒクルをＺｈｏｎｇら（米国特許出願公開第２００５／０２５６０９７号公報）に従って処方した。ここで、注入の直前に２：１：１ ＥｔＯＨ：ＣｒＥＬ：ＰＥＧ４００中の１５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧを、３ｍｇ／ｍＬに希釈した。これらのミセルの取込みおよび薬物放出の方法は、記載されている方法に僅かな変更を加えて行った（Ｆｏｒｒｅｓｔら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１１０（２）（２００６）３７０−３７７）。オスのスプラーグ・ドーレイラットに右頸静脈経由でカニューレを挿入し、新しい処方物（１．５ｍｇ／ｍＬのＰＥＧ−ＰＬＡ中の１７−ＡＡＧ）またはＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方物のいずれかを、それぞれ１０ｍｇ／ｋｇ（各処置群についてｎ＝５）で静脈内に投薬した。投薬後、連続した血液試料（約０．３０ｍＬ）および尿試料を２４時間まで採取した。
【００５８】
１００μＬの血清または尿に、１００μＬの内部標準を加えた（２５μｇ／ｍＬのゲルダナマイシン）。試料を１ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出し、有機画分を乾燥、濃縮した。残渣を４００μＬの初期移動相中に溶かし、遠心分離し、１５０μＬをＲＰ−ＨＰＬＣに注入した。Ａ：５０ｍＭの酢酸＋１０ｍＭのＴＥＡ、およびＢ：ＭｅＯＨ＋１０ｍＭのＴＥＡ（０〜３分 ４０％ Ｂ、３．０１〜１１分 ８０％ Ｂ、１１．０１〜１８分 ４０％ Ｂ）中で、１７−ＡＡＧを、３０５ｎｍの内部標準を用いて、Ｇｅｎｅｓｉｓ３μｍＣ１８ ３３ｍｍ×４．６ｍｍカラム、１ｍＬ／分を使用して、３３２ｎｍで分析した。薬物動態パラメータを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）ソフトウェア（ｖｅｒ．５．０１）および非区画モデリングを使用して計算した。動物実験は全て「実験動物の飼育に関する原則」（ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．８５−２３，１９８５年に改訂）に従って行った。
【００５９】
生体内分布実験． １７−ＡＡＧの組織内分布に対する処方物の効果を評価するために、ラット（各群につきｎ＝５、２００〜２４０ｇ）にカニューレを挿入し、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００中の１７−ＡＡＧ、またはＰＥＧ−ＰＬＡミセル中の１７−ＡＡＧを静脈内に投与した。これらは全て、先行する薬物動態実験と同等であった。処方物の注入から３時間後、各動物（各時点に関してｎ＝５）を麻酔し、心穿刺によって放血した。脳、肺、心臓、肝臓、ひ臓、腎臓、膀胱、筋肉および骨、ならびに全血および血清の試料を収集した。組織試料をペーパータオルでふき、氷冷した生理食塩水中で洗浄し、ビンに入れて過剰の流体を除去し、秤量し、液体窒素中で迅速に冷凍し、液体窒素下、乳鉢および乳棒で微粉末に粉砕し、ＨＰＬＣ分析により薬物濃度を評価するまで−７０℃で保存した。
【００６０】
データ分析． 収集したデータは、平均、および平均の標準誤差（平均±ＳＥＭ）、または別途に指示がある場合は、平均および標準偏差（平均±ＳＤ）として示す。可能な場合は、ＮＣＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｐｏｗｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＣＳＳ、Ｋａｙｓｖｉｌｌｅ、ＵＴ）を使用して、データの統計学的有意性を分析した。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を、不対試料用に使用した。ｐ＜０．０５の値は、統計的に有意であると考えられる。
【００６１】
結果および検討
ゲルダナマイシン（ＧＡ）は、水溶性が低い。一般的な医薬担体中のＧＡ処方物は、肝毒性が著しく高い。これは、肝臓が主な排出経路であるためである。１７−ＤＭＡＧおよび１７−ＡＡＧのような類縁体は、ＧＡより低い肝毒性を示すが、一つにはそれらの広い分布のため、非特異的毒性の上昇を特徴とする。従って、ナノ担体処方物が強く求められる。生体適合性、製造の容易さ、動力学的および熱力学的安定性、および大量の親油性薬物を可溶化するＰＥＧ−ＰＬＡミセルの能力によって、本発明のミセル処方物と組み合わせて使用することができるナノ担体系が提供され得るかどうかを、これらの実験は決定しようとしている。種々の量の１７−ＡＡＧが、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルに可溶化された（表１）。
【００６２】
【表１】
１７−ＡＡＧの送達のための高い溶解性およびきつい界面活性剤の欠如は、このミセル処方物が、ＣｒＥＬを含む現在の送達ビヒクルよりもはるかに優れていることを実証している。
【００６３】
ミセルの物理的特性評価．動的光散乱（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）により、薬物を含有しない平均寸法２４２±５ｎｍのＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル、および薬物を負荷した平均寸法２５７±２ｎｍのＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルは、最大１．５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧを可溶化することが実証された。ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）は、３５０ｎＭの低い臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を有する（図１（ｂ））ことがわかり、これは、以下のＧｉｂｂｓのミセル形成の自由エネルギーに示されるように、該ミセルの熱力学的安定性が高かったことを示唆する。
【００６４】
ΔG＝RTln(CMC)
ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルに関してここで報告した大きさおよびＣＭＣは、Ｋａｔａｏｋａらによって先に報告されているものよりもかなり大きい（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ６２（１−２）（１９９９）８９−１００）。ミセルへの１７−ＡＡＧのカプセル化は、有機溶剤としてＤＭＳＯを使用して行われていたが、透析法でミセルを形成する場合は、ＤＭＡｃの使用が有利であることがわかった。１７−ＡＡＧを可溶化するＰＥＧ−ＰＬＡミセルの適合性を評価するために、１０％ｗ／ｗで負荷実験を行った。
【００６５】
表１における１７−ＡＡＧ負荷の報告値は、ＰＥＧ−ＰＬＡに基づく１７−ＡＡＧの１０％ｗ／ｗ負荷を示す。薬物のミセルへの取り込みは、水性ＧＰＣ（Ｓｈｏｄｅｘ ＳＢ−８０６Ｍ）を使用して、屈折率（ミセル）および１７−ＡＡＧ（ＵＶλ３３２）において、等価保持時間を監視することによって検証した。ＰＥＧ−ＰＬＡに対する１７−ＡＡＧのモル比は、０．７３±０．０９〜１の範囲であり、１７−ＡＡＧ負荷効率は１９±３％ｗ／ｗであった。回転蒸発による濃縮の後、０．３ｍＭのＰＥＯ６０００−ｂ−ＰＤＬＬＡ１２０００中の１７−ＡＡＧの最大溶解度は、約１．５±０．２ｍｇ／ｍＬであり、１７−ＡＡＧに比べて約１５０倍改善した（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅに従い約１０μｇ／ｍＬ）。ラパマイシンに関して先に報告したように、薬物に対して１：１の比のα−トコフェロールを取り込むことにより、負荷を改良することが試みられた（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ１１０（２）（２００６）３７０−３７７）が、得られたミセルは大きく（＞５００ｎｍ）、不安定であった。４℃でも、４〜５時間後に、薬物は溶液から析出した。ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：１２ｋＤａ）ミセル中の薬物負荷は、ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル（１．５ｍｇ／ｍＬ）、およびα−トコフェロール含有および非含有の場合と比べて、非常に少ない（＜０．５ｍｇ／ｍＬ）こともわかった。
【００６６】
１７−ＡＡＧ放出実験．正常な体温でのＰＥＧ−ＰＬＡミセルからの１７−ＡＡＧのインビトロ放出動力学を、３７℃の水に対する薬物負荷ミセルの透析によって調べた。１７−ＡＡＧの溶解性が低いことから、放出媒体は、浴を連続的にパージしなくても素早く飽和していたであろう。従って、放出データの分析における制約とは、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルから直接１７−ＡＡＧの放出を測定できないことであった。一旦薬物がＰＥＧ−ＰＬＡミセルから放出されると、薬物は透析膜を通って拡散するしかなく、第２の拡散バリアを生じて分析を複雑にした。透析膜が放出速度全体に大きな影響を与えるかどうかを測定するために、カセットに遊離の１７−ＡＡＧ（水で希釈する前に、最小量のＭｅＯＨに初期に溶解させたもの）を負荷し、等価保持時間を測定した。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、約４時間の半減期での放出を示し（図２）、これは薬物のみの場合と比べて２倍の改善であった。
【００６７】
インビトロ細胞毒性実験．ミセルにカプセル化された１７−ＡＡＧのＭＣＦ−７ヒト乳癌およびＰＣ−３前立腺癌細胞に対する増殖阻害活性を、レサズリン染料を使用してインビトロで測定し、代謝活性を検査した。１７−ＡＡＧは、ＭＣＦ−７における２２±１４ｎＭのＩＣ５０、およびＰＣ−３細胞における７４±１４ｎＭのＩＣ５０のサブマイクロモル濃度で活性であった。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって報告された範囲内の全ての数字は、それぞれ、ＭＣＦ−７についてのＩＣ５０として１２．６ｎＭ、およびＰＣ−３についての５０．１ｎＭであった。比較として、薬物にカプセル化されたミセルは、ＭＣＦ−７においてＩＣ５０が１６０±５６ｎＭ、ＰＣ−３細胞において５３６±１３ｎＭであった（表２）。
【００６８】
【表２】
ＩＣ５０値におけるこの相違は、ミセルからの長時間にわたる薬物の放出のため、および放出と、閉ざされた系内のミセルのコアへと戻る薬物分配との間で達した偶発的な均衡状態のためであり得る。ミセル単独では、調べた細胞株内において明らかな毒性は示さなかった（ＩＣ５０＞１０，０００ｎＭ）。カプセル化された薬物は、１７−ＡＡＧより活性が低いように思われるが、ナノカプセル化は、腫瘍蓄積が促進されるため、インビボでの１７−ＡＡＧ送達の全体的な効力を増大させると考えられる。同じように、Ｌｉらは、ポリ−（Ｌ−グルタミン酸）−パクリタキセル複合物の効力が、インビトロではパクリタキセルよりも有意に低かったが、腫瘍中で蓄積が促進されるため、インビボでは優れた活性を実証したと報告した（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８（１９９８）２４０４−２４０９）。
【００６９】
薬物動態実験．ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方物と比較した、ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル処方物の薬物動態学的プロファイルの相違を図３に示す。対照処方物と比べたミセル処方物からの２４時間以内の１７−ＡＡＧの効果的な定量化（定量化限界値を下回る前の最大１２時間のみの効果的な定量化）によって観察されるように、ミセル処方物は、注入から２４時間後に血清ＡＵＣの増加を示した（図３ａ）。また、ミセル処方物は、２４時間後、尿中に存在する１７−ＡＡＧの増加（図３ｂ）、３６時間にわたる腎クリアランスのより早い速度（図３ｃ）、および注入から４８時間後の尿中の高い薬物濃度（図３ｄ）も示した。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの血清の曲線下面積（ＡＵＣ）は、標準的な処方物の１．３倍であった。１０ｍｇ／ｋｇ（表３）で、ミセル処方剤の総クリアランス（総ＣＬ）は、標準的なビヒクルと比べて１．３倍減少し、ミセル処方剤の薬物の腎クリアランス（腎ＣＬ）は、より高い（１．５倍）肝クリアランス（肝ＣＬ）を示した標準的なビヒクルと比べて増加した（４．３倍）。
【００７０】
【表３】
ＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセル処方物では、薬物の血清半減期（ｔ１／２）が２．７倍延長した。対照の標準的なビヒクル処方物に比べて、総クリアランスの低下（１．３倍減少）によって観察されたように、長時間血中に存在するため、ミセル処方物の分布容積（Ｖｄ）の増加（１．７倍）、および血清における半減期の延長（２．７倍延長）および尿中における半減期の延長（１．２倍延長）が観察された。ミセル処方物に関する薬物の腎クリアランス（腎ＣＬ）は、標準ビヒクルに比べて増加し（４．３倍）、肝クリアランス（肝ＣＬ）がより高い（１．５倍）ことを示した。最後に、２種の処方物の間に、平均滞留時間（ＭＲＴ）の有意な相違はないことがわかった。
【００７１】
２種の処方物の間の薬物動態パラメータ全体には大きな相違はないが、ここでの結果により、好ましくない副作用における大きな減少が、１７−ＡＡＧ ＰＥＧ−ＰＬＡミセルナノ担体処方物によってもたらされ得ることが示されている。標準的な処方物は、ＣｒＥＬ、すなわち患者にアナフィラキシーを起こすことが知られている有害な界面活性剤を含む。ＣｒＥＬ処方物の使用は、抗ヒスタミン類およびステロイド類で予備処置を必要とする（Ｓｙｄｏｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、２００６；１０３（４６）、１７４０８−１３）。本発明によるミセル処方物は、そのような予備処置を必要としない。
【００７２】
ＰＥＧ−ＰＬＡミセル中の１７−ＡＡＧは、ラットにおいて良好な忍容性を示した。該実験の期間中、激しい毒性の徴候は観察されなかった。また、ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００の標準的な処方物について観察された２４時間以内の死亡率が３５％であったのに比べて、ナノ担体処方物について観察された死亡率は０であった。従って、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルナノ担体処方物中の１７−ＡＡＧは、ＥｔＯＨおよびＣｒＥＬのような毒性薬剤を必要とすることなく、１７−ＡＡＧの薬物動態的性質を保持することができる。従って、該処方物は、癌治療において、有望な化学療法剤１７−ＡＡＧを使用する新しい方法を提供する。
【００７３】
生体内分布実験．定量可能な量の１７−ＡＡＧを、測定した全ての組織で観察した（図４（ａ））。組織採取を、１０ｍｇ／ｋｇの異なる処方物のＩＶ投与から３時間後に行った。対照処方物に関して、１７−ＡＡＧ濃度の最も高いものから最も低いものの順序は、肺＞腎臓＞肝臓＞ひ臓＞心臓＞脳＞膀胱＞骨＞筋肉＞血清＞全血であった。ミセル処方物に関して、最も高い濃度から最も低い濃度の順序は、肺＞腎臓＞肝臓＞ひ臓＞脳＞骨＞膀胱＞心臓＞筋肉＞血清＞全血であった。ミセル系は、１７−ＡＡＧの脳、心臓、および膀胱への組織内分布において、いくらかの違いを示したが、分析された他の組織においては、標準的な処方物に類似する濃度が見られた。ミセル処方物に関して、全ての組織における組織対血清比（Ｋｐ）の値（図４（ｂ））は、対照より低かった。標準的な処方物（ＣｒＥＬ−ＥｔＯＨ−ＰＥＧ４００）およびミセル処方物にカプセル化された１７−ＡＡＧの投与後のＫｐ値（図４、下のパネル）は、脳、心臓、膀胱および全血に関して、統計的に相違し、このことは、組織の間で分配に何らかの優先性があることを示唆する（図４（ｂ））。いくつかの組織のうち、処方物間のＫｐ値の相違は、対照と本発明によるミセル処方物との間の担体の特性、分配、クリアランス、および１７−ＡＡＧの分布容積の相違を始めとするいくつかの要因に起因するものであろう。
【００７４】
結論
適切な処方物がないために、１７−ＡＡＧの臨床試験への移行が妨げられてきた。１７−ＤＭＡＧ（アルベスピマイシン）のようなより新しい誘導体は、水溶性に関連するいくつかの問題を克服している。しかし、肝臓によるこれらの誘導体の優先的かつ迅速なクリアランスは、腫瘍への薬物分布を限定し、そのため、薬物の効力を大きく制限している。有機共溶剤またはきつい界面活性剤を必要としない１７−ＡＡＧの処方物が調製されている。該処方物は、１．５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧをＰＥＧ−ＰＬＡ（１２：６ｋＤａ）ミセルに可溶化することができる。有機共溶剤または界面活性剤を必要としない１７−ＡＡＧの第２の処方物が調製されている。この処方物は、約５ｍｇ／ｍＬの１７−ＡＡＧをＰＥＧ−ＰＬＡ（２：２ｋＤａ）ミセルに可溶化することができる。パクリタキセルのＰＥＧ−ＰＬＡミセルへのカプセル化に関する類似の研究は、このより安全なミセル処方物が、ＣｒＥＬを患者に投与した後に該薬物に関連する有害な副作用を最小限にできることを実証している。さらに、ナノスケールの寸法は、たとえ標的リガンドが存在しなくても、ＥＰＲ効果により薬物の腫瘍特異性にさらなる利点を与える。
【００７５】
実施例３．ポリマー組成物および薬物負荷
本発明によるある特定のミセルを、表４および５のデータに示すように調製した。
【００７６】
【表４】
表４で製造したミセルの各試料に関して、０．５ｍＬのアセトニトリル（ＡｃＣＮ）を使用して薬物およびポリマー（約６０℃で）を溶解し、その後溶液を濃縮し、０．５ｍＬの脱イオン水（ＤＷ）を加えてミセルを形成した。０．４５μｍ孔フィルターを使用して、ろ過によりミセルを単離した。パクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセル（ＰＡＸ＋ＡＡＧ）に関して、薬剤のポリマーに対する比を、各薬剤の質量によって計算した。例えば、２ｍｇのパクリタキセルと２ｍｇの１７−ＡＡＧとを、５ｍｇのＰＥＧ−ＰＬＡポリマー（２Ｋ−２Ｋ）で可溶化し、１：２．５の薬物：ポリマー比のミセルとした（すなわち、この比は、薬剤の合計ではなく、１つの薬剤の質量によって計算した）。
【００７７】
【表５】
表５は、パクリタキセル（ＰＡＸ）、１７−ＡＡＧ、または２つの薬剤を一緒に負荷してカプセル化した種々のＰＥＧ−ＰＬＡミセルの物理的安定性を示す。表中の値は、室温で蒸留水中に２４時間保存された後、ミセルによって保持された活性剤の量を示す。１７−ＡＡＧを単独で、またはパクリタキセルと組み合わせてカプセル化したミセルは、パクリタキセル単一薬剤ミセルよりも有意に安定であった。類似の安定性結果が、１７−ＡＡＧ／ドセタキセルまたは１７−ＡＡＧ／エトポシドの組合せを含有するミセルに関しても得られた（図１２〜１５参照）。図１０に、脱イオン水に溶解することができる薬物処方物の量（ｍｇ／ｍＬ）を示す。
【００７８】
５Ｋ：６Ｋ（それぞれＰＥＧ：ＰＬＡ）のブロックサイズのＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、パクリタキセル単独あるいは１７−ＡＡＧ単独を、約５ｍｇ／ｍＬで適切に可溶化する。しかし、パクリタキセルミセルは、パクリタキセルがミセルから析出することによって（例えば、パクリタキセルの水溶性の喪失）、１７−ＡＡＧミセルよりも速くミセルのコアから薬物を失った（２４時間で）。１７−ＡＡＧミセルは、特定の他の活性剤（例えば、パクリタキセル）だけを含むミセルよりも、有意に安定であり溶解性が高いことがわかった。従って、１７−ＡＡＧは、ミセル安定剤と考えることができる。
【００７９】
パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧの両方を同時にＰＥＧ−ＰＬＡミセルに負荷した場合、予想外の効果が見出された。これらのミセルにおいて、各薬物の可溶化は、各薬物を単独でＰＥＧ−ＰＬＡミセルに負荷した場合に得られるレベルに近づいた。例えば、５Ｋ：６Ｋミセルでは、両薬剤のそれぞれに関して、（薬剤のみの場合の約５ｍｇ／ｍＬと比較して）約４〜５ｍｇ／ｍＬの負荷が達成された。
【００８０】
これらの画期的な結果に加えて、両薬剤をコア内に含有するＰＥＧ−ＰＬＡミセルは、非１７−ＡＡＧ活性剤の損失について安定性が高いことが示された（図１１参照）。ＰＥＧ−ＰＬＡミセルのコア内の活性剤、例えば、１７−ＡＡＧとパクリタキセルとの間の相互作用により、ミセルの安定性が増すことが見出された。５Ｋ−６Ｋおよび１２Ｋ−６ＫのＰＥＧ−ＰＬＡを有するポリマーミセルは、ミセルの薬物：ポリマー比が１：７．５で、さらなる安定性を示した。同じ結果が、１７−ＡＡＧと共にドセタキセルまたはエトポシドを含有するミセルにも見られた。従って、１７−ＡＡＧ（Ｈｓｐ９０阻害剤および化学療法剤（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、テニポシドおよび／またはエトポシド）の組合せを、有機溶剤、界面活性剤などに頼ることなく投与することができる。
【００８１】
これらの結果を、ＰＥＧ−ＰＬＡミセル（ＰＥＧ−ＰＬＡ ５Ｋ６Ｋ、薬物：ポリマー比＝１：７．５）による、１７−ＡＡＧとエトポシド、ドセタキセルおよびパクリタキセルとの共可溶化の結果を示す図１０および１１にさらに示す。具体的には、図１０は、ＰＥＧ−ＰＬＡミセル中でのパクリタキセルおよび１７−ＡＡＧを合わせた可溶化を示す。２Ｋ−２Ｋおよび１２Ｋ−３Ｋ ＰＥＧ−ＰＬＡから調製されたミセルは、薬物：ポリマー比が１：５未満で、より低い薬物可溶化結果をもたらした。５Ｋ−３Ｋ、５Ｋ−６Ｋおよび１２Ｋ−６Ｋ ＰＥＧ−ＰＬＡから調製されたミセルは、１：７．５の薬物：ポリマー比で、最も高い可溶化をもたらした。
【００８２】
エトポシドおよびドセタキセルは、パクリタキセルおよび１７−ＡＡＧと同じ方法で、１７−ＡＡＧと共可溶化することができる。また、１７−ＡＡＧの存在下で、より多くのエトポシドが２４時間にわたって溶液中にとどまる。図１２〜１５に、水中でのＰＥＧ−ＰＬＡミセルからの薬物放出を始めとする、ある量の分解に起因する、第２活性剤（パクリタキセル、ドセタキセルまたはエトポシド）の析出時の光学密度の変化を示す。１７−ＡＡＧを含有するミセルは、この分解の発生を予防および／または阻害する。
【００８３】
図１２（ａ）〜（ｄ）に、パクリタキセル／１７−ＡＡＧミセルの溶解度、およびそれらの２４時間後の安定性（ＰＥＧ−ＰＬＡ ５Ｋ：６Ｋ、薬物：ポリマー比＝１：７．５）を示す。Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒを、粒子径データを作成するために使用した。図１２（ｃ）は、２４時間後に、９８％を超えるＰＡＸと９７％を超える１７−ＡＡＧがミセル内に残留したことを示す。図１２（ｄ）は、２４時間後に、わずか８％のＰＡＸがＰＡＸ単独ミセル中に残留したことを示し、これは、１７−ＡＡＧの存在が、物理的に混合されたミセルに対して有意な安定性を提供することを示唆している。
【００８４】
類似の結果が、エトポシド（ＥＴＯ）およびエトポシド／１７−ＡＡＧミセル（図１３（ａ）〜（ｄ））、ならびにドセタキセル（ＤＣＴＸ）およびドセタキセル／１７−ＡＡＧミセル（図１４（ａ）〜（ｄ））について観察された。ＰＥＧ−ＰＬＡ ５Ｋ：６Ｋから調製されたミセルを使用して、１：７．５（ｗｔ．／ｗｔ．）の薬物：ポリマー比で、図１３および１４のデータを得た。図１３（ｃ）は、２４時間後に、ほぼ１００％のエトポシドおよび１７−ＡＡＧがミセル内に残留したことを示し、一方、エトポシド単独ミセルでは、エトポシドの大量の損失が観察された（図１３（ｄ）：平均で７０％を超える損失（ｎ＝３））。エトポシドは、わずか１〜２時間後には、エトポシド単独ミセルから析出し始めた。
【００８５】
図１４（ｃ）は、ドセタキセルを含むミセル内に１７−ＡＡＧを含有させることが、ドセタキセル単独ミセルと比較して有意な安定性の向上をもたらしたことを示す。２４時間後、ドセタキセルおよび１７−ＡＡＧは両方ともミセル内に９５％を超える量で残留し、一方ドセタキセル単独ミセルでは、ドセタキセルの大量の損失が観察された（図１４（ｄ）：平均で７３．２％を超える損失（ｎ＝３））。ドセタキセルは、わずか２時間後には、ドセタキセル単独ミセルから析出し始めた。
【００８６】
図１５（ａ）および１６（ｂ）は、パクリタキセルに加えて、１７−ＡＡＧをミセルに取り込むと、さらなる安定性がミセルに与えられることをさらに示す。薬物−ミセルにおける光学密度（ＯＤ）変化の測定は、ディッププローブを備えるＶａｒｉａｎ（登録商標）Ｃａｒｙ５０（０〜１４４０分；１５分ごと；獲得：０．１秒）を使用して、６５０ｎｍ（ＲＴ）で行った。１：７．５の薬物：ポリマー比を、５Ｋ：６Ｋ ＰＥＧ−ＰＬＡミセルで使用した。パクリタキセルカプセル化ミセルに１３．４％パクリタキセル（ｗｔ．／ｗｔ．）を負荷し、パクリタキセル／１７−ＡＡＧ二重薬剤ミセルに２６．８％の薬剤を負荷した（組合せ；各薬物につき１３．４％）。図１５（ａ）は、大量のパクリタキセルがパクリタキセルカプセル化ミセルから失われたことを示し、一方、パクリタキセル／１７−ＡＡＧミセルは、２４時間にわたって実質的に安定であった（図１５（ｂ））。
【００８７】
さらに、単純混合ミセル組成物を調製したときに、予想外な結果が観察された。例えば、１つの試料のミセルがパクリタキセルをカプセル化し、第２の試料のミセルが１７−ＡＡＧをカプセル化したＰＥＧ−ＰＬＡミセルを調製した。ミセルの２種類の試料を組み合わせて単一の水性処方物とした場合、パクリタキセル単一薬剤ミセルは、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルの純粋なパクリタキセル単一薬剤処方物よりも、析出に対して安定であった。従って、１７−ＡＡＧミセルを有する処方物におけるパクリタキセルカプセル化ミセルは、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルにパクリタキセルだけを取り込んだ処方物に比べて、安定性が向上した。いくつかの実施形態では、処方物中のミセル間で活性剤の平衡が起こり得る。他の単一薬剤ミセルは、１７−ＡＡＧカプセル化ＰＥＧ−ＰＬＡミセルで単純混合処方物を形成することによって、同様に安定化することができる。
【００８８】
全ての公報、特許および特許文献は、参照によって個別に組み込まれているかのように、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明を、種々の特的の好ましい実施形態および手法に言及して記載した。しかし、本発明の精神および範囲内にある限り、多くの変更および修正がなされてもよいことが理解されよう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１７−ＡＡＧカプセル化ミセルを含む組成物であって、
ミセルは、ポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマーを含み、
ポリマーの疎水性ポリ（乳酸）ブロックは各ミセルの内部に向き、ポリマーの親水性ポリ（エチレングリコール）ブロックは各ミセルの外部に向き、
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１，０００〜約３５，０００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約１，０００〜約１５，０００ｇ／ｍｏｌであり、
ミセル中の１７−ＡＡＧの薬物負荷は、ミセルの重量に対して約１重量％〜約２５重量％であり、かつ
エタノール、ジメチルスルホキシド、ひまし油、およびひまし油誘導体を実質的に含まない、組成物。
【請求項２】
ミセル中の１７−ＡＡＧの薬物負荷は、１０重量％〜約２０重量％である、請求項１の組成物。
【請求項３】
水性ビヒクルをさらに含み、１７−ＡＡＧの濃度は、水性ビヒクルの容積に対して約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１の組成物。
【請求項４】
１７−ＡＡＧの濃度は、水性ビヒクルの容積に対して約１ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬである、請求項３の組成物。
【請求項５】
約２重量％未満のエタノール、ジメチルスルホキシド、ひまし油、およびひまし油誘導体を含む、請求項１の組成物。
【請求項６】
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１０，０００〜約１４，０００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約５，０００〜約７，０００ｇ／ｍｏｌであり、ミセルの平均直径は約２５０ｎｍ〜約２７０ｎｍである、請求項１〜５のいずれか１項の組成物。
【請求項７】
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１，５００〜約２，５００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約１，５００〜約２，５００ｇ／ｍｏｌであり、ミセルの平均直径は約４０ｎｍ〜約６０ｎｍである、請求項１〜５のいずれか１項の組成物。
【請求項８】
１つ以上のＰＥＧ−ＰＬＡミセルにカプセル化された第２活性剤をさらに含み、ミセル中の第２活性剤の薬物負荷は、ミセルの重量に対して約１重量％〜約２５重量％である、請求項１の組成物。
【請求項９】
１７−ＡＡＧおよび第２活性剤は、１つ以上のＰＥＧ−ＰＬＡミセルに一緒に取り込まれている、請求項８の組成物。
【請求項１０】
１７−ＡＡＧおよび第２活性剤は、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルに別々に取り込まれ、該ミセルは、単一の水性ビヒクル内で組み合わされている、請求項８の組成物。
【請求項１１】
第２活性剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、またはテニポシドである、請求項８〜１０のいずれか１項の組成物。
【請求項１２】
請求項１または８の組成物と、水性担体とを含む医薬組成物であって、該組成物は、静脈内または腹腔内投与のために処方され、水性担体は、生理食塩水または炭水化物を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
１７−ＡＡＧの投与によって治療され得る状態の、あるいはそのような状態であると診断された患者に１７−ＡＡＧを投与する方法であって、有効量の１７−ＡＡＧカプセル化ミセルを含む組成物を投与することを含み、ミセルはポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマーを含み、
ポリマーの疎水性ポリ（乳酸）ブロックは、各ミセルの内部に向き、ポリマーの親水性ポリ（エチレングリコール）ブロックは、各ミセルの外部に向き、
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１，０００〜約３５，０００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約１，０００〜約１５，０００ｇ／ｍｏｌであり、
ミセル内の１７−ＡＡＧの薬物負荷は、ミセルの重量に対して約１重量％〜約２５重量％であり、かつ
該組成物は、エタノール、ジメチルスルホキシド、ひまし油、およびひまし油誘導体を実質的に含まない、方法。
【請求項１４】
ミセル中の１７−ＡＡＧは、約４ｍｇ／ｍ２〜約４０００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項１３の方法。
【請求項１５】
ミセル中の１７−ＡＡＧは、１週あたり約１００ｍｇ／ｍ２〜１週あたり約５００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項１３の方法。
【請求項１６】
ミセル中の１７−ＡＡＧは、１週あたり約３００ｍｇ／ｍ２〜１週あたり約４００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項１３の方法。
【請求項１７】
組成物は、１７−ＡＡＧを含むミセル内部に第２活性剤をさらに含む、請求項１３の方法。
【請求項１８】
癌細胞を阻害または死滅させる方法であって、該細胞に、阻害または致死させるのに有効な量の請求項１または請求項８の組成物を接触させる工程を含む、方法。
【請求項１９】
接触がインビボで行われる、請求項１８の方法。
【請求項２０】
接触がインビトロで行われる、請求項１８の方法。
【請求項２１】
癌細胞は、ヒト乳癌細胞、ヒト前立腺癌細胞、または白血病細胞である、請求項１８の方法。
【請求項２２】
Ｈｓｐ９０を阻害する方法であって、該Ｈｓｐ９０を、有効阻害量の請求項１または８の組成物と接触させる工程を含む、方法。
【請求項２３】
接触がインビボで行われる、請求項２２の方法。
【請求項２４】
接触がインビトロで行われる、請求項２２の方法。
【請求項２５】
１７−ＡＡＧ、およびポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマーから形成されるミセルを含まない担体の投与後の血液中の１７−ＡＡＧの半減期と比較して、哺乳類の血液中の１７−ＡＡＧの半減期を延長する方法であって、請求項１または８の組成物の投与を含む、方法。
【請求項２６】
１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを製造する方法であって、１７−ＡＡＧとポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマー単位とを、水混和性溶剤に溶解する工程と、該溶液を透析バッグに加える工程と、該透析バッグを水を含む浴に加えて、該透析バッグ中に１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを得る工程と、該ミセルを単離する工程とを含む、方法。
【請求項２７】
１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを遠心分離して、取り込まれていない１７−ＡＡＧを析出させる工程と、ろ過によって取り込まれていない１７−ＡＡＧを除去し、単離された１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを得る工程とをさらに含む、請求項２６の方法。
【請求項２８】
水を含む浴は、溶解した固体を含有する、請求項２６または２７の方法。
【請求項２９】
溶解した固体は、塩化ナトリウム、デキストロースおよび緩衝液のうち１つ以上を含む、請求項２７の方法。
【請求項３０】
水混和性溶剤は、アセトニトリル、ジメチルスルホキシドまたはジメチルアセトアミドである、請求項２６または２７の方法。
【請求項３１】
１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを製造する方法であって、１７−ＡＡＧおよびポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマー鎖を、水混和性溶剤に溶解して溶液を得る工程と、水混和性溶剤を除去してポリマーと１７−ＡＡＧとを含む固体または油様組成物を得る工程と、水を該組成物に加えて水性混合物を得る工程と、該混合物を遠心分離して１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルと沈降物とを含有する上澄み液を得る工程と、該沈降物を除去して、単離された１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを得る工程とを含む、方法。
【請求項１】
１７−ＡＡＧカプセル化ミセルを含む組成物であって、
ミセルは、ポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマーを含み、
ポリマーの疎水性ポリ（乳酸）ブロックは各ミセルの内部に向き、ポリマーの親水性ポリ（エチレングリコール）ブロックは各ミセルの外部に向き、
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１，０００〜約３５，０００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約１，０００〜約１５，０００ｇ／ｍｏｌであり、
ミセル中の１７−ＡＡＧの薬物負荷は、ミセルの重量に対して約１重量％〜約２５重量％であり、かつ
エタノール、ジメチルスルホキシド、ひまし油、およびひまし油誘導体を実質的に含まない、組成物。
【請求項２】
ミセル中の１７−ＡＡＧの薬物負荷は、１０重量％〜約２０重量％である、請求項１の組成物。
【請求項３】
水性ビヒクルをさらに含み、１７−ＡＡＧの濃度は、水性ビヒクルの容積に対して約０．６ｍｇ／ｍＬ〜約２０ｍｇ／ｍＬである、請求項１の組成物。
【請求項４】
１７−ＡＡＧの濃度は、水性ビヒクルの容積に対して約１ｍｇ／ｍＬ〜約６ｍｇ／ｍＬである、請求項３の組成物。
【請求項５】
約２重量％未満のエタノール、ジメチルスルホキシド、ひまし油、およびひまし油誘導体を含む、請求項１の組成物。
【請求項６】
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１０，０００〜約１４，０００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約５，０００〜約７，０００ｇ／ｍｏｌであり、ミセルの平均直径は約２５０ｎｍ〜約２７０ｎｍである、請求項１〜５のいずれか１項の組成物。
【請求項７】
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１，５００〜約２，５００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約１，５００〜約２，５００ｇ／ｍｏｌであり、ミセルの平均直径は約４０ｎｍ〜約６０ｎｍである、請求項１〜５のいずれか１項の組成物。
【請求項８】
１つ以上のＰＥＧ−ＰＬＡミセルにカプセル化された第２活性剤をさらに含み、ミセル中の第２活性剤の薬物負荷は、ミセルの重量に対して約１重量％〜約２５重量％である、請求項１の組成物。
【請求項９】
１７−ＡＡＧおよび第２活性剤は、１つ以上のＰＥＧ−ＰＬＡミセルに一緒に取り込まれている、請求項８の組成物。
【請求項１０】
１７−ＡＡＧおよび第２活性剤は、ＰＥＧ−ＰＬＡミセルに別々に取り込まれ、該ミセルは、単一の水性ビヒクル内で組み合わされている、請求項８の組成物。
【請求項１１】
第２活性剤は、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシド、またはテニポシドである、請求項８〜１０のいずれか１項の組成物。
【請求項１２】
請求項１または８の組成物と、水性担体とを含む医薬組成物であって、該組成物は、静脈内または腹腔内投与のために処方され、水性担体は、生理食塩水または炭水化物を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
１７−ＡＡＧの投与によって治療され得る状態の、あるいはそのような状態であると診断された患者に１７−ＡＡＧを投与する方法であって、有効量の１７−ＡＡＧカプセル化ミセルを含む組成物を投与することを含み、ミセルはポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマーを含み、
ポリマーの疎水性ポリ（乳酸）ブロックは、各ミセルの内部に向き、ポリマーの親水性ポリ（エチレングリコール）ブロックは、各ミセルの外部に向き、
ポリ（エチレングリコール）ブロックの分子量は約１，０００〜約３５，０００ｇ／ｍｏｌであり、ポリ（乳酸）ブロックの分子量は約１，０００〜約１５，０００ｇ／ｍｏｌであり、
ミセル内の１７−ＡＡＧの薬物負荷は、ミセルの重量に対して約１重量％〜約２５重量％であり、かつ
該組成物は、エタノール、ジメチルスルホキシド、ひまし油、およびひまし油誘導体を実質的に含まない、方法。
【請求項１４】
ミセル中の１７−ＡＡＧは、約４ｍｇ／ｍ２〜約４０００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項１３の方法。
【請求項１５】
ミセル中の１７−ＡＡＧは、１週あたり約１００ｍｇ／ｍ２〜１週あたり約５００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項１３の方法。
【請求項１６】
ミセル中の１７−ＡＡＧは、１週あたり約３００ｍｇ／ｍ２〜１週あたり約４００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項１３の方法。
【請求項１７】
組成物は、１７−ＡＡＧを含むミセル内部に第２活性剤をさらに含む、請求項１３の方法。
【請求項１８】
癌細胞を阻害または死滅させる方法であって、該細胞に、阻害または致死させるのに有効な量の請求項１または請求項８の組成物を接触させる工程を含む、方法。
【請求項１９】
接触がインビボで行われる、請求項１８の方法。
【請求項２０】
接触がインビトロで行われる、請求項１８の方法。
【請求項２１】
癌細胞は、ヒト乳癌細胞、ヒト前立腺癌細胞、または白血病細胞である、請求項１８の方法。
【請求項２２】
Ｈｓｐ９０を阻害する方法であって、該Ｈｓｐ９０を、有効阻害量の請求項１または８の組成物と接触させる工程を含む、方法。
【請求項２３】
接触がインビボで行われる、請求項２２の方法。
【請求項２４】
接触がインビトロで行われる、請求項２２の方法。
【請求項２５】
１７−ＡＡＧ、およびポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマーから形成されるミセルを含まない担体の投与後の血液中の１７−ＡＡＧの半減期と比較して、哺乳類の血液中の１７−ＡＡＧの半減期を延長する方法であって、請求項１または８の組成物の投与を含む、方法。
【請求項２６】
１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを製造する方法であって、１７−ＡＡＧとポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマー単位とを、水混和性溶剤に溶解する工程と、該溶液を透析バッグに加える工程と、該透析バッグを水を含む浴に加えて、該透析バッグ中に１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを得る工程と、該ミセルを単離する工程とを含む、方法。
【請求項２７】
１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを遠心分離して、取り込まれていない１７−ＡＡＧを析出させる工程と、ろ過によって取り込まれていない１７−ＡＡＧを除去し、単離された１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを得る工程とをさらに含む、請求項２６の方法。
【請求項２８】
水を含む浴は、溶解した固体を含有する、請求項２６または２７の方法。
【請求項２９】
溶解した固体は、塩化ナトリウム、デキストロースおよび緩衝液のうち１つ以上を含む、請求項２７の方法。
【請求項３０】
水混和性溶剤は、アセトニトリル、ジメチルスルホキシドまたはジメチルアセトアミドである、請求項２６または２７の方法。
【請求項３１】
１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを製造する方法であって、１７−ＡＡＧおよびポリ（エチレングリコール）−ブロック−ポリ（乳酸）ポリマー鎖を、水混和性溶剤に溶解して溶液を得る工程と、水混和性溶剤を除去してポリマーと１７−ＡＡＧとを含む固体または油様組成物を得る工程と、水を該組成物に加えて水性混合物を得る工程と、該混合物を遠心分離して１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルと沈降物とを含有する上澄み液を得る工程と、該沈降物を除去して、単離された１７−ＡＡＧ−カプセル化ミセルを得る工程とを含む、方法。
【図１】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２−１】
【図１２−２】
【図１３−１】
【図１３−２】
【図１４−１】
【図１４−２】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【図２】
【図３−１】
【図３−２】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２−１】
【図１２−２】
【図１３−１】
【図１３−２】
【図１４−１】
【図１４−２】
【図１５Ａ】
【図１５Ｂ】
【公表番号】特表２０１０−５３３１８０（Ｐ２０１０−５３３１８０Ａ）
【公表日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１６０４５（Ｐ２０１０−５１６０４５）
【出願日】平成２０年７月９日（２００８．７．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００８４１７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００９０６７
【国際公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【出願人】（５０９２３９８２０）
【出願人】（５１０００９５６６）
【出願人】（５１０００９５７７）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月９日（２００８．７．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００８４１７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／００９０６７
【国際公開日】平成２１年１月１５日（２００９．１．１５）
【出願人】（５０９２３９８２０）
【出願人】（５１０００９５６６）
【出願人】（５１０００９５７７）
【Ｆターム（参考）】
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