溶媒和していない結晶性１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン塩酸塩
本発明は、結晶性の溶媒和していない１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン塩酸塩に関する。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
子宮平滑筋腫／平滑筋腫（子宮筋腫疾患）は、子宮筋腫、子宮肥大、子宮平滑筋腫、子宮筋肥大、子宮線維症（fibrosis uteri）、および線維性子宮炎（fibrotic metritis）を含む様々な名称で呼ばれている臨床に関する問題である。特に子宮筋腫は、子宮の壁に線維組織の不適切な沈着がみられる状態である。この状態は、女性の月経困難や不妊の原因である。
【０００２】
子宮内膜症は、重篤な月経困難の状態であり、激しい痛み、子宮内または腹腔への出血を伴い、不妊につながることが多い。症状の原因は、正常なホルモン調節に不適当に応答し、不適当な組織に局在する場違いな内皮増殖と考えられる。内皮増殖が不適当な場所で存在するために、組織は、局所的な炎症様応答を開始し、マクロファージ浸潤および疼痛応答の開始につながる一連の事象を引き起こすと考えられる。子宮筋腫および子宮内膜症の原因がエストロゲンに対する線維組織および／または内皮組織の不適当な応答であると示唆する証拠がある。
【０００３】
ここ十年で選択的なエストロゲンレセプター調節物質（ＳＥＲＭ）を開示する多くの出版物が出ている。例えば,米国特許第５,４８４,７９５号,同第５,４８４,７９８号,同第５,５１０,３５８号,同第５,９９８,４０１号およびＷＯ９６／０９０４０。これらのＳＥＲＭの多くは、一般に言えば、骨および循環系において有益なエストロゲンアゴニスト活性を有すると同時に乳房において有益なエストロゲンアンタゴニスト活性を有することが分かっている。そのような化合物の小さくて特に有用な集団は、子宮においてエストロゲンアンタゴニスト効果を有することも分かっている。このＳＥＲＭプロファイルを有する化合物は、子宮筋腫および／または子宮内膜症の処置において特に有望である。
【０００４】
しかしながら、そのようなＳＥＲＭ化合物の、子宮筋腫および／または子宮内膜症の処置のための臨床上の使用は、特に閉経前の女性において、有意の卵巣刺激作用を有するその化合物の傾向によって阻まれている。従って、現在、卵巣を有意に刺激することなく子宮においてエストロゲンアンタゴニストとして振る舞う新しいＳＥＲＭ化合物に対する必要性は大きい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の要旨
本発明は、銅放射線源（ＣｕＫα、λ＝１．５４０５６Å）から得られるパターンが、２θで１５．２±０．１、１７．６±０．１、１８．６±０．１および２４．１±０．１°にピークを含んでなるＸ線回折パターンを有する、結晶性の溶媒和していない１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン 塩酸塩、すなわち次式で示される化合物（以下、「Ｆ−ＩＩＩ」と称する）に関する。
【化１】
【０００６】
本発明はさらに、Ｆ−ＩＩＩおよび製薬的な担体を含有する医薬製剤に関する。別の態様では、本発明の医薬製剤は、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫の治療において用いるために適合化することができる。
【０００７】
本発明はさらに、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫を処置するための方法であって、必要とする患者に有効量のＦ−ＩＩＩを投与することを含んでなる方法に関する。
【０００８】
さらに、本発明は、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫の処置において使用するためのＦ−ＩＩＩに関する。本発明はさらに、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫を処置するための医薬の製造のためのＦ−ＩＩＩの使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の詳細な記載
溶媒和していない結晶形であるので、Ｆ−ＩＩＩは、１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン塩酸塩の無水形態であると理解される。
【００１０】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＤ）を用いてＦ−ＩＩＩの特徴付けを行った。ＸＲＤは結晶性の物質における長距離秩序（long-range order）を検出する技術である。Ｘ線粉末回折（ＸＲＤ）パターンは、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）および最小５０ｋＶおよび４０ｍＡで作動するKevex固体状態Ｓｉ（Ｌｉ）検出器を取り付けたSiemens D5000Ｘ線粉末回折計によって得られた。サンプルのスキャンは、発散および受光スリット１ｍｍおよび検出スリット０．１ｍｍを用い、ステップサイズ０．０２°（２θ）、最大スキャン速度３．０秒／ステップにて、４〜３５°（２θ）の範囲で行った。合成フルオロ金雲母マイカ（ＮＩＳＴ６７５）を内部標準として用いてサンプルの変位誤差を補正した。
【００１１】
本明細書に開示したＦ−ＩＩＩに関するＸＲＤパターンは、高度な結晶性を有する物質であることを示すシャープなピークとフラットなベースラインを特徴とする。
Ｆ−ＩＩＩの最大ピークと等しいかまたはその１０％よりも大きい強度を有する全てのピークについての、２θでのピーク角の位置および対応するＩ／Ｉoデータを表１に示す。表１のすべてのデータの精度は±０．１°（２θ）である。
【表１】
【００１２】
ある特定の結晶形に関して、結晶の形態や晶癖等の要因から生じる選択配向に起因して回折ピークの相対強度が変化し得ることは結晶学の分野においてよく知られている。選択配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変わるが、多型の特徴的なピークの位置は変わらない。例えば、米国薬局方第２３版、国民医薬品集、1843-1844頁、1995参照。さらに、ある特定の結晶形態に関して、ピーク角度の位置がわずかに変化することがあることは結晶学の分野ではよく知られている。例えば、ピークの位置は、分析するサンプルの温度の変動、サンプルの変位、または内部標準の存在あるいは不在に起因してシフトし得る。本発明の場合、±０．１°（２θ）のピーク位置の変動は、これらの潜在的な変動を考慮に入れて、本発明の結晶性の塩の明確な同定を妨げるものではない。
【００１３】
また、13Ｃ交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰ／ＭＡＳ）ＮＭＲ（固相ＮＭＲまたはＳＳＮＭＲ）を使用してＦ−ＩＩＩの特徴付けを行った。このスペクトルは１００．５７３ＭＨｚの炭素周波数で作動するVarian Unity Inova 400 MHz ＮＭＲ分光計を用いて得た。取得パラメーターは、以下のとおりである：９０°プロトンr.f.パルス幅４．０μｓ、接触時間２．５ｍｓ、パルス繰り返し時間１５ｓ、ＭＡＳ周波数１０ｋＨｚ、分光幅５０ｋＨｚ、および収集時間５０ｍｓ。化学シフトは、サンプル置換により、ヘキサメチルベンゼン（δ＝１７．３ｐｐｍ）のメチル基を参照した。Ｆｏｒｍ ＩＩＩについての化学シフトデータは以下のとおりである：20.7、23.8、25.3、38.4、51.2、52.4、56.8、59.8、110.8、113.3、114.6、118.0、118.3、122.3、122.9、125.4、127.2、130.0、132.0、137.9、142.2、143.1、147.3、151.3、153.8、および158.0 ppm。
【００１４】
製造例１
１−（２−｛４−［２−（４−メタンスルホニル−フェニル）−６−メトキシ−ナフタレン−１−イルオキシ］−フェノキシ｝−エチル）−ピペリジン塩酸塩
還流冷却器および窒素パージ用通気口を設けた三股フラスコに６−メトキシテトラロン（１．０当量）、４−ブロモフェニル−メチル−スルホン（１．０２〜１．０５当量）、酢酸パラジウムＰｄ（ＯＡＣ）2（０．０２５当量）、［（オキシジ−２,１−フェニレン）ビス（ジフェニルホスフィン）］（DPEphosリガンド、０．０２６当量）およびトルエン１０〜１２体積を加えた。ナトリウムt-ブトキシド（２．５当量）を一度に加え、混合物を約４０℃まで発熱させた。７５℃〜８０℃に加熱した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完了したら、室温に冷却した。１２体積の水を加えて温度を４０℃未満に維持した。２〜３時間攪拌した。ポリプロピレンパッドを用いて濾過し、水（３ｘ２体積）で洗浄した。フィルターケーキを５０℃で一晩乾燥して２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシテトラロンを得た。
【００１５】
２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシテトラロン（１．０当量）、ハイフロ（２０％／重量）、およびトルエン（７．５体積）を混合した。ＰＢｒ3（１．５〜１．７５当量）を室温にて攪拌しながら一度に加えた。内容物を還流温度（約１１０℃）に一晩加熱した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完結したら（通常１５時間）、溶液を４５℃または９０℃に冷却し、２０体積のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）をゆっくりと加えた。４５℃または９０℃にて３０分間攪拌し、加温しながらハイフロのパッド上で濾過した。パッドを２×２体積のＴＨＦで４５℃または９０℃にて洗浄した。濾液を約７体積まで濃縮した。残った混合物に７．５体積の水を加えて温度を４０℃以下に維持した（注意：水を最初に添加したときには大量ＨＢｒの発生とともに非常に発熱する）。スラリーを室温へ冷却し、２〜３時間攪拌した。ポリプロピレンパッドで濾過し、２ｘ２体積の水で洗浄した。フィルターケーキを、減圧下、６０℃で一晩乾燥して１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−３，４−ジヒドロ−６−メトキシナフタレンを得た。
【００１６】
１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−３,４−ジヒドロ−６−メトキシナフタレンおよび２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ、１．８当量）を１０体積のアセトニトリルおよび５体積のＴＨＦ中で混合した。窒素雰囲気下、反応物を７３〜７５℃に加熱した。反応の進行を、反応が完結するまでＧＣ解析でモニターした。反応の完結にはさらにＤＤＱ（０．２−０．３当量）が必要であることもある。内容物を常温に冷却し、１０体積の１Ｎ水酸化ナトリウムを加えた。約１時間攪拌し、濾過した。フィルターケーキを２体積の水、３ｘ５体積の５０％アセトニトリル／水、最後に３体積のメタノールでリンスした。フィルターケーキを６５℃で減圧乾燥して１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシナフタレンを得た。
【００１７】
１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシナフタレン、４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノール（２．０当量）、炭酸セシウム（２．０〜２．１当量）および塩化銅（０．１５当量）を１２体積のジグリムに加えた。フラスコを約２分間脱気した後、窒素でパージした。脱気／窒素パージを３回繰り返した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完結するまで内容物を１３０℃に加熱した。反応が完結したら、内容物を常温近くまで冷却し、１２体積の水酸化アンモニウムを加え、約３０分間攪拌した。固体を濾取し、固体を９体積の３０％ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨで洗浄し、フィルター支持体上でこの固体をスラリー化した。固体を２×９体積の３０％ＮＨ4ＯＨ／ＭｅＯＨで洗浄し、フィルター支持体上でこの固体をスラリー化した。４体積のメタノールで洗浄した。フィルターケーキを６０℃にて減圧乾燥して表題化合物の遊離塩基を得た。９体積のトルエン中で遊離塩基をスラリー化し、このスラリーを７０〜７５℃に加熱した。１．１当量の塩化水素ガスを２体積のエタノールに溶解した。このエタノール性ＨＣｌ溶液を熱トルエンスラリーに加えた。溶液を常温に冷却し、１〜２時間攪拌した。濾過し、少量のトルエンで洗浄した。フィルターケーキを６５℃で減圧乾燥して標題の化合物を得た。
【実施例】
【００１８】
実施例１
Ｆ−ＩＩＩ
１−（２−｛４−［２−（４−メタンスルホニル−フェニル）−６−メトキシ−ナフタレン−１−イルオキシ］−フェノキシ｝−エチル）−ピペリジン塩酸塩を５体積の１,２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）と混合し、混合物を１０℃以下に冷却した。５当量の三塩化ホウ素を表面下で添加した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完結するまで常温で攪拌した。反応物を、温度を＜５０℃に維持しながら、５．６体積の３Ａ−エタノール（約５％メタノールでのエタノール変性）中にクエンチした。常温まで冷却し、１〜３時間攪拌した。固体を濾過し、フィルターケーキを３Ａ−エタノールでリンスした。フィルターケーキを６５℃で減圧乾燥した。この混合物のおよそ還流温度にて単離した生成物を９．８体積の３Ａエタノールおよび１．５体積の脱イオン水に溶解した。この溶液を約３０分間還流した後、混合物を常温に冷却した。常温にしたら、得られたスラリーを常温で１〜２時間攪拌した後、濾過し、フィルターケーキを３Ａエタノールでリンスした。このフィルターケーキを、還流温度にて１９体積のアセトニトリルおよび１．４体積の脱イオン水に溶解した。合計１２．１体積の蒸留物が除去されるまで蒸留により水を共沸留去した。得られたスラリーを常温まで冷却し、濾過し、フィルターケーキをアセトニトリルでリンスして標題の化合物を得た。
【００１９】
製剤（医薬組成物）
本発明の化合物は、好ましくは、患者に投与する前に単位投与剤型、即ち、個々の送達ビークル、例えば、錠剤またはカプセルに製剤化する。用語「患者」には、女性のヒトおよびヒトでない雌性動物、例えばコンパニオンアニマル（イヌ、ネコ、ウマなど）が挙げられる。処置される好ましい患者は女性のヒトである。
【００２０】
本発明の医薬組成物は、周知で容易に入手可能な成分を用いる既知の手法によって製造する。本発明の製剤の製造においては、活性成分（Ｆ−ＩＩＩ）は通常、担体と混合、または担体によって希釈、またはカプセル、サシェ、ペーパーまたはその他の容器の形態であってよい担体内に入れられる。担体が希釈剤として供する場合、担体は、活性成分のためのビークル、賦形剤または媒体として作用する固体、半固体または液体の物質であってよい。従って、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、トローチ剤、サシェ、カシェ、エリキシル剤、懸濁液、乳剤、溶液、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてまたは液体媒体中の）、軟質および硬質ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液および滅菌包装粉末剤の形態をとることができる。
【００２１】
適当な担体、賦形剤、および希釈剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、珪酸カルシウム、微晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油が挙げられる。製剤にはさらに滑沢剤、湿潤剤、例えば、ポリソルベート８０またはラウリル硫酸塩、乳化剤および懸濁剤、保存料、甘味料または香味剤を含有させることができる。本発明の組成物は、患者に投与した後で、活性成分の、迅速な、徐放性のまたは遅延させた放出をもたらすように製剤化する。
【００２２】
製剤例
１０ｍｇカプセルまたは錠剤
約１５６ｍｇの充填剤（ラクトース、マンニトール、またはデキストロース）、約２０ｍｇの錠剤分解物質（微晶性セルロース、またはデンプン）、約４ｍｇの超錠剤分解物質（super disintegrant）（クロスポビドン、またはデンプングリコール酸ナトリウム）、約４ｍｇの結合剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース）および約１０ｍｇのＦ−ＩＩＩを造粒機に加え、混合して粉末を均一に分布させた。ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはヒドロキシプロピルセルロース（乾燥粉末の約２〜４重量％に十分な量）、およびポリソルベート８０またはナトリウムラウリル硫酸塩等の湿潤剤（０．５〜３重量％に十分な量）からなる水性の造粒溶液を、粉末を混合しながら一定の速度でスプレーした。造粒物をスクリーンを用いて湿潤状態でふるいにかけ、大きな凝集体の状態でバラバラにした。フィルターにかけた造粒粉末を流動床法によるかまたは対流式オーブン中で乾燥した。乾燥した造粒粉末をミルにかけるかまたは他の適当な装置にかけて均一のサイズにした後、ミキサーに移した。造粒粉末を、滑沢剤（製剤重量の約１重量％のステアリン酸マグネシウム、またはフマル酸ステアリルナトリウム）およびさらなる錠剤崩壊物質（外部粉末の約２〜４重量％）とともに均一にブレンドした。完成した粉末を硬質ゼラチンカプセルに封入するかまたはこの粉末を圧縮して錠剤にした（次いで、以下に記載するように錠剤をフィルムコーティングする）。この方法で製造したカプセルまたは錠剤の合計重量は約２００ｍｇであった。
【００２３】
４５ｍｇカプセル剤または錠剤
約１６２ｍｇの充填剤（ラクトース、マンニトールまたはデンプン）、約１０ｍｇの錠剤崩壊物質（クロスポビドンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）および約４５ｍｇのＦ−ＩＩＩを造粒機に加え、混合して粉末を均一に分布させた。ポビドン（約３５重量％）およびポリソルベート８０（約１０重量％）からなる水性の造粒溶液を、粉末を混合しながら一定の速度で粉末にスプレーした。造粒物をスクリーンを湿潤状態で用いてふるいにかけ、大きな凝集体の状態でバラバラにした。フィルターにかけた造粒粉末を流動床法によるかまたは対流式オーブン中で乾燥した。乾燥した造粒粉末をミルにかけるかまたは他の適当な装置にかけて均一のサイズにした後、ミキサーに移した。造粒粉末を、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム：製剤重量の約１重量％）およびさらなる錠剤崩壊物質（外部粉末の約２重量％）とともに均一にブレンドした。完成した粉末を硬質ゼラチンカプセルに封入するかまたはこの粉末を圧縮して錠剤にした（次いで、以下に記載するように錠剤をフィルムコーティングする）。この方法で製造したカプセルまたは錠剤の合計重量は約２３０ｍｇであった。
【００２４】
あるいは、錠剤を製造するために、充填剤、錠剤崩壊物質、およびＦ−ＩＩＩをミキサーに加え、混合して粉末を均一に分布させた。粉末が均一に混合したら滑沢剤を加え、再度ブレンドした。ブレンドした物質を打錠機に移して、錠剤を製造し、次いで適当なフィルム形成剤を用いてフィルムコーティングを施した。
【００２５】
生物学的アッセイ
石川細胞増殖アッセイ：このアッセイは、本発明の化合物単独での存在下でのアゴニストモード、および増殖のエストラジオール刺激をブロックする本発明化合物の能力が測定されるアンタゴニストモードの両方において細胞増殖を測定する（アルカリホスファターゼの値を用いて）。
【００２６】
石川ヒト子宮内腫瘍細胞を、１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Gibco BRL）を添加したＭＥＭ（最小必須培地、Earle塩およびＬ−グルタミン添加、Gibco BRL, Gaithersburg, MD）中に維持した。アッセイの前日に、増殖培地をアッセイ培地に置き換えた：ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（３：１）（Dulbecco修飾Eagle培地：栄養混合培地Ｆ−１２、３：１混合物、フェノールレッド不含、Gibco BRL）（５％デキストランコートチャコール処理ウシ胎児血清（ＤＣＣ−ＦＢＳ）（Hyclone, Logen, UT）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］２ｍＭ）（全てGibcoBRL製）を添加）。一晩インキュベーションした後、石川細胞を、Ｃａ+2およびＭｇ+2を含まないDulbeccoリン酸緩衝生理食塩水（１Ｘ）（Ｄ−ＰＢＳ）（GibcoBRL）でリンスし、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ（フェノールレッド不含）（GibcoBRL）と３分間インキュベーションすることによりトリプシン処理した。細胞をアッセイ培地に再懸濁し、細胞数を２５０、０００細胞／ｍＬに調節した。培地１００μＬ中の約２５、０００個の細胞を平底９６ウェルマイクロタイタープレート（Costar3596）に加え、５％ＣＯ2加湿インキュベーター中、３７℃にて２４時間インキュベーションした。翌日、化合物の段階希釈をアッセイ培地中で調製した（アッセイにおける最終濃度の６倍）。アッセイはデュアルモード、すなわちアゴニストモードおよびアンタゴニストモードで行った。アゴニストモードについては、プレートに２５μｌ／ウェルのアッセイ培地を加えた後、２５μｌ／ウェルの希釈した本発明化合物を添加した（最終濃度の６倍）。アンタゴニストモードについては、プレートに２５μＬ／ウェルの６ｎＭ Ｅ2（β−エストラジオール、Sigma、St.Louis、MO）、次いで、２５μｌ／ウェルの希釈した本発明化合物（最終濃度の６倍）を加えた。５％ＣＯ2加湿インキュベーター中、３７℃にて４８時間インキュベーションした後、培地をウェルから吸引し、各マイクロカルチャーに１００μｌの新鮮なアッセイ培地を添加した。化合物の段階希釈物を調製し、上記のとおり細胞に加えた。５％ＣＯ2加湿インキュベーター中３７℃にて７２時間インキュベーションした後、培地を除去し、プレートをDulbeccoリン酸緩衝生理食塩水（１Ｘ）（Ｄ−ＰＢＳ）（GibcoBRL）で２回リンスすることにより分析物をクエンチした。プレートを５分間乾燥し、−７０℃で少なくとも１時間冷凍した。次いで、プレートをフリーザーから取り出し、室温で解凍した。各ウェルに対して１００μＬの１−Ｓｔｅｐ（商標）ＰＮＰＰ（Pierce Chemical Company、Rockford、IL）を加えた。２０分間インキュベーションした後、分光計を用いて４０５ｎｍにてプレートを読み取った。
【００２７】
データを線形補間法に当てはめてＥＣ５０（アゴニストモード）またはＩＣ５０（アンタゴニストモード）値を求めた。アンタゴニストモードについて、各化合物の％効果をＥ２（１ｎＭ）単独に対して計算した。アゴニストモードについて、各化合物の％効果をタモキシフェンに対する応答に対して計算した。
【００２８】
アゴニストモードでは、Ｆ−ＩＩＩを試験した結果、刺激はタモキシフェンよりも小さい。アンタゴニストモードでは、Ｆ−ＩＩＩは１ｎＭエストラジオール応答の少なくとも７０％以上の阻害を示す。
【００２９】
１０日間ラットホルモン（卵巣刺激）スクリーン：最初に、卵巣毒性の最初のスクリーニングを１０日間ラットホルモン試験を用いて行い、ＧＹＮＳＥＲＭ、Ｆ−ＩＩＩ投与後にエストラジオールおよび黄体形成ホルモンのレベルを測定した。このスクリーニングは、化合物を成熟（９〜１０週齢）Ｆ３４４雌性ラットに１０日間経口投与することにより行った。ＬＨおよびエストラジオールレベルを評価するために、１０日目の投与から約２時間後に、素早く断頭し、体幹（Trunk）血液を回収する。遠心分離により得た血清を取り出し、分析するまで−６０℃以下で保存する。ＬＨおよびエストラジオールの血清レベルをラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）法により測定する。
【００３０】
ラットＬＨ一次抗体および参照調製物（ラットＬＨ：ＲＰ−３）はPituitary Hormonesand Antisera Center、Harbor-UCLA Medical Center、Torrance、CAのA.F.Parlow博士から入手する。１００μLのサンプルに対して、ＬＨアッセイの検出上限は３０ｎｇ／ｍＬであり、検出下限は０．１ｎｇ／ｍＬである。
【００３１】
Ｅ２臨床アッセイ。DiaSorins.r.l.、Saluggia（Vercelli）、Italy.検出の上限は１０００ｐｇ／ｍＬであり検出の下限は５ｐｇ／ｍＬである。上記アッセイにおいてＦ−ＩＩＩを試験したが、循環エストラジオールまたはＬＨレベルが有意に上昇することはない。
【００３２】
有用性
乳房および子宮組織におけるエストロゲンのアンタゴニストとして、Ｆ−ＩＩＩは、エストロゲンがその状態において原因となる役割を担うことが示されている状態を処置するのに有用である。骨格および循環系におけるエストロゲンのアゴニストとして、Ｆ−ＩＩＩは、エストロゲンがその状態において有益な役割を担うことが示されている状態を処置するのに有用である。
【００３３】
本明細書において用いられる「処置する」および「処置」なる語には、その一般に受け入れられている意味、即ち、本明細書に記載した病理学的状態あるいはその続発症の進行または重篤度の、緩和（alleviating）、改善（ameliorating）、管理（managing）、予防（preventing）、制止（prohibiting）、抑制（restraining）、遅延（slowing）、中止（stopping）、または逆転（reversing）を包含する。用語「予防する」は、本発明の化合物の受容者が本明細書に記載したいずれかの病理学的状態またはその続発症を被るまたは発症する可能性を減少することを意味する。
【００３４】
本発明の化合物がそれに対する処置において有用である疾患、障害または状態としては（１）子宮および／または乳癌；（２）子宮内膜症；（３）子宮平滑筋腫／平滑筋腫；および（４）骨粗鬆症が挙げられるがこれに限定されない。本明細書に記載した子宮平滑筋腫／平滑筋腫の処置は、疼痛、頻尿、および子宮の出血等の関連する症状も減少し得る。
【００３５】
用量
本明細書で用いられる用語「有効量」は、本明細書に記載した状態またはその有害な影響を処置することが可能なＦ−ＩＩＩの量を意味する。
【００３６】
投与する具体的な量は、各々の状況を取り巻く特定の事情によって決定される。これらの事情としては、投与経路、その患者の過去の病歴、処置する病理学的状態または症状、処置するその状態／症状の重篤度および受容者の年齢および性別が挙げられる。受容者の患者の主治医は、関連する事情に照らして治療用量を決定する。
【００３７】
一般にＦ−ＩＩＩの最小限の有効量は１日約５ｍｇを超える。典型的には、有効量は１日最大で約３５０ｍｇを超えない。正確な用量は、患者の「用量滴定」の医学分野での標準的なプラクティスにしたがって決定することができる。すなわち、最初に化合物を低用量で投与し、望ましい治療効果が観察されるまで投与量を徐々に増大させる。
【００３８】
投与経路
Ｆ−ＩＩＩを、筋肉内、鼻内、膣内、静脈内、経口、直腸、皮下、局所および経皮を含む様々な経路で投与することができる。好ましい投与経路は、経口である。
【００３９】
組み合わせ治療
Ｆ−ＩＩＩを他の薬物と組み合わせて用い、これらの化合物が有用であるような疾患または状態の処置において用いることができる。そのような他の薬物は、一般に用いられている経路および量で投与することができ、故に、本発明の塩と同時またはそれに続いて投与することができる。Ｆ−ＩＩＩを１以上の他の薬物と同時に用いる場合、本発明の化合物に加えてそのような他の薬物を含有する医薬の単位投与剤型は好ましい。従って、本発明の医薬組成物は、１以上の他の活性成分を含有するものを包含する。本発明の化合物と組み合わせて、別々に、または同じ医薬組成物として投与することができる、他の活性成分の一例としては、ホルモン置換治療（ＨＲＴ）において用いられる薬剤が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】Ｆ−ＩＩＩのＸＲＤパターンを示す。
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
子宮平滑筋腫／平滑筋腫（子宮筋腫疾患）は、子宮筋腫、子宮肥大、子宮平滑筋腫、子宮筋肥大、子宮線維症（fibrosis uteri）、および線維性子宮炎（fibrotic metritis）を含む様々な名称で呼ばれている臨床に関する問題である。特に子宮筋腫は、子宮の壁に線維組織の不適切な沈着がみられる状態である。この状態は、女性の月経困難や不妊の原因である。
【０００２】
子宮内膜症は、重篤な月経困難の状態であり、激しい痛み、子宮内または腹腔への出血を伴い、不妊につながることが多い。症状の原因は、正常なホルモン調節に不適当に応答し、不適当な組織に局在する場違いな内皮増殖と考えられる。内皮増殖が不適当な場所で存在するために、組織は、局所的な炎症様応答を開始し、マクロファージ浸潤および疼痛応答の開始につながる一連の事象を引き起こすと考えられる。子宮筋腫および子宮内膜症の原因がエストロゲンに対する線維組織および／または内皮組織の不適当な応答であると示唆する証拠がある。
【０００３】
ここ十年で選択的なエストロゲンレセプター調節物質（ＳＥＲＭ）を開示する多くの出版物が出ている。例えば,米国特許第５,４８４,７９５号,同第５,４８４,７９８号,同第５,５１０,３５８号,同第５,９９８,４０１号およびＷＯ９６／０９０４０。これらのＳＥＲＭの多くは、一般に言えば、骨および循環系において有益なエストロゲンアゴニスト活性を有すると同時に乳房において有益なエストロゲンアンタゴニスト活性を有することが分かっている。そのような化合物の小さくて特に有用な集団は、子宮においてエストロゲンアンタゴニスト効果を有することも分かっている。このＳＥＲＭプロファイルを有する化合物は、子宮筋腫および／または子宮内膜症の処置において特に有望である。
【０００４】
しかしながら、そのようなＳＥＲＭ化合物の、子宮筋腫および／または子宮内膜症の処置のための臨床上の使用は、特に閉経前の女性において、有意の卵巣刺激作用を有するその化合物の傾向によって阻まれている。従って、現在、卵巣を有意に刺激することなく子宮においてエストロゲンアンタゴニストとして振る舞う新しいＳＥＲＭ化合物に対する必要性は大きい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の要旨
本発明は、銅放射線源（ＣｕＫα、λ＝１．５４０５６Å）から得られるパターンが、２θで１５．２±０．１、１７．６±０．１、１８．６±０．１および２４．１±０．１°にピークを含んでなるＸ線回折パターンを有する、結晶性の溶媒和していない１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン 塩酸塩、すなわち次式で示される化合物（以下、「Ｆ−ＩＩＩ」と称する）に関する。
【化１】
【０００６】
本発明はさらに、Ｆ−ＩＩＩおよび製薬的な担体を含有する医薬製剤に関する。別の態様では、本発明の医薬製剤は、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫の治療において用いるために適合化することができる。
【０００７】
本発明はさらに、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫を処置するための方法であって、必要とする患者に有効量のＦ−ＩＩＩを投与することを含んでなる方法に関する。
【０００８】
さらに、本発明は、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫の処置において使用するためのＦ−ＩＩＩに関する。本発明はさらに、子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫を処置するための医薬の製造のためのＦ−ＩＩＩの使用に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の詳細な記載
溶媒和していない結晶形であるので、Ｆ−ＩＩＩは、１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン塩酸塩の無水形態であると理解される。
【００１０】
Ｘ線粉末回折（ＸＲＤ）を用いてＦ−ＩＩＩの特徴付けを行った。ＸＲＤは結晶性の物質における長距離秩序（long-range order）を検出する技術である。Ｘ線粉末回折（ＸＲＤ）パターンは、ＣｕＫα源（λ＝１．５４０５６Å）および最小５０ｋＶおよび４０ｍＡで作動するKevex固体状態Ｓｉ（Ｌｉ）検出器を取り付けたSiemens D5000Ｘ線粉末回折計によって得られた。サンプルのスキャンは、発散および受光スリット１ｍｍおよび検出スリット０．１ｍｍを用い、ステップサイズ０．０２°（２θ）、最大スキャン速度３．０秒／ステップにて、４〜３５°（２θ）の範囲で行った。合成フルオロ金雲母マイカ（ＮＩＳＴ６７５）を内部標準として用いてサンプルの変位誤差を補正した。
【００１１】
本明細書に開示したＦ−ＩＩＩに関するＸＲＤパターンは、高度な結晶性を有する物質であることを示すシャープなピークとフラットなベースラインを特徴とする。
Ｆ−ＩＩＩの最大ピークと等しいかまたはその１０％よりも大きい強度を有する全てのピークについての、２θでのピーク角の位置および対応するＩ／Ｉoデータを表１に示す。表１のすべてのデータの精度は±０．１°（２θ）である。
【表１】
【００１２】
ある特定の結晶形に関して、結晶の形態や晶癖等の要因から生じる選択配向に起因して回折ピークの相対強度が変化し得ることは結晶学の分野においてよく知られている。選択配向の効果が存在する場合、ピーク強度は変わるが、多型の特徴的なピークの位置は変わらない。例えば、米国薬局方第２３版、国民医薬品集、1843-1844頁、1995参照。さらに、ある特定の結晶形態に関して、ピーク角度の位置がわずかに変化することがあることは結晶学の分野ではよく知られている。例えば、ピークの位置は、分析するサンプルの温度の変動、サンプルの変位、または内部標準の存在あるいは不在に起因してシフトし得る。本発明の場合、±０．１°（２θ）のピーク位置の変動は、これらの潜在的な変動を考慮に入れて、本発明の結晶性の塩の明確な同定を妨げるものではない。
【００１３】
また、13Ｃ交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰ／ＭＡＳ）ＮＭＲ（固相ＮＭＲまたはＳＳＮＭＲ）を使用してＦ−ＩＩＩの特徴付けを行った。このスペクトルは１００．５７３ＭＨｚの炭素周波数で作動するVarian Unity Inova 400 MHz ＮＭＲ分光計を用いて得た。取得パラメーターは、以下のとおりである：９０°プロトンr.f.パルス幅４．０μｓ、接触時間２．５ｍｓ、パルス繰り返し時間１５ｓ、ＭＡＳ周波数１０ｋＨｚ、分光幅５０ｋＨｚ、および収集時間５０ｍｓ。化学シフトは、サンプル置換により、ヘキサメチルベンゼン（δ＝１７．３ｐｐｍ）のメチル基を参照した。Ｆｏｒｍ ＩＩＩについての化学シフトデータは以下のとおりである：20.7、23.8、25.3、38.4、51.2、52.4、56.8、59.8、110.8、113.3、114.6、118.0、118.3、122.3、122.9、125.4、127.2、130.0、132.0、137.9、142.2、143.1、147.3、151.3、153.8、および158.0 ppm。
【００１４】
製造例１
１−（２−｛４−［２−（４−メタンスルホニル−フェニル）−６−メトキシ−ナフタレン−１−イルオキシ］−フェノキシ｝−エチル）−ピペリジン塩酸塩
還流冷却器および窒素パージ用通気口を設けた三股フラスコに６−メトキシテトラロン（１．０当量）、４−ブロモフェニル−メチル−スルホン（１．０２〜１．０５当量）、酢酸パラジウムＰｄ（ＯＡＣ）2（０．０２５当量）、［（オキシジ−２,１−フェニレン）ビス（ジフェニルホスフィン）］（DPEphosリガンド、０．０２６当量）およびトルエン１０〜１２体積を加えた。ナトリウムt-ブトキシド（２．５当量）を一度に加え、混合物を約４０℃まで発熱させた。７５℃〜８０℃に加熱した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完了したら、室温に冷却した。１２体積の水を加えて温度を４０℃未満に維持した。２〜３時間攪拌した。ポリプロピレンパッドを用いて濾過し、水（３ｘ２体積）で洗浄した。フィルターケーキを５０℃で一晩乾燥して２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシテトラロンを得た。
【００１５】
２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシテトラロン（１．０当量）、ハイフロ（２０％／重量）、およびトルエン（７．５体積）を混合した。ＰＢｒ3（１．５〜１．７５当量）を室温にて攪拌しながら一度に加えた。内容物を還流温度（約１１０℃）に一晩加熱した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完結したら（通常１５時間）、溶液を４５℃または９０℃に冷却し、２０体積のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）をゆっくりと加えた。４５℃または９０℃にて３０分間攪拌し、加温しながらハイフロのパッド上で濾過した。パッドを２×２体積のＴＨＦで４５℃または９０℃にて洗浄した。濾液を約７体積まで濃縮した。残った混合物に７．５体積の水を加えて温度を４０℃以下に維持した（注意：水を最初に添加したときには大量ＨＢｒの発生とともに非常に発熱する）。スラリーを室温へ冷却し、２〜３時間攪拌した。ポリプロピレンパッドで濾過し、２ｘ２体積の水で洗浄した。フィルターケーキを、減圧下、６０℃で一晩乾燥して１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−３，４−ジヒドロ−６−メトキシナフタレンを得た。
【００１６】
１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−３,４−ジヒドロ−６−メトキシナフタレンおよび２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン（ＤＤＱ、１．８当量）を１０体積のアセトニトリルおよび５体積のＴＨＦ中で混合した。窒素雰囲気下、反応物を７３〜７５℃に加熱した。反応の進行を、反応が完結するまでＧＣ解析でモニターした。反応の完結にはさらにＤＤＱ（０．２−０．３当量）が必要であることもある。内容物を常温に冷却し、１０体積の１Ｎ水酸化ナトリウムを加えた。約１時間攪拌し、濾過した。フィルターケーキを２体積の水、３ｘ５体積の５０％アセトニトリル／水、最後に３体積のメタノールでリンスした。フィルターケーキを６５℃で減圧乾燥して１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシナフタレンを得た。
【００１７】
１−ブロモ−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−メトキシナフタレン、４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノール（２．０当量）、炭酸セシウム（２．０〜２．１当量）および塩化銅（０．１５当量）を１２体積のジグリムに加えた。フラスコを約２分間脱気した後、窒素でパージした。脱気／窒素パージを３回繰り返した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完結するまで内容物を１３０℃に加熱した。反応が完結したら、内容物を常温近くまで冷却し、１２体積の水酸化アンモニウムを加え、約３０分間攪拌した。固体を濾取し、固体を９体積の３０％ＭｅＯＨ／ＮＨ4ＯＨで洗浄し、フィルター支持体上でこの固体をスラリー化した。固体を２×９体積の３０％ＮＨ4ＯＨ／ＭｅＯＨで洗浄し、フィルター支持体上でこの固体をスラリー化した。４体積のメタノールで洗浄した。フィルターケーキを６０℃にて減圧乾燥して表題化合物の遊離塩基を得た。９体積のトルエン中で遊離塩基をスラリー化し、このスラリーを７０〜７５℃に加熱した。１．１当量の塩化水素ガスを２体積のエタノールに溶解した。このエタノール性ＨＣｌ溶液を熱トルエンスラリーに加えた。溶液を常温に冷却し、１〜２時間攪拌した。濾過し、少量のトルエンで洗浄した。フィルターケーキを６５℃で減圧乾燥して標題の化合物を得た。
【実施例】
【００１８】
実施例１
Ｆ−ＩＩＩ
１−（２−｛４−［２−（４−メタンスルホニル−フェニル）−６−メトキシ−ナフタレン−１−イルオキシ］−フェノキシ｝−エチル）−ピペリジン塩酸塩を５体積の１,２−ジクロロエタン（ＤＣＥ）と混合し、混合物を１０℃以下に冷却した。５当量の三塩化ホウ素を表面下で添加した。ＨＰＬＣ分析により判断して反応が完結するまで常温で攪拌した。反応物を、温度を＜５０℃に維持しながら、５．６体積の３Ａ−エタノール（約５％メタノールでのエタノール変性）中にクエンチした。常温まで冷却し、１〜３時間攪拌した。固体を濾過し、フィルターケーキを３Ａ−エタノールでリンスした。フィルターケーキを６５℃で減圧乾燥した。この混合物のおよそ還流温度にて単離した生成物を９．８体積の３Ａエタノールおよび１．５体積の脱イオン水に溶解した。この溶液を約３０分間還流した後、混合物を常温に冷却した。常温にしたら、得られたスラリーを常温で１〜２時間攪拌した後、濾過し、フィルターケーキを３Ａエタノールでリンスした。このフィルターケーキを、還流温度にて１９体積のアセトニトリルおよび１．４体積の脱イオン水に溶解した。合計１２．１体積の蒸留物が除去されるまで蒸留により水を共沸留去した。得られたスラリーを常温まで冷却し、濾過し、フィルターケーキをアセトニトリルでリンスして標題の化合物を得た。
【００１９】
製剤（医薬組成物）
本発明の化合物は、好ましくは、患者に投与する前に単位投与剤型、即ち、個々の送達ビークル、例えば、錠剤またはカプセルに製剤化する。用語「患者」には、女性のヒトおよびヒトでない雌性動物、例えばコンパニオンアニマル（イヌ、ネコ、ウマなど）が挙げられる。処置される好ましい患者は女性のヒトである。
【００２０】
本発明の医薬組成物は、周知で容易に入手可能な成分を用いる既知の手法によって製造する。本発明の製剤の製造においては、活性成分（Ｆ−ＩＩＩ）は通常、担体と混合、または担体によって希釈、またはカプセル、サシェ、ペーパーまたはその他の容器の形態であってよい担体内に入れられる。担体が希釈剤として供する場合、担体は、活性成分のためのビークル、賦形剤または媒体として作用する固体、半固体または液体の物質であってよい。従って、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、トローチ剤、サシェ、カシェ、エリキシル剤、懸濁液、乳剤、溶液、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてまたは液体媒体中の）、軟質および硬質ゼラチンカプセル、坐剤、滅菌注射溶液および滅菌包装粉末剤の形態をとることができる。
【００２１】
適当な担体、賦形剤、および希釈剤のいくつかの例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、珪酸カルシウム、微晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油が挙げられる。製剤にはさらに滑沢剤、湿潤剤、例えば、ポリソルベート８０またはラウリル硫酸塩、乳化剤および懸濁剤、保存料、甘味料または香味剤を含有させることができる。本発明の組成物は、患者に投与した後で、活性成分の、迅速な、徐放性のまたは遅延させた放出をもたらすように製剤化する。
【００２２】
製剤例
１０ｍｇカプセルまたは錠剤
約１５６ｍｇの充填剤（ラクトース、マンニトール、またはデキストロース）、約２０ｍｇの錠剤分解物質（微晶性セルロース、またはデンプン）、約４ｍｇの超錠剤分解物質（super disintegrant）（クロスポビドン、またはデンプングリコール酸ナトリウム）、約４ｍｇの結合剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルセルロース）および約１０ｍｇのＦ−ＩＩＩを造粒機に加え、混合して粉末を均一に分布させた。ポビドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、またはヒドロキシプロピルセルロース（乾燥粉末の約２〜４重量％に十分な量）、およびポリソルベート８０またはナトリウムラウリル硫酸塩等の湿潤剤（０．５〜３重量％に十分な量）からなる水性の造粒溶液を、粉末を混合しながら一定の速度でスプレーした。造粒物をスクリーンを用いて湿潤状態でふるいにかけ、大きな凝集体の状態でバラバラにした。フィルターにかけた造粒粉末を流動床法によるかまたは対流式オーブン中で乾燥した。乾燥した造粒粉末をミルにかけるかまたは他の適当な装置にかけて均一のサイズにした後、ミキサーに移した。造粒粉末を、滑沢剤（製剤重量の約１重量％のステアリン酸マグネシウム、またはフマル酸ステアリルナトリウム）およびさらなる錠剤崩壊物質（外部粉末の約２〜４重量％）とともに均一にブレンドした。完成した粉末を硬質ゼラチンカプセルに封入するかまたはこの粉末を圧縮して錠剤にした（次いで、以下に記載するように錠剤をフィルムコーティングする）。この方法で製造したカプセルまたは錠剤の合計重量は約２００ｍｇであった。
【００２３】
４５ｍｇカプセル剤または錠剤
約１６２ｍｇの充填剤（ラクトース、マンニトールまたはデンプン）、約１０ｍｇの錠剤崩壊物質（クロスポビドンまたはデンプングリコール酸ナトリウム）および約４５ｍｇのＦ−ＩＩＩを造粒機に加え、混合して粉末を均一に分布させた。ポビドン（約３５重量％）およびポリソルベート８０（約１０重量％）からなる水性の造粒溶液を、粉末を混合しながら一定の速度で粉末にスプレーした。造粒物をスクリーンを湿潤状態で用いてふるいにかけ、大きな凝集体の状態でバラバラにした。フィルターにかけた造粒粉末を流動床法によるかまたは対流式オーブン中で乾燥した。乾燥した造粒粉末をミルにかけるかまたは他の適当な装置にかけて均一のサイズにした後、ミキサーに移した。造粒粉末を、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム：製剤重量の約１重量％）およびさらなる錠剤崩壊物質（外部粉末の約２重量％）とともに均一にブレンドした。完成した粉末を硬質ゼラチンカプセルに封入するかまたはこの粉末を圧縮して錠剤にした（次いで、以下に記載するように錠剤をフィルムコーティングする）。この方法で製造したカプセルまたは錠剤の合計重量は約２３０ｍｇであった。
【００２４】
あるいは、錠剤を製造するために、充填剤、錠剤崩壊物質、およびＦ−ＩＩＩをミキサーに加え、混合して粉末を均一に分布させた。粉末が均一に混合したら滑沢剤を加え、再度ブレンドした。ブレンドした物質を打錠機に移して、錠剤を製造し、次いで適当なフィルム形成剤を用いてフィルムコーティングを施した。
【００２５】
生物学的アッセイ
石川細胞増殖アッセイ：このアッセイは、本発明の化合物単独での存在下でのアゴニストモード、および増殖のエストラジオール刺激をブロックする本発明化合物の能力が測定されるアンタゴニストモードの両方において細胞増殖を測定する（アルカリホスファターゼの値を用いて）。
【００２６】
石川ヒト子宮内腫瘍細胞を、１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（Gibco BRL）を添加したＭＥＭ（最小必須培地、Earle塩およびＬ−グルタミン添加、Gibco BRL, Gaithersburg, MD）中に維持した。アッセイの前日に、増殖培地をアッセイ培地に置き換えた：ＤＭＥＭ／Ｆ−１２（３：１）（Dulbecco修飾Eagle培地：栄養混合培地Ｆ−１２、３：１混合物、フェノールレッド不含、Gibco BRL）（５％デキストランコートチャコール処理ウシ胎児血清（ＤＣＣ−ＦＢＳ）（Hyclone, Logen, UT）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−［２−エタンスルホン酸］２ｍＭ）（全てGibcoBRL製）を添加）。一晩インキュベーションした後、石川細胞を、Ｃａ+2およびＭｇ+2を含まないDulbeccoリン酸緩衝生理食塩水（１Ｘ）（Ｄ−ＰＢＳ）（GibcoBRL）でリンスし、０．２５％トリプシン／ＥＤＴＡ（フェノールレッド不含）（GibcoBRL）と３分間インキュベーションすることによりトリプシン処理した。細胞をアッセイ培地に再懸濁し、細胞数を２５０、０００細胞／ｍＬに調節した。培地１００μＬ中の約２５、０００個の細胞を平底９６ウェルマイクロタイタープレート（Costar3596）に加え、５％ＣＯ2加湿インキュベーター中、３７℃にて２４時間インキュベーションした。翌日、化合物の段階希釈をアッセイ培地中で調製した（アッセイにおける最終濃度の６倍）。アッセイはデュアルモード、すなわちアゴニストモードおよびアンタゴニストモードで行った。アゴニストモードについては、プレートに２５μｌ／ウェルのアッセイ培地を加えた後、２５μｌ／ウェルの希釈した本発明化合物を添加した（最終濃度の６倍）。アンタゴニストモードについては、プレートに２５μＬ／ウェルの６ｎＭ Ｅ2（β−エストラジオール、Sigma、St.Louis、MO）、次いで、２５μｌ／ウェルの希釈した本発明化合物（最終濃度の６倍）を加えた。５％ＣＯ2加湿インキュベーター中、３７℃にて４８時間インキュベーションした後、培地をウェルから吸引し、各マイクロカルチャーに１００μｌの新鮮なアッセイ培地を添加した。化合物の段階希釈物を調製し、上記のとおり細胞に加えた。５％ＣＯ2加湿インキュベーター中３７℃にて７２時間インキュベーションした後、培地を除去し、プレートをDulbeccoリン酸緩衝生理食塩水（１Ｘ）（Ｄ−ＰＢＳ）（GibcoBRL）で２回リンスすることにより分析物をクエンチした。プレートを５分間乾燥し、−７０℃で少なくとも１時間冷凍した。次いで、プレートをフリーザーから取り出し、室温で解凍した。各ウェルに対して１００μＬの１−Ｓｔｅｐ（商標）ＰＮＰＰ（Pierce Chemical Company、Rockford、IL）を加えた。２０分間インキュベーションした後、分光計を用いて４０５ｎｍにてプレートを読み取った。
【００２７】
データを線形補間法に当てはめてＥＣ５０（アゴニストモード）またはＩＣ５０（アンタゴニストモード）値を求めた。アンタゴニストモードについて、各化合物の％効果をＥ２（１ｎＭ）単独に対して計算した。アゴニストモードについて、各化合物の％効果をタモキシフェンに対する応答に対して計算した。
【００２８】
アゴニストモードでは、Ｆ−ＩＩＩを試験した結果、刺激はタモキシフェンよりも小さい。アンタゴニストモードでは、Ｆ−ＩＩＩは１ｎＭエストラジオール応答の少なくとも７０％以上の阻害を示す。
【００２９】
１０日間ラットホルモン（卵巣刺激）スクリーン：最初に、卵巣毒性の最初のスクリーニングを１０日間ラットホルモン試験を用いて行い、ＧＹＮＳＥＲＭ、Ｆ−ＩＩＩ投与後にエストラジオールおよび黄体形成ホルモンのレベルを測定した。このスクリーニングは、化合物を成熟（９〜１０週齢）Ｆ３４４雌性ラットに１０日間経口投与することにより行った。ＬＨおよびエストラジオールレベルを評価するために、１０日目の投与から約２時間後に、素早く断頭し、体幹（Trunk）血液を回収する。遠心分離により得た血清を取り出し、分析するまで−６０℃以下で保存する。ＬＨおよびエストラジオールの血清レベルをラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）法により測定する。
【００３０】
ラットＬＨ一次抗体および参照調製物（ラットＬＨ：ＲＰ−３）はPituitary Hormonesand Antisera Center、Harbor-UCLA Medical Center、Torrance、CAのA.F.Parlow博士から入手する。１００μLのサンプルに対して、ＬＨアッセイの検出上限は３０ｎｇ／ｍＬであり、検出下限は０．１ｎｇ／ｍＬである。
【００３１】
Ｅ２臨床アッセイ。DiaSorins.r.l.、Saluggia（Vercelli）、Italy.検出の上限は１０００ｐｇ／ｍＬであり検出の下限は５ｐｇ／ｍＬである。上記アッセイにおいてＦ−ＩＩＩを試験したが、循環エストラジオールまたはＬＨレベルが有意に上昇することはない。
【００３２】
有用性
乳房および子宮組織におけるエストロゲンのアンタゴニストとして、Ｆ−ＩＩＩは、エストロゲンがその状態において原因となる役割を担うことが示されている状態を処置するのに有用である。骨格および循環系におけるエストロゲンのアゴニストとして、Ｆ−ＩＩＩは、エストロゲンがその状態において有益な役割を担うことが示されている状態を処置するのに有用である。
【００３３】
本明細書において用いられる「処置する」および「処置」なる語には、その一般に受け入れられている意味、即ち、本明細書に記載した病理学的状態あるいはその続発症の進行または重篤度の、緩和（alleviating）、改善（ameliorating）、管理（managing）、予防（preventing）、制止（prohibiting）、抑制（restraining）、遅延（slowing）、中止（stopping）、または逆転（reversing）を包含する。用語「予防する」は、本発明の化合物の受容者が本明細書に記載したいずれかの病理学的状態またはその続発症を被るまたは発症する可能性を減少することを意味する。
【００３４】
本発明の化合物がそれに対する処置において有用である疾患、障害または状態としては（１）子宮および／または乳癌；（２）子宮内膜症；（３）子宮平滑筋腫／平滑筋腫；および（４）骨粗鬆症が挙げられるがこれに限定されない。本明細書に記載した子宮平滑筋腫／平滑筋腫の処置は、疼痛、頻尿、および子宮の出血等の関連する症状も減少し得る。
【００３５】
用量
本明細書で用いられる用語「有効量」は、本明細書に記載した状態またはその有害な影響を処置することが可能なＦ−ＩＩＩの量を意味する。
【００３６】
投与する具体的な量は、各々の状況を取り巻く特定の事情によって決定される。これらの事情としては、投与経路、その患者の過去の病歴、処置する病理学的状態または症状、処置するその状態／症状の重篤度および受容者の年齢および性別が挙げられる。受容者の患者の主治医は、関連する事情に照らして治療用量を決定する。
【００３７】
一般にＦ−ＩＩＩの最小限の有効量は１日約５ｍｇを超える。典型的には、有効量は１日最大で約３５０ｍｇを超えない。正確な用量は、患者の「用量滴定」の医学分野での標準的なプラクティスにしたがって決定することができる。すなわち、最初に化合物を低用量で投与し、望ましい治療効果が観察されるまで投与量を徐々に増大させる。
【００３８】
投与経路
Ｆ−ＩＩＩを、筋肉内、鼻内、膣内、静脈内、経口、直腸、皮下、局所および経皮を含む様々な経路で投与することができる。好ましい投与経路は、経口である。
【００３９】
組み合わせ治療
Ｆ−ＩＩＩを他の薬物と組み合わせて用い、これらの化合物が有用であるような疾患または状態の処置において用いることができる。そのような他の薬物は、一般に用いられている経路および量で投与することができ、故に、本発明の塩と同時またはそれに続いて投与することができる。Ｆ−ＩＩＩを１以上の他の薬物と同時に用いる場合、本発明の化合物に加えてそのような他の薬物を含有する医薬の単位投与剤型は好ましい。従って、本発明の医薬組成物は、１以上の他の活性成分を含有するものを包含する。本発明の化合物と組み合わせて、別々に、または同じ医薬組成物として投与することができる、他の活性成分の一例としては、ホルモン置換治療（ＨＲＴ）において用いられる薬剤が挙げられる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】Ｆ−ＩＩＩのＸＲＤパターンを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
銅放射線源（ＣｕＫα、λ＝１．５４０５６Å）から得られるパターンが、２θで１５．２±０．１、１７．６±０．１、１８．６±０．１および２４．１±０．１°にピークを含んでなるＸ線回折パターンを有する、結晶性の溶媒和していない１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン塩酸塩。
【請求項２】
前記Ｘ線回折パターンがさらに２θで１６．９±０．１、１９．２±０．１、２１．３±０．１および２１．６±０．１°にピークを含んでなる、請求項１記載の塩。
【請求項３】
有効量の請求項１または２のいずれかに記載の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む子宮内膜症の治療方法。
【請求項４】
有効量の請求項１または２のいずれかに記載の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む子宮平滑筋腫の治療方法。
【請求項５】
子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫の治療において使用するための請求項１または２のいずれかに示される化合物。
【請求項１】
銅放射線源（ＣｕＫα、λ＝１．５４０５６Å）から得られるパターンが、２θで１５．２±０．１、１７．６±０．１、１８．６±０．１および２４．１±０．１°にピークを含んでなるＸ線回折パターンを有する、結晶性の溶媒和していない１−（４−（２−ピペリジニルエトキシ）フェノキシ）−２−（４−メタンスルホニルフェニル）−６−ヒドロキシナフタレン塩酸塩。
【請求項２】
前記Ｘ線回折パターンがさらに２θで１６．９±０．１、１９．２±０．１、２１．３±０．１および２１．６±０．１°にピークを含んでなる、請求項１記載の塩。
【請求項３】
有効量の請求項１または２のいずれかに記載の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む子宮内膜症の治療方法。
【請求項４】
有効量の請求項１または２のいずれかに記載の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む子宮平滑筋腫の治療方法。
【請求項５】
子宮内膜症および／または子宮平滑筋腫の治療において使用するための請求項１または２のいずれかに示される化合物。
【図１】
【公表番号】特表２００７−５３７９９１（Ｐ２００７−５３７９９１Ａ）
【公表日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３６４９１（Ｐ２００６−５３６４９１）
【出願日】平成１６年１月２１日（２００４．１．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００００２０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０７５８９４
【国際公開日】平成１６年９月１０日（２００４．９．１０）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１２月２７日（２００７．１２．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１月２１日（２００４．１．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００００２０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０７５８９４
【国際公開日】平成１６年９月１０日（２００４．９．１０）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
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