炎症性疾患用アミノ酸組成物
【課題】炎症性腸疾患等の炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に有効で、副腎皮質ステロイド剤等の既存の医薬に比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性も生じにくく、しかも、経口投与が可能で、コストも安い炎症性疾患用アミノ酸組成物を提供する。
【解決手段】ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含有しないことを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。ヒトの必須アミノ酸は、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンからなることが好ましい。さらに、前記炎症性疾患用アミノ酸組成物は、アルギニンを含有することが好ましい。
【解決手段】ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含有しないことを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。ヒトの必須アミノ酸は、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンからなることが好ましい。さらに、前記炎症性疾患用アミノ酸組成物は、アルギニンを含有することが好ましい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性疾患用アミノ酸組成物に関する。さらに詳しく言うと、本願発明は、ヒトの必須アミノ酸から構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含まない炎症性疾患用アミノ酸組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
クローン病及び潰瘍性大腸炎を二大疾患とする炎症性腸疾患（inflammatory bowel disease;ＩＢＤ）は、慢性の難治性疾患であり、特定疾患として指定されている。日本での患者数は１０万人を超え、なおも増加傾向にある。
本疾患の病因は未だ特定されていないが、免疫機構に関与するものと考えられている。すなわち、特定の腸内細菌や食餌抗原が、炎症の発症部位である腸管上皮から組織内部へ侵入し、過剰な炎症反応が引き起こされるというメカニズムが指摘されている。免疫系が攪乱されて、腸管上皮周辺を中心に自己を攻撃し、腸管に炎症が発症するというのである。炎症性腸疾患は、通常は、炎症症状の急性憎悪・再燃（炎症の悪化）と寛解（炎症の緩和）を繰り返す。炎症症状の急性増悪・再燃の際には、患者は一般に、食事摂取が不十分であったり、消化吸収障害や、炎症部位からのタンパク質の漏出、さらには炎症による発熱等が認められたりするため、低栄養状態に陥ることが多い。
そのため、治療方針としては、速やかに炎症症状を緩和（寛解導入）し、再燃を予防（寛解維持）することにより、患者のＱＯＬを高めることに主眼が置かれている。
【０００３】
本疾患の治療方法には、薬物療法、栄養療法、手術がある。薬物療法では、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド剤、分子生物学的製剤（抗体医薬）、アミノサリチル酸製剤等が主に使用されている。
しかし、これらの既存医薬では、重篤な副作用が報告されており、安全性に問題がある。しかも、効果の減弱が生じやすく、薬剤耐性が生じやすいものが多い。さらに、これらの既存医薬は、経口投与できず、自宅では投与できないなどの問題もあった。
また、手術は、病変部の切除や狭窄形成術等が行われているが、再発率が高いなどの問題がある。
【０００４】
栄養療法としては、タンパク質をその構成分子の混合物として与える成分栄養が行われている。タンパク質はアミノ酸混合物として配合されるが、その配合量は、栄養価の高い卵白アルブミンのアミノ酸組成をもとに調整が行われている（非特許文献１〜３参照）。
一方、ホエイタンパク質加水分解物の全アミノ酸組成物を、炎症性疾患である肝不全患者の栄養療法において使用することが検討されている（特許文献１）。
ホエイタンパク質は、必須アミノ酸と非必須アミノ酸の含有バランスに優れ、卵白アルブミンなどよりもさらに栄養的価値が高い旨の評価もある（非特許文献４）。
しかしながら、これらの文献に記載されているアミノ酸組成物は、必須アミノ酸及び非必須アミノ酸の両者を含む全アミノ酸からなる組成物やペプチド混合物であり、これらの栄養療法は薬物療法に比べて安全性が高く、患者の栄養状態も改善しうるものの、その抗炎症効果は不十分であった。
【０００５】
このような状況下で、炎症性腸疾患等の炎症性疾患に対する抗炎症作用が優れ、患者の栄養状態の改善も可能で、既存の医薬と比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性も生じず、経口投与が可能で、しかもコストが安い炎症性疾患用治療剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００４−９９５６３号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Elemental diet as primary treatment of acute Crohn’s desease: a controlled trial, British Medical Journal (1984) Vol.288 1859-1862.
【非特許文献２】Nutritional Management of inflammatory bowel disease, Gastroenterology Clinics of North America (1989) Vol.17, No.1, 129-157.
【非特許文献３】Therapeutic efficacy of cyclic home elemental enteral alimentation in Crohn’s disease, Journal of Gastroenterology (1995) 30 (Suppl VIII) 91-94.
【非特許文献４】山口真ら、ホエイタンパク質およびホエイペプチドの特長と抗炎症作用,Milk Science (2005) Vol.54,No.3 123-127
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明は、炎症性腸疾患等の炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に有効で、患者の栄養状態も改善しつつ、副腎皮質ステロイド剤等の既存の薬物に比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性も生じにくく、しかも、経口投与が可能で、コストが安い炎症性疾患用アミノ酸組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねたところ、アミノ酸組成物のうち、ヒトの必須アミノ酸組成物に非常に優れた抗炎症作用があることを見出し、本発明を完成させた。
また、前記ヒトの必須アミノ酸組成物にアルギニンを加えたものに、さらに優れた抗炎症作用があることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の炎症性腸疾患治療剤を提供するものである。
（１） ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含有しないことを特徴とする炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（２） ヒトの必須アミノ酸が、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンからなることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（３） ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％及びバリン２．３〜５３．６重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（４） ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％及びバリン９．３〜１３．４重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（５） さらに、アルギニンを含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（６） ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％、バリン２．３〜５３．６重量％及びアルギニン１．１〜６３．６重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（７） ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％、バリン９．３〜１３．４重量％及びアルギニン４．７〜１５．９重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（８） 炎症性疾患が、炎症性腸疾患であることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（９）炎症性腸疾患が、クローン病または潰瘍性大腸炎であることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（１０） 炎症性疾患の治療、予防、寛解の導入または維持のために使用できることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、炎症性腸疾患などの炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に優れた薬理的活性を有し、栄養状態の改善も見込め、さらに、既存の薬物と比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性が生じず、経口投与が可能で、しかもコストが安い。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験例１における組成物Ａ〜Ｄの結果を示すグラフである。
【図２】試験例３における通常餌及び混合餌Ａ〜Ｄの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明について詳しく説明する。
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含まないことを特徴とするものである。
すなわち、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、
１）「ヒトの必須アミノ酸」から構成される場合と、
２）「ヒトの必須アミノ酸」及び「アルギニン」から構成される場合
がある。本発明のアミノ酸組成物は、１）及び２）の両方の場合において、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含まないことを特徴とする。
なお、本明細書全体において、ヒトの必須アミノ酸及びヒトの非必須アミノ酸については、「ヒトの」を省略して、単に必須アミノ酸及び非必須アミノ酸と書く場合がある。
【００１４】
本発明で使用するアミノ酸組成物の組成の由来等は特に限定されない。
たとえば、乳カゼイン、乳ホエイ、卵黄、卵白アルブミン、大豆タンパク質等を構成する全アミノ酸組成から、ヒトの必須アミノ酸の組成比（構成比）を抽出し、その組成比に基づいて各アミノ酸を配合した必須アミノ酸組成物を用いることができる。アルギニンは含有しても、含有していなくてもよいが、アルギニンを含有する場合には、さらに優れた効果が得られる。
これらのタンパク質のうち、乳ホエイを構成する全アミノ酸組成物に含まれるヒトの必須アミノ酸組成比からなる必須アミノ酸組成物、またはそれにアルギニンを加えた組成物は特に好ましい。
なお、上記の乳は、牛乳であるが、ヤギ乳、ヒトの母乳など牛以外の哺乳類の乳でもよい。
【００１５】
本発明において、「ヒトの必須アミノ酸」とは、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンである。
これらのアミノ酸は、Ｌ−型のアミノ酸を指し、塩等の形態をとっていてもよい。塩等の例としては、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、Ｌ−リジン塩酸塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、Ｌ−シスチン、Ｎ−アセチル−Ｌ−トリプトファン等が挙げられる。また、アルギニンについては、Ｌ−アルギニン塩酸塩等が挙げられる。
【００１６】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各必須アミノ酸の好ましい配合量は、アルギニンを含まない場合、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％及びバリン２．３〜５３．６重量％である。
なお、本明細書において、「フリーのアミノ酸として」は、正味のアミノ酸重量を示し、塩等を形成している場合には、その分を除いてという意味である。
【００１７】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各必須アミノ酸のさらに好ましい配合量は、アルギニンを含まない場合、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％及びバリン９．３〜１３．４重量％である。
【００１８】
また、アルギニンを含む場合、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各アミノ酸の好ましい配合量は、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％、バリン２．３〜５３．６重量％及びアルギニン１．１〜６３．６重量％である。
【００１９】
アルギニンを含む場合、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各アミノ酸のさらに好ましい配合量は、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％、バリン９．３〜１３．４重量％及びアルギニン４．７〜１５．９重量％である。
【００２０】
上記各アミノ酸の配合量の上限値及び下限値は、ＷＨＯ／ＦＡＯ／ＵＮＵ２００７に定められた必須アミノ酸必要量（アミノ酸評点パターン）の組成比や、乳カゼイン、乳ホエイ、卵黄、卵白アルブミン、大豆タンパク質等を構成する全アミノ酸組成中、アルギニン以外の非必須アミノ酸を除いた組成比の最大値及び最小値に基づいて算出した。
【００２１】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、種々の炎症性疾患の治療、予防及び寛解導入・維持等に有効である。
炎症性疾患としては、例えば、炎症性腸疾患、リウマチ、膠原病、アレルギー性疾患、細菌・ウイルスその他の感染症、肝不全等が挙げられる。これらの中でも、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、クローン病及び潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患に特に有効である。
【００２２】
また、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、特に製剤化せずに、そのまま患者に投与してもよいし、製剤化して投与してもよい。
製剤化する場合には、賦形剤、補助剤、添加剤等と混合することができる。
賦形剤、補助剤および添加剤等を使用する場合、それらの種類やその配合量は、製剤学上、医薬学上許容され得るものであれば限定されない。賦形剤、補助剤および添加剤等の種類としては、例えば、ゲル化剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、酸味料、発泡剤、人工甘味料、香料、滑沢剤、着色剤、安定化剤、緩衝剤、抗酸化剤、界面活性剤などが挙げられ、これらの１種または２種以上を適宜使用することができる。
また、これらの賦形剤、補助剤および添加剤等の配合量は、アミノ酸組成物に対して、例えば、０．１重量％〜２０．０重量％、好ましくは、０．１重量％〜１０．０重量％、さらに好ましくは、０．１重量％〜５．０重量％とすることができる。
【００２３】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物を製剤化する場合、その剤形は、特に限定されず、分散製剤、粉粒体製剤、溶液製剤、半固形製剤、成型製剤等のいずれの剤形とすることもできる。これらの中でも、散剤、細粒剤、顆粒剤、ゼリー剤等の形態とすることは好ましい。
【００２４】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、医薬の有効成分として用いることもできる。また、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、栄養組成物中に配合して用いてもよく、その場合の形態は、ゼリー剤、液剤、粉末剤、固形剤等とすることができる。
【００２５】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物の投与量は、炎症性疾患の治療、予防、寛解導入・維持に有効な量であれば、特に限定されない。たとえば、成人に対して、０．００１ｇ〜１．５ｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは、０．１ｇ〜１．０ｇ／体重ｋｇ／日とすることができる。投与量は、患者の年齢、体重、疾患の種類、症状の程度、性別等により、適宜増減することが可能である。
また、投与方法は、特に限定されないが、経口投与、経管等による経腸投与は好ましい。投与回数は、１日１回〜適当な回数に分けることができる。
【００２６】
本発明のアミノ酸組成物は、全アミノ酸からなる組成物に比べて、炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に非常に有効である。
また、本発明のアミノ酸組成物は、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド剤、分子生物的製剤（抗体医薬）、アミノサリチル酸製剤等の既存薬物と比べて、副作用が格段に少なく、薬剤耐性も生じにくく、安全性が極めて高い。さらに、本発明のアミノ酸組成物は、前記既存の薬物と比べて、経口摂取が可能であり、コストも安いので、コンプライアンスの改善や医療費削減にも寄与することができる。
さらに、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、ヒトの必須アミノ酸またはそれにアルギニンを加えたものから構成されるため、患者の体タンパク質を維持することができ、栄養状態を改善することもできる。
【実施例】
【００２７】
以下、試験例及び実施例により、本発明をさらに、詳しく説明する。試験例及び実施例において、単に「％」と記載したものは「重量％」を示すものとする。
【００２８】
（試験例１）
本試験例において用いるラットは、炎症性腸疾患モデルラットを、Morris G.P. et al: Gastroenterology, Vol.96,P795 (1989)に記載の方法に準じて作成した。
同文献に記載の方法とは、ラットまたはマウスにトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）をエタノールと共に注腸することにより、クローン病類似の肉芽腫形成を誘発させる方法である。その手法は、麻酔下にて、５０％エタノールにＴＮＢＳを溶解させた溶液を肛門から約４ｃｍの結腸内に投与するのが一般的である。
ＴＮＢＳによる大腸炎症状は、投与４日後にピークを示し、血清中の抗ＴＮＢＳ抗体の上昇と共に、腸管内の潰瘍、陰窩の短縮及び粘膜固有層の肥厚、周囲組織への癒着を伴う持続的炎症が観察され、組織学的にも単核球の著明な浸潤と共に肉芽腫の形成が認められるクローン病類似の慢性大腸炎と考えられている。
本試験例においては、このモデルの改変モデルとして、ＴＮＢＳを大腸ではなく、クローン病の炎症好発部位である小腸（回腸）に投与し（Ohta N, Tsujikawa T, Nakamura,T et al. (2003) J Gastroenterol. 38(2):127-33., Tsujikawa T, Ohta N, Nakamura T, et al. (1999) J Gastroenterol Hepatol. 14(12):1166-72.）、癒着、拡張、潰瘍、腸管壁厚など肉眼スコアによる評価を行った。
【００２９】
本試験例においては、下記の手順で試験を行った。
（馴化）
Wistar系雄性ラット（体重２００ｇ程度）を７日間馴化させ、その間、ＡＩＮ−９３Ｇ食を与えた。
（ＴＮＢＳ感作）
馴化後、ラットにＴＮＢＳ感作を行った。すなわち、ラットに、６ｍｇ／０．１５ｍｌ／ラット（４％ＴＮＢＳ生理食塩水中）を０.１５ｍｌ投与し、ＴＮＢＳ感作を行った。ＴＮＢＳ感作は、ＴＮＢＳモデルの安定化（死亡率の低下など）に有効であると報告されている（Ishida T, Azuma T et al. (2010) Inflamm Bowel Dis. 16(1):87-95、森脇 和郎 等（2004）モデル動物の作製と維持 Life-science information center ）。
（絶食）
ＴＮＢＳ投与前に、一時的に腸管内容物をなくすため、ＴＮＢＳ感作後４日目から２日間ラットを絶食させた。
【００３０】
（ＴＮＢＳ投与）
絶食後、ラットをペントバルビタールナトリウム（腹腔内投与、４０ｍｇ／０．８ｍｌ／ｋｇ体重）にて麻酔後、開腹し、回盲弁から上流１０ｃｍの小腸部位周辺を腹腔外に引き出した。回盲弁上流１０ｃｍの部位から上流５ｃｍの範囲に２９Ｇ針つきシリンジを用いて、５０％エタノール中１２０ｍｇ／ｍｌ ＴＮＢＳを０．３ｍｌ／ラットの容量で小腸投与した。３０分間静置後、腸管を腹壁内に戻し、切開した腹筋および皮膚を縫合して閉腹した。
【００３１】
（アミノ酸組成物投与）
得られたＴＮＢＳ改変モデルラットを１群１０匹とし、表１〜表３の各アミノ酸組成物を１５ｇ／日の用量で経口投与した。
表１に示す組成物は、アミノ酸として、全アミノ酸混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（Ｔｏｔａｌ ＡＡ２０重量％：組成物Ａ）と、アミノ酸として、必須アミノ酸のみの混合物を、１５重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（ＥＡＡ１５重量％：組成物Ｂ）である。
表２に示す組成物は、前記全アミノ酸混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（Ｔｏｔａｌ ＡＡ２０重量％：組成物Ａ）に加えて、アミノ酸として、必須アミノ酸のみの混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（ＥＡＡ２０重量％：組成物Ｃ）である。
表３に示す組成物は、前記全アミノ酸混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（Ｔｏｔａｌ ＡＡ２０重量％：組成物Ａ）に加えて、アミノ酸として、必須アミノ酸及びアルギニンを、合計で１５重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（(ＥＡＡ＋Ａｒｇ)１５重量％：組成物Ｄ）を示す。
表１〜表３の各表において、組成物Ａと組成物Ｂ、組成物Ａと組成物Ｃ、組成物Ａと組成物Ｄは、それぞれアミノ酸組成が異なるのみで、それ以外の成分（油脂、糖質、ミネラル、ビタミン、添加物）と各成分の含有量は基本的に同じであるが、アミノ酸の増量分は、糖質であるデキストリンの配合量を減量することで調整した。なお、これらの組成物は、市販のアミノ酸（協和発酵株式会社製）を使用して、通常の栄養組成物の製造方法により、製造した。各表において、「Total AA」は、必須アミノ酸と非必須アミノ酸を含む全アミノ酸を示し、「EAA」は、必須アミノ酸を示す。また、各表において、「％」は、「重量％」を示す。
なお、表１〜３に示す各アミノ酸組成物のラットへの投与は、ＴＮＢＳ小腸投与前７日から投与前２日までと、ＴＮＢＳ小腸投与後１日から投与後７日までとした。
【００３２】
【表１】
【００３３】
【表２】
【００３４】
【表３】
【００３５】
（モデルの評価）
本試験例のＴＮＢＳ改変モデルラットにおいては、ＴＮＢＳ小腸投与後７日経過後に、解剖を行い、小腸の癒着・拡張を調べ、病変の状態（ダメージ・スコア）の肉眼によるスコアリングを実施した。
さらに、潰瘍部分の面積（長径（mm）×短径(mm)）、腸管壁の厚み（ｍｍ；回盲弁から上流２０ｃｍの最大肥厚部位）及び小腸重量（ｇ／回盲弁から上流２０ｃｍ）を計測した。なお、肉眼によるスコアリングは、下記肉眼スコア（１）〜（３）に基づいて判定した。
【００３６】
肉眼スコア（１）は、下記に示すように、Ｖｉｌａｓｅｃａらの方法（Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.Vilaseca J, Salas A, Guarner F, Rodriguez R, Martinez M, Malagelada JR.Gut. 1990 May;31(5):539-44.）を改良したスコアリング方法によって判定した。
【００３７】
肉眼スコア（２）は、下記に示すように、Ｗａｌｌａｃｅ（Assessment of the role of platelet-activating factor in an animal model of inflammatory bowel disease. Wallace JL, Braquet P, Ibbotson GC, MacNaughton WK, Cirino G. J Lipid Mediat. 1989 Jan-Feb;1(1):13-23.）らの方法を改良したスコアリング方法によって判定した。
【００３８】
肉眼スコア（３）は、下記に示すように、Ｃａｒｏｌｉｎｅ（Reactivation of hapten-induced colitis and its prevention by anti-inflammatory drugs. Appleyard Caroline B, Wallace JL. Am J Physiol. 1995 Jul;269(1 Pt 1):G119-25.）らによるスコアリング方法によって判定した。
【００３９】
肉眼スコア（１）
癒着 ０：なし
１：軽度（簡単に剥離できる）
２：重度（顕著なループまたは剥離困難）
拡張 ０：なし
１：軽度
２：中程度
３：重度（狭窄を伴う）
潰瘍 ０：なし
１：軽度（充血〜比較的小さく浅いもの）
２：重度（顕著な肥厚を伴い、広範囲にわたるもの）
肥厚 ０：１．０ｍｍ以下
１：１．０〜２．０ｍｍ
２：２．０〜３．０ｍｍ
３：３．０ｍｍ以上
ダメージ・スコア：１匹毎に以上の判定値を合計し、１０匹の平均値を求めた。
【００４０】
肉眼スコア（２）
スコア０：障害なし。
スコア１：充血。潰瘍なし。
スコア２：充血と大腸壁の肥厚。潰瘍なし。
スコア３：大腸壁の肥厚を伴わない潰瘍が１箇所
スコア４：２箇所以上の潰瘍または炎症。
スコア５：２箇所以上の比較的大きな潰瘍もしくは炎症。または１〜２ｃｍ程度の潰瘍もしくは炎症。
スコア６：２〜３ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア７：３〜４ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア８：４〜５ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア９：５〜６ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア10：６ｃｍ以上の潰瘍または炎症。
ダメージ・スコア：上記値の１０匹の平均値を求めた。
【００４１】
肉眼スコア（３）
潰瘍 Ｘ：Wallaceのスコアによる数値を引用
癒着 ０：癒着なし
１：軽度の癒着（癒着部位が簡単に剥がれる程度）
２：重度の癒着
糞便 ０：通常便
１：下痢便（軟便、泥状便、水様便）
腸壁 Ｙ：腸壁の厚さ（ｍｍ）
ダメージ・スコア：１匹毎に以上の判定値を合計し、１０匹の平均値を求めた。
【００４２】
上記の組成物Ａ〜Ｄの各組成物を与えたラットのそれぞれの肉眼スコア（１）〜（３）の他、潰瘍部分の面積（ｍｍ２；潰瘍長径×潰瘍短径）、腸管壁の厚み（ｍｍ；回盲弁から上流２０ｃｍの最大肥厚部位）及び病変部位を含む小腸重量（ｇ／回盲弁から上流２０ｃｍ）についても、１群１０匹の平均値を求めた。結果を表４及び図１に示す。
【００４３】
【表４】
【００４４】
表４及び図１に示される結果から、全アミノ酸混合物を投与した組成物Ａ群と比較して、非必須アミノ酸を含まず、必須アミノ酸のみからなる混合物を投与した組成物Ｂ群及び組成物Ｃ群は、腸管の癒着や拡張、潰瘍などの病態が大きく改善することが明らかとなった。
さらに、必須アミノ酸にさらにアルギニンを添加した混合物を投与した組成物Ｄ群では、病態がさらに改善することが明らかとなった。特に、潰瘍面積が非常に小さく、腸管壁の厚みや小腸重量が著しく減少しており、治療効果が顕著であると言える。
これらの結果から、アミノ酸として必須アミノ酸のみを含むアミノ酸組成物及び必須アミノ酸とアルギニンのみを含むアミノ酸組成物は、全アミノ酸混合物を用いた場合よりも、炎症性腸疾患に対する治療効果が優れていることがわかった。
また、必須アミノ酸を２０重量％含有する組成物Ｃだけでなく、アミノ酸の量が組成物Ａより少ない組成物Ｂにおいても、組成物Ａより優れた治療効果が得られており、本発明のアミノ酸組成物の優れた抗炎症効果は、非必須アミノ酸を含まないことによって得られていることがわかる。
【００４５】
（試験例２）
本試験例においては、一般的なマウス大腸炎（ＴＮＢＳ溶液を肛門から約４ｃｍの結腸内に投与）を作製し、病変部位を含む腸管組織中の炎症性サイトカインの評価を実施した。
試験の手順は下記の通りとした。
（馴化）
ＳＪＬ／Ｊ系雄性マウス（体重２０ｇ程度）を７日間馴化させ、その間、ＡＩＮ−９３Ｇ食を与えた。
（絶食）
ＴＮＢＳ投与前に、一時的に腸管内容物をなくすため、ＴＮＢＳ大腸投与の１日前の午後６時より１日間マウスを絶食させた。
（ＴＮＢＳ投与）
絶食後、マウスをイソフルラン（実験小動物用ガス麻酔システム；ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）にてプレ麻酔後、腹圧を下げるため維持麻酔下で３分以上静置した。マウスの尾をもって逆さにし、５０％エタノールに溶解したＴＮＢＳ溶液を、４Ｆｒ栄養カテーテル（アトムメディカル株式会社製）を用いて、肛門部より４ｃｍ程度大腸管腔内に挿入し、ゆっくりと１００μｌ注入し、そのままの状態で１分静置した。その後、ＴＮＢＳ漏洩を防ぐ目的で仰向けの状態で後足を上へ反らす姿勢をとり、維持麻酔の状態に戻し、５分静置した。
【００４６】
（アミノ酸組成物投与）
絶食後、ＴＮＢＳマウスを１群１０匹とし、表１に示す組成物Ａ及びＢを経口投与した。
なお、表１に示す各アミノ酸組成物のマウスへの投与は、ＴＮＢＳ大腸投与前７日から投与前２日までと、ＴＮＢＳ大腸投与後１日から投与後７日までとした。
【００４７】
本試験例のＴＮＢＳマウスにおいては、ＴＮＢＳ大腸投与後４日後に解剖を行い、大腸を摘出し、病変部位を含む大腸組織中の炎症性サイトカインをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ社製キット）にて解析した。
大腸組織は、ＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ−Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ ＋１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００＋Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）中でホモジナイズした後、遠心操作（２０，０００×ｇ、４℃、３０分）により、上清をタンパク質抽出物として回収し、ＥＬＩＳＡに供した。さらに、タンパク質抽出物について、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によりタンパク質の総量を解析し、ＥＬＩＳＡのデータをその値で除することにより、１ｍｇタンパク質中のサイトカイン（インターロイキン−６及びインターロイキン−１ａ）の濃度で示した。
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、炎症の初期に産生され、細胞浸潤を惹起するケモカインの産生を誘導、接着分子の発現誘導を行なうサイトカインであり、インターロイキン−１ａ（ＩＬ−１ａ）は、ＩＬ−６やＴＮＦ−α等の炎症性サイトカインの誘導を行ない、それ自身も好中球の誘導能を持つサイトカインである。したがって、栄養組成物の投与によってＩＬ−６及びＩＬ−１ａの量が減少すれば、炎症が抑制されていることが示される。
結果を表５に示す。
【００４８】
【表５】
【００４９】
表５に示される結果から明らかなように、全アミノ酸混合物を投与した組成物Ａと比較して、非必須アミノ酸を含まず、必須アミノ酸のみからなる混合物を投与した組成物Ｂにおいては、ＩＬ-６及びＩＬ-１ａともに量が減少した。
このことから、非必須アミノ酸を含まず、必須アミノ酸のみを含む本発明のアミノ酸組成物を投与することにより、ＩＬ−６、ＩＬ−１ａの産生が抑制されることが分かる。
すなわち、本発明のアミノ酸組成物は、全アミノ酸組成物に比べて、炎症性疾患の炎症抑制に非常に有効であることが判明した。
【００５０】
（実施例１）
（ヒトの必須アミノ酸組成物を有効成分とする散剤の製造）
市販のＬ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、塩酸Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−バリン（協和発酵株式会社製）を入手した。
必須アミノ酸の組成比は、Heine WE, Klein PD, Reeds PJ. et.al.(1991)The importance of alpha-lactalbumin in infant nutrition. 121(3):277-83.に記載の乳ホエイタンパク質のアミノ酸組成比に基づき、正味のアミノ酸量として（フリーのアミノ酸として、すなわち塩のものはその分を差し引いて）、ヒスチジン３．７重量％、イソロイシン１１．５重量％、ロイシン、１８．８重量％、リジン１６．７重量％、メチオニン４．１重量％、システイン４．１重量％、フェニルアラニン６．５重量％、チロシン６．０重量％、スレオニン１３．６重量％、トリプトファン３．５重量％及びバリン１１．５重量％とした。これらの必須アミノ酸のみからなる混合物を調製し、散剤の有効成分として用いた。
慣用の散剤の調製方法により、上記成分を秤量後、予備混和し、粉砕機を使用して粉砕した後、再度混和を行ない、１０ｋｇのアミノ酸混合物を製造した。取得したアミノ酸混合物を秤量し、一包当たり５．０ｇとなるように分包し、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物を含有する散剤を得た。
【００５１】
（実施例２）
（ヒトの必須アミノ酸とアルギニンの混合物を有効成分とする散剤の製造）
塩酸Ｌ−アルギニン（協和発酵株式会社製）を添加したこと以外は、実施例１と同様の方法で、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物を含有する散剤を調製した。
各アミノ酸の組成比は、正味のアミノ酸量として（フリーのアミノ酸として、すなわち塩のものはその分を差し引いて）、ヒスチジン３．５重量％、イソロイシン１１．０重量％、ロイシン１７．９重量％、リジン１５．９重量％、メチオニン３．９重量％、システイン３．９重量％、フェニルアラニン６．２重量％、チロシン５．７重量％、スレオニン１２．９重量％、トリプトファン３．４重量％、バリン１１．０重量％及びアルギニン４．８重量％とした。
【００５２】
（試験例３）
本試験例においては、通常の餌とともに投与した本発明のアミノ酸組成物がＴＮＢＳによる小腸炎の病状に与える影響について調べた。
使用するラットの種類や、試験の手順（ラットの馴化、ＴＮＢＳ感作、絶食、ＴＮＢＳ投与等）等は、試験例１と同様とした。
【００５３】
通常餌としては、ＣＲＦ−１（オリエンタル酵母工業株式会社製）を用いた。ＣＲＦ−１は、マウス、ラット、ハムスター等の実験動物に用いられる一般的な粉末飼料であり、１００ｇ中に下記の組成を有する。
水分 ７．８ｇ
粗蛋白質 ２２．４ｇ
粗脂肪 ５．７ｇ
粗灰分 ６．６ｇ
粗繊維 ３．１ｇ
可溶性無窒素物 ５４．５ｇ
このように、ＣＲＦ−１中には繊維や脂肪が多く含まれている上、窒素源がアミノ酸ではなく蛋白質として含まれており、本来、炎症性腸疾患モデルには適さない組成物（飼料）である。
【００５４】
次に、上記通常餌に添加したアミノ酸組成物について説明する。
表６に示す割合（フリーのアミノ酸として（重量％））でアミノ酸を含む、全アミノ酸組成物（１）、必須アミノ酸組成物（２）及び必須アミノ酸とアルギニンを含む組成物（３）を準備した。
上記各アミノ酸組成物（１）〜（３）を、表７に示すように通常餌（ＣＲＦ−１）に混合した。表７に示す混合餌Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸の量は下記の通りである。
「混合餌Ａ」：混合餌全量に対して前記全アミノ酸組成物（１）を２０％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記全アミノ酸組成物（１）の量が２０ｇ（フリーのアミノ酸として）。
「混合餌Ｂ」：混合餌全量に対して前記必須アミノ酸組成物（２）を１５％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記必須アミノ酸組成物（２）の量が１５ｇ（フリーのアミノ酸として）。
「混合餌Ｃ」：混合餌全量に対して、前記必須アミノ酸組成物（２）を２０％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記必須アミノ酸組成物（２）の量が２０ｇ（フリーのアミノ酸として）。
「混合餌Ｄ」：混合餌全量に対して、前記（必須アミノ酸とアルギニン）組成物（３）を１５％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記（必須アミノ酸とアルギニン）組成物（３）の量が１５ｇ（フリーのアミノ酸として）。
また、表７に示すアミノ酸を、実際に使用する際のアミノ酸の量として表すと表８に示す通りである。
通常餌、及び混合餌Ａ〜Ｄは、全てのエネルギー摂取量が等量となるようにマウスに給餌した。
【００５５】
【表６】
【００５６】
【表７】
【００５７】
【表８】
【００５８】
通常餌を与えたラット及び通常餌にアミノ酸組成物を加えた混合餌Ａ〜Ｄを与えたラットのそれぞれの肉眼スコア（１）〜（３）の他、潰瘍部分の面積（ｍｍ２；潰瘍長径×潰瘍短径）、腸管壁の厚み（ｍｍ；回盲弁から上流２０ｃｍの最大肥厚部位）及び病変部位を含む小腸重量（ｇ／回盲弁から上流２０ｃｍ）について、試験例１と同じ測定方法及び評価方法により、１群１０匹の平均値を求めた。結果を表９及び図２に示す。
【００５９】
【表９】
【００６０】
表９及び図２に示される結果から、通常餌を投与した通常餌群（コントロール）や全アミノ酸組成物を通常餌に加えて投与した混合餌Ａ群（比較例）と比較して、必須アミノ酸のみからなる組成物を通常餌に加えて投与した組成物Ｂ群及び組成物Ｃ群は、腸管の癒着や拡張、潰瘍などの病態が改善されていることが明らかとなった。
さらに、必須アミノ酸にさらにアルギニンを添加した組成物を通常餌に加えて投与した混合餌Ｄ群では、病態がさらに改善することが明らかとなった。
これらの結果から、アミノ酸として必須アミノ酸のみを含むアミノ酸組成物及び必須アミノ酸とアルギニンのみを含むアミノ酸組成物は、全アミノ酸組成物を用いた場合よりも、炎症性腸疾患に対する治療効果が優れていることが分かる。
また、必須アミノ酸を２０重量％含有する混合餌Ｃだけでなく、アミノ酸の量が組成物Ａより少ない混合餌Ｂにおいても、混合餌Ａより優れた治療効果が得られており、本発明のアミノ酸組成物の優れた抗炎症効果は、非必須アミノ酸を含まないことによって得られていることがわかる。
なお、試験例３における結果は、試験例１で得られた結果と比べて効果がそれほど顕著ではないが、これは通常餌の摂取に起因するものと考えられる。試験例３において用いた通常餌（ＣＲＦ−１）は、上記したように、炎症性腸疾患モデルには適さない脂肪や繊維を多く含む飼料であり、窒素源もアミノ酸ではなく蛋白質として含まれている。これらの脂肪や繊維、蛋白質は炎症性腸疾患の病態悪化をもたらす成分である。
しかしながら、本試験例では、通常餌のみを与えた通常餌群や全アミノ酸組成物を通常餌に添加した混合餌Ａよりも、混合餌Ｂ群、混合餌Ｃ群、混合餌Ｄ群の順で試験例１と同様、本発明の効果が増した。すなわち、本発明の組成物は、炎症性腸疾患に適さない飼料を摂取した動物においても、必須アミノ酸のみを含むアミノ酸組成物、もしくは必須アミノ酸とアルギニンのみを含むアミノ酸組成物の摂取により、炎症性腸疾患の改善効果をもたらすことが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、炎症性疾患の治療、予防及び寛解導入・維持に対して非常に有効である。また、既存の薬剤に比べて、副作用や薬剤耐性も問題もなく、経口投与が可能な上、患者の栄養改善を図ることもできる。さらに、本発明のアミノ酸組成物は、既存の医薬よりもコストが安いため、医療費の削減にも寄与し得る。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症性疾患用アミノ酸組成物に関する。さらに詳しく言うと、本願発明は、ヒトの必須アミノ酸から構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含まない炎症性疾患用アミノ酸組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
クローン病及び潰瘍性大腸炎を二大疾患とする炎症性腸疾患（inflammatory bowel disease;ＩＢＤ）は、慢性の難治性疾患であり、特定疾患として指定されている。日本での患者数は１０万人を超え、なおも増加傾向にある。
本疾患の病因は未だ特定されていないが、免疫機構に関与するものと考えられている。すなわち、特定の腸内細菌や食餌抗原が、炎症の発症部位である腸管上皮から組織内部へ侵入し、過剰な炎症反応が引き起こされるというメカニズムが指摘されている。免疫系が攪乱されて、腸管上皮周辺を中心に自己を攻撃し、腸管に炎症が発症するというのである。炎症性腸疾患は、通常は、炎症症状の急性憎悪・再燃（炎症の悪化）と寛解（炎症の緩和）を繰り返す。炎症症状の急性増悪・再燃の際には、患者は一般に、食事摂取が不十分であったり、消化吸収障害や、炎症部位からのタンパク質の漏出、さらには炎症による発熱等が認められたりするため、低栄養状態に陥ることが多い。
そのため、治療方針としては、速やかに炎症症状を緩和（寛解導入）し、再燃を予防（寛解維持）することにより、患者のＱＯＬを高めることに主眼が置かれている。
【０００３】
本疾患の治療方法には、薬物療法、栄養療法、手術がある。薬物療法では、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド剤、分子生物学的製剤（抗体医薬）、アミノサリチル酸製剤等が主に使用されている。
しかし、これらの既存医薬では、重篤な副作用が報告されており、安全性に問題がある。しかも、効果の減弱が生じやすく、薬剤耐性が生じやすいものが多い。さらに、これらの既存医薬は、経口投与できず、自宅では投与できないなどの問題もあった。
また、手術は、病変部の切除や狭窄形成術等が行われているが、再発率が高いなどの問題がある。
【０００４】
栄養療法としては、タンパク質をその構成分子の混合物として与える成分栄養が行われている。タンパク質はアミノ酸混合物として配合されるが、その配合量は、栄養価の高い卵白アルブミンのアミノ酸組成をもとに調整が行われている（非特許文献１〜３参照）。
一方、ホエイタンパク質加水分解物の全アミノ酸組成物を、炎症性疾患である肝不全患者の栄養療法において使用することが検討されている（特許文献１）。
ホエイタンパク質は、必須アミノ酸と非必須アミノ酸の含有バランスに優れ、卵白アルブミンなどよりもさらに栄養的価値が高い旨の評価もある（非特許文献４）。
しかしながら、これらの文献に記載されているアミノ酸組成物は、必須アミノ酸及び非必須アミノ酸の両者を含む全アミノ酸からなる組成物やペプチド混合物であり、これらの栄養療法は薬物療法に比べて安全性が高く、患者の栄養状態も改善しうるものの、その抗炎症効果は不十分であった。
【０００５】
このような状況下で、炎症性腸疾患等の炎症性疾患に対する抗炎症作用が優れ、患者の栄養状態の改善も可能で、既存の医薬と比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性も生じず、経口投与が可能で、しかもコストが安い炎症性疾患用治療剤が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００４−９９５６３号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Elemental diet as primary treatment of acute Crohn’s desease: a controlled trial, British Medical Journal (1984) Vol.288 1859-1862.
【非特許文献２】Nutritional Management of inflammatory bowel disease, Gastroenterology Clinics of North America (1989) Vol.17, No.1, 129-157.
【非特許文献３】Therapeutic efficacy of cyclic home elemental enteral alimentation in Crohn’s disease, Journal of Gastroenterology (1995) 30 (Suppl VIII) 91-94.
【非特許文献４】山口真ら、ホエイタンパク質およびホエイペプチドの特長と抗炎症作用,Milk Science (2005) Vol.54,No.3 123-127
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明は、炎症性腸疾患等の炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に有効で、患者の栄養状態も改善しつつ、副腎皮質ステロイド剤等の既存の薬物に比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性も生じにくく、しかも、経口投与が可能で、コストが安い炎症性疾患用アミノ酸組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねたところ、アミノ酸組成物のうち、ヒトの必須アミノ酸組成物に非常に優れた抗炎症作用があることを見出し、本発明を完成させた。
また、前記ヒトの必須アミノ酸組成物にアルギニンを加えたものに、さらに優れた抗炎症作用があることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、本発明は、以下の炎症性腸疾患治療剤を提供するものである。
（１） ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含有しないことを特徴とする炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（２） ヒトの必須アミノ酸が、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンからなることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（３） ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％及びバリン２．３〜５３．６重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（４） ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％及びバリン９．３〜１３．４重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（５） さらに、アルギニンを含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（６） ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％、バリン２．３〜５３．６重量％及びアルギニン１．１〜６３．６重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（７） ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％、バリン９．３〜１３．４重量％及びアルギニン４．７〜１５．９重量％を含有することを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（８） 炎症性疾患が、炎症性腸疾患であることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（９）炎症性腸疾患が、クローン病または潰瘍性大腸炎であることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
（１０） 炎症性疾患の治療、予防、寛解の導入または維持のために使用できることを特徴とする前記炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、炎症性腸疾患などの炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に優れた薬理的活性を有し、栄養状態の改善も見込め、さらに、既存の薬物と比べて、副作用の心配がなく、薬剤耐性が生じず、経口投与が可能で、しかもコストが安い。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験例１における組成物Ａ〜Ｄの結果を示すグラフである。
【図２】試験例３における通常餌及び混合餌Ａ〜Ｄの結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明について詳しく説明する。
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含まないことを特徴とするものである。
すなわち、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、
１）「ヒトの必須アミノ酸」から構成される場合と、
２）「ヒトの必須アミノ酸」及び「アルギニン」から構成される場合
がある。本発明のアミノ酸組成物は、１）及び２）の両方の場合において、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含まないことを特徴とする。
なお、本明細書全体において、ヒトの必須アミノ酸及びヒトの非必須アミノ酸については、「ヒトの」を省略して、単に必須アミノ酸及び非必須アミノ酸と書く場合がある。
【００１４】
本発明で使用するアミノ酸組成物の組成の由来等は特に限定されない。
たとえば、乳カゼイン、乳ホエイ、卵黄、卵白アルブミン、大豆タンパク質等を構成する全アミノ酸組成から、ヒトの必須アミノ酸の組成比（構成比）を抽出し、その組成比に基づいて各アミノ酸を配合した必須アミノ酸組成物を用いることができる。アルギニンは含有しても、含有していなくてもよいが、アルギニンを含有する場合には、さらに優れた効果が得られる。
これらのタンパク質のうち、乳ホエイを構成する全アミノ酸組成物に含まれるヒトの必須アミノ酸組成比からなる必須アミノ酸組成物、またはそれにアルギニンを加えた組成物は特に好ましい。
なお、上記の乳は、牛乳であるが、ヤギ乳、ヒトの母乳など牛以外の哺乳類の乳でもよい。
【００１５】
本発明において、「ヒトの必須アミノ酸」とは、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンである。
これらのアミノ酸は、Ｌ−型のアミノ酸を指し、塩等の形態をとっていてもよい。塩等の例としては、Ｌ−ヒスチジン塩酸塩、Ｌ−リジン塩酸塩、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、Ｌ−シスチン、Ｎ−アセチル−Ｌ−トリプトファン等が挙げられる。また、アルギニンについては、Ｌ−アルギニン塩酸塩等が挙げられる。
【００１６】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各必須アミノ酸の好ましい配合量は、アルギニンを含まない場合、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％及びバリン２．３〜５３．６重量％である。
なお、本明細書において、「フリーのアミノ酸として」は、正味のアミノ酸重量を示し、塩等を形成している場合には、その分を除いてという意味である。
【００１７】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各必須アミノ酸のさらに好ましい配合量は、アルギニンを含まない場合、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％及びバリン９．３〜１３．４重量％である。
【００１８】
また、アルギニンを含む場合、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各アミノ酸の好ましい配合量は、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％、バリン２．３〜５３．６重量％及びアルギニン１．１〜６３．６重量％である。
【００１９】
アルギニンを含む場合、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物における各アミノ酸のさらに好ましい配合量は、当該アミノ酸組成物中、ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％、バリン９．３〜１３．４重量％及びアルギニン４．７〜１５．９重量％である。
【００２０】
上記各アミノ酸の配合量の上限値及び下限値は、ＷＨＯ／ＦＡＯ／ＵＮＵ２００７に定められた必須アミノ酸必要量（アミノ酸評点パターン）の組成比や、乳カゼイン、乳ホエイ、卵黄、卵白アルブミン、大豆タンパク質等を構成する全アミノ酸組成中、アルギニン以外の非必須アミノ酸を除いた組成比の最大値及び最小値に基づいて算出した。
【００２１】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、種々の炎症性疾患の治療、予防及び寛解導入・維持等に有効である。
炎症性疾患としては、例えば、炎症性腸疾患、リウマチ、膠原病、アレルギー性疾患、細菌・ウイルスその他の感染症、肝不全等が挙げられる。これらの中でも、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、クローン病及び潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患に特に有効である。
【００２２】
また、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、特に製剤化せずに、そのまま患者に投与してもよいし、製剤化して投与してもよい。
製剤化する場合には、賦形剤、補助剤、添加剤等と混合することができる。
賦形剤、補助剤および添加剤等を使用する場合、それらの種類やその配合量は、製剤学上、医薬学上許容され得るものであれば限定されない。賦形剤、補助剤および添加剤等の種類としては、例えば、ゲル化剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、酸味料、発泡剤、人工甘味料、香料、滑沢剤、着色剤、安定化剤、緩衝剤、抗酸化剤、界面活性剤などが挙げられ、これらの１種または２種以上を適宜使用することができる。
また、これらの賦形剤、補助剤および添加剤等の配合量は、アミノ酸組成物に対して、例えば、０．１重量％〜２０．０重量％、好ましくは、０．１重量％〜１０．０重量％、さらに好ましくは、０．１重量％〜５．０重量％とすることができる。
【００２３】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物を製剤化する場合、その剤形は、特に限定されず、分散製剤、粉粒体製剤、溶液製剤、半固形製剤、成型製剤等のいずれの剤形とすることもできる。これらの中でも、散剤、細粒剤、顆粒剤、ゼリー剤等の形態とすることは好ましい。
【００２４】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、医薬の有効成分として用いることもできる。また、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、栄養組成物中に配合して用いてもよく、その場合の形態は、ゼリー剤、液剤、粉末剤、固形剤等とすることができる。
【００２５】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物の投与量は、炎症性疾患の治療、予防、寛解導入・維持に有効な量であれば、特に限定されない。たとえば、成人に対して、０．００１ｇ〜１．５ｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは、０．１ｇ〜１．０ｇ／体重ｋｇ／日とすることができる。投与量は、患者の年齢、体重、疾患の種類、症状の程度、性別等により、適宜増減することが可能である。
また、投与方法は、特に限定されないが、経口投与、経管等による経腸投与は好ましい。投与回数は、１日１回〜適当な回数に分けることができる。
【００２６】
本発明のアミノ酸組成物は、全アミノ酸からなる組成物に比べて、炎症性疾患の治療や予防あるいは寛解導入・維持に非常に有効である。
また、本発明のアミノ酸組成物は、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド剤、分子生物的製剤（抗体医薬）、アミノサリチル酸製剤等の既存薬物と比べて、副作用が格段に少なく、薬剤耐性も生じにくく、安全性が極めて高い。さらに、本発明のアミノ酸組成物は、前記既存の薬物と比べて、経口摂取が可能であり、コストも安いので、コンプライアンスの改善や医療費削減にも寄与することができる。
さらに、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、ヒトの必須アミノ酸またはそれにアルギニンを加えたものから構成されるため、患者の体タンパク質を維持することができ、栄養状態を改善することもできる。
【実施例】
【００２７】
以下、試験例及び実施例により、本発明をさらに、詳しく説明する。試験例及び実施例において、単に「％」と記載したものは「重量％」を示すものとする。
【００２８】
（試験例１）
本試験例において用いるラットは、炎症性腸疾患モデルラットを、Morris G.P. et al: Gastroenterology, Vol.96,P795 (1989)に記載の方法に準じて作成した。
同文献に記載の方法とは、ラットまたはマウスにトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）をエタノールと共に注腸することにより、クローン病類似の肉芽腫形成を誘発させる方法である。その手法は、麻酔下にて、５０％エタノールにＴＮＢＳを溶解させた溶液を肛門から約４ｃｍの結腸内に投与するのが一般的である。
ＴＮＢＳによる大腸炎症状は、投与４日後にピークを示し、血清中の抗ＴＮＢＳ抗体の上昇と共に、腸管内の潰瘍、陰窩の短縮及び粘膜固有層の肥厚、周囲組織への癒着を伴う持続的炎症が観察され、組織学的にも単核球の著明な浸潤と共に肉芽腫の形成が認められるクローン病類似の慢性大腸炎と考えられている。
本試験例においては、このモデルの改変モデルとして、ＴＮＢＳを大腸ではなく、クローン病の炎症好発部位である小腸（回腸）に投与し（Ohta N, Tsujikawa T, Nakamura,T et al. (2003) J Gastroenterol. 38(2):127-33., Tsujikawa T, Ohta N, Nakamura T, et al. (1999) J Gastroenterol Hepatol. 14(12):1166-72.）、癒着、拡張、潰瘍、腸管壁厚など肉眼スコアによる評価を行った。
【００２９】
本試験例においては、下記の手順で試験を行った。
（馴化）
Wistar系雄性ラット（体重２００ｇ程度）を７日間馴化させ、その間、ＡＩＮ−９３Ｇ食を与えた。
（ＴＮＢＳ感作）
馴化後、ラットにＴＮＢＳ感作を行った。すなわち、ラットに、６ｍｇ／０．１５ｍｌ／ラット（４％ＴＮＢＳ生理食塩水中）を０.１５ｍｌ投与し、ＴＮＢＳ感作を行った。ＴＮＢＳ感作は、ＴＮＢＳモデルの安定化（死亡率の低下など）に有効であると報告されている（Ishida T, Azuma T et al. (2010) Inflamm Bowel Dis. 16(1):87-95、森脇 和郎 等（2004）モデル動物の作製と維持 Life-science information center ）。
（絶食）
ＴＮＢＳ投与前に、一時的に腸管内容物をなくすため、ＴＮＢＳ感作後４日目から２日間ラットを絶食させた。
【００３０】
（ＴＮＢＳ投与）
絶食後、ラットをペントバルビタールナトリウム（腹腔内投与、４０ｍｇ／０．８ｍｌ／ｋｇ体重）にて麻酔後、開腹し、回盲弁から上流１０ｃｍの小腸部位周辺を腹腔外に引き出した。回盲弁上流１０ｃｍの部位から上流５ｃｍの範囲に２９Ｇ針つきシリンジを用いて、５０％エタノール中１２０ｍｇ／ｍｌ ＴＮＢＳを０．３ｍｌ／ラットの容量で小腸投与した。３０分間静置後、腸管を腹壁内に戻し、切開した腹筋および皮膚を縫合して閉腹した。
【００３１】
（アミノ酸組成物投与）
得られたＴＮＢＳ改変モデルラットを１群１０匹とし、表１〜表３の各アミノ酸組成物を１５ｇ／日の用量で経口投与した。
表１に示す組成物は、アミノ酸として、全アミノ酸混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（Ｔｏｔａｌ ＡＡ２０重量％：組成物Ａ）と、アミノ酸として、必須アミノ酸のみの混合物を、１５重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（ＥＡＡ１５重量％：組成物Ｂ）である。
表２に示す組成物は、前記全アミノ酸混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（Ｔｏｔａｌ ＡＡ２０重量％：組成物Ａ）に加えて、アミノ酸として、必須アミノ酸のみの混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（ＥＡＡ２０重量％：組成物Ｃ）である。
表３に示す組成物は、前記全アミノ酸混合物を、２０重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（Ｔｏｔａｌ ＡＡ２０重量％：組成物Ａ）に加えて、アミノ酸として、必須アミノ酸及びアルギニンを、合計で１５重量％（フリーのアミノ酸として）含有する組成物（(ＥＡＡ＋Ａｒｇ)１５重量％：組成物Ｄ）を示す。
表１〜表３の各表において、組成物Ａと組成物Ｂ、組成物Ａと組成物Ｃ、組成物Ａと組成物Ｄは、それぞれアミノ酸組成が異なるのみで、それ以外の成分（油脂、糖質、ミネラル、ビタミン、添加物）と各成分の含有量は基本的に同じであるが、アミノ酸の増量分は、糖質であるデキストリンの配合量を減量することで調整した。なお、これらの組成物は、市販のアミノ酸（協和発酵株式会社製）を使用して、通常の栄養組成物の製造方法により、製造した。各表において、「Total AA」は、必須アミノ酸と非必須アミノ酸を含む全アミノ酸を示し、「EAA」は、必須アミノ酸を示す。また、各表において、「％」は、「重量％」を示す。
なお、表１〜３に示す各アミノ酸組成物のラットへの投与は、ＴＮＢＳ小腸投与前７日から投与前２日までと、ＴＮＢＳ小腸投与後１日から投与後７日までとした。
【００３２】
【表１】
【００３３】
【表２】
【００３４】
【表３】
【００３５】
（モデルの評価）
本試験例のＴＮＢＳ改変モデルラットにおいては、ＴＮＢＳ小腸投与後７日経過後に、解剖を行い、小腸の癒着・拡張を調べ、病変の状態（ダメージ・スコア）の肉眼によるスコアリングを実施した。
さらに、潰瘍部分の面積（長径（mm）×短径(mm)）、腸管壁の厚み（ｍｍ；回盲弁から上流２０ｃｍの最大肥厚部位）及び小腸重量（ｇ／回盲弁から上流２０ｃｍ）を計測した。なお、肉眼によるスコアリングは、下記肉眼スコア（１）〜（３）に基づいて判定した。
【００３６】
肉眼スコア（１）は、下記に示すように、Ｖｉｌａｓｅｃａらの方法（Dietary fish oil reduces progression of chronic inflammatory lesions in a rat model of granulomatous colitis.Vilaseca J, Salas A, Guarner F, Rodriguez R, Martinez M, Malagelada JR.Gut. 1990 May;31(5):539-44.）を改良したスコアリング方法によって判定した。
【００３７】
肉眼スコア（２）は、下記に示すように、Ｗａｌｌａｃｅ（Assessment of the role of platelet-activating factor in an animal model of inflammatory bowel disease. Wallace JL, Braquet P, Ibbotson GC, MacNaughton WK, Cirino G. J Lipid Mediat. 1989 Jan-Feb;1(1):13-23.）らの方法を改良したスコアリング方法によって判定した。
【００３８】
肉眼スコア（３）は、下記に示すように、Ｃａｒｏｌｉｎｅ（Reactivation of hapten-induced colitis and its prevention by anti-inflammatory drugs. Appleyard Caroline B, Wallace JL. Am J Physiol. 1995 Jul;269(1 Pt 1):G119-25.）らによるスコアリング方法によって判定した。
【００３９】
肉眼スコア（１）
癒着 ０：なし
１：軽度（簡単に剥離できる）
２：重度（顕著なループまたは剥離困難）
拡張 ０：なし
１：軽度
２：中程度
３：重度（狭窄を伴う）
潰瘍 ０：なし
１：軽度（充血〜比較的小さく浅いもの）
２：重度（顕著な肥厚を伴い、広範囲にわたるもの）
肥厚 ０：１．０ｍｍ以下
１：１．０〜２．０ｍｍ
２：２．０〜３．０ｍｍ
３：３．０ｍｍ以上
ダメージ・スコア：１匹毎に以上の判定値を合計し、１０匹の平均値を求めた。
【００４０】
肉眼スコア（２）
スコア０：障害なし。
スコア１：充血。潰瘍なし。
スコア２：充血と大腸壁の肥厚。潰瘍なし。
スコア３：大腸壁の肥厚を伴わない潰瘍が１箇所
スコア４：２箇所以上の潰瘍または炎症。
スコア５：２箇所以上の比較的大きな潰瘍もしくは炎症。または１〜２ｃｍ程度の潰瘍もしくは炎症。
スコア６：２〜３ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア７：３〜４ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア８：４〜５ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア９：５〜６ｃｍ程度の潰瘍または炎症。
スコア10：６ｃｍ以上の潰瘍または炎症。
ダメージ・スコア：上記値の１０匹の平均値を求めた。
【００４１】
肉眼スコア（３）
潰瘍 Ｘ：Wallaceのスコアによる数値を引用
癒着 ０：癒着なし
１：軽度の癒着（癒着部位が簡単に剥がれる程度）
２：重度の癒着
糞便 ０：通常便
１：下痢便（軟便、泥状便、水様便）
腸壁 Ｙ：腸壁の厚さ（ｍｍ）
ダメージ・スコア：１匹毎に以上の判定値を合計し、１０匹の平均値を求めた。
【００４２】
上記の組成物Ａ〜Ｄの各組成物を与えたラットのそれぞれの肉眼スコア（１）〜（３）の他、潰瘍部分の面積（ｍｍ２；潰瘍長径×潰瘍短径）、腸管壁の厚み（ｍｍ；回盲弁から上流２０ｃｍの最大肥厚部位）及び病変部位を含む小腸重量（ｇ／回盲弁から上流２０ｃｍ）についても、１群１０匹の平均値を求めた。結果を表４及び図１に示す。
【００４３】
【表４】
【００４４】
表４及び図１に示される結果から、全アミノ酸混合物を投与した組成物Ａ群と比較して、非必須アミノ酸を含まず、必須アミノ酸のみからなる混合物を投与した組成物Ｂ群及び組成物Ｃ群は、腸管の癒着や拡張、潰瘍などの病態が大きく改善することが明らかとなった。
さらに、必須アミノ酸にさらにアルギニンを添加した混合物を投与した組成物Ｄ群では、病態がさらに改善することが明らかとなった。特に、潰瘍面積が非常に小さく、腸管壁の厚みや小腸重量が著しく減少しており、治療効果が顕著であると言える。
これらの結果から、アミノ酸として必須アミノ酸のみを含むアミノ酸組成物及び必須アミノ酸とアルギニンのみを含むアミノ酸組成物は、全アミノ酸混合物を用いた場合よりも、炎症性腸疾患に対する治療効果が優れていることがわかった。
また、必須アミノ酸を２０重量％含有する組成物Ｃだけでなく、アミノ酸の量が組成物Ａより少ない組成物Ｂにおいても、組成物Ａより優れた治療効果が得られており、本発明のアミノ酸組成物の優れた抗炎症効果は、非必須アミノ酸を含まないことによって得られていることがわかる。
【００４５】
（試験例２）
本試験例においては、一般的なマウス大腸炎（ＴＮＢＳ溶液を肛門から約４ｃｍの結腸内に投与）を作製し、病変部位を含む腸管組織中の炎症性サイトカインの評価を実施した。
試験の手順は下記の通りとした。
（馴化）
ＳＪＬ／Ｊ系雄性マウス（体重２０ｇ程度）を７日間馴化させ、その間、ＡＩＮ−９３Ｇ食を与えた。
（絶食）
ＴＮＢＳ投与前に、一時的に腸管内容物をなくすため、ＴＮＢＳ大腸投与の１日前の午後６時より１日間マウスを絶食させた。
（ＴＮＢＳ投与）
絶食後、マウスをイソフルラン（実験小動物用ガス麻酔システム；ＤＳファーマバイオメディカル株式会社製）にてプレ麻酔後、腹圧を下げるため維持麻酔下で３分以上静置した。マウスの尾をもって逆さにし、５０％エタノールに溶解したＴＮＢＳ溶液を、４Ｆｒ栄養カテーテル（アトムメディカル株式会社製）を用いて、肛門部より４ｃｍ程度大腸管腔内に挿入し、ゆっくりと１００μｌ注入し、そのままの状態で１分静置した。その後、ＴＮＢＳ漏洩を防ぐ目的で仰向けの状態で後足を上へ反らす姿勢をとり、維持麻酔の状態に戻し、５分静置した。
【００４６】
（アミノ酸組成物投与）
絶食後、ＴＮＢＳマウスを１群１０匹とし、表１に示す組成物Ａ及びＢを経口投与した。
なお、表１に示す各アミノ酸組成物のマウスへの投与は、ＴＮＢＳ大腸投与前７日から投与前２日までと、ＴＮＢＳ大腸投与後１日から投与後７日までとした。
【００４７】
本試験例のＴＮＢＳマウスにおいては、ＴＮＢＳ大腸投与後４日後に解剖を行い、大腸を摘出し、病変部位を含む大腸組織中の炎症性サイトカインをＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ社製キット）にて解析した。
大腸組織は、ＴＢＳＴ（Ｔｒｉｓ−Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ ＋１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００＋Ｐｒｏｔｅａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）中でホモジナイズした後、遠心操作（２０，０００×ｇ、４℃、３０分）により、上清をタンパク質抽出物として回収し、ＥＬＩＳＡに供した。さらに、タンパク質抽出物について、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法によりタンパク質の総量を解析し、ＥＬＩＳＡのデータをその値で除することにより、１ｍｇタンパク質中のサイトカイン（インターロイキン−６及びインターロイキン−１ａ）の濃度で示した。
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、炎症の初期に産生され、細胞浸潤を惹起するケモカインの産生を誘導、接着分子の発現誘導を行なうサイトカインであり、インターロイキン−１ａ（ＩＬ−１ａ）は、ＩＬ−６やＴＮＦ−α等の炎症性サイトカインの誘導を行ない、それ自身も好中球の誘導能を持つサイトカインである。したがって、栄養組成物の投与によってＩＬ−６及びＩＬ−１ａの量が減少すれば、炎症が抑制されていることが示される。
結果を表５に示す。
【００４８】
【表５】
【００４９】
表５に示される結果から明らかなように、全アミノ酸混合物を投与した組成物Ａと比較して、非必須アミノ酸を含まず、必須アミノ酸のみからなる混合物を投与した組成物Ｂにおいては、ＩＬ-６及びＩＬ-１ａともに量が減少した。
このことから、非必須アミノ酸を含まず、必須アミノ酸のみを含む本発明のアミノ酸組成物を投与することにより、ＩＬ−６、ＩＬ−１ａの産生が抑制されることが分かる。
すなわち、本発明のアミノ酸組成物は、全アミノ酸組成物に比べて、炎症性疾患の炎症抑制に非常に有効であることが判明した。
【００５０】
（実施例１）
（ヒトの必須アミノ酸組成物を有効成分とする散剤の製造）
市販のＬ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、塩酸Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−バリン（協和発酵株式会社製）を入手した。
必須アミノ酸の組成比は、Heine WE, Klein PD, Reeds PJ. et.al.(1991)The importance of alpha-lactalbumin in infant nutrition. 121(3):277-83.に記載の乳ホエイタンパク質のアミノ酸組成比に基づき、正味のアミノ酸量として（フリーのアミノ酸として、すなわち塩のものはその分を差し引いて）、ヒスチジン３．７重量％、イソロイシン１１．５重量％、ロイシン、１８．８重量％、リジン１６．７重量％、メチオニン４．１重量％、システイン４．１重量％、フェニルアラニン６．５重量％、チロシン６．０重量％、スレオニン１３．６重量％、トリプトファン３．５重量％及びバリン１１．５重量％とした。これらの必須アミノ酸のみからなる混合物を調製し、散剤の有効成分として用いた。
慣用の散剤の調製方法により、上記成分を秤量後、予備混和し、粉砕機を使用して粉砕した後、再度混和を行ない、１０ｋｇのアミノ酸混合物を製造した。取得したアミノ酸混合物を秤量し、一包当たり５．０ｇとなるように分包し、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物を含有する散剤を得た。
【００５１】
（実施例２）
（ヒトの必須アミノ酸とアルギニンの混合物を有効成分とする散剤の製造）
塩酸Ｌ−アルギニン（協和発酵株式会社製）を添加したこと以外は、実施例１と同様の方法で、本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物を含有する散剤を調製した。
各アミノ酸の組成比は、正味のアミノ酸量として（フリーのアミノ酸として、すなわち塩のものはその分を差し引いて）、ヒスチジン３．５重量％、イソロイシン１１．０重量％、ロイシン１７．９重量％、リジン１５．９重量％、メチオニン３．９重量％、システイン３．９重量％、フェニルアラニン６．２重量％、チロシン５．７重量％、スレオニン１２．９重量％、トリプトファン３．４重量％、バリン１１．０重量％及びアルギニン４．８重量％とした。
【００５２】
（試験例３）
本試験例においては、通常の餌とともに投与した本発明のアミノ酸組成物がＴＮＢＳによる小腸炎の病状に与える影響について調べた。
使用するラットの種類や、試験の手順（ラットの馴化、ＴＮＢＳ感作、絶食、ＴＮＢＳ投与等）等は、試験例１と同様とした。
【００５３】
通常餌としては、ＣＲＦ−１（オリエンタル酵母工業株式会社製）を用いた。ＣＲＦ−１は、マウス、ラット、ハムスター等の実験動物に用いられる一般的な粉末飼料であり、１００ｇ中に下記の組成を有する。
水分 ７．８ｇ
粗蛋白質 ２２．４ｇ
粗脂肪 ５．７ｇ
粗灰分 ６．６ｇ
粗繊維 ３．１ｇ
可溶性無窒素物 ５４．５ｇ
このように、ＣＲＦ−１中には繊維や脂肪が多く含まれている上、窒素源がアミノ酸ではなく蛋白質として含まれており、本来、炎症性腸疾患モデルには適さない組成物（飼料）である。
【００５４】
次に、上記通常餌に添加したアミノ酸組成物について説明する。
表６に示す割合（フリーのアミノ酸として（重量％））でアミノ酸を含む、全アミノ酸組成物（１）、必須アミノ酸組成物（２）及び必須アミノ酸とアルギニンを含む組成物（３）を準備した。
上記各アミノ酸組成物（１）〜（３）を、表７に示すように通常餌（ＣＲＦ−１）に混合した。表７に示す混合餌Ａ〜Ｄにおけるアミノ酸の量は下記の通りである。
「混合餌Ａ」：混合餌全量に対して前記全アミノ酸組成物（１）を２０％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記全アミノ酸組成物（１）の量が２０ｇ（フリーのアミノ酸として）。
「混合餌Ｂ」：混合餌全量に対して前記必須アミノ酸組成物（２）を１５％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記必須アミノ酸組成物（２）の量が１５ｇ（フリーのアミノ酸として）。
「混合餌Ｃ」：混合餌全量に対して、前記必須アミノ酸組成物（２）を２０％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記必須アミノ酸組成物（２）の量が２０ｇ（フリーのアミノ酸として）。
「混合餌Ｄ」：混合餌全量に対して、前記（必須アミノ酸とアルギニン）組成物（３）を１５％添加したもの。すなわち、混合餌１００ｇ中の前記（必須アミノ酸とアルギニン）組成物（３）の量が１５ｇ（フリーのアミノ酸として）。
また、表７に示すアミノ酸を、実際に使用する際のアミノ酸の量として表すと表８に示す通りである。
通常餌、及び混合餌Ａ〜Ｄは、全てのエネルギー摂取量が等量となるようにマウスに給餌した。
【００５５】
【表６】
【００５６】
【表７】
【００５７】
【表８】
【００５８】
通常餌を与えたラット及び通常餌にアミノ酸組成物を加えた混合餌Ａ〜Ｄを与えたラットのそれぞれの肉眼スコア（１）〜（３）の他、潰瘍部分の面積（ｍｍ２；潰瘍長径×潰瘍短径）、腸管壁の厚み（ｍｍ；回盲弁から上流２０ｃｍの最大肥厚部位）及び病変部位を含む小腸重量（ｇ／回盲弁から上流２０ｃｍ）について、試験例１と同じ測定方法及び評価方法により、１群１０匹の平均値を求めた。結果を表９及び図２に示す。
【００５９】
【表９】
【００６０】
表９及び図２に示される結果から、通常餌を投与した通常餌群（コントロール）や全アミノ酸組成物を通常餌に加えて投与した混合餌Ａ群（比較例）と比較して、必須アミノ酸のみからなる組成物を通常餌に加えて投与した組成物Ｂ群及び組成物Ｃ群は、腸管の癒着や拡張、潰瘍などの病態が改善されていることが明らかとなった。
さらに、必須アミノ酸にさらにアルギニンを添加した組成物を通常餌に加えて投与した混合餌Ｄ群では、病態がさらに改善することが明らかとなった。
これらの結果から、アミノ酸として必須アミノ酸のみを含むアミノ酸組成物及び必須アミノ酸とアルギニンのみを含むアミノ酸組成物は、全アミノ酸組成物を用いた場合よりも、炎症性腸疾患に対する治療効果が優れていることが分かる。
また、必須アミノ酸を２０重量％含有する混合餌Ｃだけでなく、アミノ酸の量が組成物Ａより少ない混合餌Ｂにおいても、混合餌Ａより優れた治療効果が得られており、本発明のアミノ酸組成物の優れた抗炎症効果は、非必須アミノ酸を含まないことによって得られていることがわかる。
なお、試験例３における結果は、試験例１で得られた結果と比べて効果がそれほど顕著ではないが、これは通常餌の摂取に起因するものと考えられる。試験例３において用いた通常餌（ＣＲＦ−１）は、上記したように、炎症性腸疾患モデルには適さない脂肪や繊維を多く含む飼料であり、窒素源もアミノ酸ではなく蛋白質として含まれている。これらの脂肪や繊維、蛋白質は炎症性腸疾患の病態悪化をもたらす成分である。
しかしながら、本試験例では、通常餌のみを与えた通常餌群や全アミノ酸組成物を通常餌に添加した混合餌Ａよりも、混合餌Ｂ群、混合餌Ｃ群、混合餌Ｄ群の順で試験例１と同様、本発明の効果が増した。すなわち、本発明の組成物は、炎症性腸疾患に適さない飼料を摂取した動物においても、必須アミノ酸のみを含むアミノ酸組成物、もしくは必須アミノ酸とアルギニンのみを含むアミノ酸組成物の摂取により、炎症性腸疾患の改善効果をもたらすことが判明した。
【産業上の利用可能性】
【００６１】
本発明の炎症性疾患用アミノ酸組成物は、炎症性疾患の治療、予防及び寛解導入・維持に対して非常に有効である。また、既存の薬剤に比べて、副作用や薬剤耐性も問題もなく、経口投与が可能な上、患者の栄養改善を図ることもできる。さらに、本発明のアミノ酸組成物は、既存の医薬よりもコストが安いため、医療費の削減にも寄与し得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含有しないことを特徴とする炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項２】
ヒトの必須アミノ酸が、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンからなることを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項３】
ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％及びバリン２．３〜５３．６重量％を含有することを特徴とする請求項１または２に記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項４】
ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％及びバリン９．３〜１３．４重量％を含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項５】
さらに、アルギニンを含有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項６】
ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％、バリン２．３〜５３．６重量％及びアルギニン１．１〜６３．６重量％を含有することを特徴とする請求項１または５記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項７】
ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％、バリン９．３〜１３．４重量％及びアルギニン４．７〜１５．９重量％を含有することを特徴とする請求項１、５または６記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項８】
炎症性疾患が、炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項９】
炎症性腸疾患が、クローン病または潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項８記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項１０】
炎症性疾患の治療、予防、寛解の導入または維持のために使用できることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項１】
ヒトの必須アミノ酸で構成され、アルギニン以外のヒトの非必須アミノ酸を含有しないことを特徴とする炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項２】
ヒトの必須アミノ酸が、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、バリン、システイン及びチロシンからなることを特徴とする請求項１に記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項３】
ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％及びバリン２．３〜５３．６重量％を含有することを特徴とする請求項１または２に記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項４】
ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％及びバリン９．３〜１３．４重量％を含有することを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項５】
さらに、アルギニンを含有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項６】
ヒスチジン０．８〜２４．４重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン１．９〜５０．４重量％、ロイシン３．６〜７５．２重量％、リジン１．７〜６８．８重量％、メチオニン０．６〜３８．０重量％、システイン０．１〜４２．０重量％、フェニルアラニン０．１〜５５．６重量％、チロシン０．１〜４３．６重量％、スレオニン１．５〜５４．４重量％、トリプトファン０．４〜１６．４重量％、バリン２．３〜５３．６重量％及びアルギニン１．１〜６３．６重量％を含有することを特徴とする請求項１または５記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項７】
ヒスチジン３．５〜６．１重量％（フリーのアミノ酸として：以下同じ）、イソロイシン７．７〜１２．６重量％、ロイシン１４．７〜１８．８重量％、リジン６．９〜１７．２重量％、メチオニン２．４〜９．５重量％、システイン０．６〜１０．５重量％、フェニルアラニン６．１〜１３．９重量％、チロシン５．６〜１０．９重量％、スレオニン６．１〜１３．６重量％、トリプトファン１．９〜４．１重量％、バリン９．３〜１３．４重量％及びアルギニン４．７〜１５．９重量％を含有することを特徴とする請求項１、５または６記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項８】
炎症性疾患が、炎症性腸疾患であることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項９】
炎症性腸疾患が、クローン病または潰瘍性大腸炎であることを特徴とする請求項８記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【請求項１０】
炎症性疾患の治療、予防、寛解の導入または維持のために使用できることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載の炎症性疾患用アミノ酸組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−２１４４５１（Ｐ２０１２−２１４４５１Ａ）
【公開日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−６７０９３（Ｐ２０１２−６７０９３）
【出願日】平成２４年３月２３日（２０１２．３．２３）
【出願人】（５０２１３８３５９）イーエヌ大塚製薬株式会社 (56)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１１月８日（２０１２．１１．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年３月２３日（２０１２．３．２３）
【出願人】（５０２１３８３５９）イーエヌ大塚製薬株式会社 (56)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]