物質の殺菌効果を試験するための方法および装置
洗浄サイクル後の洗濯物の微生物の付着の程度をチェックするための方法であり、規定の量の微生物生体を洗濯物と一緒に洗浄し、洗浄工程終了後にまだ生存している微生物の数を測定し、洗浄工程の効果または質を、微生物生体の開始時の量と洗浄工程後にまだ生存している微生物の量との差から測定することを特徴とする。この方法を実施するための装置はとりわけ容器（９０）を含んでおり、洗浄液はこの容器（９０）に進入できるが、微生物はこの容器から漏出できないように、微生物は保持されている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は物質の殺菌効果の試験方法、およびその方法を実施するための装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
この種の方法は、例えば殺菌剤、消毒剤、洗剤、洗浄成分等の殺菌効果を試験するために使用することが可能である。この種の方法は、ウィーンのウォルター・コラー大学教授によってZbl. Bakt. Hyg., I. Abt. Orig. B176, 463-471 (1982)に発表されている。この方法では細菌用キャリアを利用している。これらは汚染されたバチスト布であり、２枚の薄膜フィルタの間に封入されている。このシステムは灌流チャンバとして機能する。灌流チャンバは水と水に溶解している活性剤をシステムの内部に透過できるが、細菌がシステムから流出することは防止する。洗浄工程終了後、システム内でまだ生存している細菌の数を数える。この計数は、それに必要な手段を備えた実験施設でのみ利用可能な手段によってのみ、実行可能である。従来のプレートカウント法を用いたこのような研究の結果は１、２日後にしか入手できず、実用の目的には時間がかかりすぎる。最新の分析装置を使用して計数をより迅速にすることは可能であるが、こういった装置の配備には莫大な投資が必要となる。
【発明の開示】
【０００３】
本発明の目的は方法とこの方法を実施するための装置を提供するものであり、洗濯物に付着している微生物の程度についての情報、もしくは洗濯機で洗浄温度３０〜６０℃で１回洗浄した後の洗濯物の細菌汚染の程度（衛生状態）についての情報を得ることを可能とする。さらに、本方法および装置は、洗浄工程の質についての半定量的な情報も得られるような形で構成されるものとする。同時に、本方法および装置は、単純な形で操作可能であるように構成されるものとする。また、本方法はそういった研究の結果が可能な限り早く入手できるように構成されるものとする。本方法を実施するための装置は、使い捨て製品として構成されるものとする。
【０００４】
導入部に記載のこの種の方法に関し、該目的は特許請求項１の特徴部によって定義される本発明により達成される。
【０００５】
また、該目的は特許請求項８の特徴部によって定義される装置を使用して本発明により達成される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下に、本発明の実施例を添付の図面を参照してより詳細に説明する。
図１は、物質１の殺菌効果を試験するための本発明の方法の手順を図式化したものである。この方法においては、既定もしくは規定の数の微生物生体を、試験対象である物質の作用にある特定の時間にわたって曝露する。該作用時間が終了した後、まだ生存している微生物の数を数え、このまだ生きている微生物の数から試験した物質の殺菌効果を導き出す。試験対象物質の作用に曝露する前に、微生物生体は液体中にいれられ、懸濁液を生成する。この液体は栄養溶液または生理食塩水であることが好都合である。試験対象物質は、溶液状もしくは懸濁液状で試験工程に提供されることが好都合である。また、これらは以下の記載において物質液８８とも称される。
【０００７】
また、本発明の方法を実施するための装置は、とりわけ槽８５（図１）を含み、その中で試験法を行う。また、この試験槽は物質液８８を収容している。洗浄工程の成分を試験する場合、例えば、洗濯機の洗浄槽が試験槽８５、洗浄液が物質液８８となる。また、本発明の装置は容器９０（図１、３、４）を含み、試験微生物、特には規定の量の微生物を収容するために使用される。このような容器９０は、モニター槽と称される場合もある。
【０００８】
微生物容器またはモニター槽９０は、中空の下部９１と基本的に平坦な上部９２とを含む。図３および４で図示の例において、容器９０のこれらの構成部品９１および９２は円形の輪郭を有する。微生物は液体９８に浮遊しており、液体９８は容器９０の下部９１の内側に位置している。すでに記載したように、この液体は生理食塩水であることが好都合である。試験対象生物を収容するために使用する容器９０の内部は、少なくとも１ｍｌの容量を有していなくてはならない。
【０００９】
容器下部９１の上端部の外側にはネジ山９３が設けられている。蓋９２は、円盤型の本体８９を含む。つば９４は短い円筒形スリーブ状をしており、容器の蓋９２のこの円盤型本体８９の縁部から垂れ下がっている。この円筒形スリーブ９４の内表面にもネジ山９３が形成されているため、蓋９２を下部９１にネジ止めすることが可能である。蓋９２の円盤型本体８９には穴９５が形成されており、物質と微生物との相互作用中、物質液はここを通って容器９０の内部９８に進入することができる。
【００１０】
前述の相互作用中、試験微生物は中空の容器下部９１の内部９８内に封入され続けてなくてはならず、そうすることで試験結果が損なわれることがない。半透膜９６は蓋９２のプレート型本体８９の下面全体、従って蓋９２のプレート型本体８９の穴９５も覆っており、蓋９２のプレート型本体８９の下面もしくは内側に取り付けられている。半透膜９６は、相互作用中に液状物質がモニター槽９０の内部９８に進入し微生物と相互作用できるようにと構成されている。しかしながら、半透膜９６は試験微生物に対して不透性であるようにも構成されており、そのため微生物は蓋９２の穴９５を通って容器９０から漏出することは出来ない。
【００１１】
試験微生物が容器９０の下部９１と蓋９２との間の隙間を通って、容器下部９１内の窪みから漏出できないように、つば９４が蓋９２の円盤状本体８９と接する、蓋９２のコーナー部には密閉リング９７が配置されている。よって、密閉リング９７は蓋９２の円盤状本体８９と下部９１の壁部の上端部との間で圧縮されて、ネジ部９３の間の隙間は微生物に対して密閉効果を発揮する。
【００１２】
また、容器９０の内部に活性ユニットを設置することも想定でき、灌流チャンバ（図示せず）として構成される。この灌流チャンバは試験微生物用キャリアを含み、微生物は灌流チャンバ内に封入されている。さらに、灌流チャンバは前述の細孔を有する半透膜９６を含んでおり、キャリア上に適用された試験対象生物を覆う。
【００１３】
例えば、以下の細菌を本発明の方法において試験微生物として使用してもよい。
大腸菌(Escherichia coli)
カンジダ・グラブラタ(Candida glabrata)
エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)
エンテロコッカス・フェカーリス(Enterococcus faecalis)
表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)
枯草菌(Bacillus subtilis)
【００１４】
純粋培地中の規定の量の微生物生体もしくは試験細菌生体を容器９０内に入れ、この容器９０を続いて閉鎖する。図１の場合、これはエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)を約１０８含む懸濁液である。モニター槽９０の灌流チャンバ９９内には、微生物を１種類のみ、封入する。モニター槽９０を試験槽８５内に入れ、モニター槽９０内に封入された微生物は物質液８８の作用に曝露される。試験液８８と微生物９８との相互作用中、試験槽８５を動かす、例えば攪拌してもよく、試験槽８５内部の温度はその変動が所望のプロファイルを含むように変更してもよく、相互作用時間は臨機応変に変化させてもよい。
【００１５】
まだ生存している微生物の数に応じて試験微生物のデヒドロゲナーゼによって還元され有色生成物ホルマザンを生成するテトラゾリウム塩を、作用時間が経過した後、微生物の懸濁液９８に添加する。続いて、ホルマザンによる光学濃度を測定する。測定結果から、試験した物質の殺菌効果、従ってまた試験物質８８の作用時間を生き残った試験微生物の数が導き出される。
【００１６】
試験工程の開始時点で生存していた微生物の数は通常、既知である。これは、この数それ自体が選択されたもの、もしくは測定されたものだからである。試験工程終了後、相互作用を生き残った微生物の数を前述の測定法によって測定する。この検出は間接的な方法を伴う。つまり、試験工程に生き残ったこれらの微生物の代謝選択性を測定する。まだ生存している微生物のみを記録することが重要である。これは、生存している微生物のみが後に増殖可能であり、かつ健康上のリスクとなるからである。
【００１７】
測定を行うためにモニター槽９０を開放し、微生物懸濁液９８をモニター槽９０から取り出す。微生物懸濁液９８をキュベット８６（図１）に入れる。これは、光度計（図示せず）に設置可能なキュベット８６であってもよく、例えば、その容量は１．５ｍｌである。キュベットは液状の培地を収容していてもよい。この培地は、それ自体は既知の微生物用の栄養溶液である。
【００１８】
本方法の次の工程において、微生物懸濁液９８内の例えば洗剤の残留物を中和または除去することが可能な物質を、懸濁液に添加してもよい。このような物質は、不活性化物質とも称される場合がある。例えば、モニター槽９０からの２００μｌの生物９８に、栄養溶液と不活性化物質から成る約６００μｌの液体を加えてもよい。微生物９８をこの液体中に既定の時間、例えば１時間、既定の温度、例えば３７℃で維持する。
【００１９】
懸濁液をこのように前処理した後、もしくはこういった培養時間後、関連する洗浄サイクルの質の実際の評価となる本発明の問題の部分を行うことが出来る。この目的を達成するために、テトラゾリウム塩を懸濁液に添加する。生きている微生物は細菌酵素であるデヒドロゲナーゼを含有している。この酵素は、まだ生存している微生物の数に応じて、つまり懸濁液中の微生物生体の活性に応じて、テトラゾリウム塩を還元して有色生成物であるホルマザンを生成する。図２は、懸濁液９８内でまだ生存している微生物の数に応じて、テトラゾリウム塩が有色の生成物に還元される過程を示した概略図である。微生物の活性、および従って相互作用工程を生き残った微生物の数は、生成されたホルマザンの量と結果として得られる色の強度から求められる。
【００２０】
本発明の次の工程においては、ホルマザンによる光学濃度もしくは光強度を測定する。この測定は、光度計を用いて行ってもよい。光学濃度は、既定の波長、例えば４５０ｎｍで測定してもよい。試験工程を生き延びた微生物の数および試験物質の殺菌効果についての結論は、測定結果から導き出すことが可能である。
【００２１】
光学濃度の測定は、より正確な方法、特にはある特定の時間にわたってのホルマザンの増加量に基づいて行うことも可能である（図示せず）。懸濁液中の微生物をまず最初に第一の時間、例えば３０分間にわたって特定の温度、例えば３７℃で培養する。次に、光学濃度の第一測定を行う。その後、懸濁液中の微生物を引き続いて第二時間、例えば３０分間にわたって特定の温度、例えば３７℃で培養する。続いて、光学濃度の第二測定を行う。このようにして、ある特定の時間（例えば３０分）にわたってのホルマザンの増加量が測定可能である。光学濃度の向上は、細菌の活性または細菌の数に直接的に相関している。相互作用工程を生き残った微生物の数、および従って試験物質の殺菌効果についての結論が、これら２つの測定結果の差から導き出される。
【００２２】
洗浄成分を試験する場合、洗浄サイクル後の洗濯物に付着している細菌の程度もしくは、洗浄工程の衛生効果、つまり洗濯機８５での洗浄工程中における細菌数の低下を測定する必要がある。このような試験のために、容器９０は、洗浄工程中に著しいダメージを受けることなく洗濯機８５の内部に設置できるように構成されている。容器９０は機械的に非常に安定した材料から成り、機械的に加工可能、オートクレーブ対応（少なくとも＋１２１℃／１気圧）であり、耐洗濯機およびタンブラー仕様である。容器の内部の容量は少なくとも１〜１．５ｍｌでなくてはならず、サンプルもしくは試験材料を収容するために使用される。
【００２３】
モニター槽９０に既定もしくは規定の量の試験微生物９８の生体を充填し、このモニター槽９０を洗濯機８５内に洗濯物とともにいれ、洗浄サイクルにかける。これにより試験微生物９８は、洗濯物と同一の洗浄工程効果に曝露されることになる。洗濯機８５は、例えば、家庭用洗濯機であっても工業用洗濯機であってもよい。洗浄サイクル終了後、まだ生きている微生物の数を上述の測定法の１つによって測定する。洗浄工程、もしくは洗浄工程で使用した洗剤、洗浄成分、洗浄方法の効果もしくは質は、洗浄サイクルにかけた微生物生体の開始時の既定量と、洗浄サイクル後にまだ生存している微生物の量の差から導き出される。洗浄サイクル後もまだ生きている微生物が少なければ少ないほど洗浄サイクルの効果は高く、洗浄サイクル後の洗濯物の細菌の付着程度は低く、洗浄工程の衛生効果は大きい。
【００２４】
本発明の装置の第二の実施例が図５〜８に表されている。この装置は容器１を含み、中空の本体２を含むように設計されている。この容器本体２は、例えば、直平方六面体、立方体、球等であってもよい。図示した例においては、容器１の本体２は円盤状である。本発明の装置のこの実施例において、容器１の中空本体２は上部３および下部４を含み、容器１のハーフ部３、４とも称される場合がある。この実施例において、容器ハーフ部３、４のそれぞれの本体は円筒形の横面５を有した厚い円盤状である。容器ハーフ部３、４のそれぞれの本体は、さらに２つの互いに対向する円盤状の広表面６、７を互いに平行に含む。窪み８または９が容器ハーフ部３、４のそれぞれの広表面６、７に形成されている。容器ハーフ部３、４の１つの窪み８、９の深さは円盤状容器ハーフ部３、４の厚みより薄いため、特には、容器ハーフ部３、４のそれぞれにおける窪み８、９の底の間には仕切り壁１０がある。
【００２５】
円周領域において、容器ハーフ部３または４の１つの各窪み８および９は、環状端部１１によって囲まれている。この端部は、内部に側面３７を有する。仕切り壁１０は関連する円盤３または４の端部１１と一体化している。上述したように中空である容器ハーフ部３、４の環状端部１１の互いに対向するセクション１２および１３には、ねじを用いて容器ハーフ部３、４が互いに取り外し可能に連結可能なようにそれ自体は既知のネジ山が設けられている。このネジ山は、好ましくは、一回転半するだけでハウジング２を開閉できるように構成されている。
【００２６】
開口部１４は、各円盤状容器ハーフ部３、４における窪み８、９を流体的に互いに連結しており、関連する円盤３または４の仕切り壁１０に形成されている。図の場合において、これらの連結開口部１４は仕切り壁１０のスリットとして構成されており、仕切り壁１０の中心から放射線状に延びている。これらのスリット１４もしくはその代替物に加え、異なる形状の連結開口部１４を仕切り壁１０に形成してもよい。容器１の内部は、容器ハーフ部３および４において対向して開放された、内側に形成された窪み９によって郭成されている。該開口部１４は容器１の内部９をその周囲に、特には容器ハーフ部３および４の外側に位置する窪み８に連結している。
【００２７】
容器１の内部９は、少なくとも１〜１．５ｍｌの容積を有するべきであり、サンプル材料を収容するために使用される。本発明の装置の活性ユニットもしくは灌流チャンバ２０は内部９内に置かれる。この灌流チャンバ２０は、とりわけ、試験微生物用キャリア１５を含む。このキャリア１５は、例えば、紙片である。あるいは、キャリア１５は繊維材料、例えば綿から成る布として構成される。キャリア１５は、図示のケースにおいては円盤状をしており、例えば、上述の材料の１つから成り、この円盤は環状の縁部を有する。この円盤状キャリア１５の直径は、その縁部が、容器１の窪み９の実質的に円筒状の内壁３７に当たるような寸法になっている。この縁領域３７において、Ｏリング１６または１７がそれぞれキャリア１５の両側に位置している。これらのＯリング１６、１７の断面の直径は、Ｏリング１６および１７が、試験微生物用のキャリア１５と容器ハーフ部３、４における内部窪み９の底３５との間で圧縮されるような寸法に構成されているため、容器窪み９の円筒形内壁３７とキャリア１５の縁部との間を液体が流れることがない。
【００２８】
また、本発明の灌流チャンバ２０はディスク２１および２２を含み（図３）、いわゆる滅菌フィルタに通常使用される材料から成る。これらのフィルタの細孔径は、例えば、０．２〜０．４マイクロメーターである。滅菌フィルタは通常ニトロセルロースから成り、非常に脆い。よって、機械の振動で起こる類の機械的負荷下においては損傷を受ける危険性が高い。ディスク２１および２２は基本的にキャリア１５と同じ直径を有するため、容器１の内部９内に同様に格納可能である。フィルタディスク２１および２２は、試験微生物用キャリア１５に対してと同様に、実質的に互いに平行に位置している。
【００２９】
フィルタディスク２１および２２はそれぞれ試験微生物用キャリア１５の広表面側の１つに割り当てられている。図６に図示のケースにおいて、各フィルタディスク２１または２２は関連する容器ハーフ部３または４の内部窪み９の底３５とそこに取り付けられたＯリング１６または１７との間に位置している。この場合、フィルタディスク２１および２２のそれぞれは、容器ハーフ部３または４の各仕切り壁１０の内側または底３５に取り付けられており、よって容器１の内部９の仕切り壁１０において開口部１４を覆っている。また、フィルタディスク２１および２２のそれぞれが試験微生物用キャリア１５の広表面側の１つに直接接触しており、よってＯリング１６および１７が関連するフィルタディスク２１または２２の外側と関連する内部窪み９の底３５との間に位置することも想定可能である。
【００３０】
図８は、本発明の装置の第二の実施例の分解図である。上述したように、本発明の装置のこの第二の実施例は、洗濯機にいれることを意図したものである。
【００３１】
図９は本発明の装置の第三の実施例を示すものである。本発明の装置のこの実施例は、洗浄液またはその他の液体が本発明の装置内を流れるだけの場合に使用することが出来る。内部において、この第三の装置は、本発明の装置の第二の実施例と本質的に同様に構成されている。第二実施例における外側陥凹部もしくは窪み８の代わりに、第三の実施例の容器ハーフ部３または４のそれぞれには吐出口２４が設けられている。各吐出口２４は各容器ハーフ部３または４の内部９に流体的に連結されている。それ自体は既知の接管２５はそのねじをきった端部でもって各吐出口２４にネジ止めすることが可能である。接管２５の反対側の端部はチューブに差込接続できるように構成されており、図９によると、これを通して液体を装置に導入もしくは装置から排出することが可能である。
【００３２】
図１０は本発明の装置のさらに別の可能な実施例を示す。この装置の灌流チャンバ３０は、同様に、上述の微生物用キャリア１５を含む。しかしながら、このキャリア１５はこの灌流チャンバ３０のさらに別の部品であるところのスリーブ３１内に封入されている。スリーブ３１は基本的にはチューブ状をしている。透析チューブの製造に通常用いられる材料から成る。このケースにおいて、こういった透析チューブ３１は、可能な限り大きい細孔を有さなくてはならない。例えば再生セルロースから成るチューブ３１の最大細孔径は、５００００ダルトンである。よって、上述した滅菌フィルタに比べて、流体交換はこれらの薄膜を経由して著しく緩慢に行われる。こういった薄膜チューブ３１を使用する場合、微生物はキャリア１５上に粉末としてもしくは同様に液体に分散させた状態で置かれる。
【００３３】
チューブ３１はその端部領域、特にはキャリア１５から適切な位置において、細菌を密封する形で連結される。これは、例えば、クランプを用いて行ってもよい。細孔径が１２０００ダルトンではあるが、ＰＶＤＦから成る溶接可能な透析チューブ３１も使用可能である。さらに、このチューブには柔軟性がなく、セルロース薄膜チューブ３１のような重負荷には耐えることができない。さらに、図示したケースからわかるように、チューブ３１の端部は適切なコード３２で縛ることによって閉じられている。
【００３４】
チューブ３１の材料の強度は比較的低いため、チューブ３１は安定性のある材料から成る開放ハウジング３３内に配置されている。このハウジング３３は、大きなスリットもしくは穴を備えた箱状のプラスチック槽として構成されていてもよい。図示したケースにおいて、ハウジング３３は円筒の横面として構成されており、この円筒表面の端部は、洗浄液がハウジング３３を通って流れることができるように開放されている。このハウジング３３内に配置された該灌流チャンバ３０とともに、このハウジング３３を洗濯機等に入れる。ハウジング３３の底領域は開放されているため、洗浄液はハウジングを通って流れることができ、これによりスリーブ３１内のキャリア１５上の微生物にまで到達する。灌流チャンバ３０がハウジング３３から滑り落ちるのを防止するために、灌流チャンバ３０はハウジング３３の内部にそれ自体は既知の保持手段３４によって保持されている。前述のコード３２の、スリーブ３１を超えて延びる部分を保持手段３４として使用してもよく、その端部はハウジング３３の壁上にもしくは壁内に留め付けられている。
【００３５】
図１１は、本発明の装置５０の第五実施例の蓋５１の全体図である。図１２は、本発明の装置５０のこの第五実施例の下部５２の断面図である。断面図において、蓋５１の本体および下部５２の本体はＵ字型の断面を有する。蓋５１の横壁内側および下部５２の横壁外側には、上述した互いに対応するネジの半分が設けられているため、蓋５１を下部５２にネジ止めすることが出来る。蓋５１には上述した開口部１４が設けられている。図示したケースにおいて、細孔を有する半透膜５３は、キャリア５４上に支持されており、この構成は下部５２の窪み５５内部に位置している。薄膜５３は水および洗剤に対して透過性である。
【００３６】
図１３は、本発明の装置の第六実施例の側面図である。この実施例は、同様に下部６２に加えて蓋６１を含む。基本的に、蓋６１および下部６２は本装置の第五実施例の蓋５１と下部５２と同様に設計されている。
【００３７】
図１４は、図１３に図示の本発明の装置の実施例の下部６２の断面図である。この下部６２の内壁７３は、球状キャップ表面の形状を有している。球状キャップ底部の中心領域７４から下部６２の上端７５に向って延びるスリット型開口部１４が、こういった下部６２の壁に形成されている。放射線状に突出するつば７６が、下部６２の外側に球状キャップ底部７４とほぼ水平に成形されている。
【００３８】
図１５および１６は、蓋６１のさらに別の可能な実施例を示す。図１５は蓋６１の断面図である。図１６は、蓋６１を下から、もしくは内側から見た図である。底面６９に向って垂直かつ互いに平行に延びている穿孔６７は、底６６の表面全体に分散しており、蓋６１の底６６に形成されている。これらの穿孔６７は、蓋６１の外部広表面６８と底面６９との間に延びている。底面６９は平坦である。その内部にシール７１が位置しているところの環状溝７０は、底面６９の領域にのみ形成される。このシール７１は、Ｏリング状に構成してもよい。溝７０の直径は、蓋６１を下部６２上にネジ止めした場合、この溝７０の底が下部６２の上端部７５に面するような寸法に構成されている。結果として、環状シール７１も下部６２の上端部に面し、下部６２の上端部と溝７０の底との間で圧縮される。
【００３９】
この容器６０の内部７３内には、本装置の活性ユニットまたは灌流チャンバ８０がある。また、この灌流チャンバ８０は、とりわけ、ディスク８１を含み、いわゆる滅菌フィルタに通常使用される材料から成る。この滅菌フィルタの細孔径は、例えば、０．２〜０．４マイクロメーターである。通常、滅菌フィルタはニトロセルロースから成り、非常に脆い。よって、機械の振動で起こるような機械的負荷においては損傷を受ける危険性が高い。そのため、こういったディスク８１は、本発明の方法を実施する際、ここで開示の容器の１つに入れなくてはならない。
【００４０】
ディスク８１は、蓋６１の底部領域における内部と基本的に同じ直径を有しているため、ディスク８１を蓋６１の内部に格納することが可能である。その端部はシール７１と接触している。蓋６１を容器の下部６２にネジ止めした後、このディスク８１の端部はともに容器下部６２の上端部７５とシール７１との間で密閉するように圧迫される。灌流チャンバ８０はさらに試験微生物用のキャリアを含む。このキャリアは、上述したタイプの１つであってもよい。このキャリアは、容器６０の、球状キャップ型の内部７３に面しているディスク８１と同じ面に適用する。
【００４１】
欧州標準規格１２７６号によっても規定される、以下の試験用細菌が実験室での洗浄試験によく使用される。
黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)
大腸菌(Escherichia coli)
緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)
エンテロコッカス・ヒラエ(Enterococcus hirae)
【００４２】
欧州標準規格１２７６号によって規定されてはいないが、以下の試験用細菌が実験室での洗浄試験によく使用される。
エンテロコッカス・フェカーリス(Enterococcus faecalis(Streptococcus faecalis))
エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)
カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)
毛瘡白癬菌(Trichophyton mentagrophytes)
【００４３】
本方法においては、規定の量の試験用細菌の微生物生体を純粋培地に入れたものを、キャリア上に置く。使用する試験用細菌は液体中に浮遊させても、粉末状であってもよい。液体の液滴もしくは既定の量の粉末をキャリア上に置く。洗浄工程にかける前に、微生物をキャリア上に固定させてもよい。これは、例えばアルギン酸ゲル等のゲルを用いて行ってもよい。細菌は該ゲルによって布片上にしっかりと付着されるため、キャリア上に固定されたままになる。さらに、例えばフリーズドライによって乾燥させることで、洗浄工程にかける前に微生物を保護もしくは安定化してもよい。
【００４４】
このようにして準備したキャリアを灌流チャンバ内に細菌を密封する形で閉鎖する。灌流チャンバには微生物を１種類だけ封入する。灌流チャンバは、微生物は灌流チャンバ外に漏出することは出来ないが、洗浄液は微生物と接触できるような漏れ防止構造となっている。灌流チャンバを容器内に設置すると、微生物は従って容器内に封入される。洗濯物と一緒に容器を家庭用洗濯機に入れる。灌流チャンバ３０が上述のチューブとして構成されている場合、まずチューブをハウジング３３内に取付け、その後、ハウジング３３を洗濯物と一緒に家庭用洗濯機内に入れ、洗濯物と一緒に洗浄する。
【００４５】
洗浄工程終了後、キャリアを容器の灌流チャンバから取り出し、洗浄工程終了後にまだ生存している微生物の数を測定する。洗浄工程の効果もしくは質は、微生物生体の開始時の数と、洗浄工程後にまだ生存している微生物の数との差から導き出される。
【００４６】
洗浄後の検出中、生きている細胞のみを記録することが重要である。これは、生存している微生物のみが後に増殖可能であり、かつ健康上のリスクとなるからである。微生物用にキャリア、例えば丸い布片を使用する場合、このキャリアをまずケージもしくは容器から取り出し、生理食塩水で洗浄する。死亡率は、洗浄工程もしくは洗浄サイクル直後に、例えば変色指示薬を用いて読み取ることが可能である。この検出は、比較的単純な方法で行うことが可能である。あるいは、死亡率は、ＡＴＰ活性を用いて測定してもよい。ＡＴＰの測定は、液体を直接的に測定もしくはルミノメーターで綿棒を使用することで行う。
【００４７】
洗浄工程で生き残った微生物の数は、いわゆる遺伝子プローブを用いて測定してもよい。遺伝子プローブは、例えばVIT-Vermicon社によって製造されている。さらに、生存している微生物はその他の方法、例えばインピーダンス（BioMerieux社またはSyLab社製）、光電気的計数（FOSS社製）、固相サイトメトリ（ChemScan社製）、免疫磁気分離法／IMS（DYNAL社製）によって測定することが出来る。
【００４８】
原理上は、液状のサンプルを寒天プレート上に乗せて培養することも可能である。しかしながら、この方法では結果が出るのに２、３日かかる。一方、そういった評価法の結果は正確である。この方法の人件費は非常に高い。
【００４９】
洗浄工程の質は、洗浄工程開始時に生存していた微生物数と、洗浄工程終了後にまだ生存していた微生物の数との比に基づいて測定する。こういった評価は、コンピュータで適切なプログラムを用いて行うことも可能である。
【００５０】
多くの製造業者が、微生物を効果的に退治することを意図して漂白および/または同時殺菌作用を備えた物質を洗剤に添加する。これらの製造業者は、少なくとも自分達のために、こういった添加物が洗浄中に実際に細菌を殺すのかどうか、またはどの程度まで細菌が死ぬのかを知りたいと考えている。本発明の方法および装置は、企業の内部統制のために、洗浄工程の効果に加えて、洗剤に使用した物質の効果を可能な限り単純かつ迅速な形でチェックすることを可能にするようなものでなくてはならない。こういった方法および装置は、クリーニング工場および関連する研究施設だけでなく、洗剤、漂白および洗濯機製造業者が使用してもよい。また、想定した試験用洗濯物は、例えば、６０℃より高い温度で洗うことのできないいずれの繊維材料であってもよい。これらは、例えば、変色防止をしていない繊維、ウール、絹、合成繊維等である。さらに、この方法および装置は、クリーニング工場における洗浄工程の微生物学的観点からの評価に加え、機械、プログラム、洗剤等の新製品の微生物学的な評価に適している。最低限の準備作業のみで、本発明の装置は、時には洗濯機の洗浄サイクルにおける細菌死亡率についての半定量的な情報さえも、数時間で提供することが可能である。さらに、本発明の装置は実際の洗浄工程および温度、時間、洗剤、機械的負荷等の対応する影響因子についての迅速な評価を可能とする。洗浄工程中に機械からサンプルを採取する必要がない。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】本発明の方法の図式である。
【図２】本方法で使用する物質の一部の機能性を表す。
【図３】モニター槽の第一の実施例の垂直断面図であり、本方法を実施するための装置の部品の１つを表す。
【図４】図３の槽またはチャンバの平面図である。
【図５】稼動可能な状態の、槽の第二の実施例の全体図である。
【図６】図５の槽の概略垂直断面図である。
【図７】図５の装置の中心部の概略全体図である。
【図８】本発明の装置の第二の実施例の主要部の分解図である。
【図９】本発明の装置の第三の実施例の分解図である。
【図１０】本発明の装置の第四の実施例の概略図である。
【図１１】本発明の装置の第五の実施例の蓋の全体図である。
【図１２】本発明の装置の第五の実施例の下部の垂直断面図である。
【図１３】本発明の装置の第六の実施例の側面図である。
【図１４】図１３に図示の本発明の装置の実施例の下部の垂直断面図である。
【図１５】図１３に図示の本発明の装置の実施例の蓋の垂直断面図である。
【図１６】図１５の蓋を下からもしくは内部から見た図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は物質の殺菌効果の試験方法、およびその方法を実施するための装置に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
この種の方法は、例えば殺菌剤、消毒剤、洗剤、洗浄成分等の殺菌効果を試験するために使用することが可能である。この種の方法は、ウィーンのウォルター・コラー大学教授によってZbl. Bakt. Hyg., I. Abt. Orig. B176, 463-471 (1982)に発表されている。この方法では細菌用キャリアを利用している。これらは汚染されたバチスト布であり、２枚の薄膜フィルタの間に封入されている。このシステムは灌流チャンバとして機能する。灌流チャンバは水と水に溶解している活性剤をシステムの内部に透過できるが、細菌がシステムから流出することは防止する。洗浄工程終了後、システム内でまだ生存している細菌の数を数える。この計数は、それに必要な手段を備えた実験施設でのみ利用可能な手段によってのみ、実行可能である。従来のプレートカウント法を用いたこのような研究の結果は１、２日後にしか入手できず、実用の目的には時間がかかりすぎる。最新の分析装置を使用して計数をより迅速にすることは可能であるが、こういった装置の配備には莫大な投資が必要となる。
【発明の開示】
【０００３】
本発明の目的は方法とこの方法を実施するための装置を提供するものであり、洗濯物に付着している微生物の程度についての情報、もしくは洗濯機で洗浄温度３０〜６０℃で１回洗浄した後の洗濯物の細菌汚染の程度（衛生状態）についての情報を得ることを可能とする。さらに、本方法および装置は、洗浄工程の質についての半定量的な情報も得られるような形で構成されるものとする。同時に、本方法および装置は、単純な形で操作可能であるように構成されるものとする。また、本方法はそういった研究の結果が可能な限り早く入手できるように構成されるものとする。本方法を実施するための装置は、使い捨て製品として構成されるものとする。
【０００４】
導入部に記載のこの種の方法に関し、該目的は特許請求項１の特徴部によって定義される本発明により達成される。
【０００５】
また、該目的は特許請求項８の特徴部によって定義される装置を使用して本発明により達成される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下に、本発明の実施例を添付の図面を参照してより詳細に説明する。
図１は、物質１の殺菌効果を試験するための本発明の方法の手順を図式化したものである。この方法においては、既定もしくは規定の数の微生物生体を、試験対象である物質の作用にある特定の時間にわたって曝露する。該作用時間が終了した後、まだ生存している微生物の数を数え、このまだ生きている微生物の数から試験した物質の殺菌効果を導き出す。試験対象物質の作用に曝露する前に、微生物生体は液体中にいれられ、懸濁液を生成する。この液体は栄養溶液または生理食塩水であることが好都合である。試験対象物質は、溶液状もしくは懸濁液状で試験工程に提供されることが好都合である。また、これらは以下の記載において物質液８８とも称される。
【０００７】
また、本発明の方法を実施するための装置は、とりわけ槽８５（図１）を含み、その中で試験法を行う。また、この試験槽は物質液８８を収容している。洗浄工程の成分を試験する場合、例えば、洗濯機の洗浄槽が試験槽８５、洗浄液が物質液８８となる。また、本発明の装置は容器９０（図１、３、４）を含み、試験微生物、特には規定の量の微生物を収容するために使用される。このような容器９０は、モニター槽と称される場合もある。
【０００８】
微生物容器またはモニター槽９０は、中空の下部９１と基本的に平坦な上部９２とを含む。図３および４で図示の例において、容器９０のこれらの構成部品９１および９２は円形の輪郭を有する。微生物は液体９８に浮遊しており、液体９８は容器９０の下部９１の内側に位置している。すでに記載したように、この液体は生理食塩水であることが好都合である。試験対象生物を収容するために使用する容器９０の内部は、少なくとも１ｍｌの容量を有していなくてはならない。
【０００９】
容器下部９１の上端部の外側にはネジ山９３が設けられている。蓋９２は、円盤型の本体８９を含む。つば９４は短い円筒形スリーブ状をしており、容器の蓋９２のこの円盤型本体８９の縁部から垂れ下がっている。この円筒形スリーブ９４の内表面にもネジ山９３が形成されているため、蓋９２を下部９１にネジ止めすることが可能である。蓋９２の円盤型本体８９には穴９５が形成されており、物質と微生物との相互作用中、物質液はここを通って容器９０の内部９８に進入することができる。
【００１０】
前述の相互作用中、試験微生物は中空の容器下部９１の内部９８内に封入され続けてなくてはならず、そうすることで試験結果が損なわれることがない。半透膜９６は蓋９２のプレート型本体８９の下面全体、従って蓋９２のプレート型本体８９の穴９５も覆っており、蓋９２のプレート型本体８９の下面もしくは内側に取り付けられている。半透膜９６は、相互作用中に液状物質がモニター槽９０の内部９８に進入し微生物と相互作用できるようにと構成されている。しかしながら、半透膜９６は試験微生物に対して不透性であるようにも構成されており、そのため微生物は蓋９２の穴９５を通って容器９０から漏出することは出来ない。
【００１１】
試験微生物が容器９０の下部９１と蓋９２との間の隙間を通って、容器下部９１内の窪みから漏出できないように、つば９４が蓋９２の円盤状本体８９と接する、蓋９２のコーナー部には密閉リング９７が配置されている。よって、密閉リング９７は蓋９２の円盤状本体８９と下部９１の壁部の上端部との間で圧縮されて、ネジ部９３の間の隙間は微生物に対して密閉効果を発揮する。
【００１２】
また、容器９０の内部に活性ユニットを設置することも想定でき、灌流チャンバ（図示せず）として構成される。この灌流チャンバは試験微生物用キャリアを含み、微生物は灌流チャンバ内に封入されている。さらに、灌流チャンバは前述の細孔を有する半透膜９６を含んでおり、キャリア上に適用された試験対象生物を覆う。
【００１３】
例えば、以下の細菌を本発明の方法において試験微生物として使用してもよい。
大腸菌(Escherichia coli)
カンジダ・グラブラタ(Candida glabrata)
エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)
エンテロコッカス・フェカーリス(Enterococcus faecalis)
表皮ブドウ球菌(Staphylococcus epidermidis)
枯草菌(Bacillus subtilis)
【００１４】
純粋培地中の規定の量の微生物生体もしくは試験細菌生体を容器９０内に入れ、この容器９０を続いて閉鎖する。図１の場合、これはエンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)を約１０８含む懸濁液である。モニター槽９０の灌流チャンバ９９内には、微生物を１種類のみ、封入する。モニター槽９０を試験槽８５内に入れ、モニター槽９０内に封入された微生物は物質液８８の作用に曝露される。試験液８８と微生物９８との相互作用中、試験槽８５を動かす、例えば攪拌してもよく、試験槽８５内部の温度はその変動が所望のプロファイルを含むように変更してもよく、相互作用時間は臨機応変に変化させてもよい。
【００１５】
まだ生存している微生物の数に応じて試験微生物のデヒドロゲナーゼによって還元され有色生成物ホルマザンを生成するテトラゾリウム塩を、作用時間が経過した後、微生物の懸濁液９８に添加する。続いて、ホルマザンによる光学濃度を測定する。測定結果から、試験した物質の殺菌効果、従ってまた試験物質８８の作用時間を生き残った試験微生物の数が導き出される。
【００１６】
試験工程の開始時点で生存していた微生物の数は通常、既知である。これは、この数それ自体が選択されたもの、もしくは測定されたものだからである。試験工程終了後、相互作用を生き残った微生物の数を前述の測定法によって測定する。この検出は間接的な方法を伴う。つまり、試験工程に生き残ったこれらの微生物の代謝選択性を測定する。まだ生存している微生物のみを記録することが重要である。これは、生存している微生物のみが後に増殖可能であり、かつ健康上のリスクとなるからである。
【００１７】
測定を行うためにモニター槽９０を開放し、微生物懸濁液９８をモニター槽９０から取り出す。微生物懸濁液９８をキュベット８６（図１）に入れる。これは、光度計（図示せず）に設置可能なキュベット８６であってもよく、例えば、その容量は１．５ｍｌである。キュベットは液状の培地を収容していてもよい。この培地は、それ自体は既知の微生物用の栄養溶液である。
【００１８】
本方法の次の工程において、微生物懸濁液９８内の例えば洗剤の残留物を中和または除去することが可能な物質を、懸濁液に添加してもよい。このような物質は、不活性化物質とも称される場合がある。例えば、モニター槽９０からの２００μｌの生物９８に、栄養溶液と不活性化物質から成る約６００μｌの液体を加えてもよい。微生物９８をこの液体中に既定の時間、例えば１時間、既定の温度、例えば３７℃で維持する。
【００１９】
懸濁液をこのように前処理した後、もしくはこういった培養時間後、関連する洗浄サイクルの質の実際の評価となる本発明の問題の部分を行うことが出来る。この目的を達成するために、テトラゾリウム塩を懸濁液に添加する。生きている微生物は細菌酵素であるデヒドロゲナーゼを含有している。この酵素は、まだ生存している微生物の数に応じて、つまり懸濁液中の微生物生体の活性に応じて、テトラゾリウム塩を還元して有色生成物であるホルマザンを生成する。図２は、懸濁液９８内でまだ生存している微生物の数に応じて、テトラゾリウム塩が有色の生成物に還元される過程を示した概略図である。微生物の活性、および従って相互作用工程を生き残った微生物の数は、生成されたホルマザンの量と結果として得られる色の強度から求められる。
【００２０】
本発明の次の工程においては、ホルマザンによる光学濃度もしくは光強度を測定する。この測定は、光度計を用いて行ってもよい。光学濃度は、既定の波長、例えば４５０ｎｍで測定してもよい。試験工程を生き延びた微生物の数および試験物質の殺菌効果についての結論は、測定結果から導き出すことが可能である。
【００２１】
光学濃度の測定は、より正確な方法、特にはある特定の時間にわたってのホルマザンの増加量に基づいて行うことも可能である（図示せず）。懸濁液中の微生物をまず最初に第一の時間、例えば３０分間にわたって特定の温度、例えば３７℃で培養する。次に、光学濃度の第一測定を行う。その後、懸濁液中の微生物を引き続いて第二時間、例えば３０分間にわたって特定の温度、例えば３７℃で培養する。続いて、光学濃度の第二測定を行う。このようにして、ある特定の時間（例えば３０分）にわたってのホルマザンの増加量が測定可能である。光学濃度の向上は、細菌の活性または細菌の数に直接的に相関している。相互作用工程を生き残った微生物の数、および従って試験物質の殺菌効果についての結論が、これら２つの測定結果の差から導き出される。
【００２２】
洗浄成分を試験する場合、洗浄サイクル後の洗濯物に付着している細菌の程度もしくは、洗浄工程の衛生効果、つまり洗濯機８５での洗浄工程中における細菌数の低下を測定する必要がある。このような試験のために、容器９０は、洗浄工程中に著しいダメージを受けることなく洗濯機８５の内部に設置できるように構成されている。容器９０は機械的に非常に安定した材料から成り、機械的に加工可能、オートクレーブ対応（少なくとも＋１２１℃／１気圧）であり、耐洗濯機およびタンブラー仕様である。容器の内部の容量は少なくとも１〜１．５ｍｌでなくてはならず、サンプルもしくは試験材料を収容するために使用される。
【００２３】
モニター槽９０に既定もしくは規定の量の試験微生物９８の生体を充填し、このモニター槽９０を洗濯機８５内に洗濯物とともにいれ、洗浄サイクルにかける。これにより試験微生物９８は、洗濯物と同一の洗浄工程効果に曝露されることになる。洗濯機８５は、例えば、家庭用洗濯機であっても工業用洗濯機であってもよい。洗浄サイクル終了後、まだ生きている微生物の数を上述の測定法の１つによって測定する。洗浄工程、もしくは洗浄工程で使用した洗剤、洗浄成分、洗浄方法の効果もしくは質は、洗浄サイクルにかけた微生物生体の開始時の既定量と、洗浄サイクル後にまだ生存している微生物の量の差から導き出される。洗浄サイクル後もまだ生きている微生物が少なければ少ないほど洗浄サイクルの効果は高く、洗浄サイクル後の洗濯物の細菌の付着程度は低く、洗浄工程の衛生効果は大きい。
【００２４】
本発明の装置の第二の実施例が図５〜８に表されている。この装置は容器１を含み、中空の本体２を含むように設計されている。この容器本体２は、例えば、直平方六面体、立方体、球等であってもよい。図示した例においては、容器１の本体２は円盤状である。本発明の装置のこの実施例において、容器１の中空本体２は上部３および下部４を含み、容器１のハーフ部３、４とも称される場合がある。この実施例において、容器ハーフ部３、４のそれぞれの本体は円筒形の横面５を有した厚い円盤状である。容器ハーフ部３、４のそれぞれの本体は、さらに２つの互いに対向する円盤状の広表面６、７を互いに平行に含む。窪み８または９が容器ハーフ部３、４のそれぞれの広表面６、７に形成されている。容器ハーフ部３、４の１つの窪み８、９の深さは円盤状容器ハーフ部３、４の厚みより薄いため、特には、容器ハーフ部３、４のそれぞれにおける窪み８、９の底の間には仕切り壁１０がある。
【００２５】
円周領域において、容器ハーフ部３または４の１つの各窪み８および９は、環状端部１１によって囲まれている。この端部は、内部に側面３７を有する。仕切り壁１０は関連する円盤３または４の端部１１と一体化している。上述したように中空である容器ハーフ部３、４の環状端部１１の互いに対向するセクション１２および１３には、ねじを用いて容器ハーフ部３、４が互いに取り外し可能に連結可能なようにそれ自体は既知のネジ山が設けられている。このネジ山は、好ましくは、一回転半するだけでハウジング２を開閉できるように構成されている。
【００２６】
開口部１４は、各円盤状容器ハーフ部３、４における窪み８、９を流体的に互いに連結しており、関連する円盤３または４の仕切り壁１０に形成されている。図の場合において、これらの連結開口部１４は仕切り壁１０のスリットとして構成されており、仕切り壁１０の中心から放射線状に延びている。これらのスリット１４もしくはその代替物に加え、異なる形状の連結開口部１４を仕切り壁１０に形成してもよい。容器１の内部は、容器ハーフ部３および４において対向して開放された、内側に形成された窪み９によって郭成されている。該開口部１４は容器１の内部９をその周囲に、特には容器ハーフ部３および４の外側に位置する窪み８に連結している。
【００２７】
容器１の内部９は、少なくとも１〜１．５ｍｌの容積を有するべきであり、サンプル材料を収容するために使用される。本発明の装置の活性ユニットもしくは灌流チャンバ２０は内部９内に置かれる。この灌流チャンバ２０は、とりわけ、試験微生物用キャリア１５を含む。このキャリア１５は、例えば、紙片である。あるいは、キャリア１５は繊維材料、例えば綿から成る布として構成される。キャリア１５は、図示のケースにおいては円盤状をしており、例えば、上述の材料の１つから成り、この円盤は環状の縁部を有する。この円盤状キャリア１５の直径は、その縁部が、容器１の窪み９の実質的に円筒状の内壁３７に当たるような寸法になっている。この縁領域３７において、Ｏリング１６または１７がそれぞれキャリア１５の両側に位置している。これらのＯリング１６、１７の断面の直径は、Ｏリング１６および１７が、試験微生物用のキャリア１５と容器ハーフ部３、４における内部窪み９の底３５との間で圧縮されるような寸法に構成されているため、容器窪み９の円筒形内壁３７とキャリア１５の縁部との間を液体が流れることがない。
【００２８】
また、本発明の灌流チャンバ２０はディスク２１および２２を含み（図３）、いわゆる滅菌フィルタに通常使用される材料から成る。これらのフィルタの細孔径は、例えば、０．２〜０．４マイクロメーターである。滅菌フィルタは通常ニトロセルロースから成り、非常に脆い。よって、機械の振動で起こる類の機械的負荷下においては損傷を受ける危険性が高い。ディスク２１および２２は基本的にキャリア１５と同じ直径を有するため、容器１の内部９内に同様に格納可能である。フィルタディスク２１および２２は、試験微生物用キャリア１５に対してと同様に、実質的に互いに平行に位置している。
【００２９】
フィルタディスク２１および２２はそれぞれ試験微生物用キャリア１５の広表面側の１つに割り当てられている。図６に図示のケースにおいて、各フィルタディスク２１または２２は関連する容器ハーフ部３または４の内部窪み９の底３５とそこに取り付けられたＯリング１６または１７との間に位置している。この場合、フィルタディスク２１および２２のそれぞれは、容器ハーフ部３または４の各仕切り壁１０の内側または底３５に取り付けられており、よって容器１の内部９の仕切り壁１０において開口部１４を覆っている。また、フィルタディスク２１および２２のそれぞれが試験微生物用キャリア１５の広表面側の１つに直接接触しており、よってＯリング１６および１７が関連するフィルタディスク２１または２２の外側と関連する内部窪み９の底３５との間に位置することも想定可能である。
【００３０】
図８は、本発明の装置の第二の実施例の分解図である。上述したように、本発明の装置のこの第二の実施例は、洗濯機にいれることを意図したものである。
【００３１】
図９は本発明の装置の第三の実施例を示すものである。本発明の装置のこの実施例は、洗浄液またはその他の液体が本発明の装置内を流れるだけの場合に使用することが出来る。内部において、この第三の装置は、本発明の装置の第二の実施例と本質的に同様に構成されている。第二実施例における外側陥凹部もしくは窪み８の代わりに、第三の実施例の容器ハーフ部３または４のそれぞれには吐出口２４が設けられている。各吐出口２４は各容器ハーフ部３または４の内部９に流体的に連結されている。それ自体は既知の接管２５はそのねじをきった端部でもって各吐出口２４にネジ止めすることが可能である。接管２５の反対側の端部はチューブに差込接続できるように構成されており、図９によると、これを通して液体を装置に導入もしくは装置から排出することが可能である。
【００３２】
図１０は本発明の装置のさらに別の可能な実施例を示す。この装置の灌流チャンバ３０は、同様に、上述の微生物用キャリア１５を含む。しかしながら、このキャリア１５はこの灌流チャンバ３０のさらに別の部品であるところのスリーブ３１内に封入されている。スリーブ３１は基本的にはチューブ状をしている。透析チューブの製造に通常用いられる材料から成る。このケースにおいて、こういった透析チューブ３１は、可能な限り大きい細孔を有さなくてはならない。例えば再生セルロースから成るチューブ３１の最大細孔径は、５００００ダルトンである。よって、上述した滅菌フィルタに比べて、流体交換はこれらの薄膜を経由して著しく緩慢に行われる。こういった薄膜チューブ３１を使用する場合、微生物はキャリア１５上に粉末としてもしくは同様に液体に分散させた状態で置かれる。
【００３３】
チューブ３１はその端部領域、特にはキャリア１５から適切な位置において、細菌を密封する形で連結される。これは、例えば、クランプを用いて行ってもよい。細孔径が１２０００ダルトンではあるが、ＰＶＤＦから成る溶接可能な透析チューブ３１も使用可能である。さらに、このチューブには柔軟性がなく、セルロース薄膜チューブ３１のような重負荷には耐えることができない。さらに、図示したケースからわかるように、チューブ３１の端部は適切なコード３２で縛ることによって閉じられている。
【００３４】
チューブ３１の材料の強度は比較的低いため、チューブ３１は安定性のある材料から成る開放ハウジング３３内に配置されている。このハウジング３３は、大きなスリットもしくは穴を備えた箱状のプラスチック槽として構成されていてもよい。図示したケースにおいて、ハウジング３３は円筒の横面として構成されており、この円筒表面の端部は、洗浄液がハウジング３３を通って流れることができるように開放されている。このハウジング３３内に配置された該灌流チャンバ３０とともに、このハウジング３３を洗濯機等に入れる。ハウジング３３の底領域は開放されているため、洗浄液はハウジングを通って流れることができ、これによりスリーブ３１内のキャリア１５上の微生物にまで到達する。灌流チャンバ３０がハウジング３３から滑り落ちるのを防止するために、灌流チャンバ３０はハウジング３３の内部にそれ自体は既知の保持手段３４によって保持されている。前述のコード３２の、スリーブ３１を超えて延びる部分を保持手段３４として使用してもよく、その端部はハウジング３３の壁上にもしくは壁内に留め付けられている。
【００３５】
図１１は、本発明の装置５０の第五実施例の蓋５１の全体図である。図１２は、本発明の装置５０のこの第五実施例の下部５２の断面図である。断面図において、蓋５１の本体および下部５２の本体はＵ字型の断面を有する。蓋５１の横壁内側および下部５２の横壁外側には、上述した互いに対応するネジの半分が設けられているため、蓋５１を下部５２にネジ止めすることが出来る。蓋５１には上述した開口部１４が設けられている。図示したケースにおいて、細孔を有する半透膜５３は、キャリア５４上に支持されており、この構成は下部５２の窪み５５内部に位置している。薄膜５３は水および洗剤に対して透過性である。
【００３６】
図１３は、本発明の装置の第六実施例の側面図である。この実施例は、同様に下部６２に加えて蓋６１を含む。基本的に、蓋６１および下部６２は本装置の第五実施例の蓋５１と下部５２と同様に設計されている。
【００３７】
図１４は、図１３に図示の本発明の装置の実施例の下部６２の断面図である。この下部６２の内壁７３は、球状キャップ表面の形状を有している。球状キャップ底部の中心領域７４から下部６２の上端７５に向って延びるスリット型開口部１４が、こういった下部６２の壁に形成されている。放射線状に突出するつば７６が、下部６２の外側に球状キャップ底部７４とほぼ水平に成形されている。
【００３８】
図１５および１６は、蓋６１のさらに別の可能な実施例を示す。図１５は蓋６１の断面図である。図１６は、蓋６１を下から、もしくは内側から見た図である。底面６９に向って垂直かつ互いに平行に延びている穿孔６７は、底６６の表面全体に分散しており、蓋６１の底６６に形成されている。これらの穿孔６７は、蓋６１の外部広表面６８と底面６９との間に延びている。底面６９は平坦である。その内部にシール７１が位置しているところの環状溝７０は、底面６９の領域にのみ形成される。このシール７１は、Ｏリング状に構成してもよい。溝７０の直径は、蓋６１を下部６２上にネジ止めした場合、この溝７０の底が下部６２の上端部７５に面するような寸法に構成されている。結果として、環状シール７１も下部６２の上端部に面し、下部６２の上端部と溝７０の底との間で圧縮される。
【００３９】
この容器６０の内部７３内には、本装置の活性ユニットまたは灌流チャンバ８０がある。また、この灌流チャンバ８０は、とりわけ、ディスク８１を含み、いわゆる滅菌フィルタに通常使用される材料から成る。この滅菌フィルタの細孔径は、例えば、０．２〜０．４マイクロメーターである。通常、滅菌フィルタはニトロセルロースから成り、非常に脆い。よって、機械の振動で起こるような機械的負荷においては損傷を受ける危険性が高い。そのため、こういったディスク８１は、本発明の方法を実施する際、ここで開示の容器の１つに入れなくてはならない。
【００４０】
ディスク８１は、蓋６１の底部領域における内部と基本的に同じ直径を有しているため、ディスク８１を蓋６１の内部に格納することが可能である。その端部はシール７１と接触している。蓋６１を容器の下部６２にネジ止めした後、このディスク８１の端部はともに容器下部６２の上端部７５とシール７１との間で密閉するように圧迫される。灌流チャンバ８０はさらに試験微生物用のキャリアを含む。このキャリアは、上述したタイプの１つであってもよい。このキャリアは、容器６０の、球状キャップ型の内部７３に面しているディスク８１と同じ面に適用する。
【００４１】
欧州標準規格１２７６号によっても規定される、以下の試験用細菌が実験室での洗浄試験によく使用される。
黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)
大腸菌(Escherichia coli)
緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)
エンテロコッカス・ヒラエ(Enterococcus hirae)
【００４２】
欧州標準規格１２７６号によって規定されてはいないが、以下の試験用細菌が実験室での洗浄試験によく使用される。
エンテロコッカス・フェカーリス(Enterococcus faecalis(Streptococcus faecalis))
エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)
カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)
毛瘡白癬菌(Trichophyton mentagrophytes)
【００４３】
本方法においては、規定の量の試験用細菌の微生物生体を純粋培地に入れたものを、キャリア上に置く。使用する試験用細菌は液体中に浮遊させても、粉末状であってもよい。液体の液滴もしくは既定の量の粉末をキャリア上に置く。洗浄工程にかける前に、微生物をキャリア上に固定させてもよい。これは、例えばアルギン酸ゲル等のゲルを用いて行ってもよい。細菌は該ゲルによって布片上にしっかりと付着されるため、キャリア上に固定されたままになる。さらに、例えばフリーズドライによって乾燥させることで、洗浄工程にかける前に微生物を保護もしくは安定化してもよい。
【００４４】
このようにして準備したキャリアを灌流チャンバ内に細菌を密封する形で閉鎖する。灌流チャンバには微生物を１種類だけ封入する。灌流チャンバは、微生物は灌流チャンバ外に漏出することは出来ないが、洗浄液は微生物と接触できるような漏れ防止構造となっている。灌流チャンバを容器内に設置すると、微生物は従って容器内に封入される。洗濯物と一緒に容器を家庭用洗濯機に入れる。灌流チャンバ３０が上述のチューブとして構成されている場合、まずチューブをハウジング３３内に取付け、その後、ハウジング３３を洗濯物と一緒に家庭用洗濯機内に入れ、洗濯物と一緒に洗浄する。
【００４５】
洗浄工程終了後、キャリアを容器の灌流チャンバから取り出し、洗浄工程終了後にまだ生存している微生物の数を測定する。洗浄工程の効果もしくは質は、微生物生体の開始時の数と、洗浄工程後にまだ生存している微生物の数との差から導き出される。
【００４６】
洗浄後の検出中、生きている細胞のみを記録することが重要である。これは、生存している微生物のみが後に増殖可能であり、かつ健康上のリスクとなるからである。微生物用にキャリア、例えば丸い布片を使用する場合、このキャリアをまずケージもしくは容器から取り出し、生理食塩水で洗浄する。死亡率は、洗浄工程もしくは洗浄サイクル直後に、例えば変色指示薬を用いて読み取ることが可能である。この検出は、比較的単純な方法で行うことが可能である。あるいは、死亡率は、ＡＴＰ活性を用いて測定してもよい。ＡＴＰの測定は、液体を直接的に測定もしくはルミノメーターで綿棒を使用することで行う。
【００４７】
洗浄工程で生き残った微生物の数は、いわゆる遺伝子プローブを用いて測定してもよい。遺伝子プローブは、例えばVIT-Vermicon社によって製造されている。さらに、生存している微生物はその他の方法、例えばインピーダンス（BioMerieux社またはSyLab社製）、光電気的計数（FOSS社製）、固相サイトメトリ（ChemScan社製）、免疫磁気分離法／IMS（DYNAL社製）によって測定することが出来る。
【００４８】
原理上は、液状のサンプルを寒天プレート上に乗せて培養することも可能である。しかしながら、この方法では結果が出るのに２、３日かかる。一方、そういった評価法の結果は正確である。この方法の人件費は非常に高い。
【００４９】
洗浄工程の質は、洗浄工程開始時に生存していた微生物数と、洗浄工程終了後にまだ生存していた微生物の数との比に基づいて測定する。こういった評価は、コンピュータで適切なプログラムを用いて行うことも可能である。
【００５０】
多くの製造業者が、微生物を効果的に退治することを意図して漂白および/または同時殺菌作用を備えた物質を洗剤に添加する。これらの製造業者は、少なくとも自分達のために、こういった添加物が洗浄中に実際に細菌を殺すのかどうか、またはどの程度まで細菌が死ぬのかを知りたいと考えている。本発明の方法および装置は、企業の内部統制のために、洗浄工程の効果に加えて、洗剤に使用した物質の効果を可能な限り単純かつ迅速な形でチェックすることを可能にするようなものでなくてはならない。こういった方法および装置は、クリーニング工場および関連する研究施設だけでなく、洗剤、漂白および洗濯機製造業者が使用してもよい。また、想定した試験用洗濯物は、例えば、６０℃より高い温度で洗うことのできないいずれの繊維材料であってもよい。これらは、例えば、変色防止をしていない繊維、ウール、絹、合成繊維等である。さらに、この方法および装置は、クリーニング工場における洗浄工程の微生物学的観点からの評価に加え、機械、プログラム、洗剤等の新製品の微生物学的な評価に適している。最低限の準備作業のみで、本発明の装置は、時には洗濯機の洗浄サイクルにおける細菌死亡率についての半定量的な情報さえも、数時間で提供することが可能である。さらに、本発明の装置は実際の洗浄工程および温度、時間、洗剤、機械的負荷等の対応する影響因子についての迅速な評価を可能とする。洗浄工程中に機械からサンプルを採取する必要がない。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】本発明の方法の図式である。
【図２】本方法で使用する物質の一部の機能性を表す。
【図３】モニター槽の第一の実施例の垂直断面図であり、本方法を実施するための装置の部品の１つを表す。
【図４】図３の槽またはチャンバの平面図である。
【図５】稼動可能な状態の、槽の第二の実施例の全体図である。
【図６】図５の槽の概略垂直断面図である。
【図７】図５の装置の中心部の概略全体図である。
【図８】本発明の装置の第二の実施例の主要部の分解図である。
【図９】本発明の装置の第三の実施例の分解図である。
【図１０】本発明の装置の第四の実施例の概略図である。
【図１１】本発明の装置の第五の実施例の蓋の全体図である。
【図１２】本発明の装置の第五の実施例の下部の垂直断面図である。
【図１３】本発明の装置の第六の実施例の側面図である。
【図１４】図１３に図示の本発明の装置の実施例の下部の垂直断面図である。
【図１５】図１３に図示の本発明の装置の実施例の蓋の垂直断面図である。
【図１６】図１５の蓋を下からもしくは内部から見た図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
既定もしくは規定の数の微生物生体を試験対象である物質の作用に、ある特定の時間にわたって曝露し、該作用時間の終了後にまだ生存している微生物の数を測定し、試験物質の殺菌効果を測定結果から導き出すことを特徴とする、物質の殺菌効果の試験方法。
【請求項２】
規定の量の微生物生体を洗濯物と一緒に洗浄し、洗浄工程終了後にまだ生存している微生物の数を測定し、洗浄工程の効果または質を、微生物生体の開始時の量と洗浄工程後にまだ生存している微生物の量との差から測定することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
規定の量の微生物をキャリア上に例えば液滴または粉末状で置き、キャリアを洗浄工程にかける前に微生物をキャリア上に、例えばゲルを用いて固定し、および／またはキャリアを洗浄工程にかけるまえに微生物を例えばフリーズドライすることで保護することを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
試験対象物質の作用に曝露する前に、微生物生体を液体中に入れ懸濁液を生成し、この液体が栄養溶液であってもよく、試験対象物質は溶液または懸濁液の形態で試験工程にかけることができ、作用時間の経過後、テトラゾリウム塩を微生物の懸濁液に添加し、テトラゾリウム塩はまだ生存している微生物の数に応じて試験微生物のデヒドロゲナーゼ酵素によって還元されて有色生成物ホルマザンを生成し、ホルマザンによる光学濃度を続いて測定し、試験物質の殺菌効果、従ってまた試験物質の作用時間を生き残った試験微生物の数についての結論が測定結果から導き出されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
試験物質の作用時間を生き残った微生物の数についての結論は、培養時間後のホルマザンの増加量に基づき導きだされ、光学濃度の測定は懸濁液中または栄養溶液中の微生物を第一の時間、例えば３０分間培養し、その後、光学濃度の第一の測定を行い、懸濁液または栄養溶液中の微生物を続いて第二の時間、例えば３０分間培養し、続いて光学濃度の第二の測定を行い、光学濃度の測定結果の違いから試験物質の殺菌効果についての結論を導き出すことによって行われることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
テトラゾリウム塩を懸濁液に添加する前に、洗剤残留物を除去または中和可能な物質をこの懸濁液に添加し、微生物をこの懸濁液に既定の時間、例えば１時間にわたって既定の温度、例えば３７℃で維持し、テトラゾリウム塩は懸濁液のこの培養時間が経過するまで添加しないことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
試験微生物を封入する容器を提供し、この容器が洗浄液はその内部の微生物と接触できるが微生物は洗浄工程中に容器から漏出できないように構成されていることを特徴とする、請求項１に記載の方法を実施するための装置。
【請求項８】
容器が中空の本体を含み、この本体が容器の内部とその周囲とを連結する少なくとも１つの開口部を有し、開口部はある材料から成る壁によって覆われており、規定の量の微生物はキャリア上に置かれ、このキャリアは容器の内部に位置されることを特徴とする、請求項７に記載の装置。
【請求項９】
容器が実質的に円盤状であり、容器の中空円盤状本体の広表面の少なくとも１つに少なくとも１つの開口部が形成されることを特徴とする、請求項７に記載の装置。
【請求項１０】
中空容器本体の少なくとも１つの広表面に、少なくとも１つの開口部をそれぞれ形成し、容器の各広表面壁の内側に滅菌フィルタを取り付け、微生物は実質的に互いに平行に配置されたこれら２枚の滅菌フィルタの間に位置することを特徴とする、請求項８に記載の装置。
【請求項１１】
光度計と、容器（９０）から取り出した懸濁液を収容するためのキュベットをさらに含むことを特徴とする、請求項７に記載の装置。
【請求項１】
既定もしくは規定の数の微生物生体を試験対象である物質の作用に、ある特定の時間にわたって曝露し、該作用時間の終了後にまだ生存している微生物の数を測定し、試験物質の殺菌効果を測定結果から導き出すことを特徴とする、物質の殺菌効果の試験方法。
【請求項２】
規定の量の微生物生体を洗濯物と一緒に洗浄し、洗浄工程終了後にまだ生存している微生物の数を測定し、洗浄工程の効果または質を、微生物生体の開始時の量と洗浄工程後にまだ生存している微生物の量との差から測定することを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
規定の量の微生物をキャリア上に例えば液滴または粉末状で置き、キャリアを洗浄工程にかける前に微生物をキャリア上に、例えばゲルを用いて固定し、および／またはキャリアを洗浄工程にかけるまえに微生物を例えばフリーズドライすることで保護することを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
試験対象物質の作用に曝露する前に、微生物生体を液体中に入れ懸濁液を生成し、この液体が栄養溶液であってもよく、試験対象物質は溶液または懸濁液の形態で試験工程にかけることができ、作用時間の経過後、テトラゾリウム塩を微生物の懸濁液に添加し、テトラゾリウム塩はまだ生存している微生物の数に応じて試験微生物のデヒドロゲナーゼ酵素によって還元されて有色生成物ホルマザンを生成し、ホルマザンによる光学濃度を続いて測定し、試験物質の殺菌効果、従ってまた試験物質の作用時間を生き残った試験微生物の数についての結論が測定結果から導き出されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
試験物質の作用時間を生き残った微生物の数についての結論は、培養時間後のホルマザンの増加量に基づき導きだされ、光学濃度の測定は懸濁液中または栄養溶液中の微生物を第一の時間、例えば３０分間培養し、その後、光学濃度の第一の測定を行い、懸濁液または栄養溶液中の微生物を続いて第二の時間、例えば３０分間培養し、続いて光学濃度の第二の測定を行い、光学濃度の測定結果の違いから試験物質の殺菌効果についての結論を導き出すことによって行われることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
テトラゾリウム塩を懸濁液に添加する前に、洗剤残留物を除去または中和可能な物質をこの懸濁液に添加し、微生物をこの懸濁液に既定の時間、例えば１時間にわたって既定の温度、例えば３７℃で維持し、テトラゾリウム塩は懸濁液のこの培養時間が経過するまで添加しないことを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
試験微生物を封入する容器を提供し、この容器が洗浄液はその内部の微生物と接触できるが微生物は洗浄工程中に容器から漏出できないように構成されていることを特徴とする、請求項１に記載の方法を実施するための装置。
【請求項８】
容器が中空の本体を含み、この本体が容器の内部とその周囲とを連結する少なくとも１つの開口部を有し、開口部はある材料から成る壁によって覆われており、規定の量の微生物はキャリア上に置かれ、このキャリアは容器の内部に位置されることを特徴とする、請求項７に記載の装置。
【請求項９】
容器が実質的に円盤状であり、容器の中空円盤状本体の広表面の少なくとも１つに少なくとも１つの開口部が形成されることを特徴とする、請求項７に記載の装置。
【請求項１０】
中空容器本体の少なくとも１つの広表面に、少なくとも１つの開口部をそれぞれ形成し、容器の各広表面壁の内側に滅菌フィルタを取り付け、微生物は実質的に互いに平行に配置されたこれら２枚の滅菌フィルタの間に位置することを特徴とする、請求項８に記載の装置。
【請求項１１】
光度計と、容器（９０）から取り出した懸濁液を収容するためのキュベットをさらに含むことを特徴とする、請求項７に記載の装置。
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１】
【図２】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１】
【図２】
【公表番号】特表２００７−５３１５３３（Ｐ２００７−５３１５３３Ａ）
【公表日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０６６３４（Ｐ２００７−５０６６３４）
【出願日】平成１７年４月６日（２００５．４．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＨ２００５／０００１９７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９８０１９
【国際公開日】平成１７年１０月２０日（２００５．１０．２０）
【出願人】（５０５３５５８１８）エンパ テストマテリアリエン アーゲー (3)
【氏名又は名称原語表記】ＥＭＰＡ ＴＥＳＴＭＡＴＥＲＩＡＬＩＥＮ ＡＧ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１１月８日（２００７．１１．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年４月６日（２００５．４．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＨ２００５／０００１９７
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９８０１９
【国際公開日】平成１７年１０月２０日（２００５．１０．２０）
【出願人】（５０５３５５８１８）エンパ テストマテリアリエン アーゲー (3)
【氏名又は名称原語表記】ＥＭＰＡ ＴＥＳＴＭＡＴＥＲＩＡＬＩＥＮ ＡＧ
【Ｆターム（参考）】
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