男性の更年期又はうつ病の鑑別方法
【課題】 血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量に基づき、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法を提供する。また、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量をＬＣ／ＭＳを用いて同時に測定する方法を提供する。
【解決手段】 血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、それを健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値と対比することにより、男性の更年期又はうつ病を鑑別する。また、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量のＬＣ／ＭＳ測定において、それぞれの生成イオンを同時に検出することにより、これらのステロイドホルモンの量を同時に測定する。
【解決手段】 血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、それを健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値と対比することにより、男性の更年期又はうつ病を鑑別する。また、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量のＬＣ／ＭＳ測定において、それぞれの生成イオンを同時に検出することにより、これらのステロイドホルモンの量を同時に測定する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量に基づき、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法に関する。また、本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の新規測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
男性更年期は、一般に、成熟期から老年期への移行期である４５〜５５歳を指す。その時期には、精力、気分・健康感、認知・記憶力等の精神的機能の低下、筋肉量・骨量の減少、体脂肪の増加等による身体的機能の低下及び性機能の低下が見られる。
【０００３】
一方、うつ病はストレスを誘因として発症することが臨床精神医学により明らかにされており、その初発年齢のピークは２０歳代及び５０歳代にある。
【０００４】
近年、男性更年期としてＰＡＤＡＭ（partial androgen deficiency in aging male）が注目され、男性更年期障害の臨床診断及び治療はＰＡＤＡＭの観点から行われつつあるが、男性更年期外来を受診する患者の中にはうつ病の症例も相当の割合で混在しており、必ずしもテストステロン値の低下に基づくＰＡＤＡＭ患者ばかりではない。ＰＡＤＡＭとうつ病は主訴をほぼ同じくするため、実際にはうつ病である患者に対してＰＡＤＡＭに基づく治療（主としてアンドロゲン補充療法）が施されることがある。しかし、そのような場合は症状が改善されないばかりか、症状の悪化及び自殺等の事態を招くおそれがある。したがって、男性更年期外来を訪れた患者の診断及び治療は、患者の主訴を主とする問診のみに頼ることなく、内分泌状況などを総合的に検討した上で行わなければならない。
【０００５】
男性更年期の診断は、現在は遊離テストステロン（Tsujimura,A. et al: J.Urology,170,2345 (2003)）及びバイオアベイラブルテストステロンを指標として行われているが、現在用いられている基準値は米国で作成されたものであり、日本人には値が高すぎてほとんどの人が基準値の下限（１５．２pg/mL）を下回ってしまうため、我が国独自の基準値の作成が求められている。また、生理活性を有するのはバイオアベイラブルテストステロンであることから、男性更年期の診断はバイオアベイラブルテストステロンを指標とするのが望ましい。しかし、その測定方法として、例えば、硫安法、ＩＳＳＡＭ法、ＣｏｎＡ法が提案されている（Medical Science Digest, Vol.31(3), 99-103(2005)参照）が、測定方法の国際的な統一はなされていない。このようなことから、バイオアベイラブルテストステロンに基づく我が国に適した男性更年期の診断方法の確立が求められている。
【０００６】
一方、うつ病の診断は、ZungのSelf-rating Depression Scale（ＳＤＳ）、ZigmondによるHospital Anxiety and Depression Scale（ＨＡＤＳ）等のスクリーニングテスト、あるいは、臨床的な確定診断のためのＤＳＭ−４（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4th. edition、米国精神医学会）等により行われている。これらはいずれも問診を中心としたものであるが、最近になって、血中コルチゾールの量に基づいてうつ病を診断する試みがなされている。これは、うつ病において視床下部−下垂体−副腎皮質系（ＨＡＰ系）の機能が亢進してグルココルチコイドの分泌が増大し、その結果として、血液、尿、脳脊髄液等におけるコルチゾールの濃度が上昇している所見が多く見られることに由来するものであり、例えば、ＨＡＰ系異常を検出する検査として、デキサメサゾンを負荷し、コルチゾールと副腎皮質刺激ホルモンの分泌抑制を見るデキサメサゾン抑制テスト（ＤＳＴ）やこれらを改良したＤＳＴ/ＣＲＨテストが提案されている（Heuser I, et al: J.Psychiatr．Res. 1994; 28,341）。しかしながら、どのような状態のコルチゾール、例えば、遊離しているものかバイオアベイラブルなものか、あるいは全量のコルチゾールがうつ病と関係しているのかが明らかではなく、特にバイオアベイラブルコルチゾールの定量法が確立していないこともあって、血中コルチゾールの量とうつ病の症状の程度との関係は未だ明らかにされていない。ただし、うつ病の発症誘因とされているストレスについては、スポーツ選手（Kivlighan KT,et al: Psychoneuroendocrinology, 2005 Jan; 30(1); 58-71: Maso F,et al; Br.J.Sports Med.2004 Jun; 38(3)260-263)、宇宙飛行士（Strollo F, et al: J.Gravit.Physiol.1997, July; 4(2)103-104)、消防士(Roy M, et al: Ann.Behav.Med.2003 Dec; 26(3)194-200)等の職業に起因するストレスを有する人を対象として、血中又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールを測定し、その結果を考察した報告がいくつかなされている。また、デヒドロエピアンドロステロンとコルチゾールを測定しストレスを定量する方法も知られている（特開平１１−３８００４）。しかし、これらの文献には、男性の更年期又はうつ病については何ら記載されていない。
【０００７】
ところで、テストステロンが関係する疾患とコルチゾールが関係する疾患は全く領域が異なるために、それぞれのステロイドホルモンは単独で測定されている。また、その測定方法も免疫学的方法やラジオイムノアッセイが殆んどである。しかし、男性更年期外来を受診する患者が増加してきており、テストステロン及びコルチゾールの両者の値を同時に、しかも簡便に、さらにはバイオアベイラブルな状態にあるものを測定する方法の開発が求められている。
【非特許文献１】Tsujimura,A. et al:J.Urology,170,2345 (2003)
【非特許文献２】Medical Science Digest, Vol.31(3), 99-103(2005)
【非特許文献３】Heuser I，et al: J.Psychiatr．Res. 1994; 28,341
【非特許文献４】Kivlighan KT,et al: Psychoneuroendocrinology, 2005 Jan; 30(1); 58-71
【非特許文献５】Maso F, et al; Br.J.Sports Med.2004 Jun; 38(3)260-263
【非特許文献６】Strollo F, et al: J.Gravit.Physiol.1997, July; 4(2)103-104
【非特許文献７】Roy M, et al:Ann.Behav.Med.2003 Dec; 26(3)194-200
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量に基づき、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法を提供することである。
【０００９】
また、本発明の別の目的は、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量をＬＣ／ＭＳを用いて同時に測定する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、血液又は唾液中のテストステロンの量と男性の更年期症状との関係、及び血液又は唾液中のコルチゾールの量とうつ病の程度との関係について鋭意検討した。その結果、唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量は血液中のバイオアベイラブルなそれらのホルモンの状態を反映していること、及びそれらのホルモンの量と男性の更年期又はうつ病の症状に一定の関係があることを見出し、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法を完成させた。また、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの簡便な測定方法も併せて開発した。
【００１１】
すなわち、本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別法を提供するものである。
【００１２】
また、本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別用キットを提供するものである。
【００１３】
さらに、本発明は、男性の更年期又はうつ病の鑑別のために、ＬＣ／ＭＳを用いて、それぞれの生成イオンを同時に検出することを特徴とする、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定方法を提供するものである。
【００１４】
本発明は、具体的には、以下に記載の通りである。
（１）被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチ
ゾールの量を測定し、得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ
病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定
値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別法。
（２）血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定を、ＬＣ／ＭＳを用いて、それぞれの生成イオンを同時に検出することにより行う、上記（１）に記載の鑑別法。
（３）唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、上記（１）又は（２）に記載の鑑別法。
（４）被検者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定するための手段、及び得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値と対比する手段を含むことを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
（５）対比する手段が健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値の対比表である、上記（４）に記載の男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
（６）男性の更年期又はうつ病の鑑別のために、ＬＣ／ＭＳを用いて、被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのそれぞれの生成イオンを同時に検出してテストステロン及びコルチゾールを定量することを特徴とする、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定方法。
（７）血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、上記（６）に記載の測定方法。
（８）さらに、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのカルボニル基をイミノ化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、上記（７）に記載の測定方法。
（９）唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、上記（６）〜（８）のいずれか１項に記載の測定方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明において使用することのできる生体由来試料は、血液及び唾液である。両者ともバイオアベイラブルなホルモンの状況を反映しているが、中でも、生体への負荷が少ない非侵襲的な方法で採取できるという点及び実質的にバイオアベイラブルなホルモンしか含まない点で、唾液が好適である。
【００１６】
血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定は、例えば、免疫学的測定、ラジオイムノアッセイ、ＧＣ／ＭＳ、ＬＣ／ＭＳ等を用いて、一般的な方法により行うことができる。この中で、微量測定が可能であること、テストステロンとコルチゾールの同時測定が可能であること及び測定者に放射線被爆等の危険がないことから、ＬＣ／ＭＳが最も適している。
【００１７】
本発明の「鑑別用キット」には、被検者からの血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値と健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値とを対比して男性の更年期又はうつ病を鑑別するために必要な手段が含まれ、例えば、被検者からの血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定手段として、血液又は唾液の採取用具、カラムカートリッジ等、及び、被検者からの血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値と健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値とを対比する手段として、健常者及び男性の更年期又はうつ病患者のそれぞれの測定値の対比表が挙げられる。中でも、上記対比表は、医師の判断によらなくとも男性の更年期又はうつ病であるかどうかを鑑別することが可能となるものであり、特に有用である。
【００１８】
本発明の測定方法において、「ＬＣ／ＭＳ」は、一般的なＬＣ／ＭＳを使用することができる。また、その測定においては、例えば、ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ、ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ、ＬＣ−ＡＰＣＩ／ＭＳ−ＭＳ等を用いることができる。
【００１９】
また、本発明の測定方法においては、生体由来試料中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化し、さらに必要に応じてカルボニル基をイミノ化した後に、ＬＣ／ＭＳ測定を行うことも可能である。それらの誘導体化を行う場合は、エステル化については、例えば、アセチル化、ベンゾイル化、トリフルオロベンゾイル化等を挙げることができ、また、イミノ化については、ヒドロキシルイミノ化、メチルオキシルイミノ化等を挙げることができる。
【００２０】
本発明について、以下に具体的に説明する。
試料の調製
試料の調製方法については、後記実施例において詳述するが、被検者から採取した血液又は唾液を遠心分離や簡易カラムクロマトグラフィーにより分離精製する一般的調製方法を適宜選択して用いることができる。この試料調製方法により、特に血液中のバイオアベイラブルなホルモンを分離でき、これを以後の測定工程に供する。また、血液として、血清を使用することもできる。なお、唾液については、特に調製することなく、採取したものをそのまま測定に供することもできる。
【００２１】
ＬＣ−ＭＳを使用する場合には、血清のＳＨＢＧ結合を除いた画分又は採取した唾液を極性溶媒（例えば、酢酸エチル、ブタノール等）を用いて抽出することにより、アルブミンに結合したテストステロン及びコルチゾールを遊離のテストステロン及びコルチゾールに変換して測定する。
血液試料あるいは唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定
【００２２】
上記で調製した血液試料あるいは採取した唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を、免疫学的測定用キット、例えば、エンザプレート テストステロン、エンザプレート コルチゾール、Testosterone saliva LIA キット、Cortisol saliva LIA キット等；ラジオイムノアッセイキット、例えば、ＤＰＣトータルテストステロンキット、ＤＰＣコルチゾールキット等；ＧＣ／ＭＳ；又はＬＣ／ＭＳ等を用いて測定する。
【００２３】
測定においてＬＣ／ＭＳを用いると、血液試料あるいは唾液中に含まれるテストステロン及びコルチゾールを同時に測定することができるので、特に好ましい。例えば、テストステロンは７９、８１、９７、１０９、１２１及び１２３に特徴的な生成イオンを示し、特に９７及び１０９が代表的な生成イオンであり、また、コルチゾールは９７、１２１、１２３、１４７、３０９及び３２７に特徴的な生成イオンを示し、特に１２１及び３２７が代表的な生成イオンである。したがって、これらの特徴的な生成イオンに着目し、内部標準物質と対比することにより、それぞれのステロイドホルモンの量を同時に算出することができる。
【００２４】
また、血液試料あるいは唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化し、さらに必要に応じてカルボニル基をイミノ化した後に、ＬＳ／ＭＳにより測定する場合は、検出する生成イオンは次のようになる。例えば、両者の水酸基をアセチル化した後にＬＣ／ＭＳ測定したときは、テストステロンについては９７及び１０９が特徴的な生成イオンであり、また、コルチゾールについては１２１、２４１、３０９及び３２７が特徴的な生成イオンである。
血液試料あるいは唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量と、健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値との対比
【００２５】
上記で得られた被検者からの血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値（午前９時の測定値）を、例えば、下記表Ａに示す健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値（午前９時の測定値）と対比し、鑑別を行う。「午前９時」とするのは、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値は日内変動があるので、特定の時間の測定値を対比する必要があるからである。表Ａは、５０歳前後の午前９時の測定値であるが、テストステロンの量は年齢にも依存するので、鑑別にあたっては年齢に応じて総合的に判断する。なお、コルチゾールの量は、年齢にはほとんど依存しないので、年齢に関わらず、表Ａの測定値が対比に使用できる。
【表１】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するものであるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００２６】
実施例１：ＬＣ／ＭＳ−ＭＳによるテストステロン及びコルチゾールの量の測定（検量線の作成）
ＬＣ／ＭＳ−ＭＳは、液体クロマトグラフィー装置（アジレントテクノロジー、Agilent 1100）に接続したマススペクトロメータＡＰＩ-４０００を用い、ＥＳＩ法で測定した。ＬＣ及びＭＳの測定条件を、下記表Ｂに示す。
【００２７】
【表２】
【００２８】
テストステロンのＭＳ測定を行うと、ｍ／ｚ２８９．３に前駆イオンが検出された。この前駆イオンについて更にＭＳ測定を行うと、ｍ／ｚ９７．３に強い強度を示すスペクトルが得られた（図１及び図２）。
【００２９】
そこでｍ／ｚ２８９．３を前駆イオンとして、また、ｍ／ｚ９７．３を生成イオンとしてＬＣ／ＭＳクロマトグラム測定したところ、テストステロン１pgを検出することができた（検出限界）。なお、内部標準物質には重水素で標識したテストステロン（１６，１６，１７-ｄ３テストステロン）を用いた（図３）。この条件で得られた検量線を図４に示す。検量線は、試験管に１，５，１０，２５，１００，５００，１０００pgのテストステロンをそれぞれ採り、これに内部標準物質を１ng添加し、精製水１mlに溶解したものから作成した。テストステロン５〜１０００pg／１０μLの濃度範囲において、相関係数１．００００と良好な直線を示した。
【００３０】
コルチゾールについてもテストステロンと同様にＬＣ／ＭＳ測定を行った。すなわち、コルチゾールのＭＳ測定において、前駆イオンｍ／ｚ３６３．３が検出され、これについて更にＭＳ測定を行い、生成イオンｍ／ｚ３２７．１を得た（図５及び図６）。この条件でＬＣ／ＭＳクロマトグラム測定したところ、コルチゾール５pgを検出することができた（検出限界）。内部標準物質には重水素で標識したコルチゾール（９，１１，１２，１２−ｄ４コルチゾール）を用いた（図７）。この条件で得られた検量線を図８に示す。検量線は、試験管に２０，５０，１００，５００，１０００、５０００、１００００pgのコルチゾールをそれぞれ採り、これに内部標準物質を１ng添加し、精製水１mlに溶解したものから作成した。コルチゾール２０〜１００００pg／１０μLの濃度範囲において、相関係数０．９９７３と良好な直線を示した。
【００３１】
実施例２：ヒト唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定
（１−１）試料の調製
健常男性から得た唾液１mLに２Ｈ３−テストステロン１ng、２Ｈ４−コルチゾール１ng及び酢酸エチル５mLを加えて１０分間振り混ぜ、遠心分離（４℃、３０００回転、５分間）した。これを凍結し有機層を分離した。有機層を遠心式エバポレータで乾固した後、残渣を０．０５％ギ酸/アセトニトリル混液（３：２）１００μLに溶解し、試料とした。
（１−２）ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ法による測定
上記（１−１）で得た試料のうちの１０μLをＬＣ／ＭＳ測定に使用した。測定は、実施例１と同様に行った。テストステロン及びコルチゾールのＬＣ／ＭＳクロマトグラムにおける生成イオンｍ／ｚ９７．３及び３２７．１のピーク面積をそれぞれ測定し、それらと内部標準物質とのピーク面積比を算出し、テストステロン及びコルチゾール濃度を求めた。その結果を下記表Ｃに示す。
【００３２】
【表３】
【００３３】
上記の通り、本発明の測定方法により、唾液中のテストステロン及びコルチゾール（バイオアベイラブルなもの）をそれぞれ５〜１０００pg及び２０〜１００００pg/mLの範囲で定量できる。また、それぞれの測定限界は、テストステロンは１０pg、コルチゾールは５pgである。
【００３４】
実施例３：
受診者１〜５について、午前９時頃に唾液中のテストステロン及びコルチゾールを測定し、更年期又はうつ病への罹患の有無について、前期表Ａに基づいて鑑別を行った。その結果を、下記表Ｄに示す。また、下記表Ｄには、それぞれの受診者に対する問診によるＡＭＳ評価（男性の老化症状に対する質問票）及びＨＡＤスコアも併せて記載した。
【００３５】
【表４】
上記表Ｄには、問診によるＡＭＳ評価が中程度以上であったとしても、更年期ではなくむしろうつ病を疑うべき者がみられる。これらの例に対して、唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値に基づく鑑別がより適切であることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、テストステロンのマススペクトルである。特徴的な前駆イオンｍ／ｚ２８９.３のピークを確認することができる。
【図２】図２は、テストステロンの前駆イオンｍ／ｚ２８９．３からの生成イオンのスペクトルである。
【図３】図３は、テストステロン及び１６，１６，１７-ｄ３テストステロン（内部標準物質として使用）のＬＣ／ＭＳクロマトグラムである。左側が唾液中のテストステロンであり、右側が内部標準物質である。
【図４】図４は、本発明の測定方法において使用されるテストステロン１〜１０００pgの検量線である。
【図５】図５は、コルチゾールのマススペクトルである。特徴的な前駆イオンｍ／ｚ３６３．０のピークを確認することができる。
【図６】図６は、コルチゾールの前駆イオンｍ／ｚ３６３．０からの生成イオンのスペクトルである。
【図７】図７は、コルチゾール及び９，１１，１２，１２−ｄ４コルチゾール（内部標準物質として使用）のＬＣ/ＭＳクロマトグラムである。左側が唾液中のコルチゾールであり、右側が内部標準物質である。
【図８】図８は、本発明の測定方法において使用されるコルチゾール１〜１００００pgの検量線である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量に基づき、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法に関する。また、本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の新規測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
男性更年期は、一般に、成熟期から老年期への移行期である４５〜５５歳を指す。その時期には、精力、気分・健康感、認知・記憶力等の精神的機能の低下、筋肉量・骨量の減少、体脂肪の増加等による身体的機能の低下及び性機能の低下が見られる。
【０００３】
一方、うつ病はストレスを誘因として発症することが臨床精神医学により明らかにされており、その初発年齢のピークは２０歳代及び５０歳代にある。
【０００４】
近年、男性更年期としてＰＡＤＡＭ（partial androgen deficiency in aging male）が注目され、男性更年期障害の臨床診断及び治療はＰＡＤＡＭの観点から行われつつあるが、男性更年期外来を受診する患者の中にはうつ病の症例も相当の割合で混在しており、必ずしもテストステロン値の低下に基づくＰＡＤＡＭ患者ばかりではない。ＰＡＤＡＭとうつ病は主訴をほぼ同じくするため、実際にはうつ病である患者に対してＰＡＤＡＭに基づく治療（主としてアンドロゲン補充療法）が施されることがある。しかし、そのような場合は症状が改善されないばかりか、症状の悪化及び自殺等の事態を招くおそれがある。したがって、男性更年期外来を訪れた患者の診断及び治療は、患者の主訴を主とする問診のみに頼ることなく、内分泌状況などを総合的に検討した上で行わなければならない。
【０００５】
男性更年期の診断は、現在は遊離テストステロン（Tsujimura,A. et al: J.Urology,170,2345 (2003)）及びバイオアベイラブルテストステロンを指標として行われているが、現在用いられている基準値は米国で作成されたものであり、日本人には値が高すぎてほとんどの人が基準値の下限（１５．２pg/mL）を下回ってしまうため、我が国独自の基準値の作成が求められている。また、生理活性を有するのはバイオアベイラブルテストステロンであることから、男性更年期の診断はバイオアベイラブルテストステロンを指標とするのが望ましい。しかし、その測定方法として、例えば、硫安法、ＩＳＳＡＭ法、ＣｏｎＡ法が提案されている（Medical Science Digest, Vol.31(3), 99-103(2005)参照）が、測定方法の国際的な統一はなされていない。このようなことから、バイオアベイラブルテストステロンに基づく我が国に適した男性更年期の診断方法の確立が求められている。
【０００６】
一方、うつ病の診断は、ZungのSelf-rating Depression Scale（ＳＤＳ）、ZigmondによるHospital Anxiety and Depression Scale（ＨＡＤＳ）等のスクリーニングテスト、あるいは、臨床的な確定診断のためのＤＳＭ−４（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4th. edition、米国精神医学会）等により行われている。これらはいずれも問診を中心としたものであるが、最近になって、血中コルチゾールの量に基づいてうつ病を診断する試みがなされている。これは、うつ病において視床下部−下垂体−副腎皮質系（ＨＡＰ系）の機能が亢進してグルココルチコイドの分泌が増大し、その結果として、血液、尿、脳脊髄液等におけるコルチゾールの濃度が上昇している所見が多く見られることに由来するものであり、例えば、ＨＡＰ系異常を検出する検査として、デキサメサゾンを負荷し、コルチゾールと副腎皮質刺激ホルモンの分泌抑制を見るデキサメサゾン抑制テスト（ＤＳＴ）やこれらを改良したＤＳＴ/ＣＲＨテストが提案されている（Heuser I, et al: J.Psychiatr．Res. 1994; 28,341）。しかしながら、どのような状態のコルチゾール、例えば、遊離しているものかバイオアベイラブルなものか、あるいは全量のコルチゾールがうつ病と関係しているのかが明らかではなく、特にバイオアベイラブルコルチゾールの定量法が確立していないこともあって、血中コルチゾールの量とうつ病の症状の程度との関係は未だ明らかにされていない。ただし、うつ病の発症誘因とされているストレスについては、スポーツ選手（Kivlighan KT,et al: Psychoneuroendocrinology, 2005 Jan; 30(1); 58-71: Maso F,et al; Br.J.Sports Med.2004 Jun; 38(3)260-263)、宇宙飛行士（Strollo F, et al: J.Gravit.Physiol.1997, July; 4(2)103-104)、消防士(Roy M, et al: Ann.Behav.Med.2003 Dec; 26(3)194-200)等の職業に起因するストレスを有する人を対象として、血中又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールを測定し、その結果を考察した報告がいくつかなされている。また、デヒドロエピアンドロステロンとコルチゾールを測定しストレスを定量する方法も知られている（特開平１１−３８００４）。しかし、これらの文献には、男性の更年期又はうつ病については何ら記載されていない。
【０００７】
ところで、テストステロンが関係する疾患とコルチゾールが関係する疾患は全く領域が異なるために、それぞれのステロイドホルモンは単独で測定されている。また、その測定方法も免疫学的方法やラジオイムノアッセイが殆んどである。しかし、男性更年期外来を受診する患者が増加してきており、テストステロン及びコルチゾールの両者の値を同時に、しかも簡便に、さらにはバイオアベイラブルな状態にあるものを測定する方法の開発が求められている。
【非特許文献１】Tsujimura,A. et al:J.Urology,170,2345 (2003)
【非特許文献２】Medical Science Digest, Vol.31(3), 99-103(2005)
【非特許文献３】Heuser I，et al: J.Psychiatr．Res. 1994; 28,341
【非特許文献４】Kivlighan KT,et al: Psychoneuroendocrinology, 2005 Jan; 30(1); 58-71
【非特許文献５】Maso F, et al; Br.J.Sports Med.2004 Jun; 38(3)260-263
【非特許文献６】Strollo F, et al: J.Gravit.Physiol.1997, July; 4(2)103-104
【非特許文献７】Roy M, et al:Ann.Behav.Med.2003 Dec; 26(3)194-200
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量に基づき、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法を提供することである。
【０００９】
また、本発明の別の目的は、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量をＬＣ／ＭＳを用いて同時に測定する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、血液又は唾液中のテストステロンの量と男性の更年期症状との関係、及び血液又は唾液中のコルチゾールの量とうつ病の程度との関係について鋭意検討した。その結果、唾液中のテストステロン及びコルチゾールの量は血液中のバイオアベイラブルなそれらのホルモンの状態を反映していること、及びそれらのホルモンの量と男性の更年期又はうつ病の症状に一定の関係があることを見出し、男性の更年期又はうつ病を鑑別する方法を完成させた。また、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの簡便な測定方法も併せて開発した。
【００１１】
すなわち、本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別法を提供するものである。
【００１２】
また、本発明は、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別用キットを提供するものである。
【００１３】
さらに、本発明は、男性の更年期又はうつ病の鑑別のために、ＬＣ／ＭＳを用いて、それぞれの生成イオンを同時に検出することを特徴とする、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定方法を提供するものである。
【００１４】
本発明は、具体的には、以下に記載の通りである。
（１）被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチ
ゾールの量を測定し、得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ
病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定
値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別法。
（２）血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定を、ＬＣ／ＭＳを用いて、それぞれの生成イオンを同時に検出することにより行う、上記（１）に記載の鑑別法。
（３）唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、上記（１）又は（２）に記載の鑑別法。
（４）被検者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定するための手段、及び得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値と対比する手段を含むことを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
（５）対比する手段が健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値の対比表である、上記（４）に記載の男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
（６）男性の更年期又はうつ病の鑑別のために、ＬＣ／ＭＳを用いて、被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのそれぞれの生成イオンを同時に検出してテストステロン及びコルチゾールを定量することを特徴とする、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定方法。
（７）血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、上記（６）に記載の測定方法。
（８）さらに、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのカルボニル基をイミノ化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、上記（７）に記載の測定方法。
（９）唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、上記（６）〜（８）のいずれか１項に記載の測定方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明において使用することのできる生体由来試料は、血液及び唾液である。両者ともバイオアベイラブルなホルモンの状況を反映しているが、中でも、生体への負荷が少ない非侵襲的な方法で採取できるという点及び実質的にバイオアベイラブルなホルモンしか含まない点で、唾液が好適である。
【００１６】
血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定は、例えば、免疫学的測定、ラジオイムノアッセイ、ＧＣ／ＭＳ、ＬＣ／ＭＳ等を用いて、一般的な方法により行うことができる。この中で、微量測定が可能であること、テストステロンとコルチゾールの同時測定が可能であること及び測定者に放射線被爆等の危険がないことから、ＬＣ／ＭＳが最も適している。
【００１７】
本発明の「鑑別用キット」には、被検者からの血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値と健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値とを対比して男性の更年期又はうつ病を鑑別するために必要な手段が含まれ、例えば、被検者からの血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定手段として、血液又は唾液の採取用具、カラムカートリッジ等、及び、被検者からの血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値と健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定値とを対比する手段として、健常者及び男性の更年期又はうつ病患者のそれぞれの測定値の対比表が挙げられる。中でも、上記対比表は、医師の判断によらなくとも男性の更年期又はうつ病であるかどうかを鑑別することが可能となるものであり、特に有用である。
【００１８】
本発明の測定方法において、「ＬＣ／ＭＳ」は、一般的なＬＣ／ＭＳを使用することができる。また、その測定においては、例えば、ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ、ＬＣ−ＥＳＩ／ＭＳ、ＬＣ−ＡＰＣＩ／ＭＳ−ＭＳ等を用いることができる。
【００１９】
また、本発明の測定方法においては、生体由来試料中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化し、さらに必要に応じてカルボニル基をイミノ化した後に、ＬＣ／ＭＳ測定を行うことも可能である。それらの誘導体化を行う場合は、エステル化については、例えば、アセチル化、ベンゾイル化、トリフルオロベンゾイル化等を挙げることができ、また、イミノ化については、ヒドロキシルイミノ化、メチルオキシルイミノ化等を挙げることができる。
【００２０】
本発明について、以下に具体的に説明する。
試料の調製
試料の調製方法については、後記実施例において詳述するが、被検者から採取した血液又は唾液を遠心分離や簡易カラムクロマトグラフィーにより分離精製する一般的調製方法を適宜選択して用いることができる。この試料調製方法により、特に血液中のバイオアベイラブルなホルモンを分離でき、これを以後の測定工程に供する。また、血液として、血清を使用することもできる。なお、唾液については、特に調製することなく、採取したものをそのまま測定に供することもできる。
【００２１】
ＬＣ−ＭＳを使用する場合には、血清のＳＨＢＧ結合を除いた画分又は採取した唾液を極性溶媒（例えば、酢酸エチル、ブタノール等）を用いて抽出することにより、アルブミンに結合したテストステロン及びコルチゾールを遊離のテストステロン及びコルチゾールに変換して測定する。
血液試料あるいは唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定
【００２２】
上記で調製した血液試料あるいは採取した唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を、免疫学的測定用キット、例えば、エンザプレート テストステロン、エンザプレート コルチゾール、Testosterone saliva LIA キット、Cortisol saliva LIA キット等；ラジオイムノアッセイキット、例えば、ＤＰＣトータルテストステロンキット、ＤＰＣコルチゾールキット等；ＧＣ／ＭＳ；又はＬＣ／ＭＳ等を用いて測定する。
【００２３】
測定においてＬＣ／ＭＳを用いると、血液試料あるいは唾液中に含まれるテストステロン及びコルチゾールを同時に測定することができるので、特に好ましい。例えば、テストステロンは７９、８１、９７、１０９、１２１及び１２３に特徴的な生成イオンを示し、特に９７及び１０９が代表的な生成イオンであり、また、コルチゾールは９７、１２１、１２３、１４７、３０９及び３２７に特徴的な生成イオンを示し、特に１２１及び３２７が代表的な生成イオンである。したがって、これらの特徴的な生成イオンに着目し、内部標準物質と対比することにより、それぞれのステロイドホルモンの量を同時に算出することができる。
【００２４】
また、血液試料あるいは唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化し、さらに必要に応じてカルボニル基をイミノ化した後に、ＬＳ／ＭＳにより測定する場合は、検出する生成イオンは次のようになる。例えば、両者の水酸基をアセチル化した後にＬＣ／ＭＳ測定したときは、テストステロンについては９７及び１０９が特徴的な生成イオンであり、また、コルチゾールについては１２１、２４１、３０９及び３２７が特徴的な生成イオンである。
血液試料あるいは唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量と、健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の測定値との対比
【００２５】
上記で得られた被検者からの血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値（午前９時の測定値）を、例えば、下記表Ａに示す健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値（午前９時の測定値）と対比し、鑑別を行う。「午前９時」とするのは、血液又は唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値は日内変動があるので、特定の時間の測定値を対比する必要があるからである。表Ａは、５０歳前後の午前９時の測定値であるが、テストステロンの量は年齢にも依存するので、鑑別にあたっては年齢に応じて総合的に判断する。なお、コルチゾールの量は、年齢にはほとんど依存しないので、年齢に関わらず、表Ａの測定値が対比に使用できる。
【表１】
以下の実施例は、本発明をより詳細に説明するものであるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例】
【００２６】
実施例１：ＬＣ／ＭＳ−ＭＳによるテストステロン及びコルチゾールの量の測定（検量線の作成）
ＬＣ／ＭＳ−ＭＳは、液体クロマトグラフィー装置（アジレントテクノロジー、Agilent 1100）に接続したマススペクトロメータＡＰＩ-４０００を用い、ＥＳＩ法で測定した。ＬＣ及びＭＳの測定条件を、下記表Ｂに示す。
【００２７】
【表２】
【００２８】
テストステロンのＭＳ測定を行うと、ｍ／ｚ２８９．３に前駆イオンが検出された。この前駆イオンについて更にＭＳ測定を行うと、ｍ／ｚ９７．３に強い強度を示すスペクトルが得られた（図１及び図２）。
【００２９】
そこでｍ／ｚ２８９．３を前駆イオンとして、また、ｍ／ｚ９７．３を生成イオンとしてＬＣ／ＭＳクロマトグラム測定したところ、テストステロン１pgを検出することができた（検出限界）。なお、内部標準物質には重水素で標識したテストステロン（１６，１６，１７-ｄ３テストステロン）を用いた（図３）。この条件で得られた検量線を図４に示す。検量線は、試験管に１，５，１０，２５，１００，５００，１０００pgのテストステロンをそれぞれ採り、これに内部標準物質を１ng添加し、精製水１mlに溶解したものから作成した。テストステロン５〜１０００pg／１０μLの濃度範囲において、相関係数１．００００と良好な直線を示した。
【００３０】
コルチゾールについてもテストステロンと同様にＬＣ／ＭＳ測定を行った。すなわち、コルチゾールのＭＳ測定において、前駆イオンｍ／ｚ３６３．３が検出され、これについて更にＭＳ測定を行い、生成イオンｍ／ｚ３２７．１を得た（図５及び図６）。この条件でＬＣ／ＭＳクロマトグラム測定したところ、コルチゾール５pgを検出することができた（検出限界）。内部標準物質には重水素で標識したコルチゾール（９，１１，１２，１２−ｄ４コルチゾール）を用いた（図７）。この条件で得られた検量線を図８に示す。検量線は、試験管に２０，５０，１００，５００，１０００、５０００、１００００pgのコルチゾールをそれぞれ採り、これに内部標準物質を１ng添加し、精製水１mlに溶解したものから作成した。コルチゾール２０〜１００００pg／１０μLの濃度範囲において、相関係数０．９９７３と良好な直線を示した。
【００３１】
実施例２：ヒト唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定
（１−１）試料の調製
健常男性から得た唾液１mLに２Ｈ３−テストステロン１ng、２Ｈ４−コルチゾール１ng及び酢酸エチル５mLを加えて１０分間振り混ぜ、遠心分離（４℃、３０００回転、５分間）した。これを凍結し有機層を分離した。有機層を遠心式エバポレータで乾固した後、残渣を０．０５％ギ酸/アセトニトリル混液（３：２）１００μLに溶解し、試料とした。
（１−２）ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ法による測定
上記（１−１）で得た試料のうちの１０μLをＬＣ／ＭＳ測定に使用した。測定は、実施例１と同様に行った。テストステロン及びコルチゾールのＬＣ／ＭＳクロマトグラムにおける生成イオンｍ／ｚ９７．３及び３２７．１のピーク面積をそれぞれ測定し、それらと内部標準物質とのピーク面積比を算出し、テストステロン及びコルチゾール濃度を求めた。その結果を下記表Ｃに示す。
【００３２】
【表３】
【００３３】
上記の通り、本発明の測定方法により、唾液中のテストステロン及びコルチゾール（バイオアベイラブルなもの）をそれぞれ５〜１０００pg及び２０〜１００００pg/mLの範囲で定量できる。また、それぞれの測定限界は、テストステロンは１０pg、コルチゾールは５pgである。
【００３４】
実施例３：
受診者１〜５について、午前９時頃に唾液中のテストステロン及びコルチゾールを測定し、更年期又はうつ病への罹患の有無について、前期表Ａに基づいて鑑別を行った。その結果を、下記表Ｄに示す。また、下記表Ｄには、それぞれの受診者に対する問診によるＡＭＳ評価（男性の老化症状に対する質問票）及びＨＡＤスコアも併せて記載した。
【００３５】
【表４】
上記表Ｄには、問診によるＡＭＳ評価が中程度以上であったとしても、更年期ではなくむしろうつ病を疑うべき者がみられる。これらの例に対して、唾液中のテストステロン及びコルチゾールの測定値に基づく鑑別がより適切であることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、テストステロンのマススペクトルである。特徴的な前駆イオンｍ／ｚ２８９.３のピークを確認することができる。
【図２】図２は、テストステロンの前駆イオンｍ／ｚ２８９．３からの生成イオンのスペクトルである。
【図３】図３は、テストステロン及び１６，１６，１７-ｄ３テストステロン（内部標準物質として使用）のＬＣ／ＭＳクロマトグラムである。左側が唾液中のテストステロンであり、右側が内部標準物質である。
【図４】図４は、本発明の測定方法において使用されるテストステロン１〜１０００pgの検量線である。
【図５】図５は、コルチゾールのマススペクトルである。特徴的な前駆イオンｍ／ｚ３６３．０のピークを確認することができる。
【図６】図６は、コルチゾールの前駆イオンｍ／ｚ３６３．０からの生成イオンのスペクトルである。
【図７】図７は、コルチゾール及び９，１１，１２，１２−ｄ４コルチゾール（内部標準物質として使用）のＬＣ/ＭＳクロマトグラムである。左側が唾液中のコルチゾールであり、右側が内部標準物質である。
【図８】図８は、本発明の測定方法において使用されるコルチゾール１〜１００００pgの検量線である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別法。
【請求項２】
血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定を、ＬＣ／ＭＳを用いて、それぞれの生成イオンを同時に検出することにより行う、請求項１に記載の鑑別法。
【請求項３】
唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、請求項１又は２に記載の鑑別法。
【請求項４】
被検者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定するための手段、及び得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値と対比する手段を含むことを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
【請求項５】
対比する手段が健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値の対比表である、請求項４に記載の男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
【請求項６】
男性の更年期又はうつ病の鑑別のために、ＬＣ／ＭＳを用いて、被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのそれぞれの生成イオンを同時に検出してテストステロン及びコルチゾールを定量することを特徴とする、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定方法。
【請求項７】
血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、請求項６に記載の測定方法。
【請求項８】
さらに、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのカルボニル基をイミノ化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、請求項７に記載の測定方法。
【請求項９】
唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、請求項６〜８のいずれか１項に記載の測定方法。
【請求項１】
被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定し、得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値と対比することを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別法。
【請求項２】
血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定を、ＬＣ／ＭＳを用いて、それぞれの生成イオンを同時に検出することにより行う、請求項１に記載の鑑別法。
【請求項３】
唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、請求項１又は２に記載の鑑別法。
【請求項４】
被検者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定するための手段、及び得られた両者の測定値を健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値と対比する手段を含むことを特徴とする、男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
【請求項５】
対比する手段が健常者及び男性の更年期又はうつ病患者の血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾール量の測定値の対比表である、請求項４に記載の男性の更年期又はうつ病の鑑別用キット。
【請求項６】
男性の更年期又はうつ病の鑑別のために、ＬＣ／ＭＳを用いて、被検者から採取した血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのそれぞれの生成イオンを同時に検出してテストステロン及びコルチゾールを定量することを特徴とする、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量の測定方法。
【請求項７】
血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの水酸基をエステル化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、請求項６に記載の測定方法。
【請求項８】
さらに、血液又は唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールのカルボニル基をイミノ化した後にＬＣ／ＭＳ測定を行う、請求項７に記載の測定方法。
【請求項９】
唾液中に存在するテストステロン及びコルチゾールの量を測定する、請求項６〜８のいずれか１項に記載の測定方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２００７−２４８２２（Ｐ２００７−２４８２２Ａ）
【公開日】平成１９年２月１日（２００７．２．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−２１１２２７（Ｐ２００５−２１１２２７）
【出願日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１７年６月２４日 日本アンドロロジー学会発行の「日本アンドロロジー総会記事（ＸＸＩＶ）」に発表
【出願人】（０００００２９９０）あすか製薬株式会社 (39)
【出願人】（５０４１２５４５８）株式会社帝国臓器製薬メディカル (6)
【出願人】（５９６１６５５８９）学校法人 聖マリアンナ医科大学 (53)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年２月１日（２００７．２．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 平成１７年６月２４日 日本アンドロロジー学会発行の「日本アンドロロジー総会記事（ＸＸＩＶ）」に発表
【出願人】（０００００２９９０）あすか製薬株式会社 (39)
【出願人】（５０４１２５４５８）株式会社帝国臓器製薬メディカル (6)
【出願人】（５９６１６５５８９）学校法人 聖マリアンナ医科大学 (53)
【Ｆターム（参考）】
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