癌の介入治療および根絶のためのＩＴＥ
ＩＴＥと称されるアリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）に対する内因性リガンドまたはその類似体（活性成分）の１つの有効量を、癌を患う被験者に投与することで、癌を介入治療または根絶する方法を開示する。活性成分の有効量および投与回数は、投与後の被験者におけるその血中濃度を測定して決定する。担体系を用いて調合された活性成分は、被験者に局所的、経腸的、または非経口で投与される。また、調剤薬物は１以上のその他の癌治療薬と共に投与することが可能である。維持量は癌の根絶を確実とするために被験者に癌が存在しなくなった後に提供される。前立腺癌、肝癌、肺癌、卵巣癌、および乳癌の被験者が好ましくは治療を受けることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
癌療法、癌治療、癌介入治療、癌根絶、癌生物学、腫瘍学、治療学、薬学、生物薬剤学。
【背景技術】
【０００２】
アリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）は、リガンド誘導性の転写因子であり、いわゆるｂａｓｉｃ ｈｅｌｉｘ−ｌｏｏｐ−ｈｅｌｉｘ／Ｐｅｒ−Ａｒｎｔ−Ｓｉｍ（ｂＨＬＨ／ＰＡＳ）スーパーファミリーに属している。ＡｈＲはそのリガンドに結合すると、Ｐ４５０ファミリー等の遺伝子発現に加えて、細胞分裂、アポトーシス（プログラムされた細胞死）、細胞分化、エストロゲンおよびアンドロゲンの作用、脂肪分化、視床下部作用、血管新生、免疫系の刺激または抑制、催奇形性、腫瘍原性、腫瘍発生、腫瘍促進、腫瘍進行、塩素座瘡、消耗症候群、およびその他のホルモン系の作用を含む、一連の生物学的過程およびいくらかの有害効果を仲介し、または相互作用する［１、２、３、４、５、６、７、８］。リガンド受容体は、細胞質から細胞核への転位、Ａｈ受容体核内輸送体と称される他の因子とのヘテロ二量化、ＡｈＲ制御のもとでＡｈ応答エレメントと称される遺伝子の調節領域へのヘテロ二量体の接着、そしてこれらの遺伝子の転写の促進または抑制を介して、生物学的過程に関与している。
【０００３】
ＡｈＲは、３−メチルコラントレン（３−ＭＣ）によって例示される多環芳香族炭化水素、および２，３，７，８−テトラクロロジベンゾパラジオキシン（ＴＣＤＤ）によって代表されるハロゲン化芳香族炭化水素などの外因性化学物質（したがって人工的リガンド）のいくつかのグループと、様々な親和力で結合が起こり得る。これまでに受容体系はその人工的リガンドを対象にして研究されてきた。これらのＡｈＲ人工的リガンドの研究は受容体系に対する私たちの理解を前進させることに役立ってきた一方で、系が担う生理学的役割および系が提供し得る潜在的治療効果における徹底的な解明は、ＡｈＲ生理学的リガンドを特定せずには不可能である。この目標に対する最初の段階として、受容体に対する内因性リガンドが特定された。ＡｈＲに対する、内因性リガンド、または生理学的リガンド、または天然ホルモンを、２−（１’Ｈ−インドール−３’−カルボニル）−チアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（短縮形はＩＴＥ）として特定した［９，１０］。
【０００４】
ＡｈＲに対する大部分の人工的リガンドは環境有害物質［１，２，３］であるため、治療薬としては使用不可能である。しかしながら、リガンドＡｈＲの機能を理解するために、ＴＣＤＤ、６−メチル−１，３，８−トリクロロジベンゾフラン（６−ＭＣＤＦ）、８−メチル−１，３，６−トリクロロジベンゾフラン（８−ＭＣＤＦ）、およびインドールまたはトリプトファンからの誘導体などのその人工的リガンドは、リガンドＡｈＲが、遺伝子導入マウス系統における前立腺腫瘍の転位［１１］、ならびに発癌物質誘発ラット乳腺腫瘍［１２，１３，１４］、ヒト乳房腫瘍細胞異種移植片［１５，１６］、および遺伝子突然変異に起因する腫瘍［１７］の増殖を、抑制可能であることを明らかにするために使用された。
【０００５】
ＡｈＲの天然リガンドとして、ＩＴＥは受容体を正確かつ特異的に標的とすることにおいて優れた作用因子である。しかしながら、いくつかの結果が抗癌の可能性を示し［１２，１３，１４，１５，１６］、一方では他の結果が腫瘍の発生、促進、および進行を示す［８，１８，１９２０，２１］、今までにＡｈＲのこれらの人工的リガンドの挙動から学んできたことからは、標的の結果は予測不可能である。ＩＴＥは血管新生阻害を示すことから、癌療法において有用であろう［７］。しかしながら血管新生阻害単独の性質からは、ＩＴＥを効果的な抗癌剤として直ちに見なすことは不可能である。論点を提供している多数の例が存在している［２２，２３、２４、２５］。多くの血管新生阻害薬は治療薬としての機能を果たすことができず［２２］、多くの他の薬剤は、恐らく薬剤から生じるストレスで腫瘍への酸素および栄養の供給が制限されることによって、腫瘍の浸潤および転移をさらに加速させた［２６，２７］。転移を加速させる可能性により、癌療法の絶対基準である全生存率さえも減少させるため、血管新生阻害療法は実際のところ懸念されている［２３］。そのＡｈＲの人工的リガンドによって明らかとなったリガンドＡｈＲの抗癌特性から［１２，１３，１４，１５，１６］、ＩＴＥがいったん同じ受容体に結合すると、多数のこれらの人工的リガンドまたはそれらの代謝産物が試験されたこれらの癌細胞に高い毒性を有し得るという、言うまでもないこれらの人工的リガンドが行ったことを、ＩＴＥも部分的にでも成し得ることを保証するものではない。そういう意味では、これらの人工的リガンドまたはそれらの代謝産物は、Ａｈ受容体を標的とした結果ではなく、癌細胞を殺すという単に無差別の細胞毒性薬としての機能を果たすであろう。
【０００６】
さらに、リガンド受容体が成し得ることを決定する重要な要素は、リガンド受容体が担う最終の３次元（３Ｄ）構造にある。なぜなら、３Ｄ構造は、リガンド受容体がいくつの様々な細胞性因子と相互作用するのか、およびこれらの相互作用が生命の過程を実行するためにどのように実施されるべきかを決定付けるためである。そして、リガンド受容体が担う最終の３Ｄ構造は、所定の生物系において、受容体に対してリガンドの３Ｄ構造によってのみ形成される。これがなぜリガンドの３Ｄ構造が、その受容体媒介性の生物学的過程および薬理学的過程に関してこれほど重要であるかを説明する基本的原理である。さらに、異なる構造を有するリガンドは異なる代謝を行い、それらの異なる代謝は確実に生物学的過程を異なる態様にて妨害し得る。したがって、異なる３Ｄ構造を有するリガンドは同じ受容体に結合したとしても、完全に異なる生物学的影響を確実にもたらし得ることは明らかである。
【０００７】
論点の妥当性は、上述した理論および当然ながら文献データの例示からも容易に確立し得る。例えば、ＴＣＤＤおよび６−ホルミルインドーロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＦＩＣＺ）の両方はＡｈＲに対する高親和性のリガンドではあるが、ＴＣＤＤは調節性Ｔ細胞の分化を刺激することが分かっており、そのため免疫系を抑制し、一方で、ＦＩＣＺはＴｈ１７細胞の分化を促進して免疫系を刺激し得る［２８］。他の実施例では、ＴＣＤＤおよびＩＴＥの両方はＡｈＲに対する高親和性のリガンドではあるが、ＴＣＤＤが口蓋裂、水腎症、および胸腺萎縮を誘発する一方で、ＩＴＥはこれらのいずれも誘発しなかった［２９］。さらなる実例を文献において容易に発見することが可能である［３０、３１、３２、３３、３４］。したがって、明確な回答を見出すための異なる実験モデルおよびシステムを用いた広範囲にわたる研究プログラムを行わずして、抗癌特性を示すＡｈＲに対する人工的リガンドのこれらの研究［１２、１３，１４、１５、１６］、またはその血管新生阻害特性を証明するＩＴＥの研究［７］からも、ＩＴＥが優れた抗癌剤であることは全く明らかではない。
【０００８】
こうした状況のために、私たちはＩＴＥまたはその構造類似体の１つが癌を治療または根絶するために効果的かつ安全に使用可能であるかどうかの調査を進めた。本発明は癌の介入治療または根絶において、新たに発見された内因性のＡｈ受容体リガンドであるＩＴＥまたその構造類似体の１つを治療薬として使用する方法を十分に開示するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第７４１９９９２号明細書
【特許文献２】米国特許第６９１６８３４号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｐｏｌａｎｄ Ａ，Ｋｎｕｔｓｏｎ ＪＣ．２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｈａｌｏｇｅｎａｔｅｄ ａｒｏｍａｔｉｃ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ：ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．１９８２；２２：５１７−５５４．
【非特許文献２】Ｐｏｅｌｌｉｎｇｅｒ Ｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ａｓｐｅｃｔｓ−−ｔｈｅ ｄｉｏｘｉｎ（ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｆｏｏｄ Ａｄｄ ｉｔ Ｃｏｎｔａｍ．２０００；１７（４）：２６１−６．
【非特許文献３】Ｂｏｃｋ ＫＷ，Ｋｏｈｌｅ Ｃ．Ａｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ− ａｎｄ ＴＣＤＤ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｉｖｅｒ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ：ｃｌｏｎａｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｅｖａｄｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５；６９（１０）：１４０３−１４０８．
【非特許文献４】Ｓｔｅｖｅｎｓ ＥＡ，Ｍｅｚｒｉｃｈ ＪＤ，Ｂｒａｄｆｉｅｌｄ ＣＡ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００９；１２７（３）：２９９−３１１．
【非特許文献５】Ｐｕｇａ Ａ，Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ＣＲ，Ｘｉａ Ｙ．Ａｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｓ ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５；６９（２）：１９９−２０７．
【非特許文献６】Ｓａｆｅ Ｓ，ＭｃＤｏｕｇａｌ Ａ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃａｎｃｅｒｓ（Ｒｅｖｉｅｗ）．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ．２００２；２０（６）：１１２３−８．
【非特許文献７】Ｄｉｅｔｒｉｃｈ Ｃ，Ｋａｉｎａ ｂ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＡｈＲ）ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ ｃｏｎｔａｃｔ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１０；３１（８）：１３１９−１３２８．
【非特許文献８】Ｓｏｎｇ Ｊ，Ｃｌａｇｅｔｔ−Ｄａｍｅ Ｍ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ＲＥ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｌｕｎｇ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００２；９９（２３）：１４６９４−９．
【非特許文献９】Ｆｒｉｔｚ ＷＡ，Ｌｉｎ Ｔ，Ｓａｆｅ Ｓ，Ｍｏｏｒｅ ＲＷ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ＲＥ．Ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ６−ｍｅｔｈｙｌ−１，３，８−ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ＴＲＡＭＰ ｍｉｃｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９；７７（７）：１１５１ −１１６０．
【非特許文献１０】ＭｃＤｏｕｇａｌ Ａ，Ｗｉｌｓｏｎ Ｃ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ７，１２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚ［ａ］ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒａｔ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．１９９７；１２０（１）：５３−６３．
【非特許文献１１】Ｈｏｌｃｏｍｂ Ｍ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ７，１２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚａｎｔｈｒａｃｅｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒａｔ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．１９９４；８２（１）：４３−７．
【非特許文献１２】ＭｃＤｏｕｇａｌ Ａ，Ｗｏｒｍｋｅ Ｍ，Ｃａｌｖｉｎ Ｊ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ／ａｎｔｉｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｏｎ ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｄ ｂｙ ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００１；６１（１０）：３９０２−３９０７．
【非特許文献１３】Ｇｉｅｒｔｈｙ ＪＦ，Ｂｅｎｎｅｔｔ ＪＡ，Ｂｒａｄｌｅｙ ＬＭ，Ｃｕｔｌｅｒ ＤＳ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＣＦ−７ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９３；５３（１３）：３１４９−３１５３．
【非特許文献１４】Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｌｅｉ Ｐ，Ｌｉｕ Ｘ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ．２００９；１６（３）：８３５−８４４．
【非特許文献１５】Ｋａｗａｊｉｒｉ Ｋ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｙ，Ｏｈｔａｋｅ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ＡｐｃＭｉｎ／＋ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｎａｔｕｒａｌ ｌｉｇａｎｄｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００９；１０６（３２）：１３４８１−１３４８６．
【非特許文献１６】Ｓｉｍｏｎ Ｔ，Ａｙｌｗａｒｄ ＬＬ，Ｋｉｒｍａｎ ＣＲ，Ｒｏｗｌａｎｄｓ ＪＣ，Ｂｕｄｉｎｓｋｙ ＲＡ．Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ２，３，７， ８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ（ｐ）ｄｉｏｘｉｎ ｕｓｉｎｇ ｌｉｎｅａｒ ａｎｄ ｎｏｎｌｉｎｅａｒ ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．２００９；１１２（２）：４９０−５０６．
【非特許文献１７】Ｉｓｈｉｄａ Ｍ，Ｍｉｋａｍｉ Ｓ，Ｋｉｋｕｃｈｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ． Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＭＭＰ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｕｐｐｅｒ ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１０；３１（２）：２８７−２９５．
【非特許文献１８】Ｒａｙ Ｓ，Ｓｗａｎｓｏｎ ＨＩ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｙ ＴＣＤＤ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ：ａ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｅｖｅｎｔ？Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９；７７（４）：６８１−６８８．
【非特許文献１９】Ｋｎｅｒｒ Ｓ，Ｓｃｈｒｅｎｋ Ｄ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌｓ．Ｍｏｌ Ｎｕｔｒ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ．２００６；５０（１０）：８９７−９０７．
【非特許文献２０】Ｊｏｈｎ ＡＲ，Ｂｒａｍｈａｌｌ ＳＲ，Ｅｇｇｏ ＭＣ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ．Ｂｒ Ｊ Ｓｕｒｇ．２００８；９５（３）：２８１−２９３．
【非特許文献２１】Ｒｏｕｋｏｓ ＤＨ，Ｔｚａｋｏｓ Ａ，Ｚｏｇｒａｆｏｓ Ｇ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｒｎｓ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｒｅｇａｒｄｉｎｇ ｔａｉｌｏｒｅｄ ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００９；９（１０）：１４１３−１４１６．
【非特許文献２２】Ｅｎｇｌｉｓｈ ＢＣ，Ｐｒｉｃｅ ＤＫ，Ｆｉｇｇ ＷＤ．ＶＥＧＦ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ： ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００９；８（１３）：１２１４−１２２５．
【非特許文献２３】Ｌｏｇｅｓ Ｓ，Ｍａｚｚｏｎｅ Ｍ，Ｈｏｈｅｎｓｉｎｎｅｒ Ｐ，Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ Ｐ．Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｒ ｆｕｅｌｉｎｇ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２００９；１５（３）：１６７−１７０．
【非特許文献２４】Ｅｂｏｓ ＪＭＬ，Ｌｅｅ ＣＲ，Ｃｒｕｚ−Ｍｕｎｏｚ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２００９；１５（３）：２３２−２３９．
【非特許文献２５】Ｐａｅｚ−Ｒｉｂｅｓ Ｍ，Ａｌｌｅｎ Ｅ， Ｈｕｄｏｃｋ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｅｌｉｃｉｔｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒｓ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｏｃａｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｔａｎｔ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２００９；１５（３）：２２０−２３１．
【非特許文献２６】Ｑｕｉｎｔａｎａ ＦＪ，Ｂａｓｓｏ ＡＳ，Ｉｇｌｅｓｉａｓ ＡＨ，ｅｔ ａｌ． Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｔ（ｒｅｇ）ａｎｄ Ｔ（Ｈ）１７ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５３（７１９１）：６５−７１．
【非特許文献２７】Ｈｅｎｒｙ ＥＣ，Ｂｅｍｉｓ ＪＣ，Ｈｅｎｒｙ Ｏ，Ｋｅｎｄｅ ＡＳ，Ｇａｓｉｅｗｉｃｚ ＴＡ．Ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈａｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｇｏｎｉｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００６；４５０（１）：６７−７７．
【非特許文献２８】Ｂｒａｕｚｅ Ｄ，Ｗｉｄｅｒａｋ Ｍ， Ｃｗｙｋｉｅｌ Ｊ，Ｓｚｙｆｔｅｒ Ｋ，Ｂａｅｒ−Ｄｕｂｏｗｓｋａ Ｗ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｇａｎｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｈＲ，ＡｈＲＲ，ＡＲＮＴ，Ｈｉｆ１ａｌｐｈａ，ＣＹＰ１Ａ１ ａｎｄ ＮＱＯ１ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．２００６；１６７（３）：２１２−２２０．
【非特許文献２９】Ｂｅｒｍｕｄｅｚ ｄｅ Ｌｅｏｎ Ｍ，Ｇｏｍｅｚ Ｐ，Ｅｌｉｚｏｎｄｏ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｂｅｔａ−ｎａｐｈｔｈｏｆｌａｖｏｎｅ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ Ｄｐ７１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．２００６；１７５９（３−４）：１５２−１５８．
【非特許文献３０】Ｏｋｉｎｏ ＳＴ，Ｐｏｏｋｏｔ Ｄ，Ｂａｓａｋ Ｓ，Ｄａｈｉｙａ Ｒ．Ｔｏｘｉｃ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｌｉｇａｎｄｓ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ Ｒｅｓ（Ｐｈｉｌａ Ｐａ）．２００９；２（３）：２５１−２５６．
【非特許文献３１】Ｍｏｒｒｏｗ Ｄ，Ｑｉｎ Ｃ，Ｓｍｉｔｈ Ｒ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＬＮＣａＰ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４；８８（１）：２７−３６．
【非特許文献３２】Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ ＪＴ，Ｓｌｏｂｂｅ Ｌ，Ｌａｎｓｂｅｒｇｅｎ ＧＷ，Ｓａｆｅ Ｓ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ Ｍ．２，３，７，８−Ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ａｎｄ ｄｉｉｎｄｏｌｙｌｍｅｔｈａｎｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ １Ａ１，１Ｂ１，ａｎｄ １９ ｉｎ Ｈ２９５Ｒ ｈｕｍａｎ ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．２００１；６１（１）：４０−４８．
【非特許文献３３】Ｅｌｉｚｏｎｄｏ Ｇ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｓａｌｇｕｅｒｏ Ｐ，Ｓｈｅｉｋｈ ＭＳ，ｅｔ ａｌ．Ａｌｔｅｒｅｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｔ ｔｈｅ Ｇ（２）／Ｍ ｐｈａｓｅｓ ｉｎ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｕｌｌ ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ．Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００；５７（５）：１０５６−６３．
【非特許文献３４】Ｐｕｇａ Ａ，Ｍａｒｌｏｗｅ Ｊ，Ｂａｒｎｅｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．２００２；１８１−１８２：１７１−７．
【非特許文献３５】Ｍａｒｌｏｗｅ ＪＬ，Ｋｎｕｄｓｅｎ ＥＳ，Ｓｃｈｗｅｍｂｅｒｇｅｒ Ｓ，Ｐｕｇａ Ａ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｓｐｌａｃｅｓ ｐ３００ ｆｒｏｍ Ｅ２Ｆ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ａｎｄ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ Ｓ ｐｈａｓｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４；２７９（２８）：２９０１３−２２．
【非特許文献３６】Ｋａｊｔａ Ｍ，Ｗｏｊｔｏｗｉｃｚ ＡＫ，Ｍａｃｋｏｗｉａｋ Ｍ，Ｌａｓｏｎ Ｗ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ：ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．２００９；１５８（２）：８１１−８２２．
【非特許文献３７】Ｓｉｎｇｈ ＮＰ，Ｎａｇａｒｋａｔｔｉ Ｍ，Ｎａｇａｒｋａｔｔｉ Ｐ．Ｐｒｉｍａｒｙ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｅｃｏｍｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｕｐｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００８；７３（６）：１７２２−１７３５．
【非特許文献３８】Ｐａｒｋ Ｋ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ＫＡ，Ｈｕａｎｇ Ｇ，Ｅｌｆｅｒｉｎｋ ＣＪ． Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｔｏ Ｆａｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５；６７（３）：６１２−２２．
【非特許文献３９】Ｊｕｘ Ｂ，Ｋａｄｏｗ Ｓ，Ｅｓｓｅｒ Ｃ．Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔａｃｔ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｒｅ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｉｎ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｕｌｌ ｍｉｃｅ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；１８２（１１）：６７０９−６７１７．
【非特許文献４０】Ｓｕｔｔｅｒ ＣＨ，Ｙｉｎ Ｈ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．ＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｌｏｃｋｓ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００９；１０６（１１）：４２６６−４２７１．
【非特許文献４１】Ｈａｌｌ ＪＭ，Ｂａｒｈｏｏｖｅｒ ＭＡ，Ｋａｚｍｉｎ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｒｙｌ−Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｎｄ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００９．Ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２００３２１９５［Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｊａｎｕａｒｙ ２７，２０１０］．
【非特許文献４２】Ｏｅｎｇａ ＧＮ，Ｓｐｉｎｋ ＤＣ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ＤＯ．ＴＣＤＤ ａｎｄ ＰＣＢｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ．２００４；１８（６）：８１１−９．
【非特許文献４３】Ｊａｎａ ＮＲ，Ｓａｒｋａｒ Ｓ，Ｉｓｈｉｚｕｋａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ａｎｄ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ＬＮＣａＰ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９；２５６（３）：４６２−８．
【非特許文献４４】Ｍｏｒｒｏｗ Ｄ，Ｑｉｎ Ｃ，Ｓｍｉｔｈ Ｒ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＬＮＣａＰ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００４；８８（１）：２７−３６．
【非特許文献４５】Ｖｅｌｄｈｏｅｎ Ｍ，Ｈｉｒｏｔａ Ｋ，Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｆ ＡＭ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｎｋｓ ＴＨ１７−ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｔｏｘｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５３（７１９１）：１０６−１０９．
【非特許文献４６】Ｋｏｌｉｏｐａｎｏｓ Ａ，Ｋｌｅｅｆｆ Ｊ，Ｘｉａｏ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｒｙｌｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｆｅｒｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００２；２１（３９）：６０５９−７０．
【非特許文献４７】Ｋａｓｈａｎｉ Ｍ，Ｓｔｅｉｎｅｒ Ｇ，Ｈａｉｔｅｌ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＡｈＲ） ａｎｄ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ（ＡＲＮＴ）ｉｎ ｆｅｔａｌ，ｂｅｎｉｇｎ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ，ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ．１９９８；３７（２）：９８−１０８．
【非特許文献４８】Ｇｌｕｓｃｈｎａｉｄｅｒ Ｕ，Ｈｉｄａｓ Ｇ，Ｃｏｊｏｃａｒｕ Ｇ，ｅｔ ａｌ．ｂｅｔａ−ＴｒＣＰ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｖｉａ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１０；５（２）：ｅ９０６０．
【非特許文献４９】Ｐｅｎｇ Ｔ，Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｍａｏ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００９；１５（１４）：１７１９−１７２９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
現在、癌療法の市場において２つの重大な課題がある。第１には重度の副作用および毒性であり、第２には非常に限定された有効性である。その結果、癌は米国および世界の地域において未だ死亡原因の第２位である。
【００１２】
細胞毒性および非細胞毒性の両方のカテゴリーにおいて、癌に対する現在の治療薬の大多数は人体にとっては異質物である化学物質である。その結果、身体は利用可能な代謝経路を何でも使用して化学物質を取り除こうと懸命に努力する。身体はこれらの異質な化学物質を代謝する自然かつ安全な方法を有していないため、いくつかの非特異的な酸化反応が代謝の主な手段として使用される。その結果、除去過程において多数の化学的に活性な中間体またはラジカルを不可避的に生成し、それは限定されるものではないが身体の免疫系に含まれる正常な細胞物質をも攻撃し、重度の副作用、毒性、および免疫系の低下をもたらし得る。多くのこれらの薬剤は、天然物ではなく人為的に設計されたものであるため、身体において人間が予測した標的よりも（限定されるものではないが、受容体、酵素、その他のタンパク質を含む）その他の細胞性因子と結合かつ相互作用する可能性が高い。これらの「非特異的」な結合および相互作用は、副作用の著しい可能性をもたらす原因である。
【００１３】
癌療法のための細胞毒性薬の有効性は、限定されるものではないが免疫系に含まれる正常な細胞および組織に対する細胞毒性薬の無差別な毒性によって、大部分が制限されている。免疫系の低下は、予想される通り、癌細胞に対する秩序立った攻撃を開始することを不可能にする。癌細胞が生存するために重要な特定の機能を標的とした非細胞毒性薬の有効性は、それらの単一機構に基づく戦略によって制限されている。しかしながら、癌の重要な特徴は、癌の絶え間ない遺伝子変化または突然変異である。生存するために治療薬が標的とする特定機能にもはや依存しない状態まで癌細胞が変化すると、薬剤の有効性は直ちに失われ得る。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本状況において、癌に対する統合された攻撃を構築し、癌根絶の可能性に向けて個々の癌細胞を除去し、「非特異的」な相互作用の可能性を制限し、かつ低副作用に向けて代謝自体を安全に行うために、効力が持続するよう複数の対抗能力を用いて癌を攻撃すると同時に免疫系に役立つ新規の治療薬の出現が求められている。新たに発見されたＡｈ受容体内因性リガンドであるＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、記載された厳しい要件を満たし得るものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の最も重要な利点は、癌細胞の絶え間ない遺伝子変化の結果に立ち向かうＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける複数の癌攻撃能力にある。ＩＴＥは血管新生を抑制することが実証されてきた［７］。文献には、（ＩＴＥではない）その人工的リガンドをリガンドとしたＡｈ受容体（ＡｈＲ）は、細胞分裂の抑制［３５，３６，３７］、プログラムされた細胞死（アポトーシス）の促進［３８，３９，４０］、細胞分化の誘導［４１，４２，４３］、およびエストロゲン［６，４４］およびアンドロゲン［４５，４６］の作用の阻害が可能であると示されていた（これらの人工的リガンドの悪影響の可能性は、文献中では差し当たり無視されている）。最近では、（ＩＴＥではない）人工的リガンドをリガンドとしたＡｈＲが、病原体および癌に対する攻撃の構築において、免疫系にとって有用である免疫Ｔ細胞の分化を誘発し得ることが実証された［２８，４７］。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つがＡｈＲに結合するときに、その血管新生阻害特性に加えて言及した１以上の機能も有する場合、複数の癌攻撃能力によってその癌治療効力は持続可能となる。ＩＴＥまたはその類似体の１つにおける効力持続性とさらに免疫系を刺激するその潜在能力は、癌療法における有効性を劇的に増強するだけでなく、癌根絶を可能なものにし得る。図面および実施例において示されるデータは、上述した理論的分析を明確に立証する。
【００１６】
市場においてその他のリガンドをしのぐＩＴＥを使用することの非常に大きな利益としては、その複数の癌攻撃能力に裏付けられるその持続可能な有効性に加えて、その低い副作用の可能性にある。人体にとって異質物であり、かつ人為的に設計された、現在の癌療法において使用されているこれらのＡｈＲ人工的リガンドおよび薬剤を含むこれらの化学物質とは対照的に、ＩＴＥは自然界において設計された天然ホルモンであるため、自然の力によってその代謝は自然かつ安全な方法で設計および実行されるであろう。したがって、その代謝過程は身体において問題を引きこす可能性は少ないかまたは皆無であろう。これは、その代謝によって引き起こされる副作用が少ないであろうことを意味している。低副作用の可能性に関する他の重要な理由としては、天然ホルモンのその受容体（ＡｈＲ）への結合は、人為的ではなく自然界において設計されているため、非常に特異的かつ正確であることである。人為的に設計したこれらの化学物質ではない天然ホルモンであるＩＴＥにおいては、副作用の重大な機会となる「非特異的」な問題を引き起こすその他の細胞性因子との結合および相互作用の可能性は低いであろう。図面および実施例において記載された実験データが論点を支持している。
【００１７】
癌療法における他の重要な課題は、治療薬の効力を増強させ、かつ副作用を減少させるよう、正常細胞ではなく癌細胞に特異的に作用する治療薬が非常に望まれていることにある。この種の特異性は、薬剤が結合する標的分子が正常細胞内よりも癌細胞内に多い場合、達成可能である。ＩＴＥおよびその類似体に対する標的分子はＡｈＲである。文献では、ＡｈＲは患者の膵臓癌組織において高濃度であるが、調査された全ての正常な膵臓組織においては非常に希薄であることが報告されている［４８］。同様に、高濃度のＡｈＲは前立腺癌［４９，５０］および胃癌［５１］においても報告されている。これは、少なくともこれらの報告された種類の癌において、ＩＴＥおよびその構造類似体の治療特異性を達成可能であることを意味している。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、ＩＴＥ投与における投与量、経路、およびスケジュールに反応したヒト癌細胞株ＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制を示している。図１Ａは、０（溶媒、ＤＭＳＯ）、０．１、１、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（２８日間連続して１２時間おきに腹腔内注射）のＩＴＥ投与量に反応したＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制の程度を示しており（平均＋ＳＥＭ、ｎ＝８）、図１Ｂは、マウスの体重変化によって判断した担異種移植片マウスの治療に対する低毒性反応を示しており（平均＋ＳＥＭ、ｎ＝８）、図１Ｃは、示されるように使用した溶媒、投与レベル、およびＡＵＣ’ｓ（曲線下面積）を有する、静脈注射、腹腔内注射、および経口投与でのＩＴＥ投与（単回投与）におけるＰＫ（薬物動態）特性を示しており、および図１Ｄは、規定されるとおり、異なる投与量（４０または８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．）、スケジュール（１日１回または２回）、および経路（腹腔内または経口）でのＩＴＥ投与によるＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制を示している。
【図２】図２は、ヒトの前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ）、肝癌細胞株（ＨｅｐＧ２）、卵巣癌細胞株（ＯＶＣＡＲ−３）、および乳癌細胞株（ＭＣＦ−７）の異種移植片の増殖抑制における、ＩＴＥ（菱型）またはＩＴＫ（ＩＴＥ構造類似体の１つ、正方形）の有効性（１日１回の腹腔内注射）を示している。図２Ａは、両方とも２０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥまたはＩＴＫによるＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制を示しており、図２Ｂは、両方とも８０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥまたはＩＴＫによるＨｅｐＧ２異種移植片の増殖抑制を示しており、図２Ｃは、両方とも８０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥまたはＩＴＫによるＯＶＣＡＲ−３異種移植片の増殖抑制を示しており、および図２Ｄは、２０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥによるＭＣＦ−７異種移植片の増殖抑制を示している。
【図３】図３は、同系マウス・ルイス肺癌（ＬＬＣ）モデルにおけるＩＴＥ（１日１回の腹腔内注射）による癌の抑制および根絶を示している。図３Ａは、ＬＬＣ腫瘍の積極的増殖、および２０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥ投与量における腫瘍増殖抑制を示しており、図３Ｂでは、８０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥ（１日１回の腹腔内注射）によりＬＬＣ腫瘍のより良好な増殖抑制を示したため、治療プログラムの２８日間にさらにもう１週間の注射後の観察を追加して終了することが可能であった。図３Ｃは、ＩＴＥグループ（正方形）からの１匹のマウス（Ｎｏ．３３、菱型）を示しており、それは治療段階の開始からすぐに腫瘍の縮小が始まり、治療の１３日目において腫瘍が存在しなくなり、残りの治療段階の間腫瘍が存在しない状態を維持し、観察段階の全１ヶ月間なお腫瘍が存在しないままであった。図３ＤはＩＴＥ（正方形）および溶媒コントロール（丸）のグループと合わせて、マウスＮｏ．３３（菱型）の体重変化を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、特別に定義されない限り、本発明の属する技術分野における当業者によって一般に使用される意味と同じである。本明細書において記載されるものと類似または同等のその他の材料および方法は、本発明の実施または試験においても使用可能であるが、好ましい材料および方法のみが以下に記載されていることを理解されたい。
【００２０】
本発明は、内因性アリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）のリガンドであるＩＴＥまたはその構造類似体の１つを用いて、癌を介入治療または根絶する方法に関するものである。ＩＴＥまたはその類似体（活性成分）の１つは、１以上の薬学的に許容される担体（担体系）を用いて調合可能である。担体系は、好ましくは無菌および無毒であり、活性成分を投与するのに有用な不活性物質から成る。担体系は活性成分と相溶性がなければならず、固体、液体、または気体の形態であってもよい。そして、適切に調合された活性成分は、局所的、経腸的、または非経口的に癌を患う被験者に投与され得る。それは、例えばクリーム、カプセル、タブレット、トローチ、または注入可能な形状で提供され得る。防腐剤などのその他の相溶性のある成分は、必要に応じて活性成分と共に調合可能である。
【００２１】
好ましい介入治療プログラムでは、前立腺癌、肝癌、肺癌、卵巣癌、および乳癌を患う被験者は、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを用いた治療を好ましくは受けることができる。しかしながら、これは決して治療範囲を限定するものではない。潜在的な癌根絶に向けて、癌を攻撃し、かつ個々の癌細胞を除去するための、ＩＴＥおよびその類似体の１つが有する複数の癌攻撃能力と、さらに被験者の免疫系を刺激する可能性を考慮すると、治療範囲は将来の試験において急速に拡大されることが想定される。
【００２２】
好ましい介入治療プログラムでは、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける有効な用量範囲は、規定された投与計画のもとで、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの被験者における血中濃度を測定して濃度−時間特性を確立し、実施例において示されるように、試験の期間に形成された同様の濃度‐時間特性と癌の抑制または根絶に対する効果との間で確立された相関を調査し、かつ被験者に対する毒性の可能性と被験者における健康状態または身体的耐久性から達成される治療効果の平衡を保つことで決定される。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの投与回数は、上記の用量範囲の決定における記載と同様にして決定する。現在、１日１回のＩＴＥの経腸的または非経口的な投与が好ましいとして提案されている。投与は被験者に癌が存在しなくなるまで継続され得る。維持量は癌の完全な除去または根絶を確実にするために被験者に癌が存在しなくなった後に提供されることが好ましく、維持量の継続期間は試験によって方向付けられる。
【００２３】
他の好ましい介入治療プログラムでは、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、１以上のその他の癌治療薬と組み合わせて投与可能であり、それは好ましくはＡｈＲ以外の様々な治療標的に向けたものである。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、１以上の前記その他の薬剤から独立して、または共に調合することが可能である。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、１以上の前記その他の薬剤と同じかまたは異なるスケジュールで投与可能である。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つと１以上のその他の癌治療薬との割合は、適切に設定された試験によって方向付けることが可能である。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つと１以上のその他の癌治療薬との治療の組み合わせにより、有効性がさらに増強し得る。組み合わせ治療の利点を示した例は多数存在する。
【００２４】
これらの好ましい介入治療プログラムにおいて、活性成分は以下の構造式（構造式１）を有するアリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）の内因性リガンドであるＩＴＥである。
【００２５】
【化１】
【００２６】
これらの好ましい介入治療プログラムにおいて、活性成分はＩＴＥの２つの特に有用な構造類似体から選択可能である。ケトンまたはチオールエステルの官能基が、ＩＴＥ構造中で生物系において多数のエステラーゼにより容易に標的とされる通常の（酸素）エステルに取って代わるため、前記２つの類似体は被験者の系において、類似体の安定性を増加し、そして類似体の半減期を引き伸ばすことが想定される。引き伸ばされた半減期は、癌の介入治療においてより高い有効性および／またはより長い効力の持続に転換され得る。ＩＴＥのケトン類似体（したがってＩＴＫと称する）を以下の構造式（構造式２）に示す。
【００２７】
【化２】
【００２８】
ＩＴＥのチオール（Ｓ、硫黄）エステル類似体（したがってＩＴＳＥと称する）の構造式は以下の通りである（構造式３）。
【００２９】
【化３】
【００３０】
これらの好ましい介入治療プログラムでは、活性成分はＩＴＥのその他の構造類似体からさらに選択可能であり、以下の構造式（構造式４）によって定められる。
【００３１】
【化４】
【００３２】
式中、
ＸおよびＹは、独立して、Ｏ（酸素）またはＳ（硫黄）であり、
ＲＮは水素、ハロ、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイル、ハロアルカノイル、または窒素保護基から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ（−ＯＨ）、チオール（−ＳＨ）、シアノ（−ＣＮ）、ホルミル（−ＣＨＯ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ（−ＮＯ２）、アルコキシ、ハロアルコキシ、チオアルコキシ、アルカノイル、ハロアルカノイル、またはカルボニルオキシから選択され、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、もしくはチオアルコキシから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【００３３】
【化５】
【００３４】
であり、
式中、Ｒ８は、水素、ハロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【００３５】
【化６】
【００３６】
であり、
Ｒ９は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【００３７】
【化７】
【００３８】
であり、
Ｒ１０は、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７はまた、独立して、
【００３９】
【化８】
【００４０】
であり、
式中、Ｒ１１は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、またはアルキニルから選択され得る。
【実施例】
【００４１】
前臨床動物試験からの実例が本発明の実施形態にさらに役立つであろう。ヒト前立腺癌の増殖抑制におけるＩＴＥの使用（実施例１）、より多くのヒト癌型の増殖抑制におけるＩＴＥまたはＩＴＫ（ＩＴＥ類似体の１つ）の使用（実施例２）、癌根絶の可能性におけるＩＴＥの使用（実施例３）、およびＩＴＥ毒性モニタリング（実施例４）を説明する。
【実施例１】
【００４２】
材料
生後６〜８週間の雄のＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ハツカネズミ）を、イヤーコーディングによって個々に標識した。１匹の動物が各々のポリカーボネートのケージ（３００ｍｍ×１８０ｍ×１５０ｍｍ）内に入るように、動物を２０〜２６℃の一定温度、および４０〜７０％の湿度において層流室で維持した。敷料はトウモロコシの穂軸であり、それを週に２回変えた。動物は全研究期間において、無菌の乾燥顆粒飼料および無菌の飲料水を自由に利用できた。
【００４３】
ＩＴＥは神戸天然物化学株式会社（ＫＮＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）（日本、東京所在）によって合成された。化合物のロット番号は０８６−００９−２−１（ＡｈＲ製剤に対するロット番号：ＡＨＲ−００１）である。ＤＭＳＯ（カタログ番号：０２３１−５００ＭＬ）はＡＭＲＥＳＣＯ社（アメリカ合衆国、オハイオ州、ソロン所在）において製造された。ラブラゾールをＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ社（フランス、サン−プリースト所在）から購入し、ＰＥＧ ４００はＳｉｇｍａ社（アメリカ合衆国、ミズーリ州、セントルイス所在）から供給された。
【００４４】
方法
有効性研究
本研究における動物の取り扱い、世話、および処理に関連する全ての手順は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）の指針に基づいて、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（アメリカ合衆国、カリフォルニア州、サンタクララ所在、私たちが雇用した開発業務受託機関）の動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された指針に従って実施した。動物は、運動性、飼料および水の消費、体重の増減（総体重を週に２回測定した）、目／毛の艶消具合、およびその他のあらゆる異常効果などの、腫瘍増殖および薬剤治療が正常な行動に与えるあらゆる影響を調査した。死亡および観察される臨床兆候を、各グループ内における動物の数を基にして記録した。腫瘍体積が３，０００ｍｍ３を超える個々の動物、または平均腫瘍体積が２，０００ｍｍ３を超えるグループの動物を安楽死させた。さらに、重度の苦痛および／または痛みの兆候を示し、治療開始時の体重から体重が２０％を超えて減少し、または十分な飼料もしくは水の摂取能力を喪失した動物は、人道的犠牲とした。
【００４５】
ヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関、アメリカ合衆国、バージニア州、マナッサス所在）を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地において、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で３７℃にて単層培養として生体外で維持した。腫瘍細胞を週に２回、定期的に継代培養した。対数増殖期の細胞を腫瘍接種のために採取して数えた。
【００４６】
腫瘍成長のために、ＬＮＣａＰ細胞（１×１０７）／０．１ｍｌＰＢＳを、各マウスの右側腹部の皮下に接種した。平均腫瘍体積が約１５０ｍｍ３に到達すると、担腫瘍マウスをそれらの腫瘍体積に基づいて均質ブロックに分け、続いて各ブロックのマウスを無作為に治療グループに振り分けた（すなわち、初期の平均腫瘍体積の差異による治療に対する腫瘍反応の変動を最小限にすることが可能である）。各治療グループは８つの担腫瘍マウスから構成された。溶媒（ＤＭＳＯ）または溶媒中のＩＴＥの特定の投与量を、示されるように２８日間連続して１日に１回または２回、ｉ．ｐ．（腹腔内）注射またはｐ．ｏ．（経口）投与によって、マウスに投与した。
【００４７】
腫瘍体積はキャリパーを使用して２つの寸法を週に２回測定し、体積を式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２を用いて算出した。式中、ａおよびｂはそれぞれ腫瘍の長径および短径（ｍｍ）である。そして、腫瘍体積を使用して、ＴＧＩ（腫瘍増殖抑制率）およびＴＧＤ（腫瘍増殖遅延）の両方を計算した。ＴＧＩを、ＴＧＩ＝ΔＴ／ΔＣ×１００％を用いて決定した。式中、ΔＴは、薬剤処理グループに対する特定の観察日と治療を開始した日（１日目）における平均腫瘍体積間の差である。一方で、ΔＣは対象グループに対して測定された同様の差である。ＴＧＤを、ＴＧＤ＝Ｔ−Ｃによって算出した。式中、Ｔは薬剤処理グループにおいて、腫瘍が所定の平均腫瘍体積に到達するのに必要な期間（日数）であり、Ｃは対象グループにおいて、同様の体積に到達するのに必要な期間（日数）である。腫瘍重量は、体積１，０００ｍｍ３を重量１，０００ｍｇと同等と見なして得た。その後、純体重は、対応する腫瘍を有する総体重から腫瘍重量を差し引いて得た。
【００４８】
各時点における各グループの腫瘍体積に関する平均および標準誤差（ＳＥＭ）を含む要約統計量を提供する。グループ間の腫瘍体積の差異における統計的分析を、示されるように、最善の治療時点または最終の投与日におけるデータセットに基づいて実施した。腫瘍体積データを対数に変換し、一元配置分散分析法を用いて評価し、有意性が認められると続いてチューキー法を用いて評価した。全てのデータをＳＰＳＳ１６．０を用いて分析し、ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとした。
【００４９】
ＰＫ研究
雄のヌードマウスをＰＫ（薬物動態）研究においても使用した。静脈注射に関しては、１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥを、尾静脈からＤＭＳＯを溶媒として用いて投与した。腹腔内注射に関しては、１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥを、左下腹部からＤＭＳＯを用いて送達した。経口投与では、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥを、ラブラゾール：ＰＥＧ４００（２：８、ｖ／ｖ）の溶媒を用いて強制経口投与した。全１５匹のマウスは各投与レベルにおいて単回投与を受け、投与マウスの３匹に１匹を使用して、各時点における血液試料を採取した（０、０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、８、２４時）。動物をそれぞれ２回サンプリングするように交代させたが、２回のサンプリング時間の間の間隔は少なくとも１１０分であった。動物を手作業にてイソフルランで麻酔して拘束した。各時点における約１５０μｌの全血を、Ｋ２−ＥＤＴＡチューブ内に（後眼窩穿刺によって）採取する。血液試料をサンプリング後１５分以内に、冷却して血漿に処理した（４，０００ｇ、５分、４℃）。血漿試料を分析するまで−８０℃で貯蔵した。２０μｌの一定分量の血漿サンプルを２０μｌの内部標準（グリピジド、５００ｎｇ／ｍｌ／ＡＣＮ、抽出効率用）と共に、１２０μｌのＡＣＮ（アセトニトリル）に添加した。混合物を１，５００ｒｐｍにて２分間ボルテックスし、その後、１２，０００ｒｐｍにて５分間遠心分離した。５μｌの上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステム（ＡＰＩ４０００、アメリカ合衆国、カリフォルニア州、フォスターシティ所在）に注入した。Ｇｅｍｉｎｉ−Ｃ１８カラム（２．０×５０ｍｍ、５μｍ）を使用し、ＬＣ（液体｛えきたい｝クロマトグラフィー）を０．４５ｍｌ／分の流速にて、以下のプログラムで動作させた。
時間（分） ０ ０．２ １．８ ２．８ ２．９ ４
ポンプＡ（％）９５ ９５ ２ ２ ９５ 停止
ポンプＢ（％） ５ ５ ９８ ９８ ５ 停止
【００５０】
ポンプＡは、１ｍＭＮＨ４ＯＡｃ（酢酸アンモニウム）／水＋０．０２５％ＦＡ（ギ酸）用であり、一方で、ポンプＢは、１ｍＭＮＨ４ＯＡＣ／アセトニトリル＋０．０２５％ＦＡ用であった。質量分析における負イオン化過程はＡＰＣＩ（大気圧化学イオン化）モードで操作し、一方で、ＭＲＭ（多重反応モニタリング）モードで検出した。ＩＴＥは、２．５分のＬＣ保持時間、かつ２８５．０ｍ／ｚ（衝突前）および１４２．０ｍ／ｚ（衝突後）の２つの質量ピークを認識して特定し、一方で内部標準は２．３５分のＬＣ保持時間、かつ４４４．３ｍ／ｚ（衝突前）および３１９．３ｍ／ｚ（衝突後）の２つの質量ピークを認識して特定した。マウスの血漿とＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムとを混合した後、抽出／沈殿過程の両方を介して実行され、ＩＴＥの一連の既知量から毎回作成される検量線を用いてＩＴＥを定量した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｖ５．２ 統計ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、アメリカ合衆国、カリフォルニア州所在）を使用し、非コンパートメントモデルを用いてＣｍａｘ、Ｔｍａｘ、Ｔｌ／２、およびＡＵＣ（曲線下面積）などのＰＫパラメータを作成した。
【００５１】
結果および考察
１、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥ投与による治療（２８日間連続して１２時間おきに腹腔内注射、溶媒：ＤＭＳＯ、注射体積：０．５ｍｌ／ｋｇ ｂ．ｗ．）によって、明確な投与量−効果関係を有する著しい抗癌活性がもたらされた（図１Ａ）。ＴＧＩ’ｓ（腫瘍増殖抑制率）は一連の投与量に対し、２８日目においてそれぞれ５２％、３１％、２６％、および２２％（ｎ＝８；ｐ＜０．０４８、０．００７、０．００４、および０．００４）と算出された。腫瘍サイズ６００ｍｍ３におけるＴＧＤ（腫瘍増殖遅延）は、それぞれの一連の投与量において３、１０、１２、および１６日に到達した。０．１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥは、統計的に有意な抗癌活性をもたらさなかった（ｎ＝８、２８日目においてＴＧＩ＝７４％、ｐ＜０．６２３）。担腫瘍マウスにおける体重変化から判断すると、ＩＴＥ処理は著しい毒性反応を引き起こさないようであった（図１Ｂ）。
【００５２】
ＩＴＥの薬物動態（ＰＫ）挙動および直接的なさらなる有効性に関する研究を理解するために、ＩＴＥを異なる経路および異なるレベルにてヌードマウスに投与した。ＩＴＥ ＰＫ特性を図１Ｃに示す。ボーラス静脈注射によって送達される１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥ／ＤＭＳＯは、推定半減期が６分であり非常に早く分解した。該経路に対する推定ＡＵＣは２５６ｈｒ.ｎｇ／ｍｌであった。腹腔内注射によって投与されたＩＴＥ／ＤＭＳＯでは、その半減期は改善され、その一方で、吸収効率は静脈注射と比較して１０％を下回る。例えば、腹腔内注射における、１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥの半減期は、それぞれ１．１３、１．６１、および５．１７時間であるのに対し、ＡＵＣは一連の投与量においてそれぞれ１９７、３３２、４９９ｈｒ.ｎｇ／ｍｌであった。経口経路によって送達されるＩＴＥ／ラブラゾール：ＰＥＧ４００（２：８、ｖ／ｖ）は、さらにより低い吸収効率（約１％）を有し、一方では腹腔内注射によって達成されたレベルの半減期を維持した。投与レベルが４０および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．の経口投与によるＡＵＣは、それぞれ１０７および９７ｈｒ.ｎｇ／ｍｌであった（図１Ｃ）。
【００５３】
ＰＫ研究からの結果に基づいて、ＩＴＥ投与スケジュール、投与レベル、および経路をさらに調査した。１日当たりの全投与量を同じ量に維持すると、腹腔内経路における１日１回または２回の投与スケジュールは、癌増殖の抑制において同等の有効性をもたらした（例えば、８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．を１日１回、対４０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．を１日２回、図１Ｄ）。さらにＩＴＥ投与量を８０ｍｇ／ｋｇ（１日２回の腹腔内注射）に引き上げると、ＴＧＩは４０ｍｇ／ｋｇ（１日２回の腹腔内注射）からさらに改善されたように思われる。８０ｍｇ／ｋｇ（１日２回の腹腔内注射）のＴＧＩが今までに得られた結果の中で最良であり、例えば２８日目において１２％、および最終日において１６％であった。８０ｍｇ／ｋｇの経口経路を介したＩＴＥの吸収効率は、ＡＵＣの観点から１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射よりもかなり低いが（図１Ｃ）、最初の３週間くらいの間は、癌増殖抑制の観点において、８０ｍｇ／ｋｇの毎日の経口投与は４０ｍｇ／ｋｇの毎日の腹腔内注射と同様であった（例えば、２４日目において、ＴＧＩ＝４６％）。ＰＫ研究から、８０ｍｇ／ｋｇの経口投与におけるＩＴＥの血漿レベルは、最初の数時間は１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射よりも低いが、注射後３〜８時間で１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射、さらには４０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射よりも高くなった（図１Ｃ）。これが最初の３週間の経口投与における結果の裏にある理由であろう。経口投与の場合、その治療効果はなぜか腹腔内注射よりも長続きせず、治療の最後に向かい、終了を宣言する（図１Ｄ）。
【実施例２】
【００５４】
材料および方法
ヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰの培養および接種を実施例１に示すように行った。ヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ）の操作は、（ＲＰＭＩ−１６４０の代わりに）ＤＭＥＭ溶媒を使用し、Ｌ−グルタミンを使用せず、そして２×１０６の細胞を用いて雌のヌードマウスに接種したことを除いて、ＬＮＣａＰと同様であった。ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ−３（ＡＴＣＣ）の取り扱いは、ＤＭＥＭ溶媒を使用し、５×１０６の細胞を使用して雌のヌードマウスの接種に使用したことを除いて、ＬＮＣａＰと同様であった。ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７（ＣＬ−１６１）はＭＣＦ−７（ＡＴＣＣ）からのクローン化株であり、その異種移植片の増殖にはエストロゲンの外生的供給をもはや必要としない。ＭＣＦ−７細胞の培養は、ＲＰＭＩ−１６４０溶媒と置き換えるために、１ｍＭの非必須｛ひ ひっす｝アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、および０．０１ｍｇ／ｍｌのウシインスリンが添加されたＭＥＭ溶媒を使用することを除いて、ＬＮＣａＰと同様であった。ＭＣＦ−７細胞の接種は、腫瘍成長のための０．１ｍｌのＰＢＳとマトリゲル（１：１）、および雌のマウスの使用を除いてＬＮＣａＰと同様であった。
【００５５】
ＩＴＥ源は実施例１に記載したものと同じである。ＩＴＥ構造類似体の１つである化合物ＩＴＫ（構造式２）はＳｈａｎｇｈａｉ ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ社（中華人民共和国、上海所在）によって合成された。ロット番号はＡｈＲ−ＩＴＫ−００１であった。
【００５６】
結果および考察
ヒト前立腺癌（ＬＮＣａＰ）異種移植｛いしゅ いしょく｝モデルにおいて、ＩＴＫ（ＩＴＥ構造類似体の１つ）は２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）において効果があることが示され、同じ処方計画のＩＴＥよりもさらに良好に機能した（図２Ａ）。ＴＧＩ’ｓ（腫瘍増殖抑制率）は、２８日目において、ＩＴＫおよびＩＴＥに対してそれぞれ５１％（ｐ＜０．００３、ｎ＝８）および６４％（ｐ＜０．０２１、ｎ＝８）であった。ＩＴＫおよびＩＴＥに対するＴＧＤ’ｓ（腫瘍増殖遅延）は、１，０００ｍｍ３の腫瘍体積において、それぞれ１６日および８日であった。
【００５７】
ヒト肝癌（ＨｅｐＧ２）異種移植片の増殖抑制において、８０ｍｇ／ｋｇ（１日１回の腹腔内注射）のＩＴＥおよびＩＴＫの両方は良好な有効性を示した。ＩＴＥおよびＩＴＫの能力は、本モデルにおいて非常に類似するものであった（図２Ｂ）。ＩＴＥおよびＩＴＫに対するＴＧＩ’ｓは、２２日目においてそれぞれ２５％（ｐ＜０．００１、ｎ＝８）および２２％（ｐ＜０．００１、ｎ＝８）であった。ＩＴＥおよびＩＴＫに対するＴＧＤ’ｓは、腫瘍体積８００ｍｍ３において、それぞれ２９日および２６日であった。ＩＴＫグループにおいて８匹のマウスのうち１匹が３２日目に死亡したが、明らかな純体重の減少はなかった（データ表示なし）。
【００５８】
ヒト卵巣癌（ＯＶＣＡＲ−３）の増殖抑制においても、８０ｍｇ／ｋｇ（１日１回の腹腔内注射）のＩＴＥおよびＩＴＫの両方は同様の有効性を示した（図２Ｃ）。ＴＧＩ’ｓは、ＩＴＥおよびＩＴＫに対して、３３日目においてそれぞれ４７％（ｐ＜０．００２、ｎ＝８）および４６％（ｐ＜０．００１、ｎ＝８）であった。ＩＴＥおよびＩＴＫに対するＴＧＤ’ｓは、腫瘍体積８００ｍｍ３において、それぞれ１０日および１３日であった。明らかな準体重の減少はなかった（データ表示なし）。また、ＩＴＫグループにおいて８匹のマウスのうち１匹が３２日目に死亡した。
【００５９】
ヒト乳癌（ＭＣＦ−７）の増殖抑制において、ＩＴＥは少量（２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．、１日１回の腹腔内注射）ではあったが適度な有効性を示した（図２Ｄ）。ＴＧＩはＩＴＥ処理に対して、１９日目に７１％（ｐ＜０．０３１、ｎ＝８）と算出された。５００ｍｍ３の腫瘍体積において、ＩＴＥグループからＴＧＤは３日であることを得た。より良好な増殖抑制および遅延を生じさせるために、投与レベルのさらなる増加が確実に必要であるが、ＩＴＥ処理に対するＭＣＦ−７異種移植片の反応はあった。
【００６０】
本実施例におけるＩＴＥ構造類似体の１つ（ＩＴＫ）の能力は、構造式４によって特定される骨格に基づくＩＴＥ類似体の開発において非常に大きな可能性を立証するものである。さらに、ＩＴＥ構造において、通常の（酸素）エステルに取って変わるチオールエステル官能基を有する類似体は、ＩＴＫ（構造式２）研究の結果を考慮すると特に重要であることが想定される。したがって、構造式３によってまさに特定されるチオール（Ｓ、硫黄）エステルは、ＩＴＳＥと略される。ＩＴＫおよびＩＴＳＥの両方の構造特性は、生物系における、特にＩＴＥ構造の酸素エステル官能基に対する多数のエステラーゼによる攻撃を回避することに役立つであろう。
【実施例３】
【００６１】
材料および方法
マウス・ルイス肺癌細胞株ＬＬＣ（ＡＴＣＣ）は、ＲＰＭＩ−１６４０の代わりにＤＭＥＭの溶媒を使用することを除いて、実施例１においてＬＮＣａＰに対する記載の通りに培養した。生後６〜８週間のそれぞれの雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、３×１０５ＬＬＣ細胞／０．１ｍｌＰＢＳを接種して腫瘍を成長させた。平均腫瘍体積が８０〜１２０ｍｍ３に到達したときにＩＴＥ処理を開始した。全てのその他の材料および方法は実施例１に記載のものと同じであった。
【００６２】
結果および考察
異種移植モデルを使用する利点は、ヒト癌を直接動物において試験できることである。しかしながら、欠点としては、マウスがヒト癌細胞を拒絶しないよう、マウスは免疫システムにおいて欠陥を有さなければならない。したがって、ＩＴＥが免疫系を刺激することでその治療を劇的に強化することが可能であるかを試験するために、このタイプのモデルを使用することは不可能である。そこで、マウス腫瘍細胞を健康な免疫系を有するマウスに接種した同系モデルを使用した。２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）の投与量にてＩＴＥはマウス肺癌の増殖抑制を示す（ｎ＝８、１５日目においてＴＧＩ＝６５％、図３Ａ）一方で、癌の除去または根絶の兆候はなかった。実際、このモデルにおいて腫瘍の増殖が非常に攻撃的であったため、対象グループおよびＩＴＥグループの両方において、苦しむ動物を腫瘍の大きな負担から解放するために早めに実験を終了しなければならなかった。
【００６３】
８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）の投与量において、ＩＴＥは腫瘍の増殖抑制を著しく改善したため、ＩＴＥ処理グループは前回のように早めに終了することなく実験終了時まで維持可能であった（図３Ｂ）。ＩＴＥ処理に対する２０日目でのＴＧＩは４２％（ｎ＝８、ｐ＜０．０３７）であり、１０００ｍｍ３の腫瘍体積におけるＴＧＤは７日間であった。ＩＴＥグループのうちの１匹のマウス（マウスＮｏ．３３）は、ＩＴＥ処理の開始からすぐその腫瘍を縮小させ始め、それはその腫瘍が１３日目においてもはや触知できなくなくなるまで続いた（図３Ｃ）。そのマウスは残りのＩＴＥ処理段階の間（全２８日間）、腫瘍が存在しない状態を保った。２８日間の処理が終了した後、そのマウスにもう１か月与えてその腫瘍の再増殖の可能性を観察した。しかしながら再増殖は起こらず、そのマウスは観察中の全１か月間腫瘍が存在しない状態を保ち、処理による全癌細胞の除去を示唆した（図３Ｃ）。体重変化の観察によって、ＩＴＥグループのマウスＮｏ．３３およびその他のマウスは処理に対して良好な耐性を有することを示唆した（図３Ｄ）。
【００６４】
異種移植モデルでは、完全な腫瘍の除去は、８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）の投与、または１日２回の８０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）投与においても決して起こらなかった。それにより、この同系モデルのマウスにおける免疫系の刺激を議論することが可能であろう。実際には、下記の実施例４の結果によって、低（２０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の腹腔内注射）投与量では示さなかったが、高（５００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の腹腔内注射）、および中（１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の腹腔内注射）投与量において、白血球、好中球、リンパ球、および血小板の数の上昇を示したことで、この概念は支持され得る。したがって、癌と戦い個々の癌細胞を除去することに役立つよう免疫系が動員され、その一方で同時に癌増殖が効果的に抑制かつ攻撃されれば、癌の根絶を達成することが可能であろう。
【実施例４】
【００６５】
材料および方法
ＩＴＥナノ懸濁液は、湿式媒体製粉機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＳＬ−ｎａｎｏ、ＷＡＢ Ｗｉｌｌｙ Ａ．Ｂａｃｈｏｆｅｎ ＡＧ社、スイス、ムッテンツ所在）を用いて、１％のＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロースナトリウム）、０．５％のＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、０．０８５％のＰＶＰ Ｋ９０（ポリビニルピロリドン Ｋ９０）、および０．２％の安息香酸塩を含む水中で、ＩＴＥ粉末を所望のサイズ範囲に到達するまで製粉して調製した。粒径をレーザー回折式粒度分布測定装置（ＭＳ２０００、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、イギリス、ウスターシャー所在）を用いて決定した。粒径のパラメータを、Ｄ１０（１０％の粒子の直径）＝６７ｎｍ、Ｄ５０＝１１４ｎｍ、およびＤ９０＝２０７ｎｍとして決定した。そして調製したナノ懸濁液を使用するまで４℃で保管した。
【００６６】
生後６〜８週間の雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、各４つの投与グループ（０、２０、１００、および５００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．）に６匹ずつ無作為に割り当てた。ＩＴＥナノ懸濁液を７日間連続して１日１回腹腔内注射により投与した。死亡率、臨床兆候、体重、および飼料消費を記録した。血液学（６匹中３匹）および血液生化学検査（６匹中他の３匹）のデータを収集した。ＴＫ（毒物動態学）パラメータを実施例１に記載の通り決定し、１、３、および７日目において投与から１時間および３時間後の両方のＩＴＥの血漿レベルを測定した。剖検にて主要な臓器の総括的観察を行った。
【００６７】
結果および考察
ＴＫデータは適切なＩＴＥ系の暴露を確認した（データ表示なし）。２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（低投与量）グループの１匹のマウスが投与の２日目を前にして原因不明で死亡したことを除き、死亡は観察されなかった。全３つのＩＴＥ処理グループにおいて飼料消費の劇的な減少が調査の１日目において発見されたが、ＩＴＥ処理による著しい体重の減少はなかった。剖検による全ＩＴＥ処理グループにおける主要臓器検査からは異常は観察されなかった。５００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（高投与量）グループにおけるＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、およびＴＰ（総タンパク量）のレベルは、溶媒コントロールに対して、それぞれ３．２（ｐ＜０．０５）、１．８（非有意）、および１．２（ｐ＜０．０５）倍上昇した（表１）。２０ｍｇ／ｋｇ（低投与量）グループのＢＵＮ（血中尿素窒素）は、溶媒に対して１．４倍（ｐ＜０．０５）上昇した。これらのデータ、特にＡＬＴのデータは、ＩＴＥ投与量が上限付近に到達していることを示唆している可能性がある。ＷＢＣ（白血球数）は、１００ｍｇ／ｋｇ（中）および５００ｍｇ／ｋｇ（高）グループにおいて、それぞれ２．６倍（ｐ＜０．０５）および２．０倍（非有意）上昇した。その他のＰＬＴ（血小板）の割合、ＮＥＵＴ（好中球）の割合、好中球の数（＃ＮＥＵＴ）、およびリンパ球の数（＃ＬＹＭＰＨ）等は、統計的に有意ではないが、１００ｍｇ／ｋｇおよび５００ｍｇ／ｋｇのグループの両方において上昇した（表１）。追加の確認試験を行う必要はあるが、血液学におけるデータはＩＴＥによる免疫系の動員を実際に示唆しているため、実施例３に示される癌根絶のデータに高い確率で反響し得る。
血液学および血液生化学検査に関する部分的測定値
【００６８】
【表１】
表１は血液学および血液生化学検査に関する部分的測定値を示しており、グループ平均および括弧内にＳＤ（標準偏差）が記載されている。＊は統計的有意性（ｐ＜０．０５）を示し、「ｎｏ」は標準偏差が試料サイズのために得られないことを意味している。ＡＬＴはアラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＳＴはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＴＰは総タンパク量、ＢＵＮは血中尿素窒素、ＷＢＣは白血球数、ＰＬＴは血小板、ＮＥＴＵは好中球、＃ＮＥＴＵは好中球数、および＃ＬＹＭＰＨはリンパ球数を意味している。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明は、人類およびその他の動物、特に哺乳動物のための、癌の介入治療または根絶における領域に適用することが可能である。
【００７０】
符号の説明
本明細書において使用される用語である、ＩＴＥの「構造類似体」または単に「類似体」は、ＡｈＲ内因性リガンドであるＩＴＥと類似する化学構造を有する化合物として定義する。
【００７１】
本明細書において使用される用語「アルキル」は、水素で飽和された１〜６個の炭素が直鎖または分岐鎖の形状で結合した基を表す。
【００７２】
本明細書において使用される用語「ハロアルキル」は、１以上のハロゲン原子によって置換されたアルキルを表す。
【００７３】
本明細書において使用される用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖の形状で結合した２〜６個の炭素を含む炭化水素基を表す。
【００７４】
本明細書において使用される用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖の形状で結合した２〜６個の炭素を含む炭化水素基を表す。
【００７５】
本明細書において使用される用語「ハロ」は、あらゆるハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）を表す。
【００７６】
本明細書において使用される用語「カルボニル」は、
【００７７】
【化９】
【００７８】
を表す。
本明細書において使用される用語「アルカノイル」は、カルボニル基に結合したアルキルを表す。
【００７９】
【化１０】
【００８０】
本明細書において使用される用語「ハロアルカノイル」は、カルボニル基に結合したハロアルキルを表す。
【００８１】
【化１１】
【００８２】
本明細書において使用される用語「窒素保護基」は、合成手順の間の好ましくない化学反応から窒素を保護するために通常使用される基を表す。
【００８３】
本明細書において使用される用語「アミノ」は、ＮＲａＲｂを表し、ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、ハロ、ホルミル（−ＣＨＯ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイル、ハロアルカノイル、または窒素保護基から選択され得る。
【００８４】
本明細書において使用される用語「アルコキシ」は、酸素原子に結合したアルキル（−Ｏ−アルキル）を表す。
【００８５】
本明細書において使用される用語「ハロアルコキシ」は、酸素原子に結合したハロアルキル（−Ｏ−ハロアルキル）を表す。
【００８６】
本明細書において使用される用語「チオアルコキシ」は、硫黄原子に結合したアルキル（−Ｓ−アルキル）を表す。
【００８７】
本明細書において使用される用語「カルボニルオキシ」は、酸素原子に結合したアルカノイルを表す。
【００８８】
【化１２】
引用文献
特許文献
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【技術分野】
【０００１】
癌療法、癌治療、癌介入治療、癌根絶、癌生物学、腫瘍学、治療学、薬学、生物薬剤学。
【背景技術】
【０００２】
アリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）は、リガンド誘導性の転写因子であり、いわゆるｂａｓｉｃ ｈｅｌｉｘ−ｌｏｏｐ−ｈｅｌｉｘ／Ｐｅｒ−Ａｒｎｔ−Ｓｉｍ（ｂＨＬＨ／ＰＡＳ）スーパーファミリーに属している。ＡｈＲはそのリガンドに結合すると、Ｐ４５０ファミリー等の遺伝子発現に加えて、細胞分裂、アポトーシス（プログラムされた細胞死）、細胞分化、エストロゲンおよびアンドロゲンの作用、脂肪分化、視床下部作用、血管新生、免疫系の刺激または抑制、催奇形性、腫瘍原性、腫瘍発生、腫瘍促進、腫瘍進行、塩素座瘡、消耗症候群、およびその他のホルモン系の作用を含む、一連の生物学的過程およびいくらかの有害効果を仲介し、または相互作用する［１、２、３、４、５、６、７、８］。リガンド受容体は、細胞質から細胞核への転位、Ａｈ受容体核内輸送体と称される他の因子とのヘテロ二量化、ＡｈＲ制御のもとでＡｈ応答エレメントと称される遺伝子の調節領域へのヘテロ二量体の接着、そしてこれらの遺伝子の転写の促進または抑制を介して、生物学的過程に関与している。
【０００３】
ＡｈＲは、３−メチルコラントレン（３−ＭＣ）によって例示される多環芳香族炭化水素、および２，３，７，８−テトラクロロジベンゾパラジオキシン（ＴＣＤＤ）によって代表されるハロゲン化芳香族炭化水素などの外因性化学物質（したがって人工的リガンド）のいくつかのグループと、様々な親和力で結合が起こり得る。これまでに受容体系はその人工的リガンドを対象にして研究されてきた。これらのＡｈＲ人工的リガンドの研究は受容体系に対する私たちの理解を前進させることに役立ってきた一方で、系が担う生理学的役割および系が提供し得る潜在的治療効果における徹底的な解明は、ＡｈＲ生理学的リガンドを特定せずには不可能である。この目標に対する最初の段階として、受容体に対する内因性リガンドが特定された。ＡｈＲに対する、内因性リガンド、または生理学的リガンド、または天然ホルモンを、２−（１’Ｈ−インドール−３’−カルボニル）−チアゾール−４−カルボン酸メチルエステル（短縮形はＩＴＥ）として特定した［９，１０］。
【０００４】
ＡｈＲに対する大部分の人工的リガンドは環境有害物質［１，２，３］であるため、治療薬としては使用不可能である。しかしながら、リガンドＡｈＲの機能を理解するために、ＴＣＤＤ、６−メチル−１，３，８−トリクロロジベンゾフラン（６−ＭＣＤＦ）、８−メチル−１，３，６−トリクロロジベンゾフラン（８−ＭＣＤＦ）、およびインドールまたはトリプトファンからの誘導体などのその人工的リガンドは、リガンドＡｈＲが、遺伝子導入マウス系統における前立腺腫瘍の転位［１１］、ならびに発癌物質誘発ラット乳腺腫瘍［１２，１３，１４］、ヒト乳房腫瘍細胞異種移植片［１５，１６］、および遺伝子突然変異に起因する腫瘍［１７］の増殖を、抑制可能であることを明らかにするために使用された。
【０００５】
ＡｈＲの天然リガンドとして、ＩＴＥは受容体を正確かつ特異的に標的とすることにおいて優れた作用因子である。しかしながら、いくつかの結果が抗癌の可能性を示し［１２，１３，１４，１５，１６］、一方では他の結果が腫瘍の発生、促進、および進行を示す［８，１８，１９２０，２１］、今までにＡｈＲのこれらの人工的リガンドの挙動から学んできたことからは、標的の結果は予測不可能である。ＩＴＥは血管新生阻害を示すことから、癌療法において有用であろう［７］。しかしながら血管新生阻害単独の性質からは、ＩＴＥを効果的な抗癌剤として直ちに見なすことは不可能である。論点を提供している多数の例が存在している［２２，２３、２４、２５］。多くの血管新生阻害薬は治療薬としての機能を果たすことができず［２２］、多くの他の薬剤は、恐らく薬剤から生じるストレスで腫瘍への酸素および栄養の供給が制限されることによって、腫瘍の浸潤および転移をさらに加速させた［２６，２７］。転移を加速させる可能性により、癌療法の絶対基準である全生存率さえも減少させるため、血管新生阻害療法は実際のところ懸念されている［２３］。そのＡｈＲの人工的リガンドによって明らかとなったリガンドＡｈＲの抗癌特性から［１２，１３，１４，１５，１６］、ＩＴＥがいったん同じ受容体に結合すると、多数のこれらの人工的リガンドまたはそれらの代謝産物が試験されたこれらの癌細胞に高い毒性を有し得るという、言うまでもないこれらの人工的リガンドが行ったことを、ＩＴＥも部分的にでも成し得ることを保証するものではない。そういう意味では、これらの人工的リガンドまたはそれらの代謝産物は、Ａｈ受容体を標的とした結果ではなく、癌細胞を殺すという単に無差別の細胞毒性薬としての機能を果たすであろう。
【０００６】
さらに、リガンド受容体が成し得ることを決定する重要な要素は、リガンド受容体が担う最終の３次元（３Ｄ）構造にある。なぜなら、３Ｄ構造は、リガンド受容体がいくつの様々な細胞性因子と相互作用するのか、およびこれらの相互作用が生命の過程を実行するためにどのように実施されるべきかを決定付けるためである。そして、リガンド受容体が担う最終の３Ｄ構造は、所定の生物系において、受容体に対してリガンドの３Ｄ構造によってのみ形成される。これがなぜリガンドの３Ｄ構造が、その受容体媒介性の生物学的過程および薬理学的過程に関してこれほど重要であるかを説明する基本的原理である。さらに、異なる構造を有するリガンドは異なる代謝を行い、それらの異なる代謝は確実に生物学的過程を異なる態様にて妨害し得る。したがって、異なる３Ｄ構造を有するリガンドは同じ受容体に結合したとしても、完全に異なる生物学的影響を確実にもたらし得ることは明らかである。
【０００７】
論点の妥当性は、上述した理論および当然ながら文献データの例示からも容易に確立し得る。例えば、ＴＣＤＤおよび６−ホルミルインドーロ［３，２−ｂ］カルバゾール（ＦＩＣＺ）の両方はＡｈＲに対する高親和性のリガンドではあるが、ＴＣＤＤは調節性Ｔ細胞の分化を刺激することが分かっており、そのため免疫系を抑制し、一方で、ＦＩＣＺはＴｈ１７細胞の分化を促進して免疫系を刺激し得る［２８］。他の実施例では、ＴＣＤＤおよびＩＴＥの両方はＡｈＲに対する高親和性のリガンドではあるが、ＴＣＤＤが口蓋裂、水腎症、および胸腺萎縮を誘発する一方で、ＩＴＥはこれらのいずれも誘発しなかった［２９］。さらなる実例を文献において容易に発見することが可能である［３０、３１、３２、３３、３４］。したがって、明確な回答を見出すための異なる実験モデルおよびシステムを用いた広範囲にわたる研究プログラムを行わずして、抗癌特性を示すＡｈＲに対する人工的リガンドのこれらの研究［１２、１３，１４、１５、１６］、またはその血管新生阻害特性を証明するＩＴＥの研究［７］からも、ＩＴＥが優れた抗癌剤であることは全く明らかではない。
【０００８】
こうした状況のために、私たちはＩＴＥまたはその構造類似体の１つが癌を治療または根絶するために効果的かつ安全に使用可能であるかどうかの調査を進めた。本発明は癌の介入治療または根絶において、新たに発見された内因性のＡｈ受容体リガンドであるＩＴＥまたその構造類似体の１つを治療薬として使用する方法を十分に開示するものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第７４１９９９２号明細書
【特許文献２】米国特許第６９１６８３４号明細書
【非特許文献】
【００１０】
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【非特許文献３】Ｂｏｃｋ ＫＷ，Ｋｏｈｌｅ Ｃ．Ａｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ− ａｎｄ ＴＣＤＤ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｉｖｅｒ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ：ｃｌｏｎａｌ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｓ ｅｖａｄｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５；６９（１０）：１４０３−１４０８．
【非特許文献４】Ｓｔｅｖｅｎｓ ＥＡ，Ｍｅｚｒｉｃｈ ＪＤ，Ｂｒａｄｆｉｅｌｄ ＣＡ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２００９；１２７（３）：２９９−３１１．
【非特許文献５】Ｐｕｇａ Ａ，Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ ＣＲ，Ｘｉａ Ｙ．Ａｈ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｓ ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｐａｔｈｗａｙｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５；６９（２）：１９９−２０７．
【非特許文献６】Ｓａｆｅ Ｓ，ＭｃＤｏｕｇａｌ Ａ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃａｎｃｅｒｓ（Ｒｅｖｉｅｗ）．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ．２００２；２０（６）：１１２３−８．
【非特許文献７】Ｄｉｅｔｒｉｃｈ Ｃ，Ｋａｉｎａ ｂ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＡｈＲ）ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ ｃｏｎｔａｃｔ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１０；３１（８）：１３１９−１３２８．
【非特許文献８】Ｓｏｎｇ Ｊ，Ｃｌａｇｅｔｔ−Ｄａｍｅ Ｍ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ＲＥ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｌｕｎｇ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００２；９９（２３）：１４６９４−９．
【非特許文献９】Ｆｒｉｔｚ ＷＡ，Ｌｉｎ Ｔ，Ｓａｆｅ Ｓ，Ｍｏｏｒｅ ＲＷ，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ＲＥ．Ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ ６−ｍｅｔｈｙｌ−１，３，８−ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏｆｕｒａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｉｎ ＴＲＡＭＰ ｍｉｃｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９；７７（７）：１１５１ −１１６０．
【非特許文献１０】ＭｃＤｏｕｇａｌ Ａ，Ｗｉｌｓｏｎ Ｃ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ７，１２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚ［ａ］ａｎｔｈｒａｃｅｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒａｔ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．１９９７；１２０（１）：５３−６３．
【非特許文献１１】Ｈｏｌｃｏｍｂ Ｍ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ７，１２−ｄｉｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚａｎｔｈｒａｃｅｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｒａｔ ｍａｍｍａｒｙ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．１９９４；８２（１）：４３−７．
【非特許文献１２】ＭｃＤｏｕｇａｌ Ａ，Ｗｏｒｍｋｅ Ｍ，Ｃａｌｖｉｎ Ｊ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ／ａｎｔｉｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｏｎ ｓｙｎｅｒｇｉｚｅｄ ｂｙ ａ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｄｕｌａｔｏｒ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００１；６１（１０）：３９０２−３９０７．
【非特許文献１３】Ｇｉｅｒｔｈｙ ＪＦ，Ｂｅｎｎｅｔｔ ＪＡ，Ｂｒａｄｌｅｙ ＬＭ，Ｃｕｔｌｅｒ ＤＳ．Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＣＦ−７ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｂｙ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９３；５３（１３）：３１４９−３１５３．
【非特許文献１４】Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｌｅｉ Ｐ，Ｌｉｕ Ｘ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ．２００９；１６（３）：８３５−８４４．
【非特許文献１５】Ｋａｗａｊｉｒｉ Ｋ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｙ，Ｏｈｔａｋｅ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ＡｐｃＭｉｎ／＋ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｎａｔｕｒａｌ ｌｉｇａｎｄｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００９；１０６（３２）：１３４８１−１３４８６．
【非特許文献１６】Ｓｉｍｏｎ Ｔ，Ａｙｌｗａｒｄ ＬＬ，Ｋｉｒｍａｎ ＣＲ，Ｒｏｗｌａｎｄｓ ＪＣ，Ｂｕｄｉｎｓｋｙ ＲＡ．Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ２，３，７， ８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ（ｐ）ｄｉｏｘｉｎ ｕｓｉｎｇ ｌｉｎｅａｒ ａｎｄ ｎｏｎｌｉｎｅａｒ ｄｏｓｅ−ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．２００９；１１２（２）：４９０−５０６．
【非特許文献１７】Ｉｓｈｉｄａ Ｍ，Ｍｉｋａｍｉ Ｓ，Ｋｉｋｕｃｈｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ． Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｂｙ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ＭＭＰ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｉｎ ｕｐｐｅｒ ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２０１０；３１（２）：２８７−２９５．
【非特許文献１８】Ｒａｙ Ｓ，Ｓｗａｎｓｏｎ ＨＩ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｙ ＴＣＤＤ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ：ａ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｅｖｅｎｔ？Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００９；７７（４）：６８１−６８８．
【非特許文献１９】Ｋｎｅｒｒ Ｓ，Ｓｃｈｒｅｎｋ Ｄ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌｓ．Ｍｏｌ Ｎｕｔｒ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ．２００６；５０（１０）：８９７−９０７．
【非特許文献２０】Ｊｏｈｎ ＡＲ，Ｂｒａｍｈａｌｌ ＳＲ，Ｅｇｇｏ ＭＣ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ．Ｂｒ Ｊ Ｓｕｒｇ．２００８；９５（３）：２８１−２９３．
【非特許文献２１】Ｒｏｕｋｏｓ ＤＨ，Ｔｚａｋｏｓ Ａ，Ｚｏｇｒａｆｏｓ Ｇ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｒｎｓ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｒｅｇａｒｄｉｎｇ ｔａｉｌｏｒｅｄ ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００９；９（１０）：１４１３−１４１６．
【非特許文献２２】Ｅｎｇｌｉｓｈ ＢＣ，Ｐｒｉｃｅ ＤＫ，Ｆｉｇｇ ＷＤ．ＶＥＧＦ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ： ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００９；８（１３）：１２１４−１２２５．
【非特許文献２３】Ｌｏｇｅｓ Ｓ，Ｍａｚｚｏｎｅ Ｍ，Ｈｏｈｅｎｓｉｎｎｅｒ Ｐ，Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ Ｐ．Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｒ ｆｕｅｌｉｎｇ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｗｉｔｈ ＶＥＧＦ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２００９；１５（３）：１６７−１７０．
【非特許文献２４】Ｅｂｏｓ ＪＭＬ，Ｌｅｅ ＣＲ，Ｃｒｕｚ−Ｍｕｎｏｚ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｓｈｏｒｔ−ｔｅｒｍ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ａ ｐｏｔｅｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２００９；１５（３）：２３２−２３９．
【非特許文献２５】Ｐａｅｚ−Ｒｉｂｅｓ Ｍ，Ａｌｌｅｎ Ｅ， Ｈｕｄｏｃｋ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ ｅｌｉｃｉｔｓ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒｓ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｏｃａｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｓｔａｎｔ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２００９；１５（３）：２２０−２３１．
【非特許文献２６】Ｑｕｉｎｔａｎａ ＦＪ，Ｂａｓｓｏ ＡＳ，Ｉｇｌｅｓｉａｓ ＡＨ，ｅｔ ａｌ． Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｔ（ｒｅｇ）ａｎｄ Ｔ（Ｈ）１７ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５３（７１９１）：６５−７１．
【非特許文献２７】Ｈｅｎｒｙ ＥＣ，Ｂｅｍｉｓ ＪＣ，Ｈｅｎｒｙ Ｏ，Ｋｅｎｄｅ ＡＳ，Ｇａｓｉｅｗｉｃｚ ＴＡ．Ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｌｉｇａｎｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈａｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｇｏｎｉｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２００６；４５０（１）：６７−７７．
【非特許文献２８】Ｂｒａｕｚｅ Ｄ，Ｗｉｄｅｒａｋ Ｍ， Ｃｗｙｋｉｅｌ Ｊ，Ｓｚｙｆｔｅｒ Ｋ，Ｂａｅｒ−Ｄｕｂｏｗｓｋａ Ｗ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｇａｎｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｈＲ，ＡｈＲＲ，ＡＲＮＴ，Ｈｉｆ１ａｌｐｈａ，ＣＹＰ１Ａ１ ａｎｄ ＮＱＯ１ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｒａｔ ｌｉｖｅｒ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｌｅｔｔ．２００６；１６７（３）：２１２−２２０．
【非特許文献２９】Ｂｅｒｍｕｄｅｚ ｄｅ Ｌｅｏｎ Ｍ，Ｇｏｍｅｚ Ｐ，Ｅｌｉｚｏｎｄｏ Ｇ，ｅｔ ａｌ．Ｂｅｔａ−ｎａｐｈｔｈｏｆｌａｖｏｎｅ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ Ｄｐ７１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．２００６；１７５９（３−４）：１５２−１５８．
【非特許文献３０】Ｏｋｉｎｏ ＳＴ，Ｐｏｏｋｏｔ Ｄ，Ｂａｓａｋ Ｓ，Ｄａｈｉｙａ Ｒ．Ｔｏｘｉｃ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｌｉｇａｎｄｓ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ Ｒｅｓ（Ｐｈｉｌａ Ｐａ）．２００９；２（３）：２５１−２５６．
【非特許文献３１】Ｍｏｒｒｏｗ Ｄ，Ｑｉｎ Ｃ，Ｓｍｉｔｈ Ｒ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＬＮＣａＰ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２００４；８８（１）：２７−３６．
【非特許文献３２】Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ ＪＴ，Ｓｌｏｂｂｅ Ｌ，Ｌａｎｓｂｅｒｇｅｎ ＧＷ，Ｓａｆｅ Ｓ，ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｅｒｇ Ｍ．２，３，７，８−Ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ａｎｄ ｄｉｉｎｄｏｌｙｌｍｅｔｈａｎｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅ ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｐ４５０ １Ａ１，１Ｂ１，ａｎｄ １９ ｉｎ Ｈ２９５Ｒ ｈｕｍａｎ ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．２００１；６１（１）：４０−４８．
【非特許文献３３】Ｅｌｉｚｏｎｄｏ Ｇ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｓａｌｇｕｅｒｏ Ｐ，Ｓｈｅｉｋｈ ＭＳ，ｅｔ ａｌ．Ａｌｔｅｒｅｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｔ ｔｈｅ Ｇ（２）／Ｍ ｐｈａｓｅｓ ｉｎ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｕｌｌ ｅｍｂｒｙｏ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ．Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０００；５７（５）：１０５６−６３．
【非特許文献３４】Ｐｕｇａ Ａ，Ｍａｒｌｏｗｅ Ｊ，Ｂａｒｎｅｓ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ．２００２；１８１−１８２：１７１−７．
【非特許文献３５】Ｍａｒｌｏｗｅ ＪＬ，Ｋｎｕｄｓｅｎ ＥＳ，Ｓｃｈｗｅｍｂｅｒｇｅｒ Ｓ，Ｐｕｇａ Ａ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｓｐｌａｃｅｓ ｐ３００ ｆｒｏｍ Ｅ２Ｆ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ａｎｄ ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ Ｓ ｐｈａｓｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４；２７９（２８）：２９０１３−２２．
【非特許文献３６】Ｋａｊｔａ Ｍ，Ｗｏｊｔｏｗｉｃｚ ＡＫ，Ｍａｃｋｏｗｉａｋ Ｍ，Ｌａｓｏｎ Ｗ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｃｅｌｌｓ：ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．２００９；１５８（２）：８１１−８２２．
【非特許文献３７】Ｓｉｎｇｈ ＮＰ，Ｎａｇａｒｋａｔｔｉ Ｍ，Ｎａｇａｒｋａｔｔｉ Ｐ．Ｐｒｉｍａｒｙ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｅｃｏｍｅ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｕｐｏｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００８；７３（６）：１７２２−１７３５．
【非特許文献３８】Ｐａｒｋ Ｋ，Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ＫＡ，Ｈｕａｎｇ Ｇ，Ｅｌｆｅｒｉｎｋ ＣＪ． Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｔｏ Ｆａｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００５；６７（３）：６１２−２２．
【非特許文献３９】Ｊｕｘ Ｂ，Ｋａｄｏｗ Ｓ，Ｅｓｓｅｒ Ｃ．Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ ｃｅｌｌ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｎｔａｃｔ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｒｅ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｉｎ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｎｕｌｌ ｍｉｃｅ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００９；１８２（１１）：６７０９−６７１７．
【非特許文献４０】Ｓｕｔｔｅｒ ＣＨ，Ｙｉｎ Ｈ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．ＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｌｏｃｋｓ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００９；１０６（１１）：４２６６−４２７１．
【非特許文献４１】Ｈａｌｌ ＪＭ，Ｂａｒｈｏｏｖｅｒ ＭＡ，Ｋａｚｍｉｎ Ｄ，ｅｔ ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｒｙｌ−Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｉｎｖａｓｉｖｅ ａｎｄ Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｐｒｏｍｏｔｅｓ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２００９．Ａｖａｉｌａｂｌｅ ａｔ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２００３２１９５［Ａｃｃｅｓｓｅｄ Ｊａｎｕａｒｙ ２７，２０１０］．
【非特許文献４２】Ｏｅｎｇａ ＧＮ，Ｓｐｉｎｋ ＤＣ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ＤＯ．ＴＣＤＤ ａｎｄ ＰＣＢｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ．２００４；１８（６）：８１１−９．
【非特許文献４３】Ｊａｎａ ＮＲ，Ｓａｒｋａｒ Ｓ，Ｉｓｈｉｚｕｋａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ ｂｅｔｗｅｅｎ ２，３，７，８−ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｄｉｂｅｎｚｏ−ｐ−ｄｉｏｘｉｎ ａｎｄ ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ＬＮＣａＰ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９；２５６（３）：４６２−８．
【非特許文献４４】Ｍｏｒｒｏｗ Ｄ，Ｑｉｎ Ｃ，Ｓｍｉｔｈ Ｒ，Ｓａｆｅ Ｓ．Ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＬＮＣａＰ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００４；８８（１）：２７−３６．
【非特許文献４５】Ｖｅｌｄｈｏｅｎ Ｍ，Ｈｉｒｏｔａ Ｋ，Ｗｅｓｔｅｎｄｏｒｆ ＡＭ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｌｉｎｋｓ ＴＨ１７−ｃｅｌｌ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｏ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｔｏｘｉｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．２００８；４５３（７１９１）：１０６−１０９．
【非特許文献４６】Ｋｏｌｉｏｐａｎｏｓ Ａ，Ｋｌｅｅｆｆ Ｊ，Ｘｉａｏ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｒｙｌｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆｆｅｒｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．２００２；２１（３９）：６０５９−７０．
【非特許文献４７】Ｋａｓｈａｎｉ Ｍ，Ｓｔｅｉｎｅｒ Ｇ，Ｈａｉｔｅｌ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ （ＡｈＲ） ａｎｄ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ（ＡＲＮＴ）ｉｎ ｆｅｔａｌ，ｂｅｎｉｇｎ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ，ａｎｄ ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ．１９９８；３７（２）：９８−１０８．
【非特許文献４８】Ｇｌｕｓｃｈｎａｉｄｅｒ Ｕ，Ｈｉｄａｓ Ｇ，Ｃｏｊｏｃａｒｕ Ｇ，ｅｔ ａｌ．ｂｅｔａ−ＴｒＣＰ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒｅｄｕｃｅｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｖｉａ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ．２０１０；５（２）：ｅ９０６０．
【非特許文献４９】Ｐｅｎｇ Ｔ，Ｃｈｅｎ Ｊ，Ｍａｏ Ｗ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｒｙｌ ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ．Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２００９；１５（１４）：１７１９−１７２９．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
現在、癌療法の市場において２つの重大な課題がある。第１には重度の副作用および毒性であり、第２には非常に限定された有効性である。その結果、癌は米国および世界の地域において未だ死亡原因の第２位である。
【００１２】
細胞毒性および非細胞毒性の両方のカテゴリーにおいて、癌に対する現在の治療薬の大多数は人体にとっては異質物である化学物質である。その結果、身体は利用可能な代謝経路を何でも使用して化学物質を取り除こうと懸命に努力する。身体はこれらの異質な化学物質を代謝する自然かつ安全な方法を有していないため、いくつかの非特異的な酸化反応が代謝の主な手段として使用される。その結果、除去過程において多数の化学的に活性な中間体またはラジカルを不可避的に生成し、それは限定されるものではないが身体の免疫系に含まれる正常な細胞物質をも攻撃し、重度の副作用、毒性、および免疫系の低下をもたらし得る。多くのこれらの薬剤は、天然物ではなく人為的に設計されたものであるため、身体において人間が予測した標的よりも（限定されるものではないが、受容体、酵素、その他のタンパク質を含む）その他の細胞性因子と結合かつ相互作用する可能性が高い。これらの「非特異的」な結合および相互作用は、副作用の著しい可能性をもたらす原因である。
【００１３】
癌療法のための細胞毒性薬の有効性は、限定されるものではないが免疫系に含まれる正常な細胞および組織に対する細胞毒性薬の無差別な毒性によって、大部分が制限されている。免疫系の低下は、予想される通り、癌細胞に対する秩序立った攻撃を開始することを不可能にする。癌細胞が生存するために重要な特定の機能を標的とした非細胞毒性薬の有効性は、それらの単一機構に基づく戦略によって制限されている。しかしながら、癌の重要な特徴は、癌の絶え間ない遺伝子変化または突然変異である。生存するために治療薬が標的とする特定機能にもはや依存しない状態まで癌細胞が変化すると、薬剤の有効性は直ちに失われ得る。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
したがって、本状況において、癌に対する統合された攻撃を構築し、癌根絶の可能性に向けて個々の癌細胞を除去し、「非特異的」な相互作用の可能性を制限し、かつ低副作用に向けて代謝自体を安全に行うために、効力が持続するよう複数の対抗能力を用いて癌を攻撃すると同時に免疫系に役立つ新規の治療薬の出現が求められている。新たに発見されたＡｈ受容体内因性リガンドであるＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、記載された厳しい要件を満たし得るものである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の最も重要な利点は、癌細胞の絶え間ない遺伝子変化の結果に立ち向かうＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける複数の癌攻撃能力にある。ＩＴＥは血管新生を抑制することが実証されてきた［７］。文献には、（ＩＴＥではない）その人工的リガンドをリガンドとしたＡｈ受容体（ＡｈＲ）は、細胞分裂の抑制［３５，３６，３７］、プログラムされた細胞死（アポトーシス）の促進［３８，３９，４０］、細胞分化の誘導［４１，４２，４３］、およびエストロゲン［６，４４］およびアンドロゲン［４５，４６］の作用の阻害が可能であると示されていた（これらの人工的リガンドの悪影響の可能性は、文献中では差し当たり無視されている）。最近では、（ＩＴＥではない）人工的リガンドをリガンドとしたＡｈＲが、病原体および癌に対する攻撃の構築において、免疫系にとって有用である免疫Ｔ細胞の分化を誘発し得ることが実証された［２８，４７］。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つがＡｈＲに結合するときに、その血管新生阻害特性に加えて言及した１以上の機能も有する場合、複数の癌攻撃能力によってその癌治療効力は持続可能となる。ＩＴＥまたはその類似体の１つにおける効力持続性とさらに免疫系を刺激するその潜在能力は、癌療法における有効性を劇的に増強するだけでなく、癌根絶を可能なものにし得る。図面および実施例において示されるデータは、上述した理論的分析を明確に立証する。
【００１６】
市場においてその他のリガンドをしのぐＩＴＥを使用することの非常に大きな利益としては、その複数の癌攻撃能力に裏付けられるその持続可能な有効性に加えて、その低い副作用の可能性にある。人体にとって異質物であり、かつ人為的に設計された、現在の癌療法において使用されているこれらのＡｈＲ人工的リガンドおよび薬剤を含むこれらの化学物質とは対照的に、ＩＴＥは自然界において設計された天然ホルモンであるため、自然の力によってその代謝は自然かつ安全な方法で設計および実行されるであろう。したがって、その代謝過程は身体において問題を引きこす可能性は少ないかまたは皆無であろう。これは、その代謝によって引き起こされる副作用が少ないであろうことを意味している。低副作用の可能性に関する他の重要な理由としては、天然ホルモンのその受容体（ＡｈＲ）への結合は、人為的ではなく自然界において設計されているため、非常に特異的かつ正確であることである。人為的に設計したこれらの化学物質ではない天然ホルモンであるＩＴＥにおいては、副作用の重大な機会となる「非特異的」な問題を引き起こすその他の細胞性因子との結合および相互作用の可能性は低いであろう。図面および実施例において記載された実験データが論点を支持している。
【００１７】
癌療法における他の重要な課題は、治療薬の効力を増強させ、かつ副作用を減少させるよう、正常細胞ではなく癌細胞に特異的に作用する治療薬が非常に望まれていることにある。この種の特異性は、薬剤が結合する標的分子が正常細胞内よりも癌細胞内に多い場合、達成可能である。ＩＴＥおよびその類似体に対する標的分子はＡｈＲである。文献では、ＡｈＲは患者の膵臓癌組織において高濃度であるが、調査された全ての正常な膵臓組織においては非常に希薄であることが報告されている［４８］。同様に、高濃度のＡｈＲは前立腺癌［４９，５０］および胃癌［５１］においても報告されている。これは、少なくともこれらの報告された種類の癌において、ＩＴＥおよびその構造類似体の治療特異性を達成可能であることを意味している。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、ＩＴＥ投与における投与量、経路、およびスケジュールに反応したヒト癌細胞株ＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制を示している。図１Ａは、０（溶媒、ＤＭＳＯ）、０．１、１、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（２８日間連続して１２時間おきに腹腔内注射）のＩＴＥ投与量に反応したＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制の程度を示しており（平均＋ＳＥＭ、ｎ＝８）、図１Ｂは、マウスの体重変化によって判断した担異種移植片マウスの治療に対する低毒性反応を示しており（平均＋ＳＥＭ、ｎ＝８）、図１Ｃは、示されるように使用した溶媒、投与レベル、およびＡＵＣ’ｓ（曲線下面積）を有する、静脈注射、腹腔内注射、および経口投与でのＩＴＥ投与（単回投与）におけるＰＫ（薬物動態）特性を示しており、および図１Ｄは、規定されるとおり、異なる投与量（４０または８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．）、スケジュール（１日１回または２回）、および経路（腹腔内または経口）でのＩＴＥ投与によるＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制を示している。
【図２】図２は、ヒトの前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ）、肝癌細胞株（ＨｅｐＧ２）、卵巣癌細胞株（ＯＶＣＡＲ−３）、および乳癌細胞株（ＭＣＦ−７）の異種移植片の増殖抑制における、ＩＴＥ（菱型）またはＩＴＫ（ＩＴＥ構造類似体の１つ、正方形）の有効性（１日１回の腹腔内注射）を示している。図２Ａは、両方とも２０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥまたはＩＴＫによるＬＮＣａＰ異種移植片の増殖抑制を示しており、図２Ｂは、両方とも８０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥまたはＩＴＫによるＨｅｐＧ２異種移植片の増殖抑制を示しており、図２Ｃは、両方とも８０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥまたはＩＴＫによるＯＶＣＡＲ−３異種移植片の増殖抑制を示しており、および図２Ｄは、２０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥによるＭＣＦ−７異種移植片の増殖抑制を示している。
【図３】図３は、同系マウス・ルイス肺癌（ＬＬＣ）モデルにおけるＩＴＥ（１日１回の腹腔内注射）による癌の抑制および根絶を示している。図３Ａは、ＬＬＣ腫瘍の積極的増殖、および２０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥ投与量における腫瘍増殖抑制を示しており、図３Ｂでは、８０ｍｇ／ｋｇのＩＴＥ（１日１回の腹腔内注射）によりＬＬＣ腫瘍のより良好な増殖抑制を示したため、治療プログラムの２８日間にさらにもう１週間の注射後の観察を追加して終了することが可能であった。図３Ｃは、ＩＴＥグループ（正方形）からの１匹のマウス（Ｎｏ．３３、菱型）を示しており、それは治療段階の開始からすぐに腫瘍の縮小が始まり、治療の１３日目において腫瘍が存在しなくなり、残りの治療段階の間腫瘍が存在しない状態を維持し、観察段階の全１ヶ月間なお腫瘍が存在しないままであった。図３ＤはＩＴＥ（正方形）および溶媒コントロール（丸）のグループと合わせて、マウスＮｏ．３３（菱型）の体重変化を示している。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、特別に定義されない限り、本発明の属する技術分野における当業者によって一般に使用される意味と同じである。本明細書において記載されるものと類似または同等のその他の材料および方法は、本発明の実施または試験においても使用可能であるが、好ましい材料および方法のみが以下に記載されていることを理解されたい。
【００２０】
本発明は、内因性アリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）のリガンドであるＩＴＥまたはその構造類似体の１つを用いて、癌を介入治療または根絶する方法に関するものである。ＩＴＥまたはその類似体（活性成分）の１つは、１以上の薬学的に許容される担体（担体系）を用いて調合可能である。担体系は、好ましくは無菌および無毒であり、活性成分を投与するのに有用な不活性物質から成る。担体系は活性成分と相溶性がなければならず、固体、液体、または気体の形態であってもよい。そして、適切に調合された活性成分は、局所的、経腸的、または非経口的に癌を患う被験者に投与され得る。それは、例えばクリーム、カプセル、タブレット、トローチ、または注入可能な形状で提供され得る。防腐剤などのその他の相溶性のある成分は、必要に応じて活性成分と共に調合可能である。
【００２１】
好ましい介入治療プログラムでは、前立腺癌、肝癌、肺癌、卵巣癌、および乳癌を患う被験者は、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを用いた治療を好ましくは受けることができる。しかしながら、これは決して治療範囲を限定するものではない。潜在的な癌根絶に向けて、癌を攻撃し、かつ個々の癌細胞を除去するための、ＩＴＥおよびその類似体の１つが有する複数の癌攻撃能力と、さらに被験者の免疫系を刺激する可能性を考慮すると、治療範囲は将来の試験において急速に拡大されることが想定される。
【００２２】
好ましい介入治療プログラムでは、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける有効な用量範囲は、規定された投与計画のもとで、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの被験者における血中濃度を測定して濃度−時間特性を確立し、実施例において示されるように、試験の期間に形成された同様の濃度‐時間特性と癌の抑制または根絶に対する効果との間で確立された相関を調査し、かつ被験者に対する毒性の可能性と被験者における健康状態または身体的耐久性から達成される治療効果の平衡を保つことで決定される。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの投与回数は、上記の用量範囲の決定における記載と同様にして決定する。現在、１日１回のＩＴＥの経腸的または非経口的な投与が好ましいとして提案されている。投与は被験者に癌が存在しなくなるまで継続され得る。維持量は癌の完全な除去または根絶を確実にするために被験者に癌が存在しなくなった後に提供されることが好ましく、維持量の継続期間は試験によって方向付けられる。
【００２３】
他の好ましい介入治療プログラムでは、ＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、１以上のその他の癌治療薬と組み合わせて投与可能であり、それは好ましくはＡｈＲ以外の様々な治療標的に向けたものである。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、１以上の前記その他の薬剤から独立して、または共に調合することが可能である。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つは、１以上の前記その他の薬剤と同じかまたは異なるスケジュールで投与可能である。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つと１以上のその他の癌治療薬との割合は、適切に設定された試験によって方向付けることが可能である。ＩＴＥまたはその構造類似体の１つと１以上のその他の癌治療薬との治療の組み合わせにより、有効性がさらに増強し得る。組み合わせ治療の利点を示した例は多数存在する。
【００２４】
これらの好ましい介入治療プログラムにおいて、活性成分は以下の構造式（構造式１）を有するアリール炭化水素（Ａｈ）受容体（ＡｈＲ）の内因性リガンドであるＩＴＥである。
【００２５】
【化１】
【００２６】
これらの好ましい介入治療プログラムにおいて、活性成分はＩＴＥの２つの特に有用な構造類似体から選択可能である。ケトンまたはチオールエステルの官能基が、ＩＴＥ構造中で生物系において多数のエステラーゼにより容易に標的とされる通常の（酸素）エステルに取って代わるため、前記２つの類似体は被験者の系において、類似体の安定性を増加し、そして類似体の半減期を引き伸ばすことが想定される。引き伸ばされた半減期は、癌の介入治療においてより高い有効性および／またはより長い効力の持続に転換され得る。ＩＴＥのケトン類似体（したがってＩＴＫと称する）を以下の構造式（構造式２）に示す。
【００２７】
【化２】
【００２８】
ＩＴＥのチオール（Ｓ、硫黄）エステル類似体（したがってＩＴＳＥと称する）の構造式は以下の通りである（構造式３）。
【００２９】
【化３】
【００３０】
これらの好ましい介入治療プログラムでは、活性成分はＩＴＥのその他の構造類似体からさらに選択可能であり、以下の構造式（構造式４）によって定められる。
【００３１】
【化４】
【００３２】
式中、
ＸおよびＹは、独立して、Ｏ（酸素）またはＳ（硫黄）であり、
ＲＮは水素、ハロ、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイル、ハロアルカノイル、または窒素保護基から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ（−ＯＨ）、チオール（−ＳＨ）、シアノ（−ＣＮ）、ホルミル（−ＣＨＯ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ（−ＮＯ２）、アルコキシ、ハロアルコキシ、チオアルコキシ、アルカノイル、ハロアルカノイル、またはカルボニルオキシから選択され、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、もしくはチオアルコキシから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【００３３】
【化５】
【００３４】
であり、
式中、Ｒ８は、水素、ハロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【００３５】
【化６】
【００３６】
であり、
Ｒ９は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【００３７】
【化７】
【００３８】
であり、
Ｒ１０は、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７はまた、独立して、
【００３９】
【化８】
【００４０】
であり、
式中、Ｒ１１は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、またはアルキニルから選択され得る。
【実施例】
【００４１】
前臨床動物試験からの実例が本発明の実施形態にさらに役立つであろう。ヒト前立腺癌の増殖抑制におけるＩＴＥの使用（実施例１）、より多くのヒト癌型の増殖抑制におけるＩＴＥまたはＩＴＫ（ＩＴＥ類似体の１つ）の使用（実施例２）、癌根絶の可能性におけるＩＴＥの使用（実施例３）、およびＩＴＥ毒性モニタリング（実施例４）を説明する。
【実施例１】
【００４２】
材料
生後６〜８週間の雄のＢＡＬＢ／ｃヌードマウス（ハツカネズミ）を、イヤーコーディングによって個々に標識した。１匹の動物が各々のポリカーボネートのケージ（３００ｍｍ×１８０ｍ×１５０ｍｍ）内に入るように、動物を２０〜２６℃の一定温度、および４０〜７０％の湿度において層流室で維持した。敷料はトウモロコシの穂軸であり、それを週に２回変えた。動物は全研究期間において、無菌の乾燥顆粒飼料および無菌の飲料水を自由に利用できた。
【００４３】
ＩＴＥは神戸天然物化学株式会社（ＫＮＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）（日本、東京所在）によって合成された。化合物のロット番号は０８６−００９−２−１（ＡｈＲ製剤に対するロット番号：ＡＨＲ−００１）である。ＤＭＳＯ（カタログ番号：０２３１−５００ＭＬ）はＡＭＲＥＳＣＯ社（アメリカ合衆国、オハイオ州、ソロン所在）において製造された。ラブラゾールをＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ社（フランス、サン−プリースト所在）から購入し、ＰＥＧ ４００はＳｉｇｍａ社（アメリカ合衆国、ミズーリ州、セントルイス所在）から供給された。
【００４４】
方法
有効性研究
本研究における動物の取り扱い、世話、および処理に関連する全ての手順は、国際実験動物管理公認協会（ＡＡＡＬＡＣ）の指針に基づいて、Ｃｒｏｗｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社（アメリカ合衆国、カリフォルニア州、サンタクララ所在、私たちが雇用した開発業務受託機関）の動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）によって承認された指針に従って実施した。動物は、運動性、飼料および水の消費、体重の増減（総体重を週に２回測定した）、目／毛の艶消具合、およびその他のあらゆる異常効果などの、腫瘍増殖および薬剤治療が正常な行動に与えるあらゆる影響を調査した。死亡および観察される臨床兆候を、各グループ内における動物の数を基にして記録した。腫瘍体積が３，０００ｍｍ３を超える個々の動物、または平均腫瘍体積が２，０００ｍｍ３を超えるグループの動物を安楽死させた。さらに、重度の苦痛および／または痛みの兆候を示し、治療開始時の体重から体重が２０％を超えて減少し、または十分な飼料もしくは水の摂取能力を喪失した動物は、人道的犠牲とした。
【００４５】
ヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ、アメリカ合衆国培養細胞系統保存機関、アメリカ合衆国、バージニア州、マナッサス所在）を、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン、および２ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地において、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で３７℃にて単層培養として生体外で維持した。腫瘍細胞を週に２回、定期的に継代培養した。対数増殖期の細胞を腫瘍接種のために採取して数えた。
【００４６】
腫瘍成長のために、ＬＮＣａＰ細胞（１×１０７）／０．１ｍｌＰＢＳを、各マウスの右側腹部の皮下に接種した。平均腫瘍体積が約１５０ｍｍ３に到達すると、担腫瘍マウスをそれらの腫瘍体積に基づいて均質ブロックに分け、続いて各ブロックのマウスを無作為に治療グループに振り分けた（すなわち、初期の平均腫瘍体積の差異による治療に対する腫瘍反応の変動を最小限にすることが可能である）。各治療グループは８つの担腫瘍マウスから構成された。溶媒（ＤＭＳＯ）または溶媒中のＩＴＥの特定の投与量を、示されるように２８日間連続して１日に１回または２回、ｉ．ｐ．（腹腔内）注射またはｐ．ｏ．（経口）投与によって、マウスに投与した。
【００４７】
腫瘍体積はキャリパーを使用して２つの寸法を週に２回測定し、体積を式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２を用いて算出した。式中、ａおよびｂはそれぞれ腫瘍の長径および短径（ｍｍ）である。そして、腫瘍体積を使用して、ＴＧＩ（腫瘍増殖抑制率）およびＴＧＤ（腫瘍増殖遅延）の両方を計算した。ＴＧＩを、ＴＧＩ＝ΔＴ／ΔＣ×１００％を用いて決定した。式中、ΔＴは、薬剤処理グループに対する特定の観察日と治療を開始した日（１日目）における平均腫瘍体積間の差である。一方で、ΔＣは対象グループに対して測定された同様の差である。ＴＧＤを、ＴＧＤ＝Ｔ−Ｃによって算出した。式中、Ｔは薬剤処理グループにおいて、腫瘍が所定の平均腫瘍体積に到達するのに必要な期間（日数）であり、Ｃは対象グループにおいて、同様の体積に到達するのに必要な期間（日数）である。腫瘍重量は、体積１，０００ｍｍ３を重量１，０００ｍｇと同等と見なして得た。その後、純体重は、対応する腫瘍を有する総体重から腫瘍重量を差し引いて得た。
【００４８】
各時点における各グループの腫瘍体積に関する平均および標準誤差（ＳＥＭ）を含む要約統計量を提供する。グループ間の腫瘍体積の差異における統計的分析を、示されるように、最善の治療時点または最終の投与日におけるデータセットに基づいて実施した。腫瘍体積データを対数に変換し、一元配置分散分析法を用いて評価し、有意性が認められると続いてチューキー法を用いて評価した。全てのデータをＳＰＳＳ１６．０を用いて分析し、ｐ＜０．０５を統計的に有意であるとした。
【００４９】
ＰＫ研究
雄のヌードマウスをＰＫ（薬物動態）研究においても使用した。静脈注射に関しては、１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥを、尾静脈からＤＭＳＯを溶媒として用いて投与した。腹腔内注射に関しては、１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥを、左下腹部からＤＭＳＯを用いて送達した。経口投与では、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥを、ラブラゾール：ＰＥＧ４００（２：８、ｖ／ｖ）の溶媒を用いて強制経口投与した。全１５匹のマウスは各投与レベルにおいて単回投与を受け、投与マウスの３匹に１匹を使用して、各時点における血液試料を採取した（０、０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、８、２４時）。動物をそれぞれ２回サンプリングするように交代させたが、２回のサンプリング時間の間の間隔は少なくとも１１０分であった。動物を手作業にてイソフルランで麻酔して拘束した。各時点における約１５０μｌの全血を、Ｋ２−ＥＤＴＡチューブ内に（後眼窩穿刺によって）採取する。血液試料をサンプリング後１５分以内に、冷却して血漿に処理した（４，０００ｇ、５分、４℃）。血漿試料を分析するまで−８０℃で貯蔵した。２０μｌの一定分量の血漿サンプルを２０μｌの内部標準（グリピジド、５００ｎｇ／ｍｌ／ＡＣＮ、抽出効率用）と共に、１２０μｌのＡＣＮ（アセトニトリル）に添加した。混合物を１，５００ｒｐｍにて２分間ボルテックスし、その後、１２，０００ｒｐｍにて５分間遠心分離した。５μｌの上清をＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステム（ＡＰＩ４０００、アメリカ合衆国、カリフォルニア州、フォスターシティ所在）に注入した。Ｇｅｍｉｎｉ−Ｃ１８カラム（２．０×５０ｍｍ、５μｍ）を使用し、ＬＣ（液体｛えきたい｝クロマトグラフィー）を０．４５ｍｌ／分の流速にて、以下のプログラムで動作させた。
時間（分） ０ ０．２ １．８ ２．８ ２．９ ４
ポンプＡ（％）９５ ９５ ２ ２ ９５ 停止
ポンプＢ（％） ５ ５ ９８ ９８ ５ 停止
【００５０】
ポンプＡは、１ｍＭＮＨ４ＯＡｃ（酢酸アンモニウム）／水＋０．０２５％ＦＡ（ギ酸）用であり、一方で、ポンプＢは、１ｍＭＮＨ４ＯＡＣ／アセトニトリル＋０．０２５％ＦＡ用であった。質量分析における負イオン化過程はＡＰＣＩ（大気圧化学イオン化）モードで操作し、一方で、ＭＲＭ（多重反応モニタリング）モードで検出した。ＩＴＥは、２．５分のＬＣ保持時間、かつ２８５．０ｍ／ｚ（衝突前）および１４２．０ｍ／ｚ（衝突後）の２つの質量ピークを認識して特定し、一方で内部標準は２．３５分のＬＣ保持時間、かつ４４４．３ｍ／ｚ（衝突前）および３１９．３ｍ／ｚ（衝突後）の２つの質量ピークを認識して特定した。マウスの血漿とＬＣ−ＭＳ／ＭＳシステムとを混合した後、抽出／沈殿過程の両方を介して実行され、ＩＴＥの一連の既知量から毎回作成される検量線を用いてＩＴＥを定量した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｖ５．２ 統計ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ社、アメリカ合衆国、カリフォルニア州所在）を使用し、非コンパートメントモデルを用いてＣｍａｘ、Ｔｍａｘ、Ｔｌ／２、およびＡＵＣ（曲線下面積）などのＰＫパラメータを作成した。
【００５１】
結果および考察
１、１０、２０、および４０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥ投与による治療（２８日間連続して１２時間おきに腹腔内注射、溶媒：ＤＭＳＯ、注射体積：０．５ｍｌ／ｋｇ ｂ．ｗ．）によって、明確な投与量−効果関係を有する著しい抗癌活性がもたらされた（図１Ａ）。ＴＧＩ’ｓ（腫瘍増殖抑制率）は一連の投与量に対し、２８日目においてそれぞれ５２％、３１％、２６％、および２２％（ｎ＝８；ｐ＜０．０４８、０．００７、０．００４、および０．００４）と算出された。腫瘍サイズ６００ｍｍ３におけるＴＧＤ（腫瘍増殖遅延）は、それぞれの一連の投与量において３、１０、１２、および１６日に到達した。０．１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥは、統計的に有意な抗癌活性をもたらさなかった（ｎ＝８、２８日目においてＴＧＩ＝７４％、ｐ＜０．６２３）。担腫瘍マウスにおける体重変化から判断すると、ＩＴＥ処理は著しい毒性反応を引き起こさないようであった（図１Ｂ）。
【００５２】
ＩＴＥの薬物動態（ＰＫ）挙動および直接的なさらなる有効性に関する研究を理解するために、ＩＴＥを異なる経路および異なるレベルにてヌードマウスに投与した。ＩＴＥ ＰＫ特性を図１Ｃに示す。ボーラス静脈注射によって送達される１ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥ／ＤＭＳＯは、推定半減期が６分であり非常に早く分解した。該経路に対する推定ＡＵＣは２５６ｈｒ.ｎｇ／ｍｌであった。腹腔内注射によって投与されたＩＴＥ／ＤＭＳＯでは、その半減期は改善され、その一方で、吸収効率は静脈注射と比較して１０％を下回る。例えば、腹腔内注射における、１０、４０、および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．のＩＴＥの半減期は、それぞれ１．１３、１．６１、および５．１７時間であるのに対し、ＡＵＣは一連の投与量においてそれぞれ１９７、３３２、４９９ｈｒ.ｎｇ／ｍｌであった。経口経路によって送達されるＩＴＥ／ラブラゾール：ＰＥＧ４００（２：８、ｖ／ｖ）は、さらにより低い吸収効率（約１％）を有し、一方では腹腔内注射によって達成されたレベルの半減期を維持した。投与レベルが４０および８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．の経口投与によるＡＵＣは、それぞれ１０７および９７ｈｒ.ｎｇ／ｍｌであった（図１Ｃ）。
【００５３】
ＰＫ研究からの結果に基づいて、ＩＴＥ投与スケジュール、投与レベル、および経路をさらに調査した。１日当たりの全投与量を同じ量に維持すると、腹腔内経路における１日１回または２回の投与スケジュールは、癌増殖の抑制において同等の有効性をもたらした（例えば、８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．を１日１回、対４０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．を１日２回、図１Ｄ）。さらにＩＴＥ投与量を８０ｍｇ／ｋｇ（１日２回の腹腔内注射）に引き上げると、ＴＧＩは４０ｍｇ／ｋｇ（１日２回の腹腔内注射）からさらに改善されたように思われる。８０ｍｇ／ｋｇ（１日２回の腹腔内注射）のＴＧＩが今までに得られた結果の中で最良であり、例えば２８日目において１２％、および最終日において１６％であった。８０ｍｇ／ｋｇの経口経路を介したＩＴＥの吸収効率は、ＡＵＣの観点から１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射よりもかなり低いが（図１Ｃ）、最初の３週間くらいの間は、癌増殖抑制の観点において、８０ｍｇ／ｋｇの毎日の経口投与は４０ｍｇ／ｋｇの毎日の腹腔内注射と同様であった（例えば、２４日目において、ＴＧＩ＝４６％）。ＰＫ研究から、８０ｍｇ／ｋｇの経口投与におけるＩＴＥの血漿レベルは、最初の数時間は１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射よりも低いが、注射後３〜８時間で１０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射、さらには４０ｍｇ／ｋｇの腹腔内注射よりも高くなった（図１Ｃ）。これが最初の３週間の経口投与における結果の裏にある理由であろう。経口投与の場合、その治療効果はなぜか腹腔内注射よりも長続きせず、治療の最後に向かい、終了を宣言する（図１Ｄ）。
【実施例２】
【００５４】
材料および方法
ヒト前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰの培養および接種を実施例１に示すように行った。ヒト肝癌細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ）の操作は、（ＲＰＭＩ−１６４０の代わりに）ＤＭＥＭ溶媒を使用し、Ｌ−グルタミンを使用せず、そして２×１０６の細胞を用いて雌のヌードマウスに接種したことを除いて、ＬＮＣａＰと同様であった。ヒト卵巣癌細胞株ＯＶＣＡＲ−３（ＡＴＣＣ）の取り扱いは、ＤＭＥＭ溶媒を使用し、５×１０６の細胞を使用して雌のヌードマウスの接種に使用したことを除いて、ＬＮＣａＰと同様であった。ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ−７（ＣＬ−１６１）はＭＣＦ−７（ＡＴＣＣ）からのクローン化株であり、その異種移植片の増殖にはエストロゲンの外生的供給をもはや必要としない。ＭＣＦ−７細胞の培養は、ＲＰＭＩ−１６４０溶媒と置き換えるために、１ｍＭの非必須｛ひ ひっす｝アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、および０．０１ｍｇ／ｍｌのウシインスリンが添加されたＭＥＭ溶媒を使用することを除いて、ＬＮＣａＰと同様であった。ＭＣＦ−７細胞の接種は、腫瘍成長のための０．１ｍｌのＰＢＳとマトリゲル（１：１）、および雌のマウスの使用を除いてＬＮＣａＰと同様であった。
【００５５】
ＩＴＥ源は実施例１に記載したものと同じである。ＩＴＥ構造類似体の１つである化合物ＩＴＫ（構造式２）はＳｈａｎｇｈａｉ ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ社（中華人民共和国、上海所在）によって合成された。ロット番号はＡｈＲ−ＩＴＫ−００１であった。
【００５６】
結果および考察
ヒト前立腺癌（ＬＮＣａＰ）異種移植｛いしゅ いしょく｝モデルにおいて、ＩＴＫ（ＩＴＥ構造類似体の１つ）は２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）において効果があることが示され、同じ処方計画のＩＴＥよりもさらに良好に機能した（図２Ａ）。ＴＧＩ’ｓ（腫瘍増殖抑制率）は、２８日目において、ＩＴＫおよびＩＴＥに対してそれぞれ５１％（ｐ＜０．００３、ｎ＝８）および６４％（ｐ＜０．０２１、ｎ＝８）であった。ＩＴＫおよびＩＴＥに対するＴＧＤ’ｓ（腫瘍増殖遅延）は、１，０００ｍｍ３の腫瘍体積において、それぞれ１６日および８日であった。
【００５７】
ヒト肝癌（ＨｅｐＧ２）異種移植片の増殖抑制において、８０ｍｇ／ｋｇ（１日１回の腹腔内注射）のＩＴＥおよびＩＴＫの両方は良好な有効性を示した。ＩＴＥおよびＩＴＫの能力は、本モデルにおいて非常に類似するものであった（図２Ｂ）。ＩＴＥおよびＩＴＫに対するＴＧＩ’ｓは、２２日目においてそれぞれ２５％（ｐ＜０．００１、ｎ＝８）および２２％（ｐ＜０．００１、ｎ＝８）であった。ＩＴＥおよびＩＴＫに対するＴＧＤ’ｓは、腫瘍体積８００ｍｍ３において、それぞれ２９日および２６日であった。ＩＴＫグループにおいて８匹のマウスのうち１匹が３２日目に死亡したが、明らかな純体重の減少はなかった（データ表示なし）。
【００５８】
ヒト卵巣癌（ＯＶＣＡＲ−３）の増殖抑制においても、８０ｍｇ／ｋｇ（１日１回の腹腔内注射）のＩＴＥおよびＩＴＫの両方は同様の有効性を示した（図２Ｃ）。ＴＧＩ’ｓは、ＩＴＥおよびＩＴＫに対して、３３日目においてそれぞれ４７％（ｐ＜０．００２、ｎ＝８）および４６％（ｐ＜０．００１、ｎ＝８）であった。ＩＴＥおよびＩＴＫに対するＴＧＤ’ｓは、腫瘍体積８００ｍｍ３において、それぞれ１０日および１３日であった。明らかな準体重の減少はなかった（データ表示なし）。また、ＩＴＫグループにおいて８匹のマウスのうち１匹が３２日目に死亡した。
【００５９】
ヒト乳癌（ＭＣＦ−７）の増殖抑制において、ＩＴＥは少量（２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．、１日１回の腹腔内注射）ではあったが適度な有効性を示した（図２Ｄ）。ＴＧＩはＩＴＥ処理に対して、１９日目に７１％（ｐ＜０．０３１、ｎ＝８）と算出された。５００ｍｍ３の腫瘍体積において、ＩＴＥグループからＴＧＤは３日であることを得た。より良好な増殖抑制および遅延を生じさせるために、投与レベルのさらなる増加が確実に必要であるが、ＩＴＥ処理に対するＭＣＦ−７異種移植片の反応はあった。
【００６０】
本実施例におけるＩＴＥ構造類似体の１つ（ＩＴＫ）の能力は、構造式４によって特定される骨格に基づくＩＴＥ類似体の開発において非常に大きな可能性を立証するものである。さらに、ＩＴＥ構造において、通常の（酸素）エステルに取って変わるチオールエステル官能基を有する類似体は、ＩＴＫ（構造式２）研究の結果を考慮すると特に重要であることが想定される。したがって、構造式３によってまさに特定されるチオール（Ｓ、硫黄）エステルは、ＩＴＳＥと略される。ＩＴＫおよびＩＴＳＥの両方の構造特性は、生物系における、特にＩＴＥ構造の酸素エステル官能基に対する多数のエステラーゼによる攻撃を回避することに役立つであろう。
【実施例３】
【００６１】
材料および方法
マウス・ルイス肺癌細胞株ＬＬＣ（ＡＴＣＣ）は、ＲＰＭＩ−１６４０の代わりにＤＭＥＭの溶媒を使用することを除いて、実施例１においてＬＮＣａＰに対する記載の通りに培養した。生後６〜８週間のそれぞれの雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、３×１０５ＬＬＣ細胞／０．１ｍｌＰＢＳを接種して腫瘍を成長させた。平均腫瘍体積が８０〜１２０ｍｍ３に到達したときにＩＴＥ処理を開始した。全てのその他の材料および方法は実施例１に記載のものと同じであった。
【００６２】
結果および考察
異種移植モデルを使用する利点は、ヒト癌を直接動物において試験できることである。しかしながら、欠点としては、マウスがヒト癌細胞を拒絶しないよう、マウスは免疫システムにおいて欠陥を有さなければならない。したがって、ＩＴＥが免疫系を刺激することでその治療を劇的に強化することが可能であるかを試験するために、このタイプのモデルを使用することは不可能である。そこで、マウス腫瘍細胞を健康な免疫系を有するマウスに接種した同系モデルを使用した。２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）の投与量にてＩＴＥはマウス肺癌の増殖抑制を示す（ｎ＝８、１５日目においてＴＧＩ＝６５％、図３Ａ）一方で、癌の除去または根絶の兆候はなかった。実際、このモデルにおいて腫瘍の増殖が非常に攻撃的であったため、対象グループおよびＩＴＥグループの両方において、苦しむ動物を腫瘍の大きな負担から解放するために早めに実験を終了しなければならなかった。
【００６３】
８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）の投与量において、ＩＴＥは腫瘍の増殖抑制を著しく改善したため、ＩＴＥ処理グループは前回のように早めに終了することなく実験終了時まで維持可能であった（図３Ｂ）。ＩＴＥ処理に対する２０日目でのＴＧＩは４２％（ｎ＝８、ｐ＜０．０３７）であり、１０００ｍｍ３の腫瘍体積におけるＴＧＤは７日間であった。ＩＴＥグループのうちの１匹のマウス（マウスＮｏ．３３）は、ＩＴＥ処理の開始からすぐその腫瘍を縮小させ始め、それはその腫瘍が１３日目においてもはや触知できなくなくなるまで続いた（図３Ｃ）。そのマウスは残りのＩＴＥ処理段階の間（全２８日間）、腫瘍が存在しない状態を保った。２８日間の処理が終了した後、そのマウスにもう１か月与えてその腫瘍の再増殖の可能性を観察した。しかしながら再増殖は起こらず、そのマウスは観察中の全１か月間腫瘍が存在しない状態を保ち、処理による全癌細胞の除去を示唆した（図３Ｃ）。体重変化の観察によって、ＩＴＥグループのマウスＮｏ．３３およびその他のマウスは処理に対して良好な耐性を有することを示唆した（図３Ｄ）。
【００６４】
異種移植モデルでは、完全な腫瘍の除去は、８０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（１日１回の腹腔内注射）の投与、または１日２回の８０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）投与においても決して起こらなかった。それにより、この同系モデルのマウスにおける免疫系の刺激を議論することが可能であろう。実際には、下記の実施例４の結果によって、低（２０ｍｇ／ｋｇ、１日１回の腹腔内注射）投与量では示さなかったが、高（５００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の腹腔内注射）、および中（１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回の腹腔内注射）投与量において、白血球、好中球、リンパ球、および血小板の数の上昇を示したことで、この概念は支持され得る。したがって、癌と戦い個々の癌細胞を除去することに役立つよう免疫系が動員され、その一方で同時に癌増殖が効果的に抑制かつ攻撃されれば、癌の根絶を達成することが可能であろう。
【実施例４】
【００６５】
材料および方法
ＩＴＥナノ懸濁液は、湿式媒体製粉機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＳＬ−ｎａｎｏ、ＷＡＢ Ｗｉｌｌｙ Ａ．Ｂａｃｈｏｆｅｎ ＡＧ社、スイス、ムッテンツ所在）を用いて、１％のＣＭＣ−Ｎａ（カルボキシメチルセルロースナトリウム）、０．５％のＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、０．０８５％のＰＶＰ Ｋ９０（ポリビニルピロリドン Ｋ９０）、および０．２％の安息香酸塩を含む水中で、ＩＴＥ粉末を所望のサイズ範囲に到達するまで製粉して調製した。粒径をレーザー回折式粒度分布測定装置（ＭＳ２０００、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、イギリス、ウスターシャー所在）を用いて決定した。粒径のパラメータを、Ｄ１０（１０％の粒子の直径）＝６７ｎｍ、Ｄ５０＝１１４ｎｍ、およびＤ９０＝２０７ｎｍとして決定した。そして調製したナノ懸濁液を使用するまで４℃で保管した。
【００６６】
生後６〜８週間の雌のＣ５７ＢＬ／６マウスを、各４つの投与グループ（０、２０、１００、および５００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．）に６匹ずつ無作為に割り当てた。ＩＴＥナノ懸濁液を７日間連続して１日１回腹腔内注射により投与した。死亡率、臨床兆候、体重、および飼料消費を記録した。血液学（６匹中３匹）および血液生化学検査（６匹中他の３匹）のデータを収集した。ＴＫ（毒物動態学）パラメータを実施例１に記載の通り決定し、１、３、および７日目において投与から１時間および３時間後の両方のＩＴＥの血漿レベルを測定した。剖検にて主要な臓器の総括的観察を行った。
【００６７】
結果および考察
ＴＫデータは適切なＩＴＥ系の暴露を確認した（データ表示なし）。２０ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（低投与量）グループの１匹のマウスが投与の２日目を前にして原因不明で死亡したことを除き、死亡は観察されなかった。全３つのＩＴＥ処理グループにおいて飼料消費の劇的な減少が調査の１日目において発見されたが、ＩＴＥ処理による著しい体重の減少はなかった。剖検による全ＩＴＥ処理グループにおける主要臓器検査からは異常は観察されなかった。５００ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．（高投与量）グループにおけるＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）、およびＴＰ（総タンパク量）のレベルは、溶媒コントロールに対して、それぞれ３．２（ｐ＜０．０５）、１．８（非有意）、および１．２（ｐ＜０．０５）倍上昇した（表１）。２０ｍｇ／ｋｇ（低投与量）グループのＢＵＮ（血中尿素窒素）は、溶媒に対して１．４倍（ｐ＜０．０５）上昇した。これらのデータ、特にＡＬＴのデータは、ＩＴＥ投与量が上限付近に到達していることを示唆している可能性がある。ＷＢＣ（白血球数）は、１００ｍｇ／ｋｇ（中）および５００ｍｇ／ｋｇ（高）グループにおいて、それぞれ２．６倍（ｐ＜０．０５）および２．０倍（非有意）上昇した。その他のＰＬＴ（血小板）の割合、ＮＥＵＴ（好中球）の割合、好中球の数（＃ＮＥＵＴ）、およびリンパ球の数（＃ＬＹＭＰＨ）等は、統計的に有意ではないが、１００ｍｇ／ｋｇおよび５００ｍｇ／ｋｇのグループの両方において上昇した（表１）。追加の確認試験を行う必要はあるが、血液学におけるデータはＩＴＥによる免疫系の動員を実際に示唆しているため、実施例３に示される癌根絶のデータに高い確率で反響し得る。
血液学および血液生化学検査に関する部分的測定値
【００６８】
【表１】
表１は血液学および血液生化学検査に関する部分的測定値を示しており、グループ平均および括弧内にＳＤ（標準偏差）が記載されている。＊は統計的有意性（ｐ＜０．０５）を示し、「ｎｏ」は標準偏差が試料サイズのために得られないことを意味している。ＡＬＴはアラニンアミノトランスフェラーゼ、ＡＳＴはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、ＴＰは総タンパク量、ＢＵＮは血中尿素窒素、ＷＢＣは白血球数、ＰＬＴは血小板、ＮＥＴＵは好中球、＃ＮＥＴＵは好中球数、および＃ＬＹＭＰＨはリンパ球数を意味している。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明は、人類およびその他の動物、特に哺乳動物のための、癌の介入治療または根絶における領域に適用することが可能である。
【００７０】
符号の説明
本明細書において使用される用語である、ＩＴＥの「構造類似体」または単に「類似体」は、ＡｈＲ内因性リガンドであるＩＴＥと類似する化学構造を有する化合物として定義する。
【００７１】
本明細書において使用される用語「アルキル」は、水素で飽和された１〜６個の炭素が直鎖または分岐鎖の形状で結合した基を表す。
【００７２】
本明細書において使用される用語「ハロアルキル」は、１以上のハロゲン原子によって置換されたアルキルを表す。
【００７３】
本明細書において使用される用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖の形状で結合した２〜６個の炭素を含む炭化水素基を表す。
【００７４】
本明細書において使用される用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を有する直鎖または分岐鎖の形状で結合した２〜６個の炭素を含む炭化水素基を表す。
【００７５】
本明細書において使用される用語「ハロ」は、あらゆるハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩ）を表す。
【００７６】
本明細書において使用される用語「カルボニル」は、
【００７７】
【化９】
【００７８】
を表す。
本明細書において使用される用語「アルカノイル」は、カルボニル基に結合したアルキルを表す。
【００７９】
【化１０】
【００８０】
本明細書において使用される用語「ハロアルカノイル」は、カルボニル基に結合したハロアルキルを表す。
【００８１】
【化１１】
【００８２】
本明細書において使用される用語「窒素保護基」は、合成手順の間の好ましくない化学反応から窒素を保護するために通常使用される基を表す。
【００８３】
本明細書において使用される用語「アミノ」は、ＮＲａＲｂを表し、ＲａおよびＲｂは、独立して、水素、ハロ、ホルミル（−ＣＨＯ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイル、ハロアルカノイル、または窒素保護基から選択され得る。
【００８４】
本明細書において使用される用語「アルコキシ」は、酸素原子に結合したアルキル（−Ｏ−アルキル）を表す。
【００８５】
本明細書において使用される用語「ハロアルコキシ」は、酸素原子に結合したハロアルキル（−Ｏ−ハロアルキル）を表す。
【００８６】
本明細書において使用される用語「チオアルコキシ」は、硫黄原子に結合したアルキル（−Ｓ−アルキル）を表す。
【００８７】
本明細書において使用される用語「カルボニルオキシ」は、酸素原子に結合したアルカノイルを表す。
【００８８】
【化１２】
引用文献
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける有効量を癌を患う被験者に投与することで、癌を介入治療または根絶する方法。
【請求項２】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを１以上の薬学的に許容される担体と組み合わせることで、前記被験者への前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの投与を補助する方法。
【請求項３】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを投与する段階は、局所、腸内、および非経口の投与から成る群より選択される方法。
【請求項４】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける有効量、および前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける投与回数は、前記被験者の血液中における前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの濃度‐時間特性を観察し、試験の期間に形成された同様の濃度‐時間特性と癌の抑制または根絶に対する効果との間で確立された相関を調査し、かつ前記被験者に対する毒性の可能性と前記被験者における健康状態または身体的耐久性の両方から達成される治療効果の平衡を保つことで決定される方法。
【請求項５】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを、必要に応じて、１以上のその他の癌治療薬と共に、同じまたは異なるスケジュールにて前記被験者に投与する方法。
【請求項６】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける維持量は、癌の根絶を確実にするために前記被験者に癌が存在しなくなった後に提供され、前記維持量の継続期間は試験によって方向付けられる方法。
【請求項７】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥは以下の構造式（構造式１）で示される方法。
【化１】
【請求項８】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥの具体的に選択される構造類似体はＩＴＫと称され、以下の構造式（構造式２）を有する方法。
【化２】
【請求項９】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥの他の具体的に選択される構造類似体はＩＴＳＥと称され、以下の構造式（構造式３）を有する方法。
【化３】
【請求項１０】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥのその他の構造類似体は以下の構造式（構造式４）で表され、
【化４】
式中、
ＸおよびＹは、独立して、Ｏ（酸素）またはＳ（硫黄）であり、
ＲＮは水素、ハロ、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイル、ハロアルカノイル、または窒素保護基から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ（−ＯＨ）、チオール（−ＳＨ）、シアノ（−ＣＮ）、ホルミル（−ＣＨＯ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ（−ＮＯ２）、アルコキシ、ハロアルコキシ、チオアルコキシ、アルカノイル、ハロアルカノイル、またはカルボニルオキシから選択され、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、もしくはチオアルコキシから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【化５】
であり、
式中、Ｒ８は、水素、ハロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【化６】
であり、
Ｒ９は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【化７】
であり、
Ｒ１０は、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７はまた、独立して、
【化８】
であり、
式中、Ｒ１１は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、またはアルキニルから選択される方法。
【請求項１１】
請求項１の方法であって、前記被験者は、人類およびその他の動物、特に哺乳動物から成る群より選択される方法。
【請求項１２】
請求項１の方法であって、前記癌は、前立腺癌、肝癌、肺癌、卵巣癌、および乳癌から成る群より選択される方法。
【請求項１】
ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける有効量を癌を患う被験者に投与することで、癌を介入治療または根絶する方法。
【請求項２】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを１以上の薬学的に許容される担体と組み合わせることで、前記被験者への前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの投与を補助する方法。
【請求項３】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを投与する段階は、局所、腸内、および非経口の投与から成る群より選択される方法。
【請求項４】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける有効量、および前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける投与回数は、前記被験者の血液中における前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つの濃度‐時間特性を観察し、試験の期間に形成された同様の濃度‐時間特性と癌の抑制または根絶に対する効果との間で確立された相関を調査し、かつ前記被験者に対する毒性の可能性と前記被験者における健康状態または身体的耐久性の両方から達成される治療効果の平衡を保つことで決定される方法。
【請求項５】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つを、必要に応じて、１以上のその他の癌治療薬と共に、同じまたは異なるスケジュールにて前記被験者に投与する方法。
【請求項６】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥまたはその構造類似体の１つにおける維持量は、癌の根絶を確実にするために前記被験者に癌が存在しなくなった後に提供され、前記維持量の継続期間は試験によって方向付けられる方法。
【請求項７】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥは以下の構造式（構造式１）で示される方法。
【化１】
【請求項８】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥの具体的に選択される構造類似体はＩＴＫと称され、以下の構造式（構造式２）を有する方法。
【化２】
【請求項９】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥの他の具体的に選択される構造類似体はＩＴＳＥと称され、以下の構造式（構造式３）を有する方法。
【化３】
【請求項１０】
請求項１の方法であって、前記ＩＴＥのその他の構造類似体は以下の構造式（構造式４）で表され、
【化４】
式中、
ＸおよびＹは、独立して、Ｏ（酸素）またはＳ（硫黄）であり、
ＲＮは水素、ハロ、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アルカノイル、ハロアルカノイル、または窒素保護基から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ（−ＯＨ）、チオール（−ＳＨ）、シアノ（−ＣＮ）、ホルミル（−ＣＨＯ）、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ（−ＮＯ２）、アルコキシ、ハロアルコキシ、チオアルコキシ、アルカノイル、ハロアルカノイル、またはカルボニルオキシから選択され、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、ホルミル、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロ、アルコキシ、ハロアルコキシ、もしくはチオアルコキシから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【化５】
であり、
式中、Ｒ８は、水素、ハロ、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【化６】
であり、
Ｒ９は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７は、独立して、
【化７】
であり、
Ｒ１０は、水素、ハロ、ヒドロキシ、チオール、シアノ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、アルキニル、アミノ、ニトロから選択され、または、
Ｒ６、およびＲ７はまた、独立して、
【化８】
であり、
式中、Ｒ１１は、水素、ハロ、アルキル、ハロアルキル、アルケニル、またはアルキニルから選択される方法。
【請求項１１】
請求項１の方法であって、前記被験者は、人類およびその他の動物、特に哺乳動物から成る群より選択される方法。
【請求項１２】
請求項１の方法であって、前記癌は、前立腺癌、肝癌、肺癌、卵巣癌、および乳癌から成る群より選択される方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２０１３−５０９４１１（Ｐ２０１３−５０９４１１Ａ）
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３６８６２（Ｐ２０１２−５３６８６２）
【出願日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７２９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５３４６６
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（５１２０８２７６１）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月１４日（２０１３．３．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５２７２９
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５３４６６
【国際公開日】平成２３年５月５日（２０１１．５．５）
【出願人】（５１２０８２７６１）
【Ｆターム（参考）】
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