発毛・育毛料
【課題】 男性および女性のいずれに対しても、また、その成分濃度が超稀薄濃度においても、優れた発毛、育毛効果を有する新規な発毛・育毛料を提供する。
【解決手段】 一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシド、好ましくコレステリルグルコピラノシドを含有すること
を特徴とする発毛・育毛料である。
一般式（Ｉ）
（但し、式中、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基を示す。）
【解決手段】 一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシド、好ましくコレステリルグルコピラノシドを含有すること
を特徴とする発毛・育毛料である。
一般式（Ｉ）
（但し、式中、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基を示す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、新規な発毛・育毛料に関するものである。
より詳しくは、ステリルグルコピラノシド、好ましくはコレステリルグルコピラノシドを有効成分とし、その成分濃度が１０−１３ｇ／ｍＬ、１０−１２ｇ／ｍＬという超希薄濃度においても、優れた発毛・育毛効果を発揮する発毛・育毛料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症の原因としては、ホルモンバランスの乱れ、毛乳頭および毛包周囲の毛細血管の循環障害、皮脂腺機能の過度な亢進や皮脂分泌障害、ストレスの蓄積、免疫機能の低下、毛母細胞の機能低下、毛の成長に関与する各種酵素活性の異常、フケの過剰発生（皮脂分泌異常・頭皮細菌類の増殖）、頭皮の緊張や過剰乾燥などが関係するとされている。
【０００３】
かかる脱毛の予防あるいは毛成長促進、さらには発毛促進のためには、
（１）局所血液循環および代謝の促進
（２）毛包細胞の増殖促進
（３）男性ホルモンによる脱毛作用の予防および皮脂分泌の抑制
（４）頭皮環境の保全
などが考えられる。
【０００４】
健常なヒト頭髪は、ほぼ５，６年の周期で生え変わっている。
この間、毛包を形成し、毛を伸ばしていく「成長期」、成長が減弱する「退行期」、成長が止まる「休止期」の３期間に分類されている。
【０００５】
男性型脱毛においては、この毛周期が徐々に短くなり、成長期が短縮することで、太く長い終毛から、産毛状の軟毛に変化して行くことが知られている。
【０００６】
頭皮の血流促進は、主に毛乳頭内と、毛包を取り巻く間葉系細胞周辺の毛細血管を介して、酸素と養分を毛包に補給し、毛母細胞など上皮系細胞の増殖を円滑に進めることで、特に成長期に効果があると考えられるが、詳細なメカニズムは明確に示されていない。
【０００７】
血行促進、血管拡張、エネルギー供給に加えて、すでに数多くの研究があるのが、男性ホルモンの抑制の観点から、脱毛抑制、発毛促進効果のあるホルモンバランスを整える薬剤である。
しかしながら、必ずしも脱毛への機構が充分解明されたとは言えないが、この観点からの育毛薬剤の開発は進んでいる。
【０００８】
その他、薬剤開発まで進んではいないが、細胞増殖因子、神経伝達物質などの物質の毛包構成細胞への効果や、アポトーシス関連物質、毛包誘導因子、血管新生因子などの毛周期との関連、その発毛促進、成長期延長などが研究されている。
【０００９】
男性型脱毛でも円形脱毛症ほどではないが、毛包周辺に若干の炎症を伴うことも報告されており、サイトカインなどについて男性型脱毛の関連も研究されつつある。
男性に比較して、女性においては薄毛の研究は余りされていない。
【００１０】
しかしながら、近年、薄毛を気にする女性が増加している。
これは、女性の社会進出などに起因するストレスなどが原因と言われている。
【００１１】
男性型脱毛においては、毛包成長期間が短くなることで、未成熟な毛包が多くなり結果的に産毛が多くなることが知られている。
しかしながら、女性では、成長期比率が殆ど変わらないことから、毛の細りの原因は、産毛の増加というより終毛の細毛化と考えられる。
つまり、毛包を太く、しかも毛包細胞を活発に増殖させることで、より太い毛を生えさせることが可能となると考えられる。
【００１２】
成長期毛では、毛根は真皮下層の脂肪層にまで深く入り込み、５〜６年程度の成長期を終了すると、退行期、休止期と徐々に半分程度まで短くなることが知られている。
新しい成長期を迎えると、毛根は、また徐々に脂肪層の奥深く入り込み、新しい毛を伸ばし始める。
【００１３】
成長期毛包が大きくなる時期には、毛乳頭周辺の毛母細胞および毛幹周辺の毛根鞘細胞で、陽性細胞が多く見られることが確認されている。
そのため、毛根鞘細胞の増殖を促進することが、女性の髪の細りを改善するのに重要であると考え、細胞培養系での細胞増殖促進する薬剤の開発研究が行われている。
【００１４】
一方、例えば、特開平０４−５２１９号公報（特許文献１）や特開平０５−２５０２３号公報（特許文献２）においては、発毛、育毛成分として、ステロイド配糖体、トリテルペノイド配糖体を用いたものが研究されている。
【００１５】
さらに、例えば、特開平０７−１０９２９５号公報（特許文献３）においては、ステロイド配糖体の一種であるスチグマステロール配糖体を有効成分として含む発毛・育毛料が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開平０４−５２１９号公報
【特許文献２】特開平０５−２５０２３号公報
【特許文献３】特開平０７−１０９２９５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
前記特許文献３に記載のスチグマステロール配糖体は、スチグマステロールのマルトシド、マルトトリオシド、マルトテトラオシド又はマルトペンタオシドである。
育毛料中の前記フチグマステロール配糖体の含有量は、０．０００５〜５質量％（実施例では１質量％）であって、育毛料としての通常の濃度である。
このスチグマステロールは、大豆油、やし油、ワタの種子など、植物界に広く分布しているもので、コレステロールは動物界に分布するステロールである。
【００１８】
このように、トリテルペノイド配糖体やステロイド配糖体は、発毛、青毛効果が期待され、様々な試みがなされているが、これまで、十分な発毛、育毛効果は得られていないのが実状である。
【００１９】
この発明はかかる現状に鑑み、男性および女性に対して優れた発毛、育毛効果を有する新規な発毛・育毛料を提供することを目的とするものである。
【００２０】
発明者は、先に家禽類の羽毛を原料とする水溶性ケラチン誘導体を開発するとともに、この水溶性ケラチン誘導体が、高エネルギー波吸収剤、発光材料、耐侯性改善剤、撥水剤などとして有用であることを見出した。
【００２１】
この水溶性ケラチン誘導体について、さらに研究の結果、このケラチン誘導体は、剃毛マウスに対して発毛効果を有することを見出すとともに、その中の発毛に対する有効成分が、コレステリルグルコピラノシドであることを突き止めた。
【００２２】
さらに研究を重ねた結果、前記コレステリルグルコピラノシド以外のステリルグルコピラノシドも発毛・育毛効果を有すること、そして意外にもある濃度範囲の超希薄溶液において、優れた発毛・育毛効果を発揮することを見出した。
この発明は、かかる知見に基づいて完成したものである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを含有すること
を特徴とする発毛・育毛料である。
【００２４】
【化１】
（但し、式中、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基を示す。）
【００２５】
また、この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載の発毛・育毛料において、
前記一般式（Ｉ）におけるステロール残基は、
コレステロール残基、β−シトステロール残基、スチグマステロール残基、カンペステロール残基又はブラジカステロール残基であること
を特徴とするものである。
【００２６】
また、この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項１に記載の発毛・育毛料において、
前記ステリルグルコピラノシドは、
コレステリルグルコピラノシドであること
を特徴とするものである。
【００２７】
また、この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項１〜３のいずれかに記載の発毛・育毛料において、
前記ステリルグルコピラノシドは、
天然由来物質及び／又は合成品であること
を特徴とするものである。
【００２８】
また、この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項３に記載の発毛・育毛料において、
前記コレステリルグルコピラノシドは、
鳥類の羽毛から得られたものであること
を特徴とするものである。
【発明の効果】
【００２９】
この発明の発毛・育毛料は、ステリルグルコピラノシド、好ましくはコレステリルグルコピラノシドを有効成分とするもので、希薄濃度においても、優れた発毛・育毛効果を発揮するものである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】この発明における製造例２−（３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（合成ＣＧ）の１Ｈ−ＮＭＲチャート（５００ＭＨｚ ｉｎ Ｄ２Ｏ）である。
【図２】同製造例２−（３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（合成ＣＧ）のケイ酸ＴＬＣクロマトグラムである。
【図３】同製造例２−（３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（合成ＣＧ）のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図４】この発明における実施例５におけるＦＣＧの４６歳女性の頭髪に対する発毛試験結果を示す頭部の写真図である。
【図５】同実施例６におけるＦＣＧの３５歳男性の頭髪に対する発毛試験結果を示す頭部の写真図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
この発明の発毛・育毛料は、有効成分として、一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを含有することを特徴とするものである。
【００３２】
【化２】
【００３３】
前記一般式（Ｉ）において、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基である。
【００３４】
このＺで表されるステロール残基としては、下記式２で表されるコレステロール、β−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロールおよびブラジカステロールの残基を挙げることができる。
【００３５】
【化３】
【００３６】
前記コレステロールは、動物界に広く分布しているステロールである。
前記β−シトステロールは、代表的な植物ステロールで、通常カンペステロール、スチグマステロールなどと共存していることが多い。
綿実油、タール油、大豆油などの主ステロールである。
【００３７】
前記スチグマステロールは、大豆油に豊富に含まれ、やし油、綿の種子など植物界に広く分布しており、β−シトステロール、カンペステロールと共存することが多い。
前記カンペステロールは、西洋アブラナの種子、大豆、小麦胚芽、ナタネなどに含まれている。
前記ブラジカステロールは、アプラナ科植物の種子、海藻、貝類などに含まれている。
【００３８】
これらのステリルグルコピラノシドは、異性体が存在するものもあるが、いずれの異性体でもよく、また、グルコピラノシル結合においてはα体、β体のいずれでもよい。
この発明においては、ステリルグルコピラノシドとしては、発毛、育毛効果の点から、コレステリルグルコピラノシドが好ましい。
【００３９】
この発明における前記一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドは、天然由来物質であってもよく、合成品であってもよい。
一般に、ステリルグルコピラノシドは、天然物からの抽出あるいはステロールとＤ−グルコースを用いる化学合成によって得ることができる。
この発明において好ましいコレステリルグルコピラノシドは、合成品を用いてもよい。
天然由来物質としては、例えば、鳥類の羽毛から得られたものを、好ましく用いることができる。
【００４０】
前記一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドは、以下のようにして合成することができる。
【００４１】
＜ステリルグルコピラノシドの合成法＞
適当な溶媒中において、各種ステロールとアセトハロゲノ−α−Ｄ−グルコピラノースを、シアン化水銀や酸化銀などの触媒の存在下に室温程度の温度で反応させて、テトラアセチルステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドを得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。
つぎに、この精製テトラアセチルステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドを、例えば、メタノール−水溶媒中で室温程度の温度で加水分解処理することにより、目的のステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドが得られる。
ステリル−α−Ｄ−グルコピラノシドを合成する場合には、上記方法において、原料のアセトハロゲノ−α−Ｄ−グルコピラノースの代わりに、アセトハロゲノ−β一Ｄ一グルコピラノースを用いればよい。
【００４２】
また、例えば、コレステリルグルコピラノシドなどは、鳥類の羽毛より、以下に示す方法により得ることができる。
【００４３】
＜天然由来のコレステリルグルコピラノシド＞
鳥類の羽毛を破砕し、適当な抽出溶媒で処理して、まず全脂質を抽出する。
ついで、この全脂質から、メタノール−水溶解物を取り出したのち、弱アルカリ処理して、アルカリ処理安定な複合脂質画分を得る。
得た複合脂質両分を、ケイ酸カラムクロマトグラフィーや、ケイ酸薄層クロマトグラフィー（ケイ酸ＴＬＣ）に付し、粗製のコレステリルグルコピラノシドを得たのち、さらにケイ酸ＴＬＣに付すことにより、精製コレステリルグルコピラノシドが得られる。
【００４４】
この発明の発毛・育毛料は、前記一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドの含有するものである。
その際、濃度が１０−１３ｇ／ｍＬ、１０−１２ｇ／ｍＬという超希薄濃度においても、発毛・育毛効果を発揮するという優れた特長を示すものである。
なお、この含有量を多くしても、その量に応じた発毛、育毛効果が発揮されず、むしろ逆に発毛、育毛効果が低下する傾向も認められる。
したがって、前記ステリルグルコピラノシドの好ましい含有量は、１０−１３〜１０−８ ｇ／ｍＬ、より好ましい含有量は１０−１３〜１０−９ｇ／ｍＬである。
【００４５】
この発明の発毛・育毛料の剤型は、特に限定されるものではないが、例えば、ヘアトニック、シャンプー、リンス、ポマード、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアトリートメント等の通常、発毛・育毛料として用いられているものが挙げられる。
これらの発毛・青毛料は、一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを配合する以外は、通常の発毛・育毛料と同様の方法で調製することができる。
【００４６】
また、この発明の発毛・育毛料には、通常、発毛・育毛料に適用される炭化水素類、ロウ類、油脂類、エステル類、高級脂肪酸、高級アルコール、界面活性剤、香料、色素、防腐剤、抗酸化剤、紫外線防御剤、アルコール類、ｐＨ調整剤、及び各種目的に応じた種々の薬効成分などが適宜選択されて調製される。
【００４７】
さらに、この発明の発毛・育毛成分であるステリルグルコピラノシド以外の発毛、育毛成分、例えば、卵胞ホルモン、抹消血管血流促進剤、局所刺激剤、角質溶解剤、抗脂漏剤、殺菌剤、代謝賦活剤、酸索活性阻害剤、消炎剤、栄養剤、保湿剤等を当該ステリルグルコピラノシドと併せて用いることもできる。
【実施例】
【００４８】
以下、この発明にかかる発毛・育毛料を実施例に基づいて詳細に説明するが、この発明は、これらの例によってなんら限定されるものではない。
【００４９】
＜製造例１＞
トリ羽毛由来のコレステリルグルコピラノシド（以下、ＦＣＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
１）全脂質の抽出
破砕されたニワトリ羽３５０ｇに、クロロホルムーメタノール（容量比２：１）６Ｌを加えて２時間振とうした。
吸引ろ過後、残渣に、さらにクロロホルムーメタノール（容量比２：１）６Ｌを加えて２時間振とうした。
吸引ろ過後、クロロホルム−メタノール（容量比１：２）６Ｌを加えて２時間振とうし、脂質を抽出した。
得られた全抽出液を濃縮乾固し、クロロホルム−メタノール−水（容量比８：４：３）で分配したのち、下層を濃縮乾固して、全脂質５．６ｇを得た。
２）アルカリ安定な複合脂質画分の調製
前記１）で得られた全脂質にヘキサン９００ｍＬ、メタノール１，８００ｍＬを加えて撹拌した。
その後、水３００ｍＬを加えて再撹拌し、下層のメタノール−水層を分取した。
上層のヘキサン層に再度メタノール６００ｍＬを加えて撹拌し、その後、水１５０ｍＬ加えて撹拌したのち、下層を分取した。
メタノール−水層を合わせて濃縮乾固したのち、弱アルカリ処理（０．４モル／Ｌメタノール性ＫＯＨ溶液で温度３７℃にて２時間分解）した。
３）ケイ酸カラムクロマトグラフィーおよびケイ酸薄層クロマトグラフィーによるＦＣＧの単離
前記２）で得られたアルカリ処理安定な複合脂質画分を、クロロホルムーアセトン（容量比７：３）可溶部と不溶部に分けたのち、それぞれケイ酸カラムクロマトグラフィーに供した。
可溶部は、クロロホルム−アセトン（容量比７：３）５００ｍＬ、クロロホルム−アセトン（容量比１：１）５００ｍＬ（画分１）、アセトン５００ｍＬ（画分２）およびクロロホルム−メタノール（容量比２：１）５００ｍＬで溶出した。
不溶部は、クロロホルム−アセトン（容量比１：１）６５０ｍＬ（画分３）、アセトン３００ｍＬ（画分４）、およびクロロホルム−メタノール（容量比２：１）３００ｍＬで溶出した。
【００５０】
それぞれの画分を、クロロホルム−メタノール−水（容量比６５：１６：２）を展開溶媒とするケイ酸ＴＬＣ（ケイ酸薄層クロマトグラフィー）に供し、コレスデリルグルコピラノシド（ＣＧ）のスポッ卜を確認した。
【００５１】
画分１および画分２と画分４を合わせたものを、クロロホルム−メタノール（容量比９５：１２）を展開溶媒としたケイ酸ＴＬＣに供し、ＣＧのスポットを分取した。
それぞれ２６．７ｍｇと、１２．７ｍｇの粗製ＣＧが得られた。
【００５２】
画分３は、さらにケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム−アセトン（容量比７：３）５００ｍＬ、クロロホルムーアセトン（容量比１：１）５００ｍＬ（画分5)およびアセトン５００ｍＬで溶出した。
画分５からは、粗製ＣＧが１２．０ｍｇ得られた。
【００５３】
前記の粗製ＣＧを合わせて、クロロホルム−メタノール容量比（９５：１２）を展開溶媒としたケイ酸ＴＬＣに供し、ＣＧのスポットを分取し、ＣＧ精製物（ＦＣＧ）４０ｍｇを得た。
【００５４】
＜製造例２＞
合成コレステリルグルコピラノシド（以下、ＳＣＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
なお、アセトブロモグルコース、コレステロール、酸化銀、シアン化水銀、３０質量％アンモニア水は、和光純薬社製の特級を用いた。
【００５５】
１）シアン化水銀を用いたテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
５０ｍＬナスフラスコ内でＣＨ３ＣＮ ５ｍＬにコレステロール１９３ｍｇと、アセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース１．２３８ｇを加え、撹拌した。
ここに、Ｈｇ（ＣＮ）２ ４１１ｍｇを加え、室温で３時間撹拌し、ＴＬＣでアセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノースの消失を確認した。
これに、ＣＨ２Ｃｌ２ １０ｍＬを加え、吸引ろ過した。
得たろ液を、飽和ＮａＨＣＯ３水、水で分液し、ＭｇＳＯ４を加え一晩放置した後、吸引ろ過し、濃縮した。
これをＳｉＯ２ カラム（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００、展開溶媒 ヘキサン：酢エチ容量比＝１９：１ ２００ｍＬ，９：１ １００ｍＬ，４：１ １００ｍＬ，１：１ １００ｍＬ）で分画し、テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド２５２ｍｇ（収率７０．４％）を得た。
【００５６】
２）酸化銀を用いたテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
５００ｍＬナスフラスコ内でＣＨ２Ｃｌ２ ２００ｍＬに、コレステロール１５．０９ｇとアセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース３０．６５ｇを加え、撹拌した。
ここに、Ａｇ２Ｏ ２１．００ｇを加え、室温で３時間撹拌し、さらに、アセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース３０．６５ｇ、Ａｇ２Ｏ ２１．００ｇを加えた。
１０時間後、さらに、アセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース３０．６５ｇ、Ａｇ２ Ｏ２１．００ｇを加えた。
これを１２時間撹拌し、ＴＬＣでアセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノースの消失を確認してから、吸引ろ過した。
得たろ液を濃縮し、これをＳｉＯ２ カラム（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００、展開溶媒 ヘキサン：酢エチ（容量比＝１９：１ ５００ｍＬ，９：１ ５００ｍＬ，４：１ １００ｍＬ，１：１ ５００ｍＬ）で分画した。
さらに、同じ条件でＳｉＯ２カラムを繰り返し、ＴＬＣでワンスポットのテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１５．６２ｇ（収率５５．８％）を得た。
【００５７】
３）テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの加水分解によるコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドヘの変換
（ａ）前記１）で得られた、テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１００．２ｍｇをメタノール５０ｍＬに溶解した。
さらに、３０質量％アンモニア水１０ｍＬを加えた。
これを室温で１２時間撹拌し、ＴＬＣで原料の消失を確認した。
この溶液を濃縮し、コレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド６８．２ｍｇ（収率８８．９％）を得た。
【００５８】
（ｂ）前記２）で得られた、テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１５．４１ｇをメタノール３００ｍＬに溶解した。
さらに、３０質量％アンモニア水５０ｍＬを加えた。
これを室温で１２時間撹拌し、ＴＬＣで原料の消失を確認した。
この溶液を濃縮し、コレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１１．３１ｇ（収率９５．９％）を得た。
これをエタノール−水で再結晶し、白色の粉末（４．５８ｇ）を得た。さらに、母液を再度結晶化させ、薄茶色の粉末（２．７ｇ）を得た。
なお、活性試験用には、この方法で合成されたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いた。
【００５９】
＜分析結果＞
イ）テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの構造確認
前記１）および２）で得られたテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコビラノシドの１Ｈ−ＮＭＲは、いずれも文献値と良い一致を示した。
また、ジアステレオ異性体のテトラアセチルコレステリル−α−Ｄ−グルコピラノシドの生成も、認められなかった。
ロ）コレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの構造確認
前記３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの１Ｈ−ＮＭＲを図１に示す。
このコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドは、文献値と良い一致を示した。加水分解反応は定量的に反応が進んでいた。
ハ）コレステリル−β−Ｄ−グルコビラノシドの純度
前記３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドのＴＬＣクロマトグラムを図２に、ＨＰＬＣクロマトグラムを図３に示す。
これらから、白色粉末、薄茶色の粉末のいずれも、ワンスポット、ワンピークを与えることが分かる。
【００６０】
＜製造例３＞
トウモロコシ由来のステリルグルコピラソシド（以下、ＣＳＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
トウモロコシ種実（スイートコーン種）１００ｇ（生質量）を、温度１００℃の水蒸気で３分間加熱して酵素を失活した後、ポリトロン型ホモジナイザーを用いて、５倍容のクロロホルム：メタノール（２：１，ｖ／ｖ）でホモジナイズし、吸引ろ過した。
この残渣について、同様の処理をクロロホルム：メタノール（２：１，ｖ／ｖ）およびクロロホルム：メタノール（１：２，ｖ／ｖ）で１回ずつ行い、それぞれの抽出液を回収した。
この抽出液を濃縮後、混在する水溶性成分を水洗除去し、下層のクロロホルム層を減圧濃縮して、総脂質とした。総脂質は約１．７ｇ回収された。
つぎに、総脂質をクロロホルム−アセトン−メタノール系のケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、中性脂質、糖脂質およびリン脂質に分画した。
この糖脂質画分を、クロロホルム−アセトン系のケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、粗分画した後、展開溶媒にクロロホルム−メタノール−水（６５：１６：２，ｖ／ｖ）を用いた分取ケイ酸ＴＬＣを用いて、ステリルグルコピラノシド（ＣＳＧ）を精製した。
収量は、トウモロコシ１００ｇ（生質量）当たり３．４ｍｇであった。
【００６１】
＜製造例４＞
コメ由来のステリルグルコピラノシド（以下、ＲＳＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
製造例３と同様にして、コメ糠から総脂質を抽出した。総脂質の収量は、コメ糠１００ｇ当たり１０．９ｇであった。
つぎに、製造例３と同様にして、総脂質からステリルグルコピラノシド（ＲＳＧ）を分離精製した。収量は、コメ糠１００ｇ（生質量）当たり２６．７ｍｇであった。
【００６２】
＜参考例１；マウスによる発毛の予備実験＞
製造例１で得たＦＣＧ１０ｐｇ／ｍＬ濃度の７０質量％エタノール水溶液（試料液）を調製した。
９週齢ＩＣＲ雄マウス４匹の剃毛背側皮膚に、前記試料液２０μＬを塗布し、３時間後と６時間後に皮膚を採取した。
この皮膚に対し、ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞増殖因子）、Ｈｓｐ７０（熱ショック蛋白７０）及びＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）の蛍光抗体法による免疫染色とＨＥ染色（ヘマトキシリンーエオシン染色）を行い、１４μｍ厚クリオスッタト切片の標本を作製した。
この標本を、顕微鏡と写真撮影装置［Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ，Ｊｅｎａ社製、ＡｘｉｏＣａｍ ＭＲｃ５装着Ａｘｉｏｓｋｏｐ］で観察した。
【００６３】
（１）塗布３時間後
＜ＨＥ染色＞
２匹中、１匹のマウスに、局所的な毛根の伸長と毛球の肥大が認められた。
成長期の毛根；毛根が伸びた毛母基はかなり肥大しており、帽状に毛乳頭と接触していた。一部の肥大した毛母基は、毛乳頭を完全に取り込んでいた。
さらに、毛包（外根鞘）と、それに続く表皮に局所的な重層化とバルジの肥大が観察された。
＜ｂＦＧＦ免疫染色＞
表皮近傍の重層化毛包とそれに続く重層化表皮、肥大化バルジ部、毛母基最外層の外根鞘、立毛筋などにｂＦＧＦの強い発現が見られた。
特に、毛乳頭と接触した毛母基接触面の外根鞘に、ｂＦＧＦの強い発現が惹起されていた。
＜ＶＥＧＦ免疫染色＞
エタノール対照マウス：上皮と若干肥大したバルジ部の細胞が、ＶＥＧＦに陽性であった。
ＦＣＧ塗布マウス：毛母基内の毛乳頭細胞と、毛母基最外層に局在する、おそらく線維芽細胞にＶＥＧＦ陽性反応がみられた。
表皮と休止期毛根の毛乳頭細胞に、ＶＥＧＦの発現が観察された。
＜Ｈｓｐ７０免疫染色＞
休止期毛根の毛乳頭細胞に、弱あるいは中等度のＨｓｐ７０の発現が見られた。
また、立毛筋と線維芽細胞に弱陽性反応が認められたが、バルジ部は陰性であった。
【００６４】
（２）塗布６時間後
＜ＨＥ染色＞
殆どの毛根が皮下組織にまで達しており、その内一部の毛根はＪ字状に湾曲していた。
＜ｂＦＧＦ免疫染色＞
毛乳頭が毛母基に完全に包み込まれた毛球が観察されたが、毛乳頭細胞のｂＦＧＦの発現は微弱になっていた。
毛母基に毛乳頭細胞が接触して、毛母基に取り込みが始まる時期に、一過性にｂＦＧＦの強い発現が惹起されるようである。
立毛筋のｂＦＧＦ発現は、中等度に減弱していた。
【００６５】
以上の結果、下記のことが考えられる。
ＦＣＧを塗布すると、表皮、外根鞘、バルジ、毛母基などにｂＦＧＦの発現が誘発され、これらの組織に細胞分裂が惹起される。
正常マウスの表皮は２列立方上皮であるが、表皮とそれに続く外根鞘は重層化し、おそらく、この重層化は毛根の伸長に働き、毛乳頭との接触に関与すると考えられる。
バルジ、毛母基などは、細胞分裂によって肥大化とｂＦＧＦの発現がさらに増強する。
休止期毛根では毛母基の形態を呈していないが、分裂・増殖に伴い成長期の毛母基の形成が惹起される。
毛乳頭は、分化途上の毛母基との接触によって分裂・増殖・肥大し、さらにｂＦＧＦの強い発現がおきる。
毛母基の形成に伴って、毛乳頭の取り込みが始まる。毛乳頭は毛母基に完全に取り込まれると、毛根の形成が完了する。
毛球の毛乳頭ではｂＦＧＦの発現が微弱となり、これに代わってＶＥＧＦの発現が誘導される。
このＶＥＧＦ発現は毛球内に微小血管を誘導することが示唆され、成長期毛根の分化が完了する。
【００６６】
＜実施例１〜４＞
１）試料液の調製
製造例１で得たＦＣＧ、製造例２で得たＳＣＧ、製造例３で得たＣＳＧおよび製造例４で得たＲＳＧを、それぞれ７０質量％エタノール水に溶解し、
ＦＣＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
ＦＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
ＦＣＧ １００ｐｇ／ｍＬ溶液
ＳＣＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
ＳＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
ＳＣＧ １００ｐｇ／ｍＬ溶液
ＣＳＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
ＣＳＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
ＲＳＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
および
ＲＳＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
を調製した。
また、市販のコレステロール（以下、Ｃｈｏと略記する。）を７０質量％エタノール水に溶解し、Ｃｈｏ １０ｐｇ／ｍＬ溶液を調製した。
【００６７】
２）発毛試験
８〜９週齢Ｃ３Ｈ雄マウスの背側体毛を、動物用電気バリカン（大東電気工業社製「Ｔｈｒｉｖｅ ｃｌｉｐｐｅｒ, Ｍｏｄｅｌ ６００ＡＤ」）と、回転式セェーバ（ナショナルＥＳ６１１）を併用して剃毛した。
前記の各試料液２０μＬを、それぞれ４回に分けて風乾を繰り返しながら、マウス剃毛中央部の皮膚に塗布した。塗布は剃毛後、２４時間経過してから実施した。
発毛効果は、試料液塗布２週間後に、肉眼観察とデジタルカメラ撮影写真によって評価した。
なお、対照として７０質量％エタノール水の塗布および試料液無塗布剃毛マウスを用いた。結果を表１に示す。
【００６８】
【表１】
【００６９】
表１から、以下のことが分かる。
合成コレステリルグルコピラノシド（ＳＣＧ）にも、羽毛由来のコレステリルグルコピラノシド（ＦＣＧ）と同一の発毛作用が認められる。
また、植物由来のステリルグルコピラノシド（ＣＳＧ，ＲＳＧ）およびコレステロール（Ｃｈｏ）も弱いながら発毛作用が認められる。
また、ＦＣＧおよびＳＣＧは、マウスに対しては、濃度が１０ｐg／ｍＬよりも１ｐｇ／ｍＬの方が、発毛作用が強い。
【００７０】
＜実施例５＞
ＦＣＧの４６歳女性の、頭髪に対する発毛効果を調べた。
充分に洗髪し、ドライヤーで完全に乾燥させたのち、ＦＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ濃度の７０質量％エタノール水溶液（試料液）約３．５ｍＬを、頭皮に満遍なく塗布する操作を１日１回行った。
試料液を使用前、使用開始日から約２ヶ月経過後に、それぞれデジタルカメラで、前額部からと頭頂部から写真撮影した。その結果を図４に示す。
図４から分かるように、使用開始日から約２ヶ月経過後に、前額部および頭頂部のいずれも多量の発毛が認められた。
【００７１】
＜実施例６＞
ＦＣＧの３５歳男性の、頭髪に対する発毛効果を調べた。
充分に洗髪し、完全に自然乾燥させたのち、ＦＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ濃度の７０質量％エタノール水溶液（試料液）約３．５ｍＬを、頭皮に満遍なく塗布する操作を１日１回行った。
試料液の使用開始日および約２ヶ月経過後に、それぞれデジタルカメラで、後頭部の写真撮影を行った。その結果を図５に示す。
２ヶ月経過後に、後頭部及び頭頂部にかなりの発毛が認められた。
なお、１年以上経過した時点で、副作用は全く認められていない。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
この発明の発毛・育毛料は、ステリルグルコピラノシド、好ましくはコレステリルグルコピラノシドを有効成分とし、超希薄濃度（１０−１３ｇ／ｍＬ、１０−１２ｇ／ｍＬ）においても、優れた発毛、育毛効果を発揮するもので、医薬品として、あるいは化粧品として広く利用される可能性を有するものである。
【技術分野】
【０００１】
この発明は、新規な発毛・育毛料に関するものである。
より詳しくは、ステリルグルコピラノシド、好ましくはコレステリルグルコピラノシドを有効成分とし、その成分濃度が１０−１３ｇ／ｍＬ、１０−１２ｇ／ｍＬという超希薄濃度においても、優れた発毛・育毛効果を発揮する発毛・育毛料に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脱毛症の原因としては、ホルモンバランスの乱れ、毛乳頭および毛包周囲の毛細血管の循環障害、皮脂腺機能の過度な亢進や皮脂分泌障害、ストレスの蓄積、免疫機能の低下、毛母細胞の機能低下、毛の成長に関与する各種酵素活性の異常、フケの過剰発生（皮脂分泌異常・頭皮細菌類の増殖）、頭皮の緊張や過剰乾燥などが関係するとされている。
【０００３】
かかる脱毛の予防あるいは毛成長促進、さらには発毛促進のためには、
（１）局所血液循環および代謝の促進
（２）毛包細胞の増殖促進
（３）男性ホルモンによる脱毛作用の予防および皮脂分泌の抑制
（４）頭皮環境の保全
などが考えられる。
【０００４】
健常なヒト頭髪は、ほぼ５，６年の周期で生え変わっている。
この間、毛包を形成し、毛を伸ばしていく「成長期」、成長が減弱する「退行期」、成長が止まる「休止期」の３期間に分類されている。
【０００５】
男性型脱毛においては、この毛周期が徐々に短くなり、成長期が短縮することで、太く長い終毛から、産毛状の軟毛に変化して行くことが知られている。
【０００６】
頭皮の血流促進は、主に毛乳頭内と、毛包を取り巻く間葉系細胞周辺の毛細血管を介して、酸素と養分を毛包に補給し、毛母細胞など上皮系細胞の増殖を円滑に進めることで、特に成長期に効果があると考えられるが、詳細なメカニズムは明確に示されていない。
【０００７】
血行促進、血管拡張、エネルギー供給に加えて、すでに数多くの研究があるのが、男性ホルモンの抑制の観点から、脱毛抑制、発毛促進効果のあるホルモンバランスを整える薬剤である。
しかしながら、必ずしも脱毛への機構が充分解明されたとは言えないが、この観点からの育毛薬剤の開発は進んでいる。
【０００８】
その他、薬剤開発まで進んではいないが、細胞増殖因子、神経伝達物質などの物質の毛包構成細胞への効果や、アポトーシス関連物質、毛包誘導因子、血管新生因子などの毛周期との関連、その発毛促進、成長期延長などが研究されている。
【０００９】
男性型脱毛でも円形脱毛症ほどではないが、毛包周辺に若干の炎症を伴うことも報告されており、サイトカインなどについて男性型脱毛の関連も研究されつつある。
男性に比較して、女性においては薄毛の研究は余りされていない。
【００１０】
しかしながら、近年、薄毛を気にする女性が増加している。
これは、女性の社会進出などに起因するストレスなどが原因と言われている。
【００１１】
男性型脱毛においては、毛包成長期間が短くなることで、未成熟な毛包が多くなり結果的に産毛が多くなることが知られている。
しかしながら、女性では、成長期比率が殆ど変わらないことから、毛の細りの原因は、産毛の増加というより終毛の細毛化と考えられる。
つまり、毛包を太く、しかも毛包細胞を活発に増殖させることで、より太い毛を生えさせることが可能となると考えられる。
【００１２】
成長期毛では、毛根は真皮下層の脂肪層にまで深く入り込み、５〜６年程度の成長期を終了すると、退行期、休止期と徐々に半分程度まで短くなることが知られている。
新しい成長期を迎えると、毛根は、また徐々に脂肪層の奥深く入り込み、新しい毛を伸ばし始める。
【００１３】
成長期毛包が大きくなる時期には、毛乳頭周辺の毛母細胞および毛幹周辺の毛根鞘細胞で、陽性細胞が多く見られることが確認されている。
そのため、毛根鞘細胞の増殖を促進することが、女性の髪の細りを改善するのに重要であると考え、細胞培養系での細胞増殖促進する薬剤の開発研究が行われている。
【００１４】
一方、例えば、特開平０４−５２１９号公報（特許文献１）や特開平０５−２５０２３号公報（特許文献２）においては、発毛、育毛成分として、ステロイド配糖体、トリテルペノイド配糖体を用いたものが研究されている。
【００１５】
さらに、例えば、特開平０７−１０９２９５号公報（特許文献３）においては、ステロイド配糖体の一種であるスチグマステロール配糖体を有効成分として含む発毛・育毛料が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開平０４−５２１９号公報
【特許文献２】特開平０５−２５０２３号公報
【特許文献３】特開平０７−１０９２９５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
前記特許文献３に記載のスチグマステロール配糖体は、スチグマステロールのマルトシド、マルトトリオシド、マルトテトラオシド又はマルトペンタオシドである。
育毛料中の前記フチグマステロール配糖体の含有量は、０．０００５〜５質量％（実施例では１質量％）であって、育毛料としての通常の濃度である。
このスチグマステロールは、大豆油、やし油、ワタの種子など、植物界に広く分布しているもので、コレステロールは動物界に分布するステロールである。
【００１８】
このように、トリテルペノイド配糖体やステロイド配糖体は、発毛、青毛効果が期待され、様々な試みがなされているが、これまで、十分な発毛、育毛効果は得られていないのが実状である。
【００１９】
この発明はかかる現状に鑑み、男性および女性に対して優れた発毛、育毛効果を有する新規な発毛・育毛料を提供することを目的とするものである。
【００２０】
発明者は、先に家禽類の羽毛を原料とする水溶性ケラチン誘導体を開発するとともに、この水溶性ケラチン誘導体が、高エネルギー波吸収剤、発光材料、耐侯性改善剤、撥水剤などとして有用であることを見出した。
【００２１】
この水溶性ケラチン誘導体について、さらに研究の結果、このケラチン誘導体は、剃毛マウスに対して発毛効果を有することを見出すとともに、その中の発毛に対する有効成分が、コレステリルグルコピラノシドであることを突き止めた。
【００２２】
さらに研究を重ねた結果、前記コレステリルグルコピラノシド以外のステリルグルコピラノシドも発毛・育毛効果を有すること、そして意外にもある濃度範囲の超希薄溶液において、優れた発毛・育毛効果を発揮することを見出した。
この発明は、かかる知見に基づいて完成したものである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
すなわち、この発明の請求項１に記載の発明は、
一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを含有すること
を特徴とする発毛・育毛料である。
【００２４】
【化１】
（但し、式中、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基を示す。）
【００２５】
また、この発明の請求項２に記載の発明は、
請求項１に記載の発毛・育毛料において、
前記一般式（Ｉ）におけるステロール残基は、
コレステロール残基、β−シトステロール残基、スチグマステロール残基、カンペステロール残基又はブラジカステロール残基であること
を特徴とするものである。
【００２６】
また、この発明の請求項３に記載の発明は、
請求項１に記載の発毛・育毛料において、
前記ステリルグルコピラノシドは、
コレステリルグルコピラノシドであること
を特徴とするものである。
【００２７】
また、この発明の請求項４に記載の発明は、
請求項１〜３のいずれかに記載の発毛・育毛料において、
前記ステリルグルコピラノシドは、
天然由来物質及び／又は合成品であること
を特徴とするものである。
【００２８】
また、この発明の請求項５に記載の発明は、
請求項３に記載の発毛・育毛料において、
前記コレステリルグルコピラノシドは、
鳥類の羽毛から得られたものであること
を特徴とするものである。
【発明の効果】
【００２９】
この発明の発毛・育毛料は、ステリルグルコピラノシド、好ましくはコレステリルグルコピラノシドを有効成分とするもので、希薄濃度においても、優れた発毛・育毛効果を発揮するものである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】この発明における製造例２−（３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（合成ＣＧ）の１Ｈ−ＮＭＲチャート（５００ＭＨｚ ｉｎ Ｄ２Ｏ）である。
【図２】同製造例２−（３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（合成ＣＧ）のケイ酸ＴＬＣクロマトグラムである。
【図３】同製造例２−（３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド（合成ＣＧ）のＨＰＬＣクロマトグラムである。
【図４】この発明における実施例５におけるＦＣＧの４６歳女性の頭髪に対する発毛試験結果を示す頭部の写真図である。
【図５】同実施例６におけるＦＣＧの３５歳男性の頭髪に対する発毛試験結果を示す頭部の写真図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
この発明の発毛・育毛料は、有効成分として、一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを含有することを特徴とするものである。
【００３２】
【化２】
【００３３】
前記一般式（Ｉ）において、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基である。
【００３４】
このＺで表されるステロール残基としては、下記式２で表されるコレステロール、β−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロールおよびブラジカステロールの残基を挙げることができる。
【００３５】
【化３】
【００３６】
前記コレステロールは、動物界に広く分布しているステロールである。
前記β−シトステロールは、代表的な植物ステロールで、通常カンペステロール、スチグマステロールなどと共存していることが多い。
綿実油、タール油、大豆油などの主ステロールである。
【００３７】
前記スチグマステロールは、大豆油に豊富に含まれ、やし油、綿の種子など植物界に広く分布しており、β−シトステロール、カンペステロールと共存することが多い。
前記カンペステロールは、西洋アブラナの種子、大豆、小麦胚芽、ナタネなどに含まれている。
前記ブラジカステロールは、アプラナ科植物の種子、海藻、貝類などに含まれている。
【００３８】
これらのステリルグルコピラノシドは、異性体が存在するものもあるが、いずれの異性体でもよく、また、グルコピラノシル結合においてはα体、β体のいずれでもよい。
この発明においては、ステリルグルコピラノシドとしては、発毛、育毛効果の点から、コレステリルグルコピラノシドが好ましい。
【００３９】
この発明における前記一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドは、天然由来物質であってもよく、合成品であってもよい。
一般に、ステリルグルコピラノシドは、天然物からの抽出あるいはステロールとＤ−グルコースを用いる化学合成によって得ることができる。
この発明において好ましいコレステリルグルコピラノシドは、合成品を用いてもよい。
天然由来物質としては、例えば、鳥類の羽毛から得られたものを、好ましく用いることができる。
【００４０】
前記一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドは、以下のようにして合成することができる。
【００４１】
＜ステリルグルコピラノシドの合成法＞
適当な溶媒中において、各種ステロールとアセトハロゲノ−α−Ｄ−グルコピラノースを、シアン化水銀や酸化銀などの触媒の存在下に室温程度の温度で反応させて、テトラアセチルステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドを得たのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製する。
つぎに、この精製テトラアセチルステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドを、例えば、メタノール−水溶媒中で室温程度の温度で加水分解処理することにより、目的のステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドが得られる。
ステリル−α−Ｄ−グルコピラノシドを合成する場合には、上記方法において、原料のアセトハロゲノ−α−Ｄ−グルコピラノースの代わりに、アセトハロゲノ−β一Ｄ一グルコピラノースを用いればよい。
【００４２】
また、例えば、コレステリルグルコピラノシドなどは、鳥類の羽毛より、以下に示す方法により得ることができる。
【００４３】
＜天然由来のコレステリルグルコピラノシド＞
鳥類の羽毛を破砕し、適当な抽出溶媒で処理して、まず全脂質を抽出する。
ついで、この全脂質から、メタノール−水溶解物を取り出したのち、弱アルカリ処理して、アルカリ処理安定な複合脂質画分を得る。
得た複合脂質両分を、ケイ酸カラムクロマトグラフィーや、ケイ酸薄層クロマトグラフィー（ケイ酸ＴＬＣ）に付し、粗製のコレステリルグルコピラノシドを得たのち、さらにケイ酸ＴＬＣに付すことにより、精製コレステリルグルコピラノシドが得られる。
【００４４】
この発明の発毛・育毛料は、前記一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドの含有するものである。
その際、濃度が１０−１３ｇ／ｍＬ、１０−１２ｇ／ｍＬという超希薄濃度においても、発毛・育毛効果を発揮するという優れた特長を示すものである。
なお、この含有量を多くしても、その量に応じた発毛、育毛効果が発揮されず、むしろ逆に発毛、育毛効果が低下する傾向も認められる。
したがって、前記ステリルグルコピラノシドの好ましい含有量は、１０−１３〜１０−８ ｇ／ｍＬ、より好ましい含有量は１０−１３〜１０−９ｇ／ｍＬである。
【００４５】
この発明の発毛・育毛料の剤型は、特に限定されるものではないが、例えば、ヘアトニック、シャンプー、リンス、ポマード、ヘアローション、ヘアクリーム、ヘアトリートメント等の通常、発毛・育毛料として用いられているものが挙げられる。
これらの発毛・青毛料は、一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを配合する以外は、通常の発毛・育毛料と同様の方法で調製することができる。
【００４６】
また、この発明の発毛・育毛料には、通常、発毛・育毛料に適用される炭化水素類、ロウ類、油脂類、エステル類、高級脂肪酸、高級アルコール、界面活性剤、香料、色素、防腐剤、抗酸化剤、紫外線防御剤、アルコール類、ｐＨ調整剤、及び各種目的に応じた種々の薬効成分などが適宜選択されて調製される。
【００４７】
さらに、この発明の発毛・育毛成分であるステリルグルコピラノシド以外の発毛、育毛成分、例えば、卵胞ホルモン、抹消血管血流促進剤、局所刺激剤、角質溶解剤、抗脂漏剤、殺菌剤、代謝賦活剤、酸索活性阻害剤、消炎剤、栄養剤、保湿剤等を当該ステリルグルコピラノシドと併せて用いることもできる。
【実施例】
【００４８】
以下、この発明にかかる発毛・育毛料を実施例に基づいて詳細に説明するが、この発明は、これらの例によってなんら限定されるものではない。
【００４９】
＜製造例１＞
トリ羽毛由来のコレステリルグルコピラノシド（以下、ＦＣＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
１）全脂質の抽出
破砕されたニワトリ羽３５０ｇに、クロロホルムーメタノール（容量比２：１）６Ｌを加えて２時間振とうした。
吸引ろ過後、残渣に、さらにクロロホルムーメタノール（容量比２：１）６Ｌを加えて２時間振とうした。
吸引ろ過後、クロロホルム−メタノール（容量比１：２）６Ｌを加えて２時間振とうし、脂質を抽出した。
得られた全抽出液を濃縮乾固し、クロロホルム−メタノール−水（容量比８：４：３）で分配したのち、下層を濃縮乾固して、全脂質５．６ｇを得た。
２）アルカリ安定な複合脂質画分の調製
前記１）で得られた全脂質にヘキサン９００ｍＬ、メタノール１，８００ｍＬを加えて撹拌した。
その後、水３００ｍＬを加えて再撹拌し、下層のメタノール−水層を分取した。
上層のヘキサン層に再度メタノール６００ｍＬを加えて撹拌し、その後、水１５０ｍＬ加えて撹拌したのち、下層を分取した。
メタノール−水層を合わせて濃縮乾固したのち、弱アルカリ処理（０．４モル／Ｌメタノール性ＫＯＨ溶液で温度３７℃にて２時間分解）した。
３）ケイ酸カラムクロマトグラフィーおよびケイ酸薄層クロマトグラフィーによるＦＣＧの単離
前記２）で得られたアルカリ処理安定な複合脂質画分を、クロロホルムーアセトン（容量比７：３）可溶部と不溶部に分けたのち、それぞれケイ酸カラムクロマトグラフィーに供した。
可溶部は、クロロホルム−アセトン（容量比７：３）５００ｍＬ、クロロホルム−アセトン（容量比１：１）５００ｍＬ（画分１）、アセトン５００ｍＬ（画分２）およびクロロホルム−メタノール（容量比２：１）５００ｍＬで溶出した。
不溶部は、クロロホルム−アセトン（容量比１：１）６５０ｍＬ（画分３）、アセトン３００ｍＬ（画分４）、およびクロロホルム−メタノール（容量比２：１）３００ｍＬで溶出した。
【００５０】
それぞれの画分を、クロロホルム−メタノール−水（容量比６５：１６：２）を展開溶媒とするケイ酸ＴＬＣ（ケイ酸薄層クロマトグラフィー）に供し、コレスデリルグルコピラノシド（ＣＧ）のスポッ卜を確認した。
【００５１】
画分１および画分２と画分４を合わせたものを、クロロホルム−メタノール（容量比９５：１２）を展開溶媒としたケイ酸ＴＬＣに供し、ＣＧのスポットを分取した。
それぞれ２６．７ｍｇと、１２．７ｍｇの粗製ＣＧが得られた。
【００５２】
画分３は、さらにケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム−アセトン（容量比７：３）５００ｍＬ、クロロホルムーアセトン（容量比１：１）５００ｍＬ（画分5)およびアセトン５００ｍＬで溶出した。
画分５からは、粗製ＣＧが１２．０ｍｇ得られた。
【００５３】
前記の粗製ＣＧを合わせて、クロロホルム−メタノール容量比（９５：１２）を展開溶媒としたケイ酸ＴＬＣに供し、ＣＧのスポットを分取し、ＣＧ精製物（ＦＣＧ）４０ｍｇを得た。
【００５４】
＜製造例２＞
合成コレステリルグルコピラノシド（以下、ＳＣＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
なお、アセトブロモグルコース、コレステロール、酸化銀、シアン化水銀、３０質量％アンモニア水は、和光純薬社製の特級を用いた。
【００５５】
１）シアン化水銀を用いたテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
５０ｍＬナスフラスコ内でＣＨ３ＣＮ ５ｍＬにコレステロール１９３ｍｇと、アセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース１．２３８ｇを加え、撹拌した。
ここに、Ｈｇ（ＣＮ）２ ４１１ｍｇを加え、室温で３時間撹拌し、ＴＬＣでアセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノースの消失を確認した。
これに、ＣＨ２Ｃｌ２ １０ｍＬを加え、吸引ろ過した。
得たろ液を、飽和ＮａＨＣＯ３水、水で分液し、ＭｇＳＯ４を加え一晩放置した後、吸引ろ過し、濃縮した。
これをＳｉＯ２ カラム（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００、展開溶媒 ヘキサン：酢エチ容量比＝１９：１ ２００ｍＬ，９：１ １００ｍＬ，４：１ １００ｍＬ，１：１ １００ｍＬ）で分画し、テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド２５２ｍｇ（収率７０．４％）を得た。
【００５６】
２）酸化銀を用いたテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成
５００ｍＬナスフラスコ内でＣＨ２Ｃｌ２ ２００ｍＬに、コレステロール１５．０９ｇとアセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース３０．６５ｇを加え、撹拌した。
ここに、Ａｇ２Ｏ ２１．００ｇを加え、室温で３時間撹拌し、さらに、アセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース３０．６５ｇ、Ａｇ２Ｏ ２１．００ｇを加えた。
１０時間後、さらに、アセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノース３０．６５ｇ、Ａｇ２ Ｏ２１．００ｇを加えた。
これを１２時間撹拌し、ＴＬＣでアセトブロモ−α−Ｄ−グルコピラノースの消失を確認してから、吸引ろ過した。
得たろ液を濃縮し、これをＳｉＯ２ カラム（Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００、展開溶媒 ヘキサン：酢エチ（容量比＝１９：１ ５００ｍＬ，９：１ ５００ｍＬ，４：１ １００ｍＬ，１：１ ５００ｍＬ）で分画した。
さらに、同じ条件でＳｉＯ２カラムを繰り返し、ＴＬＣでワンスポットのテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１５．６２ｇ（収率５５．８％）を得た。
【００５７】
３）テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの加水分解によるコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドヘの変換
（ａ）前記１）で得られた、テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１００．２ｍｇをメタノール５０ｍＬに溶解した。
さらに、３０質量％アンモニア水１０ｍＬを加えた。
これを室温で１２時間撹拌し、ＴＬＣで原料の消失を確認した。
この溶液を濃縮し、コレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド６８．２ｍｇ（収率８８．９％）を得た。
【００５８】
（ｂ）前記２）で得られた、テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１５．４１ｇをメタノール３００ｍＬに溶解した。
さらに、３０質量％アンモニア水５０ｍＬを加えた。
これを室温で１２時間撹拌し、ＴＬＣで原料の消失を確認した。
この溶液を濃縮し、コレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシド１１．３１ｇ（収率９５．９％）を得た。
これをエタノール−水で再結晶し、白色の粉末（４．５８ｇ）を得た。さらに、母液を再度結晶化させ、薄茶色の粉末（２．７ｇ）を得た。
なお、活性試験用には、この方法で合成されたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドを用いた。
【００５９】
＜分析結果＞
イ）テトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの構造確認
前記１）および２）で得られたテトラアセチルコレステリル−β−Ｄ−グルコビラノシドの１Ｈ−ＮＭＲは、いずれも文献値と良い一致を示した。
また、ジアステレオ異性体のテトラアセチルコレステリル−α−Ｄ−グルコピラノシドの生成も、認められなかった。
ロ）コレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの構造確認
前記３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドの１Ｈ−ＮＭＲを図１に示す。
このコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドは、文献値と良い一致を示した。加水分解反応は定量的に反応が進んでいた。
ハ）コレステリル−β−Ｄ−グルコビラノシドの純度
前記３）（ｂ）で得られたコレステリル−β−Ｄ−グルコピラノシドのＴＬＣクロマトグラムを図２に、ＨＰＬＣクロマトグラムを図３に示す。
これらから、白色粉末、薄茶色の粉末のいずれも、ワンスポット、ワンピークを与えることが分かる。
【００６０】
＜製造例３＞
トウモロコシ由来のステリルグルコピラソシド（以下、ＣＳＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
トウモロコシ種実（スイートコーン種）１００ｇ（生質量）を、温度１００℃の水蒸気で３分間加熱して酵素を失活した後、ポリトロン型ホモジナイザーを用いて、５倍容のクロロホルム：メタノール（２：１，ｖ／ｖ）でホモジナイズし、吸引ろ過した。
この残渣について、同様の処理をクロロホルム：メタノール（２：１，ｖ／ｖ）およびクロロホルム：メタノール（１：２，ｖ／ｖ）で１回ずつ行い、それぞれの抽出液を回収した。
この抽出液を濃縮後、混在する水溶性成分を水洗除去し、下層のクロロホルム層を減圧濃縮して、総脂質とした。総脂質は約１．７ｇ回収された。
つぎに、総脂質をクロロホルム−アセトン−メタノール系のケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、中性脂質、糖脂質およびリン脂質に分画した。
この糖脂質画分を、クロロホルム−アセトン系のケイ酸カラムクロマトグラフィーに供し、粗分画した後、展開溶媒にクロロホルム−メタノール−水（６５：１６：２，ｖ／ｖ）を用いた分取ケイ酸ＴＬＣを用いて、ステリルグルコピラノシド（ＣＳＧ）を精製した。
収量は、トウモロコシ１００ｇ（生質量）当たり３．４ｍｇであった。
【００６１】
＜製造例４＞
コメ由来のステリルグルコピラノシド（以下、ＲＳＧと略記する。）を、以下のようにして得た。
製造例３と同様にして、コメ糠から総脂質を抽出した。総脂質の収量は、コメ糠１００ｇ当たり１０．９ｇであった。
つぎに、製造例３と同様にして、総脂質からステリルグルコピラノシド（ＲＳＧ）を分離精製した。収量は、コメ糠１００ｇ（生質量）当たり２６．７ｍｇであった。
【００６２】
＜参考例１；マウスによる発毛の予備実験＞
製造例１で得たＦＣＧ１０ｐｇ／ｍＬ濃度の７０質量％エタノール水溶液（試料液）を調製した。
９週齢ＩＣＲ雄マウス４匹の剃毛背側皮膚に、前記試料液２０μＬを塗布し、３時間後と６時間後に皮膚を採取した。
この皮膚に対し、ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞増殖因子）、Ｈｓｐ７０（熱ショック蛋白７０）及びＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）の蛍光抗体法による免疫染色とＨＥ染色（ヘマトキシリンーエオシン染色）を行い、１４μｍ厚クリオスッタト切片の標本を作製した。
この標本を、顕微鏡と写真撮影装置［Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ，Ｊｅｎａ社製、ＡｘｉｏＣａｍ ＭＲｃ５装着Ａｘｉｏｓｋｏｐ］で観察した。
【００６３】
（１）塗布３時間後
＜ＨＥ染色＞
２匹中、１匹のマウスに、局所的な毛根の伸長と毛球の肥大が認められた。
成長期の毛根；毛根が伸びた毛母基はかなり肥大しており、帽状に毛乳頭と接触していた。一部の肥大した毛母基は、毛乳頭を完全に取り込んでいた。
さらに、毛包（外根鞘）と、それに続く表皮に局所的な重層化とバルジの肥大が観察された。
＜ｂＦＧＦ免疫染色＞
表皮近傍の重層化毛包とそれに続く重層化表皮、肥大化バルジ部、毛母基最外層の外根鞘、立毛筋などにｂＦＧＦの強い発現が見られた。
特に、毛乳頭と接触した毛母基接触面の外根鞘に、ｂＦＧＦの強い発現が惹起されていた。
＜ＶＥＧＦ免疫染色＞
エタノール対照マウス：上皮と若干肥大したバルジ部の細胞が、ＶＥＧＦに陽性であった。
ＦＣＧ塗布マウス：毛母基内の毛乳頭細胞と、毛母基最外層に局在する、おそらく線維芽細胞にＶＥＧＦ陽性反応がみられた。
表皮と休止期毛根の毛乳頭細胞に、ＶＥＧＦの発現が観察された。
＜Ｈｓｐ７０免疫染色＞
休止期毛根の毛乳頭細胞に、弱あるいは中等度のＨｓｐ７０の発現が見られた。
また、立毛筋と線維芽細胞に弱陽性反応が認められたが、バルジ部は陰性であった。
【００６４】
（２）塗布６時間後
＜ＨＥ染色＞
殆どの毛根が皮下組織にまで達しており、その内一部の毛根はＪ字状に湾曲していた。
＜ｂＦＧＦ免疫染色＞
毛乳頭が毛母基に完全に包み込まれた毛球が観察されたが、毛乳頭細胞のｂＦＧＦの発現は微弱になっていた。
毛母基に毛乳頭細胞が接触して、毛母基に取り込みが始まる時期に、一過性にｂＦＧＦの強い発現が惹起されるようである。
立毛筋のｂＦＧＦ発現は、中等度に減弱していた。
【００６５】
以上の結果、下記のことが考えられる。
ＦＣＧを塗布すると、表皮、外根鞘、バルジ、毛母基などにｂＦＧＦの発現が誘発され、これらの組織に細胞分裂が惹起される。
正常マウスの表皮は２列立方上皮であるが、表皮とそれに続く外根鞘は重層化し、おそらく、この重層化は毛根の伸長に働き、毛乳頭との接触に関与すると考えられる。
バルジ、毛母基などは、細胞分裂によって肥大化とｂＦＧＦの発現がさらに増強する。
休止期毛根では毛母基の形態を呈していないが、分裂・増殖に伴い成長期の毛母基の形成が惹起される。
毛乳頭は、分化途上の毛母基との接触によって分裂・増殖・肥大し、さらにｂＦＧＦの強い発現がおきる。
毛母基の形成に伴って、毛乳頭の取り込みが始まる。毛乳頭は毛母基に完全に取り込まれると、毛根の形成が完了する。
毛球の毛乳頭ではｂＦＧＦの発現が微弱となり、これに代わってＶＥＧＦの発現が誘導される。
このＶＥＧＦ発現は毛球内に微小血管を誘導することが示唆され、成長期毛根の分化が完了する。
【００６６】
＜実施例１〜４＞
１）試料液の調製
製造例１で得たＦＣＧ、製造例２で得たＳＣＧ、製造例３で得たＣＳＧおよび製造例４で得たＲＳＧを、それぞれ７０質量％エタノール水に溶解し、
ＦＣＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
ＦＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
ＦＣＧ １００ｐｇ／ｍＬ溶液
ＳＣＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
ＳＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
ＳＣＧ １００ｐｇ／ｍＬ溶液
ＣＳＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
ＣＳＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
ＲＳＧ １ｐｇ／ｍＬ溶液
および
ＲＳＧ １０ｐｇ／ｍＬ溶液
を調製した。
また、市販のコレステロール（以下、Ｃｈｏと略記する。）を７０質量％エタノール水に溶解し、Ｃｈｏ １０ｐｇ／ｍＬ溶液を調製した。
【００６７】
２）発毛試験
８〜９週齢Ｃ３Ｈ雄マウスの背側体毛を、動物用電気バリカン（大東電気工業社製「Ｔｈｒｉｖｅ ｃｌｉｐｐｅｒ, Ｍｏｄｅｌ ６００ＡＤ」）と、回転式セェーバ（ナショナルＥＳ６１１）を併用して剃毛した。
前記の各試料液２０μＬを、それぞれ４回に分けて風乾を繰り返しながら、マウス剃毛中央部の皮膚に塗布した。塗布は剃毛後、２４時間経過してから実施した。
発毛効果は、試料液塗布２週間後に、肉眼観察とデジタルカメラ撮影写真によって評価した。
なお、対照として７０質量％エタノール水の塗布および試料液無塗布剃毛マウスを用いた。結果を表１に示す。
【００６８】
【表１】
【００６９】
表１から、以下のことが分かる。
合成コレステリルグルコピラノシド（ＳＣＧ）にも、羽毛由来のコレステリルグルコピラノシド（ＦＣＧ）と同一の発毛作用が認められる。
また、植物由来のステリルグルコピラノシド（ＣＳＧ，ＲＳＧ）およびコレステロール（Ｃｈｏ）も弱いながら発毛作用が認められる。
また、ＦＣＧおよびＳＣＧは、マウスに対しては、濃度が１０ｐg／ｍＬよりも１ｐｇ／ｍＬの方が、発毛作用が強い。
【００７０】
＜実施例５＞
ＦＣＧの４６歳女性の、頭髪に対する発毛効果を調べた。
充分に洗髪し、ドライヤーで完全に乾燥させたのち、ＦＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ濃度の７０質量％エタノール水溶液（試料液）約３．５ｍＬを、頭皮に満遍なく塗布する操作を１日１回行った。
試料液を使用前、使用開始日から約２ヶ月経過後に、それぞれデジタルカメラで、前額部からと頭頂部から写真撮影した。その結果を図４に示す。
図４から分かるように、使用開始日から約２ヶ月経過後に、前額部および頭頂部のいずれも多量の発毛が認められた。
【００７１】
＜実施例６＞
ＦＣＧの３５歳男性の、頭髪に対する発毛効果を調べた。
充分に洗髪し、完全に自然乾燥させたのち、ＦＣＧ １０ｐｇ／ｍＬ濃度の７０質量％エタノール水溶液（試料液）約３．５ｍＬを、頭皮に満遍なく塗布する操作を１日１回行った。
試料液の使用開始日および約２ヶ月経過後に、それぞれデジタルカメラで、後頭部の写真撮影を行った。その結果を図５に示す。
２ヶ月経過後に、後頭部及び頭頂部にかなりの発毛が認められた。
なお、１年以上経過した時点で、副作用は全く認められていない。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
この発明の発毛・育毛料は、ステリルグルコピラノシド、好ましくはコレステリルグルコピラノシドを有効成分とし、超希薄濃度（１０−１３ｇ／ｍＬ、１０−１２ｇ／ｍＬ）においても、優れた発毛、育毛効果を発揮するもので、医薬品として、あるいは化粧品として広く利用される可能性を有するものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを含有すること
を特徴とする発毛・育毛料。
一般式（Ｉ）
【化１】
（但し、式中、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基を示す。）
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）におけるステロール残基は、
コレステロール残基、β−シトステロール残基、スチグマステロール残基、カンペステロール残基又はブラジカステロール残基であること
を特徴とする請求項１に記載の発毛・育毛料。
【請求項３】
前記ステリルグルコピラノシドは、
コレステリルグルコピラノシドであること
を特徴とする請求項２に記載の発毛・育毛料。
【請求項４】
前記ステリルグルコピラノシドは、
天然由来物質及び／又は合成品であること
を特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の発毛・育毛料。
【請求項５】
前記コレステリルグルコピラノシドは、
鳥類の羽毛から得られたものであること
を特徴とするものである請求項３に記載の発毛・育毛料。
【請求項１】
一般式（Ｉ）で表されるステリルグルコピラノシドを含有すること
を特徴とする発毛・育毛料。
一般式（Ｉ）
【化１】
（但し、式中、Ｚは、シクロペンタノヒドロフェナントレン環の３位に結合する水酸基を除いたステロール残基を示す。）
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）におけるステロール残基は、
コレステロール残基、β−シトステロール残基、スチグマステロール残基、カンペステロール残基又はブラジカステロール残基であること
を特徴とする請求項１に記載の発毛・育毛料。
【請求項３】
前記ステリルグルコピラノシドは、
コレステリルグルコピラノシドであること
を特徴とする請求項２に記載の発毛・育毛料。
【請求項４】
前記ステリルグルコピラノシドは、
天然由来物質及び／又は合成品であること
を特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の発毛・育毛料。
【請求項５】
前記コレステリルグルコピラノシドは、
鳥類の羽毛から得られたものであること
を特徴とするものである請求項３に記載の発毛・育毛料。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２０１２−２４６２７９（Ｐ２０１２−２４６２７９Ａ）
【公開日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１２１６６２（Ｐ２０１１−１２１６６２）
【出願日】平成２３年５月３１日（２０１１．５．３１）
【出願人】（５９９０３５３３９）株式会社 レオロジー機能食品研究所 (16)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１２月１３日（２０１２．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年５月３１日（２０１１．５．３１）
【出願人】（５９９０３５３３９）株式会社 レオロジー機能食品研究所 (16)
【Ｆターム（参考）】
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