神経線維腫の局所治療
神経線維腫、例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者における、神経線維腫を治療する方法が開示される。本方法は、組成物を局所的に神経線維腫に局所投与または病巣内投与することを含む。本方法は、神経線維腫に影響を与えるために被験者に組成物を全身投与することは含まない。そのような治療に有用な組成物、および前記組成物を調製するための方法が開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
Ｉ型神経線維腫症（ＮＦ１）は、ヒト神経系に影響を与える最も一般的な単一遺伝子疾患である。それは、遺伝的に常染色体優性遺伝により伝達される。ＮＦ１は、世界中で１５０万人の人々に影響を与えており、その疾患に対する民族的、人種的または地理的偏りはない。ＮＦ１は、腫瘍抑制遺伝子であるニューロフィブロミンを産生するＮＦ１遺伝子における突然変異により引き起こされる。ＮＦ１遺伝子座における自発突然変異率は高いため（５０％）、遺伝子検査により集団においてその疾患が著しく低下する可能性は低い。
【背景技術】
【０００２】
ＮＦ１の影響を受けている人々は、皮膚、皮下および叢状神経線維腫；視覚経路星状細胞腫および悪性末梢神経鞘腫瘍（「ＭＰＮＳＴ」）、並びに学習障害について、脊柱側湾症および特定形態の白血病を含む神経系の種々の腫瘍を発生させる危険が高い。これらの腫瘍は、醜い外観、神経系損傷および慢性疼痛を起こすことがある。皮膚神経線維腫は、ＮＦ１の最も一般的な病巣であり、影響を受けた個体の９０％において生じる。皮膚神経線維腫は、典型的に、小さく（直径が２ｃｍ未満）、多発性であり、思春期において最初に発生する。これらは、典型的に、コラーゲン含量が高く、代謝活性が非常に低く、叢状神経線維腫と対照的に、決して悪性変性しない。自然発生の皮膚神経線維腫において、または、種々の悪性疾患のために局所的放射線治療を受けたまたは悪性疾患のために化学治療を受けた患者において、悪性変性が報告された場合はない。
【０００３】
ある患者は、最初はＮＦ１と考えられていた別の疾患である象人間病（Elephant Man's disease）に関係する同じ醜化兆候を呈することがある。現時点での唯一の治療は、外科的除去である。しかしながら、大きな神経的および／または審美的問題、多くの場合、再生を引き起こすことなく、腫瘍を除去することはできないことが多い。これらは、放射線治療に、または既知の化学治療薬に反応性がない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
皮膚および皮下神経線維腫は、人生のいかなる時にも発生し得るが、その発生数は、通常、思春期前は少ない。成人で見られる神経線維腫の合計数は、わずか数個から数千個で変化する。さらなる皮膚および皮下神経線維腫が人生全体で発生するが、出現率は年毎に大きく変わり得る。その症状のための実際の治療以外に、皮膚神経線維腫のための効果的な非外科的治療が、ＮＦ１により影響されている米国における１０万人の人々のための唯一の最も高い優先手段である。皮膚神経線維腫は、重大な醜化、疼痛、心理的および経済的なストレスを起こし、この集団における主な満たされていない医学的要求だと考えるべきである。他の腫瘍と比べて比較的低い増殖指数、および特に基底細胞および扁平上皮細胞癌と比べたときに皮膚において僅かに深く腫瘍が位置するという事実を含む幾つかの因子故に、皮膚神経線維腫のための局所治療は今までは研究されていなかった。この局所的治療は、神経線維腫の部位における局所治療および病巣内または皮内治療の両方を含む。従って、これらの皮膚神経線維腫のそのような局所治療は、満たされていない医学的要求のための価値ある治療であるかも知れないが、この領域においてこれまで研究が成されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一つの態様は、神経線維腫、例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者において、神経線維腫を治療する方法である。本方法は、組成物を神経線維腫に局所適用することを含む。本方法は、その組成物を被験者に全身投与して神経線維腫への効果を奏することは含まない。本方法は、組成物を腫瘍の領域に局所投与することを含み、その組成物は、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助する医薬的に許容できる賦形剤とを含み、好ましくは神経線維腫に悪影響を与えるのに十分な時間維持されることを特徴とする。
【０００６】
本方法は、より具体的には、組成物を腫瘍の領域において皮膚の表面に局所適用することを含み、その組成物は、（ａ）神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を皮膚を通して腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤とを含むものである。
【０００７】
本発明のもう一つの態様は、被験者における神経線維腫（例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫）の治療に有用な組成物である。この組成物は、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を皮膚を通して腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤とを含む。この組成物は、別の態様において、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、（ｂ）注入に適した医薬的に許容できるキャリアとを含む。
【０００８】
本発明のさらにもう一つの態様は、神経線維腫（例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫）を局所治療するための医薬品を調製する方法である。本方法は、その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤を、皮膚を通してその薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に該薬剤を所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤と組み合わせることを含む。
【０００９】
本発明のさらなる態様は、神経線維腫に病巣内注入するための医薬品を調製するための方法である。本方法は、その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤を、その薬剤が被験者の腫瘍に所定時間接するように腫瘍中に病巣内に送達することを補助する医薬的に許容できる賦形剤と組み合わせることを含む。
【００１０】
本発明の他の態様は、以下の詳細な説明を読んだ後の当業者に明白である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の方法の実施において、組成物が、腫瘍の領域において皮膚の表面に適用される。その組成物は、組成物の適用のためのいかなる既知の方法においても適用することができる。すなわち、組成物は噴霧、塗り付け、擦り付け、またはパッチ等を用いて皮膚に接着することができる。さらに、組成物を皮膚に適用して、顕微注入、電気泳動、超音波または高周波機構を用いて皮膚を通過させて運ぶことができる。これは、ウイルス系または空気系の配達システムを用いて配達することができる。この薬剤は、ナノ粒子、デンドリマーまたはリポソームとして調製することができる。この組成物は、粉末、液状溶液または懸濁液、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、または薬剤が皮膚を通過して腫瘍まで移動するのに十分な時間、その組成物を皮膚の上に維持させる別の組成物の形態をとってもよい。
【００１２】
組成物は、腫瘍の領域において皮膚に適用される、または腫瘍に病巣内注入される。通常、腫瘍は容易に明らかとなり、皮膚上で醜化する。よって、腫瘍の領域内にある皮膚の表面に、組成物が直接適用される。その領域は、組成物中の活性薬剤が皮膚を通過して腫瘍中に入り腫瘍に作用する皮膚の領域である。組成物がいったん皮膚に適用されると、薬剤が皮膚を通過して腫瘍中に入り被験者の神経線維腫の悪影響を減弱させるのに十分な時間、皮膚の上に維持される。
【００１３】
病巣内注入のためには、種々の「能動的」薬剤配達法および受動的薬剤配達（透過促進剤を用いるまたは用いない処方）がある。全ての技術が、何らかのタイプのエネルギーを用いてまたは機械的に、表皮のケラチン層を不安定化して薬剤配達を向上させる。これらの方法としては、イオン導入、超音波、高周波（ＲＦ）および微細針（削皮術）がある。薬剤に皮膚を通過させるＣＯ2カートリッジに取り付けられた微細針である無針注入技術を用いることもできる。
【００１４】
悪影響を減弱させるというのは、（１）腫瘍の寸法が安定化し増加しない、（２）腫瘍の寸法が小さくなり得る、または（３）腫瘍に伴う疼痛および／またはそう痒が減少し得る、ことを意味する。神経線維腫により引き起こされる醜化が症状の主要な不利益であるので、腫瘍の寸法が著しく低下することは好ましい。被験者への悪影響を減弱させるように組成物が作用しているかどうかを決めるためのマーカーには、治療期間中に腫瘍の寸法を測定すること、および被験者における疼痛のレベルが低下しているか決めるために被験者に面接することがある。腫瘍の増殖速度を示す増殖指数、腫瘍細胞の死滅速度を示すアポトーシス指数、または血管密度のような、他のマーカーを開発することができる。当業者に明らかである他のバイオマーカーを用いて、本発明の組成物の成功を測ることもできる。例えば、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＭＡＰＫ経路の活性化状態をモニターするバイオマーカーを用いて、本発明の組成物による腫瘍組織における標的阻害を測定することができる。大部分の場合、ベースラインを達成してから、キャリパーを用いてまたはＭＲＩ造影技術を用いて腫瘍の寸法を測定することにより、または未処理腫瘍についての指数を達成することにより治療する。いったんベースラインが達成されると、処理を始め、測定を周期的に行って、処理の成功を決めることができる。
【００１５】
皮膚の表面に適用するためまたは腫瘍中に病巣内注入するための組成物中での単一薬剤としてまたは一以上の薬剤の組み合わせとして有用な薬剤は、被験者への神経線維腫の悪影響を減弱させるものである。本発明で有用な好ましい薬剤は、発癌性でない薬剤である。ＦＤＡまたはＩＡＲＣ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓは、発癌性と考えられ、ヒトへの使用が薦められないまたは許容されない化合物／薬剤のリストを有する。ブレオマイシンが薬剤として以下に列挙されているが、発癌性であるので好ましい薬剤として望ましくはない。例えば、そのような薬剤は、化学治療剤（例えば、抗新生物薬、細胞毒素、または増殖防止薬）；硬化薬；免疫修飾物質（例えば、免疫調節物質、免疫抑制剤、または免疫刺激剤）、または抗炎症剤、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）またはＣｏｘ−１および２阻害剤；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、ＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）阻害剤（例えば、バルプロ酸、ＦＫ２２８、トラポキシン）、血管新生阻害剤；低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる薬剤（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤［Ｒ１１５７７７］、イソプレニルシステイントランスフェラーゼ阻害剤（シスメスニル（ｃｙｓｍｅｔｈｎｉｌ））；ビタミン、ビタミン誘導体、酸化防止剤、栄養剤のような化学予防剤として作用する薬剤（例えば、フェンレチニド、ＥＧＣＧ含有緑茶抽出物）；抗線溶剤、アポトーシスまたは抗アポトーシスシグナルを標的とする薬剤、キナーゼ阻害剤（例えば、タンパク質キナーゼ阻害剤または脂質キナーゼ阻害剤）；アルキルリン脂質；タンパク質シャペロン阻害剤、例えば、熱ショックタンパク質阻害剤（例えば、ＨＳＰ９０）；抗真菌剤；突然変異遺伝子の機能を回復する薬剤、例えば、ナンセンス突然変異を抑制する薬剤（例えば、ゲンタマイシン）；核酸系治療薬、ホスファターゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、または、皮膚過形成（例えば、紫外線角化症、黒色腫、カポジ肉腫、基底細胞または扁平上皮細胞癌、または他の癌の皮膚転移）を阻害する薬剤、であり得る。局所治療のためには、組成物は、好ましくは、薬剤に皮膚を通過して腫瘍中に押し入れることを補助する皮膚浸透剤を含む。
【００１６】
有用な化学治療薬の例としては、（１）トポイソメラーゼ阻害によりＤＮＡ複製を妨害する薬剤、（２）微小管および／または紡錘体を破壊する薬剤、（３）ＤＮＡアルキル化物質またはＤＮＡ損傷物質として作用する薬剤、または（４）ヌクレオチド合成を妨害する薬剤、すなわち、代謝拮抗物質、が挙げられる。具体的化学治療薬には、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびチオテパが挙げられる。これらの物質の各々が、当業者に周知であり、標準的供給源から得ることができる。
【００１７】
タンパク質キナーゼ阻害剤は、それぞれが細胞の増殖および生存を促進する、Ｒａｓ−活性化有糸分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ経路（例えば、ＭＥＫおよびＲａｆキナーゼ）、受容体および非受容体チロシンキナーゼ、およびＡＫＴ−ｍＴＯＲ経路の成分のような、神経線維腫において過活性化しているキナーゼを標的とする化合物である。脂質キナーゼ阻害剤は、神経線維腫において過活性化し細胞生存率を向上させるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ経路を標的とする化合物である。
【００１８】
タンパク質シャペロン阻害剤は、熱ショックタンパク質またはペプチジルプロリルイソメラーゼ機能を阻害するものである。熱ショックタンパク質活性は、多くの他のシグナル分子に加えて、Ｒａｓ有糸分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ経路の２つの成分であるＲａｆおよびＫＳＲの生理学的タンパク質レベルを維持するために必要である。
【００１９】
血管新生阻害薬は、（１）血管新生シグナルカスケード、例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体シグナル、（２）細胞外基質破壊、例えば、基質メタロプロテイナーゼ（例えば、ハロフギノン）により誘発されるもの、（３）内皮細胞の増殖、生存および移動、または（４）作用の未知の機構、を遮断するものである。これらの化合物の一部も、他の範疇に属する。これらの血管新生プロセスは、特に、成長している腫瘍への適度の血液供給を確保するのに必要であり、ＮＦ１用の治療介入の興味深い形態である。
【００２０】
シュワン細胞、肥満細胞および線維芽細胞を含む多くの細胞型の間の化学的および物理的の両方の細胞間伝達は、神経線維腫疾患の進行に必須のようである。サイトカインおよび成長因子の転写を妨害するカルシニューリン阻害剤のような免疫修飾物質は、細胞間伝達を妨害する効率的手段である。
【００２１】
遺伝子置換のような特定の突然変異を補正する薬剤またはナンセンス突然変異の修復のためのゲンタマイシンも有用である。
【００２２】
本発明を、以下の好ましい実施形態により、より具体的に説明する。
【００２３】
１．皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者において、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を治療する方法であって、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助する医薬的に許容できる賦形剤とを含む組成物であって、好ましくは神経線維腫に悪影響を与えるのに十分な時間維持される組成物を、腫瘍の領域に局所投与することを含む方法。２．前記局所投与が、腫瘍の領域において皮膚の表面に前記組成物を局所適用することであり、前記賦形剤が、皮膚を通過させて薬剤を腫瘍まで運び、好ましくは薬剤を被験者の皮膚の上に維持することを補助する、１に記載の方法。３．前記局所投与が、前記組成物を腫瘍中に病巣内注入することである、１に記載の方法。４．前記薬剤が化学治療薬剤を含み、（１）その薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）その薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）その薬剤がＤＮＡをアルキル化または損傷する薬剤として作用する、（４）その薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、１〜３のいずれか一項に記載の方法。５．前記薬剤が硬化薬を含む、１〜３のいずれか一項に記載の方法。６．前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。７．前記薬剤が遺伝子転写を修飾する、１〜３のいずれか一項に記載の方法。８．前記薬剤が血管形成阻害薬である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。９．前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１０．前記薬剤が化学予防剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１１．前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤またはプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１２．前記薬剤が抗線溶剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１３．前記薬剤がアルキルリン脂質である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１４．前記薬剤が、アポトーシスまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１５．前記薬剤が核酸系治療薬である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１６．前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１７．前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１８．前記薬剤が、アルキル化剤、例えば、チオテパまたはカルボプラチン；代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリンまたはその類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたはその類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１９．前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、１〜１８に記載の方法。
【００２４】
神経線維腫の治療に有用な好ましい組成物も開示される。２０．被験者における皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療に有用な組成物であって、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）皮膚を通してその薬剤を腫瘍中に運び、好ましくは被験者の皮膚の上に薬剤を所定時間維持することを補助する医薬的に許容できる局所賦形剤を含む組成物。２１．前記薬剤が化学治療薬剤を含み、（１）その薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）その薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）その薬剤がＤＮＡをアルキル化または損傷する薬剤として作用する、（４）その薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、２０に記載の組成物。２２．前記薬剤が硬化薬を含む、２０に記載の組成物。２３．前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、２０に記載の組成物。２４．前記薬剤が遺伝子転写を修飾する、２０に記載の組成物。２５．前記薬剤が血管形成阻害薬である、２０に記載の組成物。２６．前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、２０に記載の組成物。２７．前記薬剤が化学予防剤である、２０に記載の組成物。２８．前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、２０に記載の組成物。２９．前記薬剤が抗線溶剤である、２０に記載の組成物。３０．前記薬剤がアルキルリン脂質である、２０に記載の組成物。３１．前記薬剤が、アポトーシスシグナルまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、２０に記載の組成物。３２．前記薬剤が核酸系治療薬である、２０に記載の組成物。３３．前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、２０に記載の組成物。３４．前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、２０に記載の組成物。３５．前記薬剤が、アルキル化剤、例えば、チオテパまたはカルボプラチン；代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリンまたはその類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたはその類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、２０に記載の組成物。３６．前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、２０〜３６に記載の組成物。３７．被験者における神経線維腫の治療のための薬学的組成物の調製のための、２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物の使用。３８．皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を局所的に治療するための２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬品を調製する方法であって、その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤を、皮膚を通してその薬剤を腫瘍中に運び、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持することを補助する医薬的に許容できる局所賦形剤と組み合わせることを含む方法。
【００２５】
被験者への神経線維腫の悪影響を減弱させる薬剤として本発明において有用な特定の化合物の単独または組み合わせの例としては、チオテパ、ドキシサイクリン、ブレオマイシン、ジクロフェナク、カルボプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メベンダゾール、ハルフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、ミルテフォシン等が挙げられる。
【００２６】
さらに、被験者への神経線維腫の悪影響を減弱させるために、医薬的に許容できる局所賦形剤を用いてまたは用いずに、単一の薬剤活性剤としてまたは一以上の薬剤活性剤の組み合わせとして組成物に含まれる薬剤として、以下の薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
１．化学治療薬、例えば、細胞毒素、抗血管新生または抗増殖剤、例えば：
アルキル化剤、例えば、チオテパ
【化１】
トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、カンプトテシン
【化２】
カルボプラチン
【化３】
代謝拮抗物質、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）
【化４】
トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン
【化５】
微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール
【化６】
代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、クラドリビン
【化７】
トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ＸＫ４６９（２−（４−（（７−クロロ−２−キノキサリニル）オキシ）−フェノキシ）プロピオン酸）
【化８】
ヌクレオシド類似体、例えば、サンギバマイシン
【化９】
ヌクレオシド類似体、例えば、ツベルシジン
【化１０】
【００２８】
２．硬化剤、例えば：
ブレオマイシン（抗新生物抗生物質）
【化１１】
テトラサイクリン類似体または抗生物質、例えば、ドキシサイクリン
【化１２】
【００２９】
３．免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫刺激剤または免疫抑制剤、例えば：
免疫刺激剤、例えば、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）（免疫反応修飾物質またはＴＬＲ７／８リガンドまたはアゴニスト）
【化１３】
免疫抑制剤、例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）
【化１４】
【００３０】
４．抗炎症薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク
【化１５】
セレコキシブ（Ｃｏｘ−１およびＣｏｘ−２阻害剤、または抗炎症薬）
【化１６】
【００３１】
５．遺伝子転写を修飾する薬剤：例えば、ＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）阻害剤、例えば、
ＨＤＡＣ阻害剤の脂肪酸類、例えば、バルプロ酸
【化１７】
ＨＤＡＣ阻害剤のヒドロキサム酸類、例えば、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）
【化１８】
カルバマゼピン（以下）およびその誘導体、例えば、カルバマゼピンエポキシド
【化１９】
ＨＤＡＣ阻害剤の環式テトラペプチド類、例えば、デプシペプチドＦＫ２２８（ＦＲ９０１２２８）
【化２０】
【００３２】
６．血管新生阻害剤、例えば、
真菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓにより分泌されるフマギリン、およびその類似体、例えば、以下に示すＴＮＰ−４７０（［Ｏ−（クロロアセチルカルバモイル）フマギロール］：
【化２１】
サリドマイド（免疫修飾剤でもある）
【化２２】
【００３３】
７．低分子ＧＴＰａｓｅの修飾に必要な細胞プロセスを阻害する薬剤：
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬［例えば、Ｒ１１５７７７，（Ｂ）−６−［アミノ（４−クロロフェニル）（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５イル）メチル］−４−（３−クロロフェニル）−１−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン］
【化２３】
イソプレニルシステイントランスフェラーゼ阻害剤［例えば、シスメスニル］
【化２４】
ＨＭＧ−ＣｏＡ阻害剤（スタチン、例えば、ロバスタチン）
【化２５】
ビスホスホネート（例えば、アレンドロネート（メバロネート経路の阻害剤））
【化２６】
【００３４】
８．化学予防薬、例えば：
合成レチノイド（フェンレチニド）
【化２７】
レチノイン酸［３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセニル）−ノナ−２，４，６，８−テトラエン酸］および類似体
【化２８】
クルクミンおよび誘導体
【化２９】
ＥＧＣＧ，（−）−エピガロカテキン・ガレート（以下参照）および類似体
【化３０】
Ｉ３Ｃ（インドール−３−カルビノール）
【化３１】
シクロパミン
【化３２】
メチルグリオキサール
【化３３】
【００３５】
９．キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば：
ＭＥＫ阻害剤、例えば、Ｕ０１２６［１，４−ジアミノ−２，３−ジシアノ−１，４−ビス（２−アミノフェニルチオ）−ブタジエン］
【化３４】
Ｐ１３Ｋ阻害剤、例えば、Ｌｙ２９４００２［２−（４−モルフォリニル）−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン］
【化３５】
ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２阻害剤、例えば、４−（４−ベンジルオキシアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン
【化３６】
ＡＧ１４７８（ＥＧＦＲ阻害剤）、４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン
【化３７】
複数のチロシンキナーゼの阻害剤、例えば、ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、ＫＮ２９４１（４−（６，７−ジメトキシ−４−キナゾリニル）−Ｎ−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−１−ピペラジンチオカルボキサミド）
【化３８】
複数のキナーゼの阻害剤、例えば、ＳＵ１１６５２、５−［（Ｚ）−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化３９】
複数のキナーゼの阻害剤、例えば、ＳＵ１１２４８（商標名はＳｕｔｅｎｔ）、５−［（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化４０】
複数のキナーゼの阻害剤、例えば、ＶＥＧＦＲ２およびＲａｆキナーゼ、例えば、Ｂａｙ４３−９００６（ＮＥＸＡＶＡＲ、またはソラフェニブ）、４−（４−｛３−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ウレイド｝フェノキシ）−Ｎ２−メチルピリジン−２−カルボキサミド
【化４１】
ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン（免疫抑制剤でもある、以下参照）およびプロドラッグまたは類似体
【化４２】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、例えば、ファスジル（Ｆａｓｕｄｉｌ）、［１−（５−イソキノリンスルホニル）ホモピペラジン］
【化４３】
【００３６】
１０．血管新生阻害剤でもある薬剤を含むことができる新規抗線溶剤、例えば、
ハロフギノン臭化水素酸塩［（＋／−）−トランス−７−ブロモ−６−クロロ−３−［３−（３−ヒドロキシ−２−ピペリジニル）−２−オキソプロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノン臭化水素酸塩］
【化４４】
ピルフェニドン（５−メチル−Ｎ−フェニル−２−１Ｈ−ピリドン−ｄ５）
【化４５】
【００３７】
１１．アルキルリン脂質、例えば：
Ａ．ミルテフォシン（ＨｅＰＣ）
Ｂ．エデルフォシン（Ｅｔ−１８−ＯＣＨ3）
Ｃ．ペリフォシン（Ｄ２１２６６）
【化４６】
【００３８】
１２．ＨＳＰ９０阻害剤（熱ショックタンパク質阻害剤）
ゲルダナマイシン類似体／誘導体、例えば、１７−ＡＡＧおよびその誘導体、１７−ＡＡＧ、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン
【化４７】
ラジシコールおよび類似体
【化４８】
ヒペリシン
【化４９】
【００３９】
１３．抗真菌剤：
クロトリマゾールおよび類似体
【化５０】
【００４０】
１４．突然変異遺伝子の機能を回復する薬剤、例えば、ナンセンス突然変異を抑制する薬剤、例えば：
ゲンタマイシン
【化５１】
【００４１】
本発明の組成物の調製において、（１）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１７th，１８th ｏｒ １９th Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０−９１２７３４−０４．３（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」とも呼ぶ）、（２）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ−Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｕｌｔｏｎ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ；（３）Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（７th ｏｒ ８th Ｅｄ）ｂｙ Ｈａｌｌ ａｎｄ Ｒｅｉｓｓ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ；等の教示を参考にでき、それらの全てを参照することにより本明細書に組み込む。ナノ粒子またはリポソームの配達については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈａｐｐｌ．ｃｏｍ／ｓｐｅｃｉａｌ／ｍａｒ０１３．ｈｔｍおよびｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｌｌａｂｏ．ｃｏｍ／ｌｉｐｏｓｏｍｅ．ｈｔｍにおいてさらなる情報を得ることができる。デンドリマー技術に関する情報は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉｎｇｅｒ．ｃｏｍ／ｄｅｄｒｉｍｅｒ／ｏｎｅ．ｈｔｍに見られる。
【実施例】
【００４２】
本発明において神経線維腫を処理するのに有用な薬剤は、本明細書に記載の幾つかの方法により選択することができる。例えば、本明細書に記載の種々の化合物／薬剤並びに選択し得る他の薬剤を、ＮＦ１関連細胞系のパネルの細胞増殖を阻害する性能について細胞ベースのアッセイにおいて試験する、皮膚神経線維腫移植アッセイへの効果を決めるために試験する、および、皮膚神経線維腫のための異種移植片モデルへの効果を決めるために試験する。
【００４３】
Ｉ．インビトロアッセイ
１）細胞増殖アッセイ
複数の生理学的に関連する細胞または細胞系を用いて、細胞増殖アッセイにおける化合物の性能を測定した。これらの細胞は、（１）ＮＦ１欠損ヒト悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）細胞、（２）Ｎｆ１-/-マウス胚シュワン細胞、および（３）Ｎｆ１およびｐ５３欠損マウス細胞が含まれる。マウスシュワン細胞を、ラミニンを被覆したプレート上で増殖させ、ダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）／ハムＦ１２培地（Ｆ１２）（ＤＭＥＭとＦ１２培地との１：１ブレンドであり、組換えヘレグリン−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）、ホルスコリン（２μＭ）およびＮ２サプリメント（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｃａｔ＃１７５０２−０４８）を補足した）中で培養する。全ての他の細胞を、１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）を加えたＤＭＥＭ中で増殖させる。以下の出版物は、細胞増殖アッセイにおいて用いられる細胞系の調製を開示している。
【００４４】
Ｂａｓｕ，Ｔ．Ｎ．，Ｇｕｔｍａｎｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｇｌｏｖｅｒ，Ｔ．Ｗ．，Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｆ．Ｓ．ａｎｄ Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ．（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３６５，７１３−７１５
ＤｅＣｌｕｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｐａｐａｇｅｏｒｇｅ，Ａ．Ｇ．，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｄｉｅｈｌ，Ｓ．Ｒ．，Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．，Ｖａｓｓ，Ｗ．Ｃ．ａｎｄ Ｌｏｗｙ，Ｄ．Ｒ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６９，２６５−２７３
Ｄｅｃｌｕｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｈｅｆｆｅｌｆｉｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｂｅｎｖｅｎｕｔｏ，Ｇ．，Ｌｉｎｇ，Ｂ．，Ｌｉ，Ｓ．，Ｒｕｉ，Ｗ．，Ｖａｓｓ，Ｗ．Ｃ．，Ｖｉｓｋｏｃｈｉｌ，Ｄ．ａｎｄ Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．（２０００）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０５，１２３３−１２４１
Ｖｏｇｅｌ，Ｋ．Ｓ．，Ｋｌｅｓｓｅ，Ｌ．Ｊ．，Ｖｅｌａｓｃｏ−Ｍｉｇｕｅｌ，Ｓ．，Ｍｅｙｅｒｓ，Ｋ．，Ｒｕｓｈｉｎｇ，Ｅ．Ｊ．ａｎｄ Ｐａｒａｄａ，Ｌ．Ｆ．（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６，２１７６−２１７９
Ｍａｎｅｎｔ，Ｊ．，Ｏｇｕｉｅｖｅｔｓｋａｉａ，Ｋ．，Ｂａｙｅｒ，Ｊ．，Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．ａｎｄ Ｇｉｏｖａｎｎｉｎｉ，Ｍ．（２００３）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２３，１６７−１７３
Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｔ．Ｋ．，Ｋｌｅｉｔｍａｎ，Ｎ．ａｎｄ Ｂｕｎｇｅ，Ｒ．Ｐ．（１９９１）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １１，２４３３−２４４２
Ｖｅｒｄｕ，Ｅ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｆ．Ｊ．，Ｇｕｄｉｎｏ−Ｃａｂｒｅｒａ，Ｇ．，Ｎｉｅｔｏ−Ｓａｍｐｅｄｒｏ，Ｍ．ａｎｄ Ｎａｖａｒｒｏ，Ｘ．（２０００）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｄｈｏｄｓ ９９，１１１−１１７
Ｋｉｍ，Ｈ．Ａ．，Ｌｉｎｇ，Ｂ．ａｎｄ Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．（１９９７）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １７，８６２−８７２
Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｇｈｏｓｈ，Ｐ．，Ｃｈａｒｎａｙ，Ｐ．，Ｂｕｒｎｓ，Ｄ．Ｋ．ａｎｄ Ｐａｒａｄａ，Ｌ．Ｆ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６，９２０−９２２
Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｒｏｍｅｒｏ，Ｍ．Ｌ．，Ｇｈｏｓｈ，Ｐ．，Ｙｅ，Ｚ．，Ｃｈａｒｎａｙ，Ｐ．，Ｒｕｓｈｉｎｇ，Ｅ．Ｊ．，Ｍａｒｔｈ，Ｊ．Ｄ．ａｎｄ Ｐａｒａｄａ，Ｌ．Ｆ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １５，８５９−８７６
Ｍｕｉｒ，Ｄ．，Ｎｅｕｂａｕｅｒ，Ｄ．，Ｌｉｍ，Ｉ．Ｔ．，Ｙａｃｈｎｉｓ，Ａ．Ｔ．ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ，Ｍ．Ｒ（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５８，５０１−５１３
Ｌｉ，Ｙ．，Ｒａｏ，Ｐ．Ｋ．，Ｗｅｎ，Ｒ．，Ｓｏｎｇ，Ｙ．，Ｍｕｉｒ，Ｄ．，Ｗａｌｌａｃｅ，Ｐ．，ｖａｎ Ｈｏｒｎｅ，Ｓ．Ｊ．，Ｔｅｎｎｅｋｏｏｎ，Ｇ．Ｉ．ａｎｄ Ｋａｄｅｓｃｈ，Ｔ．（２００４）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２３，１１４６−１１５２
【００４５】
細胞増殖アッセイを行うために、３日間で約７０％のコンフルエンスに達し得る適当な数の細胞（例えば、ヒトＭＰＮＳＴ細胞およびマウスＮｆ１／ｐ５３欠損細胞について３０００〜６０００個の細胞／ウェル、マウス胚シュワン細胞について８０００〜１００００個の細胞／ウェル）を、９６ウェルプレートで培養した。種々の濃度の試験すべき各化合物／薬剤を、増殖培地に加え、次に、細胞を３日間培養した。インキュベーション完了時に、培地を穏やかに除去し、各ウェルにＡＴＰｌｉｔｅ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｃａｔ＃６０１６９４１）１００μｌを加えた。ＡＴＰｌｉｔｅ溶液および細胞中のＡＴＰの反応から生じる発光を検出することにより、生存可能な細胞を測定した。種々の化合物／薬剤が、幾つかのＮＦ１関連細胞系の細胞増殖を阻害する性能を決定した。神経線維腫の局所治療用の優れた候補として有用な薬剤／化合物のための選択基準は、１０μＭ以下のＩＣ５０（ＩＣ５０は、細胞増殖を５０％阻害するのに必要な阻害剤の濃度として定義される）を有する任意の化合物の選択に基づく。そのような基準を満たす化合物は、アルキル化剤（例えば、チオテパ）、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、サンギバマイシン、ツベルシジン、トリシリビン、クラドリビン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カンプトテシン、ポドフィロトキシン、ＸＫ４６９）、微小管阻害剤（例えば、メベンダゾール）、硬化剤（例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリンおよび類似体）、遺伝子転写を修飾する薬剤（トリコスタチンＡのようなＨＤＡＣ阻害剤）、化学予防剤（例えば、フェンレチニド、レチノイン酸および類似体、クルクミンおよび誘導体、ＥＧＣＧおよび類似体、およびメチルグリオキサールのようなレチノイド）、キナーゼ阻害剤（例えば、Ｕ０１２６、ＬＹ２９４００２、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２阻害剤、ＫＮ２９４１、ＳＵ１１６５２、Ｂａｙ４３−９００６、ラパマイシンおよびそれらの類似体）、アルキルリン脂質（例えば、ミルテフォシン）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールおよび類似体、ヒペリシンのようなゲルダナマイシン誘導体）、抗真菌剤（例えば、クロトリマゾール）、ナンセンス突然変異を抑制する薬剤（例えば、ゲンタマイシン）である。さらに、化合物が、細胞非自律的な（例えば、免疫調節または抗血管新生）作用の機構を有すると考えられる、または未知である場合、これらは、陽性であると記録されないが、移植モデル、異種移植モデル、および可能ならＮＦ１患者を用いる証拠−原理臨床的試行（ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ）において試験される。
【００４６】
２） 移植片アッセイ
化合物／薬剤の効果を、以下のようにエクスビボ腫瘍移植片モデルにおいて試験した。新しいヒト皮膚神経線維腫を８つの小さな断片に切り出し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ＦＢＳ、ヘレグリンおよびホルスコリンを含む培地を有する標準的細胞培養プレート上で培養した。断片を治療群と対照群とに分けた。異なる投与量の化合物を、１日目に培地に加えた。陰性対照群では化合物を加えなかった。全ての腫瘍断片を３日目に集め、ホルマリン固定およびパラフィン包埋により組織学のために加工した。組織部分を切断し、組織学的分析のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。対になった移植片サンプルの組織学的分析を、盲検的に行った。サンプルを「−」から「＋＋＋」で記録するために、３つの組織学的パラメーターを用いた。１）全面的組織一体性；処理サンプルの細胞充実性を陰性対照サンプルと比べることにより組織一体性を評価した。低細胞充実性領域は、対照サンプル上の同様の領域よりも３０％以上核が少ないと定義した。ＭａｇｎａＦｉｒｅデジタルカメラ（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、明視野顕微鏡で４０倍での各サンプルの写真を撮り、コンピューターに保存した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて写真中の低細胞充実性領域を測定し、長さ×幅として計算し、次に、サンプルの合計面積に対する百分率として表した。全組織一体性を、０〜２＋のスコアを用いて記録した。簡単に説明すると、優れた組織一体性は０と記録し（＜５％）、１＋は中間的組織一体性（５〜２５％）を示し、２＋は低組織一体性（＞２５％）を示す。２＋の場合のみが、最終的合計スコアについて陽性「＋」であると見なした。２）細胞死−スライドを明視野顕微鏡により評価した。視野当たり少なくとも１００個の細胞を数えた。細胞死は、０〜３＋のスコアを用いて半定量的に記録した。集中したまたは断片的な核の存在は０と記録し、１＋は、検出可能な細胞死の最低水準（＜１０％）を示し、２＋は中程度の細胞死（１０〜２０％）であり、３＋は高い細胞死（＞３０％）である。全ての２＋および３＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした；および３）血管系への効果−スライドを明視野顕微鏡により評価した。陰性対照サンプルにおける血管系と比較することにより、処理サンプル中での血管系への効果を決めた。少なくとも、サンプル当たり２０個の血管系を数えた。血管系への効果は、０〜３＋のスコアを用いて半定量的に記録した。簡単に説明すると、損傷血管系の非存在または最低水準は０（＜５％）と記録し、１＋は、ある程度の損傷血管（５〜２５％）を示し、２＋は高い（＞２５％）である。全ての１＋および２＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした。最終的組織学的スコアは、「−」〜「＋＋＋」と表わされる前記３つのパラメーターのスコアの合計であった。「＋」以上の組織学的スコアの任意の化合物は、神経線維腫の局所治療のための潜在的に優れた候補である。そのような基準を満たす化合物は、アルキル化剤（例えば、チオテパ、カルボプラチン）、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、サンギバマイシン、ツベルシジン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ポドフィロトキシン）、微小管阻害剤（例えば、メベンダゾール）、硬化剤（例えば、ブレオマイシン）、抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）（例えば、ジクロフェナク）、遺伝子転写を修飾する薬剤（トリコスタチンＡ、バルプロ酸のようなＨＤＡＣ阻害剤）、化学予防剤（例えば、フェンレチニドのようなレチノイド）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールおよび類似体のようなゲルダナマイシン誘導体）である。
【００４７】
３）異種移植片アッセイ
化合物の効果を、以下のように、マウス皮膚神経線維腫（ＤＮＦ）異種移植片モデルにおける腫瘍量減少研究において試験した。５週齢と６週齢との間で重さが約２０ｇである雌ＳＣＩＤマウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得た。動物の皮下に、新しいヒトＤＮＦの断片を移植した。インキュベーションの３日後、動物を処理群と対照群とにランダムに割り当てた。各群は、６匹の腫瘍にかかっているマウスを含んでいた。各マウスは、耳にタグを付け、実験の間中個々に追跡した。投与は、ランダム化後、１日目に開始した。化合物を、１週間に２回のスケジュールで４週間、病巣内投与した。化合物＋ビヒクルを、異なる投与量で体積５０μｌで投与した。ビヒクル単独を、陰性対照として作用させるために投与した。マウスを１週間に２回計測し、１日目から開始して腫瘍測定をキャリパーを用いて１週間に２回行った。腫瘍体積は、標準式（Ｗ2×Ｌ）／２（Ｌは長さであり、およびＷは幅である）により計算した（Ｂｌａｓｋｏｖｉｃｈ ＭＡ，Ｌｉｎ Ｑ，Ｄｅｌａｒｕｅ ＦＬ，Ｓｕｎ Ｊ，Ｐａｒｋ ＨＳ，Ｃｏｐｐｏｌａ Ｄ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＡＤ，Ｓｅｂｔｉ ＳＭ（２０００），Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＧＦＢ−１１１，ａ ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｗｉｔｈ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １８：１０６５−１０７０）。屠殺後インキュベーション前に、腫瘍断片の重量を計った。最初の腫瘍重量の百分率として、相違を表した。収穫した腫瘍を、ホルマリン固定およびパラフィン包埋により組織学のために加工した。組織部分を切断し、組織学的分析のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。化合物の異種移植片に対する効果を、１）または２）のいずれかにより決めた。１）腫瘍重量測定−処理群と対照群との両方における処理前後の腫瘍重量の相違を、スチューデントｔ検定により分析した。化合物の特定の投与量の結果は、腫瘍重量の相違が統計的有意（ｐ＜０．０５）である場合、「＋」と見なされる。２）組織学的分析−サンプルを記録するために３つの組織学的パラメーターを用いた。Ａ）組織壊死−ＭａｇｎａＦｉｒｅデジタルカメラ（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、明視野顕微鏡で４０倍での各サンプルの写真を撮り、コンピューターに保存した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて写真中の壊死領域を測定し、長さ×幅として計算し、次に、サンプルの合計面積に対する百分率として表した。全組織壊死を、０〜２＋のスコアを用いて記録した。簡単に説明すると、壊死の非存在は０と記録し（＜５％）、１＋は中間的組織壊死（５〜２５％）を示し、２＋は高い組織壊死（＞２５％）を示す。２＋の場合のみが、最終的合計スコアについて陽性「＋」であると見なした。Ｂ）組織細胞充実性−処理サンプル中の低細胞充実性領域は、対照サンプル上の同様の領域よりも３０％以上核が少ないと定義した。ＭａｇｎａＦｉｒｅデジタルカメラ（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、明視野顕微鏡で４０倍での各サンプルの写真を撮り、コンピューターに保存した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて写真中の低細胞充実性領域を測定し、長さ×幅として計算し、次に、サンプルの合計面積に対する百分率として表した。全組織一体性を、０〜２＋のスコアを用いて記録した。簡単に説明すると、優れた組織一体性は０と記録し（＜５％）、１＋は中間的組織一体性（５〜２５％）を示し、２＋は低組織一体性（＞２５％）を示す。全ての１＋および２＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした。Ｃ）炎症性細胞浸潤−スライドを明視野顕微鏡により評価した。視野当たり少なくとも１００個の細胞を数え、合計細胞１００当たりの炎症性細胞の数を、各サンプルについて百分率として計算した。炎症性細胞の浸潤は、処理サンプルの百分率と対照サンプルの百分率との相違により決め、０〜３＋のスコアを用いて半定量的に記録した。簡単に説明すると、炎症性細胞浸潤の相違の非存在または非常に低い相違は０と記録し（＜５％）、１＋は炎症性細胞浸潤の中間的水準（５〜２５％）を示し、２＋は炎症性細胞浸潤の高水準（＞２５％）を示す。全ての１＋および２＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした。最終的組織学的スコアは、「−」〜「＋＋＋」と表わされる前記３つのパラメーターのスコアの合計とした。腫瘍重量測定における「＋」または組織学的スコアが「＋」以上である任意の化合物は、神経線維腫の局所治療ための潜在的に優れた候補である。そのような基準を満たす化合物は、アルキル化剤（例えば、チオテパ、カルボプラチン）、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、サンギバマイシン、ツベルシジン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ポドフィロトキシン）、微小管阻害剤（例えば、メベンダゾール）、硬化剤（例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリン）、抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）（例えば、ジクロフェナク）、遺伝子転写を修飾する薬剤（トリコスタチンＡ、バルプロ酸のようなＨＤＡＣ阻害剤）、化学予防剤（例えば、フェンレチニドのようなレチノイド）、アルキルリン脂質（例えば、ミルテフォシン）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールおよび類似体のようなゲルダナマイシン誘導体）である。
【００４８】
神経線維腫を治療するために本発明において有用な薬剤を選択するための前記アッセイの一以上を用いて、前記の化合物／薬剤を試験した。アッセイは好ましくは、特別の順番で行われ、「陽性の結果」が得られた場合、次のアッセイが行われたりする。例えば、薬剤が、細胞増殖アッセイで試験され、先に開示された基準により陽性である場合、この薬剤を移植アッセイにおいて試験し、前述の基準に従って陽性である場合、この薬剤を異種移植片アッセイにおいて試験する。特定の薬剤または化合物について３つのアッセイの全てが基準に基づき陽性の結果である場合、この薬剤は、神経線維腫、具体的にはＮＦ１の良好な治療用の優れた候補となることが予想される。さらに、化合物が、細胞非自律的な（例えば、免疫調節または抗血管新生）作用の機構を有すると考えられる、または未知である場合、これらは、異種移植モデル、または可能ならＮＦ１患者を用いる証拠−原理臨床的試行（ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ）において陽性の結果が得られるなら、神経線維腫の良好な治療用の優れた候補であると予想される。
【００４９】
ＩＩ．インビボ研究
＜薬剤または化合物を用いる神経線維腫の局所治療のための一般的研究デザイン＞
Ａ．病巣内投与
研究は、４連続週間に渡って３つの標的皮膚神経線維腫に週に１回与えられる病巣内投与薬剤の効果の証拠−原理、見込み、安全性および効果研究であった。６人の被験者を登録した。全ての被験者は、ＮＦ１と診断され、背部を含む少なくとも６個の０．５〜１．５ｃｍの皮膚神経線維腫を有していた。全ての被験者は、１８歳から６５歳の年齢である。全ての被験者は、そのほかの点では、健康状態が良かった、またはプライマリーケア医師により適当に管理される安定な付随的医学的症状を有していた。登録された被験者は、ＮＦ１の特徴以外の、実験室的および身体検査の両方について臨床的に意義のある異常は示さなかった。スクリーニングおよび登録後、全ての被験者は週に１回、所定体積（病巣の寸法に基づく）の病巣内薬剤を、最大寸法を含んで直径が０．５〜１．５ｃｍである３つの標的皮膚神経線維腫中に受け入れた。各標的の皮膚神経線維腫は寸法が異なり、一つは直径が０．５〜０．８ｃｍであり、第２のものは直径が０．８１〜１．２ｃｍであり、第３のものは直径が１．２１〜１．５ｃｍであった。付随的に、同じ寸法範囲の胴体および／または付属物の上に見られる３つの対照皮膚神経線維腫は、滅菌生理食塩水を受け入れた。注入前の全ての病巣を、リドカイン１％およびエピネフリン１：１００，０００で局所的に麻酔した。研究期間中、被験者は、６つの病巣（薬剤を受け入れる３つの標的病巣、生理食塩水を受け入れる３つの対照病巣）において４週間の病巣内注入を受け、研究薬剤を受け入れている間の毎週追跡し、最後の投与から３週間後に投与した。訪問毎に、被験者は、身体検査を受け、悪影響および付随的薬剤投与を記録し、標的および対照病巣の両方を測定し撮影した。検査には、２つの評価された病巣の正確に測定された寸法（２軸において）が含まれる。写真は、表わされた被験者の特徴を確認することなく、標的病巣と対照病巣の両方の標準化デジタル画像（定規を伴う）を含んでいた。各被験者について、写真は、一致する焦点距離、明暗、および露出角度を訪問間で持ち越した。各訪問において、各被験者を、その投与中または訪問間において研究薬剤を受け入れることによる、疼痛、そう痒、刺激、脱色、潰瘍または、ベースラインに存在しない局所的または標的および対照病巣から離れている任意の他の新規表示または兆候を含む潜在的副作用について尋ねた。
【００５０】
ドキシサイクリンが研究薬剤である局所注入研究の一つにおいて、ドキシサイクリンが注入された腫瘍の８９％が、皮膚神経線維腫の部分的または完全な除去を示したが、対照の全てが変化を示さなかった。同様に、研究薬剤としてジクロフェナクを用いるもう一つの研究において、ジクロフェナクを注入された腫瘍の４８％が、皮膚神経線維腫の部分的または完全な除去を示したが、対照の全てが変化を示さなかった。
【００５１】
Ｂ．局所投与
神経線維腫を有する被験者を、Ａに記載のように選択し、同様の対照を、同じ被験者において神経線維腫を治療せずに用いる。投与の別の方法には、５％ゲルと組み合わせて、本明細書に記載の薬剤の一以上を含む組成物を、十分な量で、１日１回２１日間、神経線維腫を覆っている皮膚に投与して腫瘍を被覆することによる局所投与が含まれる。さらに、局所投与は、薬剤を含む組成物で装置の微細針が被覆されている皮膚剥離装置を、１日１回７日間、腫瘍を覆っている皮膚に適用することにより成される。
【技術分野】
【０００１】
Ｉ型神経線維腫症（ＮＦ１）は、ヒト神経系に影響を与える最も一般的な単一遺伝子疾患である。それは、遺伝的に常染色体優性遺伝により伝達される。ＮＦ１は、世界中で１５０万人の人々に影響を与えており、その疾患に対する民族的、人種的または地理的偏りはない。ＮＦ１は、腫瘍抑制遺伝子であるニューロフィブロミンを産生するＮＦ１遺伝子における突然変異により引き起こされる。ＮＦ１遺伝子座における自発突然変異率は高いため（５０％）、遺伝子検査により集団においてその疾患が著しく低下する可能性は低い。
【背景技術】
【０００２】
ＮＦ１の影響を受けている人々は、皮膚、皮下および叢状神経線維腫；視覚経路星状細胞腫および悪性末梢神経鞘腫瘍（「ＭＰＮＳＴ」）、並びに学習障害について、脊柱側湾症および特定形態の白血病を含む神経系の種々の腫瘍を発生させる危険が高い。これらの腫瘍は、醜い外観、神経系損傷および慢性疼痛を起こすことがある。皮膚神経線維腫は、ＮＦ１の最も一般的な病巣であり、影響を受けた個体の９０％において生じる。皮膚神経線維腫は、典型的に、小さく（直径が２ｃｍ未満）、多発性であり、思春期において最初に発生する。これらは、典型的に、コラーゲン含量が高く、代謝活性が非常に低く、叢状神経線維腫と対照的に、決して悪性変性しない。自然発生の皮膚神経線維腫において、または、種々の悪性疾患のために局所的放射線治療を受けたまたは悪性疾患のために化学治療を受けた患者において、悪性変性が報告された場合はない。
【０００３】
ある患者は、最初はＮＦ１と考えられていた別の疾患である象人間病（Elephant Man's disease）に関係する同じ醜化兆候を呈することがある。現時点での唯一の治療は、外科的除去である。しかしながら、大きな神経的および／または審美的問題、多くの場合、再生を引き起こすことなく、腫瘍を除去することはできないことが多い。これらは、放射線治療に、または既知の化学治療薬に反応性がない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
皮膚および皮下神経線維腫は、人生のいかなる時にも発生し得るが、その発生数は、通常、思春期前は少ない。成人で見られる神経線維腫の合計数は、わずか数個から数千個で変化する。さらなる皮膚および皮下神経線維腫が人生全体で発生するが、出現率は年毎に大きく変わり得る。その症状のための実際の治療以外に、皮膚神経線維腫のための効果的な非外科的治療が、ＮＦ１により影響されている米国における１０万人の人々のための唯一の最も高い優先手段である。皮膚神経線維腫は、重大な醜化、疼痛、心理的および経済的なストレスを起こし、この集団における主な満たされていない医学的要求だと考えるべきである。他の腫瘍と比べて比較的低い増殖指数、および特に基底細胞および扁平上皮細胞癌と比べたときに皮膚において僅かに深く腫瘍が位置するという事実を含む幾つかの因子故に、皮膚神経線維腫のための局所治療は今までは研究されていなかった。この局所的治療は、神経線維腫の部位における局所治療および病巣内または皮内治療の両方を含む。従って、これらの皮膚神経線維腫のそのような局所治療は、満たされていない医学的要求のための価値ある治療であるかも知れないが、この領域においてこれまで研究が成されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の一つの態様は、神経線維腫、例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者において、神経線維腫を治療する方法である。本方法は、組成物を神経線維腫に局所適用することを含む。本方法は、その組成物を被験者に全身投与して神経線維腫への効果を奏することは含まない。本方法は、組成物を腫瘍の領域に局所投与することを含み、その組成物は、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助する医薬的に許容できる賦形剤とを含み、好ましくは神経線維腫に悪影響を与えるのに十分な時間維持されることを特徴とする。
【０００６】
本方法は、より具体的には、組成物を腫瘍の領域において皮膚の表面に局所適用することを含み、その組成物は、（ａ）神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を皮膚を通して腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤とを含むものである。
【０００７】
本発明のもう一つの態様は、被験者における神経線維腫（例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫）の治療に有用な組成物である。この組成物は、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を皮膚を通して腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤とを含む。この組成物は、別の態様において、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、（ｂ）注入に適した医薬的に許容できるキャリアとを含む。
【０００８】
本発明のさらにもう一つの態様は、神経線維腫（例えば、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫）を局所治療するための医薬品を調製する方法である。本方法は、その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤を、皮膚を通してその薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に該薬剤を所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤と組み合わせることを含む。
【０００９】
本発明のさらなる態様は、神経線維腫に病巣内注入するための医薬品を調製するための方法である。本方法は、その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤を、その薬剤が被験者の腫瘍に所定時間接するように腫瘍中に病巣内に送達することを補助する医薬的に許容できる賦形剤と組み合わせることを含む。
【００１０】
本発明の他の態様は、以下の詳細な説明を読んだ後の当業者に明白である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の方法の実施において、組成物が、腫瘍の領域において皮膚の表面に適用される。その組成物は、組成物の適用のためのいかなる既知の方法においても適用することができる。すなわち、組成物は噴霧、塗り付け、擦り付け、またはパッチ等を用いて皮膚に接着することができる。さらに、組成物を皮膚に適用して、顕微注入、電気泳動、超音波または高周波機構を用いて皮膚を通過させて運ぶことができる。これは、ウイルス系または空気系の配達システムを用いて配達することができる。この薬剤は、ナノ粒子、デンドリマーまたはリポソームとして調製することができる。この組成物は、粉末、液状溶液または懸濁液、クリーム、ローション、軟膏、ゲル、または薬剤が皮膚を通過して腫瘍まで移動するのに十分な時間、その組成物を皮膚の上に維持させる別の組成物の形態をとってもよい。
【００１２】
組成物は、腫瘍の領域において皮膚に適用される、または腫瘍に病巣内注入される。通常、腫瘍は容易に明らかとなり、皮膚上で醜化する。よって、腫瘍の領域内にある皮膚の表面に、組成物が直接適用される。その領域は、組成物中の活性薬剤が皮膚を通過して腫瘍中に入り腫瘍に作用する皮膚の領域である。組成物がいったん皮膚に適用されると、薬剤が皮膚を通過して腫瘍中に入り被験者の神経線維腫の悪影響を減弱させるのに十分な時間、皮膚の上に維持される。
【００１３】
病巣内注入のためには、種々の「能動的」薬剤配達法および受動的薬剤配達（透過促進剤を用いるまたは用いない処方）がある。全ての技術が、何らかのタイプのエネルギーを用いてまたは機械的に、表皮のケラチン層を不安定化して薬剤配達を向上させる。これらの方法としては、イオン導入、超音波、高周波（ＲＦ）および微細針（削皮術）がある。薬剤に皮膚を通過させるＣＯ2カートリッジに取り付けられた微細針である無針注入技術を用いることもできる。
【００１４】
悪影響を減弱させるというのは、（１）腫瘍の寸法が安定化し増加しない、（２）腫瘍の寸法が小さくなり得る、または（３）腫瘍に伴う疼痛および／またはそう痒が減少し得る、ことを意味する。神経線維腫により引き起こされる醜化が症状の主要な不利益であるので、腫瘍の寸法が著しく低下することは好ましい。被験者への悪影響を減弱させるように組成物が作用しているかどうかを決めるためのマーカーには、治療期間中に腫瘍の寸法を測定すること、および被験者における疼痛のレベルが低下しているか決めるために被験者に面接することがある。腫瘍の増殖速度を示す増殖指数、腫瘍細胞の死滅速度を示すアポトーシス指数、または血管密度のような、他のマーカーを開発することができる。当業者に明らかである他のバイオマーカーを用いて、本発明の組成物の成功を測ることもできる。例えば、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫ−ＭＡＰＫ経路の活性化状態をモニターするバイオマーカーを用いて、本発明の組成物による腫瘍組織における標的阻害を測定することができる。大部分の場合、ベースラインを達成してから、キャリパーを用いてまたはＭＲＩ造影技術を用いて腫瘍の寸法を測定することにより、または未処理腫瘍についての指数を達成することにより治療する。いったんベースラインが達成されると、処理を始め、測定を周期的に行って、処理の成功を決めることができる。
【００１５】
皮膚の表面に適用するためまたは腫瘍中に病巣内注入するための組成物中での単一薬剤としてまたは一以上の薬剤の組み合わせとして有用な薬剤は、被験者への神経線維腫の悪影響を減弱させるものである。本発明で有用な好ましい薬剤は、発癌性でない薬剤である。ＦＤＡまたはＩＡＲＣ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓは、発癌性と考えられ、ヒトへの使用が薦められないまたは許容されない化合物／薬剤のリストを有する。ブレオマイシンが薬剤として以下に列挙されているが、発癌性であるので好ましい薬剤として望ましくはない。例えば、そのような薬剤は、化学治療剤（例えば、抗新生物薬、細胞毒素、または増殖防止薬）；硬化薬；免疫修飾物質（例えば、免疫調節物質、免疫抑制剤、または免疫刺激剤）、または抗炎症剤、例えば、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）またはＣｏｘ−１および２阻害剤；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、ＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）阻害剤（例えば、バルプロ酸、ＦＫ２２８、トラポキシン）、血管新生阻害剤；低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる薬剤（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤［Ｒ１１５７７７］、イソプレニルシステイントランスフェラーゼ阻害剤（シスメスニル（ｃｙｓｍｅｔｈｎｉｌ））；ビタミン、ビタミン誘導体、酸化防止剤、栄養剤のような化学予防剤として作用する薬剤（例えば、フェンレチニド、ＥＧＣＧ含有緑茶抽出物）；抗線溶剤、アポトーシスまたは抗アポトーシスシグナルを標的とする薬剤、キナーゼ阻害剤（例えば、タンパク質キナーゼ阻害剤または脂質キナーゼ阻害剤）；アルキルリン脂質；タンパク質シャペロン阻害剤、例えば、熱ショックタンパク質阻害剤（例えば、ＨＳＰ９０）；抗真菌剤；突然変異遺伝子の機能を回復する薬剤、例えば、ナンセンス突然変異を抑制する薬剤（例えば、ゲンタマイシン）；核酸系治療薬、ホスファターゼ阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、または、皮膚過形成（例えば、紫外線角化症、黒色腫、カポジ肉腫、基底細胞または扁平上皮細胞癌、または他の癌の皮膚転移）を阻害する薬剤、であり得る。局所治療のためには、組成物は、好ましくは、薬剤に皮膚を通過して腫瘍中に押し入れることを補助する皮膚浸透剤を含む。
【００１６】
有用な化学治療薬の例としては、（１）トポイソメラーゼ阻害によりＤＮＡ複製を妨害する薬剤、（２）微小管および／または紡錘体を破壊する薬剤、（３）ＤＮＡアルキル化物質またはＤＮＡ損傷物質として作用する薬剤、または（４）ヌクレオチド合成を妨害する薬剤、すなわち、代謝拮抗物質、が挙げられる。具体的化学治療薬には、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびチオテパが挙げられる。これらの物質の各々が、当業者に周知であり、標準的供給源から得ることができる。
【００１７】
タンパク質キナーゼ阻害剤は、それぞれが細胞の増殖および生存を促進する、Ｒａｓ−活性化有糸分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ経路（例えば、ＭＥＫおよびＲａｆキナーゼ）、受容体および非受容体チロシンキナーゼ、およびＡＫＴ−ｍＴＯＲ経路の成分のような、神経線維腫において過活性化しているキナーゼを標的とする化合物である。脂質キナーゼ阻害剤は、神経線維腫において過活性化し細胞生存率を向上させるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ経路を標的とする化合物である。
【００１８】
タンパク質シャペロン阻害剤は、熱ショックタンパク質またはペプチジルプロリルイソメラーゼ機能を阻害するものである。熱ショックタンパク質活性は、多くの他のシグナル分子に加えて、Ｒａｓ有糸分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ経路の２つの成分であるＲａｆおよびＫＳＲの生理学的タンパク質レベルを維持するために必要である。
【００１９】
血管新生阻害薬は、（１）血管新生シグナルカスケード、例えば、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）受容体シグナル、（２）細胞外基質破壊、例えば、基質メタロプロテイナーゼ（例えば、ハロフギノン）により誘発されるもの、（３）内皮細胞の増殖、生存および移動、または（４）作用の未知の機構、を遮断するものである。これらの化合物の一部も、他の範疇に属する。これらの血管新生プロセスは、特に、成長している腫瘍への適度の血液供給を確保するのに必要であり、ＮＦ１用の治療介入の興味深い形態である。
【００２０】
シュワン細胞、肥満細胞および線維芽細胞を含む多くの細胞型の間の化学的および物理的の両方の細胞間伝達は、神経線維腫疾患の進行に必須のようである。サイトカインおよび成長因子の転写を妨害するカルシニューリン阻害剤のような免疫修飾物質は、細胞間伝達を妨害する効率的手段である。
【００２１】
遺伝子置換のような特定の突然変異を補正する薬剤またはナンセンス突然変異の修復のためのゲンタマイシンも有用である。
【００２２】
本発明を、以下の好ましい実施形態により、より具体的に説明する。
【００２３】
１．皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者において、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を治療する方法であって、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）その薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助する医薬的に許容できる賦形剤とを含む組成物であって、好ましくは神経線維腫に悪影響を与えるのに十分な時間維持される組成物を、腫瘍の領域に局所投与することを含む方法。２．前記局所投与が、腫瘍の領域において皮膚の表面に前記組成物を局所適用することであり、前記賦形剤が、皮膚を通過させて薬剤を腫瘍まで運び、好ましくは薬剤を被験者の皮膚の上に維持することを補助する、１に記載の方法。３．前記局所投与が、前記組成物を腫瘍中に病巣内注入することである、１に記載の方法。４．前記薬剤が化学治療薬剤を含み、（１）その薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）その薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）その薬剤がＤＮＡをアルキル化または損傷する薬剤として作用する、（４）その薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、１〜３のいずれか一項に記載の方法。５．前記薬剤が硬化薬を含む、１〜３のいずれか一項に記載の方法。６．前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。７．前記薬剤が遺伝子転写を修飾する、１〜３のいずれか一項に記載の方法。８．前記薬剤が血管形成阻害薬である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。９．前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１０．前記薬剤が化学予防剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１１．前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤またはプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１２．前記薬剤が抗線溶剤である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１３．前記薬剤がアルキルリン脂質である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１４．前記薬剤が、アポトーシスまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１５．前記薬剤が核酸系治療薬である、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１６．前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１７．前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１８．前記薬剤が、アルキル化剤、例えば、チオテパまたはカルボプラチン；代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリンまたはその類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたはその類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、１〜３のいずれか一項に記載の方法。１９．前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、１〜１８に記載の方法。
【００２４】
神経線維腫の治療に有用な好ましい組成物も開示される。２０．被験者における皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療に有用な組成物であって、（ａ）その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤と、任意選択的に（ｂ）皮膚を通してその薬剤を腫瘍中に運び、好ましくは被験者の皮膚の上に薬剤を所定時間維持することを補助する医薬的に許容できる局所賦形剤を含む組成物。２１．前記薬剤が化学治療薬剤を含み、（１）その薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）その薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）その薬剤がＤＮＡをアルキル化または損傷する薬剤として作用する、（４）その薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、２０に記載の組成物。２２．前記薬剤が硬化薬を含む、２０に記載の組成物。２３．前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、２０に記載の組成物。２４．前記薬剤が遺伝子転写を修飾する、２０に記載の組成物。２５．前記薬剤が血管形成阻害薬である、２０に記載の組成物。２６．前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、２０に記載の組成物。２７．前記薬剤が化学予防剤である、２０に記載の組成物。２８．前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、２０に記載の組成物。２９．前記薬剤が抗線溶剤である、２０に記載の組成物。３０．前記薬剤がアルキルリン脂質である、２０に記載の組成物。３１．前記薬剤が、アポトーシスシグナルまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、２０に記載の組成物。３２．前記薬剤が核酸系治療薬である、２０に記載の組成物。３３．前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、２０に記載の組成物。３４．前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、２０に記載の組成物。３５．前記薬剤が、アルキル化剤、例えば、チオテパまたはカルボプラチン；代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリンまたはその類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたはその類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、２０に記載の組成物。３６．前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、２０〜３６に記載の組成物。３７．被験者における神経線維腫の治療のための薬学的組成物の調製のための、２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物の使用。３８．皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を局所的に治療するための２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬品を調製する方法であって、その神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの薬剤を、皮膚を通してその薬剤を腫瘍中に運び、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持することを補助する医薬的に許容できる局所賦形剤と組み合わせることを含む方法。
【００２５】
被験者への神経線維腫の悪影響を減弱させる薬剤として本発明において有用な特定の化合物の単独または組み合わせの例としては、チオテパ、ドキシサイクリン、ブレオマイシン、ジクロフェナク、カルボプラチン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メベンダゾール、ハルフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、ミルテフォシン等が挙げられる。
【００２６】
さらに、被験者への神経線維腫の悪影響を減弱させるために、医薬的に許容できる局所賦形剤を用いてまたは用いずに、単一の薬剤活性剤としてまたは一以上の薬剤活性剤の組み合わせとして組成物に含まれる薬剤として、以下の薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】
１．化学治療薬、例えば、細胞毒素、抗血管新生または抗増殖剤、例えば：
アルキル化剤、例えば、チオテパ
【化１】
トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、カンプトテシン
【化２】
カルボプラチン
【化３】
代謝拮抗物質、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）
【化４】
トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン
【化５】
微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール
【化６】
代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、クラドリビン
【化７】
トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ＸＫ４６９（２−（４−（（７−クロロ−２−キノキサリニル）オキシ）−フェノキシ）プロピオン酸）
【化８】
ヌクレオシド類似体、例えば、サンギバマイシン
【化９】
ヌクレオシド類似体、例えば、ツベルシジン
【化１０】
【００２８】
２．硬化剤、例えば：
ブレオマイシン（抗新生物抗生物質）
【化１１】
テトラサイクリン類似体または抗生物質、例えば、ドキシサイクリン
【化１２】
【００２９】
３．免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫刺激剤または免疫抑制剤、例えば：
免疫刺激剤、例えば、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）（免疫反応修飾物質またはＴＬＲ７／８リガンドまたはアゴニスト）
【化１３】
免疫抑制剤、例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）
【化１４】
【００３０】
４．抗炎症薬または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク
【化１５】
セレコキシブ（Ｃｏｘ−１およびＣｏｘ−２阻害剤、または抗炎症薬）
【化１６】
【００３１】
５．遺伝子転写を修飾する薬剤：例えば、ＨＤＡＣ（ヒストン脱アセチル化酵素）阻害剤、例えば、
ＨＤＡＣ阻害剤の脂肪酸類、例えば、バルプロ酸
【化１７】
ＨＤＡＣ阻害剤のヒドロキサム酸類、例えば、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）
【化１８】
カルバマゼピン（以下）およびその誘導体、例えば、カルバマゼピンエポキシド
【化１９】
ＨＤＡＣ阻害剤の環式テトラペプチド類、例えば、デプシペプチドＦＫ２２８（ＦＲ９０１２２８）
【化２０】
【００３２】
６．血管新生阻害剤、例えば、
真菌Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓにより分泌されるフマギリン、およびその類似体、例えば、以下に示すＴＮＰ−４７０（［Ｏ−（クロロアセチルカルバモイル）フマギロール］：
【化２１】
サリドマイド（免疫修飾剤でもある）
【化２２】
【００３３】
７．低分子ＧＴＰａｓｅの修飾に必要な細胞プロセスを阻害する薬剤：
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬［例えば、Ｒ１１５７７７，（Ｂ）−６−［アミノ（４−クロロフェニル）（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５イル）メチル］−４−（３−クロロフェニル）−１−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン］
【化２３】
イソプレニルシステイントランスフェラーゼ阻害剤［例えば、シスメスニル］
【化２４】
ＨＭＧ−ＣｏＡ阻害剤（スタチン、例えば、ロバスタチン）
【化２５】
ビスホスホネート（例えば、アレンドロネート（メバロネート経路の阻害剤））
【化２６】
【００３４】
８．化学予防薬、例えば：
合成レチノイド（フェンレチニド）
【化２７】
レチノイン酸［３，７−ジメチル−９−（２，６，６−トリメチル−１−シクロヘキセニル）−ノナ−２，４，６，８−テトラエン酸］および類似体
【化２８】
クルクミンおよび誘導体
【化２９】
ＥＧＣＧ，（−）−エピガロカテキン・ガレート（以下参照）および類似体
【化３０】
Ｉ３Ｃ（インドール−３−カルビノール）
【化３１】
シクロパミン
【化３２】
メチルグリオキサール
【化３３】
【００３５】
９．キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば：
ＭＥＫ阻害剤、例えば、Ｕ０１２６［１，４−ジアミノ−２，３−ジシアノ−１，４−ビス（２−アミノフェニルチオ）−ブタジエン］
【化３４】
Ｐ１３Ｋ阻害剤、例えば、Ｌｙ２９４００２［２−（４−モルフォリニル）−８−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン］
【化３５】
ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２阻害剤、例えば、４−（４−ベンジルオキシアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン
【化３６】
ＡＧ１４７８（ＥＧＦＲ阻害剤）、４−（３−クロロアニリノ）−６，７−ジメトキシキナゾリン
【化３７】
複数のチロシンキナーゼの阻害剤、例えば、ＰＤＧＦＲ阻害剤、例えば、ＫＮ２９４１（４−（６，７−ジメトキシ−４−キナゾリニル）−Ｎ−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−１−ピペラジンチオカルボキサミド）
【化３８】
複数のキナーゼの阻害剤、例えば、ＳＵ１１６５２、５−［（Ｚ）−（５−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化３９】
複数のキナーゼの阻害剤、例えば、ＳＵ１１２４８（商標名はＳｕｔｅｎｔ）、５−［（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル］−Ｎ−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
【化４０】
複数のキナーゼの阻害剤、例えば、ＶＥＧＦＲ２およびＲａｆキナーゼ、例えば、Ｂａｙ４３−９００６（ＮＥＸＡＶＡＲ、またはソラフェニブ）、４−（４−｛３−［４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］ウレイド｝フェノキシ）−Ｎ２−メチルピリジン−２−カルボキサミド
【化４１】
ｍＴＯＲ阻害剤、例えば、ラパマイシン（免疫抑制剤でもある、以下参照）およびプロドラッグまたは類似体
【化４２】
Ｒｈｏキナーゼ阻害剤、例えば、ファスジル（Ｆａｓｕｄｉｌ）、［１−（５−イソキノリンスルホニル）ホモピペラジン］
【化４３】
【００３６】
１０．血管新生阻害剤でもある薬剤を含むことができる新規抗線溶剤、例えば、
ハロフギノン臭化水素酸塩［（＋／−）−トランス−７−ブロモ−６−クロロ−３−［３−（３−ヒドロキシ−２−ピペリジニル）−２−オキソプロピル］−４（３Ｈ）−キナゾリノン臭化水素酸塩］
【化４４】
ピルフェニドン（５−メチル−Ｎ−フェニル−２−１Ｈ−ピリドン−ｄ５）
【化４５】
【００３７】
１１．アルキルリン脂質、例えば：
Ａ．ミルテフォシン（ＨｅＰＣ）
Ｂ．エデルフォシン（Ｅｔ−１８−ＯＣＨ3）
Ｃ．ペリフォシン（Ｄ２１２６６）
【化４６】
【００３８】
１２．ＨＳＰ９０阻害剤（熱ショックタンパク質阻害剤）
ゲルダナマイシン類似体／誘導体、例えば、１７−ＡＡＧおよびその誘導体、１７−ＡＡＧ、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシン
【化４７】
ラジシコールおよび類似体
【化４８】
ヒペリシン
【化４９】
【００３９】
１３．抗真菌剤：
クロトリマゾールおよび類似体
【化５０】
【００４０】
１４．突然変異遺伝子の機能を回復する薬剤、例えば、ナンセンス突然変異を抑制する薬剤、例えば：
ゲンタマイシン
【化５１】
【００４１】
本発明の組成物の調製において、（１）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，１７th，１８th ｏｒ １９th Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＩＳＢＮ：０−９１２７３４−０４．３（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ」とも呼ぶ）、（２）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ−Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｕｌｔｏｎ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ；（３）Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（７th ｏｒ ８th Ｅｄ）ｂｙ Ｈａｌｌ ａｎｄ Ｒｅｉｓｓ，Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ；等の教示を参考にでき、それらの全てを参照することにより本明細書に組み込む。ナノ粒子またはリポソームの配達については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈａｐｐｌ．ｃｏｍ／ｓｐｅｃｉａｌ／ｍａｒ０１３．ｈｔｍおよびｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｏｌｌａｂｏ．ｃｏｍ／ｌｉｐｏｓｏｍｅ．ｈｔｍにおいてさらなる情報を得ることができる。デンドリマー技術に関する情報は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉｎｇｅｒ．ｃｏｍ／ｄｅｄｒｉｍｅｒ／ｏｎｅ．ｈｔｍに見られる。
【実施例】
【００４２】
本発明において神経線維腫を処理するのに有用な薬剤は、本明細書に記載の幾つかの方法により選択することができる。例えば、本明細書に記載の種々の化合物／薬剤並びに選択し得る他の薬剤を、ＮＦ１関連細胞系のパネルの細胞増殖を阻害する性能について細胞ベースのアッセイにおいて試験する、皮膚神経線維腫移植アッセイへの効果を決めるために試験する、および、皮膚神経線維腫のための異種移植片モデルへの効果を決めるために試験する。
【００４３】
Ｉ．インビトロアッセイ
１）細胞増殖アッセイ
複数の生理学的に関連する細胞または細胞系を用いて、細胞増殖アッセイにおける化合物の性能を測定した。これらの細胞は、（１）ＮＦ１欠損ヒト悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）細胞、（２）Ｎｆ１-/-マウス胚シュワン細胞、および（３）Ｎｆ１およびｐ５３欠損マウス細胞が含まれる。マウスシュワン細胞を、ラミニンを被覆したプレート上で増殖させ、ダルベッコ修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）／ハムＦ１２培地（Ｆ１２）（ＤＭＥＭとＦ１２培地との１：１ブレンドであり、組換えヘレグリン−β１（１０ｎｇ／ｍｌ）、ホルスコリン（２μＭ）およびＮ２サプリメント（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｃａｔ＃１７５０２−０４８）を補足した）中で培養する。全ての他の細胞を、１０％胎児ウシ血清（ＦＢＳ）を加えたＤＭＥＭ中で増殖させる。以下の出版物は、細胞増殖アッセイにおいて用いられる細胞系の調製を開示している。
【００４４】
Ｂａｓｕ，Ｔ．Ｎ．，Ｇｕｔｍａｎｎ，Ｄ．Ｈ．，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｇｌｏｖｅｒ，Ｔ．Ｗ．，Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｆ．Ｓ．ａｎｄ Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｊ．（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ ３６５，７１３−７１５
ＤｅＣｌｕｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｐａｐａｇｅｏｒｇｅ，Ａ．Ｇ．，Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｊ．Ａ．，Ｄｉｅｈｌ，Ｓ．Ｒ．，Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．，Ｖａｓｓ，Ｗ．Ｃ．ａｎｄ Ｌｏｗｙ，Ｄ．Ｒ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６９，２６５−２７３
Ｄｅｃｌｕｅ，Ｊ．Ｅ．，Ｈｅｆｆｅｌｆｉｎｇｅｒ，Ｓ．，Ｂｅｎｖｅｎｕｔｏ，Ｇ．，Ｌｉｎｇ，Ｂ．，Ｌｉ，Ｓ．，Ｒｕｉ，Ｗ．，Ｖａｓｓ，Ｗ．Ｃ．，Ｖｉｓｋｏｃｈｉｌ，Ｄ．ａｎｄ Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．（２０００）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０５，１２３３−１２４１
Ｖｏｇｅｌ，Ｋ．Ｓ．，Ｋｌｅｓｓｅ，Ｌ．Ｊ．，Ｖｅｌａｓｃｏ−Ｍｉｇｕｅｌ，Ｓ．，Ｍｅｙｅｒｓ，Ｋ．，Ｒｕｓｈｉｎｇ，Ｅ．Ｊ．ａｎｄ Ｐａｒａｄａ，Ｌ．Ｆ．（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６，２１７６−２１７９
Ｍａｎｅｎｔ，Ｊ．，Ｏｇｕｉｅｖｅｔｓｋａｉａ，Ｋ．，Ｂａｙｅｒ，Ｊ．，Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．ａｎｄ Ｇｉｏｖａｎｎｉｎｉ，Ｍ．（２００３）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２３，１６７−１７３
Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｔ．Ｋ．，Ｋｌｅｉｔｍａｎ，Ｎ．ａｎｄ Ｂｕｎｇｅ，Ｒ．Ｐ．（１９９１）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ １１，２４３３−２４４２
Ｖｅｒｄｕ，Ｅ．，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｆ．Ｊ．，Ｇｕｄｉｎｏ−Ｃａｂｒｅｒａ，Ｇ．，Ｎｉｅｔｏ−Ｓａｍｐｅｄｒｏ，Ｍ．ａｎｄ Ｎａｖａｒｒｏ，Ｘ．（２０００）Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｄｈｏｄｓ ９９，１１１−１１７
Ｋｉｍ，Ｈ．Ａ．，Ｌｉｎｇ，Ｂ．ａｎｄ Ｒａｔｎｅｒ，Ｎ．（１９９７）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １７，８６２−８７２
Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｇｈｏｓｈ，Ｐ．，Ｃｈａｒｎａｙ，Ｐ．，Ｂｕｒｎｓ，Ｄ．Ｋ．ａｎｄ Ｐａｒａｄａ，Ｌ．Ｆ．（２００２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６，９２０−９２２
Ｚｈｕ，Ｙ．，Ｒｏｍｅｒｏ，Ｍ．Ｌ．，Ｇｈｏｓｈ，Ｐ．，Ｙｅ，Ｚ．，Ｃｈａｒｎａｙ，Ｐ．，Ｒｕｓｈｉｎｇ，Ｅ．Ｊ．，Ｍａｒｔｈ，Ｊ．Ｄ．ａｎｄ Ｐａｒａｄａ，Ｌ．Ｆ．（２００１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １５，８５９−８７６
Ｍｕｉｒ，Ｄ．，Ｎｅｕｂａｕｅｒ，Ｄ．，Ｌｉｍ，Ｉ．Ｔ．，Ｙａｃｈｎｉｓ，Ａ．Ｔ．ａｎｄ Ｗａｌｌａｃｅ，Ｍ．Ｒ（２００１）Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １５８，５０１−５１３
Ｌｉ，Ｙ．，Ｒａｏ，Ｐ．Ｋ．，Ｗｅｎ，Ｒ．，Ｓｏｎｇ，Ｙ．，Ｍｕｉｒ，Ｄ．，Ｗａｌｌａｃｅ，Ｐ．，ｖａｎ Ｈｏｒｎｅ，Ｓ．Ｊ．，Ｔｅｎｎｅｋｏｏｎ，Ｇ．Ｉ．ａｎｄ Ｋａｄｅｓｃｈ，Ｔ．（２００４）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ２３，１１４６−１１５２
【００４５】
細胞増殖アッセイを行うために、３日間で約７０％のコンフルエンスに達し得る適当な数の細胞（例えば、ヒトＭＰＮＳＴ細胞およびマウスＮｆ１／ｐ５３欠損細胞について３０００〜６０００個の細胞／ウェル、マウス胚シュワン細胞について８０００〜１００００個の細胞／ウェル）を、９６ウェルプレートで培養した。種々の濃度の試験すべき各化合物／薬剤を、増殖培地に加え、次に、細胞を３日間培養した。インキュベーション完了時に、培地を穏やかに除去し、各ウェルにＡＴＰｌｉｔｅ溶液（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｃａｔ＃６０１６９４１）１００μｌを加えた。ＡＴＰｌｉｔｅ溶液および細胞中のＡＴＰの反応から生じる発光を検出することにより、生存可能な細胞を測定した。種々の化合物／薬剤が、幾つかのＮＦ１関連細胞系の細胞増殖を阻害する性能を決定した。神経線維腫の局所治療用の優れた候補として有用な薬剤／化合物のための選択基準は、１０μＭ以下のＩＣ５０（ＩＣ５０は、細胞増殖を５０％阻害するのに必要な阻害剤の濃度として定義される）を有する任意の化合物の選択に基づく。そのような基準を満たす化合物は、アルキル化剤（例えば、チオテパ）、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、サンギバマイシン、ツベルシジン、トリシリビン、クラドリビン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、カンプトテシン、ポドフィロトキシン、ＸＫ４６９）、微小管阻害剤（例えば、メベンダゾール）、硬化剤（例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリンおよび類似体）、遺伝子転写を修飾する薬剤（トリコスタチンＡのようなＨＤＡＣ阻害剤）、化学予防剤（例えば、フェンレチニド、レチノイン酸および類似体、クルクミンおよび誘導体、ＥＧＣＧおよび類似体、およびメチルグリオキサールのようなレチノイド）、キナーゼ阻害剤（例えば、Ｕ０１２６、ＬＹ２９４００２、ＥＧＦＲ／ＥｒｂＢ２阻害剤、ＫＮ２９４１、ＳＵ１１６５２、Ｂａｙ４３−９００６、ラパマイシンおよびそれらの類似体）、アルキルリン脂質（例えば、ミルテフォシン）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールおよび類似体、ヒペリシンのようなゲルダナマイシン誘導体）、抗真菌剤（例えば、クロトリマゾール）、ナンセンス突然変異を抑制する薬剤（例えば、ゲンタマイシン）である。さらに、化合物が、細胞非自律的な（例えば、免疫調節または抗血管新生）作用の機構を有すると考えられる、または未知である場合、これらは、陽性であると記録されないが、移植モデル、異種移植モデル、および可能ならＮＦ１患者を用いる証拠−原理臨床的試行（ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ）において試験される。
【００４６】
２） 移植片アッセイ
化合物／薬剤の効果を、以下のようにエクスビボ腫瘍移植片モデルにおいて試験した。新しいヒト皮膚神経線維腫を８つの小さな断片に切り出し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２、１０％ＦＢＳ、ヘレグリンおよびホルスコリンを含む培地を有する標準的細胞培養プレート上で培養した。断片を治療群と対照群とに分けた。異なる投与量の化合物を、１日目に培地に加えた。陰性対照群では化合物を加えなかった。全ての腫瘍断片を３日目に集め、ホルマリン固定およびパラフィン包埋により組織学のために加工した。組織部分を切断し、組織学的分析のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。対になった移植片サンプルの組織学的分析を、盲検的に行った。サンプルを「−」から「＋＋＋」で記録するために、３つの組織学的パラメーターを用いた。１）全面的組織一体性；処理サンプルの細胞充実性を陰性対照サンプルと比べることにより組織一体性を評価した。低細胞充実性領域は、対照サンプル上の同様の領域よりも３０％以上核が少ないと定義した。ＭａｇｎａＦｉｒｅデジタルカメラ（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、明視野顕微鏡で４０倍での各サンプルの写真を撮り、コンピューターに保存した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて写真中の低細胞充実性領域を測定し、長さ×幅として計算し、次に、サンプルの合計面積に対する百分率として表した。全組織一体性を、０〜２＋のスコアを用いて記録した。簡単に説明すると、優れた組織一体性は０と記録し（＜５％）、１＋は中間的組織一体性（５〜２５％）を示し、２＋は低組織一体性（＞２５％）を示す。２＋の場合のみが、最終的合計スコアについて陽性「＋」であると見なした。２）細胞死−スライドを明視野顕微鏡により評価した。視野当たり少なくとも１００個の細胞を数えた。細胞死は、０〜３＋のスコアを用いて半定量的に記録した。集中したまたは断片的な核の存在は０と記録し、１＋は、検出可能な細胞死の最低水準（＜１０％）を示し、２＋は中程度の細胞死（１０〜２０％）であり、３＋は高い細胞死（＞３０％）である。全ての２＋および３＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした；および３）血管系への効果−スライドを明視野顕微鏡により評価した。陰性対照サンプルにおける血管系と比較することにより、処理サンプル中での血管系への効果を決めた。少なくとも、サンプル当たり２０個の血管系を数えた。血管系への効果は、０〜３＋のスコアを用いて半定量的に記録した。簡単に説明すると、損傷血管系の非存在または最低水準は０（＜５％）と記録し、１＋は、ある程度の損傷血管（５〜２５％）を示し、２＋は高い（＞２５％）である。全ての１＋および２＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした。最終的組織学的スコアは、「−」〜「＋＋＋」と表わされる前記３つのパラメーターのスコアの合計であった。「＋」以上の組織学的スコアの任意の化合物は、神経線維腫の局所治療のための潜在的に優れた候補である。そのような基準を満たす化合物は、アルキル化剤（例えば、チオテパ、カルボプラチン）、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、サンギバマイシン、ツベルシジン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ポドフィロトキシン）、微小管阻害剤（例えば、メベンダゾール）、硬化剤（例えば、ブレオマイシン）、抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）（例えば、ジクロフェナク）、遺伝子転写を修飾する薬剤（トリコスタチンＡ、バルプロ酸のようなＨＤＡＣ阻害剤）、化学予防剤（例えば、フェンレチニドのようなレチノイド）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールおよび類似体のようなゲルダナマイシン誘導体）である。
【００４７】
３）異種移植片アッセイ
化合物の効果を、以下のように、マウス皮膚神経線維腫（ＤＮＦ）異種移植片モデルにおける腫瘍量減少研究において試験した。５週齢と６週齢との間で重さが約２０ｇである雌ＳＣＩＤマウスを、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）から得た。動物の皮下に、新しいヒトＤＮＦの断片を移植した。インキュベーションの３日後、動物を処理群と対照群とにランダムに割り当てた。各群は、６匹の腫瘍にかかっているマウスを含んでいた。各マウスは、耳にタグを付け、実験の間中個々に追跡した。投与は、ランダム化後、１日目に開始した。化合物を、１週間に２回のスケジュールで４週間、病巣内投与した。化合物＋ビヒクルを、異なる投与量で体積５０μｌで投与した。ビヒクル単独を、陰性対照として作用させるために投与した。マウスを１週間に２回計測し、１日目から開始して腫瘍測定をキャリパーを用いて１週間に２回行った。腫瘍体積は、標準式（Ｗ2×Ｌ）／２（Ｌは長さであり、およびＷは幅である）により計算した（Ｂｌａｓｋｏｖｉｃｈ ＭＡ，Ｌｉｎ Ｑ，Ｄｅｌａｒｕｅ ＦＬ，Ｓｕｎ Ｊ，Ｐａｒｋ ＨＳ，Ｃｏｐｐｏｌａ Ｄ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ ＡＤ，Ｓｅｂｔｉ ＳＭ（２０００），Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ＧＦＢ−１１１，ａ ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｗｉｔｈ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １８：１０６５−１０７０）。屠殺後インキュベーション前に、腫瘍断片の重量を計った。最初の腫瘍重量の百分率として、相違を表した。収穫した腫瘍を、ホルマリン固定およびパラフィン包埋により組織学のために加工した。組織部分を切断し、組織学的分析のためにヘマトキシリン−エオシンで染色した。化合物の異種移植片に対する効果を、１）または２）のいずれかにより決めた。１）腫瘍重量測定−処理群と対照群との両方における処理前後の腫瘍重量の相違を、スチューデントｔ検定により分析した。化合物の特定の投与量の結果は、腫瘍重量の相違が統計的有意（ｐ＜０．０５）である場合、「＋」と見なされる。２）組織学的分析−サンプルを記録するために３つの組織学的パラメーターを用いた。Ａ）組織壊死−ＭａｇｎａＦｉｒｅデジタルカメラ（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、明視野顕微鏡で４０倍での各サンプルの写真を撮り、コンピューターに保存した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて写真中の壊死領域を測定し、長さ×幅として計算し、次に、サンプルの合計面積に対する百分率として表した。全組織壊死を、０〜２＋のスコアを用いて記録した。簡単に説明すると、壊死の非存在は０と記録し（＜５％）、１＋は中間的組織壊死（５〜２５％）を示し、２＋は高い組織壊死（＞２５％）を示す。２＋の場合のみが、最終的合計スコアについて陽性「＋」であると見なした。Ｂ）組織細胞充実性−処理サンプル中の低細胞充実性領域は、対照サンプル上の同様の領域よりも３０％以上核が少ないと定義した。ＭａｇｎａＦｉｒｅデジタルカメラ（Ｏｐｔｒｏｎｉｃｓ，ＵＳＡ）を用いて、明視野顕微鏡で４０倍での各サンプルの写真を撮り、コンピューターに保存した。Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて写真中の低細胞充実性領域を測定し、長さ×幅として計算し、次に、サンプルの合計面積に対する百分率として表した。全組織一体性を、０〜２＋のスコアを用いて記録した。簡単に説明すると、優れた組織一体性は０と記録し（＜５％）、１＋は中間的組織一体性（５〜２５％）を示し、２＋は低組織一体性（＞２５％）を示す。全ての１＋および２＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした。Ｃ）炎症性細胞浸潤−スライドを明視野顕微鏡により評価した。視野当たり少なくとも１００個の細胞を数え、合計細胞１００当たりの炎症性細胞の数を、各サンプルについて百分率として計算した。炎症性細胞の浸潤は、処理サンプルの百分率と対照サンプルの百分率との相違により決め、０〜３＋のスコアを用いて半定量的に記録した。簡単に説明すると、炎症性細胞浸潤の相違の非存在または非常に低い相違は０と記録し（＜５％）、１＋は炎症性細胞浸潤の中間的水準（５〜２５％）を示し、２＋は炎症性細胞浸潤の高水準（＞２５％）を示す。全ての１＋および２＋の場合を、最終的合計スコアについて陽性「＋」として見なした。最終的組織学的スコアは、「−」〜「＋＋＋」と表わされる前記３つのパラメーターのスコアの合計とした。腫瘍重量測定における「＋」または組織学的スコアが「＋」以上である任意の化合物は、神経線維腫の局所治療ための潜在的に優れた候補である。そのような基準を満たす化合物は、アルキル化剤（例えば、チオテパ、カルボプラチン）、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体（例えば、５−フルオロウラシル、サンギバマイシン、ツベルシジン）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、ポドフィロトキシン）、微小管阻害剤（例えば、メベンダゾール）、硬化剤（例えば、ブレオマイシン、ドキシサイクリン）、抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）（例えば、ジクロフェナク）、遺伝子転写を修飾する薬剤（トリコスタチンＡ、バルプロ酸のようなＨＤＡＣ阻害剤）、化学予防剤（例えば、フェンレチニドのようなレチノイド）、アルキルリン脂質（例えば、ミルテフォシン）、ＨＳＰ９０阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールおよび類似体のようなゲルダナマイシン誘導体）である。
【００４８】
神経線維腫を治療するために本発明において有用な薬剤を選択するための前記アッセイの一以上を用いて、前記の化合物／薬剤を試験した。アッセイは好ましくは、特別の順番で行われ、「陽性の結果」が得られた場合、次のアッセイが行われたりする。例えば、薬剤が、細胞増殖アッセイで試験され、先に開示された基準により陽性である場合、この薬剤を移植アッセイにおいて試験し、前述の基準に従って陽性である場合、この薬剤を異種移植片アッセイにおいて試験する。特定の薬剤または化合物について３つのアッセイの全てが基準に基づき陽性の結果である場合、この薬剤は、神経線維腫、具体的にはＮＦ１の良好な治療用の優れた候補となることが予想される。さらに、化合物が、細胞非自律的な（例えば、免疫調節または抗血管新生）作用の機構を有すると考えられる、または未知である場合、これらは、異種移植モデル、または可能ならＮＦ１患者を用いる証拠−原理臨床的試行（ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ）において陽性の結果が得られるなら、神経線維腫の良好な治療用の優れた候補であると予想される。
【００４９】
ＩＩ．インビボ研究
＜薬剤または化合物を用いる神経線維腫の局所治療のための一般的研究デザイン＞
Ａ．病巣内投与
研究は、４連続週間に渡って３つの標的皮膚神経線維腫に週に１回与えられる病巣内投与薬剤の効果の証拠−原理、見込み、安全性および効果研究であった。６人の被験者を登録した。全ての被験者は、ＮＦ１と診断され、背部を含む少なくとも６個の０．５〜１．５ｃｍの皮膚神経線維腫を有していた。全ての被験者は、１８歳から６５歳の年齢である。全ての被験者は、そのほかの点では、健康状態が良かった、またはプライマリーケア医師により適当に管理される安定な付随的医学的症状を有していた。登録された被験者は、ＮＦ１の特徴以外の、実験室的および身体検査の両方について臨床的に意義のある異常は示さなかった。スクリーニングおよび登録後、全ての被験者は週に１回、所定体積（病巣の寸法に基づく）の病巣内薬剤を、最大寸法を含んで直径が０．５〜１．５ｃｍである３つの標的皮膚神経線維腫中に受け入れた。各標的の皮膚神経線維腫は寸法が異なり、一つは直径が０．５〜０．８ｃｍであり、第２のものは直径が０．８１〜１．２ｃｍであり、第３のものは直径が１．２１〜１．５ｃｍであった。付随的に、同じ寸法範囲の胴体および／または付属物の上に見られる３つの対照皮膚神経線維腫は、滅菌生理食塩水を受け入れた。注入前の全ての病巣を、リドカイン１％およびエピネフリン１：１００，０００で局所的に麻酔した。研究期間中、被験者は、６つの病巣（薬剤を受け入れる３つの標的病巣、生理食塩水を受け入れる３つの対照病巣）において４週間の病巣内注入を受け、研究薬剤を受け入れている間の毎週追跡し、最後の投与から３週間後に投与した。訪問毎に、被験者は、身体検査を受け、悪影響および付随的薬剤投与を記録し、標的および対照病巣の両方を測定し撮影した。検査には、２つの評価された病巣の正確に測定された寸法（２軸において）が含まれる。写真は、表わされた被験者の特徴を確認することなく、標的病巣と対照病巣の両方の標準化デジタル画像（定規を伴う）を含んでいた。各被験者について、写真は、一致する焦点距離、明暗、および露出角度を訪問間で持ち越した。各訪問において、各被験者を、その投与中または訪問間において研究薬剤を受け入れることによる、疼痛、そう痒、刺激、脱色、潰瘍または、ベースラインに存在しない局所的または標的および対照病巣から離れている任意の他の新規表示または兆候を含む潜在的副作用について尋ねた。
【００５０】
ドキシサイクリンが研究薬剤である局所注入研究の一つにおいて、ドキシサイクリンが注入された腫瘍の８９％が、皮膚神経線維腫の部分的または完全な除去を示したが、対照の全てが変化を示さなかった。同様に、研究薬剤としてジクロフェナクを用いるもう一つの研究において、ジクロフェナクを注入された腫瘍の４８％が、皮膚神経線維腫の部分的または完全な除去を示したが、対照の全てが変化を示さなかった。
【００５１】
Ｂ．局所投与
神経線維腫を有する被験者を、Ａに記載のように選択し、同様の対照を、同じ被験者において神経線維腫を治療せずに用いる。投与の別の方法には、５％ゲルと組み合わせて、本明細書に記載の薬剤の一以上を含む組成物を、十分な量で、１日１回２１日間、神経線維腫を覆っている皮膚に投与して腫瘍を被覆することによる局所投与が含まれる。さらに、局所投与は、薬剤を含む組成物で装置の微細針が被覆されている皮膚剥離装置を、１日１回７日間、腫瘍を覆っている皮膚に適用することにより成される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者における、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を治療する方法であって、組成物を腫瘍の領域に局所投与することを含み、前記組成物は、（ａ）前記神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの非発癌性の薬剤と、任意選択的に（ｂ）腫瘍中に前記薬剤を運ぶことを補助する医薬的に許容できる賦形剤とを含み、好ましくは前記組成物は神経線維腫に悪影響を与えるのに十分な時間維持されることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記局所投与が、腫瘍の領域における皮膚の表面に前記組成物を局所適用することであり、前記賦形剤が、皮膚を通過させて薬剤を腫瘍まで運ぶことを補助し、好ましくは薬剤を被験者の皮膚の上に維持する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記局所投与が、前記組成物を腫瘍中に病巣内注入することである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記薬剤が化学治療薬剤を含み、（１）前記薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）前記薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）前記薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記薬剤が硬化薬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記薬剤が遺伝子転写を調節する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記薬剤が血管形成阻害薬である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記薬剤が化学予防剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤またはプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記薬剤が抗線溶剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記薬剤がアルキルリン脂質である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤が、アポトーシスシグナルまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記薬剤が核酸系治療薬である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記薬剤が、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ドキシサイクリンまたはその類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたはその類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、請求項１〜１８に記載の方法。
【請求項２０】
被験者における皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療に有用な組成物であって、（ａ）前記神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの非発癌性の薬剤と、任意選択的に、（ｂ）皮膚を通して前記薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に前記薬剤を所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤とを含む組成物。
【請求項２１】
前記薬剤が化学治療薬剤であり、（１）前記薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）前記薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）前記薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記薬剤が硬化薬を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記薬剤が遺伝子転写を修飾する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
前記薬剤が血管形成阻害薬である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記薬剤が化学予防剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記薬剤が抗線溶剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３０】
前記薬剤がアルキルリン脂質である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３１】
前記薬剤が、アポトーシスシグナルまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記薬剤が核酸系治療薬である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３４】
前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３５】
前記薬剤が、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ドキシサイクリンまたは前記類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたは前記類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
被験者における神経線維腫の治療のための薬学的組成物の調製のための、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３８】
皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を局所的に治療するための請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬品を調製する方法であって、前記神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの非発癌性の薬剤を、皮膚を通して前記薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤と組み合わせることを含む、方法。
【請求項１】
皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療を必要としている被検者における、皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を治療する方法であって、組成物を腫瘍の領域に局所投与することを含み、前記組成物は、（ａ）前記神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの非発癌性の薬剤と、任意選択的に（ｂ）腫瘍中に前記薬剤を運ぶことを補助する医薬的に許容できる賦形剤とを含み、好ましくは前記組成物は神経線維腫に悪影響を与えるのに十分な時間維持されることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記局所投与が、腫瘍の領域における皮膚の表面に前記組成物を局所適用することであり、前記賦形剤が、皮膚を通過させて薬剤を腫瘍まで運ぶことを補助し、好ましくは薬剤を被験者の皮膚の上に維持する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記局所投与が、前記組成物を腫瘍中に病巣内注入することである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記薬剤が化学治療薬剤を含み、（１）前記薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）前記薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）前記薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記薬剤が硬化薬を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記薬剤が遺伝子転写を調節する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記薬剤が血管形成阻害薬である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記薬剤が化学予防剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤またはプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記薬剤が抗線溶剤である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記薬剤がアルキルリン脂質である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記薬剤が、アポトーシスシグナルまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記薬剤が核酸系治療薬である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記薬剤が、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ドキシサイクリンまたはその類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたはその類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、請求項１〜１８に記載の方法。
【請求項２０】
被験者における皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫の治療に有用な組成物であって、（ａ）前記神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの非発癌性の薬剤と、任意選択的に、（ｂ）皮膚を通して前記薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に前記薬剤を所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤とを含む組成物。
【請求項２１】
前記薬剤が化学治療薬剤であり、（１）前記薬剤がトポイソメラーゼの阻害によりＤＮＡ複製を妨害する、（２）前記薬剤が微小管および／または紡錘体を破壊する、（３）前記薬剤がヌクレオチド合成を妨害する、またはそれらの組み合わせである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記薬剤が硬化薬を含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２３】
前記薬剤が免疫修飾物質、免疫調節物質、免疫抑制剤、免疫刺激剤または非ステロイド性抗炎症剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記薬剤が遺伝子転写を修飾する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２５】
前記薬剤が血管形成阻害薬である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２６】
前記薬剤が低分子量ＧＴＰａｓｅの構造、機能、局在化または翻訳後修飾を変化させる、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２７】
前記薬剤が化学予防剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２８】
前記薬剤が、タンパク質キナーゼ阻害剤、脂質キナーゼ阻害剤、熱ショックタンパク質阻害剤、タンパク質シャペロン阻害剤、ホスファターゼ阻害剤およびプロテアーゼ阻害剤からなる群より選択される阻害剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２９】
前記薬剤が抗線溶剤である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３０】
前記薬剤がアルキルリン脂質である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３１】
前記薬剤が、アポトーシスシグナルまたは抗アポトーシスシグナルを標的としている、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記薬剤が核酸系治療薬である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３３】
前記薬剤が、突然変異遺伝子の機能を回復する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３４】
前記薬剤が、皮膚過形成を阻害する、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３５】
前記薬剤が、代謝拮抗物質またはヌクレオシド類似体、例えば、５−フルオロウラシル、トリシリビン、サンギバマイシンまたはツベルシジン；トポイソメラーゼ阻害剤、例えば、ポドフィロトキシン；微小管阻害剤、例えば、メベンダゾール；硬化剤、例えば、ドキシサイクリンまたは前記類似体；抗炎症剤または非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、例えば、ジクロフェナク；遺伝子転写を修飾する薬剤、例えば、トリコスタチンＡまたはバルプロ酸を含むＨＤＡＣ阻害剤；化学予防剤、例えば、フェンレチニドのようなレチノイド；アルキルリン脂質、例えば、ミルテフォシン；ＨＳＰ９０阻害剤、例えば、１７−ＡＡＧ、ラジシコールまたは前記類似体のようなゲルダナマイシン誘導体、；ハロフギノン、ゲンタマイシン、ラパマイシン、またはそれらの組み合わせである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項３６】
前記賦形剤が皮膚浸透剤を含む、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３７】
被験者における神経線維腫の治療のための薬学的組成物の調製のための、請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項３８】
皮膚神経線維腫、皮下神経線維腫または表在叢状神経線維腫を局所的に治療するための請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の組成物を含む医薬品を調製する方法であって、前記神経線維腫の被験者に対する悪影響を減弱させるための少なくとも一つの非発癌性の薬剤を、皮膚を通して前記薬剤を腫瘍中に運ぶことを補助し、好ましくは被験者の皮膚の上に所定時間維持する医薬的に許容できる局所賦形剤と組み合わせることを含む、方法。
【公表番号】特表２００８−５２８６９２（Ｐ２００８−５２８６９２Ａ）
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５５４１９０（Ｐ２００７−５５４１９０）
【出願日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００３５８８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８３９７９
【国際公開日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【出願人】（５０７２６０５５２）ネクスジェニクス・ファーマシューティカルズ，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月２日（２００６．２．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００３５８８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０８３９７９
【国際公開日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【出願人】（５０７２６０５５２）ネクスジェニクス・ファーマシューティカルズ，リミテッド・ライアビリティ・カンパニー (1)
【Ｆターム（参考）】
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