本発明は全体として、好ましい形態のIgGタンパク質の濃縮または回収の向上をもたらす方法に関する。より詳細には、本発明は、こうした組換えIgGタンパク質の調製物を酸化還元カップリング試薬、および場合によりカオトロピック剤で処理することに関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類細胞によって組換え生産されたIgG抗体の精製調製物を、約5〜約11のpHで、酸化還元カップリング試薬と接触させること；および
場合によりさらに、前記酸化還元カップリング試薬との前記接触の前、後、またはそれと同時に、前記調製物をカオトロピック剤と接触させること：
を含んでなる、IgG抗体調製物を製造する方法。
【請求項２】
前記IgG抗体が、不均一性を示す、IgG1、IgG2、IgG3およびIgG4抗体またはそれらのフラグメントからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記IgG抗体が、RP-HPLCでいくつかの別個の形態として溶出されるIgG2抗体であり、前記方法がRP-HPLCで溶出される形態の数を減少させるか、または前記RP-HPLCでの前記のいくつかの別個の形態の相対分布を変化させる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記方法が、RP-HPLCによって決定される前記調製物における前記のいくつかの別個の形態のうち少なくとも１つを優先的に濃縮する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記の優先的に濃縮される形態が、前記方法により処理されなかった調製物と比較して、製薬上望ましい特性を有する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記IgG抗体が、少なくとも１つの遊離システイン残基を有する組換えIgG1抗体、または、少なくとも１つの遊離システイン残基を有する組換えIgG1抗体のフラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記方法が、前記調製物をカオトロピック剤と接触させることを含まない、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記IgG抗体がIgG4抗体であり、前記方法がIgG4の半分子の形成を減少させる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記酸化還元カップリング試薬のpHが約5〜約10である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記酸化還元カップリング試薬のpHが約7.6〜約9.6である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記酸化還元カップリング試薬のpHが約8.6である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
酸化還元カップリング試薬が還元型グルタチオンおよび酸化型グルタチオンを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
酸化型グルタチオンに対する還元型グルタチオンの比が、約1:1〜約100:1である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
酸化還元カップリング試薬がシステイン／シスチンを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
システイン／シスチンが、約0.1 mM〜約10 mMのシステインを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
酸化還元カップリング試薬が、約0.1 mM〜約10 mMのシスチンを含んでなり、外来のシステインを加えない、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
システイン／シスチンが、約1:1〜約10:1のシステイン：シスチン比で存在する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
システイン／シスチンが約6 mMシステインおよび約1 mMシスチンを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
システイン／シスチンが約6 mMシステインおよび約6 mMシスタミンを含んでなる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記接触ステップが少なくとも30分間行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記接触ステップが約4〜約48時間かけて行われる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組換えIgG抗体が、前記接触に先立って精製される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記組換えIgG抗体が、前記接触に先立って部分精製される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
接触させた組換えIgG抗体を、第２の酸化還元カップリング試薬を含んでなるもう一つの組成物と接触させることをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法に先立って、培養液中にIgG抗体またはIgG抗体フラグメントを発現および分泌する哺乳類細胞を培養すること；約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬を添加すること、ならびに、場合により前記細胞からの抗体分泌時にカオトロピック剤を含有すること、を含んでなる方法において、前記IgG抗体が哺乳類細胞の培養液から単離される、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
精製が１つまたは複数のクロマトグラフィーステップを含んでなる、請求項１または２５に記載の方法。
【請求項２７】
組換えIgG抗体の濃度が約1 mg/mL〜約50 mg/mLである、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
前記接触が、接触させない同じIgG抗体よりも保存において安定なIgG抗体をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記接触が、接触させない同じIgG抗体よりも熱に安定なIgG抗体をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記接触が、接触させない同じIgG抗体と比較して、改善された結晶化特性を有するIgG抗体をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記接触が、接触させない同じIgG抗体集団よりも均一なIgG抗体集団をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
前記接触が、接触させない同じIgG抗体と比較して、その生物活性が少なくとも２倍増加したIgG抗体をもたらす、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記酸化還元カップリング試薬との前記接触の前、後、またはそれと同時に、前記IgG抗体をカオトロピック剤とさらに接触させる、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記カオトロピック剤が、尿素、アルギニン、SDSおよび塩酸グアニジンからなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記カオトロピック剤が塩酸グアニジンを含んでなる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
塩酸グアニジンの濃度が約0.1 M〜約1.5 Mである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
塩酸グアニジンの濃度が約0.1 M〜約1 Mである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
塩酸グアニジンの濃度が約0.5 Mである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
塩酸グアニジンの濃度が約0.9 Mである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】
前記酸化還元カップリング試薬との前記接触および前記カオトロピック剤との前記のさらなる接触が、接触させない同じIgG抗体と比較して、その生物活性が少なくとも３倍増加したIgG抗体をもたらす、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
前記方法によって製造されるIgG抗体を無菌バルク形態に製剤化することをさらに含んでなる、請求項１または３３に記載の方法。
【請求項４２】
前記方法によって製造されるIgG抗体を無菌単位剤形に製剤化することをさらに含んでなる、請求項１または３３に記載の方法。
【請求項４３】
望ましいリフォールディングされたコンフォメーションを有する、接触させたIgG抗体の画分を単離することをさらに含んでなる、請求項１または３３に記載の方法。
【請求項４４】
前記単離のための手法が、逆相クロマトグラフィーHPLC、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、および電気泳動からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記単離のための手法がイオン交換クロマトグラフィーである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記IgG抗体の均一な集団を有する、請求項１または３３の方法に従って調製された、IgG抗体の調製物。
【請求項４７】
製薬上許容される担体、賦形剤または希釈剤をさらに含んでなる、請求項４６に記載の調製物。
【請求項４８】
組換えIgG抗体の均一な集団、および製薬上許容される担体、賦形剤または希釈剤を含んでなる、組成物。
【請求項４９】
前記組換えIgG抗体がIgG1抗体である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
前記組換えIgG抗体がIgG2抗体である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５１】
前記組換えIgG抗体がIgG4抗体である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】
IgGを必要とする被験体を治療する方法であって、前記被験体に、請求項４９〜５１のいずれか１つに記載のIgGの均一集団の有効量を投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項５３】
前記投与が、皮下または静脈内投与である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
組換えIgG抗体の製造、製剤化、および／または保存中に、その組換えIgG抗体の品質を検出またはモニターする方法であって、
a)哺乳類細胞によって組換え生産された前記IgGの調製物を、約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬と接触させ、場合により、前記調製物を、前記酸化還元カップリング試薬との前記接触の前、後またはそれと同時に、カオトロピック剤とさらに接触させること；
b)ステップa)にしたがって処理されたIgG分子をフラグメントに切断すること；ならびに
c)インタクトIgGおよび／またはステップb)から得られたフラグメントを、クロマトグラフィー分析に供し、それによって前記IgG分子の品質を検出またはモニターすること、
を含んでなる前記方法。
【請求項５５】
前記IgG抗体はIgG1抗体であり、前記の特性のモニタリングは前記IgG1抗体の遊離の、すなわち対をなさないシステインの状態をモニターすることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記IgG抗体はIgG2抗体であり、前記の品質のモニタリングは、調製物の不均一性を測定するために前記IgG2の形態の数をモニターすることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
前記IgG分子がIgG4分子であり、前記の品質のモニタリングは、IgG4の半分子の存在をモニターすることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
クロマトグラフィーがLC/MS分析を含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
検出またはモニタリングが、IgG分子の精製ステップの間に行われ、この精製がカラムクロマトグラフィーを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
組換えIgG抗体またはIgG抗体フラグメントを製造する方法であって：
哺乳類細胞によって組換え生産されたIgG抗体もしくはIgG抗体フラグメントを、約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬と接触させること；ならびに、場合により、
前記IgG抗体またはIgG抗体フラグメントを、前記酸化還元カップリング試薬との前記接触の前、後またはそれと同時に、カオトロピック剤とさらに接触させること、
を含んでなる前記方法。
【請求項６１】
前記方法に先立って、培養液中にIgG抗体またはIgG抗体フラグメントを発現および分泌する哺乳類細胞を培養すること；約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬を添加すること、ならびに、場合により、前記細胞からの抗体の分泌の際にカオトロピック剤を含有すること、を含んでなる方法において、前記IgG抗体またはIgG抗体フラグメントが哺乳類細胞の培養液から単離される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６２】
前記組換えIgG抗体がIgG1抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
前記組換えIgG抗体がIgG2抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６４】
前記組換えIgG抗体がIgG4抗体である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
請求項１または６０に記載の方法を実施すること、および前記組換えIgG抗体の結晶化型を調製すること、を含んでなる、インタクト組換えIgG抗体の結晶化型を調製する方法。
【請求項６６】
前記抗体を結晶化するのに先立って、請求項１または６０に記載の方法によって調製された組換えIgG抗体を単離することをさらに含んでなる、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
前記組換えIgG抗体はクロマトグラフィーカラムの固定相に結合されており、酸化還元試薬およびカオトロピック剤は移動相の一部である、請求項１に記載の方法。
【請求項６８】
前記酸化還元カップリング試薬が酵素である、請求項１に記載の方法。
【請求項６９】
前記酸化還元カップリング試薬が、二価金属イオンおよび酸素を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７０】
IgG抗体調製物を製造する方法であって、
哺乳類細胞によって組換え生産されたIgG抗体の単離された調製物を、約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬と接触させること；および、
場合により、前記酸化還元カップリング試薬との前記接触の前、後またはそれと同時に、前記調製物を高圧による変性にさらに供すること、
を含んでなる前記方法。
【請求項７１】
IgG抗体またはそのフラグメントを製造する方法であって：
培養液中にIgG抗体またはIgG抗体フラグメントを発現および分泌する哺乳類細胞を培養すること；
約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬を加え、さらに場合により、前記細胞からの抗体分泌の際にカオトロピック剤を含有すること；ならびに
それによって、前記酸化還元カップリング試薬および場合によりカオトロピック剤に曝露されなかったIgG抗体またはそのフラグメントと比較して、改善された医薬品特性および結晶化特性を有するIgG抗体またはそのフラグメントを製造すること、
を含んでなる前記方法。
【請求項７２】
組換えIgG抗体または組換えIgG抗体フラグメントを作製する、哺乳類細胞に基づく方法において：
その改善が、約5〜約11のpHで酸化還元カップリング試薬を前記IgG抗体または前記IgG抗体フラグメントの製造のために使用される培養液に添加すること；ならびに、
場合により、前記IgG抗体または前記IgG抗体フラグメントの前記培養液中への分泌の際に、カオトロピック剤を添加すること、
を含んでなる前記方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【公表番号】特表２００８−５２０１９０（Ｐ２００８−５２０１９０Ａ）
【公表日】平成２０年６月１９日（２００８．６．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３８０９８（Ｐ２００７−５３８０９８）
【出願日】平成１７年１０月２１日（２００５．１０．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３８０４５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４７３４０
【国際公開日】平成１８年５月４日（２００６．５．４）
【出願人】（３９１０２２４３０）アムジェン　インコーポレーテッド (8)
【氏名又は名称原語表記】ＡＭＧＥＮ　ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】