自己免疫性の１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、他の自己免疫疾患、ならびに他の糖尿病関連の疾患および状態における、自己抗原標的としてのＺｎＴ８の同定について述べる。さらに、この発見に基づいた様々な治療上、診断上および予後判定上のツールおよび方法についても述べる。疾患過程の開始および臨床的糖尿病に至る自己免疫性の進行において重要な役割を果たすものとしてのＺｎＴ８の遺伝的多様性の同定について開示する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも１０アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項２】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも２５アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項３】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも５０アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項４】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも７５アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項５】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも１００アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項６】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも１０１アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項７】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも１０２アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項８】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも１０４アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項９】
ＺｎＴ８のＣ末端の少なくとも３５０アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項１０】
少なくともアミノ酸配列ＳＬＴＩＱＭＥＳ（配列番号２の３４６〜３５３位）を含むか、前記アミノ酸配列で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸配列で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項１１】
配列番号２に関してＥ３５２およびＳ３５３から成る群から選択されたアミノ酸部位を含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載のフラグメント。
【請求項１２】
ＺｎＴ８はヒトＺｎＴ８（配列番号２）である、請求項１〜９のいずれか１項に記載のフラグメント。
【請求項１３】
配列番号２の３２５位を含む、請求項１２に記載のフラグメント。
【請求項１４】
ＺｎＴ８は配列番号２の多型バリアントである、請求項１〜９のいずれか１項に記載のフラグメント。
【請求項１５】
配列番号２の３２５位を含む、請求項１４に記載のフラグメント。
【請求項１６】
３２５位のアミノ酸はトリプトファンである、請求項１５に記載のフラグメント。
【請求項１７】
３２５位のアミノ酸はグルタミンである、請求項１５に記載のフラグメント。
【請求項１８】
ＺｎＴ８のＮ末端の少なくとも１０アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項１９】
ＺｎＴ８のＮ末端の少なくとも２５アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項２０】
ＺｎＴ８のＮ末端の少なくとも５０アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項２１】
ＺｎＴ８のＮ末端の少なくとも７４アミノ酸を含むか、前記アミノ酸で本質的に構成されるか、または前記アミノ酸で構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項２２】
配列番号８〜２４または４０〜６５のうちいずれか１つによって表わされるフラグメントを含むか、前記フラグメントで本質的に構成されるか、または前記フラグメントで構成される、ＺｎＴ８のフラグメント。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかに記載の任意の２つ以上のフラグメントを含むか、前記フラグメントで本質的に構成されるか、または前記フラグメントで構成される、キメラタンパク質。
【請求項２４】
ＺｎＴ８のＮ末端フラグメントおよびＺｎＴ８のＣ末端フラグメントを含む、請求項２３に記載のキメラタンパク質。
【請求項２５】
キメラタンパク質はＺｎＴ８のＣ末端フラグメントを２つ含み、該フラグメントはそれぞれアミノ酸部位３２５を含み、かつ該フラグメントはそれぞれ３２５位に異なるアミノ酸を含む、請求項２３に記載のキメラタンパク質。
【請求項２６】
１つのフラグメントは３２５位にアルギニンを含み、別のフラグメントは３２５位にトリプトファンを含む、請求項２５に記載のキメラタンパク質。
【請求項２７】
抗ＺｎＴ８抗体が選択的に結合する少なくとも１つのＺｎＴ８エピトープを含む、ＺｎＴ８フラグメントまたはＺｎＴ８相同体。
【請求項２８】
抗ＺｎＴ８抗体は個体から得られた抗体である、請求項２７に記載のＺｎＴ８フラグメントまたはＺｎＴ８相同体。
【請求項２９】
前記個体は１型糖尿病であるか、または１型糖尿病の疑いがある、請求項２７に記載のＺｎＴ８フラグメントまたはＺｎＴ８相同体。
【請求項３０】
ＺｎＴ８特異的Ｔ細胞受容体によって特異的に認識される少なくとも１つのＺｎＴ８エピトープを含む、ＺｎＴ８フラグメントまたはＺｎＴ８相同体。
【請求項３１】
前記個体は１型糖尿病であるか、または１型糖尿病の疑いがある、請求項３０に記載のＺｎＴ８フラグメントまたはＺｎＴ８相同体。
【請求項３２】
フラグメントまたはキメラタンパク質は、該フラグメントまたはキメラタンパク質が細胞または組織もしくは身体の部位を標的とするように、少なくとも１つの標的指向性部分と複合体化される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のフラグメントまたはキメラタンパク質。
【請求項３３】
標的指向性部分はＴ細胞を標的とする、請求項３２に記載のフラグメントまたは相同体。
【請求項３４】
標的指向性部分はＺｎＴ８特異的な自己反応性Ｔ細胞を標的とする、請求項３２に記載のフラグメントまたは相同体。
【請求項３５】
Ｔ細胞もしくはＢ細胞においてアポトーシスを引き起こす毒素、またはＴ細胞もしくはＢ細胞に対して別の毒性を有する毒素と複合体化される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のフラグメントまたはキメラタンパク質。
【請求項３６】
フラグメントまたはキメラタンパク質は検出可能な標識に連結される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載のフラグメントまたはキメラタンパク質。
【請求項３７】
天然に存在するＺｎＴ８タンパク質との同一性が９９％未満であり、かつ配列番号２に少なくとも９０％同一なタンパク質を含む、ＺｎＴ８の相同体。
【請求項３８】
該タンパク質は配列番号２に少なくとも９５％同一である、請求項３７に記載の相同体。
【請求項３９】
該タンパク質は、配列番号２の３２５位を含み、３２５位のアミノ酸はアルギニン、トリプトファンまたはグルタミンである、請求項３７または請求項３８に記載の相同体。
【請求項４０】
ＺｎＴ８またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むワクチンであって、個体においてＺｎＴ８特異的な自己反応性Ｔ細胞を抑制または除去する免疫応答を誘発することを特徴とするワクチン。
【請求項４１】
ＺｎＴ８またはそのフラグメントもしくはバリアントに選択的に結合し、個体においてＺｎＴ８特異的な自己免疫応答を抑制または低減する、抗体または該抗体の抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
モノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項４１に記載の抗体。
【請求項４３】
自己免疫疾患にかかりやすいか、または自己免疫疾患を発症しつつある個体を診断する方法であって、該個体由来の試験試料中のＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含み、該個体において陰性対照と比較して抗体の増加が検出されるとその個体は自己免疫疾患にかかりやすいかまたは自己免疫疾患を発症しつつあることが示されることを特徴とする方法。
【請求項４４】
３２５位のアミノ酸がアルギニンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
３２５位のアミノ酸がトリプトファンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
３２５位のアミノ酸がグルタミンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
３２５位のアミノ酸がアルギニンまたはトリプトファンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
自己免疫疾患にかかりやすいか、または自己免疫疾患を発症しつつある個体を診断する方法であって、該個体由来の試験試料中のＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答を検出することを含み、該個体において陰性対照と比較してＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の増加が検出されるとその個体は自己免疫疾患にかかりやすいかまたは自己免疫疾患を発症しつつあることが示されることを特徴とする方法。
【請求項４９】
３２５位にアルギニンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
３２５位にトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
３２５位にグルタミンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５２】
３２５位にアルギニンまたはトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
個体が自己免疫疾患にかかりやすいかまたは自己免疫疾患を発症しつつある場合、該方法は、該個体において３２５位のアミノ酸を含むＺｎＴ８エピトープを標的とする治療薬を該個体に投与することをさらに含む、請求項４３〜５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
該治療薬はＺｎＴ８タンパク質に対する該個体の免疫応答を寛容化する、該個体のＺｎＴ８のタンパク質、ペプチドまたはアゴニストである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
該治療薬はＺｎＴ８タンパク質に対する免疫応答を刺激する、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
自己免疫疾患は１型糖尿病である、請求項４３〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
個体における１型糖尿病自己免疫の、初期の良性の自己反応性から破壊的な膵島炎への進行を監視する方法であって、該個体由来の試験試料中のＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含み、該個体において、同じ個体の以前の抗体測定と比較して抗体の増加が検出されると、該個体が破壊的な膵島炎に向かって進行していることが示されることを特徴とする方法。
【請求項５８】
３２５位のアミノ酸がアルギニンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
３２５位のアミノ酸がトリプトファンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６０】
３２５位のアミノ酸がグルタミンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６１】
３２５位のアミノ酸がアルギニンまたはトリプトファンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項５７に記載の方法。
【請求項６２】
個体における１型糖尿病自己免疫の、初期の良性の自己反応性から破壊的な膵島炎への進行を監視する方法であって、該個体由来の試験試料中のＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答を
検出することを含み、該個体において、同じ個体の以前のＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の測定と比較してＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の増加が検出されると、該個体が破壊的な膵島炎に向かって進行していることが示されることを特徴とする方法。
【請求項６３】
３２５位にアルギニンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
３２５位にトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
３２５位にグルタミンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６６】
３２５位にアルギニンまたはトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
糖尿病前症の個体における、１型糖尿病の予防、１型糖尿病の発症の遅延、または自己免疫の軽減のための治療の有効性を観察する方法であって、該個体由来の試験試料中のＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含み、該個体において、同じ個体の以前の抗体測定と比較して抗体の減少またはほぼ同レベルの抗体が検出されると、治療が有効であることが示され、また該個体において、同じ個体の以前の抗体測定と比較して抗体の増加が検出されると、治療が有効ではないことが示されることを特徴とする方法。
【請求項６８】
３２５位のアミノ酸がアルギニンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
３２５位のアミノ酸がトリプトファンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項７０】
３２５位のアミノ酸がグルタミンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
３２５位のアミノ酸がアルギニンまたはトリプトファンであるヒトＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出することを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
糖尿病前症の個体における、１型糖尿病の予防、１型糖尿病の発症の遅延、または自己免疫の軽減のための治療の有効性を観察する方法であって、該個体由来の試験試料中のＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答を検出することを含み、
該個体において、同じ個体の以前のＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の測定と比較してＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の減少またはほぼ同レベルのＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答が検出されると、治療が有効であることが示され、
該個体において、同じ個体の以前のＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の測定と比較してＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答の増加が検出されると、治療が有効ではないことが示されることを特徴とする方法。
【請求項７３】
３２５位にアルギニンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
３２５位にトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
３２５位にグルタミンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
３２５位にアルギニンまたはトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８に特異的なＴ細胞応答を検出することを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項７７】
該方法は、放射免疫沈降アッセイ、ＥＬＩＳＡ、時間分解蛍光アッセイ、および発光アッセイからなる群から選択されたアッセイの使用を含む、請求項４３〜４７、５３〜６１、または６７〜７１のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項７８】
該方法は競合的ユーロピウムアッセイの使用を含む、請求項４３〜４７、５３〜６１、または６７〜７１のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項７９】
該方法は、Ｔ細胞増殖アッセイ、可溶性ＭＨＣテトラマーを使用する結合アッセイ、可溶性Ｔ細胞受容体を使用する結合アッセイ、およびＥＬＩＳＰＯＴアッセイからなる群から選択されたアッセイの使用を含む、請求項４８〜５６、６２〜６６、または７２〜７６のうちいずれか１項に記載の方法。
【請求項８０】
該方法は、ＺｎＴ８またはそのフラグメントもしくはバリアントの使用を含む、請求項４３〜７９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８１】
請求項４３〜４７、５３〜６１、または６７〜７１のいずれか１項に記載の方法を実施するためのアッセイ・キットであって、
（ａ）ＺｎＴ８タンパク質またはそのバリアントもしくはフラグメント；
（ｂ）ＺｎＴ８に選択的に結合する抗体を検出するための１もしくは複数の試薬
を含むキット。
【請求項８２】
請求項４８〜５６、６２〜６６、または７２〜７６のいずれか１項に記載の方法を実施するためのアッセイ・キットであって、
（ａ）ＺｎＴ８タンパク質またはその相同体もしくはフラグメント；
（ｂ）ＺｎＴ８特異的なＴ細胞応答を検出するための１もしくは複数の試薬
を含むキット。
【請求項８３】
自己免疫疾患の予防、自己免疫疾患の発症の遅延、または自己免疫疾患の個体における自己免疫の軽減のための方法であって、自己免疫疾患の標的とされている患者体内の細胞または組織を保護するＺｎＴ８特異的な免疫応答を誘発する作用物質を、前記予防、前記遅延、または前記軽減を必要とする個体に投与することを含む方法。
【請求項８４】
自己免疫疾患は１型糖尿病であり、作用物質は膵島のβ細胞を保護することを特徴とする、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
自己免疫疾患の予防、自己免疫疾患の発症の遅延、または自己免疫疾患の個体における自己免疫の軽減のための方法であって、該個体においてＺｎＴ８特異的なＴ細胞を標的とし、かつＺｎＴ８特異的なＴ細胞のネクローシスまたはアポトーシスを誘導する作用物質を、前記予防、前記遅延、または前記軽減を必要とする個体に投与することを含む方法。
【請求項８６】
自己免疫疾患は１型糖尿病であり、作用物質はＺｎＴ８特異的なＴ細胞のネクローシスまたはアポトーシスを誘導することを特徴とする、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
自己免疫疾患の予防、自己免疫疾患の発症の遅延、または自己免疫疾患の個体における自己免疫の軽減のための方法であって、該個体においてＺｎＴ８特異的なＴ細胞に寛容性を生じさせる作用物質を、前記予防、前記遅延、または前記軽減を必要とする個体に投与することを含む方法。
【請求項８８】
自己免疫疾患は１型糖尿病であり、作用物質は個体においてＺｎＴ８特異的なＴ細胞に寛容性を生じさせることを特徴とする、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
作用物質はＺｎＴ８、ＺｎＴ８の相同体、ＺｎＴ８のフラグメント、またはＺｎＴ８の合成ミメティックである、請求項８３〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９０】
作用物質は、請求項１〜３８のいずれか１項に記載のフラグメントもしくはキメラタンパク質、相同体、またはそのフラグメントである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
作用物質は、個体におけるＺｎＴ８の結合について、個体体内の天然の自己抗体と競合する抗体である、請求項８３〜８８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９２】
作用物質は、３２５位にアルギニンを含むヒトＺｎＴ８の多型バリアントに特異的である、請求項８３〜９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９３】
作用物質は、３２５位にトリプトファンを含むヒトＺｎＴ８の多型バリアントに特異的である、請求項８３〜９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９４】
作用物質は、３２５位にグルタミンを含むヒトＺｎＴ８の多型バリアントに特異的である、請求項８３〜９１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９５】
ＺｎＴ８、ＺｎＴ８のバリアント、ＺｎＴ８のフラグメント、ＺｎＴ８の合成ミメティック、または前記ＺｎＴ８、前記ＺｎＴ８の相同体もしくは前記ＺｎＴ８のフラグメントに結合する抗体の、本明細書中に詳述されているような診断方法、予後判定方法または治療方法における使用。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図９Ｄ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１３】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１６】

【図１７】

【図１９】

【図２０】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２１Ｃ】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２２Ｃ】

【図２２Ｄ】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２３Ｃ】

【図２３Ｄ】

【図２４Ａ】

【図２４Ｂ】

【図２４Ｃ】

【図２４Ｄ】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８Ａ】

【図２８Ｂ】

【図２９】

【図３０】

【図３１Ａ】

【図３１Ｂ】

【図３１Ｃ】

【図３１Ｄ】

【図３１Ｅ】

【図３１Ｆ】

【図３２】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図１８】

【公表番号】特表２０１０−５１４８０５（Ｐ２０１０−５１４８０５Ａ）
【公表日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４４３０８（Ｐ２００９−５４４３０８）
【出願日】平成１９年１２月２８日（２００７．１２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８９１２５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０８３３３１
【国際公開日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【出願人】（３０８０３２４６０）ザ　リージェンツ　オブ　ザ　ユニバーシティ　オブ　コロラド (25)
【Ｆターム（参考）】