野生型ＫＲＰによる活性サイクリン−ＣＤＫ複合体阻害の、優性ネガティブ変異ＫＲＰタンパク質の防御
野生型ＣＫＩタンパク質に対して優性ネガティブな拮抗活性を有する変異ＣＤＫインヒビター（ＣＫＩ）ポリペプチド、並びに変異ＣＫＩポリペプチドをコードする核酸及びベクターを含む関連の組成物、そしてこのような核酸及びベクターを含む形質転換宿主細胞及びトランスジェニック植物が開示される。また、変異タンパク質を使用して、細胞、特に植物細胞において細胞分裂を調節するための関連の方法が開示される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された、変異植物ＣＫＩポリペプチドであって、
（ａ）サイクリンについての結合親和性を付与するサイクリン結合領域、（ｂ）ＣＤＫについての結合親和性を付与するＣＤＫ結合領域を揺する野生型植物のＣＫＩポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＣＫＩアミノ酸配列を含み、
該少なくとも１つの改変は、野生型ＣＫＩポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＣＫＩポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり；
変異ＣＫＩポリペプチドは、野生型ＣＫＩポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持し；
変異ＣＫＩポリペプチドは、ＣＤＫ結合領域への結合について、該野生型ＣＫＩと競合し得る、変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２】
前記野生型植物ＣＫＩポリペプチドが、ＫＩＰ関連性タンパク質（ＫＲＰ）ファミリーのメンバーである請求項１に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシ、コムギ、イネ、アルファルファ、綿花、又はポプラのＣＫＩポリペプチドである請求項２に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項４】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ又はＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１ポリペプチドである請求項２に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項５】
前記少なくとも１つの改変が、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内にある請求項２に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項６】
ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内に少なくとも２つの改変を含む請求項５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項７】
前記少なくとも１つの改変がアミノ酸置換を含む請求項５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項８】
アミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項７に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項９】
アミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項７に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１０】
請求項７に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチドであって、少なくとも２つのアミノ酸置換を含み、各アミノ酸置換は、
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４５位に対応する位置；
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置；
（ｃ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位に対応する位置；
（ｄ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５３位に対応する位置；
（ｅ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；
（ｆ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置、
からなる群より独立して選択される位置にある、変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１１】
少なくとも２つのアミノ酸置換のうちの１つ以上、必要に応じて全てが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項１０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１２】
少なくとも２つのアミノ酸置換のうちの１つ以上、必要に応じて全てが、非保存的な置換である請求項１０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの改変が、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内にある請求項５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１４】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内に少なくとも２つの改変を含む請求項１３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１５】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内の少なくとも２つの改変が、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換を含む請求項１４に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１６】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが非アラニンからアラニンへの置換である請求項１５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１７】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項１６に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１８】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項１５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１９】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項１８に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２０】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換をさらに含む請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２１】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項２０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２２】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項２０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１５〜２２のいずれか１項に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチドであって、
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置；
の少なくとも１つでのアミノ酸置換をさらに含む、変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２４】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項２３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２５】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非保存的置換である請求項２３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２６】
（ａ）及び（ｂ）のそれぞれでのアミノ酸置換を含む請求項２３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２７】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが非アラニンからアラニンへの置換である請求項２６に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２８】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが非保存的置換である請求項２６に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２９】
変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項４〜２８のいずれか１項に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３０】
請求項２９に記載の変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドであって、これが
（１）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；
（２）ＢｎＫＲＰ１ Ｙ１４９Ａ；Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ
（３）ＢｎＫＲＰ１ Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ；又は
（４）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ、
である、変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチド。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの改変がＣＤＫ結合領域の切断を含む請求項１〜５のいずれか１項に記載の変異ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３２】
変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項３１に記載の変異ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の変異ＣＫＩポリペプチドをコードする組換え核酸。
【請求項３４】
レプリコン及び請求項３３に記載の組換え核酸を含むベクター。
【請求項３５】
組換え核酸に作動可能に連結されるプロモーター領域をさらに含む請求項３４に記載のベクター。
【請求項３６】
プロモーター領域が植物細胞において作動可能である請求項３５に記載の発現ベクター。
【請求項３７】
プロモーター領域がＣａＭＶ ３５Ｓプロモーター又はＬＦＡＨ１２プロモーターを含む請求項３６に記載の発現ベクター。
【請求項３８】
プロモーター領域が、組織及び／又は器官特異的な様式において転写的に活性である請求項３５に記載の発現ベクター。
【請求項３９】
請求項３３に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。
【請求項４０】
請求項３４〜３８のいずれか１項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４１】
変異ＣＫＩポリペプチドを産生する方法であって、該方法は：
変異ＣＫＩポリペプチドをコードする核酸の発現に適切な条件下で請求項３９又は４０に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、方法。
【請求項４２】
前記変異ＣＫＩポリペプチドを回収する工程をさらに含む請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
変異ＣＫＩポリペプチドをコードする導入遺伝子を含むトランスジェニック植物であって、該トランスジェニック植物は野生型ＣＫＩポリペプチドを発現し、該野生型ＣＫＩポリペプチドは、（ａ）サイクリンについての結合親和性を付与するサイクリン結合領域と（ｂ）ＣＤＫについての結合親和性を付与するＣＤＫ結合領域とを含み、該変異ＣＫＩポリペプチドは、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＣＫＩアミノ酸配列を含み、該参照ＣＫＩポリペプチドは、
（１）トランスジェニック植物により発現される野生型植物ＣＫＩポリペプチド、
（２）（１）に異種な、トランスジェニック植物の細胞内で（１）の野生型ＣＫＩ機能に実質的に等価な野生型ＣＫＩ機能を提供し得る野生型ＣＫＩポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＣＫＩポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、さらに変異ＣＫＩポリペプチドは、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、トランスジェニック植物。
【請求項４４】
単子葉植物である請求項４３に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４５】
双子葉植物である請求項４３に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４６】
前記参照ＣＫＩポリペプチドが、ＫＩＰ関連性タンパク質（ＫＲＰ）ファミリーのメンバーである請求項４３〜４５のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４７】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーがＢｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシ、コムギ、イネ、アルファルファ、綿花、又はポプラのＣＫＩポリペプチドである請求項４６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４８】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーがＫＲＰ１ポリペプチドである請求項４６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４９】
前記少なくとも１つの改変がＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内にある請求項４６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５０】
前記変異ＣＫＩポリペプチドが、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内に少なくとも２つの改変を含む請求項４９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５１】
前記少なくとも１つの改変がアミノ酸置換を含む請求項４９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５２】
アミノ酸置換が非アラニンからアラニンへの置換である請求項５１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５３】
アミノ酸置換が逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項５１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５４】
前記少なくとも１つの改変が、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内にある請求項４９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５５】
前記変異ＣＫＩポリペプチドが、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内に少なくとも２つの改変を含む請求項５４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５６】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内の少なくとも２つの改変が、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換を含む請求項５４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５７】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項５６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５８】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項５７に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５９】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項５６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６０】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項５９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６１】
変異ＣＫＩポリペプチドが、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換をさらに含む請求項５６〜６０のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６２】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項６１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６３】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項６１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６４】
請求項５６〜６３のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置；
の少なくとも１つでのアミノ酸置換をさらに含む、トランスジェニック植物。
【請求項６５】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項６４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６６】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非保存的置換である請求項６４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６７】
変異ＣＫＩポリペプチドが（ａ）及び（ｂ）のそれぞれでのアミノ酸置換を含む請求項６４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６８】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項６７に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６９】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非保存的置換である請求項６７に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７０】
参照ＣＫＩポリペプチドが、ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項４６〜６９のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７１】
請求項７０に記載のトランスジェニック植物であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、
（１）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；
（２）ＢｎＫＲＰ１ Ｙ１４９Ａ；Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ
（３）ＢｎＫＲＰ１ Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ；又は
（４）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ、
である、トランスジェニック植物。
【請求項７２】
前記少なくとも１つの改変が、ＣＤＫ結合領域の切断を含む請求項４３〜４９のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７３】
参照ＣＫＩポリペプチドがＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項７２に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７４】
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシ、コムギ、イネ、アルファルファ、綿花、ポプラ、カメリナからなる群より選択される請求項４３〜７３のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７５】
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシからなる群より選択される請求項７４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７６】
参照ＣＫＩポリペプチドが、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）のＣＫＩポリペプチドである請求項７５に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７７】
請求項４３〜７４のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物を産生するための方法であって、変異ＣＫＩポリペプチドをコードする導入遺伝子を含むベクターを植物に導入する工程を含む、方法。
【請求項７８】
野生型ＣＫＩポリペプチドを発現する植物細胞において細胞分裂を調節する方法であって、該野生型ＣＫＩポリペプチドは、（ａ）サイクリンについての結合親和性を付与するサイクリン結合領域、（ｂ）ＣＤＫについての結合親和性を付与するＣＤＫ結合領域を含み；方法は以下の工程：
参照ＣＫＩポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＣＫＩアミノ酸配列を含む変異ＣＫＩポリペプチドを細胞内で発現する工程であって、該参照ＣＫＩポリペプチドは、
（１）植物細胞内で発現される野生型植物ＣＫＩポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物細胞内で（１）の野生型ＣＫＩ機能に実質的に等価な野生型ＣＫＩ機能を提供し得る野生型ＣＫＩポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＣＫＩポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＣＫＩポリペプチドは、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＣＫＩポリペプチドが、植物細胞内で野生型ＣＫＩの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項７９】
前記参照ＣＫＩポリペプチドがＫＩＰ関連性タンパク質（ＫＲＰ）ファミリーのメンバーである請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
変異ＣＫＩポリペプチドが、植物細胞内の複数の内因性ＫＲＰファミリーのメンバーを拮抗する請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、又はトウモロコシのＣＫＩポリペプチドである請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、ＫＲＰ１ポリペプチドである請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記少なくとも１つの改変が、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内にある請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
変異ＣＫＩポリペプチドが、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内に少なくとも２つの改変を含む請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記少なくとも１つの改変がアミノ酸置換を含む請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
アミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
アミノ酸置換は、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記少なくとも１つの改変が、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内にある請求項８３に記載の方法。
【請求項８９】
変異ＣＫＩポリペプチドが、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内に少なくとも２つの改変を含む請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内の前記少なくとも２つの改変が、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換を含む請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置での変異ＣＫＩポリペプチドがアミノ酸置換をさらに含む請求項９０〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
請求項９０〜９７のいずれか１項に記載の方法であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、以下
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；及び
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置；
の少なくとも１つでのアミノ酸置換をさらに含む、方法。
【請求項９９】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非保存的置換である請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
変異ＣＫＩポリペプチドが、（ａ）及び（ｂ）のそれぞれでのアミノ酸置換を含む請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非保存的置換である請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
参照ＣＫＩポリペプチドが、ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項８２〜１０３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載の方法であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、
（１）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；
（２）ＢｎＫＲＰ１ Ｙ１４９Ａ；Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ
（３）ＢｎＫＲＰ１ Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ；又は
（４）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ、
からなる群より選択される、方法。
【請求項１０６】
前記少なくとも１つの改変が、ＣＤＫ結合領域の切断を含む請求項７８〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０７】
参照ＣＫＩポリペプチドがＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
変異ＣＫＩポリペプチドをコードする組換え核酸を植物細胞に導入する工程をさらに含む請求項７８〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
組換え核酸が発現ベクターである請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
植物細胞が、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシからなる群より選択される植物由来である請求項７８〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１１】
植物が、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシからなる群より選択される請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
参照ＣＫＩポリペプチドがＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａのＣＫＩポリペプチドである請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
植物の活力を増大するための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物の活力を増大するように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１１４】
植物の根の質量を増大するための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物において根の質量を増大するように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１１５】
植物の種子の大きさを増大するための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物の種子の大きさを増大するように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１１６】
植物において早期の発芽を増すための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物において早期の発芽を増すように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１】
単離された、変異植物ＣＫＩポリペプチドであって、
（ａ）サイクリンについての結合親和性を付与するサイクリン結合領域、（ｂ）ＣＤＫについての結合親和性を付与するＣＤＫ結合領域を揺する野生型植物のＣＫＩポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＣＫＩアミノ酸配列を含み、
該少なくとも１つの改変は、野生型ＣＫＩポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＣＫＩポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり；
変異ＣＫＩポリペプチドは、野生型ＣＫＩポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持し；
変異ＣＫＩポリペプチドは、ＣＤＫ結合領域への結合について、該野生型ＣＫＩと競合し得る、変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２】
前記野生型植物ＣＫＩポリペプチドが、ＫＩＰ関連性タンパク質（ＫＲＰ）ファミリーのメンバーである請求項１に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシ、コムギ、イネ、アルファルファ、綿花、又はポプラのＣＫＩポリペプチドである請求項２に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項４】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ又はＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１ポリペプチドである請求項２に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項５】
前記少なくとも１つの改変が、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内にある請求項２に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項６】
ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内に少なくとも２つの改変を含む請求項５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項７】
前記少なくとも１つの改変がアミノ酸置換を含む請求項５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項８】
アミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項７に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項９】
アミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項７に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１０】
請求項７に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチドであって、少なくとも２つのアミノ酸置換を含み、各アミノ酸置換は、
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４５位に対応する位置；
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置；
（ｃ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位に対応する位置；
（ｄ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５３位に対応する位置；
（ｅ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；
（ｆ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置、
からなる群より独立して選択される位置にある、変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１１】
少なくとも２つのアミノ酸置換のうちの１つ以上、必要に応じて全てが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項１０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１２】
少なくとも２つのアミノ酸置換のうちの１つ以上、必要に応じて全てが、非保存的な置換である請求項１０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの改変が、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内にある請求項５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１４】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内に少なくとも２つの改変を含む請求項１３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１５】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内の少なくとも２つの改変が、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換を含む請求項１４に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１６】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが非アラニンからアラニンへの置換である請求項１５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１７】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項１６に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１８】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項１５に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項１９】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項１８に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２０】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換をさらに含む請求項１５〜１９のいずれか１項に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２１】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項２０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２２】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項２０に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１５〜２２のいずれか１項に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチドであって、
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置；
の少なくとも１つでのアミノ酸置換をさらに含む、変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２４】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項２３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２５】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非保存的置換である請求項２３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２６】
（ａ）及び（ｂ）のそれぞれでのアミノ酸置換を含む請求項２３に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２７】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが非アラニンからアラニンへの置換である請求項２６に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２８】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが非保存的置換である請求項２６に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項２９】
変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項４〜２８のいずれか１項に記載の変異植物ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３０】
請求項２９に記載の変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドであって、これが
（１）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；
（２）ＢｎＫＲＰ１ Ｙ１４９Ａ；Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ
（３）ＢｎＫＲＰ１ Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ；又は
（４）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ、
である、変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチド。
【請求項３１】
前記少なくとも１つの改変がＣＤＫ結合領域の切断を含む請求項１〜５のいずれか１項に記載の変異ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３２】
変異ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項３１に記載の変異ＣＫＩポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれか１項に記載の変異ＣＫＩポリペプチドをコードする組換え核酸。
【請求項３４】
レプリコン及び請求項３３に記載の組換え核酸を含むベクター。
【請求項３５】
組換え核酸に作動可能に連結されるプロモーター領域をさらに含む請求項３４に記載のベクター。
【請求項３６】
プロモーター領域が植物細胞において作動可能である請求項３５に記載の発現ベクター。
【請求項３７】
プロモーター領域がＣａＭＶ ３５Ｓプロモーター又はＬＦＡＨ１２プロモーターを含む請求項３６に記載の発現ベクター。
【請求項３８】
プロモーター領域が、組織及び／又は器官特異的な様式において転写的に活性である請求項３５に記載の発現ベクター。
【請求項３９】
請求項３３に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。
【請求項４０】
請求項３４〜３８のいずれか１項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４１】
変異ＣＫＩポリペプチドを産生する方法であって、該方法は：
変異ＣＫＩポリペプチドをコードする核酸の発現に適切な条件下で請求項３９又は４０に記載の宿主細胞を培養する工程を含む、方法。
【請求項４２】
前記変異ＣＫＩポリペプチドを回収する工程をさらに含む請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
変異ＣＫＩポリペプチドをコードする導入遺伝子を含むトランスジェニック植物であって、該トランスジェニック植物は野生型ＣＫＩポリペプチドを発現し、該野生型ＣＫＩポリペプチドは、（ａ）サイクリンについての結合親和性を付与するサイクリン結合領域と（ｂ）ＣＤＫについての結合親和性を付与するＣＤＫ結合領域とを含み、該変異ＣＫＩポリペプチドは、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＣＫＩアミノ酸配列を含み、該参照ＣＫＩポリペプチドは、
（１）トランスジェニック植物により発現される野生型植物ＣＫＩポリペプチド、
（２）（１）に異種な、トランスジェニック植物の細胞内で（１）の野生型ＣＫＩ機能に実質的に等価な野生型ＣＫＩ機能を提供し得る野生型ＣＫＩポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＣＫＩポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、さらに変異ＣＫＩポリペプチドは、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、トランスジェニック植物。
【請求項４４】
単子葉植物である請求項４３に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４５】
双子葉植物である請求項４３に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４６】
前記参照ＣＫＩポリペプチドが、ＫＩＰ関連性タンパク質（ＫＲＰ）ファミリーのメンバーである請求項４３〜４５のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４７】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーがＢｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシ、コムギ、イネ、アルファルファ、綿花、又はポプラのＣＫＩポリペプチドである請求項４６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４８】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーがＫＲＰ１ポリペプチドである請求項４６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項４９】
前記少なくとも１つの改変がＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内にある請求項４６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５０】
前記変異ＣＫＩポリペプチドが、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内に少なくとも２つの改変を含む請求項４９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５１】
前記少なくとも１つの改変がアミノ酸置換を含む請求項４９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５２】
アミノ酸置換が非アラニンからアラニンへの置換である請求項５１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５３】
アミノ酸置換が逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項５１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５４】
前記少なくとも１つの改変が、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内にある請求項４９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５５】
前記変異ＣＫＩポリペプチドが、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内に少なくとも２つの改変を含む請求項５４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５６】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内の少なくとも２つの改変が、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換を含む請求項５４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５７】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項５６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５８】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項５７に記載のトランスジェニック植物。
【請求項５９】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項５６に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６０】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項５９に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６１】
変異ＣＫＩポリペプチドが、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換をさらに含む請求項５６〜６０のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６２】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項６１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６３】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項６１に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６４】
請求項５６〜６３のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置；
の少なくとも１つでのアミノ酸置換をさらに含む、トランスジェニック植物。
【請求項６５】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項６４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６６】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非保存的置換である請求項６４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６７】
変異ＣＫＩポリペプチドが（ａ）及び（ｂ）のそれぞれでのアミノ酸置換を含む請求項６４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６８】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項６７に記載のトランスジェニック植物。
【請求項６９】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非保存的置換である請求項６７に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７０】
参照ＣＫＩポリペプチドが、ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項４６〜６９のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７１】
請求項７０に記載のトランスジェニック植物であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、
（１）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；
（２）ＢｎＫＲＰ１ Ｙ１４９Ａ；Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ
（３）ＢｎＫＲＰ１ Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ；又は
（４）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ、
である、トランスジェニック植物。
【請求項７２】
前記少なくとも１つの改変が、ＣＤＫ結合領域の切断を含む請求項４３〜４９のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７３】
参照ＣＫＩポリペプチドがＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項７２に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７４】
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシ、コムギ、イネ、アルファルファ、綿花、ポプラ、カメリナからなる群より選択される請求項４３〜７３のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７５】
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシからなる群より選択される請求項７４に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７６】
参照ＣＫＩポリペプチドが、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）のＣＫＩポリペプチドである請求項７５に記載のトランスジェニック植物。
【請求項７７】
請求項４３〜７４のいずれか１項に記載のトランスジェニック植物を産生するための方法であって、変異ＣＫＩポリペプチドをコードする導入遺伝子を含むベクターを植物に導入する工程を含む、方法。
【請求項７８】
野生型ＣＫＩポリペプチドを発現する植物細胞において細胞分裂を調節する方法であって、該野生型ＣＫＩポリペプチドは、（ａ）サイクリンについての結合親和性を付与するサイクリン結合領域、（ｂ）ＣＤＫについての結合親和性を付与するＣＤＫ結合領域を含み；方法は以下の工程：
参照ＣＫＩポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＣＫＩアミノ酸配列を含む変異ＣＫＩポリペプチドを細胞内で発現する工程であって、該参照ＣＫＩポリペプチドは、
（１）植物細胞内で発現される野生型植物ＣＫＩポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物細胞内で（１）の野生型ＣＫＩ機能に実質的に等価な野生型ＣＫＩ機能を提供し得る野生型ＣＫＩポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＣＫＩポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＣＫＩポリペプチドは、参照ＣＫＩポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＣＫＩポリペプチドが、植物細胞内で野生型ＣＫＩの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項７９】
前記参照ＣＫＩポリペプチドがＫＩＰ関連性タンパク質（ＫＲＰ）ファミリーのメンバーである請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
変異ＣＫＩポリペプチドが、植物細胞内の複数の内因性ＫＲＰファミリーのメンバーを拮抗する請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、又はトウモロコシのＣＫＩポリペプチドである請求項７９に記載の方法。
【請求項８２】
前記ＫＲＰファミリーのメンバーが、ＫＲＰ１ポリペプチドである請求項７９に記載の方法。
【請求項８３】
前記少なくとも１つの改変が、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内にある請求項７９に記載の方法。
【請求項８４】
変異ＣＫＩポリペプチドが、ＢｒａｓｓｉｃａＫＲＰ１（ＢｎＫＲＰ１）のアミノ酸１４５〜１６８位に対応する領域内に少なくとも２つの改変を含む請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記少なくとも１つの改変がアミノ酸置換を含む請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
アミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
アミノ酸置換は、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項８５に記載の方法。
【請求項８８】
前記少なくとも１つの改変が、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内にある請求項８３に記載の方法。
【請求項８９】
変異ＣＫＩポリペプチドが、ＫＹＮＦＤＦモチーフ内に少なくとも２つの改変を含む請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
ＫＹＮＦＤＦモチーフ内の前記少なくとも２つの改変が、ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換を含む請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換の少なくとも１つが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項９０に記載の方法。
【請求項９４】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１５１位と１５３位に対応する位置でのアミノ酸置換のそれぞれが、逆帯電されたアミノ酸でのアミノ酸の置換である請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置での変異ＣＫＩポリペプチドがアミノ酸置換をさらに含む請求項９０〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１４９位に対応する位置でのアミノ酸置換は、非保存的な置換である請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
請求項９０〜９７のいずれか１項に記載の方法であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、以下
（ａ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６４位に対応する位置；及び
（ｂ）ＢｎＫＲＰ１のアミノ酸１６５位に対応する位置；
の少なくとも１つでのアミノ酸置換をさらに含む、方法。
【請求項９９】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非アラニンからアラニンへの置換である請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
（ａ）及び（ｂ）の少なくとも１つでのアミノ酸置換は、非保存的置換である請求項９８に記載の方法。
【請求項１０１】
変異ＣＫＩポリペプチドが、（ａ）及び（ｂ）のそれぞれでのアミノ酸置換を含む請求項９８に記載の方法。
【請求項１０２】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非アラニンからアラニンへの置換である請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
（ａ）及び（ｂ）でのアミノ酸置換のそれぞれが、非保存的置換である請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０４】
参照ＣＫＩポリペプチドが、ＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項８２〜１０３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０５】
請求項１０４に記載の方法であって、変異ＣＫＩポリペプチドが、
（１）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；
（２）ＢｎＫＲＰ１ Ｙ１４９Ａ；Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ
（３）ＢｎＫＲＰ１ Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ；又は
（４）ＢｎＫＲＰ１ Ｆ１５１Ａ；Ｆ１５３Ａ；Ｅ１６４Ａ；Ｗ１６５Ａ、
からなる群より選択される、方法。
【請求項１０６】
前記少なくとも１つの改変が、ＣＤＫ結合領域の切断を含む請求項７８〜８３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０７】
参照ＣＫＩポリペプチドがＢｎＫＲＰ１ポリペプチドである請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
変異ＣＫＩポリペプチドをコードする組換え核酸を植物細胞に導入する工程をさらに含む請求項７８〜１０７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０９】
組換え核酸が発現ベクターである請求項１０８に記載の方法。
【請求項１１０】
植物細胞が、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシからなる群より選択される植物由来である請求項７８〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１１】
植物が、Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ、Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ、トウモロコシからなる群より選択される請求項１１０に記載の方法。
【請求項１１２】
参照ＣＫＩポリペプチドがＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａのＣＫＩポリペプチドである請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
植物の活力を増大するための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物の活力を増大するように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１１４】
植物の根の質量を増大するための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物において根の質量を増大するように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１１５】
植物の種子の大きさを増大するための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物の種子の大きさを増大するように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【請求項１１６】
植物において早期の発芽を増すための方法であって、以下の工程：
参照ＫＲＰポリペプチドに比較して少なくとも１つの改変を有するＫＲＰアミノ酸配列を含む変異ＫＲＰポリペプチドを植物内で発現する工程であって、該参照ＫＲＰポリペプチドは、
（１）植物内で発現される野生型ＫＲＰポリペプチド、
（２）（１）に異種な、植物の細胞内で（１）の野生型ＫＲＰ機能に実質的に等価な野生型ＫＲＰ機能を提供し得る野生型ＫＲＰポリペプチドからなる群より選択され；
該少なくとも１つの改変は、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、ＣＤＫについての、変異ＫＲＰポリペプチドの改変された結合親和性を付与するように、ＣＤＫ結合領域内にあり、そして変異ＫＲＰポリペプチドは、参照ＫＲＰポリペプチドに比較して、サイクリンについての結合親和性を実質的に維持する、工程；並びに
該変異ＫＲＰポリペプチドが、植物において早期の発芽を増すように植物内で野生型ＫＲＰの生物学的活性を阻害することを許容する工程、
を含む、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２００９−５０２１７５（Ｐ２００９−５０２１７５Ａ）
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２４１８０（Ｐ２００８−５２４１８０）
【出願日】平成１８年７月２８日（２００６．７．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２９３４９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１６３１９
【国際公開日】平成１９年２月８日（２００７．２．８）
【出願人】（５０８０２９７４５）ターゲット・グロース・インコーポレーテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年７月２８日（２００６．７．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２９３４９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１６３１９
【国際公開日】平成１９年２月８日（２００７．２．８）
【出願人】（５０８０２９７４５）ターゲット・グロース・インコーポレーテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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