黄色ブドウ球菌に由来する菌血症関連抗原
黄色ブドウ球菌のＢＡＡ抗原を、他の地方流行性の株および関連する株と比較してフィブロネクチンおよび他の細胞外基質タンパク質へのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合が増強された高度に菌血症性のＭＲＳＡ株で同定した。ＢＡＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでフィブロネクチンに結合する、ファージにコードされた表面発現アドヘシンである。ＢＡＡはＭＲＳＡ株のカテーテル関連菌血症の表現型の増強を引き起こし得るので、ＭＲＳＡ菌血症の予防のためのワクチン標的として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００９年１１月１０日に出願された英国特許出願第０９１９６９０．８号（この完全な内容は、全ての目的のために参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、黄色ブドウ球菌に対する免疫化のための組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
黄色ブドウ球菌は、グラム陽性の球状細菌である。米国における年間死亡率はいかなる他の感染症（ＨＩＶ／ＡＩＤＳが含まれる）の死亡率も凌ぎ、黄色ブドウ球菌は、血流、下気道、皮膚、および軟組織の感染の主因である。特に懸念される原因は、ほとんどの抗生物質に耐性を示すＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）である。
【０００４】
現在、認可された黄色ブドウ球菌ワクチンは存在しない。参考文献１（非特許文献１）は、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌの「Ｖ７１０」ワクチンが心臓胸部手術を受けた患者における第２／３相試験を経ていることを報告している。Ｖ７１０ワクチンは、単一の抗原ＩｓｄＢ［２（非特許文献２）］（鉄捕捉細胞表面タンパク質）に基づく。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｈｅｒｉｄａｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００９）２７：４９９〜５０１
【非特許文献２】Ｋｕｋｌｉｎら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．（２００６）７４（４）：２２１５〜２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
黄色ブドウ球菌ワクチン、特にＭＲＳＡ株に対して有用なワクチンで用いるさらに改良された抗原を同定する必要が依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の開示
ＭＲＳＡの「ＴＷ」株はＳＴ−２３９に属し、ヒトにおいて血管カテーテルに接着して菌血症を引き起こす能力が増強されている［３］。他の地方流行性の株および関連する株と比較して一連の細胞外基質タンパク質（フィブロネクチンが含まれる）へのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合も増強されている。この株はまた、地方流行性の株または関連する株よりも多くの内皮細胞に侵入する。本発明者らは、ＴＷ中の菌血症関連抗原「ＢＡＡ」を同定した。ＢＡＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのフィブロネクチンへの結合を実証し、そしてＭＲＳＡ株のカテーテル関連菌血症表現型の増強の原因であり得る、ファージにコードされた表面発現アドヘシンである。したがって、ＢＡＡは、例えば、ＭＲＳＡによって引き起こされる菌血症（ＳＴ２３９株型が含まれる）を予防するためのワクチン標的として有用であり得る。
【０００８】
本発明は、黄色ブドウ球菌疾患（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ）および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化で用いるＢＡＡ抗原を提供する。
【０００９】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原ポリペプチド配列および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原ポリペプチド配列を含む融合タンパク質を提供する。この融合タンパク質は、黄色ブドウ球菌疾患に対する免疫化のための免疫原性組成物中の有効成分として有用である。
【００１０】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物は、黄色ブドウ球菌疾患に対する免疫化に有用である。
【００１１】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原および少なくとも１つの非黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物は、一定範囲の疾患に対する免疫化に有用である。
【００１２】
本発明はまた、（１）ＢＡＡ抗原と（２）アジュバントとの組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、抗ＢＡＡ抗体を提供する。この抗体は、例えば、単独または別の治療（抗生物質など）と組み合わせて黄色ブドウ球菌疾患の処置および／または予防に有用である。
【００１４】
本発明は、サンプル中のＢＡＡ抗原またはＢＡＡ抗原をコードする核酸を検出する工程を含む、サンプル中の黄色ブドウ球菌細菌の存在または不在を検出するための方法を提供する。
【００１５】
ＢＡＡ抗原
ＢＡＡ抗原は表皮ブドウ球菌で以前に認められており、ＳｅｓＩ［４、５］、ＳＥ１６５４［６］またはＳｅｓＤ［７］と呼ばれている。しかし、黄色ブドウ球菌株では、ＢＡＡ抗原は、以前には存在しないと報告されていた［６］。表皮ブドウ球菌抗原に関する研究により、この抗原が浸潤能のマーカー（およびおそらくビルレンス因子）であり、免疫原性であり、そして細菌に対してオプソニン食作用活性（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を誘発することができることが確認されている。同一の性質を、黄色ブドウ球菌中の同一の抗原に期待することができる。さらに、黄色ブドウ球菌中のＢＡＡ抗原は、フィブロネクチン結合活性を有することが確認されており、その表面露出および機能的発現が確認されるので、黄色ブドウ球菌タンパク質が表皮ブドウ球菌タンパク質について既に認められている性質を共有するという見解がさらに支持される。
【００１６】
本発明のＢＡＡ抗原は、（ａ）配列番号１に対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）を有し、そして／または（ｂ）配列番号１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸のフラグメントを含むアミノ酸配列を含むことができ、「ｎ」は７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、またはそれを超える）である。これらのＢＡＡ配列には、配列番号１の改変体が含まれる。好ましい（ｂ）のフラグメントは、配列番号１由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、少なくとも１つの配列番号１のエピトープを保持しながら配列番号１のＣ末端由来の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）および／またはＮ末端由来の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）を欠く。
【００１７】
したがって、例えば、本発明と共に用いるポリペプチドは、配列番号１と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）のアミノ酸置換（保存的置換（すなわち、あるアミノ酸の、関連する側鎖を有する別のアミノ酸との置換）など）を含むことができる。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般に、以下の４つのファミリーに分類される：（１）酸性（すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸）、（２）塩基性（すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、（３）非極性（すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および（４）無荷電極性（すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時折、共に芳香族アミノ酸として分類される。一般に、これらのファミリー内の単一のアミノ酸の置換は、生物学的活性に大きな影響を及ぼさない。ポリペプチドはまた、配列番号１と比較して１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）の単一アミノ酸欠失を含むことができる。ポリペプチドはまた、配列番号１と比較して１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）の挿入（例えば、それぞれ１、２、３、４、または５アミノ酸）を含むことができる。
【００１８】
同様に、ＢＡＡ抗原は、以下：
（ａ）配列番号１と同一（すなわち、１００％同一）であり、
（ｂ）配列番号１と配列同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）を共有し、
（ｃ）配列番号１と比較して、別個の位置であり得るかまたは連続し得る１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（またはそれを超える）の単一アミノ酸変化（欠失、挿入、置換）を有し、そして／あるいは
（ｄ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１とアラインメントした場合、（ｐ個のアミノ酸におよぶアラインメントについて、ｐ＞ｘの場合、ｐ−ｘ＋１個のかかるウィンドウが存在するように）Ｎ末端からＣ末端までのｘ個のアミノ酸の各ムービングウィンドウは、少なくともｘ・ｙ個の同一のアラインメントしたアミノ酸（ｘが２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００から選択される場合、ｙは０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９から選択され、ｘ・ｙが整数でない場合、最も近い整数に切り上げる）を有する、
アミノ酸配列を含むことができる。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトパラメータ（例えば、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用したギャップオープンペナルティ＝１０．０およびギャップ伸長ペナルティ＝０．５を使用）を使用したＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈグローバルアラインメントアルゴリズム［８］である。このアルゴリズムを、ＥＭＢＯＳＳパッケージ中のｎｅｅｄｌｅツール中で都合よく実行する［９］。
【００１９】
群（ｃ）内で、欠失または置換は、Ｎ末端および／またはＣ末端に存在し得るか、２つの末端の間に存在し得る。したがって、短縮は、欠失の一例である。短縮は、Ｎ末端および／またはＣ末端での４０個まで（またはそれを超える）アミノ酸の欠失を含むことができる。Ｎ末端短縮は、例えば、異種宿主中での組換え発現を促進するためにリーダーペプチドを除去することができる。Ｃ末端短縮は、例えば、異種宿主中での組換え発現を促進するためにアンカー配列を除去することができる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＡＡ抗原ポリペプチド配列および少なくとも１つのさらなる抗原（好ましくは、黄色ブドウ球菌抗原）のポリペプチド配列を含む融合タンパク質を提供する。したがって、単一ポリペプチド鎖は、２つの異なる抗原性機能を提供することができる。ＢＡＡおよび２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のさらなる抗原由来のアミノ酸配列からなる融合タンパク質が有用である。
【００２１】
融合タンパク質を、下記のように結合体または非黄色ブドウ球菌抗原と組み合わせることができる。
【００２２】
融合タンパク質を、式ＮＨ２−Ａ−｛−Ｘ−Ｌ−｝ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘは上記の抗原のアミノ酸配列であり、Ｌは任意選択的なリンカーアミノ酸配列であり、Ａは選択的なＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは任意選択的なＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは２以上の整数（例えば、２、３、４、５、６など）である）によって示すことができる。少なくとも１つの−Ｘ−部分はＢＡＡ抗原である。通常、ｎは２または３である。ｎが２である場合、ＢＡＡ配列はＸ１またはＸ２（すなわち、Ｎ末端またはＣ末端抗原）であり得る。
【００２３】
−Ｘ−部分がその野生型形態でリーダーペプチド配列を有する場合、これを融合タンパク質中に含めるか除去することができる。いくつかの実施形態では、リーダーペプチドは、融合タンパク質のＮ末端に存在する−Ｘ−部分のリーダーペプチド以外が欠失されるであろう（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドが保持されるであろうが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドが除去されるであろう）。これは、全てのリーダーペプチドが欠失し、−Ａ−部分としてＸ１のリーダーペプチドを使用することに等しい。
【００２４】
｛−Ｘ−Ｌ−｝の各ｎの場合について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は存在しても存在しなくても良い。例えば、ｎ＝２の場合、融合タンパク質はＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、典型的には短いであろう（例えば、２０個以下のアミノ酸（すなわち、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個））。例は、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎ（式中、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）を含む）およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える））を含む。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。有用なリンカーは、ＧＳＧＧＧＧ（配列番号２）またはＧＳＧＳＧＧＧＧ（配列番号３）であり、これらは、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドがＢａｍＨＩ制限部位から形成されているのでクローニングおよび操作を補助し、（Ｇｌｙ）４テトラペプチドが典型的なポリグリシンリンカーである。特に最終的なＬｎとして使用するための他の適切なリンカーは、ＡＳＧＧＧＳ（配列番号４）またはＬｅｕ−Ｇｌｕジペプチドである。
【００２５】
−Ａ−は任意選択的なＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個））。例には、タンパク質輸送を指示するためのリーダー配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）））が含まれる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。Ｘ１がそれ自体のＮ末端メチオニンを欠く場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニン（例えば、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｓｅｒ）または単一のＭｅｔ残基を提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８アミノ酸を有する）である。
【００２６】
−Ｂ−は任意選択的なＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個））。例には、タンパク質輸送を指示するための配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）を含む）（配列番号５など））、またはタンパク質安定性を増強する配列が含まれる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。
【００２７】
一般に、ポリペプチドが配列番号１と同一でない配列を含む場合（例えば、配列同一性が１００％未満の配列を含む場合またはそのフラグメントを含む場合）または、ポリペプチドがＢＡＡ配列に加えて抗原を含む場合、ポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を有する黄色ブドウ球菌タンパク質を認識する抗体を誘発することができることが好ましい。したがって、本発明のＢＡＡ抗原または融合タンパク質は（例えば、ヒトに投与される場合）、配列番号１として黄色ブドウ球菌ゲノム中でコードされる野生型タンパク質を認識する抗体を誘発することができる。
【００２８】
さらなる黄色ブドウ球菌抗原
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原と組み合わせたＢＡＡ抗原を含む。さらなる抗原は、ポリペプチドおよび／またはサッカリド抗原であり得る。
【００２９】
適切なポリペプチド抗原を、以下から選択することができる（参考文献１０〜１７に開示および定義）：免疫優性ＡＢＣ輸送体、ラミニン受容体、ＳｓａＡ、ＳｉｔＣ（ＭｎｔＣとしても公知）、ＩｓａＡ（ＰｉｓＡまたはＩｓｓＡとしても公知）、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、Ａａｐ、ＲＡＰ（ＲＮＡ ＩＩＩ活性化タンパク質）、ＦＩＧ、ＥｂｐＳ、ＥＦＢ、アルファ毒素（溶血素）、ＳＢＩ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＳｄｒＣ、ＣｌｆＡ、ＦｎｂＡ、ＣｌｆＢ、コアグラーゼ、ＦｎｂＢ、ＭＡＰ、ＨａｒＡ、自己溶菌酵素グルコサミニダーゼ、自己溶菌酵素アミダーゼ、Ｅｂｈ、自己溶菌酵素Ａｎｔ、ＭＲＰＩＩ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＤ、ＳａｓＦ、ＡｈｐＣ、ＡｈｐＦ、コラーゲン結合タンパク質ＣＡＮ、ＧｅｈＤリパーゼ、ヘパリン結合タンパク質ＨＢＰ（１７ｋＤａ）、Ｎｐａｓｅ、ＯＲＦ０５９４、ＯＲＦ０６５７ｎ、ＯＲＦ０８２６、ＰＢＰ４、Ｓａｉ−１、ＳａｓＫ、ＳＢＩ、ＳｄｒＨ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ビトロネクチン結合タンパク質。
【００３０】
適切なサッカリド抗原には、黄色ブドウ球菌莢膜サッカリドおよび／または黄色ブドウ球菌エキソポリサッカリドが含まれる。サッカリド抗原を、キャリアタンパク質に結合体化することができる。
【００３１】
黄色ブドウ球菌のエキソポリサッカリドは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）である。このサッカリドは、細菌からのエキソポリサッカリドの精製中に生じるサイズを有するポリサッカリドであり得るか、または、このサッカリドは、かかるポリサッカリドの断片化によって得られるオリゴサッカリド（例えば、サイズは、４００ｋＤａ超から７５ｋＤａと４００ｋＤａとの間または１０ｋＤａと７５ｋＤａとの間まで、または３０反復単位まで変化し得る）であり得る。サッカリド部分は種々の程度のＮ−アセチル化を有することができ、参考文献１８に記載のように、ＰＮＡＧは、４０％未満Ｎ−アセチル化され得る（例えば、３５、３０、２０、１５、１０、または５％未満のＮ−アセチル化、脱アセチル化ＰＮＡＧはｄＰＮＡＧとしても公知である）。ＰＮＡＧの脱アセチル化エピトープは、オプソニン性の殺傷（ｏｐｓｏｎｉｃ ｋｉｌｌｉｎｇ）を媒介することができる抗体を誘発することができる。ＰＮＡＧは、例えば、２５、２０、１５、１０、５、２、１、または０．１％未満の残基についてＯ−スクシニル化（Ｏ−ｓｕｃｃｉｎｙｌａｔｅｄ）されていてもいなくてもよい。
【００３２】
黄色ブドウ球菌の莢膜サッカリドは、細菌からの莢膜サッカリドの精製中に生じるサイズを有するポリサッカリドであり得るか、または、このサッカリドは、かかるポリサッカリドの断片化によって得られるオリゴサッカリドであり得る。莢膜サッカリドを、任意の適切な黄色ブドウ球菌株（または類似するか同一のサッカリドを有する任意の細菌）から（５型および／または８型黄色ブドウ球菌株および／または３３６型黄色ブドウ球菌株などから）得ることができる。ほとんどの感染性黄色ブドウ球菌株は、５型または８型莢膜サッカリドのいずれかを含む。共にその反復単位中にＦｕｃＮＡｃｐおよび連結のためのスルフヒドリル基を導入するために使用することができるＭａｎＮＡｃＡを有する。５型サッカリドの反復単位は→４）−β−Ｄ−Ｍａｎ ＮＡｃＡ−（１→４）−α−Ｌ−ＦｕｃＮＡｃ（３ＯＡｃ）−（１→３）−β−Ｄ−ＦｕｃＮＡｃ−（１→であるのに対して、８型サッカリドの反復単位は→３）−β−Ｄ−ＭａｎＮＡｃＡ（４ＯＡｃ）−（１→３）−α−Ｌ−ＦｕｃＮＡｃ（１→３）−α−Ｄ−ＦｕｃＮＡｃ（１→である。３３６型サッカリドは、Ｏ−アセチル化を持たないβ連結ヘキソサミンであり［１９、２０］、３３６株（ＡＴＣＣ５５８０４）に対して惹起された抗体と交差反応性を示す。５型と８型サッカリドとの組み合わせが典型的であり、３３６型サッカリドをこの対合物に付加することができる［２１］。
【００３３】
したがって、例えば、組成物は、ＢＡＡ抗原ならびに（ａ）５型莢膜サッカリドの結合体および／または（ｂ）８型莢膜サッカリドの結合体を含むことができる。
【００３４】
結合体中のキャリア部分は、通常、タンパク質であろう。典型的なキャリアタンパク質は、細菌毒素（ジフテリア毒素または破傷風毒素、またはそのトキソイド、変異体、もしくはフラグメントなど）である。ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体［２２］が有用である。他の適切なキャリアタンパク質には、髄膜炎菌外膜タンパク質複合体［２３］）、合成ペプチド［２４、２５］、熱ショックタンパク質［２６、２７］、百日咳タンパク質［２８、２９］、サイトカイン［３０］、リンホカイン［３０］、ホルモン［３０］、成長因子［３０］、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［３１］（Ｎ１９［３２］など）、インフルエンザ菌由来のタンパク質Ｄ［３３〜３５］、ニューモリシン［３６］またはその非毒性誘導体［３７］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［３８］、鉄取り込みタンパク質［３９］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ［４０］、組換え緑膿菌エキソプロテインＡ（ｒＥＰＡ）［４１］などが含まれる。いくつかの実施形態では、キャリアタンパク質は黄色ブドウ球菌タンパク質（ＢＡＡなど）である。
【００３５】
組成物が１つを超える結合体を含む場合、各結合体は同一のキャリアタンパク質または異なるキャリアタンパク質を使用することができる。
【００３６】
結合体は、過剰なキャリア（ｗ／ｗ）または過剰なサッカリド（ｗ／ｗ）を有することができる。いくつかの実施形態では、結合体は、それぞれ実質的に同じ重量で含むことができる。
【００３７】
キャリア分子を、キャリアに共有結合的に直接またはリンカーを介して結合体化することができる。タンパク質への直接結合を、例えば、参考文献４２および４３に記載のように、例えば、サッカリドとキャリアとの間の還元的アミノ化によって行うことができる。サッカリドは、最初に、例えば酸化によって活性化される必要があり得る。リンカー基を介した結合を、任意の公知の手順（例えば、参考文献４４および４５に記載の手順）を使用して行うことができる。好ましい結合型はアジピン酸リンカーであり、これを、遊離−ＮＨ２基（例えば、アミノ化によってグルカンに導入した）のアジピン酸とのカップリング（例えば、ジイミド活性化を使用）およびその後の得られたサッカリド−アジピン酸中間体へのタンパク質のカップリングによって形成することができる［４６、４７］。別の好ましい結合型はカルボニルリンカーであり、これを、サッカリドＣＤＩ［４８、４９］の遊離ヒドロキシル基の反応およびその後のカルバメート結合を形成するためのタンパク質との反応によって形成することができる。他のリンカーには、β−プロピオンアミド［５０］、ニトロフェニル−エチルアミン［５１］、ハロアシルハライド［５２］、グリコシド結合［５３］、６−アミノカプロン酸［５４］、ＡＤＨ［５５］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［５６］などが含まれる。カルボジイミド縮合も使用することができる［５７］。
【００３８】
ＰＮＡＧ結合体を、種々の方法（例えば、ａ）マレイミド基を含むリンカーの付加によってＰＮＡＧを活性化させて活性化されたＰＮＡＧを形成すること、ｂ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってキャリアタンパク質を活性化して活性化されたキャリアタンパク質を形成すること、およびｃ）活性化されたＰＮＡＧおよび活性化されたキャリアタンパク質を反応させてＰＮＡＧ−キャリアタンパク質結合体を形成することを含む過程、またはａ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってＰＮＡＧを活性化して活性化されたＰＮＡＧを形成すること、ｂ）マレイミド基を含むリンカーの付加によってキャリアタンパク質を活性化して活性化されたキャリアタンパク質を形成すること、およびｃ）活性化されたＰＮＡＧおよび活性化されたキャリアタンパク質を反応させてＰＮＡＧ−キャリアタンパク質結合体を形成することを含む過程、またはａ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってＰＮＡＧを活性化させて活性化されたＰＮＡＧを形成すること、ｂ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってキャリアタンパク質を活性化させて活性化されたキャリアタンパク質を形成すること、およびｃ）活性化されたＰＮＡＧおよび活性化されたキャリアタンパク質を反応させてＰＮＡＧ−キャリアタンパク質結合体を形成することを含む過程による）で調製することができる。
【００３９】
非黄色ブドウ球菌抗原
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、少なくとも１つの非黄色ブドウ球菌抗原と組み合わせたＢＡＡ抗原を含む。適切な非ブドウ球菌抗原には、院内感染に関連する細菌由来の抗原が含まれるが、これに限定されない。例えば、抗原は、以下の病原体の１つに由来し得る：表皮ブドウ球菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、緑膿菌、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、および／または腸外病原性大腸菌。ＢＡＡ抗原と組み合わせて用いるさらに適切な抗原は、参考文献５８の３３〜４６頁に列挙されている。
【００４０】
本発明で使用されるポリペプチド
本発明で使用されるポリペプチドは、種々の形態（例えば、天然の（ｎａｔｉｖｅ）形態、融合形態、グリコシル化形態、非グリコシル化形態、脂質付加形態、非脂質付加形態、リン酸化形態、非リン酸化形態、ミリストイル化形態、非ミリストイル化形態、単量体形態、多量体形態、粒子形態、変性形態など）を取ることができる。
【００４１】
本発明で使用されるポリペプチドを、種々の手段（例えば、組換え発現、細胞培養物からの精製、化学合成など）によって調製することができる。特に融合タンパク質のための組換え発現タンパク質が好ましい。
【００４２】
好ましくは、本発明で使用されるポリペプチドは、精製形態または実質的に精製された形態（すなわち、他のポリペプチド（特に、他のブドウ球菌または宿主細胞のポリペプチド）を実質的に含まない（例えば、天然に存在するポリペプチドを含まない））で提供され、一般に、少なくとも約５０％（重量）純粋、通常は少なくとも約９０％純粋である（すなわち、組成物の約５０％未満、より好ましくは約１０％未満（例えば、５％））が他の発現されたポリペプチドで構成されている）。したがって、組成物中の抗原を、この分子が発現される生物全体から分離する。
【００４３】
用語「ポリペプチド」は、任意の長さのアミノ酸ポリマーをいう。ポリマーは直鎖または分岐であってよく、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断されていてよい。この用語はまた、天然で修飾されたか、または介入（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化）または任意の他の操作もしくは修飾（標識化成分との結合体化など）によって修飾されたアミノ酸ポリマーを含む。例えば、アミノ酸の１つ以上のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などが含まれる）を含むポリペプチドおよび当該分野で公知の他の修飾物も含まれる。ポリペプチドは、単一の鎖または会合した鎖として存在することができる。
【００４４】
本発明は、配列−Ｐ−Ｑ−または−Ｑ−Ｐ−（式中、−Ｐ−は上記定義のアミノ酸配列であり、−Ｑ−は上記定義の配列ではない）を含むポリペプチドを提供する（すなわち、本発明は、融合タンパク質を提供する）。−Ｐ−のＮ末端コドンがＡＴＧでないが、このコドンがポリペプチドのＮ末端に存在しない場合、Ｍｅｔとしてではなくこのコドンの標準的アミノ酸として翻訳されるであろう。しかし、このコドンがポリペプチドのＮ末端にある場合、Ｍｅｔとして翻訳されるであろう。−Ｑ−部分の例には、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える））、マルトース結合タンパク質、またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
本発明はまた、ポリペプチド発現を誘導する条件下にて本発明の核酸で形質転換した宿主細胞を培養する工程を含む、本発明のポリペプチドを生産するためのプロセスを提供する。
【００４６】
本発明のポリペプチドの発現がブドウ球菌で起こり得るが、本発明は、通常、発現（組換え発現）のために異種宿主を使用するであろう。異種宿主は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物であり得る。異種宿主は大腸菌であり得るが、他の適切な宿主には、枯草菌、コレラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｃｉｎｅｒｅａ、マイコバクテリア（例えば、結核菌）、酵母などが含まれる。本発明のポリペプチドをコードする野生型黄色ブドウ球菌遺伝子と比較して、コードされたアミノ酸に影響を及ぼすことなくかかる宿主における発現効率を最適にするためにコドンを変化させるのに役立つ。
【００４７】
本発明は、化学的手段によってポリペプチドの少なくとも一部を合成する工程を含む、本発明のポリペプチドを生成するためのプロセスを提供する。
【００４８】
抗体
抗ＢＡＡ抗体を、受動免疫化または免疫療法のために使用することができる。したがって、本発明は、治療で用いる抗ＢＡＡ抗体を提供する。本発明はまた、医薬製造におけるかかる抗体の使用を提供する。本発明はまた、有効量の本発明の抗ＢＡＡ抗体を投与する工程を含む、哺乳動物を処置するための方法を提供する。免疫原性組成物について上記のように、これらの方法および使用により、黄色ブドウ球菌感染および／または疾患から哺乳動物を防御することが可能である。
【００４９】
用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子および抗原に結合することができるそのフラグメントが含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子［５９、６０］、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメントならびにＦｖ分子、非共有結合性ヘテロ二量体［６１、６２］、単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）［６３］、二量体および三量体の抗体フラグメント構築物、ミニボディ［６４、６５］、ヒト化抗体分子［６６〜６８］、およびかかる分子から得られる任意の機能的フラグメントならびに非従来的プロセス（ファージディスプレイなど）によって得られる抗体が含まれる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は当該分野で周知である。ヒト化抗体または完全なヒト抗体が好ましい。
【００５０】
モノクローナル抗体は、指向される個別のポリペプチドの同定および精製で特に有用である。本発明のモノクローナル抗体を、免疫アッセイ、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、または酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などにおける試薬として使用することもできる。これらの適用では、抗体を、分析的に検出可能な試薬（放射性同位体、蛍光分子、または酵素など）で標識することができる。上記方法によって産生されたモノクローナル抗体を、本発明のポリペプチドの分子同定および特徴付け（エピトープマッピング）のために使用することもできる。
【００５１】
本発明の抗体を、好ましくは、精製形態または実質的に精製された形態で提供する。典型的には、抗体は、他のポリペプチドが実質的に存在しない（例えば、組成物の９０％未満（重量）、通常は６０％未満、より通常には５０％未満が他のポリペプチドから構成される場合）組成物中に存在するであろう。
【００５２】
本発明の抗体は任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ（すなわち、α、γ、またはμ重鎖））の抗体であり得るが、一般に、ＩｇＧであろう。ＩｇＧアイソタイプ内で、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスであり得る。本発明の抗体は、κまたはλ軽鎖を有し得る。
【００５３】
抗ＢＡＡ抗体を、抗生物質と併せて患者に投与することができる。抗生物質を、抗体と混合して投与することができるか（したがって、本発明の組成物はブドウ球菌に対して活性な抗生物質を含むことができる）、別個に投与することができる。
【００５４】
抗ＢＡＡ抗体は、例えば、緊急時の予想外または予測不可能な入院（大流行中の集中治療室またはかかる株が地方流行性であることが公知である場合など）のためのこれまたは潜在的に構造的に関連するアドヘシンを保有する黄色ブドウ球菌（または表皮ブドウ球菌）の株に起因する短期間の菌血症リスクのある成人および新生児への注入に特に適切である。抗体を、異物または深在性の感染に関与する黄色ブドウ球菌の菌血症の処置のための補助療法として抗生物質と共に使用することもできる。
【００５５】
核酸
本発明はまた、本発明のポリペプチドおよび融合ポリペプチドをコードする核酸を提供する。本発明はまた、１つ以上の本発明のポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、配列番号８）を含む核酸を提供する。
【００５６】
本発明はまた、かかるヌクレオチド配列と配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。配列間の同一性を、好ましくは、上記のＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムによって決定する。かかる核酸は、同一のアミノ酸をコードするための代替コドンを使用する核酸が含まれる。
【００５７】
本発明はまた、これらの核酸とハイブリダイズすることができる核酸を提供する。ハイブリダイゼーション反応を、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で行うことができる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを増大させる条件は、当該分野で広く知られており、公開されている（例えば、参考文献２５５の７．５２頁）。関連条件の例には、以下が含まれる（記載順にストリンジェンシーが増大する）：インキュベーション温度２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃、緩衝液濃度１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ（ここで、ＳＳＣは、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝液である）および他の緩衝系を使用したその等価物、ホルムアミド濃度０％、２５％、５０％、および７５％、インキュベーション時間５分間〜２４時間、１回、２回、またはそれを超える洗浄工程、洗浄インキュベーション時間１、２、または１５分間、ならびに洗浄溶液６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水。ハイブリダイゼーション技術およびその至適化は当該分野で周知である（例えば、参考文献６９、２５５、２５７などを参照のこと）。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリダイズし、他の実施形態では、中ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし、好ましい実施形態では、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の例示的な設定は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリダイゼーションの例示的な設定は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションの例示的な設定は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００５９】
本発明は、これらの配列と相補的な配列を含む核酸を含む（例えば、アンチセンスまたは探索用、またはプライマー用）。
【００６０】
本発明の核酸を、ハイブリダイゼーション反応（例えば、ノーザンブロットもしくはサザンブロットまたは核酸マイクロアレイ、または「遺伝子チップ」）、増幅反応（例えば、ＰＣＲ、ＳＤＡ、ＳＳＳＲ、ＬＣＲ、ＴＭＡ、ＮＡＳＢＡなど）、および他の核酸技術で使用することができる。
【００６１】
本発明の核酸は、種々の形態（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プライマー、プローブ、標識形態など）を取ることができる。本発明の核酸は環状または分岐であり得るが、一般に、線状であろう。他で特定または要求しない限り、核酸を使用する本発明の任意の実施形態は、二本鎖形態および二本鎖形態を作製する２つの相補的な一本鎖形態の各々の両方を使用することができる。プライマーおよびプローブは、一般に一本鎖であり、アンチセンス核酸もまた同様に一本鎖である。
【００６２】
本発明の核酸を、好ましくは、精製形態または実質的に精製された形態（すなわち、他の核酸を実質的に含まない（例えば、天然に存在する核酸を含まない、特に他のブドウ球菌または宿主細胞の核酸を含まない））で提供し、一般に、少なくとも約５０％（重量）純粋、通常は少なくとも約９０％純粋である。本発明の核酸は、好ましくは、ブドウ球菌核酸である。
【００６３】
本発明の核酸を、多数の方法で（例えば、全体または一部の化学合成（例えば、ＤＮＡのホスホルアミダイト合成）、ヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）を使用したより長い核酸の消化、より短い核酸またはヌクレオチドの連結（例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを使用）による）ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーなどから調製することができる。
【００６４】
本発明の核酸を、固体支持体（例えば、ビーズ、プレート、フィルター、フィルム、スライド、マイクロアレイ支持体、樹脂など）に付着させることができる。本発明の核酸を、例えば、放射性標識もしくは蛍光標識またはビオチン標識で標識することができる。これは、核酸を検出技術で使用する場合（例えば、核酸がプライマーまたはプローブである場合）に特に有用である。
【００６５】
用語「核酸」には、一般的意味において、任意の長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそのアナログを含む）の重合形態が含まれる。核酸には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドが含まれる。核酸には、ＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ（修飾された骨格（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホロチオアート）または修飾された塩基を含むものなど）も含まれる。したがって、本発明は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸、分岐核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを含む。本発明の核酸がＲＮＡ形態をとる場合、核酸は５’キャップを持っても持たなくても良い。
【００６６】
本発明の核酸は、ベクターの一部（すなわち、１つ以上の細胞型の形質導入／トランスフェクションのためにデザインされた核酸構築物の一部）であり得る。ベクターは、例えば、挿入されたヌクレオチドの単離、増殖（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）、および複製のためにデザインされた「クローニングベクター」、宿主細胞中でのヌクレオチド配列の発現のためにデザインされた「発現ベクター」、組換えウイルス粒子または組換えウイルス様粒子が産生されるようにデザインされた「ウイルスベクター」、または１つを超えるベクター型の特性を含む「シャトルベクター」であり得る。好ましいベクターはプラスミドである。「宿主細胞」には、外因性核酸のレシピエントであり得るか、外因性核酸のレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には単一宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、偶発的な、または意図的な変異および／または変化によって（形態または全ＤＮＡ量において）元の親細胞と必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏにて本発明の核酸でトランスフェクトされたか感染された細胞が含まれる。
【００６７】
核酸がＤＮＡである場合、ＲＮＡ配列中の「Ｕ」はＤＮＡ中で「Ｔ」に置き換えられると認識されるであろう。同様に核酸がＲＮＡである場合、ＤＮＡ配列中の「Ｔ」はＲＮＡ中の「Ｕ」に置き換えられると認識されるであろう。
【００６８】
用語「相補物」または「相補性」は、核酸に関して使用する場合、ワトソン−クリック塩基対合をいう。したがって、Ｃの相補物はＧであり、Ｇの相補物はＣであり、Ａの相補物はＴ（またはＵ）であり、Ｔ（またはＵ）の相補物はＡである。例えば、ピリミジン（ＣまたはＴ）を相補するために、Ｉ（プリンであるイノシン）などの塩基を使用することも可能である。
【００６９】
本発明の核酸を、例えば、ポリペプチドを産生するためか、生物学的なサンプル中の核酸の検出のためのハイブリダイゼーションプローブとしてか、核酸のさらなるコピーを生成するためか、リボザイムまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを生成するためか、一本鎖ＤＮＡプライマーまたはプローブとしてか、三本鎖形成オリゴヌクレオチドとして使用することができる。
【００７０】
本発明は、核酸の一部または全部を化学的手段を使用して合成する、本発明の核酸の産生プロセスを提供する。
【００７１】
本発明は、本発明のヌクレオチド配列を含むベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）およびかかるベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。
【００７２】
本発明の核酸増幅は、定量的および／またはリアルタイムであり得る。
【００７３】
本発明の一定の実施形態のために、核酸は、好ましくは、少なくとも７ヌクレオチド長（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００ヌクレオチドまたはそれより長い）である。
【００７４】
本発明の一定の実施形態のために、核酸は、好ましくは、多くても５００ヌクレオチド長（例えば、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５ヌクレオチドまたはそれより短い）である。
【００７５】
本発明のプライマーおよびプローブならびにハイブリダイゼーションのために使用される他の核酸は、好ましくは、１０と３０との間のヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド）である。
【００７６】
変異体細菌
本発明はまた、ＢＡＡ抗原がノックアウトされている黄色ブドウ球菌細菌を提供する。ノックアウト細菌の産生技術は周知であり、ノックアウト黄色ブドウ球菌株が報告されている。ノックアウト変異は、遺伝子のコード領域に存在し得るか、その転写調節領域内（例えば、そのプロモーター内）に存在し得る。ノックアウト変異は、抗原をコードするｍＲＮＡレベルを、野生型細菌によって産生されるレベルの１％未満、好ましくは０．５％未満、より好ましくは０．１％未満、最も好ましくは０％に減少させるであろう。
【００７７】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原がその活性を阻害する変異を有する黄色ブドウ球菌を提供する。抗原をコードする遺伝子は、コードされたアミノ酸配列を変化させる変異を有するであろう。変異は、１つ以上のアミノ酸が関与し得る欠失、置換、および／または挿入を含み得る。
【００７８】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原を高発現する細菌（黄色ブドウ球菌細菌など）を提供する。
【００７９】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原を構成的に発現する細菌（黄色ブドウ球菌細菌など）を提供する。本発明はまた、ＢＡＡ抗原をコードする遺伝子を含み、この遺伝子が誘導性プロモーターの調節下にある、ブドウ球菌を提供する。
【００８０】
免疫原性組成物および医薬
本発明の免疫原性組成物は、ワクチンとして有用であり得る。本発明のワクチンは、予防用（すなわち、感染を予防する）または治療用（すなわち、感染を処置する）のいずれかであり得るが、典型的には予防用であろう。
【００８１】
したがって、組成物は薬学的に許容可能であり得る。組成物は、通常、抗原に加えて成分を含むであろう（例えば、成分は、典型的には、１つ以上の薬学的キャリアおよび／または賦形剤を含む）。かかる成分の徹底的な考察は、参考文献２５２にある。
【００８２】
組成物を、一般に、水性形態で哺乳動物に投与するであろう。しかし、投与前に、組成物は非水性形態であり得る。例えば、いくつかのワクチンは水性形態で製造され、その後同様に水性形態で充填、分配、そして投与されるが、他のワクチンは、製造時に凍結乾燥され、使用時に水性形態に再構成される。したがって、本発明の組成物を乾燥させることができる（凍結乾燥処方物など）。
【００８３】
組成物は、防腐剤（チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールなど）を含むことができる。しかし、ワクチンは、好ましくは、水銀材料を実質的に含まないことが好ましい（すなわち、５μｇ／ｍｌ未満）（例えば、チオメルサールを含まない）。水銀を含まないワクチンがより好ましい。防腐剤を含まないワクチンが特に好ましい。
【００８４】
熱安定性を改善するために、組成物は温度保護剤（ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）を含むことができる。かかる薬剤のさらなる詳細を以下に示す。
【００８５】
張度を調節するために、生理学的塩（ナトリウム塩など）を含めることが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは、１ｍｇ／ｍｌと２０ｍｇ／ｍｌとの間（例えば、約１０±２ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌ）で存在し得る。存在し得る他の塩には、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、無水リン酸二ナトリウム（ｄｉｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが含まれる。
【００８６】
組成物の重量オスモル濃度は、一般に、２００ｍＯｓｍ／ｋｇと４００ｍＯｓｍ／ｋｇとの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇであり、より好ましくは、２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内であろう。
【００８７】
組成物は、１つまたは複数の緩衝液を含むことができる。典型的な緩衝液には、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液（特に、水酸化アルミニウムアジュバントを含む）、またはクエン酸緩衝液が含まれる。緩衝液を、典型的には、５〜２０ｍＭの範囲で含めるであろう。
【００８８】
組成物のｐＨは、一般に、ｐＨ５．０とｐＨ８．１との間、より典型的にはｐＨ６．０とｐＨ８．０との間（例えば、ｐＨ６．５と７．５との間またはｐＨ７．０とｐＨ７．８との間）であろう。
【００８９】
組成物は、好ましくは無菌である。組成物は、好ましくは、発熱性ではない（例えば、用量あたりＥＵ１未満（内毒素単位、一般的尺度）、好ましくは用量あたりＥＵ０．１未満を含む）。組成物は、好ましくはグルテンを含まない。
【００９０】
組成物は、単回免疫化のための材料を含むことができるか、複数回免疫化のための材料を含むことができる（すなわち、「複数回用量」キット）。複数回用量の構成（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）に防腐剤を含めることが好ましい。複数回用量組成物中に防腐剤を含めることの代替として（またはそれに加えて）、材料を取り出すための無菌アダプターを有する容器中に組成物を含めることができる。
【００９１】
ヒトワクチンを、典型的には、約０．５ｍｌの投薬体積で投与するが、半分の用量（すなわち、約０．２５ｍｌ）を小児に投与することができる。
【００９２】
本発明の免疫原性組成物はまた、１つ以上の免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含むことができる。好ましくは、免疫調節剤のうちの１つ以上は、１つまたは複数のアジュバントを含む。アジュバントには、ＴＨ１アジュバントおよび／またはＴＨ２アジュバントが含まれ得、以下でさらに考察されている。
【００９３】
したがって、本発明は、（１）ＢＡＡ抗原と（２）アジュバント（水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、１つ以上の抗原を水酸化アルミニウムに吸着することができる）など）との組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。
【００９４】
本発明の組成物中で使用することができるアジュバントには、以下が含まれるが、これらに限定されない。
【００９５】
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明でアジュバントとしての使用に適切なミネラル含有組成物には、無機塩（アルミニウム塩およびカルシウム塩（またはその混合物）など）が含まれる。カルシウム塩には、リン酸カルシウム（例えば、参考文献７０に開示の「ＣＡＰ」粒子）が含まれる。アルミニウム塩には、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などが含まれ、この塩は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、無定形など）を取る。これらの塩に吸着することが好ましい（例えば、全ての抗原を吸着させることができる）。ミネラル含有組成物を、金属塩粒子として処方することもできる［７１］。
【００９６】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントを使用することができる。これらの名称は従来の名称であるが、存在する実際の化合物を正確に説明していないので、便宜のためだけに使用する（例えば、参考文献７６の第９章を参照のこと）。本発明は、アジュバントとして一般的に使用される任意の「水酸化物」または「リン酸塩」のアジュバントを使用することができる。「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的にはオキシ水酸化アルミニウム塩であり、通常、少なくとも部分的に結晶である。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、ヒドロキシリン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ）であり、しばしば少量の硫酸塩を含む（すなわち、ヒドロキシリン酸硫酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｕｌｆａｔｅ））。これらを沈殿によって得ることができ、沈殿の間の反応条件と濃度が、塩の中のホスフェートでのヒドロキシルの置換の程度に影響を及ぼす。
【００９７】
繊維状の形態（例えば、透過電子顕微鏡写真で認められる）は、水酸化アルミニウムアジュバントの典型である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは、典型的には約１１である（すなわち、アジュバント自体は、生理学的ｐＨで正の表面電荷を有する）。水酸化アルミニウムアジュバントについてｐＨ７．４で１．８〜２．６ｍｇタンパク質／ｍｇ Ａｌ＋＋＋の吸着能が報告されている。
【００９８】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌモル比は、一般に、０．３と１．２との間、好ましくは０．８と１．２との間、より好ましくは０．９５±０．１である。特にヒドロキシリン酸塩について、リン酸アルミニウムは一般に無定形であろう。典型的なアジュバントは、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４と０．９２との間であり、０．６ｍｇ Ａｌ３＋／ｍｌを含む無定形ヒドロキシリン酸アルミニウムである。リン酸アルミニウムは、一般に、粒子状（例えば、透過電子顕微鏡写真で認められる平板様の形態）であろう。任意の抗原吸着後の粒子の典型的な直径は、０．５〜２０μｍの範囲（例えば、約５〜１０μｍ）である。リン酸アルミニウムアジュバントについてｐＨ７．４で０．７〜１．５ｍｇタンパク質／ｍｇ Ａｌ＋＋＋の吸着能が報告されている。
【００９９】
リン酸アルミニウムの電荷ゼロ点（ＰＺＣ）は、ホスフェートでのヒドロキシルの置換の程度と逆の関係にあり、この置換の程度は、沈殿による塩の調製に使用される反応条件と反応物の濃度に応じて変わり得る。ＰＺＣはまた、溶液中の遊離のホスフェートイオンの濃度を変えることによって（より多くのホスフェート＝より酸性のＰＺＣ）、または緩衝液（例えば、ヒスチジン緩衝液）を加えることによって（ＰＺＣをより塩基性にする）も変化させられる。本発明にしたがって使用されるリン酸アルミニウムは、一般的には、４．０〜７．０の間、より好ましくは、５．０〜６．５の間、例えば、約５．７のＰＺＣを有するであろう。
【０１００】
以下に示すように、黄色ブドウ球菌タンパク質抗原（ＩｓｄＡ、Ｓｔａ０１９、およびＳｔａ０７３を除外する）の水酸化アルミニウムアジュバントへの吸着は、特に複数のタンパク質の組み合わせで有利である（全ての抗原を吸着することができる）。ヒスチジン緩衝液を、通常、かかるアジュバント添加組成物（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）中に含めることができる。
【０１０１】
本発明の組成物を調製するために使用されるアルミニウム塩の懸濁液は、緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、またはＴｒｉｓ緩衝液）を含むことができるが、これは常に必要というわけではない。懸濁液は、好ましくは、無菌でありかつ発熱物質を含まない。懸濁液は、例えば、１．０ｍＭと２０ｍＭとの間、好ましくは５ｍＭと１５ｍＭとの間、より好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する遊離水性ホスフェートイオンを含むことができる。懸濁液はまた、塩化ナトリウムを含むことができる。
【０１０２】
本発明は、水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムとの混合物を使用することができる。この場合、リン酸アルミニウムが水酸化アルミニウムよりも大量に存在し得る（例えば、少なくとも２：１の重量比（例えば、５：１以上、６：１以上、７：１以上、８：１以上、９：１以上など）。
【０１０３】
患者への投与のための組成物中のＡｌ＋＋＋濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満（例えば、５ｍｇ／ｍｌ以下、４ｍｇ／ｍｌ以下、３ｍｇ／ｍｌ以下、２ｍｇ／ｍｌ以下、１ｍｇ／ｍｌ以下など）である。好ましい範囲は、０．３ｍｇ／ｍｌと１ｍｇ／ｍｌとの間である。最大で０．８５ｍｇ／用量が好ましい。
【０１０４】
Ｂ．油エマルジョン（ｏｉｌ ｅｍｕｌｓｉｏｎ）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な油エマルジョン組成物には、スクアレン−水エマルジョン（ＭＦ５９［参考文献７６の第１０章を参照のこと；参考文献７２も参照のこと］（５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５（マイクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方））など）が含まれる。フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）も使用することができる。
【０１０５】
種々の水中油型エマルジョンアジュバントが公知であり、これらは、典型的には、少なくとも１つの油および少なくとも１つの界面活性剤を含み、油および界面活性剤は生分解性（代謝性）でありかつ生体適合性である。エマルジョン中の油滴は、一般に直径５μｍ未満であり、理想的にはサブミクロンの直径を有し、マイクロフルイダイザーを使用してこれらの小さなサイズを達成して、安定なエマルジョンを得る。濾過滅菌に供することができるので、２２０ｎｍ未満のサイズの液滴が好ましい。
【０１０６】
エマルジョンは、動物供給源（魚類など）または植物供給源由来の油などの油を含むことができる。植物油の供給源には、堅果、種子、および穀粒が含まれる。ピーナッツ油、ダイズ油、ヤシ油、およびオリーブ油が、最も一般的に入手可能な堅果油の例である。例えば、ホホバ豆から得たホホバ油を使用することができる。種子油には、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、およびゴマ種子油などが含まれる。穀粒の群では、コーン油が最も容易に入手可能であるが、小麦、オート麦、ライ麦、米、テフ、ライ小麦などのようなその他の穀類の穀粒の油も用いてよい。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素の脂肪酸エステル（種子油中に天然に存在しない）を、堅果油および種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離、およびエステル化によって調製することができる。哺乳動物の乳汁由来の脂肪および油は代謝性であるので、本発明の実施に際して使用することができる。動物供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、鹸化、および他の手段のための手順は、当該分野で周知である。ほとんどの魚は、容易に回収することができる代謝性油を含む。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨ろうなどの鯨油は、本明細書中で使用することができる魚油のうちのいくつかの例である。多数の分岐鎖油は５炭素イソプレン単位において生化学的合成され、これを一般にテルペノイドという。サメ肝油は、スクアレン（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエン）として公知である分岐不飽和テルペノイドを含み、これは本明細書中で特に好ましい。スクアラン（スクアレンの飽和アナログ）も好ましい油である。魚油（スクアレンおよびスクアランが含まれる）は商業的供給源から容易に利用可能であるか、当該分野で公知の方法によって得ることができる。他の好ましい油はトコフェロールである（以下を参照のこと）。油の混合物を使用することができる。
【０１０７】
界面活性剤をその「ＨＬＢ」（親水性／親油性バランス）によって分類することができる。本発明の好ましい界面活性剤のＨＬＢは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６である。本発明を、界面活性剤（ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般にＴｗｅｅｎと呼ばれる）（特に、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）；エチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー（ＤＯＷＦＡＸ（商標）（直鎖ＥＯ／ＰＯブロックコポリマーなど）で販売）；オクトキシノール（エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の反復数で変化し得る）（オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（すなわち、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール））が特に興味深い）；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質（ホスファチジルコリン（レシチン）など）；ノニルフェノールエトキシラート（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズなど）；ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、およびオレイルアルコール由来のポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知）（トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ ３０）など）；およびソルビタンエステル（一般にＳｐａｎとして公知）（ソルビタントリオレアート（Ｓｐａｎ８５）およびソルビタンモノラウラートなど）が含まれるが、これらに限定されない）と共に使用することができる。非イオン性界面活性剤が好ましい。エマルジョン中に含めるのに好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレアート）、レシチン、およびＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００である。
【０１０８】
界面活性剤の混合物を使用することができる（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物）。ポリオキシエチレンソルビタンエステル（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（Ｔｗｅｅｎ８０）など）とオクトキシノール（ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）など）との組み合わせも適切である。別の有用な組み合わせは、ラウレス９＋ポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールを含む。
【０１０９】
界面活性剤の好ましい量（重量％）は以下である：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ８０など）０．０１〜１％（特に約０．１％）；オクチルフェノキシポリオキシエタノールまたはノニルフェノキシポリオキシエタノール（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００など）またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の洗剤）０．００１〜０．１％（特に、０．００５〜０．０２％）；ポリオキシエチレンエーテル（ラウレス９など）０．１〜２０％（好ましくは０．１〜１０％、特に０．１〜１％または約０．５％）。
【０１１０】
好ましいエマルジョンアジュバントの平均液滴サイズは、１μｍ未満（例えば、７５０ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、４００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、２５０ｎｍ以下、２２０ｎｍ以下、２００ｎｍまたはそれ未満である。これらの液滴サイズを、微小流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓａｔｉｏｎ）などの技術によって都合よく達成することができる。
【０１１１】
本発明で有用な特定の水中油型エマルジョンアジュバントには、以下が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１２】
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロンエマルジョン。体積によるエマルジョンの組成は、約５％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０、および約０．５％Ｓｐａｎ８５であり得る。重量に関して、これらの比は、４．３％スクアレン、０．５％ポリソルベート８０、および０．４８％Ｓｐａｎ８５となる。このアジュバントは「ＭＦ５９」［７３〜７５］として公知であり、参考文献７６の第１０章および参考文献７７の第１２章により詳細に記載されている。ＭＦ５９エマルジョンは、クエン酸イオンを含むことが有利である（例えば、１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液）。
【０１１３】
・スクアレン、トコフェロール、およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）のエマルジョン。エマルジョンは、リン酸緩衝化生理食塩水を含むことができる。エマルジョンは、Ｓｐａｎ８５（例えば、１％）および／またはレシチンも含むことができる。これらのエマルジョンは、２〜１０％スクアレン、２〜１０％トコフェロール、および０．３〜３％Ｔｗｅｅｎ８０を有することができ、スクアレン：トコフェロールの重量比は、好ましくは１以下である。なぜなら、これにより、より安定なエマルジョンが得られるからである。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は、約５：２の体積比または約１１：５の重量比で存在し得る。１つのかかるエマルジョンを、ＰＢＳ中にＴｗｅｅｎ８０を溶解して２％溶液を得、次いで、９０ｍｌのこの溶液を（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌスクアレン）の混合物と混合し、次いで、混合物を微小流動化することによって作製することができる。得られたエマルジョンは、サブミクロン油滴（例えば、１００ｎｍと２５０ｎｍとの間、好ましくは約１８０ｎｍの直径を有する）を有することができる。エマルジョンはまた、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３ｄ−ＭＰＬ）を含むことができる。この型の別の有用なエマルジョンは、ヒト用量あたり、０．５〜１０ｍｇスクアレン、０．５〜１１ｍｇトコフェロール、および０．１〜４ｍｇポリソルベート８０を含むことができる［７８］。
【０１１４】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎ洗剤（例えば、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）のエマルジョン。エマルジョンはまた、３ｄ−ＭＰＬを含むことができる（以下を参照のこと）。エマルジョンは、リン酸緩衝液を含むことができる。
【０１１５】
・ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ洗剤（例えば、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）、およびトコフェロール（例えば、α−トコフェロールスクシネート）を含むエマルジョン。エマルジョンは、これら３つの成分を約７５：１１：１０の（例えば、７５０μｇ／ｍｌ ポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、および１００μｇ／ｍｌ α−トコフェロールスクシネート）の質量比で含むことができ、これらの濃度は、抗原由来のこれらの成分のあらゆる寄与を含むべきである。エマルジョンはまた、スクアレンを含むことができる。エマルジョンはまた、３ｄ−ＭＰＬを含むことができる（以下を参照のこと）。水相は、リン酸緩衝液を含むことができる。
【０１１６】
・スクアラン、ポリソルベート８０、およびポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）４０１のエマルジョン（「プルロニック（商標）Ｌ１２１」）。エマルジョンを、リン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）中に処方することができる。このエマルジョンはムラミルジペプチドの有用な送達ビヒクルであり、「ＳＡＦ−１」アジュバント［７９］（０．０５〜１％ Ｔｈｒ−ＭＤＰ、５％スクアラン、２．５％プルロニックＬ１２１、および０．２％ポリソルベート８０）中でトレオニル−ＭＤＰと共に使用されている。これを、「ＡＦ」アジュバント［８０］（５％スクアラン、１．２５％プルロニックＬ１２１、および０．２％ポリソルベート８０）のようにＴｈｒ−ＭＤＰを使用せずに使用することもできる。微小流動化が好ましい。
【０１１７】
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）、および疎水性非イオン性界面活性剤（例えば、ソルビタンエステルまたはマンニドエステル（ソルビタンモノオレアートまたは「Ｓｐａｎ８０」など））を含むエマルジョン。エマルジョンは、好ましくは熱可逆性であり、そして／またはサイズが２００ｎｍ未満の油滴を少なくとも９０％（体積）有する［８１］。エマルジョンはまた、１つ以上の以下のものを含むことができる：アルジトール、凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）（例えば、糖（ドデシルマルトシドおよび／またはスクロースなど））、および／またはアルキルポリグリコシド。エマルジョンは、ＴＬＲ４アゴニストを含むことができる［８２］。かかるエマルジョンを凍結乾燥することができる。
・スクアレン、ポロキサマー１０５、およびＡｂｉｌ−Ｃａｒｅのエマルジョン［８３］。アジュバント添加ワクチン中のこれらの成分の最終濃度（重量）は、５％スクアレン、４％ポロキサマー１０５（プルロニックポリオール）、および２％Ａｂｉｌ−Ｃａｒｅ８５（Ｂｉｓ−ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６ ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６ジメチコン、カプリル酸トリグリセリド／カプリン酸トリグリセリド）である。
【０１１８】
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルジョン。参考文献８４に記載のように、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、およびカルジオリピンである。サブミクロン液滴サイズが有利である。
【０１１９】
・非代謝性油（軽鉱油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ））および少なくとも１つの界面活性剤（レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０、またはＳｐａｎ８０など）のサブミクロン水中油型エマルジョン。添加物を含むことができる（ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン−親油性結合体（グルクロン酸のカルボキシル基を介したデスアシルサポニンへの脂肪族アミンの付加によって生成された参考文献８５に記載のＧＰＩ−０１００など）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、および／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンなど）。
【０１２０】
・らせん状ミセルとしてサポニン（例えば、ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）およびステロール（例えば、コレステロール）を会合させたエマルジョン［８６］。
【０１２１】
・鉱油、非イオン性親油性エトキシ化脂肪アルコール、および非イオン性親水性界面活性剤（例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含むエマルジョン［８７］。
【０１２２】
・鉱油、非イオン性親水性エトキシ化脂肪アルコール、および非イオン性親油性界面活性剤（例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含むエマルジョン［８７］。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、エマルジョンを、送達時に抗原と即座に混合することができ、したがって、使用時に最終処方物にできる状態でアジュバントおよび抗原をパッケージングされたワクチンまたは分配されたワクチン中で別個に保持することができる。他の実施形態では、エマルジョンを製造中に抗原と混合する。したがって、組成物を液体のアジュバント添加形態でパッケージングする。２つの液体の混合によってワクチンが最終的に調製されるように、抗原は一般に水性形態であろう。混合のための２液体の体積比は変化し得るが（例えば、５：１と１：５との間）、一般に１：１である。上記の特定のエマルジョンの説明で成分の濃度を示す場合、これらの濃度は典型的には非希釈組成物についてである。したがって、抗原溶液との混合後の濃度は減少するであろう。
【０１２４】
組成物がトコフェロールを含む場合、αトコフェロール、βトコフェロール、γトコフェロール、δトコフェロール、εトコフェロール、またはζトコフェロールのいずれかを使用することができるが、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、いくつかの形態を取ることができる（例えば、異なる塩および／または異性体）。塩には、有機塩（コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩など）が含まれる。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールの両方を使用することができる。高齢患者（例えば、６０歳以上）用のワクチン中にトコフェロールを含めることが有利である。何故なら、ビタミンＥはこの患者群における免疫応答に正の効果を有すると報告されているからである［８８］。トコフェロールは抗酸化特性も有し、これは、エマルジョンの安定化に役立ち得る［８９］。好ましいα−トコフェロールはＤＬ−α−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩はコハク酸塩である。コハク酸塩は、ｉｎ ｖｉｖｏでＴＮＦ関連リガンドと連携することが見出されている。
【０１２５】
Ｃ．サポニン処方物［参考文献７６の第２２章］
サポニン処方物を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。サポニンは、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの不均質な群であり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根で見出され、花にさえも見出される。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅの樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ）、およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ）由来のサポニンを購入することもできる。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物（ＱＳ２１など）および脂質処方物（ＩＳＣＯＭなど）が含まれる。ＱＳ２１は、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）として市販されている。
【０１２６】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製されている。これらの技術を使用した特定の精製画分が同定されている（ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが含まれる）。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の産生方法は、参考文献９０に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（コレステロールなど）を含むことができる［９１］。
【０１２７】
サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成することができる［参考文献７６の第２３章］。ＩＳＣＯＭは、典型的には、リン脂質（ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなど）も含む。任意の公知のサポニンをＩＳＣＯＭで使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ、およびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献９１〜９３にさらに記載されている。任意選択的に、ＩＳＣＯＭＳは、追加の洗剤を欠き得る［９４］。
【０１２８】
サポニンベースアジュバント開発の概説を、参考文献９５および９６で見出すことができる。
【０１２９】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。これらの構造は、一般に、任意選択的にリン脂質と組み合わせたか処方したウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。これらは一般に非病原性であり、増幅せず、かつ一般にいかなる天然のウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質を組換え的に産生するか、全ウイルスから単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰでの使用に適切なこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（ＨＡまたはＮＡなど）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（コアタンパク質またはキャプシドタンパク質など）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビス・ウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒト乳頭腫ウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡ−ファージ由来のタンパク質、Ｑβ−ファージ由来のタンパク質（外被タンパク質など）、ＧＡ−ファージ由来のタンパク質、ｆｒ−ファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質、およびＴｙ由来のタンパク質（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）が含まれる。ＶＬＰは、参考文献９７〜１０２でさらに考察されている。ビロソームは、例えば、参考文献１０３でさらに考察されている。
【０１３０】
Ｅ．細菌または微生物の誘導体
本発明での使用に適切なアジュバントには、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、脂質Ａ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチド、およびＡＤＰ−リボシル化毒素、およびその解毒誘導体などの細菌または微生物の誘導体が含まれる。
【０１３１】
ＬＰＳの非毒性誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３ ｄｅ−Ｏ−ａｃｙｌａｔｅｄ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａ）の、４、５、または６のアシル化された鎖を有するものの混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、参考文献１０４に開示されている。かかる３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μｍ膜を通して濾過滅菌するのに十分に小さい［１０４］。他の非毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ模倣物、例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９）が挙げられる［１０５、１０６］。
【０１３２】
脂質Ａ誘導体には、大腸菌由来の脂質Ａの誘導体（ＯＭ−１７４など）が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献１０７および１０８に記載されている。
【０１３３】
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列（グアノシンへのリン酸結合（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｏｎｄ）によって連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）が含まれる。回文配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドは、免疫刺激性であることも示されている。
【０１３４】
ＣｐＧはヌクレオチド修飾／アナログ（ホスホロチオエート修飾など）を含むことができ、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献１０９、１１０、および１１１は、可能なアナログ置換を開示している（例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンとの置換）。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１１２〜１１７でさらに考察されている。
【０１３５】
ＣｐＧ配列をＴＬＲ９に指向することができる（モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなど）［１１８］。ＣｐＧ配列はＴｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか（ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなど）、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る（ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなど）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１１９〜１２１で考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１３６】
好ましくは、受容体認識のために５’末端に接近可能であるようにＣｐＧ オリゴヌクレオチドを構築する。任意選択的に、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列を３’末端で結合させて、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成することができる。例えば、参考文献１１８および１２２〜１２４を参照のこと。
【０１３７】
有用なＣｐＧアジュバントはＣｐＧ７９０９（ＰｒｏＭｕｎｅ（商標）（Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）としても公知）である。別のものはＣｐＧ１８２６である。ＣｐＧ配列を使用することの代わりとしてまたはそれに加えて、ＴｐＧ配列を使用することができ［１２５］、これらのオリゴヌクレオチドは非メチル化ＣｐＧモチーフを含まなくてよい。免疫刺激オリゴヌクレオチドはピリミジンリッチであり得る。例えば、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１つを超える連続するチミジンヌクレオチド（例えば、参考文献１２５に開示のＴＴＴＴ）を含むことができ、そして／または２５％超のチミジン（例えば、３５％超、４０％超、５０％超、６０％超、８０％超など）を有するヌクレオチド組成を有することができる。例えば、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１つを超える連続するシトシンヌクレオチド（例えば、参考文献１２５に開示のＣＣＣＣ）を含むことができ、そして／または２５％超のシトシン（例えば、３５％超、４０％超、５０％超、６０％超、８０％超など）を有するヌクレオチド組成を有することができる。これらのオリゴヌクレオチドは、非メチル化ＣｐＧモチーフを含まなくて良い。免疫刺激オリゴヌクレオチドは、典型的には、少なくとも２０個のヌクレオチドを含むであろう。免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１００個未満のヌクレオチドを含むことができる。
【０１３８】
免疫刺激オリゴヌクレオチドに基づいた特に有用なアジュバントは、ＩＣ−３１（商標）として公知である［１２６］。したがって、本発明で使用されるアジュバントは、（ｉ）少なくとも１つの（好ましくは複数の）ＣｐＩモチーフ（すなわち、ジヌクレオチドを形成するためにイノシンに連結したシトシン）を含むオリゴヌクレオチド（例えば、１５〜４０ヌクレオチド）と、（ｉｉ）ポリカチオン性ポリマー（少なくとも１つの（好ましくは複数の）Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓトリペプチド配列を含むオリゴペプチド（例えば、５〜２０アミノ酸）など）との混合物を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、２６ｍｅｒの配列５’−（ＩＣ）１３−３’（配列番号６）を含むデオキシヌクレオチドであり得る。ポリカチオン性ポリマーは、１１ｍｅｒのアミノ酸配列ＫＬＫＬＬＬＬＬＫＬＫ（配列番号７）を含むペプチドであり得る。オリゴヌクレオチドおよびポリマーは、例えば、参考文献１２７および１２８に開示の複合体を形成することができる。
【０１３９】
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することができる。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（大腸菌熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、参考文献１２９に記載されており、非経口アジュバントとしての使用は参考文献１３０に記載されている。毒素またはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロ毒素の形態である。好ましくは、Ａサブユニットは解毒変異を含み、好ましくは、Ｂサブユニットは変異していない。好ましくは、アジュバントは解毒ＬＴ変異体（ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２など）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用を、参考文献１３１〜１３８に見出すことができる。有用なＣＴ変異体はＣＴ−Ｅ２９Ｈである［１３９］。アミノ酸置換についての数値での参照は、好ましくは、参考文献１４０（特にその全体が本明細書中で参照として援用される）に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１４０】
Ｆ．ヒト免疫調節因子
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節因子には、サイトカイン（インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１４１］など）［１４２］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子など）が含まれる。好ましい免疫調節因子はＩＬ−１２である。
【０１４１】
Ｇ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤を、本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフィア［１４３］または粘膜接着剤（ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリド、およびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体など）が含まれる。キトサンおよびその誘導体を、本発明中でアジュバントとして使用することもできる［１４４］。
【０１４２】
Ｈ．微粒子
微粒子を、本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を使用して生分解性且つ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成した微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、任意選択的に、負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳを使用）または正に荷電した表面（例えば、ＣＴＡＢなどのカチオン性洗剤を使用）を有するように処理する。
【０１４３】
Ｉ．リポソーム（参考文献７６の第１３章および第１４章）
アジュバントとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１４５〜１４７に記載されている。
【０１４４】
Ｊ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明での使用に適切なアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる［１４８］。かかる処方物には、さらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１４９］および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（オクトキシノールなど）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤［１５０］が含まれる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１４５】
Ｋ．ホスファゼン
ホスファゼン（例えば、参考文献１５１および１５２に記載のポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン］（「ＰＣＰＰ」）など）を使用することができる。
【０１４６】
Ｌ．ムラミルペプチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１４７】
Ｍ．イミダゾキノロン化合物。
【０１４８】
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なイミダゾキノロン化合物の例には、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）（「Ｒ−８３７」）［１５３、１５４］、レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（「Ｒ−８４８」）［１５５］、そのアナログ、およびその塩（例えば、塩酸塩）が含まれる。免疫刺激性イミダゾキノリンについてのさらなる詳細を、参考文献１５６〜１６０で見出すことができる。
【０１４９】
Ｎ．置換尿素
アジュバントとして有用な置換尿素には、参考文献１６１に定義の以下の式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩ：
【０１５０】
【化１】
の化合物またはその塩（「ＥＲ８０３０５８」、「ＥＲ８０３７３２」、「ＥＲ８０４０５３」、「ＥＲ８０４０５８」、「ＥＲ８０４０５９」、「ＥＲ８０４４４２」、「ＥＲ８０４６８０」、「ＥＲ８０４７６４」、ＥＲ８０３０２２、または「ＥＲ８０４０５７」など）（例えば、
【０１５１】
【化２】
）が含まれる。
【０１５２】
Ｏ．さらなるアジュバント
本発明で使用することができるさらなるアジュバントには以下が含まれる。
【０１５３】
・黄色ブドウ球菌ワクチンのための有用なアジュバントとして報告されている環状ジグアニレート（「ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ」）［１６２］。
【０１５４】
・チオセミカルバゾン化合物（参考文献１６３に開示のものなど）。活性化合物を処方、製造、およびスクリーニングする方法も参考文献１６３に記載されている。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１５５】
・トリプタントリン（ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎ）化合物（参考文献１６４に開示のものなど）。活性化合物を処方、製造、およびスクリーニングする方法も参考文献１６４に記載されている。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１５６】
・ヌクレオシドアナログ（（ａ）イサトラビン（Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ）（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアノシン）：
【０１５７】
【化３】
およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）参考文献１６５〜１６７に開示の化合物ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン）など）［１６８］。
【０１５８】
・参考文献１６９に開示の化合物（アシルピペラジン化合物、インドールジオン化合物、テトラヒドライソキノリン（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン化合物、アミノアザビニル化合物、アミノベンズイミダゾールキノリノン（ＡＢＩＱ）化合物［１７０、１７１］、ヒドラフタルアミド化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナジリノン化合物、ピロール化合物［１７２］、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラゾロピリミジン（ｐｙｒａｚａｌｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）化合物、およびベンザゾール化合物［１７３］が含まれる）。
【０１５９】
・ホスフェート含有非環式骨格に連結された脂質を含む化合物（ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４など［１７４、１７５］）。
【０１６０】
・ポリオキシドニウムポリマー［１７６、１７７］または他のＮ酸化ポリエチレン−ピペラジン誘導体。
【０１６１】
・メチルイノシン５’−モノホスフェート（「ＭＩＭＰ」）［１７８］。
【０１６２】
・ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物［１７９］あるいはその薬学的に許容される塩または誘導体、例えば、以下の式を持つもの：
【０１６３】
【化４】
ここで、Ｒは、水素、直鎖または分岐鎖である非置換または置換された飽和または不飽和のアシル基、アルキル基（例えば、シクロアルキル基）、アルケニル基、アルキニル基、およびアリール基を含む群から選択される。例には、カスアリン、カスアリン−６−α−Ｄ−グルコピラノース、３−エピ−カスアリン、７−エピ−カスアリン、３，７−ジエピ−カスアリンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６４】
・ＣＤ１ｄリガンド（α−グリコシルセラミド［１８０〜１８７］（例えば、α−ガラクトシルセラミド）、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール）、ＣＲＯＮＹ−１０１、３”−Ｏ−スルホ−ガラクトシルセラミドなど）。
【０１６５】
・γイヌリン［１８８］またはその誘導体（アルガムリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）など）。
【０１６６】
【化５】
アジュバントの組み合わせ
本発明はまた、上記で同定されたアジュバントの１つ以上の組み合わせを含むことができる。例えば、以下のアジュバント組成物を本発明で使用することができる：（１）サポニンおよび水中油型エマルジョン［１８９］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［１９０］；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（任意選択的に、＋ステロール）［１９１］；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組み合わせ［１９２］；（６）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０（商標）、５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロンエマルジョンに微小流動化されたかまたはボルテックスされてより大きな粒子サイズのエマルジョンにしたＳＡＦ、（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁成分を含むＲｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および（８）１つ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＭＰＬなど）。
【０１６７】
免疫刺激剤として作用する他の物質は、参考文献７６の第７章に開示されている。
【０１６８】
水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が特に好ましく、抗原を一般にこれらの塩に吸着させる。リン酸カルシウムは別の好ましいアジュバントである。他の好ましいアジュバントの組み合わせには、Ｔｈ１アジュバントとＴｈ２アジュバントとの組み合わせ（ＣｐＧおよびミョウバンまたはレシキモドおよびミョウバンなど）が含まれる。リン酸アルミニウムと３ｄＭＰＬとの組み合わせを使用することができる。
【０１６９】
本発明の組成物は、細胞媒介免疫応答および体液性免疫応答の両方を誘発することができる。この免疫応答は、好ましくは、肺炎球菌への曝露の際に迅速に応答することができる持続性（例えば、中和）抗体および細胞媒介免疫を誘導するであろう。
【０１７０】
２つのＴ細胞型（ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞）は、一般に、細胞媒介免疫および体液性免疫を開始および／または増強する必要があると考えられる。ＣＤ８Ｔ細胞はＣＤ８共受容体を発現することができ、これを一般に細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）という。ＣＤ８Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子上に提示された抗原を認識するかこれと相互作用することができる。
【０１７１】
ＣＤ４Ｔ細胞はＣＤ４共受容体を発現することができ、一般にＴヘルパー細胞という。ＣＤ４Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合した抗原性ペプチドを認識することができる。ＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用の際、ＣＤ４細胞は、サイトカインなどの因子を分泌することができる。これらの分泌されたサイトカインは、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、および免疫応答に関与する他の細胞を活性化することができる。ヘルパーＴ細胞またはＣＤ４＋細胞を、以下の２つの機能的に異なるサブセットにさらに分類することができる：そのサイトカインおよびエフェクターの機能が異なるＴＨ１表現型およびＴＨ２表現型。
【０１７２】
活性化されたＴＨ１細胞は、細胞性免疫（抗原特異的ＣＴＬ産生の増加が含まれる）を増強し、したがって、細胞内感染に対する応答で特に有益である。活性化されたＴＨ１細胞は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−βのうちの１つ以上を分泌することができる。ＴＨ１免疫応答により、マクロファージ、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、およびＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の活性化による局所炎症反応が起こり得る。ＴＨ１免疫応答はまた、ＩＬ−１２でのＢ細胞およびＴ細胞の成長を刺激することによって免疫応答を拡大するように作用することができる。ＴＨ１刺激されたＢ細胞はＩｇＧ２ａを分泌することができる。
【０１７３】
活性化されたＴＨ２細胞は抗体産生を増強し、したがって、細胞外感染に対する応答で有益である。活性化されたＴＨ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０のうちの１つ以上を分泌することができる。ＴＨ２免疫応答により、将来の防御のためのＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞の産生をもたらすことができる。
【０１７４】
増強された免疫応答には、増強されたＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答のうちの１つ以上が含まれ得る。
【０１７５】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬの増加、１つ以上のＴＨ１免疫応答に関連するサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−βなど）の増加、活性化されたマクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加のうちの１つ以上が含まれ得る。好ましくは、増強されたＴＨ１免疫応答には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれるであろう。
【０１７６】
ＴＨ１免疫応答を、ＴＨ１アジュバントを使用して誘発することができる。ＴＨ１アジュバントは、一般に、アジュバントを使用しない抗原の免疫化と比較して、ＩｇＧ２ａ産生レベルの増加を誘発するであろう。本発明での使用に適切なＴＨ１アジュバントには、例えば、サポニン処方物、ビロソームおよびウイルス様粒子、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドが含まれ得る。免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドなど）は、本発明での使用に好ましいＴＨ１アジュバントである。
【０１７７】
ＴＨ２免疫応答には、１つ以上のＴＨ２免疫応答に関連するサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０など）の増加またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞の産生の増加の１つ以上が含まれ得る。好ましくは、増強されたＴＨ２免疫応答（ｒｅｓｏｎｓｅ）には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれるであろう。
【０１７８】
ＴＨ２免疫応答を、ＴＨ２アジュバントを使用して誘発することができる。ＴＨ２アジュバントは、一般に、アジュバントを使用しない抗原の免疫化と比較して、ＩｇＧ１産生レベルの増加を誘発するであろう。本発明での使用に適切なＴＨ２アジュバントには、例えば、ミネラル含有組成物、油エマルジョン、およびＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体が含まれる。ミネラル含有組成物（アルミニウム塩など）は、本発明での使用に好ましいＴＨ２アジュバントである。
【０１７９】
好ましくは、本発明は、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントとの組み合わせを含む組成物を含む。好ましくは、かかる組成物は、増強されたＴＨ１応答および増強されたＴＨ２応答（すなわち、アジュバントを使用しない免疫化と比較して、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの両方の産生の増加）を誘発する。さらにより好ましくは、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントとの組み合わせを含む組成物は、単一アジュバントを使用した免疫化と比較して（すなわち、ＴＨ１アジュバントのみを使用した免疫化またはＴＨ２アジュバントのみを使用した免疫化と比較して）、増加したＴＨ１免疫応答および／または増加したＴＨ２免疫応答を誘発する。
【０１８０】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答により、増強されたＴＨ１応答および増強されたＴＨ２応答の一方または両方が得られる。
【０１８１】
増強された免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答により、増強された全身免疫応答および増強された粘膜免疫応答の一方または両方が得られる。好ましくは、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８２】
黄色ブドウ球菌感染は身体の種々の領域に影響を及ぼし得るので、本発明の組成物を、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を、溶液または懸濁液のいずれかとしての注射液として調製することができる。注射前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液に適切な固体形態も調製することができる（例えば、凍結乾燥組成物または噴霧−凍結乾燥組成物）。例えば、軟膏、クリーム、または粉末として局所投与用の組成物を調製することができる。経口投与用の組成物を、例えば、錠剤もしくはカプセル、スプレー、またはシロップ（任意選択的に、風味づけする）として調製することができる。肺投与用の組成物を、例えば、微細な粉末またはスプレーを使用した吸入器として調製することができる。組成物を、坐剤またはペッサリーとして調製することができる。鼻、耳、または眼への投与のための組成物を、例えば、点滴剤として調製することができる。組成物は、合わせた組成物が患者への投与直前に再構成されるようにデザインされたキット形態であり得る。かかるキットは、液体形態の１つ以上の抗原および１つ以上の凍結乾燥抗原を含むことができる。
【０１８３】
組成物が使用前に即席で調製され（例えば、成分が凍結乾燥形態で存在する場合）、且つキットとして提示される場合、キットは２つのバイアルを含むことができるか、１つの予め充填されたシリンジおよび１つのバイアルを含むことができ、シリンジの内容物を使用して、注射前にバイアルの内容物を再活性化する。
【０１８４】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の抗原および必要に応じた任意の他の成分を含む。「免疫学的に有効な量」によって、単回用量または一連の用量の一部のいずれかでの個体への投与量が処置または予防に有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康状態および身体の状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系の抗体合成能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、処置を行う医師の医学的状況の評価、および他の関連する要因に応じて変化する。この量は、比較的広い範囲に含まれ、これを慣用的な試験によって決定することができると予想される。１つを超える抗原が組成物中に含まれる場合、２つの抗原は相互に同一の用量または異なる用量で存在することができる。
【０１８５】
上記のように、組成物は温度保護剤を含むことができ、この成分は特にアジュバント添加組成物（特に、アルミニウム塩などの無機アジュバントを含むもの）で有用であり得る。参考文献１９３に記載のように、その凝固点を低下させるために（例えば、凝固点を０℃未満に低下させるために）、液体温度保護剤を水性ワクチン組成物に添加することができる。したがって、組成物を０℃未満であるがその凝固点より高い温度で保存して、熱による分解を阻止することができる。温度保護剤はまた、無機塩アジュバントを凍結融解後の凝集または沈殿から保護しながら組成物を凍結させ、高温（例えば、４０℃超）でもこの組成物を保護することもできる。液体温度保護剤が最終混合物の体積で１％〜８０％を形成するように、出発水性ワクチンおよび液体温度保護剤を混合することができる。適切な温度保護剤は、ヒト投与に安全であり、水において容易に混和性／可溶性であるべきであり、かつ組成物中の他の成分（例えば、抗原およびアジュバント）に損傷を与えるべきではない。例には、グリセリン、プロピレングリコール、および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。適切なＰＥＧの平均分子量は、２００Ｄａ〜２０，０００Ｄａの範囲であり得る。好ましい実施形態では、ポリエチレングリコールの平均分子量は、約３００Ｄａ（「ＰＥＧ−３００」）であり得る。
【０１８６】
本発明は、（ｉ）第１の抗原群、第２の抗原群、第３の抗原群、または第４の抗原群から選択される１つ以上の抗原および（ｉｉ）温度保護剤を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物を（ｉ）、第１の抗原群、第２の抗原群、第３の抗原群、または第４の抗原群から選択される１つ以上の抗原を含む水性組成物と、（ｉｉ）温度保護剤とを混合することによって形成することができる。次いで、混合物を、例えば、０℃未満、０℃〜２０℃、２０℃〜３５℃、３５℃〜５５℃、またはそれを超える温度で保存することができる。これを、液体形態または凍結形態で保存することができる。混合物を凍結乾燥することができる。あるいは、組成物を、（ｉ）第１の抗原群、第２の抗原群、第３の抗原群、または第４の抗原群から選択される１つ以上の抗原を含む乾燥組成物と、（ｉｉ）温度保護剤を含む液体組成物とを混合することによって形成することができる。したがって、成分（ｉｉ）を使用して、成分（ｉ）を再構成することができる。
【０１８７】
処置方法およびワクチンの投与
本発明はまた、有効量の本発明の抗原、タンパク質、または免疫原性組成物を投与する工程を含む、哺乳動物における免疫応答を惹起するための方法を提供する。免疫応答は、防御性のものが好ましく、抗体媒介免疫および／または細胞媒介免疫を含むことが好ましい。本方法は、追加免疫応答（ｂｏｏｓｔｅｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を惹起することができる。
【０１８８】
本発明はまた、有効量の本発明の抗原、タンパク質、または免疫原性組成物を投与する工程を含む、黄色ブドウ球菌に対して哺乳動物を免疫化するための方法を提供する。
【０１８９】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化のための医薬の製造におけるＢＡＡ抗原の使用を提供する。
【０１９０】
本発明はまた、治療で用いるための本発明の融合タンパク質または免疫原性組成物を提供する。
【０１９１】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化のための医薬の製造における本発明の融合タンパク質の使用を提供する。
【０１９２】
本発明は、治療で用いるための本発明の抗ＢＡＡ抗体を提供する。本発明はまた、黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染の防御および／または処置のための医薬の製造における抗ＢＡＡ抗体の使用を提供する。
【０１９３】
これらの使用および方法による哺乳動物における免疫応答の惹起により、哺乳動物を黄色ブドウ球菌感染（院内感染が含まれる）から防御することができる。より詳細には、哺乳動物を、カテーテル関連血流感染（ｃａｔｈｅｔｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｂｌｏｏｄ ｓｔｒｅａｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、皮膚感染、肺炎、髄膜炎、骨髄炎、心内膜炎、トキシックショック症候群、および／または敗血症から防御することができる。
【０１９４】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物を予め充填した送達デバイスを提供する。
【０１９５】
哺乳動物は、好ましくは、ヒトである。ワクチンが予防用である場合、ヒトは、好ましくは、小児（例えば、よちよち歩きの小児（ｔｏｄｄｌｅｒ）または乳児）またはティーンエージャーであり、ワクチンが治療用である場合、ヒトは、好ましくは、ティーンエージャーまたは成人である。例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために、小児用ワクチンを成人に投与することもできる。本発明にしたがって有用に免疫化することができる他の哺乳動物は、ウシ、イヌ、ウマ、およびブタである。
【０１９６】
治療上の処置の有効性をチェックするための１つの方法は、本発明の組成物の投与後の黄色ブドウ球菌感染のモニタリングを含む。予防上の処置の有効性をチェックするための１つの方法は、本発明の組成物の投与後の本発明の組成物中の抗原に対する全身（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの産生レベルのモニタリングなど）および／または粘膜（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の免疫応答のモニタリングを含む。典型的には、抗原特異的血清抗体応答を免疫化後の他に攻撃誘発前に決定するのに対して、抗原特異的粘膜抗体応答は、免疫化後および攻撃誘発後に決定する。
【０１９７】
本発明の組成物の免疫原性を評価する別の方法は、免疫ブロットおよび／またはマイクロアレイによる患者の血清または粘膜の分泌物をスクリーニングするためにタンパク質を組換え的に発現することである。タンパク質と患者サンプルとの間の陽性反応は、患者が、問題のタンパク質に対する免疫応答を確立した（ｍｏｕｎｔ）ことを示す。この方法を使用して、抗原内の免疫優性の抗原および／またはエピトープを同定することもできる。
【０１９８】
ワクチン組成物の有効性を、ワクチン組成物での黄色ブドウ球菌感染の動物モデル（例えば、モルモットまたはマウス）の攻撃誘発（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）によってｉｎ ｖｉｖｏで決定することもできる。特に、黄色ブドウ球菌感染症研究のための有用な動物モデルは３つ（すなわち、（ｉ）マウス膿瘍モデル［１９４］、（ｉｉ）マウス致死的感染モデル［１９４］、および（ｉｉｉ）マウス肺炎モデル［１９５］）存在する。膿瘍モデルは、静脈内攻撃誘発後のマウス腎臓中の膿瘍を検査する。致死的感染モデルは、静脈内経路または腹腔内経路による通常の致死量の黄色ブドウ球菌による感染後に生存するマウスの数を検査する。肺炎モデルも生存率を検査するが、鼻腔内感染を使用する。有用なワクチンは、これらのモデルのうちの１つ以上で有効であり得る。例えば、いくつかの臨床的状況について、血液への拡散の防止やオプソニン作用の促進を必要とすることなく肺炎から防御することが望ましいかもしれない。他の状況では、血液への拡散を防止することが最も望ましいかもしれない。異なる抗原および異なる抗原の組み合わせは、有効なワクチンの異なる態様に寄与し得る。
【０１９９】
本発明の組成物を、一般に、患者に直接投与するであろう。非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質腔内）によるか、粘膜（直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）または経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、鼻腔内、眼、耳、肺、または他の粘膜投与など）によって直接送達させることができる。
【０２００】
本発明を使用して、全身免疫および／または粘膜免疫を誘発し、好ましくは、増強された全身免疫および／または粘膜免疫を誘発することができる。
【０２０１】
好ましくは、全身免疫および／または粘膜免疫の増強は、ＴＨ１および／またはＴＨ２免疫応答の増強を反映する。好ましくは、免疫応答の増強には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡの産生の増加が含まれる。
【０２０２】
単回用量スケジュールまたは複数用量スケジュールによって投薬することができる。複数用量を、一次免疫化スケジュールおよび／または追加免疫化スケジュールで使用することができる。複数用量スケジュールでは、同一または異なる経路（例えば、非経口での初回刺激（ｐｒｉｍｅ）および粘膜の追加刺激（ｂｏｏｓｔ）、粘膜の初回刺激および非経口の追加刺激など）によって種々の用量を投与することができる。複数用量を、典型的には、少なくとも１週間間隔（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１０週間、約１２週間、約１６週間など）で投与するであろう。
【０２０３】
本発明にしたがって調製したワクチンを使用して、小児および成人の両方を処置することができる。したがって、ヒト患者は、１歳未満、１〜５歳、５〜１５歳、１５〜５５歳、または少なくとも５５歳であり得る。ワクチンを受容するのに好ましい患者は、高齢者（例えば、５０歳以上、６０歳以上、好ましくは６５歳以上）、若年者（例えば、５歳以下）、入院患者、医療従事者、軍務従事者および軍関係者、妊婦、慢性疾患患者、または免疫不全患者である。しかし、ワクチンはこれらの群のみに適切なのではなく、集団でより一般的に使用することができる。
【０２０４】
本発明によって産生されたワクチンを、他のワクチンと実質的に同時に（例えば、インフルエンザワクチン、麻疹ワクチン、ムンプスワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、結合体化インフルエンザ菌ｂ型ワクチン、不活化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合体ワクチン（４価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチンなど）、呼吸器合胞体ウイルスワクチンなどと実質的に同時）（例えば、医療専門家またはワクチン接種センターに対する同時期の医学的相談または訪問中に）患者に投与することができる。同時投与に適切なさらなる非黄色ブドウ球菌ワクチンには、参考文献５８の３３〜４６頁に列挙した１つ以上の抗原が含まれ得る。
【０２０５】
核酸免疫化
上記の免疫原性組成物には、黄色ブドウ球菌由来のポリペプチド抗原が含まれる。しかし、全ての場合、ポリペプチド抗原を、このポリペプチドをコードする核酸（典型的にはＤＮＡ）と置換して、核酸免疫化に基づいた組成物、方法、および使用を得ることができる。核酸免疫化は、現在、発展した分野である（例えば、参考文献１９６〜２０３などを参照のこと）。
【０２０６】
免疫原をコードする核酸は、患者への送達後にｉｎ ｖｉｖｏで発現し、次いで、発現した免疫原は、免疫系を刺激する。有効成分は、典型的には、（ｉ）プロモーター；（ｉｉ）プロモーターに作動可能に連結された免疫原をコードする配列；および、任意選択的に、（ｉｉｉ）選択マーカーを含む核酸ベクターの形態を取るであろう。好ましいベクターは、（ｉｖ）複製起点および（ｖ）（ｉｉ）の下流に存在し、且つ（ｉｉ）に作動可能に連結された転写ターミネーターをさらに含むことができる。一般に、（ｉ）および（ｖ）は真核生物のものであり、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）は原核生物のものであろう。
【０２０７】
好ましいプロモーターは、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のウイルスプロモーターである。ベクターは、プロモーターに加えて、プロモーターと機能的に相互作用する転写調節配列（例えば、エンハンサー）も含むことができる。好ましいベクターは最初期ＣＭＶエンハンサー／プロモーターを含み、より好ましいベクターはＣＭＶイントロンＡも含む。免疫原をコードする配列の発現がプロモーターの調節下にあるように、免疫原をコードする下流配列にプロモーターを作動可能に連結する。
【０２０８】
マーカーを使用する場合、マーカーは、好ましくは、微生物宿主（例えば、原核生物、細菌、酵母）中で機能する。マーカーは、好ましくは、原核生物選択マーカー（例えば、原核生物プロモーターの調節下で転写される）である。便宜上、典型的なマーカーは抗生物質耐性遺伝子である。
【０２０９】
本発明のベクターは、好ましくは、自己複製性のエピソームまたは染色体外ベクター（プラスミドなど）である。
【０２１０】
本発明のベクターは、好ましくは、複製起点を含む。複製起点は原核生物で活性であるが、真核生物では活性ではないことが好ましい。
【０２１１】
したがって、好ましいベクターは、ベクター選択のための原核生物マーカー、原核生物の複製起点を含むが、免疫原をコードする配列の転写を駆動するための真核生物プロモーターを含む。したがって、ベクターは、（ａ）ポリペプチド発現せずに原核生物宿主中で増幅および選択されるが、（ｂ）増幅されることなく真核生物宿主中で発現される。この構成（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）は、核酸免疫化ベクターに理想的である。
【０２１２】
本発明のベクターは、コード配列の下流に真核生物転写終結配列を含むことができる。これにより、転写レベルを増強することができる。コード配列がそれ自体の転写終結配列を持たない場合、本発明のベクターは、好ましくは、ポリアデニル化配列を含む。好ましいポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモンに由来する。
【０２１３】
本発明のベクターは複数のクローニング部位を含むことができる。
【０２１４】
免疫原をコードする配列およびマーカーに加えて、ベクターは第２の真核生物コード配列を含むことができる。ベクターは、第２の配列の上流に、免疫原と同一の転写物から第２の真核生物ポリペプチドを翻訳することを可能にするためのＩＲＥＳを含むこともできる。あるいは、免疫原をコードする配列は、ＩＲＥＳの下流に存在することができる。
【０２１５】
本発明のベクターは、非メチル化ＣｐＧモチーフ（例えば、一般にグアノシンの前にシトシンを有し、２つの５’プリンおよび２つの３’ピリミジンに隣接した非メチル化ＤＮＡ配列）を含むことができる。その非メチル化形態では、これらのＤＮＡモチーフは、いくつかの免疫細胞型の強力な刺激因子であることが証明されている。
【０２１６】
ベクターを、標的化された方法で送達することができる。受容体媒介ＤＮＡ送達技術は、例えば、参考文献２０４〜２０９に記載されている。遺伝子療法プロトコールにおける局所投与のために、核酸を含む治療用組成物を約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡ範囲で投与する。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲を、遺伝子療法プロトコール中で使用することもできる。作用方法（例えば、コードされた遺伝子産物レベルの増強または抑制のため）ならびに形質転換および発現の有効性などの要因は、最終的な有効性に必要な投薬量に影響を及ぼす検討材料である。組織のより広い領域にわたりより高い発現を所望する場合、より大量のベクター、または連続した投与プロトコールにおける同量の再投与、または異なる隣接したもしくは接近した組織部分への数回の投与が、陽性の治療結果を得るのに必要であり得る。全ての場合、臨床試験における慣用的な実験により、最適な治療結果を得るための具体的な範囲が決定されるであろう。
【０２１７】
遺伝子送達ビヒクルを使用してベクターを送達させることができる。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源または非ウイルス起源であり得る（一般に、参考文献２１０〜２１３を参照のこと）。
【０２１８】
所望の核酸の送達および所望の細胞中での発現のためのウイルスベースのベクターは、当該分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルには、組換えレトロウイルス（例えば、参考文献２１４〜２２４）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビス・ウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４６）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ ＶＲ １２４９；ＡＴＣＣ ＶＲ−５３２）（これらのウイルスのハイブリッドまたはキメラも使用することができる）、ポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニア、鶏痘、カナリアポックス、修飾ワクシニアＡｎｋａｒａなど）、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、参考文献２２５〜２３０を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。死滅アデノウイルスに連結されたＤＮＡ［２３１］の投与も使用することができる。
【０２１９】
非ウイルス送達ビヒクルおよび方法も使用することができ、これらには、以下が含まれるが、これらに限定されない：死滅したアデノウイルスのみに連結されたか連結されていないポリカチオン性縮合ＤＮＡ［例えば、２３１］、リガンド連結ＤＮＡ［２３２］、真核細胞送達ビヒクル細胞［例えば、参考文献２３３〜２３７］、および核電荷中和（ｎｕｃｌｅｉｃ ｃｈａｒｇｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）または細胞膜との融合。裸のＤＮＡを使用することもできる。例示的な裸のＤＮＡの導入方法は、参考文献２３８および２３９に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用することができるリポソーム（例えば、免疫リポソーム（ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅ））は、参考文献２４０〜２４４に記載されている。さらなるアプローチは、参考文献２４５および２４６に記載されている。
【０２２０】
使用に適切なさらなる非ウイルス送達には、機械的送達系（参考文献２４６に記載のアプローチなど）が含まれる。さらに、コード配列またはその発現産物を、光重合したヒドロゲル材料の沈着または電離放射線の使用によって送達させることができる［例えば、参考文献２４７および２４８］。コード配列の送達のために使用することができる他の従来の遺伝子送達方法には、例えば、手持ち式の遺伝子銃（ｈａｎｄ−ｈｅｌｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｇｕｎ）の使用［２４９］または導入された遺伝子の活性化のための電離放射線の使用［２４７および２４８］が含まれる。
【０２２１】
ＰＬＧ（ポリ（ラクチド−コ−グリコリド））微粒子を使用したＤＮＡの送達は、例えば、負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳで処理）または正に荷電した表面（例えば、ＣＴＡＢなどのカチオン性洗剤で処理）を有するように任意選択的に処理された微粒子への吸着による特に好ましい方法である。
【０２２２】
検出方法および診断方法
本発明は、サンプル中の黄色ブドウ球菌細菌を検出するための方法を提供する。本方法は、ＢＡＡ抗原またはＢＡＡ抗原をコードする核酸の存在または不在を検出する工程を含むことができる。本方法を、微生物学的試験、臨床的診断または非臨床的診断などのために使用することができる。抗原の検出は、例えば、サンプルと、抗ＢＡＡ抗体（標識した抗ＢＡＡ抗体など）とを接触させる工程を含むことができる。核酸抗原の検出は、例えば、核酸ハイブリダイゼーション（ノーザンブロットまたはサザンブロット、核酸マイクロアレイ、または「遺伝子チップ」の使用などによる）、増幅反応（例えば、ＰＣＲ、ＳＤＡ、ＳＳＳＲ、ＬＣＲ、ＴＭＡ、ＮＡＳＢＡなど）に基づいた任意の都合のよい方法を含むことができる。
【０２２３】
本発明はまた、患者から採取したサンプル中の抗ＢＡＡ抗体の存在または不在を検出する工程を含む、患者が黄色ブドウ球菌に感染しているか否かを検出するための方法を提供する。抗原の検出は、例えば、サンプルとＢＡＡ抗原（例えば、固定化ＢＡＡ抗原）とを接触させる工程を含むことができる。
【０２２４】
ＢＡＡ抗原、ＢＡＡ抗原をコードする核酸、または抗ＢＡＡ抗原の存在は、サンプル中の黄色ブドウ球菌の存在を示し、特に、「ＴＷ」ＭＲＳＡ株および／またはＳＴ−２３９型ＭＲＳＡ株の存在を示す。したがって、臨床的診断設定では、方法の結果を使用して、患者のための治療ストラテジー（例えば、抗生物質の選択など）を教示または指示することができる。
【０２２５】
本発明はまた、（ａ）抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下で抗ＢＡＡ抗体を生物学的なサンプルと接触させる工程、および（ｂ）複合体を検出する工程を含む、ＢＡＡ抗原を検出するためのプロセスを提供する。
【０２２６】
本発明はまた、（ａ）抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下でＢＡＡ抗原を生物学的なサンプル（例えば、血液または血清サンプル）と接触させる工程、および（ｂ）複合体を検出する工程を含む、抗ＢＡＡ抗体を検出するためのプロセスを提供する。
【０２２７】
本発明は、（ａ）二重鎖を形成するためのハイブリダイゼーション条件下で本発明の核酸プローブを生物学的なサンプルと接触させる工程、および（ｂ）二重鎖を検出する工程を含む、ＢＡＡをコードする核酸を検出するためのプロセスを提供する。
【０２２８】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌細菌のＢＡＡ核酸配列内に含まれるテンプレート配列を増幅するためのプライマー（例えば、ＰＣＲプライマー）を含むキットを提供し、このキットは第１のプライマーおよび第２のプライマーを含み、第１のプライマーがテンプレート配列に実質的に相補的であり、第２のプライマーがテンプレート配列の相補物に実質的に相補的であり、実質的な相補性を有するプライマーの部分が、増幅すべきテンプレート配列の末端を規定する。第１のプライマーおよび／または第２のプライマーは、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）を含むことができる。
【０２２９】
本発明はまた、一本鎖または二本鎖の核酸（またはその混合物）中に含まれる黄色ブドウ球菌のＢＡＡテンプレート核酸配列を増幅可能な第１の一本鎖オリゴヌクレオチドおよび第２の一本鎖オリゴヌクレオチドを含むキットを提供し、ここで、（ａ）第１のオリゴヌクレオチドがテンプレート核酸配列に実質的に相補的なプライマー配列を含み、（ｂ）第２のオリゴヌクレオチドがテンプレート核酸配列の相補物に実質的に相補的なプライマー配列を含み、（ｃ）第１のオリゴヌクレオチドおよび／または第２のオリゴヌクレオチドがテンプレート核酸に相補的でない配列を含み、（ｄ）プライマー配列が増幅すべきテンプレート配列の末端を規定する。特徴（ｃ）の非相補配列は、好ましくは、プライマー配列の上流（すなわち、５’側）に存在する。これらの（ｃ）配列の一方または両方は、制限部位［例えば、参考文献２５０］またはプロモーター配列［例えば、参考文献２５１］を含むことができる。第１のオリゴヌクレオチドおよび／または第２のオリゴヌクレオチドは、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）を含むことができる。
【０２３０】
概要
本発明の実施において、他で示さない限り、当業者の技術の範囲内である化学、生化学、分子生物学、免疫学、および薬学の従来の方法を使用するであろう。かかる技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、参考文献２５２〜２５９などを参照のこと。
【０２３１】
本発明が「エピトープ」を考慮する場合、このエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／またはＴ細胞エピトープであり得る。かかるエピトープを、（例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ［２６０、２６１］または類似の方法を使用して）経験的に同定することができるか、（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｉｎｄｅｘ）［２６２］、行列ベースのアプローチ［２６３］、ＭＡＰＩＴＯＰＥ［２６４］、ＴＥＰＩＴＯＰＥ［２６５、２６６］、ニューラルネットワーク（ｎｅｕｒａｌ ｎｅｔｗｏｒｋ）［２６７］、ＯｐｔｉＭｅｒ＆ＥｐｉＭｅｒ［２６８、２６９］、ＡＤＥＰＴ［２７０］、Ｔｓｉｔｅｓ［２７１］、親水性［２７２］、抗原性指数［２７３］、または参考文献２７４〜２７８に開示の方法などを使用して）予想することができる。エピトープは、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位によって認識されて結合する抗原の一部であり、「抗原決定基」ということもできる。
【０２３２】
抗原「ドメイン」が省略される場合、これは、シグナルペプチド、細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞外ドメインなどの省略を含み得る。
【０２３３】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を含む。例えば、Ｘを「含む」組成物は、排他的にＸからなることができるか、いくらかの付加物を含むことができる（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【０２３４】
数値ｘに関する用語「約」は、任意選択的であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２３５】
２つのアミノ酸配列間のパーセンテージ配列同一性の言及は、アラインメントした場合に２配列を比較して同一であるアミノ酸のパーセンテージを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性またはパーセント配列同一性を、当該分野で公知のソフトウェアプログラム（例えば、参考文献２７９の７．７．１８節に記載のプログラム）を使用して決定することができる。好ましいアラインメントを、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭ行列６２を使用したアフィンギャップ検索を使用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定する。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献２８０に開示されている。
【図面の簡単な説明】
【０２３６】
【図１】図１は、ＯＤ５７０ｎｍとして測定した４つのＬ．ｌａｃｔｉｓ細菌の３７℃でのフィブロネクチンへの接着の比較を示す。バーは、左から右に、ポジティブコントロール細菌、ＢＡＡを発現するＴＯＰＯ株、ＢＡＡを発現する注入株、および空のベクターで形質転換したコントロール株を示す。
【発明を実施するための形態】
【０２３７】
２００７年に、ロンドンの集中治療室（ＩＣＵ）で血管アクセスデバイス（ＶＡＤ）関連菌血症の原因としてＭＲＳＡの通常でない株が報告された［３］。マイクロアレイを使用した株の遺伝子解析により、この「ＴＷ」株が以前にＵＫで報告されたＳＴ２３９伝染性クローンの１バージョンを示すという証拠が得られた。この株は、他の伝染性ＳＴ２３９クローンによって可変的に発現されるビルレンスに関連する検出可能な可動遺伝子エレメントを全て獲得していた。ＭＲＳＡを獲得したＩＣＵの全患者のコホート分析は、ＴＷ ＭＲＳＡを獲得した患者における菌血症の調整ハザード比が非ＴＷ ＭＲＳＡ株を獲得した患者の４．５倍であることを示した。ＴＷ ＭＲＳＡはまた、非ＴＷ ＭＲＳＡ株よりも血管カテーテルから単離される可能性が有意に高かった。
【０２３８】
臨床的な観察により、ＴＷが菌血症を引き起こす能力が、血管カテーテルの表面上にｉｎ ｖｉｖｏで吸着される細胞外基質タンパク質への接着能力の増強に起因することが示唆された。
【０２３９】
フィブリノゲン、フィブロネクチン、エラスチン、およびラミニンへのＭＲＳＡ株の接着を、９６ウェルプレート中で評価した。プレートを、１０μｇ／ｍｌタンパク質溶液にて４℃で一晩コーティングした。ウェルをＰＢＳでリンスし、次いで、１００μｌの２％ＢＳＡ中にて３７℃で１時間インキュベートして非特異的結合をブロックした。一晩の細菌細胞懸濁液をＲＰＭＩ−１６４０培地で０．１のＯＤ６００ｎｍに調整し、マイクロタイタープレート中に接種し、３７℃で２時間インキュベートした。ウェルをＰＢＳで３回洗浄して非接着性細菌を除去した。接着性細菌を、１００μｌの２５％ホルムアルデヒド中で固定し、次いで、１００μｌの０．１％クリスタルバイオレットで１５分間染色し、流水下でリンスした。染色した接着性の細菌膜の風乾後、マイクロプレートリーダーを使用して吸光度を測定した。全アッセイプレートは、適切なポジティブコントロールを含み、細菌を欠く、可能性があり且つ無菌のＴＳＢをネガティブコントロールとして含んでいた。分離菌のＯＤ５７０ｎｍは、バックグラウンド（同一プレートのネガティブコントロールＯＤ５７０ｎｍ）を差し引いた後の読み取り値であった。各アッセイを、３０回行った。
【０２４０】
ＴＷ ＭＲＳＡは、関連するＳＴ−２３９株（ＥＭＲＳＡ−１）、ＳＴ−２２、およびＳＴ−３６よりも多くフィブロネクチン、フィブリノゲン、およびエラスチンに接着することが証明された。これは、これらの細胞外基質タンパク質のうちの１つ以上への接着がおそらくカテーテルへの接着機構であることを示す。
【０２４１】
ＴＷ ＭＲＳＡのゲノム配列決定により、表皮ブドウ球菌（ＲＰ６２ａ）中で以前に同定されたファージに対して相同性を有する大型のファージが同定された［６］。ＴＷファージは、以下のアミノ酸配列（配列番号１）を有する推定２１ｋＤの表面発現ＬＰｘＴＧアドヘシン「ＢＡＡ」をコードする配列番号８のヌクレオチド配列を含む。
【０２４２】
【化６】
ＢＡＡは、いかなる黄色ブドウ球菌株においても以前に報告されておらず、菌血症を引き起こす能力にも関連していなかった。ＢＡＡは、試験した全てのＴＷ ＭＲＳＡ株（全部で８０）中に、他のＳＴ−２３９株のうち２７％に、他の菌血症散在性ゲンタマイシン耐性ＭＲＳＡ株およびＭＳＳＡ株のうち１０％に、ならびに菌血症ゲンタマイシン耐性表皮ブドウ球菌株のうち４１％に存在する（ＰＣＲによる検出）。表皮ブドウ球菌中のその存在は、ＢＡＡがコアグラーゼ陰性ブドウ球菌株に起因する菌血症にも関与し得ることを示唆している。
【０２４３】
Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓを、ＢＡＡをコードするｐｋＳ８０でトランスフェクションした。陽性形質転換株を、タッチＰＣＲ（ｔｏｕｃｈ ＰＣＲ）によってスクリーニングした。クローン化構築物の存在を、陽性形質転換株のプラスミド調製物の配列決定によって確認した。ｐｋＳ８０／ＢＡＡおよび空のベクターコントロールの両方の安定な形質転換株を、上記のようにフィブロネクチンへの結合について評価した。ＴＯＰＯおよび注入方法の両方を使用して構築したベクターを使用して、フィブロネクチンへの特異的結合が認められた（図１）。
【０２４４】
表皮ブドウ球菌由来のＢＡＡを、参考文献７中のＳｅｓＤとして開示する。ＳｅｓＤは発現してヒト免疫系に曝され、ヒト血清は、ＳｅｓＤに対して高力価を示した。参考文献７中のＳｅｓＤ配列は、本明細書中の配列番号１と９５％同一であるので、ＳｅｓＤを使用して認められた免疫学的結果は、本発明のＢＡＡ抗原に関しても期待することができる。
【０２４５】
したがって、ＴＷ ＭＲＳＡは、ファージにコードされた予想される新規の表面発現アドヘシン（ＢＡＡ）を保有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、他の地方流行性の株および関連する株と比較してフィブリノゲン、フィブロネクチン、およびエラスチンの両方への結合の増強を示す。予備試験は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ株へのＢＡＡのトランスフェクションによりフィブロネクチン結合表現型が付与されることを示す。ＢＡＡが、臨床背景で観察されたＴＷ ＭＲＳＡの増強されたカテーテル関連菌血症表現型の原因であり、したがって、ＳＴ−２３９株の世界的な広域分布を考慮すると、ＢＡＡは菌血症予防のためのもっともらしいワクチン標的であることを提案する。
【０２４６】
本発明をほんの一例として記載し、本発明の範囲内および精神内としながら修正形態を得ることができると理解されるであろう。
【０２４７】
【化７】
【０２４８】
【化８】
【０２４９】
【化９】
【０２５０】
【化１０】
【０２５１】
【化１１】
【０２５２】
【化１２】
【０２５３】
【化１３】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００９年１１月１０日に出願された英国特許出願第０９１９６９０．８号（この完全な内容は、全ての目的のために参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【０００２】
技術分野
本発明は、黄色ブドウ球菌に対する免疫化のための組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
黄色ブドウ球菌は、グラム陽性の球状細菌である。米国における年間死亡率はいかなる他の感染症（ＨＩＶ／ＡＩＤＳが含まれる）の死亡率も凌ぎ、黄色ブドウ球菌は、血流、下気道、皮膚、および軟組織の感染の主因である。特に懸念される原因は、ほとんどの抗生物質に耐性を示すＭＲＳＡ（メチシリン耐性黄色ブドウ球菌）である。
【０００４】
現在、認可された黄色ブドウ球菌ワクチンは存在しない。参考文献１（非特許文献１）は、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌの「Ｖ７１０」ワクチンが心臓胸部手術を受けた患者における第２／３相試験を経ていることを報告している。Ｖ７１０ワクチンは、単一の抗原ＩｓｄＢ［２（非特許文献２）］（鉄捕捉細胞表面タンパク質）に基づく。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｓｈｅｒｉｄａｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００９）２７：４９９〜５０１
【非特許文献２】Ｋｕｋｌｉｎら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．（２００６）７４（４）：２２１５〜２３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
黄色ブドウ球菌ワクチン、特にＭＲＳＡ株に対して有用なワクチンで用いるさらに改良された抗原を同定する必要が依然としてある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の開示
ＭＲＳＡの「ＴＷ」株はＳＴ−２３９に属し、ヒトにおいて血管カテーテルに接着して菌血症を引き起こす能力が増強されている［３］。他の地方流行性の株および関連する株と比較して一連の細胞外基質タンパク質（フィブロネクチンが含まれる）へのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合も増強されている。この株はまた、地方流行性の株または関連する株よりも多くの内皮細胞に侵入する。本発明者らは、ＴＷ中の菌血症関連抗原「ＢＡＡ」を同定した。ＢＡＡは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのフィブロネクチンへの結合を実証し、そしてＭＲＳＡ株のカテーテル関連菌血症表現型の増強の原因であり得る、ファージにコードされた表面発現アドヘシンである。したがって、ＢＡＡは、例えば、ＭＲＳＡによって引き起こされる菌血症（ＳＴ２３９株型が含まれる）を予防するためのワクチン標的として有用であり得る。
【０００８】
本発明は、黄色ブドウ球菌疾患（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ）および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化で用いるＢＡＡ抗原を提供する。
【０００９】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原ポリペプチド配列および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原ポリペプチド配列を含む融合タンパク質を提供する。この融合タンパク質は、黄色ブドウ球菌疾患に対する免疫化のための免疫原性組成物中の有効成分として有用である。
【００１０】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物は、黄色ブドウ球菌疾患に対する免疫化に有用である。
【００１１】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原および少なくとも１つの非黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物は、一定範囲の疾患に対する免疫化に有用である。
【００１２】
本発明はまた、（１）ＢＡＡ抗原と（２）アジュバントとの組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。
【００１３】
本発明はまた、抗ＢＡＡ抗体を提供する。この抗体は、例えば、単独または別の治療（抗生物質など）と組み合わせて黄色ブドウ球菌疾患の処置および／または予防に有用である。
【００１４】
本発明は、サンプル中のＢＡＡ抗原またはＢＡＡ抗原をコードする核酸を検出する工程を含む、サンプル中の黄色ブドウ球菌細菌の存在または不在を検出するための方法を提供する。
【００１５】
ＢＡＡ抗原
ＢＡＡ抗原は表皮ブドウ球菌で以前に認められており、ＳｅｓＩ［４、５］、ＳＥ１６５４［６］またはＳｅｓＤ［７］と呼ばれている。しかし、黄色ブドウ球菌株では、ＢＡＡ抗原は、以前には存在しないと報告されていた［６］。表皮ブドウ球菌抗原に関する研究により、この抗原が浸潤能のマーカー（およびおそらくビルレンス因子）であり、免疫原性であり、そして細菌に対してオプソニン食作用活性（ｏｐｓｏｎｏｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を誘発することができることが確認されている。同一の性質を、黄色ブドウ球菌中の同一の抗原に期待することができる。さらに、黄色ブドウ球菌中のＢＡＡ抗原は、フィブロネクチン結合活性を有することが確認されており、その表面露出および機能的発現が確認されるので、黄色ブドウ球菌タンパク質が表皮ブドウ球菌タンパク質について既に認められている性質を共有するという見解がさらに支持される。
【００１６】
本発明のＢＡＡ抗原は、（ａ）配列番号１に対して５０％以上の同一性（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）を有し、そして／または（ｂ）配列番号１の少なくとも「ｎ」個の連続するアミノ酸のフラグメントを含むアミノ酸配列を含むことができ、「ｎ」は７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、またはそれを超える）である。これらのＢＡＡ配列には、配列番号１の改変体が含まれる。好ましい（ｂ）のフラグメントは、配列番号１由来のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、少なくとも１つの配列番号１のエピトープを保持しながら配列番号１のＣ末端由来の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）および／またはＮ末端由来の１つ以上のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）を欠く。
【００１７】
したがって、例えば、本発明と共に用いるポリペプチドは、配列番号１と比較して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）のアミノ酸置換（保存的置換（すなわち、あるアミノ酸の、関連する側鎖を有する別のアミノ酸との置換）など）を含むことができる。遺伝的にコードされたアミノ酸は、一般に、以下の４つのファミリーに分類される：（１）酸性（すなわち、アスパラギン酸、グルタミン酸）、（２）塩基性（すなわち、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、（３）非極性（すなわち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および（４）無荷電極性（すなわち、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）。フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンは、時折、共に芳香族アミノ酸として分類される。一般に、これらのファミリー内の単一のアミノ酸の置換は、生物学的活性に大きな影響を及ぼさない。ポリペプチドはまた、配列番号１と比較して１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）の単一アミノ酸欠失を含むことができる。ポリペプチドはまた、配列番号１と比較して１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９など）の挿入（例えば、それぞれ１、２、３、４、または５アミノ酸）を含むことができる。
【００１８】
同様に、ＢＡＡ抗原は、以下：
（ａ）配列番号１と同一（すなわち、１００％同一）であり、
（ｂ）配列番号１と配列同一性（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）を共有し、
（ｃ）配列番号１と比較して、別個の位置であり得るかまたは連続し得る１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０（またはそれを超える）の単一アミノ酸変化（欠失、挿入、置換）を有し、そして／あるいは
（ｄ）ペアワイズアラインメントアルゴリズムを使用して配列番号１とアラインメントした場合、（ｐ個のアミノ酸におよぶアラインメントについて、ｐ＞ｘの場合、ｐ−ｘ＋１個のかかるウィンドウが存在するように）Ｎ末端からＣ末端までのｘ個のアミノ酸の各ムービングウィンドウは、少なくともｘ・ｙ個の同一のアラインメントしたアミノ酸（ｘが２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００から選択される場合、ｙは０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９から選択され、ｘ・ｙが整数でない場合、最も近い整数に切り上げる）を有する、
アミノ酸配列を含むことができる。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトパラメータ（例えば、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用したギャップオープンペナルティ＝１０．０およびギャップ伸長ペナルティ＝０．５を使用）を使用したＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈグローバルアラインメントアルゴリズム［８］である。このアルゴリズムを、ＥＭＢＯＳＳパッケージ中のｎｅｅｄｌｅツール中で都合よく実行する［９］。
【００１９】
群（ｃ）内で、欠失または置換は、Ｎ末端および／またはＣ末端に存在し得るか、２つの末端の間に存在し得る。したがって、短縮は、欠失の一例である。短縮は、Ｎ末端および／またはＣ末端での４０個まで（またはそれを超える）アミノ酸の欠失を含むことができる。Ｎ末端短縮は、例えば、異種宿主中での組換え発現を促進するためにリーダーペプチドを除去することができる。Ｃ末端短縮は、例えば、異種宿主中での組換え発現を促進するためにアンカー配列を除去することができる。
【００２０】
いくつかの実施形態では、本発明は、ＢＡＡ抗原ポリペプチド配列および少なくとも１つのさらなる抗原（好ましくは、黄色ブドウ球菌抗原）のポリペプチド配列を含む融合タンパク質を提供する。したがって、単一ポリペプチド鎖は、２つの異なる抗原性機能を提供することができる。ＢＡＡおよび２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のさらなる抗原由来のアミノ酸配列からなる融合タンパク質が有用である。
【００２１】
融合タンパク質を、下記のように結合体または非黄色ブドウ球菌抗原と組み合わせることができる。
【００２２】
融合タンパク質を、式ＮＨ２−Ａ−｛−Ｘ−Ｌ−｝ｎ−Ｂ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘは上記の抗原のアミノ酸配列であり、Ｌは任意選択的なリンカーアミノ酸配列であり、Ａは選択的なＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは任意選択的なＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは２以上の整数（例えば、２、３、４、５、６など）である）によって示すことができる。少なくとも１つの−Ｘ−部分はＢＡＡ抗原である。通常、ｎは２または３である。ｎが２である場合、ＢＡＡ配列はＸ１またはＸ２（すなわち、Ｎ末端またはＣ末端抗原）であり得る。
【００２３】
−Ｘ−部分がその野生型形態でリーダーペプチド配列を有する場合、これを融合タンパク質中に含めるか除去することができる。いくつかの実施形態では、リーダーペプチドは、融合タンパク質のＮ末端に存在する−Ｘ−部分のリーダーペプチド以外が欠失されるであろう（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドが保持されるであろうが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドが除去されるであろう）。これは、全てのリーダーペプチドが欠失し、−Ａ−部分としてＸ１のリーダーペプチドを使用することに等しい。
【００２４】
｛−Ｘ−Ｌ−｝の各ｎの場合について、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は存在しても存在しなくても良い。例えば、ｎ＝２の場合、融合タンパク質はＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、典型的には短いであろう（例えば、２０個以下のアミノ酸（すなわち、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個））。例は、クローニングを容易にする短いペプチド配列、ポリグリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎ（式中、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）を含む）およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える））を含む。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。有用なリンカーは、ＧＳＧＧＧＧ（配列番号２）またはＧＳＧＳＧＧＧＧ（配列番号３）であり、これらは、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドがＢａｍＨＩ制限部位から形成されているのでクローニングおよび操作を補助し、（Ｇｌｙ）４テトラペプチドが典型的なポリグリシンリンカーである。特に最終的なＬｎとして使用するための他の適切なリンカーは、ＡＳＧＧＧＳ（配列番号４）またはＬｅｕ−Ｇｌｕジペプチドである。
【００２５】
−Ａ−は任意選択的なＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個））。例には、タンパク質輸送を指示するためのリーダー配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）））が含まれる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。Ｘ１がそれ自体のＮ末端メチオニンを欠く場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニン（例えば、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｓｅｒ）または単一のＭｅｔ残基を提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８アミノ酸を有する）である。
【００２６】
−Ｂ−は任意選択的なＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１個））。例には、タンパク質輸送を指示するための配列、クローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）を含む）（配列番号５など））、またはタンパク質安定性を増強する配列が含まれる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。
【００２７】
一般に、ポリペプチドが配列番号１と同一でない配列を含む場合（例えば、配列同一性が１００％未満の配列を含む場合またはそのフラグメントを含む場合）または、ポリペプチドがＢＡＡ配列に加えて抗原を含む場合、ポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を有する黄色ブドウ球菌タンパク質を認識する抗体を誘発することができることが好ましい。したがって、本発明のＢＡＡ抗原または融合タンパク質は（例えば、ヒトに投与される場合）、配列番号１として黄色ブドウ球菌ゲノム中でコードされる野生型タンパク質を認識する抗体を誘発することができる。
【００２８】
さらなる黄色ブドウ球菌抗原
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原と組み合わせたＢＡＡ抗原を含む。さらなる抗原は、ポリペプチドおよび／またはサッカリド抗原であり得る。
【００２９】
適切なポリペプチド抗原を、以下から選択することができる（参考文献１０〜１７に開示および定義）：免疫優性ＡＢＣ輸送体、ラミニン受容体、ＳｓａＡ、ＳｉｔＣ（ＭｎｔＣとしても公知）、ＩｓａＡ（ＰｉｓＡまたはＩｓｓＡとしても公知）、ＥｂｈＡ、ＥｂｈＢ、Ａａｐ、ＲＡＰ（ＲＮＡ ＩＩＩ活性化タンパク質）、ＦＩＧ、ＥｂｐＳ、ＥＦＢ、アルファ毒素（溶血素）、ＳＢＩ、ＩｓｄＡ、ＩｓｄＢ、ＳｄｒＣ、ＣｌｆＡ、ＦｎｂＡ、ＣｌｆＢ、コアグラーゼ、ＦｎｂＢ、ＭＡＰ、ＨａｒＡ、自己溶菌酵素グルコサミニダーゼ、自己溶菌酵素アミダーゼ、Ｅｂｈ、自己溶菌酵素Ａｎｔ、ＭＲＰＩＩ、ＳｄｒＧ、ＳｄｒＥ、ＳｄｒＤ、ＳａｓＦ、ＡｈｐＣ、ＡｈｐＦ、コラーゲン結合タンパク質ＣＡＮ、ＧｅｈＤリパーゼ、ヘパリン結合タンパク質ＨＢＰ（１７ｋＤａ）、Ｎｐａｓｅ、ＯＲＦ０５９４、ＯＲＦ０６５７ｎ、ＯＲＦ０８２６、ＰＢＰ４、Ｓａｉ−１、ＳａｓＫ、ＳＢＩ、ＳｄｒＨ、ＳＳＰ−１、ＳＳＰ−２、ビトロネクチン結合タンパク質。
【００３０】
適切なサッカリド抗原には、黄色ブドウ球菌莢膜サッカリドおよび／または黄色ブドウ球菌エキソポリサッカリドが含まれる。サッカリド抗原を、キャリアタンパク質に結合体化することができる。
【００３１】
黄色ブドウ球菌のエキソポリサッカリドは、ポリ−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＰＮＡＧ）である。このサッカリドは、細菌からのエキソポリサッカリドの精製中に生じるサイズを有するポリサッカリドであり得るか、または、このサッカリドは、かかるポリサッカリドの断片化によって得られるオリゴサッカリド（例えば、サイズは、４００ｋＤａ超から７５ｋＤａと４００ｋＤａとの間または１０ｋＤａと７５ｋＤａとの間まで、または３０反復単位まで変化し得る）であり得る。サッカリド部分は種々の程度のＮ−アセチル化を有することができ、参考文献１８に記載のように、ＰＮＡＧは、４０％未満Ｎ−アセチル化され得る（例えば、３５、３０、２０、１５、１０、または５％未満のＮ−アセチル化、脱アセチル化ＰＮＡＧはｄＰＮＡＧとしても公知である）。ＰＮＡＧの脱アセチル化エピトープは、オプソニン性の殺傷（ｏｐｓｏｎｉｃ ｋｉｌｌｉｎｇ）を媒介することができる抗体を誘発することができる。ＰＮＡＧは、例えば、２５、２０、１５、１０、５、２、１、または０．１％未満の残基についてＯ−スクシニル化（Ｏ−ｓｕｃｃｉｎｙｌａｔｅｄ）されていてもいなくてもよい。
【００３２】
黄色ブドウ球菌の莢膜サッカリドは、細菌からの莢膜サッカリドの精製中に生じるサイズを有するポリサッカリドであり得るか、または、このサッカリドは、かかるポリサッカリドの断片化によって得られるオリゴサッカリドであり得る。莢膜サッカリドを、任意の適切な黄色ブドウ球菌株（または類似するか同一のサッカリドを有する任意の細菌）から（５型および／または８型黄色ブドウ球菌株および／または３３６型黄色ブドウ球菌株などから）得ることができる。ほとんどの感染性黄色ブドウ球菌株は、５型または８型莢膜サッカリドのいずれかを含む。共にその反復単位中にＦｕｃＮＡｃｐおよび連結のためのスルフヒドリル基を導入するために使用することができるＭａｎＮＡｃＡを有する。５型サッカリドの反復単位は→４）−β−Ｄ−Ｍａｎ ＮＡｃＡ−（１→４）−α−Ｌ−ＦｕｃＮＡｃ（３ＯＡｃ）−（１→３）−β−Ｄ−ＦｕｃＮＡｃ−（１→であるのに対して、８型サッカリドの反復単位は→３）−β−Ｄ−ＭａｎＮＡｃＡ（４ＯＡｃ）−（１→３）−α−Ｌ−ＦｕｃＮＡｃ（１→３）−α−Ｄ−ＦｕｃＮＡｃ（１→である。３３６型サッカリドは、Ｏ−アセチル化を持たないβ連結ヘキソサミンであり［１９、２０］、３３６株（ＡＴＣＣ５５８０４）に対して惹起された抗体と交差反応性を示す。５型と８型サッカリドとの組み合わせが典型的であり、３３６型サッカリドをこの対合物に付加することができる［２１］。
【００３３】
したがって、例えば、組成物は、ＢＡＡ抗原ならびに（ａ）５型莢膜サッカリドの結合体および／または（ｂ）８型莢膜サッカリドの結合体を含むことができる。
【００３４】
結合体中のキャリア部分は、通常、タンパク質であろう。典型的なキャリアタンパク質は、細菌毒素（ジフテリア毒素または破傷風毒素、またはそのトキソイド、変異体、もしくはフラグメントなど）である。ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体［２２］が有用である。他の適切なキャリアタンパク質には、髄膜炎菌外膜タンパク質複合体［２３］）、合成ペプチド［２４、２５］、熱ショックタンパク質［２６、２７］、百日咳タンパク質［２８、２９］、サイトカイン［３０］、リンホカイン［３０］、ホルモン［３０］、成長因子［３０］、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［３１］（Ｎ１９［３２］など）、インフルエンザ菌由来のタンパク質Ｄ［３３〜３５］、ニューモリシン［３６］またはその非毒性誘導体［３７］、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ［３８］、鉄取り込みタンパク質［３９］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ［４０］、組換え緑膿菌エキソプロテインＡ（ｒＥＰＡ）［４１］などが含まれる。いくつかの実施形態では、キャリアタンパク質は黄色ブドウ球菌タンパク質（ＢＡＡなど）である。
【００３５】
組成物が１つを超える結合体を含む場合、各結合体は同一のキャリアタンパク質または異なるキャリアタンパク質を使用することができる。
【００３６】
結合体は、過剰なキャリア（ｗ／ｗ）または過剰なサッカリド（ｗ／ｗ）を有することができる。いくつかの実施形態では、結合体は、それぞれ実質的に同じ重量で含むことができる。
【００３７】
キャリア分子を、キャリアに共有結合的に直接またはリンカーを介して結合体化することができる。タンパク質への直接結合を、例えば、参考文献４２および４３に記載のように、例えば、サッカリドとキャリアとの間の還元的アミノ化によって行うことができる。サッカリドは、最初に、例えば酸化によって活性化される必要があり得る。リンカー基を介した結合を、任意の公知の手順（例えば、参考文献４４および４５に記載の手順）を使用して行うことができる。好ましい結合型はアジピン酸リンカーであり、これを、遊離−ＮＨ２基（例えば、アミノ化によってグルカンに導入した）のアジピン酸とのカップリング（例えば、ジイミド活性化を使用）およびその後の得られたサッカリド−アジピン酸中間体へのタンパク質のカップリングによって形成することができる［４６、４７］。別の好ましい結合型はカルボニルリンカーであり、これを、サッカリドＣＤＩ［４８、４９］の遊離ヒドロキシル基の反応およびその後のカルバメート結合を形成するためのタンパク質との反応によって形成することができる。他のリンカーには、β−プロピオンアミド［５０］、ニトロフェニル−エチルアミン［５１］、ハロアシルハライド［５２］、グリコシド結合［５３］、６−アミノカプロン酸［５４］、ＡＤＨ［５５］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［５６］などが含まれる。カルボジイミド縮合も使用することができる［５７］。
【００３８】
ＰＮＡＧ結合体を、種々の方法（例えば、ａ）マレイミド基を含むリンカーの付加によってＰＮＡＧを活性化させて活性化されたＰＮＡＧを形成すること、ｂ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってキャリアタンパク質を活性化して活性化されたキャリアタンパク質を形成すること、およびｃ）活性化されたＰＮＡＧおよび活性化されたキャリアタンパク質を反応させてＰＮＡＧ−キャリアタンパク質結合体を形成することを含む過程、またはａ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってＰＮＡＧを活性化して活性化されたＰＮＡＧを形成すること、ｂ）マレイミド基を含むリンカーの付加によってキャリアタンパク質を活性化して活性化されたキャリアタンパク質を形成すること、およびｃ）活性化されたＰＮＡＧおよび活性化されたキャリアタンパク質を反応させてＰＮＡＧ−キャリアタンパク質結合体を形成することを含む過程、またはａ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってＰＮＡＧを活性化させて活性化されたＰＮＡＧを形成すること、ｂ）スルフィドリル基を含むリンカーの付加によってキャリアタンパク質を活性化させて活性化されたキャリアタンパク質を形成すること、およびｃ）活性化されたＰＮＡＧおよび活性化されたキャリアタンパク質を反応させてＰＮＡＧ−キャリアタンパク質結合体を形成することを含む過程による）で調製することができる。
【００３９】
非黄色ブドウ球菌抗原
いくつかの実施形態では、免疫原性組成物は、少なくとも１つの非黄色ブドウ球菌抗原と組み合わせたＢＡＡ抗原を含む。適切な非ブドウ球菌抗原には、院内感染に関連する細菌由来の抗原が含まれるが、これに限定されない。例えば、抗原は、以下の病原体の１つに由来し得る：表皮ブドウ球菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、緑膿菌、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、および／または腸外病原性大腸菌。ＢＡＡ抗原と組み合わせて用いるさらに適切な抗原は、参考文献５８の３３〜４６頁に列挙されている。
【００４０】
本発明で使用されるポリペプチド
本発明で使用されるポリペプチドは、種々の形態（例えば、天然の（ｎａｔｉｖｅ）形態、融合形態、グリコシル化形態、非グリコシル化形態、脂質付加形態、非脂質付加形態、リン酸化形態、非リン酸化形態、ミリストイル化形態、非ミリストイル化形態、単量体形態、多量体形態、粒子形態、変性形態など）を取ることができる。
【００４１】
本発明で使用されるポリペプチドを、種々の手段（例えば、組換え発現、細胞培養物からの精製、化学合成など）によって調製することができる。特に融合タンパク質のための組換え発現タンパク質が好ましい。
【００４２】
好ましくは、本発明で使用されるポリペプチドは、精製形態または実質的に精製された形態（すなわち、他のポリペプチド（特に、他のブドウ球菌または宿主細胞のポリペプチド）を実質的に含まない（例えば、天然に存在するポリペプチドを含まない））で提供され、一般に、少なくとも約５０％（重量）純粋、通常は少なくとも約９０％純粋である（すなわち、組成物の約５０％未満、より好ましくは約１０％未満（例えば、５％））が他の発現されたポリペプチドで構成されている）。したがって、組成物中の抗原を、この分子が発現される生物全体から分離する。
【００４３】
用語「ポリペプチド」は、任意の長さのアミノ酸ポリマーをいう。ポリマーは直鎖または分岐であってよく、修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸によって中断されていてよい。この用語はまた、天然で修飾されたか、または介入（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化）または任意の他の操作もしくは修飾（標識化成分との結合体化など）によって修飾されたアミノ酸ポリマーを含む。例えば、アミノ酸の１つ以上のアナログ（例えば、非天然アミノ酸などが含まれる）を含むポリペプチドおよび当該分野で公知の他の修飾物も含まれる。ポリペプチドは、単一の鎖または会合した鎖として存在することができる。
【００４４】
本発明は、配列−Ｐ−Ｑ−または−Ｑ−Ｐ−（式中、−Ｐ−は上記定義のアミノ酸配列であり、−Ｑ−は上記定義の配列ではない）を含むポリペプチドを提供する（すなわち、本発明は、融合タンパク質を提供する）。−Ｐ−のＮ末端コドンがＡＴＧでないが、このコドンがポリペプチドのＮ末端に存在しない場合、Ｍｅｔとしてではなくこのコドンの標準的アミノ酸として翻訳されるであろう。しかし、このコドンがポリペプチドのＮ末端にある場合、Ｍｅｔとして翻訳されるであろう。−Ｑ−部分の例には、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える））、マルトース結合タンパク質、またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
本発明はまた、ポリペプチド発現を誘導する条件下にて本発明の核酸で形質転換した宿主細胞を培養する工程を含む、本発明のポリペプチドを生産するためのプロセスを提供する。
【００４６】
本発明のポリペプチドの発現がブドウ球菌で起こり得るが、本発明は、通常、発現（組換え発現）のために異種宿主を使用するであろう。異種宿主は、原核生物（例えば、細菌）または真核生物であり得る。異種宿主は大腸菌であり得るが、他の適切な宿主には、枯草菌、コレラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｌａｃｔａｍｉｃａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｃｉｎｅｒｅａ、マイコバクテリア（例えば、結核菌）、酵母などが含まれる。本発明のポリペプチドをコードする野生型黄色ブドウ球菌遺伝子と比較して、コードされたアミノ酸に影響を及ぼすことなくかかる宿主における発現効率を最適にするためにコドンを変化させるのに役立つ。
【００４７】
本発明は、化学的手段によってポリペプチドの少なくとも一部を合成する工程を含む、本発明のポリペプチドを生成するためのプロセスを提供する。
【００４８】
抗体
抗ＢＡＡ抗体を、受動免疫化または免疫療法のために使用することができる。したがって、本発明は、治療で用いる抗ＢＡＡ抗体を提供する。本発明はまた、医薬製造におけるかかる抗体の使用を提供する。本発明はまた、有効量の本発明の抗ＢＡＡ抗体を投与する工程を含む、哺乳動物を処置するための方法を提供する。免疫原性組成物について上記のように、これらの方法および使用により、黄色ブドウ球菌感染および／または疾患から哺乳動物を防御することが可能である。
【００４９】
用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子および抗原に結合することができるそのフラグメントが含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子［５９、６０］、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメントならびにＦｖ分子、非共有結合性ヘテロ二量体［６１、６２］、単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）［６３］、二量体および三量体の抗体フラグメント構築物、ミニボディ［６４、６５］、ヒト化抗体分子［６６〜６８］、およびかかる分子から得られる任意の機能的フラグメントならびに非従来的プロセス（ファージディスプレイなど）によって得られる抗体が含まれる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は当該分野で周知である。ヒト化抗体または完全なヒト抗体が好ましい。
【００５０】
モノクローナル抗体は、指向される個別のポリペプチドの同定および精製で特に有用である。本発明のモノクローナル抗体を、免疫アッセイ、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、または酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）などにおける試薬として使用することもできる。これらの適用では、抗体を、分析的に検出可能な試薬（放射性同位体、蛍光分子、または酵素など）で標識することができる。上記方法によって産生されたモノクローナル抗体を、本発明のポリペプチドの分子同定および特徴付け（エピトープマッピング）のために使用することもできる。
【００５１】
本発明の抗体を、好ましくは、精製形態または実質的に精製された形態で提供する。典型的には、抗体は、他のポリペプチドが実質的に存在しない（例えば、組成物の９０％未満（重量）、通常は６０％未満、より通常には５０％未満が他のポリペプチドから構成される場合）組成物中に存在するであろう。
【００５２】
本発明の抗体は任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ（すなわち、α、γ、またはμ重鎖））の抗体であり得るが、一般に、ＩｇＧであろう。ＩｇＧアイソタイプ内で、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブクラスであり得る。本発明の抗体は、κまたはλ軽鎖を有し得る。
【００５３】
抗ＢＡＡ抗体を、抗生物質と併せて患者に投与することができる。抗生物質を、抗体と混合して投与することができるか（したがって、本発明の組成物はブドウ球菌に対して活性な抗生物質を含むことができる）、別個に投与することができる。
【００５４】
抗ＢＡＡ抗体は、例えば、緊急時の予想外または予測不可能な入院（大流行中の集中治療室またはかかる株が地方流行性であることが公知である場合など）のためのこれまたは潜在的に構造的に関連するアドヘシンを保有する黄色ブドウ球菌（または表皮ブドウ球菌）の株に起因する短期間の菌血症リスクのある成人および新生児への注入に特に適切である。抗体を、異物または深在性の感染に関与する黄色ブドウ球菌の菌血症の処置のための補助療法として抗生物質と共に使用することもできる。
【００５５】
核酸
本発明はまた、本発明のポリペプチドおよび融合ポリペプチドをコードする核酸を提供する。本発明はまた、１つ以上の本発明のポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（例えば、配列番号８）を含む核酸を提供する。
【００５６】
本発明はまた、かかるヌクレオチド配列と配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。配列間の同一性を、好ましくは、上記のＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎホモロジー検索アルゴリズムによって決定する。かかる核酸は、同一のアミノ酸をコードするための代替コドンを使用する核酸が含まれる。
【００５７】
本発明はまた、これらの核酸とハイブリダイズすることができる核酸を提供する。ハイブリダイゼーション反応を、異なる「ストリンジェンシー」の条件下で行うことができる。ハイブリダイゼーション反応のストリンジェンシーを増大させる条件は、当該分野で広く知られており、公開されている（例えば、参考文献２５５の７．５２頁）。関連条件の例には、以下が含まれる（記載順にストリンジェンシーが増大する）：インキュベーション温度２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃、緩衝液濃度１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ（ここで、ＳＳＣは、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝液である）および他の緩衝系を使用したその等価物、ホルムアミド濃度０％、２５％、５０％、および７５％、インキュベーション時間５分間〜２４時間、１回、２回、またはそれを超える洗浄工程、洗浄インキュベーション時間１、２、または１５分間、ならびに洗浄溶液６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水。ハイブリダイゼーション技術およびその至適化は当該分野で周知である（例えば、参考文献６９、２５５、２５７などを参照のこと）。
【００５８】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリダイズし、他の実施形態では、中ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし、好ましい実施形態では、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の例示的な設定は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリダイゼーションの例示的な設定は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションの例示的な設定は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００５９】
本発明は、これらの配列と相補的な配列を含む核酸を含む（例えば、アンチセンスまたは探索用、またはプライマー用）。
【００６０】
本発明の核酸を、ハイブリダイゼーション反応（例えば、ノーザンブロットもしくはサザンブロットまたは核酸マイクロアレイ、または「遺伝子チップ」）、増幅反応（例えば、ＰＣＲ、ＳＤＡ、ＳＳＳＲ、ＬＣＲ、ＴＭＡ、ＮＡＳＢＡなど）、および他の核酸技術で使用することができる。
【００６１】
本発明の核酸は、種々の形態（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プライマー、プローブ、標識形態など）を取ることができる。本発明の核酸は環状または分岐であり得るが、一般に、線状であろう。他で特定または要求しない限り、核酸を使用する本発明の任意の実施形態は、二本鎖形態および二本鎖形態を作製する２つの相補的な一本鎖形態の各々の両方を使用することができる。プライマーおよびプローブは、一般に一本鎖であり、アンチセンス核酸もまた同様に一本鎖である。
【００６２】
本発明の核酸を、好ましくは、精製形態または実質的に精製された形態（すなわち、他の核酸を実質的に含まない（例えば、天然に存在する核酸を含まない、特に他のブドウ球菌または宿主細胞の核酸を含まない））で提供し、一般に、少なくとも約５０％（重量）純粋、通常は少なくとも約９０％純粋である。本発明の核酸は、好ましくは、ブドウ球菌核酸である。
【００６３】
本発明の核酸を、多数の方法で（例えば、全体または一部の化学合成（例えば、ＤＮＡのホスホルアミダイト合成）、ヌクレアーゼ（例えば、制限酵素）を使用したより長い核酸の消化、より短い核酸またはヌクレオチドの連結（例えば、リガーゼまたはポリメラーゼを使用）による）ゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーなどから調製することができる。
【００６４】
本発明の核酸を、固体支持体（例えば、ビーズ、プレート、フィルター、フィルム、スライド、マイクロアレイ支持体、樹脂など）に付着させることができる。本発明の核酸を、例えば、放射性標識もしくは蛍光標識またはビオチン標識で標識することができる。これは、核酸を検出技術で使用する場合（例えば、核酸がプライマーまたはプローブである場合）に特に有用である。
【００６５】
用語「核酸」には、一般的意味において、任意の長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、および／またはそのアナログを含む）の重合形態が含まれる。核酸には、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドが含まれる。核酸には、ＤＮＡまたはＲＮＡのアナログ（修飾された骨格（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）またはホスホロチオアート）または修飾された塩基を含むものなど）も含まれる。したがって、本発明は、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、リボザイム、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、組換え核酸、分岐核酸、プラスミド、ベクター、プローブ、プライマーなどを含む。本発明の核酸がＲＮＡ形態をとる場合、核酸は５’キャップを持っても持たなくても良い。
【００６６】
本発明の核酸は、ベクターの一部（すなわち、１つ以上の細胞型の形質導入／トランスフェクションのためにデザインされた核酸構築物の一部）であり得る。ベクターは、例えば、挿入されたヌクレオチドの単離、増殖（ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ）、および複製のためにデザインされた「クローニングベクター」、宿主細胞中でのヌクレオチド配列の発現のためにデザインされた「発現ベクター」、組換えウイルス粒子または組換えウイルス様粒子が産生されるようにデザインされた「ウイルスベクター」、または１つを超えるベクター型の特性を含む「シャトルベクター」であり得る。好ましいベクターはプラスミドである。「宿主細胞」には、外因性核酸のレシピエントであり得るか、外因性核酸のレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には単一宿主細胞の子孫が含まれ、子孫は、天然、偶発的な、または意図的な変異および／または変化によって（形態または全ＤＮＡ量において）元の親細胞と必ずしも完全に同一でなくてもよい。宿主細胞には、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏにて本発明の核酸でトランスフェクトされたか感染された細胞が含まれる。
【００６７】
核酸がＤＮＡである場合、ＲＮＡ配列中の「Ｕ」はＤＮＡ中で「Ｔ」に置き換えられると認識されるであろう。同様に核酸がＲＮＡである場合、ＤＮＡ配列中の「Ｔ」はＲＮＡ中の「Ｕ」に置き換えられると認識されるであろう。
【００６８】
用語「相補物」または「相補性」は、核酸に関して使用する場合、ワトソン−クリック塩基対合をいう。したがって、Ｃの相補物はＧであり、Ｇの相補物はＣであり、Ａの相補物はＴ（またはＵ）であり、Ｔ（またはＵ）の相補物はＡである。例えば、ピリミジン（ＣまたはＴ）を相補するために、Ｉ（プリンであるイノシン）などの塩基を使用することも可能である。
【００６９】
本発明の核酸を、例えば、ポリペプチドを産生するためか、生物学的なサンプル中の核酸の検出のためのハイブリダイゼーションプローブとしてか、核酸のさらなるコピーを生成するためか、リボザイムまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドを生成するためか、一本鎖ＤＮＡプライマーまたはプローブとしてか、三本鎖形成オリゴヌクレオチドとして使用することができる。
【００７０】
本発明は、核酸の一部または全部を化学的手段を使用して合成する、本発明の核酸の産生プロセスを提供する。
【００７１】
本発明は、本発明のヌクレオチド配列を含むベクター（例えば、クローニングベクターまたは発現ベクター）およびかかるベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。
【００７２】
本発明の核酸増幅は、定量的および／またはリアルタイムであり得る。
【００７３】
本発明の一定の実施形態のために、核酸は、好ましくは、少なくとも７ヌクレオチド長（例えば、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２２５、２５０、２７５、３００ヌクレオチドまたはそれより長い）である。
【００７４】
本発明の一定の実施形態のために、核酸は、好ましくは、多くても５００ヌクレオチド長（例えば、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９０、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５ヌクレオチドまたはそれより短い）である。
【００７５】
本発明のプライマーおよびプローブならびにハイブリダイゼーションのために使用される他の核酸は、好ましくは、１０と３０との間のヌクレオチド長（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド）である。
【００７６】
変異体細菌
本発明はまた、ＢＡＡ抗原がノックアウトされている黄色ブドウ球菌細菌を提供する。ノックアウト細菌の産生技術は周知であり、ノックアウト黄色ブドウ球菌株が報告されている。ノックアウト変異は、遺伝子のコード領域に存在し得るか、その転写調節領域内（例えば、そのプロモーター内）に存在し得る。ノックアウト変異は、抗原をコードするｍＲＮＡレベルを、野生型細菌によって産生されるレベルの１％未満、好ましくは０．５％未満、より好ましくは０．１％未満、最も好ましくは０％に減少させるであろう。
【００７７】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原がその活性を阻害する変異を有する黄色ブドウ球菌を提供する。抗原をコードする遺伝子は、コードされたアミノ酸配列を変化させる変異を有するであろう。変異は、１つ以上のアミノ酸が関与し得る欠失、置換、および／または挿入を含み得る。
【００７８】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原を高発現する細菌（黄色ブドウ球菌細菌など）を提供する。
【００７９】
本発明はまた、ＢＡＡ抗原を構成的に発現する細菌（黄色ブドウ球菌細菌など）を提供する。本発明はまた、ＢＡＡ抗原をコードする遺伝子を含み、この遺伝子が誘導性プロモーターの調節下にある、ブドウ球菌を提供する。
【００８０】
免疫原性組成物および医薬
本発明の免疫原性組成物は、ワクチンとして有用であり得る。本発明のワクチンは、予防用（すなわち、感染を予防する）または治療用（すなわち、感染を処置する）のいずれかであり得るが、典型的には予防用であろう。
【００８１】
したがって、組成物は薬学的に許容可能であり得る。組成物は、通常、抗原に加えて成分を含むであろう（例えば、成分は、典型的には、１つ以上の薬学的キャリアおよび／または賦形剤を含む）。かかる成分の徹底的な考察は、参考文献２５２にある。
【００８２】
組成物を、一般に、水性形態で哺乳動物に投与するであろう。しかし、投与前に、組成物は非水性形態であり得る。例えば、いくつかのワクチンは水性形態で製造され、その後同様に水性形態で充填、分配、そして投与されるが、他のワクチンは、製造時に凍結乾燥され、使用時に水性形態に再構成される。したがって、本発明の組成物を乾燥させることができる（凍結乾燥処方物など）。
【００８３】
組成物は、防腐剤（チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールなど）を含むことができる。しかし、ワクチンは、好ましくは、水銀材料を実質的に含まないことが好ましい（すなわち、５μｇ／ｍｌ未満）（例えば、チオメルサールを含まない）。水銀を含まないワクチンがより好ましい。防腐剤を含まないワクチンが特に好ましい。
【００８４】
熱安定性を改善するために、組成物は温度保護剤（ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）を含むことができる。かかる薬剤のさらなる詳細を以下に示す。
【００８５】
張度を調節するために、生理学的塩（ナトリウム塩など）を含めることが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは、１ｍｇ／ｍｌと２０ｍｇ／ｍｌとの間（例えば、約１０±２ｍｇ／ｍｌ ＮａＣｌ）で存在し得る。存在し得る他の塩には、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、無水リン酸二ナトリウム（ｄｉｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｄｅｈｙｄｒａｔｅ）、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどが含まれる。
【００８６】
組成物の重量オスモル濃度は、一般に、２００ｍＯｓｍ／ｋｇと４００ｍＯｓｍ／ｋｇとの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇであり、より好ましくは、２９０〜３１０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内であろう。
【００８７】
組成物は、１つまたは複数の緩衝液を含むことができる。典型的な緩衝液には、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、ホウ酸緩衝液、コハク酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液（特に、水酸化アルミニウムアジュバントを含む）、またはクエン酸緩衝液が含まれる。緩衝液を、典型的には、５〜２０ｍＭの範囲で含めるであろう。
【００８８】
組成物のｐＨは、一般に、ｐＨ５．０とｐＨ８．１との間、より典型的にはｐＨ６．０とｐＨ８．０との間（例えば、ｐＨ６．５と７．５との間またはｐＨ７．０とｐＨ７．８との間）であろう。
【００８９】
組成物は、好ましくは無菌である。組成物は、好ましくは、発熱性ではない（例えば、用量あたりＥＵ１未満（内毒素単位、一般的尺度）、好ましくは用量あたりＥＵ０．１未満を含む）。組成物は、好ましくはグルテンを含まない。
【００９０】
組成物は、単回免疫化のための材料を含むことができるか、複数回免疫化のための材料を含むことができる（すなわち、「複数回用量」キット）。複数回用量の構成（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）に防腐剤を含めることが好ましい。複数回用量組成物中に防腐剤を含めることの代替として（またはそれに加えて）、材料を取り出すための無菌アダプターを有する容器中に組成物を含めることができる。
【００９１】
ヒトワクチンを、典型的には、約０．５ｍｌの投薬体積で投与するが、半分の用量（すなわち、約０．２５ｍｌ）を小児に投与することができる。
【００９２】
本発明の免疫原性組成物はまた、１つ以上の免疫調節剤（ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）を含むことができる。好ましくは、免疫調節剤のうちの１つ以上は、１つまたは複数のアジュバントを含む。アジュバントには、ＴＨ１アジュバントおよび／またはＴＨ２アジュバントが含まれ得、以下でさらに考察されている。
【００９３】
したがって、本発明は、（１）ＢＡＡ抗原と（２）アジュバント（水酸化アルミニウムアジュバント（例えば、１つ以上の抗原を水酸化アルミニウムに吸着することができる）など）との組み合わせを含む免疫原性組成物を提供する。
【００９４】
本発明の組成物中で使用することができるアジュバントには、以下が含まれるが、これらに限定されない。
【００９５】
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明でアジュバントとしての使用に適切なミネラル含有組成物には、無機塩（アルミニウム塩およびカルシウム塩（またはその混合物）など）が含まれる。カルシウム塩には、リン酸カルシウム（例えば、参考文献７０に開示の「ＣＡＰ」粒子）が含まれる。アルミニウム塩には、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などが含まれ、この塩は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶、無定形など）を取る。これらの塩に吸着することが好ましい（例えば、全ての抗原を吸着させることができる）。ミネラル含有組成物を、金属塩粒子として処方することもできる［７１］。
【００９６】
水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントを使用することができる。これらの名称は従来の名称であるが、存在する実際の化合物を正確に説明していないので、便宜のためだけに使用する（例えば、参考文献７６の第９章を参照のこと）。本発明は、アジュバントとして一般的に使用される任意の「水酸化物」または「リン酸塩」のアジュバントを使用することができる。「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的にはオキシ水酸化アルミニウム塩であり、通常、少なくとも部分的に結晶である。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、ヒドロキシリン酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ）であり、しばしば少量の硫酸塩を含む（すなわち、ヒドロキシリン酸硫酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｕｌｆａｔｅ））。これらを沈殿によって得ることができ、沈殿の間の反応条件と濃度が、塩の中のホスフェートでのヒドロキシルの置換の程度に影響を及ぼす。
【００９７】
繊維状の形態（例えば、透過電子顕微鏡写真で認められる）は、水酸化アルミニウムアジュバントの典型である。水酸化アルミニウムアジュバントのｐＩは、典型的には約１１である（すなわち、アジュバント自体は、生理学的ｐＨで正の表面電荷を有する）。水酸化アルミニウムアジュバントについてｐＨ７．４で１．８〜２．６ｍｇタンパク質／ｍｇ Ａｌ＋＋＋の吸着能が報告されている。
【００９８】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌモル比は、一般に、０．３と１．２との間、好ましくは０．８と１．２との間、より好ましくは０．９５±０．１である。特にヒドロキシリン酸塩について、リン酸アルミニウムは一般に無定形であろう。典型的なアジュバントは、ＰＯ４／Ａｌモル比が０．８４と０．９２との間であり、０．６ｍｇ Ａｌ３＋／ｍｌを含む無定形ヒドロキシリン酸アルミニウムである。リン酸アルミニウムは、一般に、粒子状（例えば、透過電子顕微鏡写真で認められる平板様の形態）であろう。任意の抗原吸着後の粒子の典型的な直径は、０．５〜２０μｍの範囲（例えば、約５〜１０μｍ）である。リン酸アルミニウムアジュバントについてｐＨ７．４で０．７〜１．５ｍｇタンパク質／ｍｇ Ａｌ＋＋＋の吸着能が報告されている。
【００９９】
リン酸アルミニウムの電荷ゼロ点（ＰＺＣ）は、ホスフェートでのヒドロキシルの置換の程度と逆の関係にあり、この置換の程度は、沈殿による塩の調製に使用される反応条件と反応物の濃度に応じて変わり得る。ＰＺＣはまた、溶液中の遊離のホスフェートイオンの濃度を変えることによって（より多くのホスフェート＝より酸性のＰＺＣ）、または緩衝液（例えば、ヒスチジン緩衝液）を加えることによって（ＰＺＣをより塩基性にする）も変化させられる。本発明にしたがって使用されるリン酸アルミニウムは、一般的には、４．０〜７．０の間、より好ましくは、５．０〜６．５の間、例えば、約５．７のＰＺＣを有するであろう。
【０１００】
以下に示すように、黄色ブドウ球菌タンパク質抗原（ＩｓｄＡ、Ｓｔａ０１９、およびＳｔａ０７３を除外する）の水酸化アルミニウムアジュバントへの吸着は、特に複数のタンパク質の組み合わせで有利である（全ての抗原を吸着することができる）。ヒスチジン緩衝液を、通常、かかるアジュバント添加組成物（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）中に含めることができる。
【０１０１】
本発明の組成物を調製するために使用されるアルミニウム塩の懸濁液は、緩衝液（例えば、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、またはＴｒｉｓ緩衝液）を含むことができるが、これは常に必要というわけではない。懸濁液は、好ましくは、無菌でありかつ発熱物質を含まない。懸濁液は、例えば、１．０ｍＭと２０ｍＭとの間、好ましくは５ｍＭと１５ｍＭとの間、より好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する遊離水性ホスフェートイオンを含むことができる。懸濁液はまた、塩化ナトリウムを含むことができる。
【０１０２】
本発明は、水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムとの混合物を使用することができる。この場合、リン酸アルミニウムが水酸化アルミニウムよりも大量に存在し得る（例えば、少なくとも２：１の重量比（例えば、５：１以上、６：１以上、７：１以上、８：１以上、９：１以上など）。
【０１０３】
患者への投与のための組成物中のＡｌ＋＋＋濃度は、好ましくは１０ｍｇ／ｍｌ未満（例えば、５ｍｇ／ｍｌ以下、４ｍｇ／ｍｌ以下、３ｍｇ／ｍｌ以下、２ｍｇ／ｍｌ以下、１ｍｇ／ｍｌ以下など）である。好ましい範囲は、０．３ｍｇ／ｍｌと１ｍｇ／ｍｌとの間である。最大で０．８５ｍｇ／用量が好ましい。
【０１０４】
Ｂ．油エマルジョン（ｏｉｌ ｅｍｕｌｓｉｏｎ）
本発明におけるアジュバントとしての使用に適切な油エマルジョン組成物には、スクアレン−水エマルジョン（ＭＦ５９［参考文献７６の第１０章を参照のこと；参考文献７２も参照のこと］（５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５（マイクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方））など）が含まれる。フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）も使用することができる。
【０１０５】
種々の水中油型エマルジョンアジュバントが公知であり、これらは、典型的には、少なくとも１つの油および少なくとも１つの界面活性剤を含み、油および界面活性剤は生分解性（代謝性）でありかつ生体適合性である。エマルジョン中の油滴は、一般に直径５μｍ未満であり、理想的にはサブミクロンの直径を有し、マイクロフルイダイザーを使用してこれらの小さなサイズを達成して、安定なエマルジョンを得る。濾過滅菌に供することができるので、２２０ｎｍ未満のサイズの液滴が好ましい。
【０１０６】
エマルジョンは、動物供給源（魚類など）または植物供給源由来の油などの油を含むことができる。植物油の供給源には、堅果、種子、および穀粒が含まれる。ピーナッツ油、ダイズ油、ヤシ油、およびオリーブ油が、最も一般的に入手可能な堅果油の例である。例えば、ホホバ豆から得たホホバ油を使用することができる。種子油には、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、およびゴマ種子油などが含まれる。穀粒の群では、コーン油が最も容易に入手可能であるが、小麦、オート麦、ライ麦、米、テフ、ライ小麦などのようなその他の穀類の穀粒の油も用いてよい。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０炭素の脂肪酸エステル（種子油中に天然に存在しない）を、堅果油および種子油から出発する適切な材料の加水分解、分離、およびエステル化によって調製することができる。哺乳動物の乳汁由来の脂肪および油は代謝性であるので、本発明の実施に際して使用することができる。動物供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、鹸化、および他の手段のための手順は、当該分野で周知である。ほとんどの魚は、容易に回収することができる代謝性油を含む。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨ろうなどの鯨油は、本明細書中で使用することができる魚油のうちのいくつかの例である。多数の分岐鎖油は５炭素イソプレン単位において生化学的合成され、これを一般にテルペノイドという。サメ肝油は、スクアレン（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエン）として公知である分岐不飽和テルペノイドを含み、これは本明細書中で特に好ましい。スクアラン（スクアレンの飽和アナログ）も好ましい油である。魚油（スクアレンおよびスクアランが含まれる）は商業的供給源から容易に利用可能であるか、当該分野で公知の方法によって得ることができる。他の好ましい油はトコフェロールである（以下を参照のこと）。油の混合物を使用することができる。
【０１０７】
界面活性剤をその「ＨＬＢ」（親水性／親油性バランス）によって分類することができる。本発明の好ましい界面活性剤のＨＬＢは少なくとも１０、好ましくは少なくとも１５、より好ましくは少なくとも１６である。本発明を、界面活性剤（ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（一般にＴｗｅｅｎと呼ばれる）（特に、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）；エチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）のコポリマー（ＤＯＷＦＡＸ（商標）（直鎖ＥＯ／ＰＯブロックコポリマーなど）で販売）；オクトキシノール（エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の反復数で変化し得る）（オクトキシノール−９（Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（すなわち、ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール））が特に興味深い）；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質（ホスファチジルコリン（レシチン）など）；ノニルフェノールエトキシラート（Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズなど）；ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、およびオレイルアルコール由来のポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性剤として公知）（トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ ３０）など）；およびソルビタンエステル（一般にＳｐａｎとして公知）（ソルビタントリオレアート（Ｓｐａｎ８５）およびソルビタンモノラウラートなど）が含まれるが、これらに限定されない）と共に使用することができる。非イオン性界面活性剤が好ましい。エマルジョン中に含めるのに好ましい界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレアート）、レシチン、およびＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００である。
【０１０８】
界面活性剤の混合物を使用することができる（例えば、Ｔｗｅｅｎ８０／Ｓｐａｎ８５混合物）。ポリオキシエチレンソルビタンエステル（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（Ｔｗｅｅｎ８０）など）とオクトキシノール（ｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）など）との組み合わせも適切である。別の有用な組み合わせは、ラウレス９＋ポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールを含む。
【０１０９】
界面活性剤の好ましい量（重量％）は以下である：ポリオキシエチレンソルビタンエステル（Ｔｗｅｅｎ８０など）０．０１〜１％（特に約０．１％）；オクチルフェノキシポリオキシエタノールまたはノニルフェノキシポリオキシエタノール（ＴｒｉｔｏｎＸ−１００など）またはＴｒｉｔｏｎシリーズの他の洗剤）０．００１〜０．１％（特に、０．００５〜０．０２％）；ポリオキシエチレンエーテル（ラウレス９など）０．１〜２０％（好ましくは０．１〜１０％、特に０．１〜１％または約０．５％）。
【０１１０】
好ましいエマルジョンアジュバントの平均液滴サイズは、１μｍ未満（例えば、７５０ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、４００ｎｍ以下、３００ｎｍ以下、２５０ｎｍ以下、２２０ｎｍ以下、２００ｎｍまたはそれ未満である。これらの液滴サイズを、微小流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓａｔｉｏｎ）などの技術によって都合よく達成することができる。
【０１１１】
本発明で有用な特定の水中油型エマルジョンアジュバントには、以下が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１２】
・スクアレン、Ｔｗｅｅｎ８０、およびＳｐａｎ８５のサブミクロンエマルジョン。体積によるエマルジョンの組成は、約５％スクアレン、約０．５％ポリソルベート８０、および約０．５％Ｓｐａｎ８５であり得る。重量に関して、これらの比は、４．３％スクアレン、０．５％ポリソルベート８０、および０．４８％Ｓｐａｎ８５となる。このアジュバントは「ＭＦ５９」［７３〜７５］として公知であり、参考文献７６の第１０章および参考文献７７の第１２章により詳細に記載されている。ＭＦ５９エマルジョンは、クエン酸イオンを含むことが有利である（例えば、１０ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液）。
【０１１３】
・スクアレン、トコフェロール、およびポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）のエマルジョン。エマルジョンは、リン酸緩衝化生理食塩水を含むことができる。エマルジョンは、Ｓｐａｎ８５（例えば、１％）および／またはレシチンも含むことができる。これらのエマルジョンは、２〜１０％スクアレン、２〜１０％トコフェロール、および０．３〜３％Ｔｗｅｅｎ８０を有することができ、スクアレン：トコフェロールの重量比は、好ましくは１以下である。なぜなら、これにより、より安定なエマルジョンが得られるからである。スクアレンおよびＴｗｅｅｎ８０は、約５：２の体積比または約１１：５の重量比で存在し得る。１つのかかるエマルジョンを、ＰＢＳ中にＴｗｅｅｎ８０を溶解して２％溶液を得、次いで、９０ｍｌのこの溶液を（５ｇのＤＬ−α−トコフェロールおよび５ｍｌスクアレン）の混合物と混合し、次いで、混合物を微小流動化することによって作製することができる。得られたエマルジョンは、サブミクロン油滴（例えば、１００ｎｍと２５０ｎｍとの間、好ましくは約１８０ｎｍの直径を有する）を有することができる。エマルジョンはまた、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａ（３ｄ−ＭＰＬ）を含むことができる。この型の別の有用なエマルジョンは、ヒト用量あたり、０．５〜１０ｍｇスクアレン、０．５〜１１ｍｇトコフェロール、および０．１〜４ｍｇポリソルベート８０を含むことができる［７８］。
【０１１４】
・スクアレン、トコフェロール、およびＴｒｉｔｏｎ洗剤（例えば、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）のエマルジョン。エマルジョンはまた、３ｄ−ＭＰＬを含むことができる（以下を参照のこと）。エマルジョンは、リン酸緩衝液を含むことができる。
【０１１５】
・ポリソルベート（例えば、ポリソルベート８０）、Ｔｒｉｔｏｎ洗剤（例えば、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００）、およびトコフェロール（例えば、α−トコフェロールスクシネート）を含むエマルジョン。エマルジョンは、これら３つの成分を約７５：１１：１０の（例えば、７５０μｇ／ｍｌ ポリソルベート８０、１１０μｇ／ｍｌ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、および１００μｇ／ｍｌ α−トコフェロールスクシネート）の質量比で含むことができ、これらの濃度は、抗原由来のこれらの成分のあらゆる寄与を含むべきである。エマルジョンはまた、スクアレンを含むことができる。エマルジョンはまた、３ｄ−ＭＰＬを含むことができる（以下を参照のこと）。水相は、リン酸緩衝液を含むことができる。
【０１１６】
・スクアラン、ポリソルベート８０、およびポロキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）４０１のエマルジョン（「プルロニック（商標）Ｌ１２１」）。エマルジョンを、リン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）中に処方することができる。このエマルジョンはムラミルジペプチドの有用な送達ビヒクルであり、「ＳＡＦ−１」アジュバント［７９］（０．０５〜１％ Ｔｈｒ−ＭＤＰ、５％スクアラン、２．５％プルロニックＬ１２１、および０．２％ポリソルベート８０）中でトレオニル−ＭＤＰと共に使用されている。これを、「ＡＦ」アジュバント［８０］（５％スクアラン、１．２５％プルロニックＬ１２１、および０．２％ポリソルベート８０）のようにＴｈｒ−ＭＤＰを使用せずに使用することもできる。微小流動化が好ましい。
【０１１７】
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）、および疎水性非イオン性界面活性剤（例えば、ソルビタンエステルまたはマンニドエステル（ソルビタンモノオレアートまたは「Ｓｐａｎ８０」など））を含むエマルジョン。エマルジョンは、好ましくは熱可逆性であり、そして／またはサイズが２００ｎｍ未満の油滴を少なくとも９０％（体積）有する［８１］。エマルジョンはまた、１つ以上の以下のものを含むことができる：アルジトール、凍結保護剤（ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）（例えば、糖（ドデシルマルトシドおよび／またはスクロースなど））、および／またはアルキルポリグリコシド。エマルジョンは、ＴＬＲ４アゴニストを含むことができる［８２］。かかるエマルジョンを凍結乾燥することができる。
・スクアレン、ポロキサマー１０５、およびＡｂｉｌ−Ｃａｒｅのエマルジョン［８３］。アジュバント添加ワクチン中のこれらの成分の最終濃度（重量）は、５％スクアレン、４％ポロキサマー１０５（プルロニックポリオール）、および２％Ａｂｉｌ−Ｃａｒｅ８５（Ｂｉｓ−ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６ ＰＥＧ／ＰＰＧ−１６／１６ジメチコン、カプリル酸トリグリセリド／カプリン酸トリグリセリド）である。
【０１１８】
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性剤を有するエマルジョン。参考文献８４に記載のように、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、およびカルジオリピンである。サブミクロン液滴サイズが有利である。
【０１１９】
・非代謝性油（軽鉱油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ））および少なくとも１つの界面活性剤（レシチン、Ｔｗｅｅｎ８０、またはＳｐａｎ８０など）のサブミクロン水中油型エマルジョン。添加物を含むことができる（ＱｕｉｌＡサポニン、コレステロール、サポニン−親油性結合体（グルクロン酸のカルボキシル基を介したデスアシルサポニンへの脂肪族アミンの付加によって生成された参考文献８５に記載のＧＰＩ−０１００など）、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド、および／またはＮ，Ｎ−ジオクタデシル−Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）プロパンジアミンなど）。
【０１２０】
・らせん状ミセルとしてサポニン（例えば、ＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）およびステロール（例えば、コレステロール）を会合させたエマルジョン［８６］。
【０１２１】
・鉱油、非イオン性親油性エトキシ化脂肪アルコール、および非イオン性親水性界面活性剤（例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含むエマルジョン［８７］。
【０１２２】
・鉱油、非イオン性親水性エトキシ化脂肪アルコール、および非イオン性親油性界面活性剤（例えば、エトキシ化脂肪アルコールおよび／またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー）を含むエマルジョン［８７］。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、エマルジョンを、送達時に抗原と即座に混合することができ、したがって、使用時に最終処方物にできる状態でアジュバントおよび抗原をパッケージングされたワクチンまたは分配されたワクチン中で別個に保持することができる。他の実施形態では、エマルジョンを製造中に抗原と混合する。したがって、組成物を液体のアジュバント添加形態でパッケージングする。２つの液体の混合によってワクチンが最終的に調製されるように、抗原は一般に水性形態であろう。混合のための２液体の体積比は変化し得るが（例えば、５：１と１：５との間）、一般に１：１である。上記の特定のエマルジョンの説明で成分の濃度を示す場合、これらの濃度は典型的には非希釈組成物についてである。したがって、抗原溶液との混合後の濃度は減少するであろう。
【０１２４】
組成物がトコフェロールを含む場合、αトコフェロール、βトコフェロール、γトコフェロール、δトコフェロール、εトコフェロール、またはζトコフェロールのいずれかを使用することができるが、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールは、いくつかの形態を取ることができる（例えば、異なる塩および／または異性体）。塩には、有機塩（コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩など）が含まれる。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールの両方を使用することができる。高齢患者（例えば、６０歳以上）用のワクチン中にトコフェロールを含めることが有利である。何故なら、ビタミンＥはこの患者群における免疫応答に正の効果を有すると報告されているからである［８８］。トコフェロールは抗酸化特性も有し、これは、エマルジョンの安定化に役立ち得る［８９］。好ましいα−トコフェロールはＤＬ−α−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩はコハク酸塩である。コハク酸塩は、ｉｎ ｖｉｖｏでＴＮＦ関連リガンドと連携することが見出されている。
【０１２５】
Ｃ．サポニン処方物［参考文献７６の第２２章］
サポニン処方物を本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。サポニンは、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの不均質な群であり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根で見出され、花にさえも見出される。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ ｔｒｅｅの樹皮由来のサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ）、およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ）由来のサポニンを購入することもできる。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物（ＱＳ２１など）および脂質処方物（ＩＳＣＯＭなど）が含まれる。ＱＳ２１は、Ｓｔｉｍｕｌｏｎ（商標）として市販されている。
【０１２６】
サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを使用して精製されている。これらの技術を使用した特定の精製画分が同定されている（ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが含まれる）。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の産生方法は、参考文献９０に開示されている。サポニン処方物はまた、ステロール（コレステロールなど）を含むことができる［９１］。
【０１２７】
サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成することができる［参考文献７６の第２３章］。ＩＳＣＯＭは、典型的には、リン脂質（ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなど）も含む。任意の公知のサポニンをＩＳＣＯＭで使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、ＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ、およびＱＨＣのうちの１つ以上を含む。ＩＳＣＯＭは、参考文献９１〜９３にさらに記載されている。任意選択的に、ＩＳＣＯＭＳは、追加の洗剤を欠き得る［９４］。
【０１２８】
サポニンベースアジュバント開発の概説を、参考文献９５および９６で見出すことができる。
【０１２９】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。これらの構造は、一般に、任意選択的にリン脂質と組み合わせたか処方したウイルス由来の１つ以上のタンパク質を含む。これらは一般に非病原性であり、増幅せず、かつ一般にいかなる天然のウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質を組換え的に産生するか、全ウイルスから単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰでの使用に適切なこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス由来のタンパク質（ＨＡまたはＮＡなど）、Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質（コアタンパク質またはキャプシドタンパク質など）、Ｅ型肝炎ウイルス由来のタンパク質、麻疹ウイルス由来のタンパク質、シンドビス・ウイルス由来のタンパク質、ロタウイルス由来のタンパク質、口蹄疫ウイルス由来のタンパク質、レトロウイルス由来のタンパク質、ノーウォークウイルス由来のタンパク質、ヒト乳頭腫ウイルス由来のタンパク質、ＨＩＶ由来のタンパク質、ＲＮＡ−ファージ由来のタンパク質、Ｑβ−ファージ由来のタンパク質（外被タンパク質など）、ＧＡ−ファージ由来のタンパク質、ｆｒ−ファージ由来のタンパク質、ＡＰ２０５ファージ由来のタンパク質、およびＴｙ由来のタンパク質（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）が含まれる。ＶＬＰは、参考文献９７〜１０２でさらに考察されている。ビロソームは、例えば、参考文献１０３でさらに考察されている。
【０１３０】
Ｅ．細菌または微生物の誘導体
本発明での使用に適切なアジュバントには、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、脂質Ａ誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチド、およびＡＤＰ−リボシル化毒素、およびその解毒誘導体などの細菌または微生物の誘導体が含まれる。
【０１３１】
ＬＰＳの非毒性誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡ（３ ｄｅ−Ｏ−ａｃｙｌａｔｅｄ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａ）の、４、５、または６のアシル化された鎖を有するものの混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、参考文献１０４に開示されている。かかる３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２μｍ膜を通して濾過滅菌するのに十分に小さい［１０４］。他の非毒性ＬＰＳ誘導体としては、モノホスホリルリピドＡ模倣物、例えば、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ−５２９）が挙げられる［１０５、１０６］。
【０１３２】
脂質Ａ誘導体には、大腸菌由来の脂質Ａの誘導体（ＯＭ−１７４など）が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、参考文献１０７および１０８に記載されている。
【０１３３】
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列（グアノシンへのリン酸結合（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｏｎｄ）によって連結された非メチル化シトシンを含むジヌクレオチド配列）が含まれる。回文配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む二本鎖ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドは、免疫刺激性であることも示されている。
【０１３４】
ＣｐＧはヌクレオチド修飾／アナログ（ホスホロチオエート修飾など）を含むことができ、二本鎖または一本鎖であり得る。参考文献１０９、１１０、および１１１は、可能なアナログ置換を開示している（例えば、グアノシンの２’−デオキシ−７−デアザグアノシンとの置換）。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、参考文献１１２〜１１７でさらに考察されている。
【０１３５】
ＣｐＧ配列をＴＬＲ９に指向することができる（モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなど）［１１８］。ＣｐＧ配列はＴｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか（ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなど）、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る（ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなど）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、参考文献１１９〜１２１で考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１３６】
好ましくは、受容体認識のために５’末端に接近可能であるようにＣｐＧ オリゴヌクレオチドを構築する。任意選択的に、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列を３’末端で結合させて、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成することができる。例えば、参考文献１１８および１２２〜１２４を参照のこと。
【０１３７】
有用なＣｐＧアジュバントはＣｐＧ７９０９（ＰｒｏＭｕｎｅ（商標）（Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐ，Ｉｎｃ．）としても公知）である。別のものはＣｐＧ１８２６である。ＣｐＧ配列を使用することの代わりとしてまたはそれに加えて、ＴｐＧ配列を使用することができ［１２５］、これらのオリゴヌクレオチドは非メチル化ＣｐＧモチーフを含まなくてよい。免疫刺激オリゴヌクレオチドはピリミジンリッチであり得る。例えば、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１つを超える連続するチミジンヌクレオチド（例えば、参考文献１２５に開示のＴＴＴＴ）を含むことができ、そして／または２５％超のチミジン（例えば、３５％超、４０％超、５０％超、６０％超、８０％超など）を有するヌクレオチド組成を有することができる。例えば、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１つを超える連続するシトシンヌクレオチド（例えば、参考文献１２５に開示のＣＣＣＣ）を含むことができ、そして／または２５％超のシトシン（例えば、３５％超、４０％超、５０％超、６０％超、８０％超など）を有するヌクレオチド組成を有することができる。これらのオリゴヌクレオチドは、非メチル化ＣｐＧモチーフを含まなくて良い。免疫刺激オリゴヌクレオチドは、典型的には、少なくとも２０個のヌクレオチドを含むであろう。免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１００個未満のヌクレオチドを含むことができる。
【０１３８】
免疫刺激オリゴヌクレオチドに基づいた特に有用なアジュバントは、ＩＣ−３１（商標）として公知である［１２６］。したがって、本発明で使用されるアジュバントは、（ｉ）少なくとも１つの（好ましくは複数の）ＣｐＩモチーフ（すなわち、ジヌクレオチドを形成するためにイノシンに連結したシトシン）を含むオリゴヌクレオチド（例えば、１５〜４０ヌクレオチド）と、（ｉｉ）ポリカチオン性ポリマー（少なくとも１つの（好ましくは複数の）Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｓトリペプチド配列を含むオリゴペプチド（例えば、５〜２０アミノ酸）など）との混合物を含むことができる。オリゴヌクレオチドは、２６ｍｅｒの配列５’−（ＩＣ）１３−３’（配列番号６）を含むデオキシヌクレオチドであり得る。ポリカチオン性ポリマーは、１１ｍｅｒのアミノ酸配列ＫＬＫＬＬＬＬＬＫＬＫ（配列番号７）を含むペプチドであり得る。オリゴヌクレオチドおよびポリマーは、例えば、参考文献１２７および１２８に開示の複合体を形成することができる。
【０１３９】
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することができる。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（大腸菌熱不安定性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、参考文献１２９に記載されており、非経口アジュバントとしての使用は参考文献１３０に記載されている。毒素またはトキソイドは、好ましくは、ＡサブユニットおよびＢサブユニットの両方を含むホロ毒素の形態である。好ましくは、Ａサブユニットは解毒変異を含み、好ましくは、Ｂサブユニットは変異していない。好ましくは、アジュバントは解毒ＬＴ変異体（ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴ−Ｇ１９２など）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用を、参考文献１３１〜１３８に見出すことができる。有用なＣＴ変異体はＣＴ−Ｅ２９Ｈである［１３９］。アミノ酸置換についての数値での参照は、好ましくは、参考文献１４０（特にその全体が本明細書中で参照として援用される）に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡサブユニットおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１４０】
Ｆ．ヒト免疫調節因子
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節因子には、サイトカイン（インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２［１４１］など）［１４２］、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子など）が含まれる。好ましい免疫調節因子はＩＬ−１２である。
【０１４１】
Ｇ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤を、本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフィア［１４３］または粘膜接着剤（ポリ（アクリル酸）、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリサッカリド、およびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体など）が含まれる。キトサンおよびその誘導体を、本発明中でアジュバントとして使用することもできる［１４４］。
【０１４２】
Ｈ．微粒子
微粒子を、本発明におけるアジュバントとして使用することもできる。ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を使用して生分解性且つ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成した微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、任意選択的に、負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳを使用）または正に荷電した表面（例えば、ＣＴＡＢなどのカチオン性洗剤を使用）を有するように処理する。
【０１４３】
Ｉ．リポソーム（参考文献７６の第１３章および第１４章）
アジュバントとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、参考文献１４５〜１４７に記載されている。
【０１４４】
Ｊ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明での使用に適切なアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる［１４８］。かかる処方物には、さらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤［１４９］および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（オクトキシノールなど）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤［１５０］が含まれる。好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１４５】
Ｋ．ホスファゼン
ホスファゼン（例えば、参考文献１５１および１５２に記載のポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン］（「ＰＣＰＰ」）など）を使用することができる。
【０１４６】
Ｌ．ムラミルペプチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１４７】
Ｍ．イミダゾキノロン化合物。
【０１４８】
本発明でのアジュバントとしての使用に適切なイミダゾキノロン化合物の例には、イミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）（「Ｒ−８３７」）［１５３、１５４］、レシキモド（Ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ）（「Ｒ−８４８」）［１５５］、そのアナログ、およびその塩（例えば、塩酸塩）が含まれる。免疫刺激性イミダゾキノリンについてのさらなる詳細を、参考文献１５６〜１６０で見出すことができる。
【０１４９】
Ｎ．置換尿素
アジュバントとして有用な置換尿素には、参考文献１６１に定義の以下の式Ｉ、ＩＩ、もしくはＩＩＩ：
【０１５０】
【化１】
の化合物またはその塩（「ＥＲ８０３０５８」、「ＥＲ８０３７３２」、「ＥＲ８０４０５３」、「ＥＲ８０４０５８」、「ＥＲ８０４０５９」、「ＥＲ８０４４４２」、「ＥＲ８０４６８０」、「ＥＲ８０４７６４」、ＥＲ８０３０２２、または「ＥＲ８０４０５７」など）（例えば、
【０１５１】
【化２】
）が含まれる。
【０１５２】
Ｏ．さらなるアジュバント
本発明で使用することができるさらなるアジュバントには以下が含まれる。
【０１５３】
・黄色ブドウ球菌ワクチンのための有用なアジュバントとして報告されている環状ジグアニレート（「ｃ−ｄｉ−ＧＭＰ」）［１６２］。
【０１５４】
・チオセミカルバゾン化合物（参考文献１６３に開示のものなど）。活性化合物を処方、製造、およびスクリーニングする方法も参考文献１６３に記載されている。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１５５】
・トリプタントリン（ｔｒｙｐｔａｎｔｈｒｉｎ）化合物（参考文献１６４に開示のものなど）。活性化合物を処方、製造、およびスクリーニングする方法も参考文献１６４に記載されている。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核細胞の刺激で特に有効である。
【０１５６】
・ヌクレオシドアナログ（（ａ）イサトラビン（Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ）（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアノシン）：
【０１５７】
【化３】
およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）参考文献１６５〜１６７に開示の化合物ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン）など）［１６８］。
【０１５８】
・参考文献１６９に開示の化合物（アシルピペラジン化合物、インドールジオン化合物、テトラヒドライソキノリン（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン化合物、アミノアザビニル化合物、アミノベンズイミダゾールキノリノン（ＡＢＩＱ）化合物［１７０、１７１］、ヒドラフタルアミド化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナジリノン化合物、ピロール化合物［１７２］、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラゾロピリミジン（ｐｙｒａｚａｌｏｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ）化合物、およびベンザゾール化合物［１７３］が含まれる）。
【０１５９】
・ホスフェート含有非環式骨格に連結された脂質を含む化合物（ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４など［１７４、１７５］）。
【０１６０】
・ポリオキシドニウムポリマー［１７６、１７７］または他のＮ酸化ポリエチレン−ピペラジン誘導体。
【０１６１】
・メチルイノシン５’−モノホスフェート（「ＭＩＭＰ」）［１７８］。
【０１６２】
・ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物［１７９］あるいはその薬学的に許容される塩または誘導体、例えば、以下の式を持つもの：
【０１６３】
【化４】
ここで、Ｒは、水素、直鎖または分岐鎖である非置換または置換された飽和または不飽和のアシル基、アルキル基（例えば、シクロアルキル基）、アルケニル基、アルキニル基、およびアリール基を含む群から選択される。例には、カスアリン、カスアリン−６−α−Ｄ−グルコピラノース、３−エピ−カスアリン、７−エピ−カスアリン、３，７−ジエピ−カスアリンなどが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６４】
・ＣＤ１ｄリガンド（α−グリコシルセラミド［１８０〜１８７］（例えば、α−ガラクトシルセラミド）、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００（（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール）、ＣＲＯＮＹ−１０１、３”−Ｏ−スルホ−ガラクトシルセラミドなど）。
【０１６５】
・γイヌリン［１８８］またはその誘導体（アルガムリン（ａｌｇａｍｍｕｌｉｎ）など）。
【０１６６】
【化５】
アジュバントの組み合わせ
本発明はまた、上記で同定されたアジュバントの１つ以上の組み合わせを含むことができる。例えば、以下のアジュバント組成物を本発明で使用することができる：（１）サポニンおよび水中油型エマルジョン［１８９］；（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）［１９０］；（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（任意選択的に、＋ステロール）［１９１］；（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルジョンとの組み合わせ［１９２］；（６）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０（商標）、５％プルロニック−ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロンエマルジョンに微小流動化されたかまたはボルテックスされてより大きな粒子サイズのエマルジョンにしたＳＡＦ、（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群由来の１つ以上の細菌細胞壁成分を含むＲｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および（８）１つ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＭＰＬなど）。
【０１６７】
免疫刺激剤として作用する他の物質は、参考文献７６の第７章に開示されている。
【０１６８】
水酸化アルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウムアジュバントの使用が特に好ましく、抗原を一般にこれらの塩に吸着させる。リン酸カルシウムは別の好ましいアジュバントである。他の好ましいアジュバントの組み合わせには、Ｔｈ１アジュバントとＴｈ２アジュバントとの組み合わせ（ＣｐＧおよびミョウバンまたはレシキモドおよびミョウバンなど）が含まれる。リン酸アルミニウムと３ｄＭＰＬとの組み合わせを使用することができる。
【０１６９】
本発明の組成物は、細胞媒介免疫応答および体液性免疫応答の両方を誘発することができる。この免疫応答は、好ましくは、肺炎球菌への曝露の際に迅速に応答することができる持続性（例えば、中和）抗体および細胞媒介免疫を誘導するであろう。
【０１７０】
２つのＴ細胞型（ＣＤ４細胞およびＣＤ８細胞）は、一般に、細胞媒介免疫および体液性免疫を開始および／または増強する必要があると考えられる。ＣＤ８Ｔ細胞はＣＤ８共受容体を発現することができ、これを一般に細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）という。ＣＤ８Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩ分子上に提示された抗原を認識するかこれと相互作用することができる。
【０１７１】
ＣＤ４Ｔ細胞はＣＤ４共受容体を発現することができ、一般にＴヘルパー細胞という。ＣＤ４Ｔ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合した抗原性ペプチドを認識することができる。ＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用の際、ＣＤ４細胞は、サイトカインなどの因子を分泌することができる。これらの分泌されたサイトカインは、Ｂ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、マクロファージ、および免疫応答に関与する他の細胞を活性化することができる。ヘルパーＴ細胞またはＣＤ４＋細胞を、以下の２つの機能的に異なるサブセットにさらに分類することができる：そのサイトカインおよびエフェクターの機能が異なるＴＨ１表現型およびＴＨ２表現型。
【０１７２】
活性化されたＴＨ１細胞は、細胞性免疫（抗原特異的ＣＴＬ産生の増加が含まれる）を増強し、したがって、細胞内感染に対する応答で特に有益である。活性化されたＴＨ１細胞は、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−βのうちの１つ以上を分泌することができる。ＴＨ１免疫応答により、マクロファージ、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞、およびＣＤ８細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の活性化による局所炎症反応が起こり得る。ＴＨ１免疫応答はまた、ＩＬ−１２でのＢ細胞およびＴ細胞の成長を刺激することによって免疫応答を拡大するように作用することができる。ＴＨ１刺激されたＢ細胞はＩｇＧ２ａを分泌することができる。
【０１７３】
活性化されたＴＨ２細胞は抗体産生を増強し、したがって、細胞外感染に対する応答で有益である。活性化されたＴＨ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０のうちの１つ以上を分泌することができる。ＴＨ２免疫応答により、将来の防御のためのＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞の産生をもたらすことができる。
【０１７４】
増強された免疫応答には、増強されたＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答のうちの１つ以上が含まれ得る。
【０１７５】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬの増加、１つ以上のＴＨ１免疫応答に関連するサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＴＮＦ−βなど）の増加、活性化されたマクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加のうちの１つ以上が含まれ得る。好ましくは、増強されたＴＨ１免疫応答には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれるであろう。
【０１７６】
ＴＨ１免疫応答を、ＴＨ１アジュバントを使用して誘発することができる。ＴＨ１アジュバントは、一般に、アジュバントを使用しない抗原の免疫化と比較して、ＩｇＧ２ａ産生レベルの増加を誘発するであろう。本発明での使用に適切なＴＨ１アジュバントには、例えば、サポニン処方物、ビロソームおよびウイルス様粒子、腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体、免疫刺激オリゴヌクレオチドが含まれ得る。免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドなど）は、本発明での使用に好ましいＴＨ１アジュバントである。
【０１７７】
ＴＨ２免疫応答には、１つ以上のＴＨ２免疫応答に関連するサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０など）の増加またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞の産生の増加の１つ以上が含まれ得る。好ましくは、増強されたＴＨ２免疫応答（ｒｅｓｏｎｓｅ）には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれるであろう。
【０１７８】
ＴＨ２免疫応答を、ＴＨ２アジュバントを使用して誘発することができる。ＴＨ２アジュバントは、一般に、アジュバントを使用しない抗原の免疫化と比較して、ＩｇＧ１産生レベルの増加を誘発するであろう。本発明での使用に適切なＴＨ２アジュバントには、例えば、ミネラル含有組成物、油エマルジョン、およびＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体が含まれる。ミネラル含有組成物（アルミニウム塩など）は、本発明での使用に好ましいＴＨ２アジュバントである。
【０１７９】
好ましくは、本発明は、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントとの組み合わせを含む組成物を含む。好ましくは、かかる組成物は、増強されたＴＨ１応答および増強されたＴＨ２応答（すなわち、アジュバントを使用しない免疫化と比較して、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの両方の産生の増加）を誘発する。さらにより好ましくは、ＴＨ１アジュバントとＴＨ２アジュバントとの組み合わせを含む組成物は、単一アジュバントを使用した免疫化と比較して（すなわち、ＴＨ１アジュバントのみを使用した免疫化またはＴＨ２アジュバントのみを使用した免疫化と比較して）、増加したＴＨ１免疫応答および／または増加したＴＨ２免疫応答を誘発する。
【０１８０】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答により、増強されたＴＨ１応答および増強されたＴＨ２応答の一方または両方が得られる。
【０１８１】
増強された免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答により、増強された全身免疫応答および増強された粘膜免疫応答の一方または両方が得られる。好ましくは、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０１８２】
黄色ブドウ球菌感染は身体の種々の領域に影響を及ぼし得るので、本発明の組成物を、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を、溶液または懸濁液のいずれかとしての注射液として調製することができる。注射前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液に適切な固体形態も調製することができる（例えば、凍結乾燥組成物または噴霧−凍結乾燥組成物）。例えば、軟膏、クリーム、または粉末として局所投与用の組成物を調製することができる。経口投与用の組成物を、例えば、錠剤もしくはカプセル、スプレー、またはシロップ（任意選択的に、風味づけする）として調製することができる。肺投与用の組成物を、例えば、微細な粉末またはスプレーを使用した吸入器として調製することができる。組成物を、坐剤またはペッサリーとして調製することができる。鼻、耳、または眼への投与のための組成物を、例えば、点滴剤として調製することができる。組成物は、合わせた組成物が患者への投与直前に再構成されるようにデザインされたキット形態であり得る。かかるキットは、液体形態の１つ以上の抗原および１つ以上の凍結乾燥抗原を含むことができる。
【０１８３】
組成物が使用前に即席で調製され（例えば、成分が凍結乾燥形態で存在する場合）、且つキットとして提示される場合、キットは２つのバイアルを含むことができるか、１つの予め充填されたシリンジおよび１つのバイアルを含むことができ、シリンジの内容物を使用して、注射前にバイアルの内容物を再活性化する。
【０１８４】
ワクチンとして使用される免疫原性組成物は、免疫学的に有効な量の抗原および必要に応じた任意の他の成分を含む。「免疫学的に有効な量」によって、単回用量または一連の用量の一部のいずれかでの個体への投与量が処置または予防に有効であることを意味する。この量は、処置される個体の健康状態および身体の状態、年齢、処置される個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系の抗体合成能力、所望される防御の程度、ワクチンの処方、処置を行う医師の医学的状況の評価、および他の関連する要因に応じて変化する。この量は、比較的広い範囲に含まれ、これを慣用的な試験によって決定することができると予想される。１つを超える抗原が組成物中に含まれる場合、２つの抗原は相互に同一の用量または異なる用量で存在することができる。
【０１８５】
上記のように、組成物は温度保護剤を含むことができ、この成分は特にアジュバント添加組成物（特に、アルミニウム塩などの無機アジュバントを含むもの）で有用であり得る。参考文献１９３に記載のように、その凝固点を低下させるために（例えば、凝固点を０℃未満に低下させるために）、液体温度保護剤を水性ワクチン組成物に添加することができる。したがって、組成物を０℃未満であるがその凝固点より高い温度で保存して、熱による分解を阻止することができる。温度保護剤はまた、無機塩アジュバントを凍結融解後の凝集または沈殿から保護しながら組成物を凍結させ、高温（例えば、４０℃超）でもこの組成物を保護することもできる。液体温度保護剤が最終混合物の体積で１％〜８０％を形成するように、出発水性ワクチンおよび液体温度保護剤を混合することができる。適切な温度保護剤は、ヒト投与に安全であり、水において容易に混和性／可溶性であるべきであり、かつ組成物中の他の成分（例えば、抗原およびアジュバント）に損傷を与えるべきではない。例には、グリセリン、プロピレングリコール、および／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。適切なＰＥＧの平均分子量は、２００Ｄａ〜２０，０００Ｄａの範囲であり得る。好ましい実施形態では、ポリエチレングリコールの平均分子量は、約３００Ｄａ（「ＰＥＧ−３００」）であり得る。
【０１８６】
本発明は、（ｉ）第１の抗原群、第２の抗原群、第３の抗原群、または第４の抗原群から選択される１つ以上の抗原および（ｉｉ）温度保護剤を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物を（ｉ）、第１の抗原群、第２の抗原群、第３の抗原群、または第４の抗原群から選択される１つ以上の抗原を含む水性組成物と、（ｉｉ）温度保護剤とを混合することによって形成することができる。次いで、混合物を、例えば、０℃未満、０℃〜２０℃、２０℃〜３５℃、３５℃〜５５℃、またはそれを超える温度で保存することができる。これを、液体形態または凍結形態で保存することができる。混合物を凍結乾燥することができる。あるいは、組成物を、（ｉ）第１の抗原群、第２の抗原群、第３の抗原群、または第４の抗原群から選択される１つ以上の抗原を含む乾燥組成物と、（ｉｉ）温度保護剤を含む液体組成物とを混合することによって形成することができる。したがって、成分（ｉｉ）を使用して、成分（ｉ）を再構成することができる。
【０１８７】
処置方法およびワクチンの投与
本発明はまた、有効量の本発明の抗原、タンパク質、または免疫原性組成物を投与する工程を含む、哺乳動物における免疫応答を惹起するための方法を提供する。免疫応答は、防御性のものが好ましく、抗体媒介免疫および／または細胞媒介免疫を含むことが好ましい。本方法は、追加免疫応答（ｂｏｏｓｔｅｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を惹起することができる。
【０１８８】
本発明はまた、有効量の本発明の抗原、タンパク質、または免疫原性組成物を投与する工程を含む、黄色ブドウ球菌に対して哺乳動物を免疫化するための方法を提供する。
【０１８９】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化のための医薬の製造におけるＢＡＡ抗原の使用を提供する。
【０１９０】
本発明はまた、治療で用いるための本発明の融合タンパク質または免疫原性組成物を提供する。
【０１９１】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化のための医薬の製造における本発明の融合タンパク質の使用を提供する。
【０１９２】
本発明は、治療で用いるための本発明の抗ＢＡＡ抗体を提供する。本発明はまた、黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染の防御および／または処置のための医薬の製造における抗ＢＡＡ抗体の使用を提供する。
【０１９３】
これらの使用および方法による哺乳動物における免疫応答の惹起により、哺乳動物を黄色ブドウ球菌感染（院内感染が含まれる）から防御することができる。より詳細には、哺乳動物を、カテーテル関連血流感染（ｃａｔｈｅｔｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｂｌｏｏｄ ｓｔｒｅａｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、皮膚感染、肺炎、髄膜炎、骨髄炎、心内膜炎、トキシックショック症候群、および／または敗血症から防御することができる。
【０１９４】
本発明はまた、本発明の免疫原性組成物を予め充填した送達デバイスを提供する。
【０１９５】
哺乳動物は、好ましくは、ヒトである。ワクチンが予防用である場合、ヒトは、好ましくは、小児（例えば、よちよち歩きの小児（ｔｏｄｄｌｅｒ）または乳児）またはティーンエージャーであり、ワクチンが治療用である場合、ヒトは、好ましくは、ティーンエージャーまたは成人である。例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価するために、小児用ワクチンを成人に投与することもできる。本発明にしたがって有用に免疫化することができる他の哺乳動物は、ウシ、イヌ、ウマ、およびブタである。
【０１９６】
治療上の処置の有効性をチェックするための１つの方法は、本発明の組成物の投与後の黄色ブドウ球菌感染のモニタリングを含む。予防上の処置の有効性をチェックするための１つの方法は、本発明の組成物の投与後の本発明の組成物中の抗原に対する全身（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａの産生レベルのモニタリングなど）および／または粘膜（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の免疫応答のモニタリングを含む。典型的には、抗原特異的血清抗体応答を免疫化後の他に攻撃誘発前に決定するのに対して、抗原特異的粘膜抗体応答は、免疫化後および攻撃誘発後に決定する。
【０１９７】
本発明の組成物の免疫原性を評価する別の方法は、免疫ブロットおよび／またはマイクロアレイによる患者の血清または粘膜の分泌物をスクリーニングするためにタンパク質を組換え的に発現することである。タンパク質と患者サンプルとの間の陽性反応は、患者が、問題のタンパク質に対する免疫応答を確立した（ｍｏｕｎｔ）ことを示す。この方法を使用して、抗原内の免疫優性の抗原および／またはエピトープを同定することもできる。
【０１９８】
ワクチン組成物の有効性を、ワクチン組成物での黄色ブドウ球菌感染の動物モデル（例えば、モルモットまたはマウス）の攻撃誘発（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）によってｉｎ ｖｉｖｏで決定することもできる。特に、黄色ブドウ球菌感染症研究のための有用な動物モデルは３つ（すなわち、（ｉ）マウス膿瘍モデル［１９４］、（ｉｉ）マウス致死的感染モデル［１９４］、および（ｉｉｉ）マウス肺炎モデル［１９５］）存在する。膿瘍モデルは、静脈内攻撃誘発後のマウス腎臓中の膿瘍を検査する。致死的感染モデルは、静脈内経路または腹腔内経路による通常の致死量の黄色ブドウ球菌による感染後に生存するマウスの数を検査する。肺炎モデルも生存率を検査するが、鼻腔内感染を使用する。有用なワクチンは、これらのモデルのうちの１つ以上で有効であり得る。例えば、いくつかの臨床的状況について、血液への拡散の防止やオプソニン作用の促進を必要とすることなく肺炎から防御することが望ましいかもしれない。他の状況では、血液への拡散を防止することが最も望ましいかもしれない。異なる抗原および異なる抗原の組み合わせは、有効なワクチンの異なる態様に寄与し得る。
【０１９９】
本発明の組成物を、一般に、患者に直接投与するであろう。非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または組織の間質腔内）によるか、粘膜（直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）または経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、鼻腔内、眼、耳、肺、または他の粘膜投与など）によって直接送達させることができる。
【０２００】
本発明を使用して、全身免疫および／または粘膜免疫を誘発し、好ましくは、増強された全身免疫および／または粘膜免疫を誘発することができる。
【０２０１】
好ましくは、全身免疫および／または粘膜免疫の増強は、ＴＨ１および／またはＴＨ２免疫応答の増強を反映する。好ましくは、免疫応答の増強には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡの産生の増加が含まれる。
【０２０２】
単回用量スケジュールまたは複数用量スケジュールによって投薬することができる。複数用量を、一次免疫化スケジュールおよび／または追加免疫化スケジュールで使用することができる。複数用量スケジュールでは、同一または異なる経路（例えば、非経口での初回刺激（ｐｒｉｍｅ）および粘膜の追加刺激（ｂｏｏｓｔ）、粘膜の初回刺激および非経口の追加刺激など）によって種々の用量を投与することができる。複数用量を、典型的には、少なくとも１週間間隔（例えば、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約８週間、約１０週間、約１２週間、約１６週間など）で投与するであろう。
【０２０３】
本発明にしたがって調製したワクチンを使用して、小児および成人の両方を処置することができる。したがって、ヒト患者は、１歳未満、１〜５歳、５〜１５歳、１５〜５５歳、または少なくとも５５歳であり得る。ワクチンを受容するのに好ましい患者は、高齢者（例えば、５０歳以上、６０歳以上、好ましくは６５歳以上）、若年者（例えば、５歳以下）、入院患者、医療従事者、軍務従事者および軍関係者、妊婦、慢性疾患患者、または免疫不全患者である。しかし、ワクチンはこれらの群のみに適切なのではなく、集団でより一般的に使用することができる。
【０２０４】
本発明によって産生されたワクチンを、他のワクチンと実質的に同時に（例えば、インフルエンザワクチン、麻疹ワクチン、ムンプスワクチン、風疹ワクチン、ＭＭＲワクチン、水痘ワクチン、ＭＭＲＶワクチン、ジフテリアワクチン、破傷風ワクチン、百日咳ワクチン、ＤＴＰワクチン、結合体化インフルエンザ菌ｂ型ワクチン、不活化ポリオウイルスワクチン、Ｂ型肝炎ウイルスワクチン、髄膜炎菌結合体ワクチン（４価Ａ−Ｃ−Ｗ１３５−Ｙワクチンなど）、呼吸器合胞体ウイルスワクチンなどと実質的に同時）（例えば、医療専門家またはワクチン接種センターに対する同時期の医学的相談または訪問中に）患者に投与することができる。同時投与に適切なさらなる非黄色ブドウ球菌ワクチンには、参考文献５８の３３〜４６頁に列挙した１つ以上の抗原が含まれ得る。
【０２０５】
核酸免疫化
上記の免疫原性組成物には、黄色ブドウ球菌由来のポリペプチド抗原が含まれる。しかし、全ての場合、ポリペプチド抗原を、このポリペプチドをコードする核酸（典型的にはＤＮＡ）と置換して、核酸免疫化に基づいた組成物、方法、および使用を得ることができる。核酸免疫化は、現在、発展した分野である（例えば、参考文献１９６〜２０３などを参照のこと）。
【０２０６】
免疫原をコードする核酸は、患者への送達後にｉｎ ｖｉｖｏで発現し、次いで、発現した免疫原は、免疫系を刺激する。有効成分は、典型的には、（ｉ）プロモーター；（ｉｉ）プロモーターに作動可能に連結された免疫原をコードする配列；および、任意選択的に、（ｉｉｉ）選択マーカーを含む核酸ベクターの形態を取るであろう。好ましいベクターは、（ｉｖ）複製起点および（ｖ）（ｉｉ）の下流に存在し、且つ（ｉｉ）に作動可能に連結された転写ターミネーターをさらに含むことができる。一般に、（ｉ）および（ｖ）は真核生物のものであり、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）は原核生物のものであろう。
【０２０７】
好ましいプロモーターは、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来のウイルスプロモーターである。ベクターは、プロモーターに加えて、プロモーターと機能的に相互作用する転写調節配列（例えば、エンハンサー）も含むことができる。好ましいベクターは最初期ＣＭＶエンハンサー／プロモーターを含み、より好ましいベクターはＣＭＶイントロンＡも含む。免疫原をコードする配列の発現がプロモーターの調節下にあるように、免疫原をコードする下流配列にプロモーターを作動可能に連結する。
【０２０８】
マーカーを使用する場合、マーカーは、好ましくは、微生物宿主（例えば、原核生物、細菌、酵母）中で機能する。マーカーは、好ましくは、原核生物選択マーカー（例えば、原核生物プロモーターの調節下で転写される）である。便宜上、典型的なマーカーは抗生物質耐性遺伝子である。
【０２０９】
本発明のベクターは、好ましくは、自己複製性のエピソームまたは染色体外ベクター（プラスミドなど）である。
【０２１０】
本発明のベクターは、好ましくは、複製起点を含む。複製起点は原核生物で活性であるが、真核生物では活性ではないことが好ましい。
【０２１１】
したがって、好ましいベクターは、ベクター選択のための原核生物マーカー、原核生物の複製起点を含むが、免疫原をコードする配列の転写を駆動するための真核生物プロモーターを含む。したがって、ベクターは、（ａ）ポリペプチド発現せずに原核生物宿主中で増幅および選択されるが、（ｂ）増幅されることなく真核生物宿主中で発現される。この構成（ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）は、核酸免疫化ベクターに理想的である。
【０２１２】
本発明のベクターは、コード配列の下流に真核生物転写終結配列を含むことができる。これにより、転写レベルを増強することができる。コード配列がそれ自体の転写終結配列を持たない場合、本発明のベクターは、好ましくは、ポリアデニル化配列を含む。好ましいポリアデニル化配列は、ウシ成長ホルモンに由来する。
【０２１３】
本発明のベクターは複数のクローニング部位を含むことができる。
【０２１４】
免疫原をコードする配列およびマーカーに加えて、ベクターは第２の真核生物コード配列を含むことができる。ベクターは、第２の配列の上流に、免疫原と同一の転写物から第２の真核生物ポリペプチドを翻訳することを可能にするためのＩＲＥＳを含むこともできる。あるいは、免疫原をコードする配列は、ＩＲＥＳの下流に存在することができる。
【０２１５】
本発明のベクターは、非メチル化ＣｐＧモチーフ（例えば、一般にグアノシンの前にシトシンを有し、２つの５’プリンおよび２つの３’ピリミジンに隣接した非メチル化ＤＮＡ配列）を含むことができる。その非メチル化形態では、これらのＤＮＡモチーフは、いくつかの免疫細胞型の強力な刺激因子であることが証明されている。
【０２１６】
ベクターを、標的化された方法で送達することができる。受容体媒介ＤＮＡ送達技術は、例えば、参考文献２０４〜２０９に記載されている。遺伝子療法プロトコールにおける局所投与のために、核酸を含む治療用組成物を約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡ範囲で投与する。約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇのＤＮＡの濃度範囲を、遺伝子療法プロトコール中で使用することもできる。作用方法（例えば、コードされた遺伝子産物レベルの増強または抑制のため）ならびに形質転換および発現の有効性などの要因は、最終的な有効性に必要な投薬量に影響を及ぼす検討材料である。組織のより広い領域にわたりより高い発現を所望する場合、より大量のベクター、または連続した投与プロトコールにおける同量の再投与、または異なる隣接したもしくは接近した組織部分への数回の投与が、陽性の治療結果を得るのに必要であり得る。全ての場合、臨床試験における慣用的な実験により、最適な治療結果を得るための具体的な範囲が決定されるであろう。
【０２１７】
遺伝子送達ビヒクルを使用してベクターを送達させることができる。遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源または非ウイルス起源であり得る（一般に、参考文献２１０〜２１３を参照のこと）。
【０２１８】
所望の核酸の送達および所望の細胞中での発現のためのウイルスベースのベクターは、当該分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルには、組換えレトロウイルス（例えば、参考文献２１４〜２２４）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビス・ウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２４６）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ ＶＲ １２４９；ＡＴＣＣ ＶＲ−５３２）（これらのウイルスのハイブリッドまたはキメラも使用することができる）、ポックスウイルスベクター（例えば、ワクシニア、鶏痘、カナリアポックス、修飾ワクシニアＡｎｋａｒａなど）、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、参考文献２２５〜２３０を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。死滅アデノウイルスに連結されたＤＮＡ［２３１］の投与も使用することができる。
【０２１９】
非ウイルス送達ビヒクルおよび方法も使用することができ、これらには、以下が含まれるが、これらに限定されない：死滅したアデノウイルスのみに連結されたか連結されていないポリカチオン性縮合ＤＮＡ［例えば、２３１］、リガンド連結ＤＮＡ［２３２］、真核細胞送達ビヒクル細胞［例えば、参考文献２３３〜２３７］、および核電荷中和（ｎｕｃｌｅｉｃ ｃｈａｒｇｅ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）または細胞膜との融合。裸のＤＮＡを使用することもできる。例示的な裸のＤＮＡの導入方法は、参考文献２３８および２３９に記載されている。遺伝子送達ビヒクルとして作用することができるリポソーム（例えば、免疫リポソーム（ｉｍｍｕｎｏｌｉｐｏｓｏｍｅ））は、参考文献２４０〜２４４に記載されている。さらなるアプローチは、参考文献２４５および２４６に記載されている。
【０２２０】
使用に適切なさらなる非ウイルス送達には、機械的送達系（参考文献２４６に記載のアプローチなど）が含まれる。さらに、コード配列またはその発現産物を、光重合したヒドロゲル材料の沈着または電離放射線の使用によって送達させることができる［例えば、参考文献２４７および２４８］。コード配列の送達のために使用することができる他の従来の遺伝子送達方法には、例えば、手持ち式の遺伝子銃（ｈａｎｄ−ｈｅｌｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｇｕｎ）の使用［２４９］または導入された遺伝子の活性化のための電離放射線の使用［２４７および２４８］が含まれる。
【０２２１】
ＰＬＧ（ポリ（ラクチド−コ−グリコリド））微粒子を使用したＤＮＡの送達は、例えば、負に荷電した表面（例えば、ＳＤＳで処理）または正に荷電した表面（例えば、ＣＴＡＢなどのカチオン性洗剤で処理）を有するように任意選択的に処理された微粒子への吸着による特に好ましい方法である。
【０２２２】
検出方法および診断方法
本発明は、サンプル中の黄色ブドウ球菌細菌を検出するための方法を提供する。本方法は、ＢＡＡ抗原またはＢＡＡ抗原をコードする核酸の存在または不在を検出する工程を含むことができる。本方法を、微生物学的試験、臨床的診断または非臨床的診断などのために使用することができる。抗原の検出は、例えば、サンプルと、抗ＢＡＡ抗体（標識した抗ＢＡＡ抗体など）とを接触させる工程を含むことができる。核酸抗原の検出は、例えば、核酸ハイブリダイゼーション（ノーザンブロットまたはサザンブロット、核酸マイクロアレイ、または「遺伝子チップ」の使用などによる）、増幅反応（例えば、ＰＣＲ、ＳＤＡ、ＳＳＳＲ、ＬＣＲ、ＴＭＡ、ＮＡＳＢＡなど）に基づいた任意の都合のよい方法を含むことができる。
【０２２３】
本発明はまた、患者から採取したサンプル中の抗ＢＡＡ抗体の存在または不在を検出する工程を含む、患者が黄色ブドウ球菌に感染しているか否かを検出するための方法を提供する。抗原の検出は、例えば、サンプルとＢＡＡ抗原（例えば、固定化ＢＡＡ抗原）とを接触させる工程を含むことができる。
【０２２４】
ＢＡＡ抗原、ＢＡＡ抗原をコードする核酸、または抗ＢＡＡ抗原の存在は、サンプル中の黄色ブドウ球菌の存在を示し、特に、「ＴＷ」ＭＲＳＡ株および／またはＳＴ−２３９型ＭＲＳＡ株の存在を示す。したがって、臨床的診断設定では、方法の結果を使用して、患者のための治療ストラテジー（例えば、抗生物質の選択など）を教示または指示することができる。
【０２２５】
本発明はまた、（ａ）抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下で抗ＢＡＡ抗体を生物学的なサンプルと接触させる工程、および（ｂ）複合体を検出する工程を含む、ＢＡＡ抗原を検出するためのプロセスを提供する。
【０２２６】
本発明はまた、（ａ）抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下でＢＡＡ抗原を生物学的なサンプル（例えば、血液または血清サンプル）と接触させる工程、および（ｂ）複合体を検出する工程を含む、抗ＢＡＡ抗体を検出するためのプロセスを提供する。
【０２２７】
本発明は、（ａ）二重鎖を形成するためのハイブリダイゼーション条件下で本発明の核酸プローブを生物学的なサンプルと接触させる工程、および（ｂ）二重鎖を検出する工程を含む、ＢＡＡをコードする核酸を検出するためのプロセスを提供する。
【０２２８】
本発明はまた、黄色ブドウ球菌細菌のＢＡＡ核酸配列内に含まれるテンプレート配列を増幅するためのプライマー（例えば、ＰＣＲプライマー）を含むキットを提供し、このキットは第１のプライマーおよび第２のプライマーを含み、第１のプライマーがテンプレート配列に実質的に相補的であり、第２のプライマーがテンプレート配列の相補物に実質的に相補的であり、実質的な相補性を有するプライマーの部分が、増幅すべきテンプレート配列の末端を規定する。第１のプライマーおよび／または第２のプライマーは、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）を含むことができる。
【０２２９】
本発明はまた、一本鎖または二本鎖の核酸（またはその混合物）中に含まれる黄色ブドウ球菌のＢＡＡテンプレート核酸配列を増幅可能な第１の一本鎖オリゴヌクレオチドおよび第２の一本鎖オリゴヌクレオチドを含むキットを提供し、ここで、（ａ）第１のオリゴヌクレオチドがテンプレート核酸配列に実質的に相補的なプライマー配列を含み、（ｂ）第２のオリゴヌクレオチドがテンプレート核酸配列の相補物に実質的に相補的なプライマー配列を含み、（ｃ）第１のオリゴヌクレオチドおよび／または第２のオリゴヌクレオチドがテンプレート核酸に相補的でない配列を含み、（ｄ）プライマー配列が増幅すべきテンプレート配列の末端を規定する。特徴（ｃ）の非相補配列は、好ましくは、プライマー配列の上流（すなわち、５’側）に存在する。これらの（ｃ）配列の一方または両方は、制限部位［例えば、参考文献２５０］またはプロモーター配列［例えば、参考文献２５１］を含むことができる。第１のオリゴヌクレオチドおよび／または第２のオリゴヌクレオチドは、検出可能な標識（例えば、蛍光標識）を含むことができる。
【０２３０】
概要
本発明の実施において、他で示さない限り、当業者の技術の範囲内である化学、生化学、分子生物学、免疫学、および薬学の従来の方法を使用するであろう。かかる技術は、文献中に十分に説明されている。例えば、参考文献２５２〜２５９などを参照のこと。
【０２３１】
本発明が「エピトープ」を考慮する場合、このエピトープは、Ｂ細胞エピトープおよび／またはＴ細胞エピトープであり得る。かかるエピトープを、（例えば、ＰＥＰＳＣＡＮ［２６０、２６１］または類似の方法を使用して）経験的に同定することができるか、（例えば、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗原性指数（ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｉｎｄｅｘ）［２６２］、行列ベースのアプローチ［２６３］、ＭＡＰＩＴＯＰＥ［２６４］、ＴＥＰＩＴＯＰＥ［２６５、２６６］、ニューラルネットワーク（ｎｅｕｒａｌ ｎｅｔｗｏｒｋ）［２６７］、ＯｐｔｉＭｅｒ＆ＥｐｉＭｅｒ［２６８、２６９］、ＡＤＥＰＴ［２７０］、Ｔｓｉｔｅｓ［２７１］、親水性［２７２］、抗原性指数［２７３］、または参考文献２７４〜２７８に開示の方法などを使用して）予想することができる。エピトープは、抗体またはＴ細胞受容体の抗原結合部位によって認識されて結合する抗原の一部であり、「抗原決定基」ということもできる。
【０２３２】
抗原「ドメイン」が省略される場合、これは、シグナルペプチド、細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、細胞外ドメインなどの省略を含み得る。
【０２３３】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を含む。例えば、Ｘを「含む」組成物は、排他的にＸからなることができるか、いくらかの付加物を含むことができる（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【０２３４】
数値ｘに関する用語「約」は、任意選択的であり、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２３５】
２つのアミノ酸配列間のパーセンテージ配列同一性の言及は、アラインメントした場合に２配列を比較して同一であるアミノ酸のパーセンテージを意味する。このアラインメントおよびパーセント相同性またはパーセント配列同一性を、当該分野で公知のソフトウェアプログラム（例えば、参考文献２７９の７．７．１８節に記載のプログラム）を使用して決定することができる。好ましいアラインメントを、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸長ペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭ行列６２を使用したアフィンギャップ検索を使用したＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定する。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、参考文献２８０に開示されている。
【図面の簡単な説明】
【０２３６】
【図１】図１は、ＯＤ５７０ｎｍとして測定した４つのＬ．ｌａｃｔｉｓ細菌の３７℃でのフィブロネクチンへの接着の比較を示す。バーは、左から右に、ポジティブコントロール細菌、ＢＡＡを発現するＴＯＰＯ株、ＢＡＡを発現する注入株、および空のベクターで形質転換したコントロール株を示す。
【発明を実施するための形態】
【０２３７】
２００７年に、ロンドンの集中治療室（ＩＣＵ）で血管アクセスデバイス（ＶＡＤ）関連菌血症の原因としてＭＲＳＡの通常でない株が報告された［３］。マイクロアレイを使用した株の遺伝子解析により、この「ＴＷ」株が以前にＵＫで報告されたＳＴ２３９伝染性クローンの１バージョンを示すという証拠が得られた。この株は、他の伝染性ＳＴ２３９クローンによって可変的に発現されるビルレンスに関連する検出可能な可動遺伝子エレメントを全て獲得していた。ＭＲＳＡを獲得したＩＣＵの全患者のコホート分析は、ＴＷ ＭＲＳＡを獲得した患者における菌血症の調整ハザード比が非ＴＷ ＭＲＳＡ株を獲得した患者の４．５倍であることを示した。ＴＷ ＭＲＳＡはまた、非ＴＷ ＭＲＳＡ株よりも血管カテーテルから単離される可能性が有意に高かった。
【０２３８】
臨床的な観察により、ＴＷが菌血症を引き起こす能力が、血管カテーテルの表面上にｉｎ ｖｉｖｏで吸着される細胞外基質タンパク質への接着能力の増強に起因することが示唆された。
【０２３９】
フィブリノゲン、フィブロネクチン、エラスチン、およびラミニンへのＭＲＳＡ株の接着を、９６ウェルプレート中で評価した。プレートを、１０μｇ／ｍｌタンパク質溶液にて４℃で一晩コーティングした。ウェルをＰＢＳでリンスし、次いで、１００μｌの２％ＢＳＡ中にて３７℃で１時間インキュベートして非特異的結合をブロックした。一晩の細菌細胞懸濁液をＲＰＭＩ−１６４０培地で０．１のＯＤ６００ｎｍに調整し、マイクロタイタープレート中に接種し、３７℃で２時間インキュベートした。ウェルをＰＢＳで３回洗浄して非接着性細菌を除去した。接着性細菌を、１００μｌの２５％ホルムアルデヒド中で固定し、次いで、１００μｌの０．１％クリスタルバイオレットで１５分間染色し、流水下でリンスした。染色した接着性の細菌膜の風乾後、マイクロプレートリーダーを使用して吸光度を測定した。全アッセイプレートは、適切なポジティブコントロールを含み、細菌を欠く、可能性があり且つ無菌のＴＳＢをネガティブコントロールとして含んでいた。分離菌のＯＤ５７０ｎｍは、バックグラウンド（同一プレートのネガティブコントロールＯＤ５７０ｎｍ）を差し引いた後の読み取り値であった。各アッセイを、３０回行った。
【０２４０】
ＴＷ ＭＲＳＡは、関連するＳＴ−２３９株（ＥＭＲＳＡ−１）、ＳＴ−２２、およびＳＴ−３６よりも多くフィブロネクチン、フィブリノゲン、およびエラスチンに接着することが証明された。これは、これらの細胞外基質タンパク質のうちの１つ以上への接着がおそらくカテーテルへの接着機構であることを示す。
【０２４１】
ＴＷ ＭＲＳＡのゲノム配列決定により、表皮ブドウ球菌（ＲＰ６２ａ）中で以前に同定されたファージに対して相同性を有する大型のファージが同定された［６］。ＴＷファージは、以下のアミノ酸配列（配列番号１）を有する推定２１ｋＤの表面発現ＬＰｘＴＧアドヘシン「ＢＡＡ」をコードする配列番号８のヌクレオチド配列を含む。
【０２４２】
【化６】
ＢＡＡは、いかなる黄色ブドウ球菌株においても以前に報告されておらず、菌血症を引き起こす能力にも関連していなかった。ＢＡＡは、試験した全てのＴＷ ＭＲＳＡ株（全部で８０）中に、他のＳＴ−２３９株のうち２７％に、他の菌血症散在性ゲンタマイシン耐性ＭＲＳＡ株およびＭＳＳＡ株のうち１０％に、ならびに菌血症ゲンタマイシン耐性表皮ブドウ球菌株のうち４１％に存在する（ＰＣＲによる検出）。表皮ブドウ球菌中のその存在は、ＢＡＡがコアグラーゼ陰性ブドウ球菌株に起因する菌血症にも関与し得ることを示唆している。
【０２４３】
Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓを、ＢＡＡをコードするｐｋＳ８０でトランスフェクションした。陽性形質転換株を、タッチＰＣＲ（ｔｏｕｃｈ ＰＣＲ）によってスクリーニングした。クローン化構築物の存在を、陽性形質転換株のプラスミド調製物の配列決定によって確認した。ｐｋＳ８０／ＢＡＡおよび空のベクターコントロールの両方の安定な形質転換株を、上記のようにフィブロネクチンへの結合について評価した。ＴＯＰＯおよび注入方法の両方を使用して構築したベクターを使用して、フィブロネクチンへの特異的結合が認められた（図１）。
【０２４４】
表皮ブドウ球菌由来のＢＡＡを、参考文献７中のＳｅｓＤとして開示する。ＳｅｓＤは発現してヒト免疫系に曝され、ヒト血清は、ＳｅｓＤに対して高力価を示した。参考文献７中のＳｅｓＤ配列は、本明細書中の配列番号１と９５％同一であるので、ＳｅｓＤを使用して認められた免疫学的結果は、本発明のＢＡＡ抗原に関しても期待することができる。
【０２４５】
したがって、ＴＷ ＭＲＳＡは、ファージにコードされた予想される新規の表面発現アドヘシン（ＢＡＡ）を保有し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、他の地方流行性の株および関連する株と比較してフィブリノゲン、フィブロネクチン、およびエラスチンの両方への結合の増強を示す。予備試験は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ株へのＢＡＡのトランスフェクションによりフィブロネクチン結合表現型が付与されることを示す。ＢＡＡが、臨床背景で観察されたＴＷ ＭＲＳＡの増強されたカテーテル関連菌血症表現型の原因であり、したがって、ＳＴ−２３９株の世界的な広域分布を考慮すると、ＢＡＡは菌血症予防のためのもっともらしいワクチン標的であることを提案する。
【０２４６】
本発明をほんの一例として記載し、本発明の範囲内および精神内としながら修正形態を得ることができると理解されるであろう。
【０２４７】
【化７】
【０２４８】
【化８】
【０２４９】
【化９】
【０２５０】
【化１０】
【０２５１】
【化１１】
【０２５２】
【化１２】
【０２５３】
【化１３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化で用いるためのＢＡＡ抗原。
【請求項２】
ＢＡＡ抗原ポリペプチド配列および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原ポリペプチド配列を含む融合タンパク質。
【請求項３】
ＢＡＡ抗原および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物。
【請求項４】
ＢＡＡ抗原および少なくとも１つの非黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物。
【請求項５】
（１）ＢＡＡ抗原と（２）アジュバントとの組み合わせを含む免疫原性組成物。
【請求項６】
サンプル中のＢＡＡ抗原またはＢＡＡ抗原をコードする核酸を検出する工程を含む、該サンプル中の黄色ブドウ球菌細菌の存在または不在を検出するための方法。
【請求項７】
前記ＢＡＡ抗原が、配列番号１のアミノ酸配列を有する黄色ブドウ球菌タンパク質を認識する抗体を誘発することができる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗原、融合タンパク質、組成物、または方法。
【請求項８】
前記ＢＡＡ抗原が、（ａ）配列番号１に対して８０％以上の同一性を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１のエピトープを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗原、融合タンパク質、組成物、または方法。
【請求項９】
前記ＢＡＡ抗原が、（ａ）配列番号１に対して５０％以上の同一性を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１の少なくとも７つの連続するアミノ酸のフラグメントを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗原、融合タンパク質、組成物、または方法。
【請求項１０】
抗ＢＡＡ抗体。
【請求項１１】
配列番号１のアミノ酸配列を有する黄色ブドウ球菌タンパク質を認識するモノクローナル抗体である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
黄色ブドウ球菌感染および／または黄色ブドウ球菌疾患の防御または処置で用いるための、請求項１０または請求項１１に記載の抗体。
【請求項１】
黄色ブドウ球菌疾患および／または黄色ブドウ球菌感染に対する免疫化で用いるためのＢＡＡ抗原。
【請求項２】
ＢＡＡ抗原ポリペプチド配列および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原ポリペプチド配列を含む融合タンパク質。
【請求項３】
ＢＡＡ抗原および少なくとも１つのさらなる黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物。
【請求項４】
ＢＡＡ抗原および少なくとも１つの非黄色ブドウ球菌抗原を含む免疫原性組成物。
【請求項５】
（１）ＢＡＡ抗原と（２）アジュバントとの組み合わせを含む免疫原性組成物。
【請求項６】
サンプル中のＢＡＡ抗原またはＢＡＡ抗原をコードする核酸を検出する工程を含む、該サンプル中の黄色ブドウ球菌細菌の存在または不在を検出するための方法。
【請求項７】
前記ＢＡＡ抗原が、配列番号１のアミノ酸配列を有する黄色ブドウ球菌タンパク質を認識する抗体を誘発することができる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗原、融合タンパク質、組成物、または方法。
【請求項８】
前記ＢＡＡ抗原が、（ａ）配列番号１に対して８０％以上の同一性を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１のエピトープを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗原、融合タンパク質、組成物、または方法。
【請求項９】
前記ＢＡＡ抗原が、（ａ）配列番号１に対して５０％以上の同一性を有し、かつ／または（ｂ）配列番号１の少なくとも７つの連続するアミノ酸のフラグメントを含むアミノ酸配列を含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗原、融合タンパク質、組成物、または方法。
【請求項１０】
抗ＢＡＡ抗体。
【請求項１１】
配列番号１のアミノ酸配列を有する黄色ブドウ球菌タンパク質を認識するモノクローナル抗体である、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
黄色ブドウ球菌感染および／または黄色ブドウ球菌疾患の防御または処置で用いるための、請求項１０または請求項１１に記載の抗体。
【図１】
【公表番号】特表２０１３−５１０１８８（Ｐ２０１３−５１０１８８Ａ）
【公表日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３８３９３（Ｐ２０１２−５３８３９３）
【出願日】平成２２年１１月９日（２０１０．１１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２０１０／００２０５６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５８３０２
【国際公開日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【出願人】（５１２１２２１５９）ガイズ アンド セント トーマスズ エヌエイチエス ファウンデーション トラスト (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月９日（２０１０．１１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２０１０／００２０５６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５８３０２
【国際公開日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【出願人】（５１２１２２１５９）ガイズ アンド セント トーマスズ エヌエイチエス ファウンデーション トラスト (1)
【Ｆターム（参考）】
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