（Ｒ）−トフィソパムを単離する方法
本発明は、(Ｒ)−トフィソパムを、高い鏡像異性体純度で、そして高い全体的収率で、トフィソパム鏡像異性体の混合物から、非シミュレート移動層クロマトグラフィー法によって分離するための方法に向けられている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キラル分離用媒質を用いるトフィソパム鏡像異性体の混合物のクロマトグラフィーによる分離による(Ｒ)−トフィソパムの調製規模の単離に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
トフィソパムの物理的特性／化学
トフィソパム(示した原子の番号付けを有する構造を下記に示す)は、強力なＣＮＳ調節活性を示す。トフィソパムは、１−(３，４−ジメトキシフェニル)−４−メチル−５−エチル−７，８−ジメトキシ−５Ｈ−２，３−ベンゾジアゼピンである。
【化１】
【０００３】
トフィソパムは、(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体のラセミ混合物として存在する。これは、ベンゾジアゼピン環の５位の不斉炭素(*により示される)のためである。不斉炭素は、４つの異なる結合原子団を有する炭素原子である。
【０００４】
トフィソパムの分子構造及びコンホメーション特性は、ＮＭＲ、ＣＤ及びＸ線結晶構造解析により決定された。Visy等、Chirality 1:271-275 (1989)(その全開示を、参考として本明細書中に援用する)を参照されたい。(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体として存在することに加えて、トフィソパムの各鏡像異性体は、２つの安定なコンホメーションで存在し、それは、一般に下記するようなベンゾジアゼピン環によるものと想定されうる。
【化２】
【０００５】
旋光度の符号は、ジアゼピン環の一の配座異性体から他の配座異性体への転換によって逆転する。主たる配座異性体の(Ｒ)−(＋)と(Ｓ)−(−)は、５−エチル基を、擬似赤道方向に有するが、少数配座異性体の(Ｒ)−(−)と(Ｓ)−(＋)では、５−エチル基は、擬似軸方向に位置されている。従って、ラセミトフィソパムは、４種類の分子種として、即ち、それぞれ２つのコンホメーションで存在する２つの鏡像異性体として存在する。結晶形態では、トフィソパムは、主たるコンホメーションとしてのみ存在し、右旋性トフィソパムは、(Ｒ)絶対配置である。Toth等、J. Heterocyclic Chem., 20: 709-713 (1983)；Bioorganic Heterocycles, Van der Plas, H.C., Otvos, L, Simongi, M.編、Budapest Amsterdam:Akademia; Kiado-Elsevier, 229:233 (1984)参照(すべての開示を、参考として、本明細書中に援用する)。
【０００６】
トフィソパムの(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体は、異なる生物学的活性プロフィルを有することが示されている。特に、実質的にトフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体の利用は、不安の治療において有用であることが示されていて、逆効果を減じており、従って、ラセミトフィソパムの投与と比較して改良された治療インデックスを生じている。米国特許第６，０８０，７３６号参照(その全開示を、参考として、本明細書中に援用する)。
【０００７】
トフィソパム − ラセミ化合物の合成法
ラセミトフィソパムは、３，４，３’，４’−テトラメトキシ−６−(α−アセト−プロピル)ベンゾフェノンをヒドラジン水化物と反応させて、対応するヒドラゾン、３，４，３’，４’−テトラメトキシ−６−(１−エチル−２−ヒドラゾノ−プロピル)ベンゾフェノンを形成することにより生成される。このヒドラゾンを、次いで、メタノール(ＭｅＯＨ)及びガス状塩化水素の存在下で環化させて、ラセミトフィソパムを生成する。米国特許第３，７３６，３１５号及び第６，０８０，７３６号を参照されたい(その全開示を参考として本明細書中に援用する)。このラセミトフィソパムの合成経路は、下記の通りである：
【化３】
【０００８】
上記の反応から生じる生成物中の主な不純物は、出発物質の３，４，３’，４’−テトラメトキシ−６−(α−アセト−プロピル)ベンゾフェノン及びヒドラゾン中間体である。
【０００９】
マクロサイクリック糖ペプチドを固定相として用い、１０％ ＭｅＯＨ(ｔ−ブチルメチルエーテル中)を移動相として用いるChirobiotic Ｖ(商標)カラム(ASTEAC, ニュージャージー、Whippany在)でのキラルクロマトグラフィーによるトフィソパムの分離は、米国特許第６，０８０，７３６号中に開示されている。この方法において、(Ｒ)−(＋)鏡像異性体は、カラムから溶出される最初の化合物であった。(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(−／＋)トフィソパム、及び残りの(Ｒ)−(＋)−トフィソパムが一緒に溶出して、後続の画分に集められた。Fitos等(J. Chromatogr., 709 265 (1995))は、ラセミトフィソパムを、キラルα1−酸性糖タンパク質をCHIRAL-AGP(商標)カラム(ChromTech, 英国、Cheshire)上の固定相として利用し、１０％ＡＣＮ(ｐＨ７．０のリン酸緩衝液中)を移動相として利用するキラルクロマトグラフィーにより分離するための他の方法を開示している。Zsila等は、鏡像異性体を溶出させるのに４０分よりも長くかかる方法において、Chiralcel(商標) OJ(商標)(Daicel)を固定相として利用し、ｎ−へキサン、２−プロパノール及びＭｅＯＨ(７２：１．５：３)を移動相として利用する他のトフィソパムの分離を開示している。Fitos等及びZsila等の方法は、ナノグラム量のトフィソパムをカラムに加える試料を分析するための分析的方法である。これらの方法は、製造目的などの多量のトフィソパムの分離には適していない。
【００１０】
開示された方法の何れも、薬物配合物の製造に適した化学的及び鏡像異性体純度の多量の(Ｒ)−トフィソパムの製造に最適化されていない。必要なものは、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まない(Ｒ)−トフィソパムの分離のための産業上利用可能な手順であり、それは、下記の通りである：
(ａ)高い化学的純度を与え；
(ｂ)高い鏡像異性体的純度を与え；
(ｃ)高い(Ｒ)−トフィソパムの収率を与え；そして
(ｄ)上記の特徴を、経済的に実行可能な工程にて与える。
【００１１】
発明の概要
トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まない(Ｒ)−トフィソパムを、トフィソパム鏡像異性体の混合物から分離するための方法であって、トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を、キラル分離用媒質を含む非シミュレート(non-simulated)移動層システムに導入すること及び、該キラル分離用媒質からの溶離液中の(Ｒ)−トフィソパムを分離することを含む当該方法を提供する。
【００１２】
この発明の一具体例において、この方法は、次の工程を含む：
ａ）トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を形成し；
ｂ）前記のラセミトフィソパムの供給原料溶液を、実質的に一定温度に維持された非シミュレート移動層システムに導入し、該システムは、複数のクロマトグラフィーカラムを含み、各カラムは吸着剤を含み、該カラムはシリーズで及びループ状に配置され、該ループは、供給原料の入口点、抽残液出口点、溶媒入口点、及び抽出物出口点を含み、このループの入口点と出口点の間の部分は、クロマトグラフィー域を規定し；
ｃ）溶媒を、前記のシステムに、前記の溶媒入口点から導入し；
ｄ）該入口点及び出口点の位置を変え(該入口点の変化は、該出口点の変化と実質的に異なる時点で起きる)；
ｅ）(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを、該ループから、該抽残液引き出し点で取り出し；そして
ｆ）(Ｒ)−トフィソパムを、該抽出物出口点から集める。
【００１３】
一具体例において、吸着剤は、少なくとも一種の糖誘導体よりなるキラル固定相を含む。
【００１４】
他の具体例において、吸着剤は、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート；及び式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択するキラル固定相を含む：
【化４】
[式中、各Ｒ1は、下記式ＩＩの基である：
【化５】
(式中、Ｒ2及びＲ3は、独立に、塩素及び−ＣＨ3よりなる群から選択され；ｎは約２〜２５０の、好ましくは約１０〜１５０の；一層好ましくは約１０〜１００の整数であり；該アミロース誘導体は、多孔性無機支持体又は多孔性有機支持体上に被覆され又はそれらに共有結合される)]。
【００１５】
一具体例において、この吸着剤は、アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートのキラル固定相を含む。
【００１６】
好適具体例において、この吸着剤は、下記式Ｉａのアミロース誘導体を含む：
【化６】
(式中、ｎは、約１０〜１００の整数である)。
【００１７】
本発明の一具体例において、この溶媒は、Ｃ１〜Ｃ１０アルカン、Ｃ１〜Ｃ６アルコール、Ｃ１〜Ｃ６アルコールの酢酸エステル、Ｃ１〜Ｃ６アルコールのプロピオン酸エステル、Ｃ１〜Ｃ１０ケトン、Ｃ１〜Ｃ１０エーテル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択される。
【００１８】
好適具体例において、この溶媒は、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸プロピル、プロピオン酸イソプロピル、アセトン、ブタノン、イソプロピルメチルケトン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、塩化メチレン、クロロホルム、クロロベンゼン、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択される。一層好適な具体例において、この溶媒は、アセトニトリルとメタノールの混合物である。最も好適な具体例において、この溶媒は、アセトニトリルである。
【００１９】
本発明の他の具体例において、この溶媒は、アセトニトリル、メタノール及びこれらの混合物よりなる群から選択され、キラル固定相は、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート；及び上記の式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択される。
【００２０】
一具体例において、この溶媒は、アセトニトリルであり、キラル固定相は、アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートである。
【００２１】
好適具体例において、この溶媒は、アセトニトリルであり、キラル固定相は、上記の式Ｉａのアミロース誘導体である。
【００２２】
本発明のある具体例において、実質的に一定の温度は、約０〜６０℃、一層好ましくは約２５〜４５℃であり、最も好ましくは約４０℃である。
【００２３】
幾つかの具体例において、分離すべきトフィソパム鏡像異性体の混合物は、ラセミ混合物であってよい。他の具体例において、トフィソパム鏡像異性体の混合物は、ラセミ混合物以外のものであってよい。
【００２４】
幾つかの具体例において、この溶媒系は、クロマトグラフィー分離中、定組成である。他の具体例においては、この溶媒系は、第一の溶媒組成から第二の組成への勾配を含むことができる。
【００２５】
この発明の幾つかの具体例において、キラル分離用媒質は、クロマトグラフィーカラムに含まれる。
【００２６】
この発明の幾つかの具体例において、キラル分離用媒質は、複数のクロマトグラフィーカラムに含まれる。
【００２７】
別の例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体は、少なくとも約６５重量％の、好ましくは少なくとも約７０重量％の、一層好ましくは少なくとも約７５重量％の、尚一層好ましくは少なくとも約８５重量％の収率で分離される。
【００２８】
別の例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体は、９８％鏡像異性体過剰より高い胸像異性体純度で分離される。
【００２９】
式Ｉ又は式Ｉａのアミロース誘導体を支持するための適当な有機支持体には、例えば、ポリスチレン、ポリアクリルアミド及びポリアクリレートが含まれる。式Ｉのアミロース誘導体を支持するための適当な多孔性無機支持体には、例えば、シリカ、アルミナ、マグネシア、ガラス、カオリン、酸化チタン及びシリケートが含まれる。式Ｉ又は式Ｉａのアミロース誘導体は、この支持体上に被覆され又はそれに共有結合されうる。この式Ｉ又は式Ｉａのアミロース誘導体を支持するための支持体は、約１０〜１００ミクロンの、好ましくは約１０〜５０ミクロンの、一層好ましくは約１０〜３０ミクロンの、最も好ましくは約２０ミクロンの粒度を有する。
【００３０】
この発明の他の具体例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体を与え、その(Ｒ)−鏡像異性体は、９５％より高い鏡像異性体過剰を有する。
【００３１】
この発明の他の具体例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体を与え、その(Ｒ)−鏡像異性体は、９８％より高い鏡像異性体過剰を有する。
【００３２】
この発明の他の具体例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体を与え、その(Ｒ)−鏡像異性体は、９９％より高い鏡像異性体過剰を有する。
【００３３】
他の具体例において、この発明は、高い鏡像異性体純度及び高い全体的収率を有するトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体の分離のための改良された方法を提供する。
【００３４】
本発明は、トフィソパム鏡像異性体の溶液を形成して、それらのトフィソパムの鏡像異性体を非シミュレート移動層クロマトグラフィーにより分離することによって、(Ｒ)−トフィソパムを得るための方法を提供する。トフィソパム鏡像異性体の溶液は、ループにて結合された少なくとも２つのカラムを通され、これらのカラムは、固体のキラル固定相を含んでいる。
【００３５】
図面の簡単な説明
図１は、トフィソパムの鏡像異性体の溶出順序を例示している、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び１００％ＡＣＮを含む溶媒系を利用するラセミトフィソパムの再構成されたクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
図２は、過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び１００％ＡＣＮを含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離を示している。
図３は、希釈注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
図４は、過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
図５は、過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８１％ＡＣＮ／１９％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
【００３６】
発明の詳細な説明
キラル分離用媒質の選択は、トフィソパムの分離における使用のために実験的に評価された。殆どの実験的分離は、キラル分離用媒質はトフィソパム鏡像異性体の満足すべき分離を提供できないか又はトフィソパム鏡像異性体を分離するのに最適化する際に長い滞留時間を示すので、不満足なものであるということが見出された。
【００３７】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体についての滞留時間は、トフィソパム鏡像異性体の分離において重要な因子である。これは、何故溶液中の(Ｒ)−鏡像異性体が(Ｒ)−(＋)及び(Ｒ)−(−)配座異性体の間で平衡を示すかの理由である。溶液中の(Ｒ)−トフィソパムの平衡組成は、約８５％の(Ｒ)−(＋)配座異性体と約１５％の(Ｒ)−(−)配座異性体である。この平衡は、クロマトグラフィー分離中、持続する。トフィソパム鏡像異性体及び配座異性体は、この混合物から、分離用媒質にて分離されるので、それらは、溶媒系の流れによって移動する「バンド」と呼ばれる精製された単一の異性体の領域を形成する。主たる(Ｒ)−鏡像異性体の配座異性体である(Ｒ)−(＋)は、この分離用媒質によって最も保持され、(Ｒ)−(−)配座異性体は、最も少ししか保持されない。この分離中、主たる(Ｒ)−(＋)配座異性体は、少数の(Ｒ)−(−)配座異性体に対する有限の比で平衡化する。これは、バンドを広げる結果となり、クロマトグラフィー分離により分離される(Ｒ)−トフィソパムの収率を有意に下げる結果となる。従って、(Ｒ)−トフィソパムの分離を一層短い間隔で達成する分離条件は、時間の関数としての(Ｒ)−トフィソパムの配座異性体の平衡化が最小化され、主たる配座異性体の(Ｒ)−トフィソパムの収率が増大するので、有利である。
【００３８】
本発明は、トフィソパム鏡像異性体の混合物のクロマトグラフィー分離により、実質的に(Ｓ)−鏡像異性体のトフィソパムを含まない(Ｒ)−トフィソパムを単離するためのキラルクロマトグラフィー法を提供する。本発明の方法は、分析的応用のための小規模の試料に適用可能であり、且つ多量の(Ｒ)−トフィソパムの調製において特に有用である。この方法は、迅速であり、高収率であり、且つ高い化学的純度及び鏡像異性体純度の(Ｒ)−トフィソパムを提供する。この方法は、トフィソパム鏡像異性体のラセミ混合物及びラセミ混合物以外のトフィソパム混合物例えば部分的に分離されたトフィソパムを分離するために利用することができる。この方法に供給されるトフィソパムは、(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体及びそれぞれの配座異性体以外の更なる不純物を含んでいてよい。かかる更なる不純物には、例えば、トフィソパム合成における合成中間体が含まれうる。
【００３９】
表現「分離用媒質」は、分離すべき成分の混合物が、クロマトグラフィー分離中に、該媒質において差別的に吸着される物質を意味する。この物質は、クロマトグラフィー分離をクロマトグラフィーカラム中で行なう場合には、しばしば、「固定相」と呼ばれる。
【００４０】
表現「キラル分離用媒質」は、分離用媒質が、光学活性な化合物の２つの鏡像異性体と異なって相互作用するようにキラル官能基を含むことを意味する。
【００４１】
表現「溶媒系」は、成分の混合物が異なって吸着されている分離用媒質から分離すべき成分の混合物を溶出させる溶媒又は溶媒の混合物を意味する。「慣用のカラムクロマトグラフィー」では、この物質は、「移動相」と呼ばれる。
【００４２】
用語「吸着する」及び「吸着」は、分離用媒質と、その分離用媒質上のクロマトグラフィーによって分離すべき混合物の成分との間の相互作用をいう。
【００４３】
用語「定組成」は、溶媒系の組成が、クロマトグラフィー操作中一定であることを意味する。
【００４４】
用語「勾配」は、クロマトグラフィー分離におけるパラメーターとして用いる場合には、溶媒系の組成が、クロマトグラフィー操作中の少なくとも一の時間間隔にわたって変化することを意味する。この勾配は、直線的であってもよいし、段階的であってもよい。
【００４５】
表現「吸着定数」及び記号Ｋ（数式中では上部に横棒を付して表す）は、クロマトグラフィー分離において、化合物が分離用媒質によって保持される程度を記述するものである。希釈単一成分系における化合物“ａ”についての吸着定数は、移動相(溶媒系)中の[ａ]の濃度Ｃa(ｇ／ｌ)の、固定相(分離用媒質)中の[ａ]の濃度Ｃa（数式中では上部に横棒を付して表す）(ｇ／ｌ)に対する比に等しい。多成分系の場合には、種々の成分が、分離用媒質上の限られた数の吸着部位について互いに競争する。従って、所定の種[ａ]の濃度は、その移動相濃度のみならず、系内の他のすべての成分の移動相濃度にも依存する。
【００４６】
低濃度の２つの成分(Ａ及びＢ)の混合物について、滞留時間ｔR(Ａ)及びｔR(Ｂ)は、下記式により、吸着定数と関係つけられる：
【数１】
[式中、用語εEは、「外部多孔度」であり、これは、ＶML／ＶCOLとして規定され、ここに、ＶMLは、移動中の(停滞してない)移動相の体積であり、ＶCOLは、クロマトグラフィーカラムの体積であり；そして
用語ｔ0は、下記の表現：
【数２】
(式中、Ｑは、移動相の流量である)
により規定される「ゼロ滞留時間」である]。従って、１ｍＬ／分の流量で運転され、外部多孔度０．４を有する２５０ｍｍ×４．６ｍｍのクロマトグラフィーカラムについては、計算されたゼロ滞留時間は：
【数３】
【００４７】
用語、分離用媒質における２つの成分間の「選択性」は、２つの成分がクロマトグラフィー分離において分離される程度の尺度である。選択性は、“α”として表され、２つの成分それぞれの滞留因子の比として定義される：
【数４】
【００４８】
表現「光学活性」は、物質が偏光面を回転させる特性をいう。光学活性である化合物は、その鏡像と重ね合わせられない。物がその鏡像と重ね合わせられない特性は、キラリティーと呼ばれる。
【００４９】
分子の「キラリティー」特性は、分子をその鏡像に対して重ね合わせられなくする任意の構造的特長から生じうる。キラリティーを生じる最も一般的な構造的特徴は、不斉炭素原子即ち当該炭素原子に結合する４つの同等でない原子団を有する炭素原子である。
【００５０】
用語「鏡像異性体」は、光学活性である純粋化合物の２つの重ね合わせられない異性体の各々を指す。単一の鏡像異性体は、不斉炭素に結合した４つの原子団をランク付ける一組の優先順位規則であるCahn-Ingold-Prelog系によって指定される。March, Advanced Organic Chemistry, 第４版、(1992)、p.109を参照されたい。一度、４つの原子団の優先順位ランキングが決定されたならば、その分子を、最も低ランキングの原子団が観察者から遠い位置に来るように方向付ける。そして、他の原子団の降順のランク順位が時計回りであれば、その分子は、(Ｒ)と示され、反時計回りであれば、(Ｓ)と示される。以下の例において、Cahn-Ingold-Prelogのランキング順序は、Ａ＞Ｂ＞Ｃ＞Ｄである。最低のランキングの原子Ｄは、観察者から遠方に方向付けられている。
【化７】
【００５１】
用語「ラセミ化合物」又は語句「ラセミ混合物」は、２つの鏡像異性体の５０−５０混合物をいい、この混合物は、偏光面を回転させない。
【００５２】
表現「鏡像異性体過剰」は、一般にパーセンテージで記されているが、非ラセミ混合物即ち分離された又は部分的に分離された鏡像異性体の鏡像異性体純度の程度を表現するための手段である。鏡像異性体過剰パーセント(％ｅ．ｅ．)は、下記のとおり定義される：
【数５】
【００５３】
表現「実質的にトフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を含まない(Ｒ)−トフィソパム」は、少なくとも約８０％ｅ．ｅ．(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む組成物を意味する。好ましくは、かかる組成物は、少なくとも９０％ｅ．ｅ．の(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む。一層好ましくは、かかる組成物は、少なくとも約９５％ｅ．ｅ．の(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む。最も好ましくは、かかる組成物は、９８％ｅ．ｅ．を超える(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む。
【００５４】
用語「リンカー」は、キラル分離用媒質の記述に用いる場合には、キラル官能基をシリカなどの担体に結合する繋ぎとして機能する官能基をいう。
【００５５】
この明細書及び添付の請求の範囲で用いる場合、単数形態は、文脈上明らかに異なる場合を除いて、複数を包含する。
【００５６】
キラル分離用媒質
この発明の方法は、多孔質無機担体又は多孔質有機担体上に被覆し又は共有結合させた少なくとも一種の糖誘導体により誘導体化したキラル固定相を含むキラル分離用媒質を利用する。好適具体例において、この糖誘導体は、誘導体化された、アミロース、セルロース、キトサン、キシラン、カードラン、デキストラン、及びイヌラン多糖類よりなる群から選択する多糖類であり、一層好ましくは、アミロース及びセルロース多糖類である。好適具体例において、この糖誘導体は、多糖類のエステル又はカルバメートである。一層好適な具体例において、このキラル固定相は、多孔質無機担体又は多孔質有機担体上に被覆され又は共有結合された式Ｉのアミロース誘導体である。
【００５７】
キラル固定相の非制限的例には、セルロースフェニルカルバメート誘導体例えばセルローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralcel OD」として入手可能)；セルローストリベンゾエート誘導体例えばセルロース４−メチルベンゾエート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralcel OJ」として入手可能)；セルローストリシンナメート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralcel OK」として入手可能)；アミロースフェニル及びベンジルカルバメート誘導体例えばアミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート](Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralpak AS」として入手可能)、アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralpak AD」として又は「Chiralpak IA」入手可能)、アミロース３，４−置換フェニルカルバメート、アミロース４−置換フェニル−カルバメート；及びアミローストリシンナメートが含まれる。
【００５８】
アミロース誘導体を含むキラル分離用媒質は、米国特許第５，２０２，４３３号に開示されており、その全開示を参考として本明細書中に援用する。式Ｉのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質の幾つかの例は、Chankvetadze等、J. Chromatography A, 694 (1995), p.101-109に開示されており、その全開示を参考として本明細書中に援用する。
【００５９】
式Ｉのアミロースのフェニルカルバメート誘導体の合成は、アミロースを、酸スカベンジャー例えばピリジンの存在下でアミロースの有利の水酸基と完全に反応するのに必要とされる化学量論的量より多い実質的に過剰な量のフェニルイソシアネートと反応させることにより行うことができる。Chankvetadze等、同書、p.102頁参照。この誘導体化アミロースは、当分野で公知の方法によって、多孔性の有機又は無機の支持体上に被覆させることができる。Okamoto等、J. Chromatography, 363 (1986), p.106参照(その全開示を参考として本明細書中に援用する)。誘導体化した多糖類は、Okamoto等(ＵＳ５，６７９，５７２) (その全開示を参考として本明細書中に援用する)に記載されたように担体に結合させることができる。
【００６０】
この多孔質支持体上に被覆され又は結合されたアミロース誘導体は、当分野で公知のドライパッキング又はスラリーパッキング法を利用してクロマトグラフィーカラムに詰めることができる。一具体例において、この多糖類誘導体は、シリカゲル、ジルコニウム、アルミナ、セラミックス及び他のシリカ(好ましくは、シリカゲル)上に被覆され又は結合される。このパッキング材料の平均粒径は、１〜３００μｍ、好ましくは、２〜１００μｍ、一層好ましくは、５〜７５μｍであり、最も好ましくは、１０〜３０μｍである。他の直径も可能である。このパッキング材料の平均粒径は、連続的クロマトグラフィー工程における圧力低下及びパッキング材料の効率を調節するように選択することができる。
【００６１】
このキラル分離用媒質は、クロマトグラフィーカラムに詰めることができ、溶媒系をそのカラムを通過させることができる。
【００６２】
本発明は、非シミュレート移動層クロマトグラフィー法(例えば、「VariCol(商標)法」)を利用して、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムをトフィソパム鏡像異性体の混合物から分離する。この方法は、ループにて接続された固体固定相を詰めた複数の固定層カラムを利用する。このループ内で、複数の入口点及び出口点がこれらのカラム間に位置される。このトフィソパム鏡像異性体の混合物は、このループに、供給入口点から導入され、同時に、溶媒(移動相)が溶媒入口点からこのループに導入される。同時溶出される(Ｓ)−トフィソパム及び(Ｒ)−(−)−トフィソパムを含む溶液は、このループから抽残液出口点から取り出され、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムは、このループから抽出物出口点から取り出される。
【００６３】
これらのループ内の入口点及び出口点の位置は、実質的に一定時間間隔で変えられるが、入口点の位置の変化は、出口点の位置の変化と異なる時点で起きる。このループへのトフィソパム鏡像異性体の混合物の溶液の導入のための供給入口点の位置の変化において、トフィソパム鏡像異性体の混合物の溶液の元の入口点での導入は停止され、トフィソパム鏡像異性体の混合物の溶液の導入は、ループ内の次の供給入口点で開始される。この溶媒入口点の位置は、ループ内の元の溶媒入口点での溶媒の導入を停止して次の溶媒入口点で溶媒を導入することにより変化される。抽残液出口点の位置は、ループ内の抽残液の元の抽残液出口点での取り出しを停止して、次の抽残液出口点で抽残液を取り出すことにより変化される。抽出物出口点の位置は、元の抽出物出口点での溶液の取り出しを停止して、溶液を次の抽出物出口点で取り出すことによって変化される。液体の流れを、ループ内の一点から他の点へ指示する方法は、当業者には周知である。例えば、バルブシステムを利用して、流れをループ内の元の点から新たな点に変えることができる。入口点及び出口点の位置を変えることは、ループ内に異なるトフィソパム異性体の分布を含む域を造り出す。域の長さは、経時的に一定ではなく、域当たりのカラム数は、一期間中一定でない。これらのカラムの構成並びに入口点及び出口点の位置によって、複数の域を確立することができる。
【００６４】
下記は、トフィソパム鏡像異性体の分離のための４域システムの代表的な構成である。
第１域(溶媒入口点と抽出物出口点との間に位置している)は、本質的に、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムを含み；
第２域(抽出物出口点と供給入口点との間に位置している)は、トフィソパムの４つの異性体混合物を、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムを豊富に含み；
第３域(供給入口点と抽残液出口点との間に位置している)は、４つのトフィソパムの異性体の混合物を、(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを豊富に含み；そして
第４域(抽残液収集点と溶出液の注入点との間に位置している)は、本質的に、(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを含む。
【００６５】
かかる方法で使用するための非シミュレート移動層分離工程及び装置は、一層完全に、米国特許第６，１３６，１９８号、６，３７５，８３９号；第６，４１３，４１９号；及び６，７１２，９７３号に記載されており、その全開示を、参考として本明細書中に援用する。
【００６６】
溶媒系
分離用媒質が、多孔性の無機担体又は多孔性の有機担体上に被覆され又は共有結合された糖誘導体、又は式Ｉのアミロース誘導体である場合には、溶媒系は、好ましくは、ＡＣＮとアルキルアルコールの混合物を含む。このアルキルアルコールは、好ましくは、(Ｃ1〜Ｃ4)アルコールである。このアルコールは、最も好ましくは、ＭｅＯＨである。この溶媒系は、好ましくは、約５％(Ｖ／Ｖ)〜約４０％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含み、一層好ましくは、約１０％(Ｖ／Ｖ)〜約３５％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含み、尚一層好ましくは、約１５％(Ｖ／Ｖ)〜約２５％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含み、最も好ましくは、約１９％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含む。或は、この溶媒系は、ＡＣＮ単独である。
【００６７】
アルキルアルコールのＡＣＮ溶媒系への添加は、トフィソパムの分離に有意の効果を有することが認められる。トフィソパムの４つすべての異性体は、分離される。しかしながら、トフィソパムの鏡像異性体及びそれらの配座異性体間の選択性が改善されても、トフィソパムの溶解度は、溶媒系の一層高濃度のアルキルアルコールのために低下する。それ故、溶媒系内のアルキルアルコールの濃度は、好ましくは、約４０体積％以下とする。
【００６８】
(Ｒ)−(＋)−トフィソパムを単離する場合には、アセトニトリルの溶媒系を利用して、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムが溶出される前に、(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを同時溶出する。用いたカラム及び条件によって、他の溶媒又は溶媒混合物も、同様の結果を生成しうる。
【００６９】
溶解度の研究は、ラセミトフィソパムの、ＡＣＮ中の１９％(Ｖ／Ｖ)ＭｅＯＨの混合物中における溶解度が、約１３５．５ｇ／Ｌであることを決定した。従って、溶媒系がＡＣＮ中の約１９％(Ｖ／Ｖ)ＭｅＯＨを含むこの発明の一具体例において、トフィソパムの供給の濃度は、１３５．５ｇ／Ｌ未満の濃度に限られる。好ましくは、この発明の実施におけるトフィソパムの鏡像異性体の混合物の供給の濃度は、約４５〜１２０ｇ／Ｌであり、最も好ましくは約１００ｇ／Ｌである。
【００７０】
この発明の実施において用いられる溶媒系は、クロマトグラフィー分離中定組成であってもよいし、又は一回以上の間隔での一の溶媒組成から他の溶媒組成への勾配を含んでもよい。好ましくは、溶媒系は、定組成である。
【００７１】
調製規模での分離
本発明の単離法は、特に、トフィソパムの鏡像異性体混合物の調製規模の分離に適している。この発明の方法は、オーバーローディング条件下で(即ち、分離用媒質の上流部分におけるすべての吸着部位と相互作用するのに十分高いトフィソパムの量)のトフィソパムの分離に有用であり、並びに、希釈溶液(即ち、非オーバーローディング条件)の分離、例えばトフィソパムの分析規模の分離に用いることもできる。
【００７２】
クロマトグラフィー分離を行う温度は、便利に、分離用媒質を制御された温度環境に維持すること及び／又は分離用媒質中を流れる溶媒系についての制御された温度を維持することにより制御することができる。クロマトグラフィー分離に好適な温度範囲は、約０〜６０℃であり、好ましくは約２５〜４５℃であり、最も好ましくは約４０℃である。
【００７３】
この溶媒系の溶媒組成、分離媒質中を流れる流量、及び分離用媒質の量は、この発明の方法の実施におけるトフィソパムの鏡像異性体の混合物の分離に必要な時間に寄与する因子である。好ましくは、このクロマトグラフィー分離は、約１５〜２５分で、一層好ましくは約１８〜２２分で完結される。
【００７４】
実施例７〜１０に記載したような非シミュレート移動層工程において、所定数のカラムについて構成の数に制限はない。クロマトグラフィー分離中にカラムの部分により表される所定域の平均の長さの多様性の潜在能力は、一層少ないカラムの使用、固相の量の低減、溶媒量の低減、並びに純度及び収率の増加による増大した効率へと導きうる。
【００７５】
この発明の一の非シミュレート移動層クロマトグラフィー法により、ＶａｒｉＣｏｌ(商標)法が、(Ｒ)−トフィソパムを分離するために利用される(例えば、５〜６カラム、４可変域ＶａｒｉＣｏｌ(商標)システム)。これらの域は、運転中、長さにおいて変化し、所定の運転サイクルにおいて固定長よりも平均を有する。他の具体例においては、３カラム−４可変域のＶａｒｉＣｏｌ(商標)システムを利用する。かかるシステムは、ＳＭＢプロセスにおける真の移動層システムのシミュレートに少なくとも４域を有する４つのカラムが必要なので、ＳＭＢ工程において利用することはできない。このＳＭＢ工程については、分離に必要とされるカラムの最少数がシステムの域の数と等しく、ＶａｒｉＣｏｌ(商標)システムにおいてはカラム数は、域の数より少なくてよい。
【００７６】
この発明の実施を、以下の非制限的実施例により説明する。実施例７〜１０は、トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体の、非シミュレート移動層工程(ＶａｒｉＣｏｌ(商標)法)を利用する分離のための代表的パラメーターを示している。他のカラム構成をここに記載のキラル分離に利用することもできる(少なくとも、３カラム使用)。
【実施例】
【００７７】
実施例１： ラセミトフィソパムの希釈溶液を利用する種々のキラル固定相の比較：
ラセミトフィソパムの希釈溶液におけるクロマトグラフィー分離を、表１に列記したキラル分離用媒質を利用して行った。これらの分離用媒質のすべては、４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィー用カラムに詰めた。
【００７８】
【表１−１】
【００７９】
【表１−２】
【００８０】
【表１−３】
【００８１】
下記の表２には、試験した各キラル分離用媒質に用いたキラル分離用媒質、溶媒系、温度及び流量を列記してある。溶媒系は、E.M. Scienceから得たＨＰＬＣ等級の溶媒を用いて調製した。
【００８２】
この表は又、各クロマトグラフィー分離において分離されたすべての成分についての滞留因子をもまとめてある。
【００８３】
【表２−１】
【００８４】
【表２−２】
【００８５】
試験したキラル分離用媒質の内で、２つの材料は、ラセミトフィソパムを４つの別々のピークに分離した。これらの材料は：
(Ｓ，Ｓ)−β−ＧＥＭ {シリカにアルケン(Ｃ13)エステル結合により共有結合された(２Ｓ)−２−{(１Ｓ)[(３，５−ジニトロフェニル)カルボニルアミノ]フェニルメチル}−３，３−ジメチルブタノエートを含む市販されている材料}；及び
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質：
【化８】
をシリカゲル上に被覆したものであった。
【００８６】
分離は、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ(商標)、ＡＤ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ(商標)、ＯＤ、(Ｒ，Ｒ)Ｗｈｅｌｋ−Ｏ(商標)、及びＳｈｉｓｅｉｄｏ ＲＵ−１についても観察された。Ｃｈｉｒａｌｐａｋ(商標)、ＡＤ及びＣｈｉｒａｌｃｅｌ(商標)、ＯＤは、乏しい分離(ＲS＜０．５)を示した。分離用媒質(Ｒ，Ｒ)Ｗｈｅｌｋ−Ｏ(商標)、及びＳｈｉｓｅｉｄｏ ＲＵ−１は、高い滞留定数を与え、これは、長い滞留時間を生じ、それ故、実質的に多量の溶媒系を必要とした。
【００８７】
実施例２：トフィソパム鏡像異性体の、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質における溶出順序の測定。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、２２℃で、流量１．０ｍＬ／分での１００％ＡＣＮの条件下で安定化させた。ラセミトフィソパム(０．１ｍｇ)を、このカラムに注入して、溶出液の画分を、注入後１．５〜６．０分の間、０．５分毎に集めた。これらの画分を、トフィソパムの４つの異性体の各々の量について分析した。このデータを、図１にプロットしたが、これは、１００％ＡＣＮにおける分離のピークプロフィルを示すように構成されたものである。
【００８８】
トフィソパム異性体は、次の順序で溶出された：(Ｒ)−(−)；(Ｓ)−(−)／(Ｓ)−(＋)；及び(Ｒ)−(＋)。このクロマトグラフィー法における配座異性体の相互変換のために、(Ｒ)−(−)及び(Ｒ)−(＋)配座異性体の両方の存在が、(Ｓ)−鏡像異性体の溶出中認められる。
【００８９】
実施例３：ラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質への過剰注入は、１００％ＡＣＮで溶出した。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィー用カラムを、１００％ＡＣＮ(２５℃で１．０ｍＬ／分の流量)の条件下で安定化させた。ラセミトフィソパム(濃度３３ｇ／Ｌ、３００μＬ)をこのカラムに注入した。図２は、その結果の分離を示している(３４５ｎｍでのＵＶ検出)。分離された(Ｒ)−トフィソパムの収率は、約６０重量％であった。この分離において分離された(Ｒ)−トフィソパムの測定された鏡像異性体過剰(ｅ．ｅ．)は、不純物としての(Ｓ)−(＋)鏡像異性体の存在のために、９５％ｅ．ｅ．未満であった。
【００９０】
実施例４：溶媒系の改変：ＡＣＮ／ＭｅＯＨ混合物を用いて溶出した式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質におけるトフィソパムの分離：
ラセミトフィソパムの希釈溶液のクロマトグラフィー分離を、４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍクロマトグラフィー用カラムに詰めた式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を用いて行った。この溶媒系を、１００％ＡＣＮで溶出するトフィソパムの分離をＡＣＮ／ＭｅＯＨ混合物での分離と比較するために改変した(ＭｅＯＨは、約５〜４０％の濃度範囲で存在する)。
【００９１】
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、８５／１５(Ｖ／Ｖ)ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(２５℃で、１．６ｍＬ／分の流量)の条件下で安定化させた。ラセミトフィソパムの希釈注入物を注入した。図３は、その結果の分離を示している。
【００９２】
更なるＡＣＮ／ＭｅＯＨ溶媒組成物及びその結果の分離データを下記の表３に列記した。
【表３】
【００９３】
トフィソパムの鏡像異性体とそれらの配座異性体の間の選択性は、ＭｅＯＨの溶媒系への添加により増大した。
【００９４】
実施例５：８５／１５ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)により溶出されるラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質への過剰注入。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、８５／１５(Ｖ／Ｖ)ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(２５℃で、１．０ｍＬ／分の流量)の条件下で安定化させた。ラセミトフィソパム(９．９ｍｇ)を注入した。図４は、その結果の分離を示している(３４５ｎｍでのＵＶ検出)。垂直の点線は、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムの収集を開始した切点(１１．６分)を示している。このオーバーロード実験から得られた画分の分析は、８３重量％より大きい収率、及び(Ｒ)−鏡像異性体についての９８％を超える鏡像異性体過剰を示した。
【００９５】
実施例６：ラセミトフィソパムの、８１／１９ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)により溶出される式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質への過剰注入。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィー用カラムを、８１／１９(Ｖ／Ｖ)ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(２５℃で１．１７ｍＬ／分の流量)の条件下で安定させた。ラセミトフィソパム(１０４ｇ／Ｌの濃度の５００μＬ)を注入した。図５は、その結果の分離を示している(３５５ｎｍでのＵＶ検出)。垂直の点線は、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムの収集を開始した切点(８．０分)を示している。このオーバーロード実験から得られた画分の分析は、約７３重量％の収率と(Ｒ)−鏡像異性体についての９８％を超える鏡像異性体過剰を示した。
【００９６】
この溶媒系における一層高濃度のＭｅＯＨは、増大された選択性を生成することが観察された。しかしながら、ラセミトフィソパムの溶解度が、一層高濃度のＭｅＯＨにより低下した。
【００９７】
実施例７〜１０．トフィソパム鏡像異性体の混合物からの(Ｒ)−トフィソパムの、非シミュレート移動層法(ＶａｒｉＣｏｌ(商標)法)における分離。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた５つの２．５ｃｍ(ｉ．ｄ．)×１０．６ｃｍのクロマトグラフィー用カラムを、一つのループに連結した。多数の入口及び出口がこれらのカラムの間のループに位置した。このシステムをＡＣＮを通過させることにより安定化させた後に、ＡＣＮ中のトフィソパム鏡像異性体の溶液(濃度４８〜５０ｇ／Ｌ)を連続的にこのシステムに注入した。
【００９８】
この分離を、下記の表４に列記した温度、供給濃度及び流量を利用して行なった。
【表４】
【００９９】
表４の条件は、表５に示したカラム構成を生じた。
【表５】
【０１００】
実施例７〜１０の精製による収率及び生成物純度を、表６に示した。そのデータを評価すると、最大収率は、少数の(Ｒ)−(−)−異性体が(Ｓ)−異性体と共に溶出するので、約８０％しか得られないということが理解されよう。
【０１０１】
【表６】
【０１０２】
実施例７は、トフィソパム鏡像異性体の混合物から約９３％の純度で、３６％の収率(最大理論収率の５０％未満)で(Ｒ)−トフィソパムを得ることができるということを示している。実施例７で用いたものと異なるカラム構成による実施例８(３５℃)によれば、高純度(９９．３％)の(Ｒ)−トフィソパムが、収率約７２重量％で得られた(最大理論収率の約９０％)。実施例８の３７℃の温度で、高純度(９９．３％)の(Ｒ)−トフィソパムが約７５重量％の収率で得られた(最大理論収率の約９４％)。最後に、実施例１０は、一層高純度(９９．５％)の(Ｒ)−トフィソパムを４０℃で約７８重量％の収率で得ることができることを示している(最大理論収率の約９８％)。
【０１０３】
本発明の好適な具体例を示し記載してきたが、当業者は、この発明の範囲から逸脱せずに様々な変化又は改変をすることができるということを理解するであろう。
【０１０４】
すべての引用文献を参考として、本明細書中に援用する。本発明は、その本質的特性の精神から離れることなく他の特定の形態で具体化することができ、それ故、この発明の範囲の指示としては、前述の明細書よりは添付の請求の範囲を参照すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】トフィソパムの鏡像異性体の溶出順序を例示している図である。
【図２】過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び１００％ＡＣＮを含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離を示している図である。
【図３】希釈注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している図である。
【図４】過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している図である。
【図５】過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８１％ＡＣＮ／１９％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キラル分離用媒質を用いるトフィソパム鏡像異性体の混合物のクロマトグラフィーによる分離による(Ｒ)−トフィソパムの調製規模の単離に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
トフィソパムの物理的特性／化学
トフィソパム(示した原子の番号付けを有する構造を下記に示す)は、強力なＣＮＳ調節活性を示す。トフィソパムは、１−(３，４−ジメトキシフェニル)−４−メチル−５−エチル−７，８−ジメトキシ−５Ｈ−２，３−ベンゾジアゼピンである。
【化１】
【０００３】
トフィソパムは、(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体のラセミ混合物として存在する。これは、ベンゾジアゼピン環の５位の不斉炭素(*により示される)のためである。不斉炭素は、４つの異なる結合原子団を有する炭素原子である。
【０００４】
トフィソパムの分子構造及びコンホメーション特性は、ＮＭＲ、ＣＤ及びＸ線結晶構造解析により決定された。Visy等、Chirality 1:271-275 (1989)(その全開示を、参考として本明細書中に援用する)を参照されたい。(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体として存在することに加えて、トフィソパムの各鏡像異性体は、２つの安定なコンホメーションで存在し、それは、一般に下記するようなベンゾジアゼピン環によるものと想定されうる。
【化２】
【０００５】
旋光度の符号は、ジアゼピン環の一の配座異性体から他の配座異性体への転換によって逆転する。主たる配座異性体の(Ｒ)−(＋)と(Ｓ)−(−)は、５−エチル基を、擬似赤道方向に有するが、少数配座異性体の(Ｒ)−(−)と(Ｓ)−(＋)では、５−エチル基は、擬似軸方向に位置されている。従って、ラセミトフィソパムは、４種類の分子種として、即ち、それぞれ２つのコンホメーションで存在する２つの鏡像異性体として存在する。結晶形態では、トフィソパムは、主たるコンホメーションとしてのみ存在し、右旋性トフィソパムは、(Ｒ)絶対配置である。Toth等、J. Heterocyclic Chem., 20: 709-713 (1983)；Bioorganic Heterocycles, Van der Plas, H.C., Otvos, L, Simongi, M.編、Budapest Amsterdam:Akademia; Kiado-Elsevier, 229:233 (1984)参照(すべての開示を、参考として、本明細書中に援用する)。
【０００６】
トフィソパムの(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体は、異なる生物学的活性プロフィルを有することが示されている。特に、実質的にトフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体の利用は、不安の治療において有用であることが示されていて、逆効果を減じており、従って、ラセミトフィソパムの投与と比較して改良された治療インデックスを生じている。米国特許第６，０８０，７３６号参照(その全開示を、参考として、本明細書中に援用する)。
【０００７】
トフィソパム − ラセミ化合物の合成法
ラセミトフィソパムは、３，４，３’，４’−テトラメトキシ−６−(α−アセト−プロピル)ベンゾフェノンをヒドラジン水化物と反応させて、対応するヒドラゾン、３，４，３’，４’−テトラメトキシ−６−(１−エチル−２−ヒドラゾノ−プロピル)ベンゾフェノンを形成することにより生成される。このヒドラゾンを、次いで、メタノール(ＭｅＯＨ)及びガス状塩化水素の存在下で環化させて、ラセミトフィソパムを生成する。米国特許第３，７３６，３１５号及び第６，０８０，７３６号を参照されたい(その全開示を参考として本明細書中に援用する)。このラセミトフィソパムの合成経路は、下記の通りである：
【化３】
【０００８】
上記の反応から生じる生成物中の主な不純物は、出発物質の３，４，３’，４’−テトラメトキシ−６−(α−アセト−プロピル)ベンゾフェノン及びヒドラゾン中間体である。
【０００９】
マクロサイクリック糖ペプチドを固定相として用い、１０％ ＭｅＯＨ(ｔ−ブチルメチルエーテル中)を移動相として用いるChirobiotic Ｖ(商標)カラム(ASTEAC, ニュージャージー、Whippany在)でのキラルクロマトグラフィーによるトフィソパムの分離は、米国特許第６，０８０，７３６号中に開示されている。この方法において、(Ｒ)−(＋)鏡像異性体は、カラムから溶出される最初の化合物であった。(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(−／＋)トフィソパム、及び残りの(Ｒ)−(＋)−トフィソパムが一緒に溶出して、後続の画分に集められた。Fitos等(J. Chromatogr., 709 265 (1995))は、ラセミトフィソパムを、キラルα1−酸性糖タンパク質をCHIRAL-AGP(商標)カラム(ChromTech, 英国、Cheshire)上の固定相として利用し、１０％ＡＣＮ(ｐＨ７．０のリン酸緩衝液中)を移動相として利用するキラルクロマトグラフィーにより分離するための他の方法を開示している。Zsila等は、鏡像異性体を溶出させるのに４０分よりも長くかかる方法において、Chiralcel(商標) OJ(商標)(Daicel)を固定相として利用し、ｎ−へキサン、２−プロパノール及びＭｅＯＨ(７２：１．５：３)を移動相として利用する他のトフィソパムの分離を開示している。Fitos等及びZsila等の方法は、ナノグラム量のトフィソパムをカラムに加える試料を分析するための分析的方法である。これらの方法は、製造目的などの多量のトフィソパムの分離には適していない。
【００１０】
開示された方法の何れも、薬物配合物の製造に適した化学的及び鏡像異性体純度の多量の(Ｒ)−トフィソパムの製造に最適化されていない。必要なものは、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まない(Ｒ)−トフィソパムの分離のための産業上利用可能な手順であり、それは、下記の通りである：
(ａ)高い化学的純度を与え；
(ｂ)高い鏡像異性体的純度を与え；
(ｃ)高い(Ｒ)−トフィソパムの収率を与え；そして
(ｄ)上記の特徴を、経済的に実行可能な工程にて与える。
【００１１】
発明の概要
トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まない(Ｒ)−トフィソパムを、トフィソパム鏡像異性体の混合物から分離するための方法であって、トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を、キラル分離用媒質を含む非シミュレート(non-simulated)移動層システムに導入すること及び、該キラル分離用媒質からの溶離液中の(Ｒ)−トフィソパムを分離することを含む当該方法を提供する。
【００１２】
この発明の一具体例において、この方法は、次の工程を含む：
ａ）トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を形成し；
ｂ）前記のラセミトフィソパムの供給原料溶液を、実質的に一定温度に維持された非シミュレート移動層システムに導入し、該システムは、複数のクロマトグラフィーカラムを含み、各カラムは吸着剤を含み、該カラムはシリーズで及びループ状に配置され、該ループは、供給原料の入口点、抽残液出口点、溶媒入口点、及び抽出物出口点を含み、このループの入口点と出口点の間の部分は、クロマトグラフィー域を規定し；
ｃ）溶媒を、前記のシステムに、前記の溶媒入口点から導入し；
ｄ）該入口点及び出口点の位置を変え(該入口点の変化は、該出口点の変化と実質的に異なる時点で起きる)；
ｅ）(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを、該ループから、該抽残液引き出し点で取り出し；そして
ｆ）(Ｒ)−トフィソパムを、該抽出物出口点から集める。
【００１３】
一具体例において、吸着剤は、少なくとも一種の糖誘導体よりなるキラル固定相を含む。
【００１４】
他の具体例において、吸着剤は、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート；及び式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択するキラル固定相を含む：
【化４】
[式中、各Ｒ1は、下記式ＩＩの基である：
【化５】
(式中、Ｒ2及びＲ3は、独立に、塩素及び−ＣＨ3よりなる群から選択され；ｎは約２〜２５０の、好ましくは約１０〜１５０の；一層好ましくは約１０〜１００の整数であり；該アミロース誘導体は、多孔性無機支持体又は多孔性有機支持体上に被覆され又はそれらに共有結合される)]。
【００１５】
一具体例において、この吸着剤は、アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートのキラル固定相を含む。
【００１６】
好適具体例において、この吸着剤は、下記式Ｉａのアミロース誘導体を含む：
【化６】
(式中、ｎは、約１０〜１００の整数である)。
【００１７】
本発明の一具体例において、この溶媒は、Ｃ１〜Ｃ１０アルカン、Ｃ１〜Ｃ６アルコール、Ｃ１〜Ｃ６アルコールの酢酸エステル、Ｃ１〜Ｃ６アルコールのプロピオン酸エステル、Ｃ１〜Ｃ１０ケトン、Ｃ１〜Ｃ１０エーテル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択される。
【００１８】
好適具体例において、この溶媒は、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸プロピル、プロピオン酸イソプロピル、アセトン、ブタノン、イソプロピルメチルケトン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、塩化メチレン、クロロホルム、クロロベンゼン、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択される。一層好適な具体例において、この溶媒は、アセトニトリルとメタノールの混合物である。最も好適な具体例において、この溶媒は、アセトニトリルである。
【００１９】
本発明の他の具体例において、この溶媒は、アセトニトリル、メタノール及びこれらの混合物よりなる群から選択され、キラル固定相は、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート；及び上記の式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択される。
【００２０】
一具体例において、この溶媒は、アセトニトリルであり、キラル固定相は、アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートである。
【００２１】
好適具体例において、この溶媒は、アセトニトリルであり、キラル固定相は、上記の式Ｉａのアミロース誘導体である。
【００２２】
本発明のある具体例において、実質的に一定の温度は、約０〜６０℃、一層好ましくは約２５〜４５℃であり、最も好ましくは約４０℃である。
【００２３】
幾つかの具体例において、分離すべきトフィソパム鏡像異性体の混合物は、ラセミ混合物であってよい。他の具体例において、トフィソパム鏡像異性体の混合物は、ラセミ混合物以外のものであってよい。
【００２４】
幾つかの具体例において、この溶媒系は、クロマトグラフィー分離中、定組成である。他の具体例においては、この溶媒系は、第一の溶媒組成から第二の組成への勾配を含むことができる。
【００２５】
この発明の幾つかの具体例において、キラル分離用媒質は、クロマトグラフィーカラムに含まれる。
【００２６】
この発明の幾つかの具体例において、キラル分離用媒質は、複数のクロマトグラフィーカラムに含まれる。
【００２７】
別の例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体は、少なくとも約６５重量％の、好ましくは少なくとも約７０重量％の、一層好ましくは少なくとも約７５重量％の、尚一層好ましくは少なくとも約８５重量％の収率で分離される。
【００２８】
別の例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体は、９８％鏡像異性体過剰より高い胸像異性体純度で分離される。
【００２９】
式Ｉ又は式Ｉａのアミロース誘導体を支持するための適当な有機支持体には、例えば、ポリスチレン、ポリアクリルアミド及びポリアクリレートが含まれる。式Ｉのアミロース誘導体を支持するための適当な多孔性無機支持体には、例えば、シリカ、アルミナ、マグネシア、ガラス、カオリン、酸化チタン及びシリケートが含まれる。式Ｉ又は式Ｉａのアミロース誘導体は、この支持体上に被覆され又はそれに共有結合されうる。この式Ｉ又は式Ｉａのアミロース誘導体を支持するための支持体は、約１０〜１００ミクロンの、好ましくは約１０〜５０ミクロンの、一層好ましくは約１０〜３０ミクロンの、最も好ましくは約２０ミクロンの粒度を有する。
【００３０】
この発明の他の具体例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体を与え、その(Ｒ)−鏡像異性体は、９５％より高い鏡像異性体過剰を有する。
【００３１】
この発明の他の具体例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体を与え、その(Ｒ)−鏡像異性体は、９８％より高い鏡像異性体過剰を有する。
【００３２】
この発明の他の具体例において、トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まないトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体を与え、その(Ｒ)−鏡像異性体は、９９％より高い鏡像異性体過剰を有する。
【００３３】
他の具体例において、この発明は、高い鏡像異性体純度及び高い全体的収率を有するトフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体の分離のための改良された方法を提供する。
【００３４】
本発明は、トフィソパム鏡像異性体の溶液を形成して、それらのトフィソパムの鏡像異性体を非シミュレート移動層クロマトグラフィーにより分離することによって、(Ｒ)−トフィソパムを得るための方法を提供する。トフィソパム鏡像異性体の溶液は、ループにて結合された少なくとも２つのカラムを通され、これらのカラムは、固体のキラル固定相を含んでいる。
【００３５】
図面の簡単な説明
図１は、トフィソパムの鏡像異性体の溶出順序を例示している、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び１００％ＡＣＮを含む溶媒系を利用するラセミトフィソパムの再構成されたクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
図２は、過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び１００％ＡＣＮを含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離を示している。
図３は、希釈注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
図４は、過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
図５は、過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８１％ＡＣＮ／１９％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している。
【００３６】
発明の詳細な説明
キラル分離用媒質の選択は、トフィソパムの分離における使用のために実験的に評価された。殆どの実験的分離は、キラル分離用媒質はトフィソパム鏡像異性体の満足すべき分離を提供できないか又はトフィソパム鏡像異性体を分離するのに最適化する際に長い滞留時間を示すので、不満足なものであるということが見出された。
【００３７】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体についての滞留時間は、トフィソパム鏡像異性体の分離において重要な因子である。これは、何故溶液中の(Ｒ)−鏡像異性体が(Ｒ)−(＋)及び(Ｒ)−(−)配座異性体の間で平衡を示すかの理由である。溶液中の(Ｒ)−トフィソパムの平衡組成は、約８５％の(Ｒ)−(＋)配座異性体と約１５％の(Ｒ)−(−)配座異性体である。この平衡は、クロマトグラフィー分離中、持続する。トフィソパム鏡像異性体及び配座異性体は、この混合物から、分離用媒質にて分離されるので、それらは、溶媒系の流れによって移動する「バンド」と呼ばれる精製された単一の異性体の領域を形成する。主たる(Ｒ)−鏡像異性体の配座異性体である(Ｒ)−(＋)は、この分離用媒質によって最も保持され、(Ｒ)−(−)配座異性体は、最も少ししか保持されない。この分離中、主たる(Ｒ)−(＋)配座異性体は、少数の(Ｒ)−(−)配座異性体に対する有限の比で平衡化する。これは、バンドを広げる結果となり、クロマトグラフィー分離により分離される(Ｒ)−トフィソパムの収率を有意に下げる結果となる。従って、(Ｒ)−トフィソパムの分離を一層短い間隔で達成する分離条件は、時間の関数としての(Ｒ)−トフィソパムの配座異性体の平衡化が最小化され、主たる配座異性体の(Ｒ)−トフィソパムの収率が増大するので、有利である。
【００３８】
本発明は、トフィソパム鏡像異性体の混合物のクロマトグラフィー分離により、実質的に(Ｓ)−鏡像異性体のトフィソパムを含まない(Ｒ)−トフィソパムを単離するためのキラルクロマトグラフィー法を提供する。本発明の方法は、分析的応用のための小規模の試料に適用可能であり、且つ多量の(Ｒ)−トフィソパムの調製において特に有用である。この方法は、迅速であり、高収率であり、且つ高い化学的純度及び鏡像異性体純度の(Ｒ)−トフィソパムを提供する。この方法は、トフィソパム鏡像異性体のラセミ混合物及びラセミ混合物以外のトフィソパム混合物例えば部分的に分離されたトフィソパムを分離するために利用することができる。この方法に供給されるトフィソパムは、(Ｒ)−及び(Ｓ)−鏡像異性体及びそれぞれの配座異性体以外の更なる不純物を含んでいてよい。かかる更なる不純物には、例えば、トフィソパム合成における合成中間体が含まれうる。
【００３９】
表現「分離用媒質」は、分離すべき成分の混合物が、クロマトグラフィー分離中に、該媒質において差別的に吸着される物質を意味する。この物質は、クロマトグラフィー分離をクロマトグラフィーカラム中で行なう場合には、しばしば、「固定相」と呼ばれる。
【００４０】
表現「キラル分離用媒質」は、分離用媒質が、光学活性な化合物の２つの鏡像異性体と異なって相互作用するようにキラル官能基を含むことを意味する。
【００４１】
表現「溶媒系」は、成分の混合物が異なって吸着されている分離用媒質から分離すべき成分の混合物を溶出させる溶媒又は溶媒の混合物を意味する。「慣用のカラムクロマトグラフィー」では、この物質は、「移動相」と呼ばれる。
【００４２】
用語「吸着する」及び「吸着」は、分離用媒質と、その分離用媒質上のクロマトグラフィーによって分離すべき混合物の成分との間の相互作用をいう。
【００４３】
用語「定組成」は、溶媒系の組成が、クロマトグラフィー操作中一定であることを意味する。
【００４４】
用語「勾配」は、クロマトグラフィー分離におけるパラメーターとして用いる場合には、溶媒系の組成が、クロマトグラフィー操作中の少なくとも一の時間間隔にわたって変化することを意味する。この勾配は、直線的であってもよいし、段階的であってもよい。
【００４５】
表現「吸着定数」及び記号Ｋ（数式中では上部に横棒を付して表す）は、クロマトグラフィー分離において、化合物が分離用媒質によって保持される程度を記述するものである。希釈単一成分系における化合物“ａ”についての吸着定数は、移動相(溶媒系)中の[ａ]の濃度Ｃa(ｇ／ｌ)の、固定相(分離用媒質)中の[ａ]の濃度Ｃa（数式中では上部に横棒を付して表す）(ｇ／ｌ)に対する比に等しい。多成分系の場合には、種々の成分が、分離用媒質上の限られた数の吸着部位について互いに競争する。従って、所定の種[ａ]の濃度は、その移動相濃度のみならず、系内の他のすべての成分の移動相濃度にも依存する。
【００４６】
低濃度の２つの成分(Ａ及びＢ)の混合物について、滞留時間ｔR(Ａ)及びｔR(Ｂ)は、下記式により、吸着定数と関係つけられる：
【数１】
[式中、用語εEは、「外部多孔度」であり、これは、ＶML／ＶCOLとして規定され、ここに、ＶMLは、移動中の(停滞してない)移動相の体積であり、ＶCOLは、クロマトグラフィーカラムの体積であり；そして
用語ｔ0は、下記の表現：
【数２】
(式中、Ｑは、移動相の流量である)
により規定される「ゼロ滞留時間」である]。従って、１ｍＬ／分の流量で運転され、外部多孔度０．４を有する２５０ｍｍ×４．６ｍｍのクロマトグラフィーカラムについては、計算されたゼロ滞留時間は：
【数３】
【００４７】
用語、分離用媒質における２つの成分間の「選択性」は、２つの成分がクロマトグラフィー分離において分離される程度の尺度である。選択性は、“α”として表され、２つの成分それぞれの滞留因子の比として定義される：
【数４】
【００４８】
表現「光学活性」は、物質が偏光面を回転させる特性をいう。光学活性である化合物は、その鏡像と重ね合わせられない。物がその鏡像と重ね合わせられない特性は、キラリティーと呼ばれる。
【００４９】
分子の「キラリティー」特性は、分子をその鏡像に対して重ね合わせられなくする任意の構造的特長から生じうる。キラリティーを生じる最も一般的な構造的特徴は、不斉炭素原子即ち当該炭素原子に結合する４つの同等でない原子団を有する炭素原子である。
【００５０】
用語「鏡像異性体」は、光学活性である純粋化合物の２つの重ね合わせられない異性体の各々を指す。単一の鏡像異性体は、不斉炭素に結合した４つの原子団をランク付ける一組の優先順位規則であるCahn-Ingold-Prelog系によって指定される。March, Advanced Organic Chemistry, 第４版、(1992)、p.109を参照されたい。一度、４つの原子団の優先順位ランキングが決定されたならば、その分子を、最も低ランキングの原子団が観察者から遠い位置に来るように方向付ける。そして、他の原子団の降順のランク順位が時計回りであれば、その分子は、(Ｒ)と示され、反時計回りであれば、(Ｓ)と示される。以下の例において、Cahn-Ingold-Prelogのランキング順序は、Ａ＞Ｂ＞Ｃ＞Ｄである。最低のランキングの原子Ｄは、観察者から遠方に方向付けられている。
【化７】
【００５１】
用語「ラセミ化合物」又は語句「ラセミ混合物」は、２つの鏡像異性体の５０−５０混合物をいい、この混合物は、偏光面を回転させない。
【００５２】
表現「鏡像異性体過剰」は、一般にパーセンテージで記されているが、非ラセミ混合物即ち分離された又は部分的に分離された鏡像異性体の鏡像異性体純度の程度を表現するための手段である。鏡像異性体過剰パーセント(％ｅ．ｅ．)は、下記のとおり定義される：
【数５】
【００５３】
表現「実質的にトフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を含まない(Ｒ)−トフィソパム」は、少なくとも約８０％ｅ．ｅ．(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む組成物を意味する。好ましくは、かかる組成物は、少なくとも９０％ｅ．ｅ．の(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む。一層好ましくは、かかる組成物は、少なくとも約９５％ｅ．ｅ．の(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む。最も好ましくは、かかる組成物は、９８％ｅ．ｅ．を超える(Ｒ)−鏡像異性体のトフィソパムを含む。
【００５４】
用語「リンカー」は、キラル分離用媒質の記述に用いる場合には、キラル官能基をシリカなどの担体に結合する繋ぎとして機能する官能基をいう。
【００５５】
この明細書及び添付の請求の範囲で用いる場合、単数形態は、文脈上明らかに異なる場合を除いて、複数を包含する。
【００５６】
キラル分離用媒質
この発明の方法は、多孔質無機担体又は多孔質有機担体上に被覆し又は共有結合させた少なくとも一種の糖誘導体により誘導体化したキラル固定相を含むキラル分離用媒質を利用する。好適具体例において、この糖誘導体は、誘導体化された、アミロース、セルロース、キトサン、キシラン、カードラン、デキストラン、及びイヌラン多糖類よりなる群から選択する多糖類であり、一層好ましくは、アミロース及びセルロース多糖類である。好適具体例において、この糖誘導体は、多糖類のエステル又はカルバメートである。一層好適な具体例において、このキラル固定相は、多孔質無機担体又は多孔質有機担体上に被覆され又は共有結合された式Ｉのアミロース誘導体である。
【００５７】
キラル固定相の非制限的例には、セルロースフェニルカルバメート誘導体例えばセルローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralcel OD」として入手可能)；セルローストリベンゾエート誘導体例えばセルロース４−メチルベンゾエート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralcel OJ」として入手可能)；セルローストリシンナメート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralcel OK」として入手可能)；アミロースフェニル及びベンジルカルバメート誘導体例えばアミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート](Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralpak AS」として入手可能)、アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート(Daicel Chemical Industries, Ltd.から「Chiralpak AD」として又は「Chiralpak IA」入手可能)、アミロース３，４−置換フェニルカルバメート、アミロース４−置換フェニル−カルバメート；及びアミローストリシンナメートが含まれる。
【００５８】
アミロース誘導体を含むキラル分離用媒質は、米国特許第５，２０２，４３３号に開示されており、その全開示を参考として本明細書中に援用する。式Ｉのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質の幾つかの例は、Chankvetadze等、J. Chromatography A, 694 (1995), p.101-109に開示されており、その全開示を参考として本明細書中に援用する。
【００５９】
式Ｉのアミロースのフェニルカルバメート誘導体の合成は、アミロースを、酸スカベンジャー例えばピリジンの存在下でアミロースの有利の水酸基と完全に反応するのに必要とされる化学量論的量より多い実質的に過剰な量のフェニルイソシアネートと反応させることにより行うことができる。Chankvetadze等、同書、p.102頁参照。この誘導体化アミロースは、当分野で公知の方法によって、多孔性の有機又は無機の支持体上に被覆させることができる。Okamoto等、J. Chromatography, 363 (1986), p.106参照(その全開示を参考として本明細書中に援用する)。誘導体化した多糖類は、Okamoto等(ＵＳ５，６７９，５７２) (その全開示を参考として本明細書中に援用する)に記載されたように担体に結合させることができる。
【００６０】
この多孔質支持体上に被覆され又は結合されたアミロース誘導体は、当分野で公知のドライパッキング又はスラリーパッキング法を利用してクロマトグラフィーカラムに詰めることができる。一具体例において、この多糖類誘導体は、シリカゲル、ジルコニウム、アルミナ、セラミックス及び他のシリカ(好ましくは、シリカゲル)上に被覆され又は結合される。このパッキング材料の平均粒径は、１〜３００μｍ、好ましくは、２〜１００μｍ、一層好ましくは、５〜７５μｍであり、最も好ましくは、１０〜３０μｍである。他の直径も可能である。このパッキング材料の平均粒径は、連続的クロマトグラフィー工程における圧力低下及びパッキング材料の効率を調節するように選択することができる。
【００６１】
このキラル分離用媒質は、クロマトグラフィーカラムに詰めることができ、溶媒系をそのカラムを通過させることができる。
【００６２】
本発明は、非シミュレート移動層クロマトグラフィー法(例えば、「VariCol(商標)法」)を利用して、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムをトフィソパム鏡像異性体の混合物から分離する。この方法は、ループにて接続された固体固定相を詰めた複数の固定層カラムを利用する。このループ内で、複数の入口点及び出口点がこれらのカラム間に位置される。このトフィソパム鏡像異性体の混合物は、このループに、供給入口点から導入され、同時に、溶媒(移動相)が溶媒入口点からこのループに導入される。同時溶出される(Ｓ)−トフィソパム及び(Ｒ)−(−)−トフィソパムを含む溶液は、このループから抽残液出口点から取り出され、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムは、このループから抽出物出口点から取り出される。
【００６３】
これらのループ内の入口点及び出口点の位置は、実質的に一定時間間隔で変えられるが、入口点の位置の変化は、出口点の位置の変化と異なる時点で起きる。このループへのトフィソパム鏡像異性体の混合物の溶液の導入のための供給入口点の位置の変化において、トフィソパム鏡像異性体の混合物の溶液の元の入口点での導入は停止され、トフィソパム鏡像異性体の混合物の溶液の導入は、ループ内の次の供給入口点で開始される。この溶媒入口点の位置は、ループ内の元の溶媒入口点での溶媒の導入を停止して次の溶媒入口点で溶媒を導入することにより変化される。抽残液出口点の位置は、ループ内の抽残液の元の抽残液出口点での取り出しを停止して、次の抽残液出口点で抽残液を取り出すことにより変化される。抽出物出口点の位置は、元の抽出物出口点での溶液の取り出しを停止して、溶液を次の抽出物出口点で取り出すことによって変化される。液体の流れを、ループ内の一点から他の点へ指示する方法は、当業者には周知である。例えば、バルブシステムを利用して、流れをループ内の元の点から新たな点に変えることができる。入口点及び出口点の位置を変えることは、ループ内に異なるトフィソパム異性体の分布を含む域を造り出す。域の長さは、経時的に一定ではなく、域当たりのカラム数は、一期間中一定でない。これらのカラムの構成並びに入口点及び出口点の位置によって、複数の域を確立することができる。
【００６４】
下記は、トフィソパム鏡像異性体の分離のための４域システムの代表的な構成である。
第１域(溶媒入口点と抽出物出口点との間に位置している)は、本質的に、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムを含み；
第２域(抽出物出口点と供給入口点との間に位置している)は、トフィソパムの４つの異性体混合物を、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムを豊富に含み；
第３域(供給入口点と抽残液出口点との間に位置している)は、４つのトフィソパムの異性体の混合物を、(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを豊富に含み；そして
第４域(抽残液収集点と溶出液の注入点との間に位置している)は、本質的に、(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを含む。
【００６５】
かかる方法で使用するための非シミュレート移動層分離工程及び装置は、一層完全に、米国特許第６，１３６，１９８号、６，３７５，８３９号；第６，４１３，４１９号；及び６，７１２，９７３号に記載されており、その全開示を、参考として本明細書中に援用する。
【００６６】
溶媒系
分離用媒質が、多孔性の無機担体又は多孔性の有機担体上に被覆され又は共有結合された糖誘導体、又は式Ｉのアミロース誘導体である場合には、溶媒系は、好ましくは、ＡＣＮとアルキルアルコールの混合物を含む。このアルキルアルコールは、好ましくは、(Ｃ1〜Ｃ4)アルコールである。このアルコールは、最も好ましくは、ＭｅＯＨである。この溶媒系は、好ましくは、約５％(Ｖ／Ｖ)〜約４０％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含み、一層好ましくは、約１０％(Ｖ／Ｖ)〜約３５％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含み、尚一層好ましくは、約１５％(Ｖ／Ｖ)〜約２５％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含み、最も好ましくは、約１９％(Ｖ／Ｖ)のＭｅＯＨをＡＣＮ中に含む。或は、この溶媒系は、ＡＣＮ単独である。
【００６７】
アルキルアルコールのＡＣＮ溶媒系への添加は、トフィソパムの分離に有意の効果を有することが認められる。トフィソパムの４つすべての異性体は、分離される。しかしながら、トフィソパムの鏡像異性体及びそれらの配座異性体間の選択性が改善されても、トフィソパムの溶解度は、溶媒系の一層高濃度のアルキルアルコールのために低下する。それ故、溶媒系内のアルキルアルコールの濃度は、好ましくは、約４０体積％以下とする。
【００６８】
(Ｒ)−(＋)−トフィソパムを単離する場合には、アセトニトリルの溶媒系を利用して、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムが溶出される前に、(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを同時溶出する。用いたカラム及び条件によって、他の溶媒又は溶媒混合物も、同様の結果を生成しうる。
【００６９】
溶解度の研究は、ラセミトフィソパムの、ＡＣＮ中の１９％(Ｖ／Ｖ)ＭｅＯＨの混合物中における溶解度が、約１３５．５ｇ／Ｌであることを決定した。従って、溶媒系がＡＣＮ中の約１９％(Ｖ／Ｖ)ＭｅＯＨを含むこの発明の一具体例において、トフィソパムの供給の濃度は、１３５．５ｇ／Ｌ未満の濃度に限られる。好ましくは、この発明の実施におけるトフィソパムの鏡像異性体の混合物の供給の濃度は、約４５〜１２０ｇ／Ｌであり、最も好ましくは約１００ｇ／Ｌである。
【００７０】
この発明の実施において用いられる溶媒系は、クロマトグラフィー分離中定組成であってもよいし、又は一回以上の間隔での一の溶媒組成から他の溶媒組成への勾配を含んでもよい。好ましくは、溶媒系は、定組成である。
【００７１】
調製規模での分離
本発明の単離法は、特に、トフィソパムの鏡像異性体混合物の調製規模の分離に適している。この発明の方法は、オーバーローディング条件下で(即ち、分離用媒質の上流部分におけるすべての吸着部位と相互作用するのに十分高いトフィソパムの量)のトフィソパムの分離に有用であり、並びに、希釈溶液(即ち、非オーバーローディング条件)の分離、例えばトフィソパムの分析規模の分離に用いることもできる。
【００７２】
クロマトグラフィー分離を行う温度は、便利に、分離用媒質を制御された温度環境に維持すること及び／又は分離用媒質中を流れる溶媒系についての制御された温度を維持することにより制御することができる。クロマトグラフィー分離に好適な温度範囲は、約０〜６０℃であり、好ましくは約２５〜４５℃であり、最も好ましくは約４０℃である。
【００７３】
この溶媒系の溶媒組成、分離媒質中を流れる流量、及び分離用媒質の量は、この発明の方法の実施におけるトフィソパムの鏡像異性体の混合物の分離に必要な時間に寄与する因子である。好ましくは、このクロマトグラフィー分離は、約１５〜２５分で、一層好ましくは約１８〜２２分で完結される。
【００７４】
実施例７〜１０に記載したような非シミュレート移動層工程において、所定数のカラムについて構成の数に制限はない。クロマトグラフィー分離中にカラムの部分により表される所定域の平均の長さの多様性の潜在能力は、一層少ないカラムの使用、固相の量の低減、溶媒量の低減、並びに純度及び収率の増加による増大した効率へと導きうる。
【００７５】
この発明の一の非シミュレート移動層クロマトグラフィー法により、ＶａｒｉＣｏｌ(商標)法が、(Ｒ)−トフィソパムを分離するために利用される(例えば、５〜６カラム、４可変域ＶａｒｉＣｏｌ(商標)システム)。これらの域は、運転中、長さにおいて変化し、所定の運転サイクルにおいて固定長よりも平均を有する。他の具体例においては、３カラム−４可変域のＶａｒｉＣｏｌ(商標)システムを利用する。かかるシステムは、ＳＭＢプロセスにおける真の移動層システムのシミュレートに少なくとも４域を有する４つのカラムが必要なので、ＳＭＢ工程において利用することはできない。このＳＭＢ工程については、分離に必要とされるカラムの最少数がシステムの域の数と等しく、ＶａｒｉＣｏｌ(商標)システムにおいてはカラム数は、域の数より少なくてよい。
【００７６】
この発明の実施を、以下の非制限的実施例により説明する。実施例７〜１０は、トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体の、非シミュレート移動層工程(ＶａｒｉＣｏｌ(商標)法)を利用する分離のための代表的パラメーターを示している。他のカラム構成をここに記載のキラル分離に利用することもできる(少なくとも、３カラム使用)。
【実施例】
【００７７】
実施例１： ラセミトフィソパムの希釈溶液を利用する種々のキラル固定相の比較：
ラセミトフィソパムの希釈溶液におけるクロマトグラフィー分離を、表１に列記したキラル分離用媒質を利用して行った。これらの分離用媒質のすべては、４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィー用カラムに詰めた。
【００７８】
【表１−１】
【００７９】
【表１−２】
【００８０】
【表１−３】
【００８１】
下記の表２には、試験した各キラル分離用媒質に用いたキラル分離用媒質、溶媒系、温度及び流量を列記してある。溶媒系は、E.M. Scienceから得たＨＰＬＣ等級の溶媒を用いて調製した。
【００８２】
この表は又、各クロマトグラフィー分離において分離されたすべての成分についての滞留因子をもまとめてある。
【００８３】
【表２−１】
【００８４】
【表２−２】
【００８５】
試験したキラル分離用媒質の内で、２つの材料は、ラセミトフィソパムを４つの別々のピークに分離した。これらの材料は：
(Ｓ，Ｓ)−β−ＧＥＭ {シリカにアルケン(Ｃ13)エステル結合により共有結合された(２Ｓ)−２−{(１Ｓ)[(３，５−ジニトロフェニル)カルボニルアミノ]フェニルメチル}−３，３−ジメチルブタノエートを含む市販されている材料}；及び
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質：
【化８】
をシリカゲル上に被覆したものであった。
【００８６】
分離は、Ｃｈｉｒａｌｐａｋ(商標)、ＡＤ、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ(商標)、ＯＤ、(Ｒ，Ｒ)Ｗｈｅｌｋ−Ｏ(商標)、及びＳｈｉｓｅｉｄｏ ＲＵ−１についても観察された。Ｃｈｉｒａｌｐａｋ(商標)、ＡＤ及びＣｈｉｒａｌｃｅｌ(商標)、ＯＤは、乏しい分離(ＲS＜０．５)を示した。分離用媒質(Ｒ，Ｒ)Ｗｈｅｌｋ−Ｏ(商標)、及びＳｈｉｓｅｉｄｏ ＲＵ−１は、高い滞留定数を与え、これは、長い滞留時間を生じ、それ故、実質的に多量の溶媒系を必要とした。
【００８７】
実施例２：トフィソパム鏡像異性体の、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質における溶出順序の測定。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、２２℃で、流量１．０ｍＬ／分での１００％ＡＣＮの条件下で安定化させた。ラセミトフィソパム(０．１ｍｇ)を、このカラムに注入して、溶出液の画分を、注入後１．５〜６．０分の間、０．５分毎に集めた。これらの画分を、トフィソパムの４つの異性体の各々の量について分析した。このデータを、図１にプロットしたが、これは、１００％ＡＣＮにおける分離のピークプロフィルを示すように構成されたものである。
【００８８】
トフィソパム異性体は、次の順序で溶出された：(Ｒ)−(−)；(Ｓ)−(−)／(Ｓ)−(＋)；及び(Ｒ)−(＋)。このクロマトグラフィー法における配座異性体の相互変換のために、(Ｒ)−(−)及び(Ｒ)−(＋)配座異性体の両方の存在が、(Ｓ)−鏡像異性体の溶出中認められる。
【００８９】
実施例３：ラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質への過剰注入は、１００％ＡＣＮで溶出した。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィー用カラムを、１００％ＡＣＮ(２５℃で１．０ｍＬ／分の流量)の条件下で安定化させた。ラセミトフィソパム(濃度３３ｇ／Ｌ、３００μＬ)をこのカラムに注入した。図２は、その結果の分離を示している(３４５ｎｍでのＵＶ検出)。分離された(Ｒ)−トフィソパムの収率は、約６０重量％であった。この分離において分離された(Ｒ)−トフィソパムの測定された鏡像異性体過剰(ｅ．ｅ．)は、不純物としての(Ｓ)−(＋)鏡像異性体の存在のために、９５％ｅ．ｅ．未満であった。
【００９０】
実施例４：溶媒系の改変：ＡＣＮ／ＭｅＯＨ混合物を用いて溶出した式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質におけるトフィソパムの分離：
ラセミトフィソパムの希釈溶液のクロマトグラフィー分離を、４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍクロマトグラフィー用カラムに詰めた式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を用いて行った。この溶媒系を、１００％ＡＣＮで溶出するトフィソパムの分離をＡＣＮ／ＭｅＯＨ混合物での分離と比較するために改変した(ＭｅＯＨは、約５〜４０％の濃度範囲で存在する)。
【００９１】
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、８５／１５(Ｖ／Ｖ)ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(２５℃で、１．６ｍＬ／分の流量)の条件下で安定化させた。ラセミトフィソパムの希釈注入物を注入した。図３は、その結果の分離を示している。
【００９２】
更なるＡＣＮ／ＭｅＯＨ溶媒組成物及びその結果の分離データを下記の表３に列記した。
【表３】
【００９３】
トフィソパムの鏡像異性体とそれらの配座異性体の間の選択性は、ＭｅＯＨの溶媒系への添加により増大した。
【００９４】
実施例５：８５／１５ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)により溶出されるラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質への過剰注入。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、８５／１５(Ｖ／Ｖ)ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(２５℃で、１．０ｍＬ／分の流量)の条件下で安定化させた。ラセミトフィソパム(９．９ｍｇ)を注入した。図４は、その結果の分離を示している(３４５ｎｍでのＵＶ検出)。垂直の点線は、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムの収集を開始した切点(１１．６分)を示している。このオーバーロード実験から得られた画分の分析は、８３重量％より大きい収率、及び(Ｒ)−鏡像異性体についての９８％を超える鏡像異性体過剰を示した。
【００９５】
実施例６：ラセミトフィソパムの、８１／１９ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)により溶出される式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質への過剰注入。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた４．６ｍｍ(ｉ．ｄ．)×２５０ｍｍのクロマトグラフィー用カラムを、８１／１９(Ｖ／Ｖ)ＡＣＮ／ＭｅＯＨ(２５℃で１．１７ｍＬ／分の流量)の条件下で安定させた。ラセミトフィソパム(１０４ｇ／Ｌの濃度の５００μＬ)を注入した。図５は、その結果の分離を示している(３５５ｎｍでのＵＶ検出)。垂直の点線は、(Ｒ)−(＋)−トフィソパムの収集を開始した切点(８．０分)を示している。このオーバーロード実験から得られた画分の分析は、約７３重量％の収率と(Ｒ)−鏡像異性体についての９８％を超える鏡像異性体過剰を示した。
【００９６】
この溶媒系における一層高濃度のＭｅＯＨは、増大された選択性を生成することが観察された。しかしながら、ラセミトフィソパムの溶解度が、一層高濃度のＭｅＯＨにより低下した。
【００９７】
実施例７〜１０．トフィソパム鏡像異性体の混合物からの(Ｒ)−トフィソパムの、非シミュレート移動層法(ＶａｒｉＣｏｌ(商標)法)における分離。
式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質を詰めた５つの２．５ｃｍ(ｉ．ｄ．)×１０．６ｃｍのクロマトグラフィー用カラムを、一つのループに連結した。多数の入口及び出口がこれらのカラムの間のループに位置した。このシステムをＡＣＮを通過させることにより安定化させた後に、ＡＣＮ中のトフィソパム鏡像異性体の溶液(濃度４８〜５０ｇ／Ｌ)を連続的にこのシステムに注入した。
【００９８】
この分離を、下記の表４に列記した温度、供給濃度及び流量を利用して行なった。
【表４】
【００９９】
表４の条件は、表５に示したカラム構成を生じた。
【表５】
【０１００】
実施例７〜１０の精製による収率及び生成物純度を、表６に示した。そのデータを評価すると、最大収率は、少数の(Ｒ)−(−)−異性体が(Ｓ)−異性体と共に溶出するので、約８０％しか得られないということが理解されよう。
【０１０１】
【表６】
【０１０２】
実施例７は、トフィソパム鏡像異性体の混合物から約９３％の純度で、３６％の収率(最大理論収率の５０％未満)で(Ｒ)−トフィソパムを得ることができるということを示している。実施例７で用いたものと異なるカラム構成による実施例８(３５℃)によれば、高純度(９９．３％)の(Ｒ)−トフィソパムが、収率約７２重量％で得られた(最大理論収率の約９０％)。実施例８の３７℃の温度で、高純度(９９．３％)の(Ｒ)−トフィソパムが約７５重量％の収率で得られた(最大理論収率の約９４％)。最後に、実施例１０は、一層高純度(９９．５％)の(Ｒ)−トフィソパムを４０℃で約７８重量％の収率で得ることができることを示している(最大理論収率の約９８％)。
【０１０３】
本発明の好適な具体例を示し記載してきたが、当業者は、この発明の範囲から逸脱せずに様々な変化又は改変をすることができるということを理解するであろう。
【０１０４】
すべての引用文献を参考として、本明細書中に援用する。本発明は、その本質的特性の精神から離れることなく他の特定の形態で具体化することができ、それ故、この発明の範囲の指示としては、前述の明細書よりは添付の請求の範囲を参照すべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１０５】
【図１】トフィソパムの鏡像異性体の溶出順序を例示している図である。
【図２】過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び１００％ＡＣＮを含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離を示している図である。
【図３】希釈注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している図である。
【図４】過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８５％ＡＣＮ／１５％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している図である。
【図５】過剰注入したラセミトフィソパムの、式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル分離用媒質及び８１％ＡＣＮ／１９％ＭｅＯＨ(Ｖ／Ｖ)を含む溶媒系を利用するクロマトグラフィー分離のダイヤグラムを示している図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まない(Ｒ)−トフィソパムを分離する方法であって、下記を含む当該方法：
トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を、キラル分離用媒質を含む非シミュレート移動層システムに導入し；そして
(Ｒ)−トフィソパムを、該キラル分離用媒質から溶離液にて分離する。
【請求項２】
下記の工程を含む、請求項１に記載の方法：
ａ）トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を形成し；
ｂ）前記のラセミトフィソパムの供給原料溶液を、実質的に一定の温度に維持された非シミュレート移動層システムに導入し、該システムは、複数のクロマトグラフィーカラムを含み、各カラムはキラル固定相を含む吸着剤を含み、該カラムはシリーズで及びループ状に配置され、該ループは、供給原料の入口点、抽残液出口点、溶媒入口点、及び抽出物出口点を含み、このループの入口点と出口点の間の部分は、クロマトグラフィー域を規定し；
ｃ）溶媒を、前記のシステムに、前記の溶媒入口点から導入し；
ｄ）該入口点及び出口点の位置を変え(該入口点の変化は、該出口点の変化と実質的に異なる時点で起きる)；
ｅ）(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを、該ループから、該抽残液引き出し点で取り出し；そして
ｆ）(Ｒ)−トフィソパムを、該抽出物出口点から集める。
【請求項３】
前記の吸着剤が、少なくとも一種の糖誘導体よりなるキラル固定相を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
吸着剤が、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート；及び式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択するキラル固定相を含む、請求項２に記載の方法：
【化１】
[式中、各Ｒ1は、下記式ＩＩの基である：
【化２】
(式中、Ｒ2及びＲ3は、独立に、塩素及び−ＣＨ3よりなる群から選択され；そして
ｎは１０〜１００の整数であり；
該アミロース誘導体は、多孔性無機支持体又は多孔性有機支持体上に被覆される)]。
【請求項５】
前記の吸着剤が、下記式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル固定相を含む、請求項４に記載の方法：
【化３】
(式中、ｎは、１０〜１００の整数である)。
【請求項６】
前記の吸着剤が、アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートのキラル固定相を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記の溶媒を、Ｃ１〜Ｃ１０アルカン、Ｃ１〜Ｃ６アルコール、Ｃ１〜Ｃ６アルコールの酢酸エステル、Ｃ１〜Ｃ６アルコールのプロピオン酸エステル、Ｃ１〜Ｃ１０ケトン、Ｃ１〜Ｃ１０エーテル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択する、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記の溶媒を、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸プロピル、プロピオン酸イソプロピル、アセトン、ブタノン、イソプロピルメチルケトン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、塩化メチレン、クロロホルム、クロロベンゼン、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択から選択する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
溶媒が、アセトニトリルとメタノールの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
溶媒が、アセトニトリルである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
溶媒を、アセトニトリル、メタノール及びこれらの混合物よりなる群から選択し、キラル固定相を含む吸着剤を、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；及び式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択する、請求項２に記載の方法：
【化４】
[式中、各Ｒ1は、下記式ＩＩの基である：
【化５】
(式中、Ｒ2及びＲ3は、独立に、塩素及び−ＣＨ3よりなる群から選択され；そして
ｎは１０〜１００の整数であり；
該アミロース誘導体は、多孔性無機支持体又は多孔性有機支持体上に被覆される)]。
【請求項１２】
溶媒が、アセトニトリルであり、キラル固定相を含む吸着剤が、下記式Ｉａのアミロース誘導体である、請求項１１に記載の方法：
【化６】
(ｎは１０〜１００の整数である)。
【請求項１３】
溶媒が、アセトニトリルであり、キラル固定相を含む吸着剤が、アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体が、少なくとも９５％鏡像異性体過剰で回収される、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体が、少なくとも９８％鏡像異性体過剰で回収される、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体が、少なくとも９９％鏡像異性体過剰で回収される、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記の実質的に一定の温度が、０〜６０℃である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記の実質的に一定の温度が、２５〜４５℃である、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記の実質的に一定の温度が、４０℃である、請求項２に記載の方法。
【請求項１】
トフィソパムの(Ｓ)−鏡像異性体を実質的に含まない(Ｒ)−トフィソパムを分離する方法であって、下記を含む当該方法：
トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を、キラル分離用媒質を含む非シミュレート移動層システムに導入し；そして
(Ｒ)−トフィソパムを、該キラル分離用媒質から溶離液にて分離する。
【請求項２】
下記の工程を含む、請求項１に記載の方法：
ａ）トフィソパム鏡像異性体の混合物の供給原料溶液を形成し；
ｂ）前記のラセミトフィソパムの供給原料溶液を、実質的に一定の温度に維持された非シミュレート移動層システムに導入し、該システムは、複数のクロマトグラフィーカラムを含み、各カラムはキラル固定相を含む吸着剤を含み、該カラムはシリーズで及びループ状に配置され、該ループは、供給原料の入口点、抽残液出口点、溶媒入口点、及び抽出物出口点を含み、このループの入口点と出口点の間の部分は、クロマトグラフィー域を規定し；
ｃ）溶媒を、前記のシステムに、前記の溶媒入口点から導入し；
ｄ）該入口点及び出口点の位置を変え(該入口点の変化は、該出口点の変化と実質的に異なる時点で起きる)；
ｅ）(Ｒ)−(−)−トフィソパム、(Ｓ)−(＋)−トフィソパム、及び(Ｓ)−(−)−トフィソパムを、該ループから、該抽残液引き出し点で取り出し；そして
ｆ）(Ｒ)−トフィソパムを、該抽出物出口点から集める。
【請求項３】
前記の吸着剤が、少なくとも一種の糖誘導体よりなるキラル固定相を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
吸着剤が、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；アミローストリス−(３，５−ジメチルフェニル)カルバメート；及び式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択するキラル固定相を含む、請求項２に記載の方法：
【化１】
[式中、各Ｒ1は、下記式ＩＩの基である：
【化２】
(式中、Ｒ2及びＲ3は、独立に、塩素及び−ＣＨ3よりなる群から選択され；そして
ｎは１０〜１００の整数であり；
該アミロース誘導体は、多孔性無機支持体又は多孔性有機支持体上に被覆される)]。
【請求項５】
前記の吸着剤が、下記式Ｉａのアミロース誘導体を含むキラル固定相を含む、請求項４に記載の方法：
【化３】
(式中、ｎは、１０〜１００の整数である)。
【請求項６】
前記の吸着剤が、アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートのキラル固定相を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記の溶媒を、Ｃ１〜Ｃ１０アルカン、Ｃ１〜Ｃ６アルコール、Ｃ１〜Ｃ６アルコールの酢酸エステル、Ｃ１〜Ｃ６アルコールのプロピオン酸エステル、Ｃ１〜Ｃ１０ケトン、Ｃ１〜Ｃ１０エーテル、ハロゲン化Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択する、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記の溶媒を、ヘキサン、ヘプタン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチル、プロピオン酸プロピル、プロピオン酸イソプロピル、アセトン、ブタノン、イソプロピルメチルケトン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、塩化メチレン、クロロホルム、クロロベンゼン、トリフルオロ酢酸、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、アセトニトリル及びこれらの組合せよりなる群から選択から選択する、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
溶媒が、アセトニトリルとメタノールの混合物である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
溶媒が、アセトニトリルである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
溶媒を、アセトニトリル、メタノール及びこれらの混合物よりなる群から選択し、キラル固定相を含む吸着剤を、セルローストリス４−メチルベンゾエート；セルローストリシンナメート；アミローストリス[(Ｓ)−α−メチルベンジルカルバメート]；及び式Ｉのアミロース誘導体よりなる群から選択する、請求項２に記載の方法：
【化４】
[式中、各Ｒ1は、下記式ＩＩの基である：
【化５】
(式中、Ｒ2及びＲ3は、独立に、塩素及び−ＣＨ3よりなる群から選択され；そして
ｎは１０〜１００の整数であり；
該アミロース誘導体は、多孔性無機支持体又は多孔性有機支持体上に被覆される)]。
【請求項１２】
溶媒が、アセトニトリルであり、キラル固定相を含む吸着剤が、下記式Ｉａのアミロース誘導体である、請求項１１に記載の方法：
【化６】
(ｎは１０〜１００の整数である)。
【請求項１３】
溶媒が、アセトニトリルであり、キラル固定相を含む吸着剤が、アミローストリス(３，５−ジメチルフェニル)カルバメートである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体が、少なくとも９５％鏡像異性体過剰で回収される、請求項２に記載の方法。
【請求項１５】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体が、少なくとも９８％鏡像異性体過剰で回収される、請求項２に記載の方法。
【請求項１６】
トフィソパムの(Ｒ)−鏡像異性体が、少なくとも９９％鏡像異性体過剰で回収される、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
前記の実質的に一定の温度が、０〜６０℃である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記の実質的に一定の温度が、２５〜４５℃である、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記の実質的に一定の温度が、４０℃である、請求項２に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２００９−５１９９３８（Ｐ２００９−５１９９３８Ａ）
【公表日】平成２１年５月２１日（２００９．５．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４５７９５（Ｐ２００８−５４５７９５）
【出願日】平成１８年１２月１３日（２００６．１２．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４７６５６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７８８０８
【国際公開日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【出願人】（５０７０６５７４０）ヴェラ アクイジション コーポレイション (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年５月２１日（２００９．５．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月１３日（２００６．１２．１３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４７６５６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７８８０８
【国際公開日】平成１９年７月１２日（２００７．７．１２）
【出願人】（５０７０６５７４０）ヴェラ アクイジション コーポレイション (2)
【Ｆターム（参考）】
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