説明

1,3−ブタンジオールの産生のための生物

非天然微生物には、1,3-ブタンジオール(1,3-BDO)を産生するのに十分な量で発現する1,3-BDO経路酵素をコードする少なくとも1つの外来性核酸を有する1,3-BDO経路を有する微生物を含む。経路には、2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ、AKP脱水素酵素、2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアートアミノトランスフェラーゼ、2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアート酸化還元酵素(脱アミノ化)、2-オキソ-4-ヒドロキシペンタノアートデカルボキシラーゼ、3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素、AKPアミノトランスフェラーゼ、AKP酸化還元酵素(脱アミノ化)、2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ、3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元)、3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元)、4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素、AKPデカルボキシラーゼ、4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ、4-アミノブタン-2-オン酸化還元酵素(脱アミノ化)、4-アミノブタン-2-オンアンモニア-リアーゼ、ブテノンヒドラターゼ、AKPアンモニア-リアーゼ、アセチルアクリラートデカルボキシラーゼ、アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA‐依存性、アルデヒド形成)、アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA‐依存性、アルコール形成)、アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元)、3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成)、3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ、及びクロトナーゼから選択される酵素を含む。1,3-BDOを産生する方法には、1,3-BDOを産生する条件下及び十分な時間で、このような微生物を培養することを含む。


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【特許請求の範囲】
【請求項1】
1,3-ブタンジオール(1,3-BDO)を産生するのに十分な量で発現する1,3-BDO経路酵素をコードする少なくとも1つの外来性核酸を含む1,3-BDO経路を有する微生物を含み、該1,3-BDO経路が 2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ、AKP脱水素酵素、2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアートアミノトランスフェラーゼ、2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアート酸化還元酵素(脱アミノ化)、2-オキソ-4-ヒドロキシペンタノアートデカルボキシラーゼ、3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素、AKPアミノトランスフェラーゼ、AKP酸化還元酵素(脱アミノ化)、2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ、3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元)、3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元)、4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素、AKPデカルボキシラーゼ、4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ、4-アミノブタン-2-オン酸化還元酵素(脱アミノ化)、4-アミノブタン-2-オンアンモニアリアーゼ、ブテノンヒドラターゼ、AKPアンモニア-リアーゼ、アセチルアクリラートデカルボキシラーゼ、アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルデヒド形成)、アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルコール形成)、アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元)、3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成)、3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成)、4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ、及びクロトナーゼからなる群から選択される酵素を含む、非天然微生物。
【請求項2】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする2つの外来性核酸を含む、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項3】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする3つの外来性核酸を含む、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項4】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする4つの外来性核酸を含む、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項5】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする5つの外来性核酸を含む、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項6】
前記少なくとも1つの外来性核酸が異種性核酸である、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項7】
前記非天然微生物が、実質的に嫌気性培地中にある、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項8】
前記1,3-BDO経路が、1セットの1,3-BDO経路酵素を含み、該セットの1,3-BDO経路酵素が下記からなる群から選択される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の非天然微生物:
(a)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKP脱水素酵素;(3)2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアートアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)2-オキソ-4-ヒドロキシペンタノアートデカルボキシラーゼ;及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(b)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(3)2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ;(4)3-オキシブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(c)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(3)2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ;(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(d)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(e)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(f)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアンモニア-リアーゼ;(4)ブテノンヒドラターゼ;及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(g)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアンモニア-リアーゼ;(3)アセチルアクリラートデカルボキシラーゼ;(4)ブテノンヒドラターゼ;及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(h)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルデヒド形成);(2)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(3)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(i)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルコール形成)及び(2)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(j)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルデヒド形成);(2)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(3)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(k)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元)及び(2)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成);
(l)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元);(2)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成);及び(3)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(m)(1)4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ;(2)クロトナーゼ;及び(3)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成);並びに
(n)(1)4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ;(2)クロトナーゼ;(3)3-ヒドロキシブチリル- CoA還元酵素(アルデヒド形成);及び(4)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素。
【請求項9】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKP脱水素酵素;(3)2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアートアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)2-オキソ-4-ヒドロキシペンタノアートデカルボキシラーゼ;及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項10】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(3)2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ;(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項11】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(3)2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ;(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項12】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ;(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項13】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項14】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアンモニア-リアーゼ;(4)ブテノンヒドラターゼ;及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項15】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアンモニア-リアーゼ;(3)アセチルアクリラートデカルボキシラーゼ;(4)ブテノンヒドラターゼ;及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項16】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA‐依存性、アルデヒド形成);(2)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(3)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項17】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルコール形成)及び(2)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項18】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA‐依存性、アルデヒド形成);(2)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(3)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項19】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元)及び(2)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成)を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項20】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元);(2)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成);及び(3)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項21】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ;(2)クロトナーゼ;及び(3)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成)を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項22】
前記セットの1,3-BDO経路酵素が、(1)4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ;(2)クロトナーゼ;(3)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成);及び(4)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素を含む、請求項8に記載の非天然微生物。
【請求項23】
前記2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼが、ortA(α)、ortB(β)、Amet_2368(α)、Amet_2369(β)、Teth514_1478(α)、Teth514_1479(β)、TTE1235(α)、及びthrC(β)からなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項24】
前記AKP脱水素酵素が、thrA、akthr2、hom6、hom1、hom2、fadB、fadJ、Hbd2、Hbd1、hbd、HSD17B10、phbB、phaB、Msed_1423、Msed_0399、Msed_0389、Msed_1993、adh、adhA、adh‐A、mdh、ldhA、ldh、及びbdhからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項25】
前記2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアートアミノトランスフェラーゼが、aspC、AAT2、ASP5、got2、avtA、lysN、AadAT‐II、dat、lat、ygjG、spuC、SkyPYD4、SkUGAl、UGAl、Abat、Gta‐1、gabT、及びpuuEからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項26】
前記2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアート酸化還元酵素(脱アミノ化)が、gdhA、gdh、gdhAl、rocG、gdhl、gdh2、GDH、GDH2、ldh、及びnadXからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項27】
前記2-オキソ-4-ヒドロキシペンタノアートデカルボキシラーゼが、pdc、pdcl、mdlC、dpgB、ilvB‐1、kgd、kdcA、lysA、panD、cadA、ldc、ldcC、AF323910.1:1…1299、odc1、VV2_1235、dmpH、dmpE、xylII、xylIII、Reut_B5691、Reut_B5692、CAD、padl、pofK(pad)、padC、pad、adc、cbei_3835、CLL_A2135、及びRBAM_030030からなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項28】
前記3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素が、alrA、ADH2、yqhD、bdh I、bdh II、adhA、4hbd、adhI、P84067、mmsb、dhat、及び3hidhからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項29】
前記AKPアミノトランスフェラーゼが、aspC、AAT2、ASP5、got2、avtA、lysN、AadAT‐II、dat、lat、ygjG、spuC、SkyPYD4、SkUGA1、UGA1、Abat、Gta‐1、gabT、及びpuuEからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項30】
前記AKP酸化還元酵素(脱アミノ化)が、gdhA、gdh、gdhA1、rocG、gdh1、gdh2、GDH、GDH2、ldh、及びnadXからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項31】
前記2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼが、pdc、pdc1、mdlC、dpgB、ilvB‐1、kgd、kdcA、lysA、panD、cadA、ldc、ldcC、AF323910.1:1…1299、odc1、VV2_1235、dmpH、 dmpE、 xylII、 xylIII、Reut_B5691、Reut_B5692、CAD、pad1、pofK(pad)、padC、pad、adc、cbei_3835、CLL_A2135、及びRBAM_030030からなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項32】
前記3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元)が、thrA、akthr2、hom6、hom1、hom2、fadB、fadJ、Hbd2、Hbd1、hbd、HSD17B10、phbB、phaB、Msed_1423、Msed_0399、Msed_0389、Msed_1993、adh、adhA、adh‐A、mdh、ldhA、ldh、及びbdhからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項33】
前記3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元)が、alrA、ADH2、yqhD、bdh I、bdh II、adhA、4hbd、adhI、P84067、mmsb、dhat、及び3hidhからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項34】
前記4-ヒドロキシ,2-ブタノン還元酵素が、thrA、akthr2、hom6、hom1、hom2、fadB、fadJ、Hbd2、Hbd1、hbd、HSD17B10、phbB、phaB、Msed_1423、Msed_0399、Msed_0389、Msed_1993、adh、adhA、adh‐A、mdh、ldhA、ldh、及びbdhからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項35】
前記AKPデカルボキシラーゼが、pdc、pdc1、mdlC、dpgB、ilvB‐1、kgd、kdcA、lysA、panD、cadA、ldc、ldcC、AF323910.1:1…1299、odc1、VV2_1235、dmpH、dmpE、xylII、xylIII、Reut_B5691、Reut_B5692、CAD、pad1、pofK(pad)、padC、及びpadからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項36】
前記4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼが、aspC、AAT2、ASP5、got2、avtA、lysN、AadAT‐II、dat、lat、ygjG、spuC、SkyPYD4、SkUGAl、UGAl、Abat、Gta‐1、gabT、及びpuuEからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項37】
前記4-アミノブタン-2-オン酸化還元酵素(脱アミノ化)が、gdhA、gdh、gdhAl、rocG、gdh1、gdh2、GDH、GDH2、ldh、nadX、kdd、及びlysDHからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項38】
前記4-アミノブタン-2-オンアンモニア-リアーゼが、aspA及びansBからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項39】
前記ブテノンヒドラターゼが、fumA、fumB、fumC、fumH、fum1、MmcB、MmcC、hmd、BACCAP_02294、ANACOL_02527、NtherDRAFT_2368、dmdA、dmdB、crt、crtl、ech paaA、paaB、phaA、phaB、maoC、paaF、paaG、abfD、及びMsed_1220からなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項40】
前記AKPアンモニア-リアーゼが、aspA及びansBからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項41】
前記アセチルアクリラートデカルボキシラーゼが、pdc、pdc1、mdlC、dpgB、ilvB‐1、kgd、kdcA、lysA、panD、cadA、ldc、ldcC、AF323910.1:1…1299、odc1、VV2_1235、dmpH、dmpE、xylII、xylIII、Reut_B5691、Reut_B5692、CAD、pad1、pofK(pad)、padC、pad、adc、cbei_3835、CLL_A2135、及びRBAM_030030からなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項42】
前記アセトアセチルCoA還元酵素(CoA依存性、アルデヒド形成)が、acr1、sucD、bphG、bld、adhE、Msed_0709、mcr、asd‐2、Saci_2370、Ald、及びeutEからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項43】
前記アセトアセチルCoA還元酵素(CoA依存性、アルコール形成)が、adhE、adhE2、mcr、Rcas_2929、NAPl_02720、MGP2080_00535、及びFARからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項44】
前記アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元)が、thrA、akthr2、hom6、hom1、hom2、fadB、fadJ、Hbd2、Hbd1、hbd、HSD17B10、phbB、phaB、Msed_1423、Msed_0399、Msed_0389、Msed_1993、adh、adhA、adh‐A、mdh、ldhA、ldh、及びbdhからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項45】
前記3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成)が、acr1、sucD、bphG、bld、adhE、Msed_0709、mcr、asd‐2、Saci_2370、Ald、及びeutEからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項46】
前記3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成)が、adhE、adhE2、mcr、Rcas_2929、NAP1_02720、MGP2080_00535、及びFARからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項47】
前記4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼが、fumA、fumB、fumC、fumH、fum1、MmcB、MmcC、hmd、BACCAP_02294、ANACOL_02527、NtherDRAFT_2368、dmdA、dmdB、crt、crt1、ech paaA、paaB、phaA、phaB、maoC、paaF、paaG、abfD、Msed_1220、fadA、fadB、fadI、fadJ、及びfadRからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項48】
前記クロトナーゼが、fumA、fumB、fumC、fumH、fum1、MmcB、MmcC、hmd、BACCAP_02294、ANACOL_02527、NtherDRAFT_2368、dmdA、dmdB、crt、crt1、ech paaA、paaB、phaA、phaB、maoC、paaF、paaG、abfD、Msed_1220、fadA、fadB、fadI、fadJ、及びfadRからなる群から選択される1つ以上の遺伝子によってコードされる、請求項1に記載の非天然微生物。
【請求項49】
1,3-BDOを産生するための条件下及び十分な時間で、請求項1に記載の非天然微生物を培養することを含む、1,3-BDOを産生する方法。
【請求項50】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする2つの外来性核酸を含む、請求項49に記載の方法。
【請求項51】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする3つの外来性核酸を含む、請求項49に記載の方法。
【請求項52】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする4つの外来性核酸を含む、請求項49に記載の方法。
【請求項53】
前記微生物が、1,3-BDO経路酵素を各々コードする5つの外来性核酸を含む、請求項49に記載の方法。
【請求項54】
前記1,3-BDO経路が、1セットの1,3-BDO経路酵素を含み、該セットの1,3-BDO経路酵素が、下記からなる群から選択される、請求項49〜53のいずれか一項に記載の方法:
(a)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKP脱水素酵素;(3)2-アミノ-4-ヒドロキシペンタノアートアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)2-オキソ-4-ヒドロキシペンタノアートデカルボキシラーゼ;及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(b)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(3)2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ;(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(c)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(3)2,4-ジオキソペンタノアートデカルボキシラーゼ;(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(d)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(5)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(e)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアミノトランスフェラーゼ又は酸化還元酵素(脱アミノ化);(4)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(f)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPデカルボキシラーゼ;(3)4-アミノブタン-2-オンアンモニア-リアーゼ;(4)ブタノンヒドラターゼ;及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;及び
(g)(1)2-アミノ-4-ケトペンタノアート(AKP)チオラーゼ;(2)AKPアンモニア-リアーゼ;(3)アセチルアクリラートデカルボキシラーゼ;(4)ブタノンヒドラターゼ;及び(5)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(h)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルデヒド形成);(2)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(ケトン還元);及び(3)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(i)(1)アセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルコール形成)及び(2)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(j)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(CoA依存性、アルデヒド形成);(2)3-オキソブチルアルデヒド還元酵素(アルデヒド還元);及び(3)4-ヒドロキシ-2-ブタノン還元酵素;
(k)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元)及び(2)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成);
(l)(1)アセトアセチル-CoA還元酵素(ケトン還元);(2)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成);及び(3)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素;
(m)(1)4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ;(2)クロトナーゼ;及び(3)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルコール形成);並びに
(n)(1)4-ヒドロキシブチリル-CoAデヒドラターゼ;(2)クロトナーゼ;(3)3-ヒドロキシブチリル-CoA還元酵素(アルデヒド形成);及び(4)3-ヒドロキシブチルアルデヒド還元酵素。
【請求項55】
前記非天然微生物が、実質的に嫌気性培地中にある、請求項49に記載の方法。
【請求項56】
前記少なくとも1つの外来性核酸が、異種性核酸である、請求項49に記載の方法。

【図1】
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【図2】
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【図3】
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【図4】
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【図5】
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【図6】
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【図7】
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【公表番号】特表2012−525158(P2012−525158A)
【公表日】平成24年10月22日(2012.10.22)
【国際特許分類】
【出願番号】特願2012−508804(P2012−508804)
【出願日】平成22年4月30日(2010.4.30)
【国際出願番号】PCT/US2010/033300
【国際公開番号】WO2010/127319
【国際公開日】平成22年11月4日(2010.11.4)
【出願人】(511062818)ゲノマチカ, インク. (10)
【Fターム(参考)】