ＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤
【課題】正常細胞を損傷する抗がん剤を使用せずに安全かつ効率的なＩＶＲ治療を実施する。
【解決手段】ＩＶＲ血管内局所投与用製剤としてビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とした治療剤を用いることにより悪性腫瘍の治療に大きな効果をもたらす。
【解決手段】ＩＶＲ血管内局所投与用製剤としてビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とした治療剤を用いることにより悪性腫瘍の治療に大きな効果をもたらす。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管内局所投与が可能な悪性腫瘍の治療剤に関し、特に固形癌を中心としたＩＶＲ血管塞栓術を主体とした固形腫瘍の低侵襲治療との併用に際し、正常細胞を損傷する抗癌剤投与をおこなわずに腫瘍細胞を合理的かつ速やかに消失させる画期的な治療剤を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
身体への負担をできるだけ軽くし、生体が持つ免疫能力を手術ほど低下させることなく、しかも手術をした時と同程度の治療効果をあげようとする治療法（低侵襲治療）のひとつの新しい医学分野としてインターベンショナル・ラジオロジー（Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ；以下単に「ＩＶＲ」と略す）治療がある。 これは放射線診断学の技術を病気治療に転用したもので、その代表例が血管塞栓術であり、正常部位に比して血流が多い悪性腫瘍に対して、血管造影の技術を使って動脈血流の遮断（阻血）を行ない腫瘍の虚血を引き起こす手法である。
【０００３】
固形腫瘍に対する血管塞栓術は、とくに腫瘍への血流が多い多血性腫瘍が塞栓による阻血に弱く良い適応となる。 一般的にはこの血管塞栓術を血管内治療といい、その多くは抗癌剤を併用し、抗癌剤と塞栓物質を同時に動脈内に投与することによって、腫瘍内に停滞した抗癌剤の徐放効果と動脈血流遮断による腫瘍の虚血とを相乗的に作用させている。
【０００４】
【特許文献１】特開平３−８００７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来の固形悪性腫瘍治療に使用される薬剤は、５−ＦＵ誘導体などの核酸アナログやシスプラチンやマイトマイシンと言った薬剤が使用されるが、これらは癌細胞だけを殺傷するのではなく正常細胞に対しても悪影響を与えることから重篤な副作用をもたらすことが知られている。 またこれまでの血管内治療では抗癌剤を併用するために、周囲の組織にも大きなダメージを与えることが多い。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明は、正常細胞を損傷するような危険な抗癌剤投与をおこなうことなく、腫瘍細胞を合理的かつ速やかに消失させようとするもので、特に血管塞栓術を主体としたＩＶＲ治療と併用することによって、抗癌剤投与をおこなわずに効率的な腫瘍の治療を可能としたものである。
【０００７】
具体的には、本願の発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に関する。また本願の発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に関する。さらに本願の発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とし、さらにスフェレックスを含有させてなるＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、高濃度のビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２による細胞増殖阻害剤、あるいはより低濃度で心臓などへの影響が小さい細胞増殖阻害活性を有するビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２誘導体を主成分とした治療剤を、血管内局所治療法であるＩＶＲ血管塞栓療用として投与することにより、その抗腫瘍効果をより一層高めることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下において本発明の具体的な内容について説明をすると、本発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２、あるいはビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤、あるいはビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とし、さらにスフェレックスを含有させてなるＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に要旨が存する。
【００１０】
なお以下の実施例においては望ましい実施例として、ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２、あるいはそれらの誘導体による細胞増殖阻害剤を主成分とするＩＶＲ治療（血管塞栓術）用悪性腫瘍の治療剤について説明をしている。
【００１１】
細胞増殖阻害剤およびアポトーシス誘導剤、ならびにＩＶＲ治療についての具体的な内容を説明すると、次の通りである。
【００１２】
〔細胞増殖阻害剤、アポトーシス誘導剤〕
本発明において用いられる細胞増殖阻害剤としては、固形腫瘍細胞に対して細胞増殖阻害活性を有する製剤である。 この場合、癌細胞を殺傷するのではなく、癌細胞の増殖を阻害できれば良い。 細胞増殖阻害剤としては、ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２があげられる。
【００１３】
ビスフォスフォネート及びビタミンＫ２は一般的には骨粗鬆症の治療薬として知られる。 ビスフォスフォネートはインビボにおける効果については全く知られていない。 またビタミンＫ２は、癌細胞の増殖阻害効果やアポトーシスの誘導や抑制効果の点で近時注目に値する。 一般的にいかなる物質も動物実験やインビトロ試験において抗腫瘍効果が知られていたとしても実際の臨床において必ずしも抗腫瘍効果が求められるとは限らない。
【００１４】
これは、動物実験は、純化された特定の遺伝子のみしかもたない動物を使用するのに対して、臨床適用されるヒトは、多種多様の遺伝子を持っているためである。 また、インビトロの試験系は特定の細胞あるいは酵素系だけを体外に取り出して試験を行うのに対して体内には種々の細胞や代謝経路などが存在するために、インビトロでの効果があっても臨床において必ずしも効果があるとは限らず、その効果の有無を推測することも困難である。
【００１５】
そのため、動物実験やインビトロ試験において抗腫瘍効果を有する化合物が臨床において抗腫瘍効果を有するとは限らない。現在、薬剤は最終的にヒトへの臨床投与を行うことにより効果を確かめている段階である。 ビスフォスフォネートについて、ｉｎ ｖｉｖｏ特に血管塞栓術においての単独あるいはこれら薬剤の併用による治療で悪性腫瘍が退縮したとする報告はない。
【００１６】
ビスフォスフォネートには、アレンドロネート、イパンドロネート、イカンドロネート、エチドロネート、オルパドロネート、クロドロネート、ゾレドロネート、チルドロネード、ネリドロネート、パミドロネート、リセドロネートなどが知られている。 腫瘍にアポトーシスを誘導できるものであれば、いずれのビスフォスフォネートでも使用できる。
【００１７】
本発明においては、アレンドロネート、パミドロネートを使用しており、１ｍｇ／投与から３００ｍｇ／投与の範囲で使用できるが、好ましくは、１５ｍｇ／投与から６０ｍｇ／投与の範囲で使用できる。 またビタミンＫ２は一般名「メナテトレノン」とも呼ばれ、化学名は「メナキノン」である。 市販品としてはＳＵＮＴＯＲＹほかが発売し、またエーザイのｇｌａｋａｙ（商品名）などがある。 メナキノンは１〜１４までの１４種類が存在する。
【００１８】
またビタミンＫは、元来は血液凝固に必要な因子として発見された脂溶性のビタミンでありＫ１（フィロキノン）とＫ２（メナキノン）の２種類が存在し、一般的にはカルシウムを骨に付着させる接着剤のような役割を果たすことで知られる。 食品中でビタミンＫ２「メナキノン」が含まれるのは唯一納豆であり、納豆に含まれるビタミンＫ２はメナキノン−７である。 またこれら以外のものであっても、腫瘍にアポトーシスを誘導できるものであれば、いずれのビタミンＫ２誘導体でも使用できる。
【００１９】
ビタミンＫ２は、１ｍｇ／投与から３００ｍｇ／投与の範囲で使用できるが、好ましくは、３０ｍｇ／投与から１２０ｍｇ／投与の範囲で使用できる。 また薬剤の投与は、動脈内投与が推奨される。 ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２は、これら化合物の基本骨格に対して、メチル基、エチル基、フェニル基、クロル基などの種々の官能基を導入することにより合成することができる。 これら誘導体は、共通の基本骨格を有することからビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２と同様の抗腫瘍活性を有する。 また、その毒性がより減弱されたものを合成することができる。
【００２０】
またアポトーシス誘導製剤としては固形腫瘍細胞に対してアポトーシス誘導効果を与えることができる製剤である。 アポトーシスは、腫瘍細胞の壊死や他殺死など細胞の受動的な死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）とは異なり、生理的および病理的諸要因により、不要となった細胞や損傷細胞などを積極的に排除するための、いわば自殺過程を意味するもので、寧ろ自殺死であるといえる。 アポトーシスは形態的にもネクローシスと異なるばかりでなく、その発現は遺伝子にプログラムされ、ホメオスタチスなど多岐にわたる生命現象に重要な役割を果たしているといわれる。
【００２１】
アポトーシス誘導製剤の具体例としては、例えば特開平１０−２７９５７４号や特開２００１−２２６２８３号公報、あるいは特開２００２−３５６４２８号公報などにあらわされたアポトーシス誘導剤、その他土中に含まれる放線菌から見出されたものでＣａｓｐａｓｅやリン酸化酵素などを活性化して癌細胞にアポトーシスを誘導することが可能なサイトトリエニン（Ｃｙｔｏｔｒｉｅｎｉｎｎ）や、低分子の乳酸重合体で天然型の乳酸オリゴマー構造をもつ「ＣＰＬ」（環状重合乳酸）、エトポシド（ＶＰ−１６）、三酸化二ヒ素、キナーゼカスケードなどがある。
【００２２】
上記したアポトーシス誘導製剤のほかに、同じアポトーシス誘導製剤の仲間としてビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２がある。 これらは前記した細胞増殖阻害剤として取り上げたものであるが、在来型のアポトーシス誘導製剤よりもアポトーシス作用が格段に大きく、とくにＩＶＲ治療に際してこれを併用することによって極めて画期的な腫瘍の治療効果を発揮することができる。
【００２３】
〔ＩＶＲ治療〕
鼠径部をキシロカインなどで局所麻酔を行い、穿刺針を大腿動脈内に穿刺し、動脈に添って癌の近傍の動脈までカテーテルを挿入し、抗腫瘍活性を有する薬剤、イオン性造影剤、ゼラチンスポンジを注入し血管塞栓が実施される。
【００２４】
血管の塞栓は、ゼラチンスポンジの量などによって調節する事ができき、数分から数十分間行う。血管塞栓術の時間は、好ましくは５分間から４０分間程度であるが、さらに好ましくは１０分間から２０分間程度の時間がよい。 カテーテルは、大腿動脈からだけでなく腕の動脈などから挿入することが可能であり、カテーテルの導入部位は特に限定されない。
【００２５】
なお、本発明が適応される癌の種類としては、肝臓癌、すい臓癌、胆のう癌、胆道癌、肺癌、脳腫瘍、大腸癌、胃癌などが挙げられる。 また癌の種類は限定されないが、とくに血管が多数通っている癌に対して有効である。 転移性の癌や肉腫などにも適応可能である。
【００２６】
なお本発明の上記実施例では固形腫瘍の治療方法としてビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２、あるいはそれらの誘導体による細胞増殖阻害剤を主成分とした治療剤をＩＶＲ血管内局所投与用として悪性腫瘍の治療に用いる場合について説明しているが、細胞増殖阻害剤のほかに免疫賦活剤を併用投与することにより、より大きな抗癌作用を発揮することができる。
【実施例１】
【００２７】
［患者］
転移性肝臓癌患者 ８４歳 女性
第１回目治療 平成１２年１０月２７日
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、肝臓右葉Ｓ８に腫瘍の存在を確認した。
【００２８】
次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の質的診断と腫瘍血管の多寡を判断した。 パミドロネート（商品名；アレディア、日本化薬社製）６０ｍｇ／２Ｖを２０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水１４ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２（商品名；ケーフィー、小林化工社製）６０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で６ｍｌとって同薬杯に注入した。
【００２９】
さらにスフェレックス（ヤクルト社製）６００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で１０ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、イオキサグル酸（商品名；ヘキサブリックス、田辺製薬社製）３０ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓右葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を１０ｍｌ／分の速度で全量注入した。 最後にゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その２分の１量にて肝動脈右葉枝の塞栓を施行した。
【００３０】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年１１月２７日）
肝臓：右葉全域を占める腫瘍は横径１０ｃｍでやや縮小し、内部のｇａｓは残存。 造影剤の残留はない。 Ｄｙｎａｍｉｃ Ｓｔｕｄｙにて腫瘍の横隔膜側Ｓ７に早期相より辺縁が不均一にエンハンスされ、後期相まで持続するａｌｉｖｅ ｔｕｍｏｒを認める。 腫瘍内部にも一部Ａｌｉｖｅ ｔｕｍｏｒ有り。 癌細胞９５％壊死。 右側胸水の貯溜も消失。 診断：転移性肝癌ＴＡＥ後１ヶ月ｆｏｌｌｏｗ。 ９５％Ｎｅｃｒｏｓｉｓ。 ＰＲ（Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）部分寛解・有効。
【００３１】
第２回目治療（平成１２年１２月２２日）
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、腫瘍の存在を確認した。 次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の残存域診断と腫瘍血管の多寡を判断した。 下横隔膜動脈からもＣＴ下動脈造影を行い、肝右葉の腫瘍への側副血行路からの栄養血管の供給を確認した。
【００３２】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを５ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを肝臓右葉の腫瘍の一部への栄養血管である下横隔膜動脈の末梢にまで挿入し、そこよりパミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ １５ｍｇとスフェレックス１５０ｍｇ相当量の混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。
【００３３】
さらにゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その２０分の１量にて下横隔膜動脈末梢の塞栓を施行した。 続いて、カテーテルを腫瘍存在部位である肝右葉枝の栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で残りの全量を注入した。 最後に１ｍｍ角に裁断した２．５×４ｃｍのゼラチンスポンジを、その８分の１量を投与し肝動脈右葉枝の塞栓を施行した。
【００３４】
第２回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年１月２２日）
肝臓右葉のＳＯＬはｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ化を見る。 造影にて異常な染まり（腫瘍濃染）は認めない。 周囲肝実質の萎縮なし。 胸水・腹水の貯溜を認めない。 診断：転移性肝癌追加ＴＡＥ後１か月ｆｏｌｌｏｗ。 現時点でＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）完全寛解・著効 すべての病変の１００％縮小（消失）が４週間以上持続。
【００３５】
腫瘍マーカーの経時的変化 ＣＥＡ（ｎｇ／ｍｌ）
平成１２年１０月２５日 ４９３．７
平成１２年１１月２７日 １１９．８
平成１２年１２月２１日 ５４．９
平成１３年 １月２２日 ９．２
平成１３年 ２月２１日 ４．６
平成１３年 ３月１９日 ３．８
平成１３年 ４月２３日 ６．３
平成１３年 ５月２１日 ５．４
平成１３年 ６月２５日 ７．８
平成１３年 ８月 １日 ７．８
平成１３年 ８月３１日 ９．４
平成１３年１０月２９日 １９．６
【００３６】
認定：１回目の血管内治療により癌の退縮が認められ、２回目の血管内治療により転移性肝臓癌の消失が認められた。 また、癌マーカーであるＣＥＡも１回目の血管内治療により明瞭に低下した。 このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、転移性肝臓癌を退縮させる大きな効果があることを明らかとした。
【実施例２】
【００３７】
［患者］
肝細胞癌患者 ６１歳 女性
第１回目治療 平成１３年３月１３日
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、肝臓右葉Ｓ５および左葉Ｓ２に腫瘍の存在を確認した。 次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の質的診断と腫瘍血管の多寡を判断した。
【００３８】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記二剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス１２ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓左葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で全量注入した。
【００３９】
ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記二剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス８ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓右葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で全量注入した。 最後にゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その８分の１量にて肝動脈右葉枝の塞栓を、さらに８分の１量にて肝動脈左葉枝の塞栓を施行した。
【００４０】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年４月１１日）
肝臓Ｓ２の前回のＣＴＡＰにて径４３×３０ｍｍであった腫瘍は径２．５ｃｍまで縮小し、早期相での濃染はみとめず中心のＬＤＡは最後まで濃染を受けない。 癌細胞は完全壊死と思われる。
Ｓ６の前回のＣＴＡＰにて径２１ｍｍであった腫瘍は径１．５ｃｍまで縮小し、これも早期相での濃染はみとめない。 門脈は求肝性で閉塞・途絶を認めないが、一部は遠肝性で側副血行路として胃静脈、食道静脈瘤を認める。 診断：肝細胞癌。ＴＡＥ後１ヶ月 ほぼＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である。
【００４１】
第２回目治療 平成１３年４月１７日
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、腫瘍の存在を確認した。次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の残存域診断と腫瘍血管の多寡を判断した。 Ｓ２の枝は細くなっているが、その末梢に細い屈曲蛇行する腫瘍血管と腫瘍のごく一部の濃染を認めた。 Ｓ６の枝は完全閉塞でみとめられず、Ｓ５の枝よりリング状の腫瘍濃染を認め、側副血行路からの栄養血管の供給を確認した。
【００４２】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを５ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを右肝動脈にまで挿入し、そこよりパミドロネート２０ｍｇ、ビタミンＫ２ ２０ｍｇとスフェレックス２００ｍｇ相当量の混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。
【００４３】
さらにゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その２０分の１量にて塞栓を施行した。 続いて、カテーテルを肝左葉枝まで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で残りの全量を注入した。 最後に１ｍｍ角に裁断した２．５×４ｃｍのゼラチンスポンジを、その２０分の１量を投与し左肝動脈の塞栓を施行した。
【００４４】
第２回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年５月１７日）
肝臓Ｓ２の前回のＣＴＡＰにて径４３×３０ｍｍであった腫瘍はさらに径１．７ｃｍまで縮小し、早期相での濃染はみとめず中心のＬＤＡは最後まで濃染を受けない。 癌細胞は完全壊死と思われる。 Ｓ６の前回のＣＴＡＰにて径２１ｍｍであった腫瘍も同様にさらに径０．７ｃｍまで縮小し、これも早期相での濃染はみとめない。 門脈は求肝性で閉塞・途絶を認めないが、一部は遠肝性で側副血行路として胃静脈、食道静脈瘤を認める。 診断：肝細胞癌。 初回ＴＡＥ後２ヶ月 ２回目ＴＡＥ後 １ヶ月 ＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である。
【００４５】
腫瘍マーカーの経時的変化 ＡＦＰ（ｎｇ／ｍｌ）
平成１３年 ３月１２日 ２４７５．３８
平成１３年 ３月２０日 ８０９．３
平成１３年 ４月１１日 １１４．７８
平成１３年 ５月 １日 ２６．７２
平成１３年 ５月１７日 ８．９
平成１３年 ６月１１日 ６．４２
平成１３年 ７月１４日 ５．９３
平成１３年 ９月１４日 ８．５４
平成１３年１０月１７日 １３．０２
【００４６】
認定：１回目および２回目の血管内治療により肝細胞癌の退縮が認められ、癌はほぼ消失している。 また、癌マーカーであるＡＦＰも血管内治療により明瞭に低下した。 このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、肝細胞癌を退縮させる効果があることを明らかとした。
【実施例３】
【００４７】
《ＩＶＲ治療と活性化リンパ球療法の併用例》
［患者］
胃癌患者 ７３歳 女性
第１回目血管内治療 平成１４年１０月３１日
実施例１、２と同じくセルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを腹腔動脈に挿入し造影を行い、胃体部から前庭部にかけて腫瘍の存在を確認し、その質的診断と腫瘍血管の多寡の判断を行った。 パミドロネート６０ｍｇ／２Ｖを２０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水１４ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ １２０ｍｇを２０ｍｌの注射筒で１２ｍｌとって同薬杯に注入した。
【００４８】
さらにスフェレックス１２００ｍｇを２０ｍｌの注射筒で２０ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのちこれにイオン性造影剤、ヘキサブリックスを３０ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である胃大網動脈まで挿入し、パミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ ３０ｍｇとスフェレックス３００ｍｇ相当量の同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。 １ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。
【００４９】
続いて右胃動脈までカテーテルを挿入し、同混和薬剤の１２分の１量を１ｍｌ／分の速度で注入した。 さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。 最後に左胃動脈にカテーテルを挿入し、パミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ ３０ｍｇとスフェレックス３００ｍｇ相当量の同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。
【００５０】
第１回血管内治療後および活性化リンパ球治療前のＣＴ所見
（平成１４年１１月２６日）：
胃の癌病巣部の厚みが手術前と比較して、約半分の厚さに減少、また広がりも減少し、腫瘍量が２分の１以下になっている。所属リンパ節の腫大も軽減している。 腹壁への直接浸潤部もすこし隙間があき出している。
【００５１】
『活性化リンパ球の投与』
《１》リンパ球の分離
平成１４年１１月６日、癌患者の静脈から末梢血５０ｍｌをヘパリン加採血した。 採血後、これをクリーンベンチ内で無菌的に上記により採血した注射筒の注射針を、接合部近くを触らないようにはずし１９Ｇ×１ １／２注射針につけ替えた。 別に５０ｍｌ遠沈管２本に、洗浄用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋６）５００ｍｌを１５ｍｌずつ注ぎ込んだ遠沈管内に、上記により採血した血液全てを２本共に等量になるようにゆっくりと注いだ。 遠沈管の蓋を完全に閉めた後、２〜３回転倒混和した。
【００５２】
これを１０ｍｌピペットでリンホセパールＩを１５ｍｌ遠沈管６本に各３ｍｌずつ入れ、さらに培地で希釈した血液１０ｍｌをそれぞれの遠沈管に、液面を乱さないようにゆっくり重層した。 その後、これを遠心分離機を用いて回転数１，８００ｒｐｍ、遠心分離温度２０℃、ブレーキをＯＦＦの状態で１５分間遠心した。 遠心後、吸引機により無菌的に遠沈管内のリンパ球層の約１ｃｍ上までリンパ球細胞を吸い取らないようにゆっくり吸い取った。
【００５３】
さらに５ｍｌピペットマンで血餅の層を吸い取らないようにリンパ球細胞の層をとり、これをあらかじめ、洗浄用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋６）を２５ｍｌ入れておいた５０ｍｌ遠沈管内に回収した。 遠沈管の蓋を閉め２〜３回転倒混和した後、さらに遠心分離機により、回転数１，８００ｒｐｍ、遠心分離温度２０℃の状態で１０分間遠心した。 遠心後、上清みを捨て、細胞沈渣をボルテックスにかけて良くほぐした。
【００５４】
さらにこれを、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋７）４４ｍｌに、３５，０００Ｕ／ｍｌ ＩＬ（インターロイキン）−２ １ｍｌと、ヒト血清５ｍｌを含む培養用培地（以下、単に「培養用培地」と略す）５０ｍｌに入れ、良く転倒混和して細胞懸濁液を調製した。 この細胞懸濁液１０μｌをチューブにとり、これを４０μｌのチュルク液と混合し、血球計算版に１０μｌアプライし、顕微鏡下で細胞数を測定した結果、総細胞数は７．６×１０７個だった。
【００５５】
《２》ＯＫＴ３固相化フラスコの調製
ＰＢＳ（−）で５μｇ／ｍｌに調製しておいたＯＫＴ３溶液を、底面積２２５ｃｍ２の培養用フラスコに１０ｍｌ入れ、底面に溶液を均一になるよう浸した。 翌日、フラスコのＯＫＴ３溶液を吸引機で吸い取り、ＰＢＳ（−）５０ｍｌをフラスコに注ぎ込みフラスコの蓋を閉めて激しく振った後、蓋を開け、液を捨てた。 再度、無菌的にＰＢＳ（−）５０ｍｌをフラスコに注ぎ込みフラスコの蓋を閉めて激しく振った後、蓋を開け、液を捨てた。 フラスコ内と蓋に残っている液を吸引機で丁寧に吸い取り、ＯＫＴ３固相化フラスコの調製を行った。
【００５６】
《３》リンパ球の活性化培養
前記《１》において調製した細胞懸濁液５０ｍｌを、《２》で調整したＯＫＴ３固相化フラスコに分注し、３７℃、５％濃度の炭酸ガス存在下において培養を開始した。 ３日後に培養用培地５０ｍｌを加え、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続した。 さらに４日後、培養用培地１５０ｍｌを加え、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続した。
【００５７】
さらに２日間、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続することにより活性化リンパ球を得、このうちの一部の細胞を凍結保存液に懸濁し、３本のチューブにて液体窒素下、凍結保存した（３．６×１０７個／チューブ）。 また残りの細胞を以下のように拡大培養した。
【００５８】
《４》リンパ球の拡大培養（１回目）
上記《３》で調整したリンパ球をＬＬ−７培地、あるいはＭｅｄｉｕｍ９３０ ７５０ｍｌを含むガス透過性培養バッグに移し、炭酸ガスインキュベーター中で３７℃、５％炭酸ガス下で培養をおこなった。 ３日後、細胞を含むガス透過性培養バッグと新たな培地を含むガス透過性培養バッグを無菌接合装置により連結し、両ガス透過性培養バッグ中の培地を良く混合した後、これを２分割し、再度その結合を切除し、接合部分を無菌的にシールした後、３７℃、５％炭酸ガス下で培養を継続した。
【００５９】
《５》投与製剤の調整
上記《４》で調製した２バッグのうち１バッグ中の細胞を含む培地を２５０ｍｌ遠心管内に移し、これを遠心分離機による遠心により細胞の分離をおこなった。 デカンテーションにより培養液を除去し、細胞ペレットに０．１％のヒトアルブミンを含む生理食塩水を加えて遠心分離することにより洗浄操作をおこなって細胞ペレットを調整した。 さらに上記細胞ペレットに１％のヒトアルブミンを含む生理食塩水２００ｍｌを加えて懸濁し、これを１００μのステンレス金網にて濾過後、輸血用のバッグに詰めて投与用製剤とした。 なおこの場合の輸血用バッグに含まれる細胞数は、９．２×１０９個であった。本リンパ球は、平成１４年１１月２６日に患者の静脈より注入投与した。
【００６０】
《６》凍結保存細胞からの調整
前記《３》で調製した凍結細胞を３７℃で融解させるとともに、これを培養液で３回洗浄した。 本細胞を使用して《３》、《４》、《５》に示されると同様な方法で投与製剤リンパ球製剤を調整し、４．４×１０９個の活性化リンパ球を調製した。本リンパ球は、平成１４年１２月１０日に患者の静脈より注入投与した。 上記と同様にして凍結細胞を融解し、６．７×１０９個の活性化リンパ球を調製した。本リンパ球は、平成１４年１２月２４日に患者の静脈より注入投与した。 上記と同様にして凍結細胞を融解し、３．７×１０９個の活性化リンパ球を調製し、これを平成１５年１月７日に患者の静脈より注入投与した。
【００６１】
〔活性化リンパ球療法のスケジュール〕
採血 平成１４年１１月８日
投与 １回目（０２／１１／２６）−８回目（０３／４／１）
活性化リンパ球治療 １クール目
平成１４年１１月 ８日 培養用血液採取 ５０ｍｌの注射筒で５０ｍｌ採血
平成１４年１１月２６日 第１回目活性化リンパ球投与
平成１４年１２月１０日 第２回目活性化リンパ球投与
平成１４年１２月２４日 第３回目活性化リンパ球投与
平成１５年 １月 ７日 第４回目活性化リンパ球投与
【００６２】
認定：第１回目ＩＶＲ治療の後に活性化リンパ球治療を行うことにより腫瘍量の減少を認めた（平成１５年１月２３日）。 このことにより、本発明の血管塞栓療法と活性化リンパ球治療を併用することにより腫瘍の治療に大きな相乗効果があることを明らかとした。
【００６３】
第２回目治療 平成１５年１月２３日
第１回目治療と同じくセルディンガー法にてカテーテルを挿入、胃体部から前庭部にかけて腫瘍の存在を確認した。腫瘍量の減少を認めたが、腫瘍血管は多く残存していた。パミドロネート６０ｍｇ／２Ｖを２０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水１４ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 さらにビタミンＫ２ １２０ｍｇを２０ｍｌの注射筒で１２ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス６００ｍｇを２０ｍｌの注射筒で１０ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、これにイオン性造影剤、ヘキサブリックス３０ｍｌを混和した。
【００６４】
カテーテルを腫瘍存在部位である胃大網動脈まで挿入するとともに、さらに腫瘍への栄養血管を供給している分枝に選択的に挿入し、そこよりパミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ ３０ｍｇとスフェレックス１５０ｍｇ相当量の同混和薬剤を３ｍｌ／分の速度で注入した。 そして１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。 最後に左胃動脈にカテーテルを挿入し、これを介してパミドロネート４０ｍｇ、ビタミンＫ２ ８０ｍｇとスフェレックス４００ｍｇ相当量の同混和薬剤を３ｍｌ／分の速度で注入した。 さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。
【００６５】
上記と同様にして調製した活性化リンパ球を以下のようなスケジュールで投与を行った。 なおリンパ球の調製は、実施例１と同様にして調製しておこなった
平成１５年 １月３１日 培養用血液採取 ５０ｍｌの注射筒で５０ｍｌ採血
平成１５年 ２月１８日 第１回目活性化リンパ球投与
平成１５年 ３月 ４日 第２回目活性化リンパ球投与
平成１５年 ３月１８日 第３回目活性化リンパ球投与
平成１５年 ４月 １日 第４回目活性化リンパ球投与
【００６６】
上記スケジュールのように、
平成１５年 ２月１８日 ４．３×１０９個
平成１５年 ３月 ４日 ４．６×１０９個
平成１５年 ３月１８日 ２．５×１０９個
平成１５年 ４月 １日 ５．０×１０９個
上記のようにそれぞれ活性化リンパ球を患者の静脈より注入投与した。
【００６７】
第２回ＩＶＲ治療後および活性化リンパ球治療中のＣＴ所見（平成１５年２月２５日）：
胃癌部の壁肥厚は第２回ＩＶＲ血管内治療時の厚みよりもさらに軽減している。 胃体下部前壁のＰｏｌｙｐ状の隆起も直径１．５ｃｍにまで縮小している。 また所属リンパ節も縮小し、直径１．２ｃｍとなっている。 現時点でＰＲ（Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である。
【００６８】
認定：１回目および２回目のＩＶＲ血管内治療により胃がんの縮小が認められ、特に活性化リンパ球治療を併用することによりがんの退縮効果が確実に増強されることを明らかとした。
【実施例４】
【００６９】
［患者］
肺癌患者 ９４歳 男性
第１回目ＩＶＲ治療 平成１２年８月２８日
実施例１〜３と同様にセルディンガー法にて患者の静脈にカテーテルを挿入し、動脈造影を行った。 肺癌は左気管支動脈の血管により栄養され、屈曲蛇行する腫瘍血管を認め、腫瘍の下半分が濃染されていた。 左鎖骨下動脈の造影にて内胸動脈、胸肩峰動脈のいずれからも栄養血管は認めなかった。
【００７０】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 さらにビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入し、上記三剤を混合したのち、これにイオン性造影剤ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを栄養血管である左気管支動脈にまで挿入し、そこよりパミドロネート２０ｍｇ、ビタミンＫ２ ２０ｍｇとスフェレックス２００ｍｇ相当量の同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入し、さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与して塞栓を施行した。
【００７１】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年９月２９日）：
左肺上葉の腫瘍は横径でＴＡＥ前８．５ｃｍからＴＡＥ後１ヶ月で７．０ｃｍにまで縮小している。 また内部は空洞化している。 診断：Ｌｕｎｇ ＣａｎｃｅｒのＴＡＥ後（治療効果ＰＲ以上）再ＴＡＥを要す。
【００７２】
第２回目治療 平成１２年１０月１６日
第１回目治療と同じく、肺癌は左気管支動脈の血管により栄養され、腫瘍の下半分が濃染された。 パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍ１とって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを５ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。上記三剤を混合したのちイオン性造影剤、ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを左気管支動脈にまで挿入し、そこより同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で全量を注入するとともに、さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与して塞栓を施行した。
【００７３】
第２回ＩＶＲ血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年１０月３０日）：
左肺上葉の腫瘍は横径で、ＴＡＥ前８．５ｃｍ→ＴＡＥ後１ヶ月７．０ｃｍ→ＴＡＥ後２ヶ月（再ＴＡＥ後１ヶ月）→７．５ｃｍと逐次変化している。 肺尖よりの部分と胸膜よりの部分は縮小しているが、肺門側がやや増大している。 内部の空洞化も大きな変化はない。 肺門よりのＴＡＥの効果は不十分で別の血流が関与している可能性が大きい。 しかしＩＶＲ血管内治療によりがんの退縮が認められた。 このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、肺がんを退縮させる効果があることが明らかとなった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管内局所投与が可能な悪性腫瘍の治療剤に関し、特に固形癌を中心としたＩＶＲ血管塞栓術を主体とした固形腫瘍の低侵襲治療との併用に際し、正常細胞を損傷する抗癌剤投与をおこなわずに腫瘍細胞を合理的かつ速やかに消失させる画期的な治療剤を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
身体への負担をできるだけ軽くし、生体が持つ免疫能力を手術ほど低下させることなく、しかも手術をした時と同程度の治療効果をあげようとする治療法（低侵襲治療）のひとつの新しい医学分野としてインターベンショナル・ラジオロジー（Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ；以下単に「ＩＶＲ」と略す）治療がある。 これは放射線診断学の技術を病気治療に転用したもので、その代表例が血管塞栓術であり、正常部位に比して血流が多い悪性腫瘍に対して、血管造影の技術を使って動脈血流の遮断（阻血）を行ない腫瘍の虚血を引き起こす手法である。
【０００３】
固形腫瘍に対する血管塞栓術は、とくに腫瘍への血流が多い多血性腫瘍が塞栓による阻血に弱く良い適応となる。 一般的にはこの血管塞栓術を血管内治療といい、その多くは抗癌剤を併用し、抗癌剤と塞栓物質を同時に動脈内に投与することによって、腫瘍内に停滞した抗癌剤の徐放効果と動脈血流遮断による腫瘍の虚血とを相乗的に作用させている。
【０００４】
【特許文献１】特開平３−８００７６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来の固形悪性腫瘍治療に使用される薬剤は、５−ＦＵ誘導体などの核酸アナログやシスプラチンやマイトマイシンと言った薬剤が使用されるが、これらは癌細胞だけを殺傷するのではなく正常細胞に対しても悪影響を与えることから重篤な副作用をもたらすことが知られている。 またこれまでの血管内治療では抗癌剤を併用するために、周囲の組織にも大きなダメージを与えることが多い。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
そこで本発明は、正常細胞を損傷するような危険な抗癌剤投与をおこなうことなく、腫瘍細胞を合理的かつ速やかに消失させようとするもので、特に血管塞栓術を主体としたＩＶＲ治療と併用することによって、抗癌剤投与をおこなわずに効率的な腫瘍の治療を可能としたものである。
【０００７】
具体的には、本願の発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に関する。また本願の発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に関する。さらに本願の発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とし、さらにスフェレックスを含有させてなるＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に関する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、高濃度のビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２による細胞増殖阻害剤、あるいはより低濃度で心臓などへの影響が小さい細胞増殖阻害活性を有するビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２誘導体を主成分とした治療剤を、血管内局所治療法であるＩＶＲ血管塞栓療用として投与することにより、その抗腫瘍効果をより一層高めることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下において本発明の具体的な内容について説明をすると、本発明はビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２、あるいはビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤、あるいはビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とし、さらにスフェレックスを含有させてなるＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤に要旨が存する。
【００１０】
なお以下の実施例においては望ましい実施例として、ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２、あるいはそれらの誘導体による細胞増殖阻害剤を主成分とするＩＶＲ治療（血管塞栓術）用悪性腫瘍の治療剤について説明をしている。
【００１１】
細胞増殖阻害剤およびアポトーシス誘導剤、ならびにＩＶＲ治療についての具体的な内容を説明すると、次の通りである。
【００１２】
〔細胞増殖阻害剤、アポトーシス誘導剤〕
本発明において用いられる細胞増殖阻害剤としては、固形腫瘍細胞に対して細胞増殖阻害活性を有する製剤である。 この場合、癌細胞を殺傷するのではなく、癌細胞の増殖を阻害できれば良い。 細胞増殖阻害剤としては、ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２があげられる。
【００１３】
ビスフォスフォネート及びビタミンＫ２は一般的には骨粗鬆症の治療薬として知られる。 ビスフォスフォネートはインビボにおける効果については全く知られていない。 またビタミンＫ２は、癌細胞の増殖阻害効果やアポトーシスの誘導や抑制効果の点で近時注目に値する。 一般的にいかなる物質も動物実験やインビトロ試験において抗腫瘍効果が知られていたとしても実際の臨床において必ずしも抗腫瘍効果が求められるとは限らない。
【００１４】
これは、動物実験は、純化された特定の遺伝子のみしかもたない動物を使用するのに対して、臨床適用されるヒトは、多種多様の遺伝子を持っているためである。 また、インビトロの試験系は特定の細胞あるいは酵素系だけを体外に取り出して試験を行うのに対して体内には種々の細胞や代謝経路などが存在するために、インビトロでの効果があっても臨床において必ずしも効果があるとは限らず、その効果の有無を推測することも困難である。
【００１５】
そのため、動物実験やインビトロ試験において抗腫瘍効果を有する化合物が臨床において抗腫瘍効果を有するとは限らない。現在、薬剤は最終的にヒトへの臨床投与を行うことにより効果を確かめている段階である。 ビスフォスフォネートについて、ｉｎ ｖｉｖｏ特に血管塞栓術においての単独あるいはこれら薬剤の併用による治療で悪性腫瘍が退縮したとする報告はない。
【００１６】
ビスフォスフォネートには、アレンドロネート、イパンドロネート、イカンドロネート、エチドロネート、オルパドロネート、クロドロネート、ゾレドロネート、チルドロネード、ネリドロネート、パミドロネート、リセドロネートなどが知られている。 腫瘍にアポトーシスを誘導できるものであれば、いずれのビスフォスフォネートでも使用できる。
【００１７】
本発明においては、アレンドロネート、パミドロネートを使用しており、１ｍｇ／投与から３００ｍｇ／投与の範囲で使用できるが、好ましくは、１５ｍｇ／投与から６０ｍｇ／投与の範囲で使用できる。 またビタミンＫ２は一般名「メナテトレノン」とも呼ばれ、化学名は「メナキノン」である。 市販品としてはＳＵＮＴＯＲＹほかが発売し、またエーザイのｇｌａｋａｙ（商品名）などがある。 メナキノンは１〜１４までの１４種類が存在する。
【００１８】
またビタミンＫは、元来は血液凝固に必要な因子として発見された脂溶性のビタミンでありＫ１（フィロキノン）とＫ２（メナキノン）の２種類が存在し、一般的にはカルシウムを骨に付着させる接着剤のような役割を果たすことで知られる。 食品中でビタミンＫ２「メナキノン」が含まれるのは唯一納豆であり、納豆に含まれるビタミンＫ２はメナキノン−７である。 またこれら以外のものであっても、腫瘍にアポトーシスを誘導できるものであれば、いずれのビタミンＫ２誘導体でも使用できる。
【００１９】
ビタミンＫ２は、１ｍｇ／投与から３００ｍｇ／投与の範囲で使用できるが、好ましくは、３０ｍｇ／投与から１２０ｍｇ／投与の範囲で使用できる。 また薬剤の投与は、動脈内投与が推奨される。 ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２は、これら化合物の基本骨格に対して、メチル基、エチル基、フェニル基、クロル基などの種々の官能基を導入することにより合成することができる。 これら誘導体は、共通の基本骨格を有することからビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２と同様の抗腫瘍活性を有する。 また、その毒性がより減弱されたものを合成することができる。
【００２０】
またアポトーシス誘導製剤としては固形腫瘍細胞に対してアポトーシス誘導効果を与えることができる製剤である。 アポトーシスは、腫瘍細胞の壊死や他殺死など細胞の受動的な死（ｎｅｃｒｏｓｉｓ）とは異なり、生理的および病理的諸要因により、不要となった細胞や損傷細胞などを積極的に排除するための、いわば自殺過程を意味するもので、寧ろ自殺死であるといえる。 アポトーシスは形態的にもネクローシスと異なるばかりでなく、その発現は遺伝子にプログラムされ、ホメオスタチスなど多岐にわたる生命現象に重要な役割を果たしているといわれる。
【００２１】
アポトーシス誘導製剤の具体例としては、例えば特開平１０−２７９５７４号や特開２００１−２２６２８３号公報、あるいは特開２００２−３５６４２８号公報などにあらわされたアポトーシス誘導剤、その他土中に含まれる放線菌から見出されたものでＣａｓｐａｓｅやリン酸化酵素などを活性化して癌細胞にアポトーシスを誘導することが可能なサイトトリエニン（Ｃｙｔｏｔｒｉｅｎｉｎｎ）や、低分子の乳酸重合体で天然型の乳酸オリゴマー構造をもつ「ＣＰＬ」（環状重合乳酸）、エトポシド（ＶＰ−１６）、三酸化二ヒ素、キナーゼカスケードなどがある。
【００２２】
上記したアポトーシス誘導製剤のほかに、同じアポトーシス誘導製剤の仲間としてビスフォスフォネートあるいはビタミンＫ２がある。 これらは前記した細胞増殖阻害剤として取り上げたものであるが、在来型のアポトーシス誘導製剤よりもアポトーシス作用が格段に大きく、とくにＩＶＲ治療に際してこれを併用することによって極めて画期的な腫瘍の治療効果を発揮することができる。
【００２３】
〔ＩＶＲ治療〕
鼠径部をキシロカインなどで局所麻酔を行い、穿刺針を大腿動脈内に穿刺し、動脈に添って癌の近傍の動脈までカテーテルを挿入し、抗腫瘍活性を有する薬剤、イオン性造影剤、ゼラチンスポンジを注入し血管塞栓が実施される。
【００２４】
血管の塞栓は、ゼラチンスポンジの量などによって調節する事ができき、数分から数十分間行う。血管塞栓術の時間は、好ましくは５分間から４０分間程度であるが、さらに好ましくは１０分間から２０分間程度の時間がよい。 カテーテルは、大腿動脈からだけでなく腕の動脈などから挿入することが可能であり、カテーテルの導入部位は特に限定されない。
【００２５】
なお、本発明が適応される癌の種類としては、肝臓癌、すい臓癌、胆のう癌、胆道癌、肺癌、脳腫瘍、大腸癌、胃癌などが挙げられる。 また癌の種類は限定されないが、とくに血管が多数通っている癌に対して有効である。 転移性の癌や肉腫などにも適応可能である。
【００２６】
なお本発明の上記実施例では固形腫瘍の治療方法としてビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２、あるいはそれらの誘導体による細胞増殖阻害剤を主成分とした治療剤をＩＶＲ血管内局所投与用として悪性腫瘍の治療に用いる場合について説明しているが、細胞増殖阻害剤のほかに免疫賦活剤を併用投与することにより、より大きな抗癌作用を発揮することができる。
【実施例１】
【００２７】
［患者］
転移性肝臓癌患者 ８４歳 女性
第１回目治療 平成１２年１０月２７日
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、肝臓右葉Ｓ８に腫瘍の存在を確認した。
【００２８】
次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の質的診断と腫瘍血管の多寡を判断した。 パミドロネート（商品名；アレディア、日本化薬社製）６０ｍｇ／２Ｖを２０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水１４ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２（商品名；ケーフィー、小林化工社製）６０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で６ｍｌとって同薬杯に注入した。
【００２９】
さらにスフェレックス（ヤクルト社製）６００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で１０ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、イオキサグル酸（商品名；ヘキサブリックス、田辺製薬社製）３０ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓右葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を１０ｍｌ／分の速度で全量注入した。 最後にゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その２分の１量にて肝動脈右葉枝の塞栓を施行した。
【００３０】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年１１月２７日）
肝臓：右葉全域を占める腫瘍は横径１０ｃｍでやや縮小し、内部のｇａｓは残存。 造影剤の残留はない。 Ｄｙｎａｍｉｃ Ｓｔｕｄｙにて腫瘍の横隔膜側Ｓ７に早期相より辺縁が不均一にエンハンスされ、後期相まで持続するａｌｉｖｅ ｔｕｍｏｒを認める。 腫瘍内部にも一部Ａｌｉｖｅ ｔｕｍｏｒ有り。 癌細胞９５％壊死。 右側胸水の貯溜も消失。 診断：転移性肝癌ＴＡＥ後１ヶ月ｆｏｌｌｏｗ。 ９５％Ｎｅｃｒｏｓｉｓ。 ＰＲ（Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）部分寛解・有効。
【００３１】
第２回目治療（平成１２年１２月２２日）
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、腫瘍の存在を確認した。 次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の残存域診断と腫瘍血管の多寡を判断した。 下横隔膜動脈からもＣＴ下動脈造影を行い、肝右葉の腫瘍への側副血行路からの栄養血管の供給を確認した。
【００３２】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを５ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを肝臓右葉の腫瘍の一部への栄養血管である下横隔膜動脈の末梢にまで挿入し、そこよりパミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ １５ｍｇとスフェレックス１５０ｍｇ相当量の混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。
【００３３】
さらにゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その２０分の１量にて下横隔膜動脈末梢の塞栓を施行した。 続いて、カテーテルを腫瘍存在部位である肝右葉枝の栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で残りの全量を注入した。 最後に１ｍｍ角に裁断した２．５×４ｃｍのゼラチンスポンジを、その８分の１量を投与し肝動脈右葉枝の塞栓を施行した。
【００３４】
第２回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年１月２２日）
肝臓右葉のＳＯＬはｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙ化を見る。 造影にて異常な染まり（腫瘍濃染）は認めない。 周囲肝実質の萎縮なし。 胸水・腹水の貯溜を認めない。 診断：転移性肝癌追加ＴＡＥ後１か月ｆｏｌｌｏｗ。 現時点でＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）完全寛解・著効 すべての病変の１００％縮小（消失）が４週間以上持続。
【００３５】
腫瘍マーカーの経時的変化 ＣＥＡ（ｎｇ／ｍｌ）
平成１２年１０月２５日 ４９３．７
平成１２年１１月２７日 １１９．８
平成１２年１２月２１日 ５４．９
平成１３年 １月２２日 ９．２
平成１３年 ２月２１日 ４．６
平成１３年 ３月１９日 ３．８
平成１３年 ４月２３日 ６．３
平成１３年 ５月２１日 ５．４
平成１３年 ６月２５日 ７．８
平成１３年 ８月 １日 ７．８
平成１３年 ８月３１日 ９．４
平成１３年１０月２９日 １９．６
【００３６】
認定：１回目の血管内治療により癌の退縮が認められ、２回目の血管内治療により転移性肝臓癌の消失が認められた。 また、癌マーカーであるＣＥＡも１回目の血管内治療により明瞭に低下した。 このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、転移性肝臓癌を退縮させる大きな効果があることを明らかとした。
【実施例２】
【００３７】
［患者］
肝細胞癌患者 ６１歳 女性
第１回目治療 平成１３年３月１３日
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、肝臓右葉Ｓ５および左葉Ｓ２に腫瘍の存在を確認した。 次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の質的診断と腫瘍血管の多寡を判断した。
【００３８】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記二剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス１２ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓左葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で全量注入した。
【００３９】
ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記二剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス８ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である肝臓右葉への栄養血管にまで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で全量注入した。 最後にゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その８分の１量にて肝動脈右葉枝の塞栓を、さらに８分の１量にて肝動脈左葉枝の塞栓を施行した。
【００４０】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年４月１１日）
肝臓Ｓ２の前回のＣＴＡＰにて径４３×３０ｍｍであった腫瘍は径２．５ｃｍまで縮小し、早期相での濃染はみとめず中心のＬＤＡは最後まで濃染を受けない。 癌細胞は完全壊死と思われる。
Ｓ６の前回のＣＴＡＰにて径２１ｍｍであった腫瘍は径１．５ｃｍまで縮小し、これも早期相での濃染はみとめない。 門脈は求肝性で閉塞・途絶を認めないが、一部は遠肝性で側副血行路として胃静脈、食道静脈瘤を認める。 診断：肝細胞癌。ＴＡＥ後１ヶ月 ほぼＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である。
【００４１】
第２回目治療 平成１３年４月１７日
鼠径部をキシロカイン１０ｍｌにて局所麻酔を行い、穿刺針にて大腿動脈を穿刺し、セルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを上腸間膜動脈に挿入し、ＣＴ下動脈性門脈造影を行い、腫瘍の存在を確認した。次に、腹腔動脈を造影し、肝動脈の走行と分岐状態を観察し、共通肝動脈までカテーテルを挿入した。 そこでＣＴ下肝動脈造影を行い、腫瘍の残存域診断と腫瘍血管の多寡を判断した。 Ｓ２の枝は細くなっているが、その末梢に細い屈曲蛇行する腫瘍血管と腫瘍のごく一部の濃染を認めた。 Ｓ６の枝は完全閉塞でみとめられず、Ｓ５の枝よりリング状の腫瘍濃染を認め、側副血行路からの栄養血管の供給を確認した。
【００４２】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを５ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、イオン性造影剤、ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを右肝動脈にまで挿入し、そこよりパミドロネート２０ｍｇ、ビタミンＫ２ ２０ｍｇとスフェレックス２００ｍｇ相当量の混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。
【００４３】
さらにゼラチンスポンジ２．５×４ｃｍを１ｍｍ角に裁断し、その２０分の１量にて塞栓を施行した。 続いて、カテーテルを肝左葉枝まで挿入し、同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で残りの全量を注入した。 最後に１ｍｍ角に裁断した２．５×４ｃｍのゼラチンスポンジを、その２０分の１量を投与し左肝動脈の塞栓を施行した。
【００４４】
第２回血管内治療後のＣＴ所見（平成１３年５月１７日）
肝臓Ｓ２の前回のＣＴＡＰにて径４３×３０ｍｍであった腫瘍はさらに径１．７ｃｍまで縮小し、早期相での濃染はみとめず中心のＬＤＡは最後まで濃染を受けない。 癌細胞は完全壊死と思われる。 Ｓ６の前回のＣＴＡＰにて径２１ｍｍであった腫瘍も同様にさらに径０．７ｃｍまで縮小し、これも早期相での濃染はみとめない。 門脈は求肝性で閉塞・途絶を認めないが、一部は遠肝性で側副血行路として胃静脈、食道静脈瘤を認める。 診断：肝細胞癌。 初回ＴＡＥ後２ヶ月 ２回目ＴＡＥ後 １ヶ月 ＣＲ（Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である。
【００４５】
腫瘍マーカーの経時的変化 ＡＦＰ（ｎｇ／ｍｌ）
平成１３年 ３月１２日 ２４７５．３８
平成１３年 ３月２０日 ８０９．３
平成１３年 ４月１１日 １１４．７８
平成１３年 ５月 １日 ２６．７２
平成１３年 ５月１７日 ８．９
平成１３年 ６月１１日 ６．４２
平成１３年 ７月１４日 ５．９３
平成１３年 ９月１４日 ８．５４
平成１３年１０月１７日 １３．０２
【００４６】
認定：１回目および２回目の血管内治療により肝細胞癌の退縮が認められ、癌はほぼ消失している。 また、癌マーカーであるＡＦＰも血管内治療により明瞭に低下した。 このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、肝細胞癌を退縮させる効果があることを明らかとした。
【実施例３】
【００４７】
《ＩＶＲ治療と活性化リンパ球療法の併用例》
［患者］
胃癌患者 ７３歳 女性
第１回目血管内治療 平成１４年１０月３１日
実施例１、２と同じくセルディンガー法にてカテーテルを挿入した。 カテーテルを腹腔動脈に挿入し造影を行い、胃体部から前庭部にかけて腫瘍の存在を確認し、その質的診断と腫瘍血管の多寡の判断を行った。 パミドロネート６０ｍｇ／２Ｖを２０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水１４ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ １２０ｍｇを２０ｍｌの注射筒で１２ｍｌとって同薬杯に注入した。
【００４８】
さらにスフェレックス１２００ｍｇを２０ｍｌの注射筒で２０ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのちこれにイオン性造影剤、ヘキサブリックスを３０ｍｌを混和した。 カテーテルを腫瘍存在部位である胃大網動脈まで挿入し、パミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ ３０ｍｇとスフェレックス３００ｍｇ相当量の同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。 １ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。
【００４９】
続いて右胃動脈までカテーテルを挿入し、同混和薬剤の１２分の１量を１ｍｌ／分の速度で注入した。 さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。 最後に左胃動脈にカテーテルを挿入し、パミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ ３０ｍｇとスフェレックス３００ｍｇ相当量の同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入した。
【００５０】
第１回血管内治療後および活性化リンパ球治療前のＣＴ所見
（平成１４年１１月２６日）：
胃の癌病巣部の厚みが手術前と比較して、約半分の厚さに減少、また広がりも減少し、腫瘍量が２分の１以下になっている。所属リンパ節の腫大も軽減している。 腹壁への直接浸潤部もすこし隙間があき出している。
【００５１】
『活性化リンパ球の投与』
《１》リンパ球の分離
平成１４年１１月６日、癌患者の静脈から末梢血５０ｍｌをヘパリン加採血した。 採血後、これをクリーンベンチ内で無菌的に上記により採血した注射筒の注射針を、接合部近くを触らないようにはずし１９Ｇ×１ １／２注射針につけ替えた。 別に５０ｍｌ遠沈管２本に、洗浄用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋６）５００ｍｌを１５ｍｌずつ注ぎ込んだ遠沈管内に、上記により採血した血液全てを２本共に等量になるようにゆっくりと注いだ。 遠沈管の蓋を完全に閉めた後、２〜３回転倒混和した。
【００５２】
これを１０ｍｌピペットでリンホセパールＩを１５ｍｌ遠沈管６本に各３ｍｌずつ入れ、さらに培地で希釈した血液１０ｍｌをそれぞれの遠沈管に、液面を乱さないようにゆっくり重層した。 その後、これを遠心分離機を用いて回転数１，８００ｒｐｍ、遠心分離温度２０℃、ブレーキをＯＦＦの状態で１５分間遠心した。 遠心後、吸引機により無菌的に遠沈管内のリンパ球層の約１ｃｍ上までリンパ球細胞を吸い取らないようにゆっくり吸い取った。
【００５３】
さらに５ｍｌピペットマンで血餅の層を吸い取らないようにリンパ球細胞の層をとり、これをあらかじめ、洗浄用培地（ＲＰＭＩ１６４０＋６）を２５ｍｌ入れておいた５０ｍｌ遠沈管内に回収した。 遠沈管の蓋を閉め２〜３回転倒混和した後、さらに遠心分離機により、回転数１，８００ｒｐｍ、遠心分離温度２０℃の状態で１０分間遠心した。 遠心後、上清みを捨て、細胞沈渣をボルテックスにかけて良くほぐした。
【００５４】
さらにこれを、培地（ＲＰＭＩ１６４０＋７）４４ｍｌに、３５，０００Ｕ／ｍｌ ＩＬ（インターロイキン）−２ １ｍｌと、ヒト血清５ｍｌを含む培養用培地（以下、単に「培養用培地」と略す）５０ｍｌに入れ、良く転倒混和して細胞懸濁液を調製した。 この細胞懸濁液１０μｌをチューブにとり、これを４０μｌのチュルク液と混合し、血球計算版に１０μｌアプライし、顕微鏡下で細胞数を測定した結果、総細胞数は７．６×１０７個だった。
【００５５】
《２》ＯＫＴ３固相化フラスコの調製
ＰＢＳ（−）で５μｇ／ｍｌに調製しておいたＯＫＴ３溶液を、底面積２２５ｃｍ２の培養用フラスコに１０ｍｌ入れ、底面に溶液を均一になるよう浸した。 翌日、フラスコのＯＫＴ３溶液を吸引機で吸い取り、ＰＢＳ（−）５０ｍｌをフラスコに注ぎ込みフラスコの蓋を閉めて激しく振った後、蓋を開け、液を捨てた。 再度、無菌的にＰＢＳ（−）５０ｍｌをフラスコに注ぎ込みフラスコの蓋を閉めて激しく振った後、蓋を開け、液を捨てた。 フラスコ内と蓋に残っている液を吸引機で丁寧に吸い取り、ＯＫＴ３固相化フラスコの調製を行った。
【００５６】
《３》リンパ球の活性化培養
前記《１》において調製した細胞懸濁液５０ｍｌを、《２》で調整したＯＫＴ３固相化フラスコに分注し、３７℃、５％濃度の炭酸ガス存在下において培養を開始した。 ３日後に培養用培地５０ｍｌを加え、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続した。 さらに４日後、培養用培地１５０ｍｌを加え、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続した。
【００５７】
さらに２日間、３７℃、５％濃度炭酸ガス存在下において培養を継続することにより活性化リンパ球を得、このうちの一部の細胞を凍結保存液に懸濁し、３本のチューブにて液体窒素下、凍結保存した（３．６×１０７個／チューブ）。 また残りの細胞を以下のように拡大培養した。
【００５８】
《４》リンパ球の拡大培養（１回目）
上記《３》で調整したリンパ球をＬＬ−７培地、あるいはＭｅｄｉｕｍ９３０ ７５０ｍｌを含むガス透過性培養バッグに移し、炭酸ガスインキュベーター中で３７℃、５％炭酸ガス下で培養をおこなった。 ３日後、細胞を含むガス透過性培養バッグと新たな培地を含むガス透過性培養バッグを無菌接合装置により連結し、両ガス透過性培養バッグ中の培地を良く混合した後、これを２分割し、再度その結合を切除し、接合部分を無菌的にシールした後、３７℃、５％炭酸ガス下で培養を継続した。
【００５９】
《５》投与製剤の調整
上記《４》で調製した２バッグのうち１バッグ中の細胞を含む培地を２５０ｍｌ遠心管内に移し、これを遠心分離機による遠心により細胞の分離をおこなった。 デカンテーションにより培養液を除去し、細胞ペレットに０．１％のヒトアルブミンを含む生理食塩水を加えて遠心分離することにより洗浄操作をおこなって細胞ペレットを調整した。 さらに上記細胞ペレットに１％のヒトアルブミンを含む生理食塩水２００ｍｌを加えて懸濁し、これを１００μのステンレス金網にて濾過後、輸血用のバッグに詰めて投与用製剤とした。 なおこの場合の輸血用バッグに含まれる細胞数は、９．２×１０９個であった。本リンパ球は、平成１４年１１月２６日に患者の静脈より注入投与した。
【００６０】
《６》凍結保存細胞からの調整
前記《３》で調製した凍結細胞を３７℃で融解させるとともに、これを培養液で３回洗浄した。 本細胞を使用して《３》、《４》、《５》に示されると同様な方法で投与製剤リンパ球製剤を調整し、４．４×１０９個の活性化リンパ球を調製した。本リンパ球は、平成１４年１２月１０日に患者の静脈より注入投与した。 上記と同様にして凍結細胞を融解し、６．７×１０９個の活性化リンパ球を調製した。本リンパ球は、平成１４年１２月２４日に患者の静脈より注入投与した。 上記と同様にして凍結細胞を融解し、３．７×１０９個の活性化リンパ球を調製し、これを平成１５年１月７日に患者の静脈より注入投与した。
【００６１】
〔活性化リンパ球療法のスケジュール〕
採血 平成１４年１１月８日
投与 １回目（０２／１１／２６）−８回目（０３／４／１）
活性化リンパ球治療 １クール目
平成１４年１１月 ８日 培養用血液採取 ５０ｍｌの注射筒で５０ｍｌ採血
平成１４年１１月２６日 第１回目活性化リンパ球投与
平成１４年１２月１０日 第２回目活性化リンパ球投与
平成１４年１２月２４日 第３回目活性化リンパ球投与
平成１５年 １月 ７日 第４回目活性化リンパ球投与
【００６２】
認定：第１回目ＩＶＲ治療の後に活性化リンパ球治療を行うことにより腫瘍量の減少を認めた（平成１５年１月２３日）。 このことにより、本発明の血管塞栓療法と活性化リンパ球治療を併用することにより腫瘍の治療に大きな相乗効果があることを明らかとした。
【００６３】
第２回目治療 平成１５年１月２３日
第１回目治療と同じくセルディンガー法にてカテーテルを挿入、胃体部から前庭部にかけて腫瘍の存在を確認した。腫瘍量の減少を認めたが、腫瘍血管は多く残存していた。パミドロネート６０ｍｇ／２Ｖを２０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水１４ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 さらにビタミンＫ２ １２０ｍｇを２０ｍｌの注射筒で１２ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス６００ｍｇを２０ｍｌの注射筒で１０ｍｌとって同薬杯に注入した。 上記三剤を混合したのち、これにイオン性造影剤、ヘキサブリックス３０ｍｌを混和した。
【００６４】
カテーテルを腫瘍存在部位である胃大網動脈まで挿入するとともに、さらに腫瘍への栄養血管を供給している分枝に選択的に挿入し、そこよりパミドロネート１５ｍｇ、ビタミンＫ２ ３０ｍｇとスフェレックス１５０ｍｇ相当量の同混和薬剤を３ｍｌ／分の速度で注入した。 そして１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。 最後に左胃動脈にカテーテルを挿入し、これを介してパミドロネート４０ｍｇ、ビタミンＫ２ ８０ｍｇとスフェレックス４００ｍｇ相当量の同混和薬剤を３ｍｌ／分の速度で注入した。 さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与し、同動脈の塞栓を施行した。
【００６５】
上記と同様にして調製した活性化リンパ球を以下のようなスケジュールで投与を行った。 なおリンパ球の調製は、実施例１と同様にして調製しておこなった
平成１５年 １月３１日 培養用血液採取 ５０ｍｌの注射筒で５０ｍｌ採血
平成１５年 ２月１８日 第１回目活性化リンパ球投与
平成１５年 ３月 ４日 第２回目活性化リンパ球投与
平成１５年 ３月１８日 第３回目活性化リンパ球投与
平成１５年 ４月 １日 第４回目活性化リンパ球投与
【００６６】
上記スケジュールのように、
平成１５年 ２月１８日 ４．３×１０９個
平成１５年 ３月 ４日 ４．６×１０９個
平成１５年 ３月１８日 ２．５×１０９個
平成１５年 ４月 １日 ５．０×１０９個
上記のようにそれぞれ活性化リンパ球を患者の静脈より注入投与した。
【００６７】
第２回ＩＶＲ治療後および活性化リンパ球治療中のＣＴ所見（平成１５年２月２５日）：
胃癌部の壁肥厚は第２回ＩＶＲ血管内治療時の厚みよりもさらに軽減している。 胃体下部前壁のＰｏｌｙｐ状の隆起も直径１．５ｃｍにまで縮小している。 また所属リンパ節も縮小し、直径１．２ｃｍとなっている。 現時点でＰＲ（Ｐａｒｔｉａｌ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ）である。
【００６８】
認定：１回目および２回目のＩＶＲ血管内治療により胃がんの縮小が認められ、特に活性化リンパ球治療を併用することによりがんの退縮効果が確実に増強されることを明らかとした。
【実施例４】
【００６９】
［患者］
肺癌患者 ９４歳 男性
第１回目ＩＶＲ治療 平成１２年８月２８日
実施例１〜３と同様にセルディンガー法にて患者の静脈にカテーテルを挿入し、動脈造影を行った。 肺癌は左気管支動脈の血管により栄養され、屈曲蛇行する腫瘍血管を認め、腫瘍の下半分が濃染されていた。 左鎖骨下動脈の造影にて内胸動脈、胸肩峰動脈のいずれからも栄養血管は認めなかった。
【００７０】
パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 さらにビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍｌとって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを１０ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入し、上記三剤を混合したのち、これにイオン性造影剤ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを栄養血管である左気管支動脈にまで挿入し、そこよりパミドロネート２０ｍｇ、ビタミンＫ２ ２０ｍｇとスフェレックス２００ｍｇ相当量の同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で注入し、さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与して塞栓を施行した。
【００７１】
第１回血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年９月２９日）：
左肺上葉の腫瘍は横径でＴＡＥ前８．５ｃｍからＴＡＥ後１ヶ月で７．０ｃｍにまで縮小している。 また内部は空洞化している。 診断：Ｌｕｎｇ ＣａｎｃｅｒのＴＡＥ後（治療効果ＰＲ以上）再ＴＡＥを要す。
【００７２】
第２回目治療 平成１２年１０月１６日
第１回目治療と同じく、肺癌は左気管支動脈の血管により栄養され、腫瘍の下半分が濃染された。 パミドロネート３０ｍｇ／Ｖを１０ｍｌの注射筒で注射用蒸留水７ｍｌにて溶解し、これを１００ｃｃの薬杯に注入した。 ビタミンＫ２ ３０ｍｇを１０ｍｌの注射筒で３ｍ１とって同薬杯に注入した。 さらにスフェレックス３００ｍｇを５ｍｌの注射筒で５ｍｌとって同薬杯に注入した。上記三剤を混合したのちイオン性造影剤、ヘキサブリックス１５ｍｌを混和した。 カテーテルを左気管支動脈にまで挿入し、そこより同混和薬剤を５ｍｌ／分の速度で全量を注入するとともに、さらに１ｍｍ角裁断ゼラチンスポンジを数片投与して塞栓を施行した。
【００７３】
第２回ＩＶＲ血管内治療後のＣＴ所見（平成１２年１０月３０日）：
左肺上葉の腫瘍は横径で、ＴＡＥ前８．５ｃｍ→ＴＡＥ後１ヶ月７．０ｃｍ→ＴＡＥ後２ヶ月（再ＴＡＥ後１ヶ月）→７．５ｃｍと逐次変化している。 肺尖よりの部分と胸膜よりの部分は縮小しているが、肺門側がやや増大している。 内部の空洞化も大きな変化はない。 肺門よりのＴＡＥの効果は不十分で別の血流が関与している可能性が大きい。 しかしＩＶＲ血管内治療によりがんの退縮が認められた。 このことよりビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を使用した血管内治療は、肺がんを退縮させる効果があることが明らかとなった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項２】
ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項３】
ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とし、さらにスフェレックスを含有させてなるＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項４】
治療剤の成分が、ビスフォスフォネート：１ｍｇ〜３００ｍｇ／投与の範囲、ビタミンＫ２：１ｍｇ〜３００ｍｇ／投与の範囲で含有してなる請求項１〜３のいずれか１に記載のＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項５】
治療剤の成分が、ビスフォスフォネート：１５ｍｇ〜６０ｍｇ／投与の範囲、ビタミンＫ２：３０ｍｇ〜１２０ｍｇ／投与の範囲で含有してなる請求項１〜３のいずれか１に記載のＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項６】
スフェレックス：１５０〜４００ｍｇ相当量を含有してなる請求項１〜５のいずれか１に記載のＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項１】
ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項２】
ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分としたＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項３】
ビスフォスフォネートおよびビタミンＫ２あるいはそれらの誘導体を主成分とし、さらにスフェレックスを含有させてなるＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項４】
治療剤の成分が、ビスフォスフォネート：１ｍｇ〜３００ｍｇ／投与の範囲、ビタミンＫ２：１ｍｇ〜３００ｍｇ／投与の範囲で含有してなる請求項１〜３のいずれか１に記載のＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項５】
治療剤の成分が、ビスフォスフォネート：１５ｍｇ〜６０ｍｇ／投与の範囲、ビタミンＫ２：３０ｍｇ〜１２０ｍｇ／投与の範囲で含有してなる請求項１〜３のいずれか１に記載のＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【請求項６】
スフェレックス：１５０〜４００ｍｇ相当量を含有してなる請求項１〜５のいずれか１に記載のＩＶＲ血管内局所投与用悪性腫瘍の治療剤。
【公開番号】特開２０１０−１００６６０（Ｐ２０１０−１００６６０Ａ）
【公開日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２５９１７（Ｐ２０１０−２５９１７）
【出願日】平成２２年１月２０日（２０１０．１．２０）
【分割の表示】特願２００４−１８４６２８（Ｐ２００４−１８４６２８）の分割
【原出願日】平成１６年６月２３日（２００４．６．２３）
【出願人】（５０３２３５５４７）
【出願人】（５０１００５０９２）株式会社リンフォテック (7)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１月２０日（２０１０．１．２０）
【分割の表示】特願２００４−１８４６２８（Ｐ２００４−１８４６２８）の分割
【原出願日】平成１６年６月２３日（２００４．６．２３）
【出願人】（５０３２３５５４７）
【出願人】（５０１００５０９２）株式会社リンフォテック (7)
【Ｆターム（参考）】
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