ＷＮＴ遺伝子の発現を抑制するための核酸化合物およびその使用
本開示は、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子の発現を低下または停止させる能力を持つ、部分二重鎖リボ核酸分子（ｍｄＲＮＡ）を提供する。本開示のｍｄＲＮＡは、組み合わさって、ニックまたはギャップによって離された少なくとも２つの非重複二本鎖領域を形成する少なくとも３本の鎖を含み、１本の鎖はＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である。さらに、部分二重鎖は、５‐メチルウリジンである少なくとも１つのウリジン、ロックされた核酸であるヌクレオシド、または任意選択的に他の修飾、およびこれらの任意の組み合わせを有し得る。細胞において、または対象において、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子の発現を低下させ、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ関連疾患を治療する方法も、提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
部分二重鎖リボ核酸（ｍｄＲＮＡ）分子であって、ウイングレスタイプＭＭＴＶ（マウス乳癌ウイルス）統合部位ファミリー、配列番号１１５８に記載される（ＷＮＴ）メンバー１ ｍＲＮＡ、配列番号１３９０に記載されるヒトＷＮＴ２ ｍＲＮＡ、または配列番号１６１５に記載されるヒトＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である１５〜４０ヌクレオチド長の第１の鎖と、前記第１の鎖の非重複領域にそれぞれが相補的である第２の鎖および第３の鎖と、を含み、前記第２の鎖および第３の鎖は、前記第１の鎖とアニーリングして最大１０ヌクレオチド離間した少なくとも２つの二本鎖領域を形成することができ、それによって前記第２の鎖と前記第３の鎖との間にギャップが形成される、ｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２】
前記第１の鎖は１５〜２５ヌクレオチド長または２６〜４０ヌクレオチド長である、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項３】
前記ギャップはニックであるか、または前記ギャップは、前記第１の鎖にアニーリングすると前記第２および第３の鎖によって形成される前記二本鎖領域の間に位置する前記第１の鎖内に、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項４】
前記ｍｄＲＮＡ分子の少なくとも１つのウリジンは、５−メチルウリジン、２−チオリボチミジン、または２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジンである、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項５】
前記ｍｄＲＮＡ分子は、少なくとも１つのロックされた核酸（ＬＮＡ）分子、デオキシヌクレオチド、Ｇクランプ、２’糖修飾、修飾されたヌクレオシド間結合、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項６】
前記ｍｄＲＮＡ分子は、前記ギャップの一部ではない１〜４個のヌクレオチドを含む少なくとも１つの３’オーバーハングを含有するか、または前記ｍｄＲＮＡは、前記ｍｄＲＮＡの一端もしくは両端に平滑末端を有する、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項７】
前記第３の鎖はヒドロキシルまたはリン酸塩を含む５’末端を含む、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項８】
ｍｄＲＮＡ分子であって、配列番号１１５８に記載されるヒトＷＮＴ１ ｍＲＮＡ、配列番号１３９０に記載されるＷＮＴ２ ｍＲＮＡ、または配列番号１６１５に記載されるＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である１５〜４０ヌクレオチド長の第１の鎖と、前記第１の鎖の非重複領域にそれぞれが相補的である第２の鎖および第３の鎖と、を含み、前記第２の鎖および第３の鎖は、前記第１の鎖とアニーリングして最大１０ヌクレオチド離間した少なくとも２つの二本鎖領域を形成することができ、それによって前記第２の鎖と前記第３の鎖との間にギャップが形成され、前記ｍｄＲＮＡの少なくとも１つのピリミジンは、式ＩまたはＩＩに従うピリミジンヌクレオシドを含み、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ハロゲン、置換もしくは未置換のＣ１−Ｃ１０アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、アルキルスルホニルアミノ、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロアルキル、トリフルオロメチル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、置換もしくは未置換のＣ２−Ｃ１０アルケニル、置換もしくは未置換の−Ｏ−アリル、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、置換もしくは未置換のＣ２−Ｃ１０アルキニル、カルバモイル、カルバミル、カルボキシ、カルボニルアミノ、置換もしくは未置換のアリール、置換もしくは未置換のアラルキル、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−Ｃ≡Ｎ、またはヘテロシクロ基であり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立してヒドロキシル、保護ヒドロキシル、リン酸塩、またはヌクレオシド間の結合基であり、
Ｒ５およびＲ８は、独立してＯまたはＳである、ｍｄＲＮＡ分子。
【請求項９】
前記第１の鎖は１５〜２５ヌクレオチド長または２６〜４０ヌクレオチド長である、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１０】
前記ギャップはニックであるか、または前記ギャップは、前記第１の鎖にアニーリングすると前記第２および第３の鎖によって形成される前記二本鎖領域の間に位置する前記第１の鎖内に、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含む、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１１】
少なくとも１つのヌクレオシドは式Ｉに従い、式中、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２は−ＯＨまたは−Ｏ−メチルである、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１２】
少なくとも１つのＲ２は、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ５）アルキル、２’−Ｏ−メチル、２’−ＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ−アリル、および２’−フルオロから構成される群から選択される、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１３】
前記ｍｄＲＮＡ分子の少なくとも１つのウリジンは、５−メチルウリジン、２−チオリボチミジン、または２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジンである、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１４】
前記ｍｄＲＮＡ分子は、少なくとも１つのＬＮＡ、デオキシヌクレオチド、Ｇクランプ、２’糖修飾、修飾されたヌクレオシド間結合、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１５】
前記ｍｄＲＮＡは、前記ギャップの一部ではない１〜４個のヌクレオチドを含む、少なくとも１つの３’オーバーハングを含有するか、または前記ｍｄＲＮＡ分子は、前記ｍｄＲＮＡ分子の一端もしくは両端に平滑末端を有する、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１６】
ｍｄＲＮＡ分子であって、配列番号１１５８に記載されるヒトＷＮＴ１ ｍＲＮＡ、配列番号１３９０に記載されるＷＮＴ２ ｍＲＮＡ、または配列番号１６１５に記載されるＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である第１の鎖と、前記第１の鎖の非重複領域にそれぞれが相補的である第２の鎖および第３の鎖と、を含み、前記第２の鎖および第３の鎖は、前記第１の鎖とアニーリングして最大１０ヌクレオチド離間した少なくとも２つの二本鎖領域を形成することができ、それによって前記第２の鎖と前記第３の鎖との間にギャップが形成され、合わせた二本鎖領域は合計で約１５塩基対〜約４０塩基対である、ｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１７】
前記第１の鎖は１５〜２５ヌクレオチド長または２６〜４０ヌクレオチド長である、請求項１６に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１８】
前記ギャップはニックであるか、または前記ギャップは、前記第１の鎖にアニーリングすると前記第２および第３の鎖によって形成される前記二本鎖領域の間に位置する前記第１の鎖内に、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含む、請求項１６に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１９】
前記ｍｄＲＮＡ分子の少なくとも１つのウリジンは、５−メチルウリジン、２−チオリボチミジン、または２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジンである、請求項１６に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２０】
前記第１の鎖は１９〜２３ヌクレオチド長であり、配列番号１１５９〜１３８９のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ１核酸配列、または配列番号１３９１〜１６１４のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ２核酸配列、または配列番号１６１６〜１９０１のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ３Ａ核酸配列に相補的である、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２１】
前記第１の鎖は２５〜２９ヌクレオチド長であり、配列番号１１５９〜１３８９のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ１核酸配列、または配列番号１３９１〜１６１４のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ２核酸配列、または配列番号１６１６〜１９０１のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ３Ａ核酸配列に相補的である、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２２】
ヒトＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子の発現を低下させるための方法であって、請求項１〜２１のうちのいずれか１項に記載のｍｄＲＮＡ分子を、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子を発現する細胞に投与するステップを含み、前記ｍｄＲＮＡ分子は、前記細胞中のＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子の発現を低下させる、方法。
【請求項２３】
前記細胞はヒトである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
代謝性疾患の治療において使用するための薬物を製造するための、先行する請求項のうちのいずれか１項に定義されるｍｄＲＮＡの使用。
【請求項１】
部分二重鎖リボ核酸（ｍｄＲＮＡ）分子であって、ウイングレスタイプＭＭＴＶ（マウス乳癌ウイルス）統合部位ファミリー、配列番号１１５８に記載される（ＷＮＴ）メンバー１ ｍＲＮＡ、配列番号１３９０に記載されるヒトＷＮＴ２ ｍＲＮＡ、または配列番号１６１５に記載されるヒトＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である１５〜４０ヌクレオチド長の第１の鎖と、前記第１の鎖の非重複領域にそれぞれが相補的である第２の鎖および第３の鎖と、を含み、前記第２の鎖および第３の鎖は、前記第１の鎖とアニーリングして最大１０ヌクレオチド離間した少なくとも２つの二本鎖領域を形成することができ、それによって前記第２の鎖と前記第３の鎖との間にギャップが形成される、ｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２】
前記第１の鎖は１５〜２５ヌクレオチド長または２６〜４０ヌクレオチド長である、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項３】
前記ギャップはニックであるか、または前記ギャップは、前記第１の鎖にアニーリングすると前記第２および第３の鎖によって形成される前記二本鎖領域の間に位置する前記第１の鎖内に、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含む、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項４】
前記ｍｄＲＮＡ分子の少なくとも１つのウリジンは、５−メチルウリジン、２−チオリボチミジン、または２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジンである、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項５】
前記ｍｄＲＮＡ分子は、少なくとも１つのロックされた核酸（ＬＮＡ）分子、デオキシヌクレオチド、Ｇクランプ、２’糖修飾、修飾されたヌクレオシド間結合、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項６】
前記ｍｄＲＮＡ分子は、前記ギャップの一部ではない１〜４個のヌクレオチドを含む少なくとも１つの３’オーバーハングを含有するか、または前記ｍｄＲＮＡは、前記ｍｄＲＮＡの一端もしくは両端に平滑末端を有する、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項７】
前記第３の鎖はヒドロキシルまたはリン酸塩を含む５’末端を含む、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項８】
ｍｄＲＮＡ分子であって、配列番号１１５８に記載されるヒトＷＮＴ１ ｍＲＮＡ、配列番号１３９０に記載されるＷＮＴ２ ｍＲＮＡ、または配列番号１６１５に記載されるＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である１５〜４０ヌクレオチド長の第１の鎖と、前記第１の鎖の非重複領域にそれぞれが相補的である第２の鎖および第３の鎖と、を含み、前記第２の鎖および第３の鎖は、前記第１の鎖とアニーリングして最大１０ヌクレオチド離間した少なくとも２つの二本鎖領域を形成することができ、それによって前記第２の鎖と前記第３の鎖との間にギャップが形成され、前記ｍｄＲＮＡの少なくとも１つのピリミジンは、式ＩまたはＩＩに従うピリミジンヌクレオシドを含み、
式中、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、ハロゲン、置換もしくは未置換のＣ１−Ｃ１０アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル、アルキルスルホニルアミノ、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、アルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、ハロアルキル、トリフルオロメチル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、置換もしくは未置換のＣ２−Ｃ１０アルケニル、置換もしくは未置換の−Ｏ−アリル、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｏ−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３、置換もしくは未置換のＣ２−Ｃ１０アルキニル、カルバモイル、カルバミル、カルボキシ、カルボニルアミノ、置換もしくは未置換のアリール、置換もしくは未置換のアラルキル、−ＮＨ２、−ＮＯ２、−Ｃ≡Ｎ、またはヘテロシクロ基であり、
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立してヒドロキシル、保護ヒドロキシル、リン酸塩、またはヌクレオシド間の結合基であり、
Ｒ５およびＲ８は、独立してＯまたはＳである、ｍｄＲＮＡ分子。
【請求項９】
前記第１の鎖は１５〜２５ヌクレオチド長または２６〜４０ヌクレオチド長である、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１０】
前記ギャップはニックであるか、または前記ギャップは、前記第１の鎖にアニーリングすると前記第２および第３の鎖によって形成される前記二本鎖領域の間に位置する前記第１の鎖内に、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含む、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１１】
少なくとも１つのヌクレオシドは式Ｉに従い、式中、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２は−ＯＨまたは−Ｏ−メチルである、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１２】
少なくとも１つのＲ２は、２’−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ５）アルキル、２’−Ｏ−メチル、２’−ＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、２’−ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ−アリル、および２’−フルオロから構成される群から選択される、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１３】
前記ｍｄＲＮＡ分子の少なくとも１つのウリジンは、５−メチルウリジン、２−チオリボチミジン、または２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジンである、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１４】
前記ｍｄＲＮＡ分子は、少なくとも１つのＬＮＡ、デオキシヌクレオチド、Ｇクランプ、２’糖修飾、修飾されたヌクレオシド間結合、またはこれらの任意の組み合わせを含む、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１５】
前記ｍｄＲＮＡは、前記ギャップの一部ではない１〜４個のヌクレオチドを含む、少なくとも１つの３’オーバーハングを含有するか、または前記ｍｄＲＮＡ分子は、前記ｍｄＲＮＡ分子の一端もしくは両端に平滑末端を有する、請求項８に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１６】
ｍｄＲＮＡ分子であって、配列番号１１５８に記載されるヒトＷＮＴ１ ｍＲＮＡ、配列番号１３９０に記載されるＷＮＴ２ ｍＲＮＡ、または配列番号１６１５に記載されるＷＮＴ３Ａ ｍＲＮＡに相補的である第１の鎖と、前記第１の鎖の非重複領域にそれぞれが相補的である第２の鎖および第３の鎖と、を含み、前記第２の鎖および第３の鎖は、前記第１の鎖とアニーリングして最大１０ヌクレオチド離間した少なくとも２つの二本鎖領域を形成することができ、それによって前記第２の鎖と前記第３の鎖との間にギャップが形成され、合わせた二本鎖領域は合計で約１５塩基対〜約４０塩基対である、ｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１７】
前記第１の鎖は１５〜２５ヌクレオチド長または２６〜４０ヌクレオチド長である、請求項１６に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１８】
前記ギャップはニックであるか、または前記ギャップは、前記第１の鎖にアニーリングすると前記第２および第３の鎖によって形成される前記二本鎖領域の間に位置する前記第１の鎖内に、少なくとも１つの不対ヌクレオチドを含む、請求項１６に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項１９】
前記ｍｄＲＮＡ分子の少なくとも１つのウリジンは、５−メチルウリジン、２−チオリボチミジン、または２’−Ｏ−メチル−５−メチルウリジンである、請求項１６に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２０】
前記第１の鎖は１９〜２３ヌクレオチド長であり、配列番号１１５９〜１３８９のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ１核酸配列、または配列番号１３９１〜１６１４のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ２核酸配列、または配列番号１６１６〜１９０１のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ３Ａ核酸配列に相補的である、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２１】
前記第１の鎖は２５〜２９ヌクレオチド長であり、配列番号１１５９〜１３８９のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ１核酸配列、または配列番号１３９１〜１６１４のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ２核酸配列、または配列番号１６１６〜１９０１のうちのいずれか１つに記載されるヒトＷＮＴ３Ａ核酸配列に相補的である、請求項１に記載のｍｄＲＮＡ分子。
【請求項２２】
ヒトＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子の発現を低下させるための方法であって、請求項１〜２１のうちのいずれか１項に記載のｍｄＲＮＡ分子を、ＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子を発現する細胞に投与するステップを含み、前記ｍｄＲＮＡ分子は、前記細胞中のＷＮＴ１、ＷＮＴ２、またはＷＮＴ３Ａ遺伝子の発現を低下させる、方法。
【請求項２３】
前記細胞はヒトである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
代謝性疾患の治療において使用するための薬物を製造するための、先行する請求項のうちのいずれか１項に定義されるｍｄＲＮＡの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２０１０−５１９９１３（Ｐ２０１０−５１９９１３Ａ）
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５１８８６（Ｐ２００９−５５１８８６）
【出願日】平成２０年３月３日（２００８．３．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５５６４９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０９５１８
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０７３２８１８４）エムディーアールエヌエー，インコーポレイテッド (29)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月３日（２００８．３．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５５６４９
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０９５１８
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０７３２８１８４）エムディーアールエヌエー，インコーポレイテッド (29)
【Ｆターム（参考）】
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