エリトリンムルング（ＥｒｙｔｈｒｉｎｅＭｕｌｕｎｇｕ）誘導体を含む医薬組成物及びその製造方法
本発明は、不安障害の治療のための、１１−ＯＨ−エリトラビン、エリトラビン、エリトラルチン、薬学的に許容されるそのイソセラル（ｉｓｏｔｈｅｒａｌｓ）、塩、副産物及び／又は溶媒和物を含み、他のエリトリン副産物を場合によって含む医薬組成物を明らかにする、コリン作動、セロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動系モデルのための分子の使用；前記医薬組成物を得るための方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コリン作動、セロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動系に作用する分子に関する。より具体的には、本発明は、抗不安薬の調製に有用なエリトリン副産物に関する。また、前記分子を含む医薬組成物及び前記医薬組成物を調製する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ Ｍｕｌｕｎｇｕ）（マメ科コチョウ亜科（Ｐａｐｉｌｉｏｎａｃｅａｅ−Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓｅａｅ）は、赤い花を付ける高木（高さ１０〜１４メートル）で、パラナ（Ｐａｒａｎａ）盆地の半落葉広葉樹林、並びに主にサンパウロ州の西部地域及びミナス（Ｍｉｎａｓ）三角地帯の低木地地域に生育する（ＬＯＲＥＮＺＩ、１９９２）。この植物の樹皮は、地元住民に精神安定薬及び鎮静薬として使用されている。これは、一般にムルング（ｍｕｌｕｎｇｕ）、サンゴムルング、サンゴ低木（民族名、特に、カパ−ホメン（ｃａｐａ−ｈｏｍｅｍ）、スイナ−スイナ（ｓｕｉｎａ−ｓｕｉｎａ）、チリセイロ（ｔｉｒｉｃｅｉｒｏ）など）として知られている（ＬＯＲＥＮＺＩ、１９９２）。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）、Ｅ．ヴェルティナ（Ｅ．ｖｅｌｕｔｉｎａ）、Ｅ．クリタ−ガリ（Ｅ．ｃｒｉｔａ−ｇａｌｌｉ）、Ｅ．ポエピギアナ（Ｅ．ｐｏｅｐｐｉｇｉａｎａ）、Ｅ．フスカ（Ｅ．ｆｕｓｃａ）、Ｅ．ファルカタ（Ｅ．ｆａｌｃａｔａ）、Ｅ．スペキオサ（Ｅ．ｓｐｅｃｉｏｓａ）及びＥ．ヴェルナ（Ｅ．ｖｅｒｎａ）のエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）の８つの変種が、ブラジルで発見されている（ＬＯＲＥＮＺＩ、１９９２）。
【０００３】
また、鎮痛薬、精神安定薬として、並びに緩下薬、抗炎症薬及び抗利尿薬として民間での使用も知られているエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）属の他の種の植物化学及び薬理学的特性を確認するために多くの研究が行われている（ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）種に関する研究が不足しているにもかかわらず、その抽出物は、ブラジル及び国際的製薬市場で市販されている植物療法製剤の組成の一部である。しかし、製品の質に関していかなる標準化もされておらず、消費者の健康に対してリスクをもたらす恐れがある。
【０００４】
植物化学
エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の研究に関する関心は、Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ及びＡｌｔａｍｉｒａｎｏが、Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ））の種子抽出物の薬理作用がｄ−ツボクラリン（Ｃｈｏｎｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｔｏｍｅｎｔｏｓｕｍから抽出される物質）の作用と類似していることを発見した１８７７年に始まった（ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＨＩＤＥＲら、１９８６；ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。その時以来、異なるエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の抽出物の植物化学及び薬理学的特性についての調査が実施された。数年後、様々なエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の抽出物で示された薬理作用が確認されてから、調査は、この種類の植物のアルカロイドを単離し、同定することへ向けられた（ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯら、１９８１）。そのような時まで、薬理学的試験が粗抽出物に関して実施された。１９３７年、Ｆｏｌｋｅｒｓ及びＭａｊｏｒ（１９３７）は、Ｅ．アメリカーナ ミル（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ Ｍｉｌｌ．）の種子についての化学的調査を実施し、ｄ−ツボクラリンのコリン作動性活性と同等の活性を示した結晶性アルカロイド（エリトロイジン）を単離した。その後の解析（ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ及びＧＲＵＮＤＯＮ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３）では、エリトロイジンがα−エリトロイジン及びβ−エリトロイジンと命名された２種の異性体アルカロイドの混合物であり、β−エリトロイジンは、末梢のニコチン受容体に拮抗する能力により、コリン作動性活性の原因であることを示した（ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＨＩＤＥＲら、１９８６；ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。
【０００５】
Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ）のα及びβ−エリトロイジンを単離、並びにその薬理学的特性の発見後、他のエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の研究についての関心が高まり、その結果、新規なＥ．骨格アルカロイド（ｓｋｅｌｅｔｏｎ ａｌｋａｌｏｉｄ）を得た（ＦＯＬＫＥＲＳ及びＫＯＮＩＵＳＺＹ、１９４０；ＦＯＬＫＥＲＳら、１９４４；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ及びＧＲＵＮＤＯＮ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３；ＴＡＮＤＯＮら、１９６９；ＩＴＯら、１９７０；ＢＡＲＴＯＮら、１９７０；ＧＨＯＳＡＬ、１９７０；ＧＨＯＳＡＬら、１９７１；ＩＴＯら、１９７１；ＭＩＡＮＡら、１９７２；ＧＨＯＳＡＬら、１９７２ ａ、ｂ；ＢＡＲＴＯＮら、１９７３；ＩＴＯら、１９７３、ａ、ｂ、ｃ、ｄ；ＧＨＯＳＡＬ及びＳＲＩＶＡＳＴＡＶＡ、１９７４；ＭＩＬＬＩＮＧＴＯＮら、１９７４；ＧＡＭＥＳら、１９７４；ＩＴＯら、１９７６；ＢＡＲＡＫＡＴら、１９７７；ＥＬＯＬＥＭＹら、１９７８；ＡＨＭＡＤら、１９７９；ＴＩＷＡＲＩ及びＭＡＳＳＯＤ、１９７９ ａ、ｂ；ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯ、１９８１）。
【０００６】
エリトリンアルカロイドの基本的構造の解明は、分解及び合成によって達成された（ＧＲＵＮＤＯＮ及びＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ、１９５３；ＧＲＵＮＤＯＮら、１９５３；ＷＥＩＮＳＴＯＣＫ及びＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３）。スピロアミン骨格の存在は、以下に一般式を示す、これらアルカロイドの構造において証明され、後に続く新規な化合物の同定を促進した。
【化１】
【０００７】
この構造の解明により、新規な化合物のその後の同定を促進した。現在、以下の３種類のエリトリンアルカロイドが知られている。１）ジエノイド（ｄｉｅｎｏｉｄｓ）は、環Ａ及びＢにおいてジエン酸系を呈し；２）アルカロイドは、環Ａにおいて二重結合Δ１，６を有し；３）第３群のエリトリンアルカロイドは、エリソジエノン、３−デスメトキシエリトラチジノン、α−エリトロイジン及びβ−エリトロイジンを含む。また、エリトリン骨格を呈していない特定のエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種のいくつかのアルカロイドが単離されており、これらはオリエンタリン、Ｎ−ノオリエンタリン、プロトシノメニン、Ｎ−ノルプロトシノメニン、イソボルジン、エリビジン、スコウレリン、コレキシミン、ヒパホリン、コリンを含む。
【０００８】
ドライフラワーから調製されたエタノール抽出物を用いたＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）に関する植物化学的研究では、５種のアルカロイド（エリソトリナ、Ｎ−エリソトリナ酸化物、エリトラルチン、Ｎ−エリトラルチン酸化物及びヒパホリン）及びテルペノイド、フィトールを単離した（ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯら、１９８１；ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯ、１９８１）。また、最近の植物化学的研究では、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種が、フラバノン、イソフラバノン、イソフラボン及びプテロカルパンなどの他のクラスの物質も豊富であることを実証している（ＤＡ−ＣＵＮＨＡら、１９９８；ＴＡＮＡＫＡら、１９９６、１９９７ ａ、ｂ；１９９８；２００１；ＯＨら、１９９９；ＹＥＮＥＳＥＷら、２０００；ＮＫＥＮＧＦＡＣＫら、２００１）。
【０００９】
薬理活性
エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）の主要な薬理作用の１つは、ｄ−ツボクラリンの作用と比較されているコリン作動系に対する末梢活性である（ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＨＩＤＥＲら、１９８６；ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。本作用は、Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ）（ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ及びＧＲＵＮＤＯＮ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３）及びＥ．トロニアナ（Ｅ．ｔｈｏｌｌｏｎｉａｎａ）（ＣＨＡＷＬＡら、１９８５）から単離したニコチン様アンタゴニスト受容体（ＨＩＤＥＲら、１９８６）であるアルカロイドジヒドロ−β−エリトロイジン（ＤＨＢＥ）に起因した。より最近、インビトロにおいて、ＤＨＢＥが、セロトニン作動性３アンタゴニスト受容体（５−ＨＴ３）として特徴付けられた（ＥＬＳＥＬＥら、１９９３）。また、セロトニン作動系の活性が別の研究で観察されており（ＲＯＧＥＲら、２００１）、ここでは５−ＨＴ３受容体のアンタゴニストの主な活性の１つである血小板セロトニンのカルシウム依存的放出を、Ｅ．ヴェスペルティリオ（Ｅ．ｖｅｓｐｅｒｔｉｌｉｏ）の粗抽出物が阻害することが実証された。しかし、大部分の研究は、依然として、観察された活性において関与する物質の検証なしに、異なるエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の粗抽出物を用いて実施されている。中枢神経系に対する活性の例として、抗痙攣、催眠、麻酔、鎮静及び抗不安作用を挙げることができる（ＧＨＯＳＡＬら、１９７２；ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＲＡＴＮＡＳＯＯＲＩＹＡ及びＤＨＡＲＭＡＳＩＲＩ、１９９９；ＯＮＵＳＩＣら、２００２、２００３）。
【００１０】
Ｅ．ヴェルティナ（Ｅ．ｖｅｌｕｔｉｎａ）に関する研究では、水アルコール抽出物による急性処置が、オープンフィールド検査（２５０及び５００ｍｇ／ｋｇの用量の経口摂取）で、マウスの活性を減少し、更に中枢神経系に対する抑制作用を示す、ペントバルビタールにより誘導される睡眠期間及びピロカルピン誘導痙攣の開始期間（５００及び１，０００ｍｇ／ｋｇの用量の経口摂取）を増加することを実証した（ＣＡＢＲＡＬら、２０００）。別の研究では（ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＬＩＡＲら、２０００）、Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ）（３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ）のヘキサン画分による急性処置が、ジアゼパムと同様に、オスマウスにおける攻撃行動を減少することを明らかにした。最近、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール抽出物に関する研究（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）では、２００ｍｇ／ｋｇ（経口摂取）の用量による急性処置が、高架式Ｔ字迷路試験での抑制回避動作中のマウスに対して、ベンゾジアゼピン抗不安薬（ＢＤＺ）、ジアゼパムと同等の抗不安作用を示すことが観察された。また、ＯＮＵＳＩＣ及び共同研究者ら（２００２）は、明／暗移行モデルにおいて、同じ用量で、明るい区画での滞在の長さの場合のように、２つのモデル区画の間の移動数でＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の抗不安作用を観察した。別の研究では、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物による慢性処置の経口摂取（９日）により、５０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で、高架式Ｔ字迷路のオープンアーム部からの逃避の場合のように、抑制回避動作で抗不安作用を示した（ＯＮＵＳＩＣら、２００３）。また、明／暗移行モデルにおいて、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物が、５０ｍｇ／ｋｇの用量で１４日間の慢性処置後、抗不安薬作用を示した（ＯＮＵＳＩＣら、２００３）。
【００１１】
これら非常に多くのアプローチにもかかわらず、現在まで、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）の単離された有効成分の粗抽出物若しくは精製画分の形態のいずれかで知られる標準の調製物から、又はその化学合成から製造された抗不安薬の開発、或いはそのような薬物を調製するための方法に関する公知の報告は存在しない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の目的は、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）属の植物から誘導された物質を含む標準化された医薬組成物を提供することである。ある態様では、本発明の医薬組成物は、コリン作動、セロトニン作動及びＧＡＢＡ作動系において、直接的又は間接的に作用する、標準粗抽出物、Ｅ．アルカロイドの高純度精製画分（Ｆ２）又は単離アルカロイドのエリトラルチン、エリトラビン及び１１−ヒドロキシエリトラビン、更にこれらの組合せを含む。
【００１３】
別の態様では、関連の医薬組成物及びこれらを含む医薬組成物を得る方法もこれに相当する。
【００１４】
ある態様では、本発明の粗抽出物、アルカロイドの高純度精製画分（Ｆ２）及び分子が、動物モデルで抗不安薬としての活性を示すことが明らかになった。したがって、本発明の目的は、抗不安薬の使用を必要とする不安又は他の臨床症状に関連する障害の治療において、抽出物、画分及び／又は分子を提供することである。
【００１５】
別の態様では、標準粗抽出物の調製、アルカロイドの高純度精製画分（Ｆ２）及び分子の単離及び構造的特徴付け、更に本発明の薬理学的活性の評価は、不安障害の治療において用いられる標準化された医薬組成物の開発を可能にする。したがって、本発明の１つの別の目的は、抗不安特性を有する天然製剤及び分子を含む医薬組成物を提供することである。
【００１６】
更に別の態様では、本発明の抽出物の精製、精製画分並びに分子の単離及び／又は合成は、挙げられた天然製剤及び／又は分子を含む医薬組成物の円滑な製造方法を提供する。したがって、本発明の更なる目的は、医薬組成物の製造方法を提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明の目的のために、「医薬組成物」は、ホメオスタシスを維持及び／又は回復させるために作用する、予防的、緩和的及び／又は治療的目的を有する有効成分を含むすべて及びいずれかの組成を意味し、局所的、非経口的、経腸的及び／又はくも膜下腔内に投与することができる。
【００１８】
本発明において言及される医薬組成物は、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）副産物のクラスに属し、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の粗抽出物又は精製画分から単離されたエリトラルチン及び／若しくはエリトラビン又は化学合成物を場合によって含む、１１−ＯＨ−エリトラビン、薬学的に許容されるそのイソセラル（ｉｓｏｔｈｅｒａｌ）、塩、副産物及び／又は溶媒和物を含む。
【００１９】
本発明の化合物の治療適用性を、様々な過程で実行した。実施した実験及びそれぞれの結果は、単に実施例として以下に示したもので、添付の請求項の範囲を逸脱するものではない。
【実施例】
【００２０】
（実施例１）
植物化学
植物収集及び抽出物調製
成木の花を、例えば、アララクアラ（Ａｒａｒａｑｕａｒａ）（ＳＰ）地域において、冬季に収集した。新鮮な植物材料（６ｋｇ）を、エタノール／水（ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ）（７：３）による浸軟の工程により７日間抽出にかけた。次に、この抽出物をろ過し、回転蒸発器（ｒｏｔａ−ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて濃縮し、乾燥水アルコール抽出物２９２ｇを得た。
【００２１】
総アルカロイドでのこの標準化を、薬局方の方法に従って、中和の容積測定により実施し、エリトラビンで表したアルカロイドで少なくとも０，１％含むと確認した。
【００２２】
分画及び化学成分の単離の生体モニター
酸塩基抽出を、粗抽出物を精製し、エリトリンアルカロイド濃縮が最適化された画分を生じさせるために実施した。このことを達成するために、乾燥水アルコール抽出物（１２０ｇ）を酢酸（１０％）水溶液に溶解し、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）による液／液抽出にかけた。
【００２３】
クロロホルム相を、水相から分離し、溶媒を蒸発させ、画分１を得た（７．８３ｇ）。次に、水相を、ｐＨ９〜１０にするために十分な量の水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）でアルカリ化し、再度ＣＨＣｌ３による抽出にかけた。
【００２４】
クロロホルム相を分離し、溶媒を蒸発させ、アルカロイドに富む精製画分（Ｆ２）を得た（６７０ｍｇ）。本画分をＨＰＬＣ法により評価し、少なくとも総アルカロイド２０％及びエリトラビン１０％を含むとして標準化した。また、Ｆ２を、高Ｔ迷路（つまり高架式Ｔ字迷路）の薬理学的試験において使用した。
【００２５】
（実施例２）
クロマトグラフィー、器具使用及び分光測定
段階的溶媒を、「分析のために」使用した。
【００２６】
シリカの分析的薄層クロマトグラフィー（ＣＣＤ）のために、溶媒系としてＣＨＣｌ３／メタノール（ＭｅＯＨ）（９：１）を使用した。ドラーゲンドルフ試験（Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆ ｔｅｓｔ）は、オープンカラムクロマトグラフィー（ＣＣＡ）（直径５ｃｍ及び高さ１５ｃｍ）にかけたＦ２において、アルカロイドに陽性であった。
【００２７】
ＣＣＡ（０，０３５〜０，０７０ｍｍ、φ６ηｍ）に、シリカ固定相として、また移動相としてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１０：０〜８：２）を使用した。分離のために、Ｆ２の６７０ｍｇを使用し、約２０ｍｌの１０１の画分を収集した。
【００２８】
ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（７：１）の移動相における分析的ＣＣＤにかけ、ドラーゲンドルフ測定で明らかにした後、１０１の画分を、画分Ａ（ＦＡ−１３６．２ｍｇ）（１〜２７）、画分Ｂ（ＦＢ−９３．４ｍｇ）（２８〜５０）、画分Ｃ（ＦＣ−１４８．３ｍｇ）（５１〜６９）、画分Ｄ（ＦＤ−２８４．５ｍｇ）（７０〜１０１）に群化した。
【００２９】
アルカロイドを単離及び精製するために、シリカ固定相（Ｍｅｒｃｋ）にフルオレセイン、移動相にトルエン、アセトン、エタノール及びＮＨ４ＯＨ（４５：４５：７：３）を用いた分取薄層クロマトグラフィー（ＣＣＤＰ）を使用した。画分Ｂからエリトラルチンを単離し（４８ｍｇ）、画分Ｃ及びＤからエリトラビンを単離し（それぞれ、６１及び３４，８２ｍｇ）、画分Ｄから１１−ＯＨ−エリトラビナを単離した（３６，９８ｍｇ）。
【００３０】
ＣＣＤＰにより単離された物質の分光分析のために、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光計ヴァリアンユニット（Ｖａｒｉａｎ Ｕｎｉｔ）を５００ＭＨｚの操作で使用した。重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）を溶媒として使用した。
【００３１】
（実施例３）
薬理学
３．１ 動物試験
サンパウロ州立大学（ＵＮＥＳＰ／アララクアラ）の中央動物研究所（ｃｅｎｔｒａｌ ａｎｉｍａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）由来の体重２５〜３５ｇのスイス系マウスを使用した。
【００３２】
動物を、床に木のかんな屑の敷かれたポリプロピレン製ケージ内で、１０〜１２匹の群で飼育し、床及び水は自由に利用可能にした。動物実験室は２２±１℃の常温下で維持し、照明は午前７：００から午後７：００までの１２時間周期で管理し、湿度は５０〜６０％に維持した。
【００３３】
（実施例４）
アルカリ、標準薬物及びビヒクル中の未精製標準抽出物及び高純度精製画分
したがって、Ｆ２（３、６、１０、１７及び３０ｍｇ／ｋｇ）並びにアルカロイドのエリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビン（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）に加えて、凍結乾燥された水アルコール抽出物（５０、１００、２００及び４００ｍｇ／ｋｇ）を、強制飼養により経口摂取を通して投与した。使用した標準薬物は、２ｍｇ／ｋｇ（腹腔内（ｉ．ｐ）経由）の用量のジアゼパム（ＤＺＰ）であった。
【００３４】
すべての溶液を、塩素酸ナトリウム０．９％（０．９％ＮａＣｌ）により実験当日に調製し、１５分間超音波処理した。ジアゼパムを、０，９％ＮａＣｌ及びＴｗｅｅｎ−８０に溶解した。
【００３５】
実験は、午前１１：００から午後５：００の間に実施した。
【００３６】
実験装置及び手順
高Ｔ迷路は、透明ガラスの壁及び木の床で作成し、木の支柱により床から上に３８．５ｃｍ上げられたオープンアーム（３０×５×０．２５ｃｍ）に垂直につながれたクローズドアーム（３０×５×１５ｃｍ）からなる。本試験では、各試行の間が３０秒間隔で、５回連続した抑制回避の測定（ベースラインの潜時、回避１、２、３及び４）及び１回のオープンアームからの逃避の測定を実施した。回避測定では、動物を、クローズドアームの遠位部に配置し、４つすべての足上での、オープンアームに対するこのアームの逃避潜時を計った。逃避測定では、動物を右のオープンアームの先端に配置し、このアームからの退去時間を測定した。この測定中の迷路のアーム内における動物の最大滞在時間は、３００秒であった。各動物を試験した後、装置を２０％エタノールで洗浄した。
【００３７】
高架式Ｔ字迷路での試験直後に、偽陽性又は陰性を避けるために、動物をアリーナで運動活性（ｌｏｃｏｍｏｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）試験にかけた。
【００３８】
装置は、高さ３０ｃｍの壁に囲まれた長方形の底部（４０×４８ｃｍ）の白色ポリプロピレンボックスからなる。床は、３０の正方形（８×８ｃｍ）に再分割されている。
【００３９】
本試験において、動物をボックスの中央部に配置し、四半分領域の横断数及び伸展に伴う姿勢（ｓｔｒｅｔｃｈ−ａｔｔｅｎｄ ｐｏｓｔｕｒｅ）の数についての後の解析のために、動物の活動を５分間ビデオに記録した（ＷＡＬＳＨ及びＣＵＭＭＩＮＳ、１９７６）。
【００４０】
モデルの結果の解析
単離アルカロイドの化学構造を判定するために、１Ｈ及び１３Ｃ ＲＭＮ分光測定、並びにＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ及びＣＯＳＹ二次元分光測定を使用した。結果を、Ｅ．アルカロイドについての文献にすでに存在する情報と比較した。
【００４１】
動物モデルからの結果を、最初にＬｅｖｅｎｅの均一性検定にかけた。不均一な結果を、対数尺度に変換し、その後、統計的に解析した。
【００４２】
高Ｔ迷路から得られた結果を、処置を独立因子及び試行を従属因子として、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）にかけた。処置の効果が有意であると証明された時、データを一元配置ＡＮＯＶＡにより解析し、その後Ｄｕｎｃａｎの事後検定にかけた。
【００４３】
アリーナで得られた結果を、一元配置ＡＮＯＶＡにかけ、その後Ｄｕｎｃａｎの事後検定にかけた。
【００４４】
量ｐ≦０，０５を、有意な結果と考慮した。
【００４５】
結果
１）植物化学（核磁気共鳴−ＲＭＮ）
アルカロイド１を、ＦＢを用いてＣＣＤＰにより単離した。アルカリ２を、ＦＣ及びＦＤから単離した。また、アルカロイド３もＦＤから単離することができた。
【００４６】
物質１、２及び３（表２）に対するＣＤＣｌ３における１Ｈ及び１３Ｃ ＲＭＮスペクトルは、Ｅ．アルカリ骨格の特性シグナルの存在を示した。この点に関して、水素Ｈ−１４及びＨ−１７に関する芳香族プロトンの２つの一重線、並びに炭素Ｃ−１５及びＣ−１６位のメトキシル水素に起因する２つの一重線の徴候を特定することができた。オレフィンプロトンの３つの徴候の存在は（幅広一重線（ｓｉ）、Ｈ−７；幅広二重線（ｄｉ）、Ｈ−１；２つの二重線（ｄｄ）、Ｈ−２）、エリトリン骨格のジエン酸系の水素に起因する可能性がある。
【００４７】
Ｓａｒｒａｇｉｏｔｏら（１９８２）は、それぞれδ１２５．３及びδ１３１．２にＣ−１及びＣ−２の共鳴を報告した。しかし、本発明の進展において、ＨＭＱＣ二次元スペクトルの化学シフト（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）の間の関係は、これらの共鳴がそれぞれδ１３１．５及びδ１２５．５で生じることを実証した。化学シフトと結合定数の値を表１に示す。
【表１】
【００４８】
１．１）エリトラルチン
Ｅ．骨格の水素特性シグナルの特定後（表２）、物質１のみが、Ｃ−３に位置するメトキシルの３つの水素に起因するシグナルδ３，２４を示すことに注目した。アルカロイド１１−酸素に関する文献で見られるデータにより、１Ｈ（４，６４の幅広三重線（ｔ））及び１３Ｃ（δ６４．５５）のＲＭＮスペクトルで見られたシフト、並びにＨＭＱＣ試験で得られた相関を考えると、Ｃ−１１の１つのヒドロキシルの存在について注目した。この点に関して、アルカロイド１をエリトラルチンであると同定した。一方、以前の研究とは異なり、Ｈ１０ａ−１１ｅ（Ｊ＝３．５４Ｈｚ）とＨ１０ｅ−１１ｅ（Ｊ＝３．０７Ｈｚ）の間の結合定数の値から、Ｃ−１１のヒドロキシル基のエクアトリアル配向（ｅｑｕａｔｏｒｉａｌ ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）が示唆された。
【００４９】
ＥＭの花の粗抽出物から単離したアルカロイドのエリトラルチンの化学構造を以下に示す。
【化２】
【００５０】
１．２）エリトラビン
以前の物質とは異なり、物質２の１Ｈ ＲＭＮスペクトルは、Ｃ−３位でメトキシルのシグナルを示さなかった（表２）。１３Ｃのスペクトルのδ６３．７３で観察された化学シフトに関連したδ４，３７で観察された多重線（ｍ）は、この位置での１つの酸素置換の存在を示唆している。
【００５１】
Ｃ−１１位において、δ２．９で観察された２つの二重線（ＪＨ１１ａｘ−１０ａｘ＝１０，０Ｈｚ；ＪＨ１１ａｘ−１１ｅｑ＝６，５Ｈｚ）及びδ２．６５〜２．６９領域で観察された多重線は、それぞれ軸方向のＨ−１１（ａｘ）及びエクアトリアルの（ｅｑ）に起因していた。本物質は、いまだにＥＭで単離されていないエルヒトリニック（ｅｒｈｉｔｒｉｎｉｃ）アルカロイドであるエリトラビンと同定された（図４）。
【００５２】
ＥＭの花の粗抽出物から単離したアルカロイドのエリトラビンの化学構造を以下に示す。
【化３】
【００５３】
１．３）１１−ヒドロキシ−エリトラビン（１１−ＯＨ−エリトラビン）
１１−ＯＨ−エリトラビンに関する１ＨのＮＭＲスペクトルにおいて（表２）、エリトラビンと類似して、Ｃ−３位のメトキシル水素の徴候は確認されなかったが、Ｃ−３位に起因する酸素置換に関するδ４．５で多重線が唯一確認された。エリトラルチンで観察された同じ方法で、ＮＭＲ １Ｈ及び１３Ｃのスペクトルは、Ｃ−１１でのヒドロキシルの存在に起因したそれぞれδ４．７４（ｔ）及びδ６３．６９での化学シフトを示した。これらの結果は、初めての報告であり、したがって、物質３は、新規なエリトリンアルカロイドであると認められ、１１−ヒドロキシ−エリトラビン（１１−ＯＨ−エリトラビン）と名付けられた。
【表２】
【００５４】
Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の花の粗抽出物から単離されたアルカロイド１１−ＯＨ−エリトラビンの化学構造を以下に示す。
【化４】
【００５５】
２）薬理学
粗抽出物
２．１）高Ｔ迷路（つまり高架式Ｔ字迷路試験）
表３で示したように、ＥＭの標準粗抽出物の急性処置は、高Ｔ迷路のオープンアームでの抑制回避における動物の能力を阻害した。
【００５６】
二元配置ＡＮＯＶＡは、処置（Ｆ（５，４９）＝５，４４；ｐ＜０，０００１）及び試行（Ｆ（４，１９６）＝２７，３７；ｐ＜０，０００１）の有意な効果を示したが、処置と試行の間の相互作用では示さなかった（Ｆ（２０，１９６）＝０，８７、ｐ＝０，６２８）。一元配置ＡＮＯＶＡは、ベースラインの潜時（ＬＢ）（Ｆ（５，４９）＝２，３４；ｐ＝０，０５６）、回避１（Ｅ１）（Ｆ（５，４９）＝３，９７；ｐ＝０，００４）、回避２（Ｅ２）（Ｆ（５，４９）＝３，７５；ｐ＝０，００５）；回避３（Ｅ３）（Ｆ（５，４９）＝３，３９；ｐ＝０，０１）及び回避４（Ｅ４）（Ｆ（５，４９）＝２，６２；ｐ＝０，０３）において、処置群間に有意差があることを示した。
【００５７】
表３において、Ｄｕｎｃａｎの事後検定により、対照群と比較して、群間差を観察することができる。
【００５８】
高Ｔ迷路のオープンアームからの逃避の測定において、一元配置ＡＮＯＶＡは、群間で有意差があることを示した（Ｆ（５，４９）＝３，４８；ｐ＝０，００９）。Ｄｕｎｃａｎの事後検定は、対照群と比較して、この相違がＥＭ４００ｍｇ／ｋｇの用量で処置した群により示されたクローズドアームへのオープンアームの逃避潜時の減少に起因することを示した（表３）。
【表３】
【００５９】
２．２）運動活性−アリーナ
アリーナでの動物の運動活性の測定値は、ＥＭの粗抽出物のいずれの用量による急性処置によっても変化していない（表４）。
【００６０】
一元配置ＡＮＯＶＡは、混合数の測定（Ｆ（５，４９）＝０．７８；ｐ＝０．５６）、又は調査数の測定（Ｆ（５，４９）＝１．９０；ｐ＜０．１１）においても、いかなる有意な群間差も示さなかった。
【表４】
【００６１】
３）エリトリニクス（ｅｒｉｔｒｉｎｉｃｓ）アルカロイドに富む精製画分（Ｆ２）
３．１）高Ｔ迷路
Ｆ２による急性処置は、表５に示すように、高Ｔ迷路のオープンアームにおいて抑制回避の習得を阻害した。二元配置ＡＮＯＶＡは、処置（Ｆ（４，４０）＝７．００；ｐ＜０．０００１）及び試行（Ｆ（４，１６０）＝１１．１８；ｐ＜０．０００１）の有意な効果を示したが、処置と試行の間の相互作用（Ｆ（１６，１６０）＝１．４８、ｐ＝０．１１２）では示さなかった。一元配置ＡＮＯＶＡは、ＬＢ（Ｆ（６，６９）＝２．７；ｐ＝０．０２）、Ｅ１（Ｆ（６，６９）＝４．８６；ｐ＜０．０００１）、Ｅ２（Ｆ（６，６９）＝７．４９；ｐ＜０．０００１）；Ｅ３（Ｆ（６，６９）＝５．６０；ｐ＜０．０００１）及びＥ４（Ｆ（６，６９）＝７．８３；ｐ＜０．０００１）において、処理群間に有意差が生じることを示した。Ｄｕｎｃａｎの事後検定による群間差を、表５で観察することができる。
【００６２】
一元配置ＡＮＯＶＡは、高Ｔ迷路のオープンアームの逃避の測定において、群間に有意差が生じない（Ｆ（４，４０）＝０．９６；ｐ＝０．４６）ことを示した（表５）。
【表５】
【００６３】
３．２）運動活性−アリーナ
アリーナにおける動物の運動活性の測定は、Ｆ２のいずれの用量での急性処置によっても変化しなかった（表６）。
【００６４】
一元配置ＡＮＯＶＡは、混合数の測定（Ｆ（４，４０）＝０．３０；ｐ＝０．８７）、又は上昇数の測定（Ｆ（４，４０）＝０．８１；ｐ＝０．５２）においても、いかなる有意な群間差も示さなかった。
【表６】
【００６５】
単離アルカロイドの新規な結果
１）エリトラビン
明暗移行（ｃｌｅａｒｌｙ−ｄａｒｋ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）モデルにかけたハツカネズミにおいてエリトラビンで得られた結果を表７に示す。
【００６６】
一元配置ＡＮＯＶＡは、照明された区画で費やした時間の測定において、処置の有意な効果を示した（Ｆ（３，３９）＝４．２７；Ｐ＝０．０１）。Ｄｕｎｃａｎの事後検定は、エリトラビンの３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの用量及びＤＺＰの経口投与で処置した動物群間で、照明された区画内で費やした時間が、対照群間の時間より明白に長いことを示した。２つの区画間の移行数の測定に関して、一元配置ＡＮＯＶＡは、有意な群間差を示さなかった（Ｆ（３，３９）＝１．１３；Ｐ＝０．３４）。
【表７】
【００６７】
２）１１−ＯＨ−エリトラビン
表８において、１１−ヒドロキシ−エリトラビンの明暗移行モデルで得られた結果を示す。
【００６８】
一元配置ＡＮＯＶＡは、照明された区画の動物によって費やされた時間（Ｆ（３，３８）＝３．１４；Ｐ＜０．０５）及び２つの区画間の移行数（Ｆ（３，３８）＝３．３６；Ｐ＜０．０５）の測定において、処置の有意な効果を示した。Ｄｕｎｃａｎの事後検定は、１０ｍｇ／ｋｇの用量の１１−ヒドロキシ−エリトラビン及びＤＺＰが、対照群と比較して、照明された区画内で費やした時間を明白に増加させることを明らかにした。また、モデルの区画間の移行数が、３ｍｇ／ｋｇの用量の１１−ヒドロキシ−エリトラビンの投与によって増加した（Ｐ＜０．０５）。
【表８】
【００６９】
３）エリトラルチン
エリトラルチンにより明暗移行モデルで得られた効果を、表９で示したデータにより見ることができる。
【００７０】
一元配置ＡＮＯＶＡは、照明された区画で動物により費やされた時間の測定において、有意な効果を示した（Ｆ（３，４９）＝３．６６；Ｐ＜０．０１）。Ｄｕｎｃａｎ検定によれば（Ｐ＜０．０５）、この効果は、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物群でのみ観察された。しかし、一元配置ＡＮＯＶＡは、モデルの２つの区画間の移行の測定における処置の有意な効果を示さなかった（Ｆ（３，４９）＝１．１９；Ｐ＜０．３１）。
【表９】
【００７１】
エリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビンの３種のエリトリンアルカロイドを、エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ ｍｕｌｕｎｇｕ）の粗水アルコール抽出物から単離した。以前に、Ｓａｒｒａｇｉｏｔｏら（１９８１）は、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）のメタノール粗抽出物でエリトラチン、Ｎ−オキシド−エリトラルチン、エリソトリン及びＮ−オキシド−エリソトリンの存在をすでに報告した。しかし、このｇＨＭＱＣの二次元試験によって、炭素Ｃ−１及びＣ−２の結合定数に起因した値が、本研究により訂正された。
【００７２】
エリトラビンは、Ｅ．フォルケルシ（Ｅ．ｆｏｌｋｅｒｓｉｉ）（ＭＩＬＬＩＮＧＴＯＮら、１９７３）及びＥ．コクレアタ（Ｅ．ｃｏｃｈｌｅａｔａ）（ＣＨＡＷＬＡら、１９８５）の種子抽出物から、すでに単離された。１１−ＯＨ−エリトラビンの単離については、文献における最初の報告である。
【００７３】
本発明の結果は、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の高純度アルカロイド精製画分が、高Ｔ迷路の不安動物モデルに対して抗不安作用を示すことを明らかにしている。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の粗抽出物の抗不安作用は、高Ｔ迷路のオープンアームからの逃避としての回避の減少として観察された。短期間に投与した１００、２００及び４００ｍｇ／ｋｇの用量は、オープンアームの抑制回避の習得を阻害した。これらの結果は、すべてのマウスに対する高Ｔ迷路での回避の測定において、２００ｍｇ／ｋｇの用量でもＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物の抗不安作用を実証したエビデンスを確認するものである（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）。また、この同じ研究において、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の抽出物の抗不安作用が、明暗移行モデルに関係があった（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）。２００及び４００ｍｇ／ｋｇの用量を、マウスに短期間投与すると、２つのモデル区画の間の移行及び照明された区画での動物が費やす時間が増加することが観察された。
【００７４】
ＢＤＺ、ジアゼパム及びＡ型のセロトニン受容体アゴニスト、ブスピロン（ＬＡＤＥＲ、１９９８；ＤＡＶＩＤＳＯＮ ＪＲ．、２００１；ＲＩＣＫＥＬＳら、２００１）のような全般性不安の治療のための薬物療法に使用される一部の化合物を考えると、高Ｔ迷路のオープンアームの抑制回避の測定（ＧＲＡＥＦＦら、１９９３；ＶＩＡＮＡら、１９９４；ＧＲＡＥＦＦら、１９９８；ＣＡＲＶＡＬＨＯ ＮＥＴＴＯ及びＮＵＮＥＳ ＤＥ ＳＯＵＺＡ、２００４）及び明暗移行モデル（ＭＥＲＬＯ ＰＩＣＨ及びＳＡＭＡＮＩＮ、１９８９；ＣＨＡＵＬＯＦＦら、１９９７；ＨＡＳＣＯＥＴ及びＢＯＵＲＩＮ、１９９８）で抗不安作用を示し、一部の著者らは、これらの試験が全般性不安研究に関する予知的妥当性（ｐｒｅｖｉｓｉｏｎ ｖａｌｉｄｉｔｙ）を示すことを示唆している（ＧＲＡＥＦＦら、１９９３；ＶＩＡＮＡら、１９９４；ＧＲＡＥＦＦら、１９９８；ＧＲＡＥＦＦ及びＺＡＮＧＲＯＳＳＩ、２００２；ＢＯＵＲＩＮ及びＨＡＳＣＯＥＴ、２００３）。
【００７５】
主要な物質としての高純度エリトリンアルカロイド精製画分のＦ２により得られた結果は、オープンアームの抑制回避の測定において抗不安作用を実証した。３、６、１０及び１７ｍｇ／ｋｇの用量でのＦ２の短期間投与は、使用した標準薬物、ジアゼパムと同様に、抑制回避の習得を阻害し、このことは抗不安作用を示している。これらの結果は、粗抽出物で観察された抗不安作用が、その組成内のエリトリンアルカロイドの存在に関連があるという結論を強調するものである。このことは、明暗移行モデルにより認められた試験に対して、単離アルカロイドにより認められた試験により確認することができる。
【００７６】
ＧＡＢＡ作動及びセロトニン作動薬物研究のための古典的不安動物モデルの明暗移行試験を、エリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビンの抗不安作用の評価のために使用した。
【００７７】
照明された区画で動物により費やされた時間の測定に対する標準粗抽出物（１００及び２００ｍｇ／ｋｇ）並びにアルカロイドのエリトラビン（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）及び１１−ヒドロキシ−エリトラビン（１０ｍｇ／ｋｇ）の抗不安作用が観察された。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物における本モデルでの肯定的な結果が、最近報告された（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）。２００及び４００ｍｇ／ｋｇの用量を、マウスに短期間投与すると、モデルの２つ区画間の移行及び照明された区画での動物が費やす時間が増加することが観察された。
【００７８】
また、本発明において、低用量（３ｍｇ／ｋｇ）で投与した１１−ヒドロキシ−エリトラビンにより、モデルの２つの区画間の移行が増加することが観察された。この移行の増加は、非阻害行動の結果である抗不安作用と考慮することができ、動物の活動の刺激効果（アリーナでの運動活性試験に対する反応が増加しない時間）と考慮することはできない。以下のように結論付けることができる。
【００７９】
本発明は、エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ Ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール抽出物（ＥＭ）（１００〜４００ｍｇ／ｋｇ）並びにＥＭから単離したアルカロイド、１１−ＯＨ−エリトラビン、エリトラビン及びエリトラルチン（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）を経口的に投与したときの抗不安作用を実証した、高Ｔ迷路により得られた新しい結果について述べた。
【００８０】
ＥＭ及び試験物質が動物の運動活性に影響しないことは、アリーナ試験によって得た記載の結果により実証された。
【００８１】
この結果は、少なくとも総エリトリンアルカロイドの０．１％を含む粗抽出物、並びに別の濃度の低いアルカロイド並びに別の極性及び無極性物質を上回る少なくとも総エリトリンアルカロイドの２０％及びエリトリンアルカロイドエリトラビンの１０％を含む精製画分（Ｆ２）も、ハツカネズミの運動活性を変化させることなくＬＴＥ（３〜３０ｍｇ／ｋｇ；ｖ．ｏ）で抗不安作用を示すことを明らかにした。
【００８２】
インビトロ薬理学的スクリーニングの古典的器具である明暗移行モデルにより得られた結果は、１１−ＯＨ−エリトラビン及びエリトラビンが、３及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で経口により投与すると、抗不安作用を示すことを実証した。
【００８３】
予備的急性毒性試験（７日間、経口）は、用量（２００〜３，６００ｍｇ／ｋｇ）を使用して、粗抽出物がオス又はメスのハツカネズミの死亡を引き起こさず、したがって毒性が低いことを実証した。
【００８４】
したがって、本明細書のデータは、エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ Ｍｕｌｕｎｇｕ）の単離アルカロイド（すなわち、１１−ＯＨ−エリトラビン、エリトラビン及びエリトラルチン）が抗不安作用に関連する主要な活性成分であり、これらは粗抽出物又は精製画分（Ｆ２）で投与するときですらこの活性を維持することを示した以前の結果を確証するものであり、自然の形態での本植物の使用に関する共通の問題に直面することなしに、標準化され、特定の治療の要求に対する適切な薬理作用を有する医薬組成物の調製を提供することを越えて、本植物の鎮痛薬としての広く一般的な普及を説明するものである。このことを越えて、単離アルカロイド又は高純度アルカロイド精製画分のいずれかからなる試験により観察することができる、以前の研究で観察された粗抽出物の抗不安作用が、その組成内にエリトリンアルカロイドが存在する理由によるものであると言うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール粗抽出物の抽出及び分画化、並びにＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール粗抽出物を用いたアルカロイドのエリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビンの単離の過程の一般的な説明スキームである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コリン作動、セロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動系に作用する分子に関する。より具体的には、本発明は、抗不安薬の調製に有用なエリトリン副産物に関する。また、前記分子を含む医薬組成物及び前記医薬組成物を調製する方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ Ｍｕｌｕｎｇｕ）（マメ科コチョウ亜科（Ｐａｐｉｌｉｏｎａｃｅａｅ−Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓｅａｅ）は、赤い花を付ける高木（高さ１０〜１４メートル）で、パラナ（Ｐａｒａｎａ）盆地の半落葉広葉樹林、並びに主にサンパウロ州の西部地域及びミナス（Ｍｉｎａｓ）三角地帯の低木地地域に生育する（ＬＯＲＥＮＺＩ、１９９２）。この植物の樹皮は、地元住民に精神安定薬及び鎮静薬として使用されている。これは、一般にムルング（ｍｕｌｕｎｇｕ）、サンゴムルング、サンゴ低木（民族名、特に、カパ−ホメン（ｃａｐａ−ｈｏｍｅｍ）、スイナ−スイナ（ｓｕｉｎａ−ｓｕｉｎａ）、チリセイロ（ｔｉｒｉｃｅｉｒｏ）など）として知られている（ＬＯＲＥＮＺＩ、１９９２）。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）、Ｅ．ヴェルティナ（Ｅ．ｖｅｌｕｔｉｎａ）、Ｅ．クリタ−ガリ（Ｅ．ｃｒｉｔａ−ｇａｌｌｉ）、Ｅ．ポエピギアナ（Ｅ．ｐｏｅｐｐｉｇｉａｎａ）、Ｅ．フスカ（Ｅ．ｆｕｓｃａ）、Ｅ．ファルカタ（Ｅ．ｆａｌｃａｔａ）、Ｅ．スペキオサ（Ｅ．ｓｐｅｃｉｏｓａ）及びＥ．ヴェルナ（Ｅ．ｖｅｒｎａ）のエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）の８つの変種が、ブラジルで発見されている（ＬＯＲＥＮＺＩ、１９９２）。
【０００３】
また、鎮痛薬、精神安定薬として、並びに緩下薬、抗炎症薬及び抗利尿薬として民間での使用も知られているエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）属の他の種の植物化学及び薬理学的特性を確認するために多くの研究が行われている（ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）種に関する研究が不足しているにもかかわらず、その抽出物は、ブラジル及び国際的製薬市場で市販されている植物療法製剤の組成の一部である。しかし、製品の質に関していかなる標準化もされておらず、消費者の健康に対してリスクをもたらす恐れがある。
【０００４】
植物化学
エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の研究に関する関心は、Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ及びＡｌｔａｍｉｒａｎｏが、Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ））の種子抽出物の薬理作用がｄ−ツボクラリン（Ｃｈｏｎｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｔｏｍｅｎｔｏｓｕｍから抽出される物質）の作用と類似していることを発見した１８７７年に始まった（ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＨＩＤＥＲら、１９８６；ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。その時以来、異なるエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の抽出物の植物化学及び薬理学的特性についての調査が実施された。数年後、様々なエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の抽出物で示された薬理作用が確認されてから、調査は、この種類の植物のアルカロイドを単離し、同定することへ向けられた（ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯら、１９８１）。そのような時まで、薬理学的試験が粗抽出物に関して実施された。１９３７年、Ｆｏｌｋｅｒｓ及びＭａｊｏｒ（１９３７）は、Ｅ．アメリカーナ ミル（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ Ｍｉｌｌ．）の種子についての化学的調査を実施し、ｄ−ツボクラリンのコリン作動性活性と同等の活性を示した結晶性アルカロイド（エリトロイジン）を単離した。その後の解析（ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ及びＧＲＵＮＤＯＮ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３）では、エリトロイジンがα−エリトロイジン及びβ−エリトロイジンと命名された２種の異性体アルカロイドの混合物であり、β−エリトロイジンは、末梢のニコチン受容体に拮抗する能力により、コリン作動性活性の原因であることを示した（ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＨＩＤＥＲら、１９８６；ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。
【０００５】
Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ）のα及びβ−エリトロイジンを単離、並びにその薬理学的特性の発見後、他のエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の研究についての関心が高まり、その結果、新規なＥ．骨格アルカロイド（ｓｋｅｌｅｔｏｎ ａｌｋａｌｏｉｄ）を得た（ＦＯＬＫＥＲＳ及びＫＯＮＩＵＳＺＹ、１９４０；ＦＯＬＫＥＲＳら、１９４４；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ及びＧＲＵＮＤＯＮ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３；ＴＡＮＤＯＮら、１９６９；ＩＴＯら、１９７０；ＢＡＲＴＯＮら、１９７０；ＧＨＯＳＡＬ、１９７０；ＧＨＯＳＡＬら、１９７１；ＩＴＯら、１９７１；ＭＩＡＮＡら、１９７２；ＧＨＯＳＡＬら、１９７２ ａ、ｂ；ＢＡＲＴＯＮら、１９７３；ＩＴＯら、１９７３、ａ、ｂ、ｃ、ｄ；ＧＨＯＳＡＬ及びＳＲＩＶＡＳＴＡＶＡ、１９７４；ＭＩＬＬＩＮＧＴＯＮら、１９７４；ＧＡＭＥＳら、１９７４；ＩＴＯら、１９７６；ＢＡＲＡＫＡＴら、１９７７；ＥＬＯＬＥＭＹら、１９７８；ＡＨＭＡＤら、１９７９；ＴＩＷＡＲＩ及びＭＡＳＳＯＤ、１９７９ ａ、ｂ；ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯ、１９８１）。
【０００６】
エリトリンアルカロイドの基本的構造の解明は、分解及び合成によって達成された（ＧＲＵＮＤＯＮ及びＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ、１９５３；ＧＲＵＮＤＯＮら、１９５３；ＷＥＩＮＳＴＯＣＫ及びＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３）。スピロアミン骨格の存在は、以下に一般式を示す、これらアルカロイドの構造において証明され、後に続く新規な化合物の同定を促進した。
【化１】
【０００７】
この構造の解明により、新規な化合物のその後の同定を促進した。現在、以下の３種類のエリトリンアルカロイドが知られている。１）ジエノイド（ｄｉｅｎｏｉｄｓ）は、環Ａ及びＢにおいてジエン酸系を呈し；２）アルカロイドは、環Ａにおいて二重結合Δ１，６を有し；３）第３群のエリトリンアルカロイドは、エリソジエノン、３−デスメトキシエリトラチジノン、α−エリトロイジン及びβ−エリトロイジンを含む。また、エリトリン骨格を呈していない特定のエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種のいくつかのアルカロイドが単離されており、これらはオリエンタリン、Ｎ−ノオリエンタリン、プロトシノメニン、Ｎ−ノルプロトシノメニン、イソボルジン、エリビジン、スコウレリン、コレキシミン、ヒパホリン、コリンを含む。
【０００８】
ドライフラワーから調製されたエタノール抽出物を用いたＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）に関する植物化学的研究では、５種のアルカロイド（エリソトリナ、Ｎ−エリソトリナ酸化物、エリトラルチン、Ｎ−エリトラルチン酸化物及びヒパホリン）及びテルペノイド、フィトールを単離した（ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯら、１９８１；ＳＡＲＲＡＧＩＯＴＯ、１９８１）。また、最近の植物化学的研究では、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種が、フラバノン、イソフラバノン、イソフラボン及びプテロカルパンなどの他のクラスの物質も豊富であることを実証している（ＤＡ−ＣＵＮＨＡら、１９９８；ＴＡＮＡＫＡら、１９９６、１９９７ ａ、ｂ；１９９８；２００１；ＯＨら、１９９９；ＹＥＮＥＳＥＷら、２０００；ＮＫＥＮＧＦＡＣＫら、２００１）。
【０００９】
薬理活性
エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）の主要な薬理作用の１つは、ｄ−ツボクラリンの作用と比較されているコリン作動系に対する末梢活性である（ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＨＩＤＥＲら、１９８６；ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＩＬＡＲら、２０００）。本作用は、Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ）（ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥ及びＧＲＵＮＤＯＮ、１９５３；ＢＯＥＫＥＬＨＥＩＤＥら、１９５３）及びＥ．トロニアナ（Ｅ．ｔｈｏｌｌｏｎｉａｎａ）（ＣＨＡＷＬＡら、１９８５）から単離したニコチン様アンタゴニスト受容体（ＨＩＤＥＲら、１９８６）であるアルカロイドジヒドロ−β−エリトロイジン（ＤＨＢＥ）に起因した。より最近、インビトロにおいて、ＤＨＢＥが、セロトニン作動性３アンタゴニスト受容体（５−ＨＴ３）として特徴付けられた（ＥＬＳＥＬＥら、１９９３）。また、セロトニン作動系の活性が別の研究で観察されており（ＲＯＧＥＲら、２００１）、ここでは５−ＨＴ３受容体のアンタゴニストの主な活性の１つである血小板セロトニンのカルシウム依存的放出を、Ｅ．ヴェスペルティリオ（Ｅ．ｖｅｓｐｅｒｔｉｌｉｏ）の粗抽出物が阻害することが実証された。しかし、大部分の研究は、依然として、観察された活性において関与する物質の検証なしに、異なるエリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）種の粗抽出物を用いて実施されている。中枢神経系に対する活性の例として、抗痙攣、催眠、麻酔、鎮静及び抗不安作用を挙げることができる（ＧＨＯＳＡＬら、１９７２；ＨＡＲＧＲＥＡＶＥＳら、１９７４；ＲＡＴＮＡＳＯＯＲＩＹＡ及びＤＨＡＲＭＡＳＩＲＩ、１９９９；ＯＮＵＳＩＣら、２００２、２００３）。
【００１０】
Ｅ．ヴェルティナ（Ｅ．ｖｅｌｕｔｉｎａ）に関する研究では、水アルコール抽出物による急性処置が、オープンフィールド検査（２５０及び５００ｍｇ／ｋｇの用量の経口摂取）で、マウスの活性を減少し、更に中枢神経系に対する抑制作用を示す、ペントバルビタールにより誘導される睡眠期間及びピロカルピン誘導痙攣の開始期間（５００及び１，０００ｍｇ／ｋｇの用量の経口摂取）を増加することを実証した（ＣＡＢＲＡＬら、２０００）。別の研究では（ＧＡＲＩＮ−ＡＧＵＬＩＡＲら、２０００）、Ｅ．アメリカーナ（Ｅ．ａｍｅｒｉｃａｎａ）（３ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ）のヘキサン画分による急性処置が、ジアゼパムと同様に、オスマウスにおける攻撃行動を減少することを明らかにした。最近、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール抽出物に関する研究（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）では、２００ｍｇ／ｋｇ（経口摂取）の用量による急性処置が、高架式Ｔ字迷路試験での抑制回避動作中のマウスに対して、ベンゾジアゼピン抗不安薬（ＢＤＺ）、ジアゼパムと同等の抗不安作用を示すことが観察された。また、ＯＮＵＳＩＣ及び共同研究者ら（２００２）は、明／暗移行モデルにおいて、同じ用量で、明るい区画での滞在の長さの場合のように、２つのモデル区画の間の移動数でＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の抗不安作用を観察した。別の研究では、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物による慢性処置の経口摂取（９日）により、５０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇの用量で、高架式Ｔ字迷路のオープンアーム部からの逃避の場合のように、抑制回避動作で抗不安作用を示した（ＯＮＵＳＩＣら、２００３）。また、明／暗移行モデルにおいて、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物が、５０ｍｇ／ｋｇの用量で１４日間の慢性処置後、抗不安薬作用を示した（ＯＮＵＳＩＣら、２００３）。
【００１１】
これら非常に多くのアプローチにもかかわらず、現在まで、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）の単離された有効成分の粗抽出物若しくは精製画分の形態のいずれかで知られる標準の調製物から、又はその化学合成から製造された抗不安薬の開発、或いはそのような薬物を調製するための方法に関する公知の報告は存在しない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の目的は、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）属の植物から誘導された物質を含む標準化された医薬組成物を提供することである。ある態様では、本発明の医薬組成物は、コリン作動、セロトニン作動及びＧＡＢＡ作動系において、直接的又は間接的に作用する、標準粗抽出物、Ｅ．アルカロイドの高純度精製画分（Ｆ２）又は単離アルカロイドのエリトラルチン、エリトラビン及び１１−ヒドロキシエリトラビン、更にこれらの組合せを含む。
【００１３】
別の態様では、関連の医薬組成物及びこれらを含む医薬組成物を得る方法もこれに相当する。
【００１４】
ある態様では、本発明の粗抽出物、アルカロイドの高純度精製画分（Ｆ２）及び分子が、動物モデルで抗不安薬としての活性を示すことが明らかになった。したがって、本発明の目的は、抗不安薬の使用を必要とする不安又は他の臨床症状に関連する障害の治療において、抽出物、画分及び／又は分子を提供することである。
【００１５】
別の態様では、標準粗抽出物の調製、アルカロイドの高純度精製画分（Ｆ２）及び分子の単離及び構造的特徴付け、更に本発明の薬理学的活性の評価は、不安障害の治療において用いられる標準化された医薬組成物の開発を可能にする。したがって、本発明の１つの別の目的は、抗不安特性を有する天然製剤及び分子を含む医薬組成物を提供することである。
【００１６】
更に別の態様では、本発明の抽出物の精製、精製画分並びに分子の単離及び／又は合成は、挙げられた天然製剤及び／又は分子を含む医薬組成物の円滑な製造方法を提供する。したがって、本発明の更なる目的は、医薬組成物の製造方法を提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明の目的のために、「医薬組成物」は、ホメオスタシスを維持及び／又は回復させるために作用する、予防的、緩和的及び／又は治療的目的を有する有効成分を含むすべて及びいずれかの組成を意味し、局所的、非経口的、経腸的及び／又はくも膜下腔内に投与することができる。
【００１８】
本発明において言及される医薬組成物は、エリトリン（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ）副産物のクラスに属し、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の粗抽出物又は精製画分から単離されたエリトラルチン及び／若しくはエリトラビン又は化学合成物を場合によって含む、１１−ＯＨ−エリトラビン、薬学的に許容されるそのイソセラル（ｉｓｏｔｈｅｒａｌ）、塩、副産物及び／又は溶媒和物を含む。
【００１９】
本発明の化合物の治療適用性を、様々な過程で実行した。実施した実験及びそれぞれの結果は、単に実施例として以下に示したもので、添付の請求項の範囲を逸脱するものではない。
【実施例】
【００２０】
（実施例１）
植物化学
植物収集及び抽出物調製
成木の花を、例えば、アララクアラ（Ａｒａｒａｑｕａｒａ）（ＳＰ）地域において、冬季に収集した。新鮮な植物材料（６ｋｇ）を、エタノール／水（ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ）（７：３）による浸軟の工程により７日間抽出にかけた。次に、この抽出物をろ過し、回転蒸発器（ｒｏｔａ−ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）を用いて濃縮し、乾燥水アルコール抽出物２９２ｇを得た。
【００２１】
総アルカロイドでのこの標準化を、薬局方の方法に従って、中和の容積測定により実施し、エリトラビンで表したアルカロイドで少なくとも０，１％含むと確認した。
【００２２】
分画及び化学成分の単離の生体モニター
酸塩基抽出を、粗抽出物を精製し、エリトリンアルカロイド濃縮が最適化された画分を生じさせるために実施した。このことを達成するために、乾燥水アルコール抽出物（１２０ｇ）を酢酸（１０％）水溶液に溶解し、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）による液／液抽出にかけた。
【００２３】
クロロホルム相を、水相から分離し、溶媒を蒸発させ、画分１を得た（７．８３ｇ）。次に、水相を、ｐＨ９〜１０にするために十分な量の水酸化アンモニウム（ＮＨ４ＯＨ）でアルカリ化し、再度ＣＨＣｌ３による抽出にかけた。
【００２４】
クロロホルム相を分離し、溶媒を蒸発させ、アルカロイドに富む精製画分（Ｆ２）を得た（６７０ｍｇ）。本画分をＨＰＬＣ法により評価し、少なくとも総アルカロイド２０％及びエリトラビン１０％を含むとして標準化した。また、Ｆ２を、高Ｔ迷路（つまり高架式Ｔ字迷路）の薬理学的試験において使用した。
【００２５】
（実施例２）
クロマトグラフィー、器具使用及び分光測定
段階的溶媒を、「分析のために」使用した。
【００２６】
シリカの分析的薄層クロマトグラフィー（ＣＣＤ）のために、溶媒系としてＣＨＣｌ３／メタノール（ＭｅＯＨ）（９：１）を使用した。ドラーゲンドルフ試験（Ｄｒａｇｅｎｄｏｒｆ ｔｅｓｔ）は、オープンカラムクロマトグラフィー（ＣＣＡ）（直径５ｃｍ及び高さ１５ｃｍ）にかけたＦ２において、アルカロイドに陽性であった。
【００２７】
ＣＣＡ（０，０３５〜０，０７０ｍｍ、φ６ηｍ）に、シリカ固定相として、また移動相としてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１０：０〜８：２）を使用した。分離のために、Ｆ２の６７０ｍｇを使用し、約２０ｍｌの１０１の画分を収集した。
【００２８】
ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（７：１）の移動相における分析的ＣＣＤにかけ、ドラーゲンドルフ測定で明らかにした後、１０１の画分を、画分Ａ（ＦＡ−１３６．２ｍｇ）（１〜２７）、画分Ｂ（ＦＢ−９３．４ｍｇ）（２８〜５０）、画分Ｃ（ＦＣ−１４８．３ｍｇ）（５１〜６９）、画分Ｄ（ＦＤ−２８４．５ｍｇ）（７０〜１０１）に群化した。
【００２９】
アルカロイドを単離及び精製するために、シリカ固定相（Ｍｅｒｃｋ）にフルオレセイン、移動相にトルエン、アセトン、エタノール及びＮＨ４ＯＨ（４５：４５：７：３）を用いた分取薄層クロマトグラフィー（ＣＣＤＰ）を使用した。画分Ｂからエリトラルチンを単離し（４８ｍｇ）、画分Ｃ及びＤからエリトラビンを単離し（それぞれ、６１及び３４，８２ｍｇ）、画分Ｄから１１−ＯＨ−エリトラビナを単離した（３６，９８ｍｇ）。
【００３０】
ＣＣＤＰにより単離された物質の分光分析のために、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光計ヴァリアンユニット（Ｖａｒｉａｎ Ｕｎｉｔ）を５００ＭＨｚの操作で使用した。重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）を溶媒として使用した。
【００３１】
（実施例３）
薬理学
３．１ 動物試験
サンパウロ州立大学（ＵＮＥＳＰ／アララクアラ）の中央動物研究所（ｃｅｎｔｒａｌ ａｎｉｍａｌ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）由来の体重２５〜３５ｇのスイス系マウスを使用した。
【００３２】
動物を、床に木のかんな屑の敷かれたポリプロピレン製ケージ内で、１０〜１２匹の群で飼育し、床及び水は自由に利用可能にした。動物実験室は２２±１℃の常温下で維持し、照明は午前７：００から午後７：００までの１２時間周期で管理し、湿度は５０〜６０％に維持した。
【００３３】
（実施例４）
アルカリ、標準薬物及びビヒクル中の未精製標準抽出物及び高純度精製画分
したがって、Ｆ２（３、６、１０、１７及び３０ｍｇ／ｋｇ）並びにアルカロイドのエリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビン（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）に加えて、凍結乾燥された水アルコール抽出物（５０、１００、２００及び４００ｍｇ／ｋｇ）を、強制飼養により経口摂取を通して投与した。使用した標準薬物は、２ｍｇ／ｋｇ（腹腔内（ｉ．ｐ）経由）の用量のジアゼパム（ＤＺＰ）であった。
【００３４】
すべての溶液を、塩素酸ナトリウム０．９％（０．９％ＮａＣｌ）により実験当日に調製し、１５分間超音波処理した。ジアゼパムを、０，９％ＮａＣｌ及びＴｗｅｅｎ−８０に溶解した。
【００３５】
実験は、午前１１：００から午後５：００の間に実施した。
【００３６】
実験装置及び手順
高Ｔ迷路は、透明ガラスの壁及び木の床で作成し、木の支柱により床から上に３８．５ｃｍ上げられたオープンアーム（３０×５×０．２５ｃｍ）に垂直につながれたクローズドアーム（３０×５×１５ｃｍ）からなる。本試験では、各試行の間が３０秒間隔で、５回連続した抑制回避の測定（ベースラインの潜時、回避１、２、３及び４）及び１回のオープンアームからの逃避の測定を実施した。回避測定では、動物を、クローズドアームの遠位部に配置し、４つすべての足上での、オープンアームに対するこのアームの逃避潜時を計った。逃避測定では、動物を右のオープンアームの先端に配置し、このアームからの退去時間を測定した。この測定中の迷路のアーム内における動物の最大滞在時間は、３００秒であった。各動物を試験した後、装置を２０％エタノールで洗浄した。
【００３７】
高架式Ｔ字迷路での試験直後に、偽陽性又は陰性を避けるために、動物をアリーナで運動活性（ｌｏｃｏｍｏｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）試験にかけた。
【００３８】
装置は、高さ３０ｃｍの壁に囲まれた長方形の底部（４０×４８ｃｍ）の白色ポリプロピレンボックスからなる。床は、３０の正方形（８×８ｃｍ）に再分割されている。
【００３９】
本試験において、動物をボックスの中央部に配置し、四半分領域の横断数及び伸展に伴う姿勢（ｓｔｒｅｔｃｈ−ａｔｔｅｎｄ ｐｏｓｔｕｒｅ）の数についての後の解析のために、動物の活動を５分間ビデオに記録した（ＷＡＬＳＨ及びＣＵＭＭＩＮＳ、１９７６）。
【００４０】
モデルの結果の解析
単離アルカロイドの化学構造を判定するために、１Ｈ及び１３Ｃ ＲＭＮ分光測定、並びにＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ及びＣＯＳＹ二次元分光測定を使用した。結果を、Ｅ．アルカロイドについての文献にすでに存在する情報と比較した。
【００４１】
動物モデルからの結果を、最初にＬｅｖｅｎｅの均一性検定にかけた。不均一な結果を、対数尺度に変換し、その後、統計的に解析した。
【００４２】
高Ｔ迷路から得られた結果を、処置を独立因子及び試行を従属因子として、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）にかけた。処置の効果が有意であると証明された時、データを一元配置ＡＮＯＶＡにより解析し、その後Ｄｕｎｃａｎの事後検定にかけた。
【００４３】
アリーナで得られた結果を、一元配置ＡＮＯＶＡにかけ、その後Ｄｕｎｃａｎの事後検定にかけた。
【００４４】
量ｐ≦０，０５を、有意な結果と考慮した。
【００４５】
結果
１）植物化学（核磁気共鳴−ＲＭＮ）
アルカロイド１を、ＦＢを用いてＣＣＤＰにより単離した。アルカリ２を、ＦＣ及びＦＤから単離した。また、アルカロイド３もＦＤから単離することができた。
【００４６】
物質１、２及び３（表２）に対するＣＤＣｌ３における１Ｈ及び１３Ｃ ＲＭＮスペクトルは、Ｅ．アルカリ骨格の特性シグナルの存在を示した。この点に関して、水素Ｈ−１４及びＨ−１７に関する芳香族プロトンの２つの一重線、並びに炭素Ｃ−１５及びＣ−１６位のメトキシル水素に起因する２つの一重線の徴候を特定することができた。オレフィンプロトンの３つの徴候の存在は（幅広一重線（ｓｉ）、Ｈ−７；幅広二重線（ｄｉ）、Ｈ−１；２つの二重線（ｄｄ）、Ｈ−２）、エリトリン骨格のジエン酸系の水素に起因する可能性がある。
【００４７】
Ｓａｒｒａｇｉｏｔｏら（１９８２）は、それぞれδ１２５．３及びδ１３１．２にＣ−１及びＣ−２の共鳴を報告した。しかし、本発明の進展において、ＨＭＱＣ二次元スペクトルの化学シフト（ｃｈｅｍｉｃａｌ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）の間の関係は、これらの共鳴がそれぞれδ１３１．５及びδ１２５．５で生じることを実証した。化学シフトと結合定数の値を表１に示す。
【表１】
【００４８】
１．１）エリトラルチン
Ｅ．骨格の水素特性シグナルの特定後（表２）、物質１のみが、Ｃ−３に位置するメトキシルの３つの水素に起因するシグナルδ３，２４を示すことに注目した。アルカロイド１１−酸素に関する文献で見られるデータにより、１Ｈ（４，６４の幅広三重線（ｔ））及び１３Ｃ（δ６４．５５）のＲＭＮスペクトルで見られたシフト、並びにＨＭＱＣ試験で得られた相関を考えると、Ｃ−１１の１つのヒドロキシルの存在について注目した。この点に関して、アルカロイド１をエリトラルチンであると同定した。一方、以前の研究とは異なり、Ｈ１０ａ−１１ｅ（Ｊ＝３．５４Ｈｚ）とＨ１０ｅ−１１ｅ（Ｊ＝３．０７Ｈｚ）の間の結合定数の値から、Ｃ−１１のヒドロキシル基のエクアトリアル配向（ｅｑｕａｔｏｒｉａｌ ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ）が示唆された。
【００４９】
ＥＭの花の粗抽出物から単離したアルカロイドのエリトラルチンの化学構造を以下に示す。
【化２】
【００５０】
１．２）エリトラビン
以前の物質とは異なり、物質２の１Ｈ ＲＭＮスペクトルは、Ｃ−３位でメトキシルのシグナルを示さなかった（表２）。１３Ｃのスペクトルのδ６３．７３で観察された化学シフトに関連したδ４，３７で観察された多重線（ｍ）は、この位置での１つの酸素置換の存在を示唆している。
【００５１】
Ｃ−１１位において、δ２．９で観察された２つの二重線（ＪＨ１１ａｘ−１０ａｘ＝１０，０Ｈｚ；ＪＨ１１ａｘ−１１ｅｑ＝６，５Ｈｚ）及びδ２．６５〜２．６９領域で観察された多重線は、それぞれ軸方向のＨ−１１（ａｘ）及びエクアトリアルの（ｅｑ）に起因していた。本物質は、いまだにＥＭで単離されていないエルヒトリニック（ｅｒｈｉｔｒｉｎｉｃ）アルカロイドであるエリトラビンと同定された（図４）。
【００５２】
ＥＭの花の粗抽出物から単離したアルカロイドのエリトラビンの化学構造を以下に示す。
【化３】
【００５３】
１．３）１１−ヒドロキシ−エリトラビン（１１−ＯＨ−エリトラビン）
１１−ＯＨ−エリトラビンに関する１ＨのＮＭＲスペクトルにおいて（表２）、エリトラビンと類似して、Ｃ−３位のメトキシル水素の徴候は確認されなかったが、Ｃ−３位に起因する酸素置換に関するδ４．５で多重線が唯一確認された。エリトラルチンで観察された同じ方法で、ＮＭＲ １Ｈ及び１３Ｃのスペクトルは、Ｃ−１１でのヒドロキシルの存在に起因したそれぞれδ４．７４（ｔ）及びδ６３．６９での化学シフトを示した。これらの結果は、初めての報告であり、したがって、物質３は、新規なエリトリンアルカロイドであると認められ、１１−ヒドロキシ−エリトラビン（１１−ＯＨ−エリトラビン）と名付けられた。
【表２】
【００５４】
Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の花の粗抽出物から単離されたアルカロイド１１−ＯＨ−エリトラビンの化学構造を以下に示す。
【化４】
【００５５】
２）薬理学
粗抽出物
２．１）高Ｔ迷路（つまり高架式Ｔ字迷路試験）
表３で示したように、ＥＭの標準粗抽出物の急性処置は、高Ｔ迷路のオープンアームでの抑制回避における動物の能力を阻害した。
【００５６】
二元配置ＡＮＯＶＡは、処置（Ｆ（５，４９）＝５，４４；ｐ＜０，０００１）及び試行（Ｆ（４，１９６）＝２７，３７；ｐ＜０，０００１）の有意な効果を示したが、処置と試行の間の相互作用では示さなかった（Ｆ（２０，１９６）＝０，８７、ｐ＝０，６２８）。一元配置ＡＮＯＶＡは、ベースラインの潜時（ＬＢ）（Ｆ（５，４９）＝２，３４；ｐ＝０，０５６）、回避１（Ｅ１）（Ｆ（５，４９）＝３，９７；ｐ＝０，００４）、回避２（Ｅ２）（Ｆ（５，４９）＝３，７５；ｐ＝０，００５）；回避３（Ｅ３）（Ｆ（５，４９）＝３，３９；ｐ＝０，０１）及び回避４（Ｅ４）（Ｆ（５，４９）＝２，６２；ｐ＝０，０３）において、処置群間に有意差があることを示した。
【００５７】
表３において、Ｄｕｎｃａｎの事後検定により、対照群と比較して、群間差を観察することができる。
【００５８】
高Ｔ迷路のオープンアームからの逃避の測定において、一元配置ＡＮＯＶＡは、群間で有意差があることを示した（Ｆ（５，４９）＝３，４８；ｐ＝０，００９）。Ｄｕｎｃａｎの事後検定は、対照群と比較して、この相違がＥＭ４００ｍｇ／ｋｇの用量で処置した群により示されたクローズドアームへのオープンアームの逃避潜時の減少に起因することを示した（表３）。
【表３】
【００５９】
２．２）運動活性−アリーナ
アリーナでの動物の運動活性の測定値は、ＥＭの粗抽出物のいずれの用量による急性処置によっても変化していない（表４）。
【００６０】
一元配置ＡＮＯＶＡは、混合数の測定（Ｆ（５，４９）＝０．７８；ｐ＝０．５６）、又は調査数の測定（Ｆ（５，４９）＝１．９０；ｐ＜０．１１）においても、いかなる有意な群間差も示さなかった。
【表４】
【００６１】
３）エリトリニクス（ｅｒｉｔｒｉｎｉｃｓ）アルカロイドに富む精製画分（Ｆ２）
３．１）高Ｔ迷路
Ｆ２による急性処置は、表５に示すように、高Ｔ迷路のオープンアームにおいて抑制回避の習得を阻害した。二元配置ＡＮＯＶＡは、処置（Ｆ（４，４０）＝７．００；ｐ＜０．０００１）及び試行（Ｆ（４，１６０）＝１１．１８；ｐ＜０．０００１）の有意な効果を示したが、処置と試行の間の相互作用（Ｆ（１６，１６０）＝１．４８、ｐ＝０．１１２）では示さなかった。一元配置ＡＮＯＶＡは、ＬＢ（Ｆ（６，６９）＝２．７；ｐ＝０．０２）、Ｅ１（Ｆ（６，６９）＝４．８６；ｐ＜０．０００１）、Ｅ２（Ｆ（６，６９）＝７．４９；ｐ＜０．０００１）；Ｅ３（Ｆ（６，６９）＝５．６０；ｐ＜０．０００１）及びＥ４（Ｆ（６，６９）＝７．８３；ｐ＜０．０００１）において、処理群間に有意差が生じることを示した。Ｄｕｎｃａｎの事後検定による群間差を、表５で観察することができる。
【００６２】
一元配置ＡＮＯＶＡは、高Ｔ迷路のオープンアームの逃避の測定において、群間に有意差が生じない（Ｆ（４，４０）＝０．９６；ｐ＝０．４６）ことを示した（表５）。
【表５】
【００６３】
３．２）運動活性−アリーナ
アリーナにおける動物の運動活性の測定は、Ｆ２のいずれの用量での急性処置によっても変化しなかった（表６）。
【００６４】
一元配置ＡＮＯＶＡは、混合数の測定（Ｆ（４，４０）＝０．３０；ｐ＝０．８７）、又は上昇数の測定（Ｆ（４，４０）＝０．８１；ｐ＝０．５２）においても、いかなる有意な群間差も示さなかった。
【表６】
【００６５】
単離アルカロイドの新規な結果
１）エリトラビン
明暗移行（ｃｌｅａｒｌｙ−ｄａｒｋ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ）モデルにかけたハツカネズミにおいてエリトラビンで得られた結果を表７に示す。
【００６６】
一元配置ＡＮＯＶＡは、照明された区画で費やした時間の測定において、処置の有意な効果を示した（Ｆ（３，３９）＝４．２７；Ｐ＝０．０１）。Ｄｕｎｃａｎの事後検定は、エリトラビンの３ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの用量及びＤＺＰの経口投与で処置した動物群間で、照明された区画内で費やした時間が、対照群間の時間より明白に長いことを示した。２つの区画間の移行数の測定に関して、一元配置ＡＮＯＶＡは、有意な群間差を示さなかった（Ｆ（３，３９）＝１．１３；Ｐ＝０．３４）。
【表７】
【００６７】
２）１１−ＯＨ−エリトラビン
表８において、１１−ヒドロキシ−エリトラビンの明暗移行モデルで得られた結果を示す。
【００６８】
一元配置ＡＮＯＶＡは、照明された区画の動物によって費やされた時間（Ｆ（３，３８）＝３．１４；Ｐ＜０．０５）及び２つの区画間の移行数（Ｆ（３，３８）＝３．３６；Ｐ＜０．０５）の測定において、処置の有意な効果を示した。Ｄｕｎｃａｎの事後検定は、１０ｍｇ／ｋｇの用量の１１−ヒドロキシ−エリトラビン及びＤＺＰが、対照群と比較して、照明された区画内で費やした時間を明白に増加させることを明らかにした。また、モデルの区画間の移行数が、３ｍｇ／ｋｇの用量の１１−ヒドロキシ−エリトラビンの投与によって増加した（Ｐ＜０．０５）。
【表８】
【００６９】
３）エリトラルチン
エリトラルチンにより明暗移行モデルで得られた効果を、表９で示したデータにより見ることができる。
【００７０】
一元配置ＡＮＯＶＡは、照明された区画で動物により費やされた時間の測定において、有意な効果を示した（Ｆ（３，４９）＝３．６６；Ｐ＜０．０１）。Ｄｕｎｃａｎ検定によれば（Ｐ＜０．０５）、この効果は、ＤＺＰ（２ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物群でのみ観察された。しかし、一元配置ＡＮＯＶＡは、モデルの２つの区画間の移行の測定における処置の有意な効果を示さなかった（Ｆ（３，４９）＝１．１９；Ｐ＜０．３１）。
【表９】
【００７１】
エリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビンの３種のエリトリンアルカロイドを、エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ ｍｕｌｕｎｇｕ）の粗水アルコール抽出物から単離した。以前に、Ｓａｒｒａｇｉｏｔｏら（１９８１）は、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）のメタノール粗抽出物でエリトラチン、Ｎ−オキシド−エリトラルチン、エリソトリン及びＮ−オキシド−エリソトリンの存在をすでに報告した。しかし、このｇＨＭＱＣの二次元試験によって、炭素Ｃ−１及びＣ−２の結合定数に起因した値が、本研究により訂正された。
【００７２】
エリトラビンは、Ｅ．フォルケルシ（Ｅ．ｆｏｌｋｅｒｓｉｉ）（ＭＩＬＬＩＮＧＴＯＮら、１９７３）及びＥ．コクレアタ（Ｅ．ｃｏｃｈｌｅａｔａ）（ＣＨＡＷＬＡら、１９８５）の種子抽出物から、すでに単離された。１１−ＯＨ−エリトラビンの単離については、文献における最初の報告である。
【００７３】
本発明の結果は、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の高純度アルカロイド精製画分が、高Ｔ迷路の不安動物モデルに対して抗不安作用を示すことを明らかにしている。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の粗抽出物の抗不安作用は、高Ｔ迷路のオープンアームからの逃避としての回避の減少として観察された。短期間に投与した１００、２００及び４００ｍｇ／ｋｇの用量は、オープンアームの抑制回避の習得を阻害した。これらの結果は、すべてのマウスに対する高Ｔ迷路での回避の測定において、２００ｍｇ／ｋｇの用量でもＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物の抗不安作用を実証したエビデンスを確認するものである（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）。また、この同じ研究において、Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の抽出物の抗不安作用が、明暗移行モデルに関係があった（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）。２００及び４００ｍｇ／ｋｇの用量を、マウスに短期間投与すると、２つのモデル区画の間の移行及び照明された区画での動物が費やす時間が増加することが観察された。
【００７４】
ＢＤＺ、ジアゼパム及びＡ型のセロトニン受容体アゴニスト、ブスピロン（ＬＡＤＥＲ、１９９８；ＤＡＶＩＤＳＯＮ ＪＲ．、２００１；ＲＩＣＫＥＬＳら、２００１）のような全般性不安の治療のための薬物療法に使用される一部の化合物を考えると、高Ｔ迷路のオープンアームの抑制回避の測定（ＧＲＡＥＦＦら、１９９３；ＶＩＡＮＡら、１９９４；ＧＲＡＥＦＦら、１９９８；ＣＡＲＶＡＬＨＯ ＮＥＴＴＯ及びＮＵＮＥＳ ＤＥ ＳＯＵＺＡ、２００４）及び明暗移行モデル（ＭＥＲＬＯ ＰＩＣＨ及びＳＡＭＡＮＩＮ、１９８９；ＣＨＡＵＬＯＦＦら、１９９７；ＨＡＳＣＯＥＴ及びＢＯＵＲＩＮ、１９９８）で抗不安作用を示し、一部の著者らは、これらの試験が全般性不安研究に関する予知的妥当性（ｐｒｅｖｉｓｉｏｎ ｖａｌｉｄｉｔｙ）を示すことを示唆している（ＧＲＡＥＦＦら、１９９３；ＶＩＡＮＡら、１９９４；ＧＲＡＥＦＦら、１９９８；ＧＲＡＥＦＦ及びＺＡＮＧＲＯＳＳＩ、２００２；ＢＯＵＲＩＮ及びＨＡＳＣＯＥＴ、２００３）。
【００７５】
主要な物質としての高純度エリトリンアルカロイド精製画分のＦ２により得られた結果は、オープンアームの抑制回避の測定において抗不安作用を実証した。３、６、１０及び１７ｍｇ／ｋｇの用量でのＦ２の短期間投与は、使用した標準薬物、ジアゼパムと同様に、抑制回避の習得を阻害し、このことは抗不安作用を示している。これらの結果は、粗抽出物で観察された抗不安作用が、その組成内のエリトリンアルカロイドの存在に関連があるという結論を強調するものである。このことは、明暗移行モデルにより認められた試験に対して、単離アルカロイドにより認められた試験により確認することができる。
【００７６】
ＧＡＢＡ作動及びセロトニン作動薬物研究のための古典的不安動物モデルの明暗移行試験を、エリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビンの抗不安作用の評価のために使用した。
【００７７】
照明された区画で動物により費やされた時間の測定に対する標準粗抽出物（１００及び２００ｍｇ／ｋｇ）並びにアルカロイドのエリトラビン（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）及び１１−ヒドロキシ−エリトラビン（１０ｍｇ／ｋｇ）の抗不安作用が観察された。Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）抽出物における本モデルでの肯定的な結果が、最近報告された（ＯＮＵＳＩＣら、２００２）。２００及び４００ｍｇ／ｋｇの用量を、マウスに短期間投与すると、モデルの２つ区画間の移行及び照明された区画での動物が費やす時間が増加することが観察された。
【００７８】
また、本発明において、低用量（３ｍｇ／ｋｇ）で投与した１１−ヒドロキシ−エリトラビンにより、モデルの２つの区画間の移行が増加することが観察された。この移行の増加は、非阻害行動の結果である抗不安作用と考慮することができ、動物の活動の刺激効果（アリーナでの運動活性試験に対する反応が増加しない時間）と考慮することはできない。以下のように結論付けることができる。
【００７９】
本発明は、エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ Ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール抽出物（ＥＭ）（１００〜４００ｍｇ／ｋｇ）並びにＥＭから単離したアルカロイド、１１−ＯＨ−エリトラビン、エリトラビン及びエリトラルチン（３及び１０ｍｇ／ｋｇ）を経口的に投与したときの抗不安作用を実証した、高Ｔ迷路により得られた新しい結果について述べた。
【００８０】
ＥＭ及び試験物質が動物の運動活性に影響しないことは、アリーナ試験によって得た記載の結果により実証された。
【００８１】
この結果は、少なくとも総エリトリンアルカロイドの０．１％を含む粗抽出物、並びに別の濃度の低いアルカロイド並びに別の極性及び無極性物質を上回る少なくとも総エリトリンアルカロイドの２０％及びエリトリンアルカロイドエリトラビンの１０％を含む精製画分（Ｆ２）も、ハツカネズミの運動活性を変化させることなくＬＴＥ（３〜３０ｍｇ／ｋｇ；ｖ．ｏ）で抗不安作用を示すことを明らかにした。
【００８２】
インビトロ薬理学的スクリーニングの古典的器具である明暗移行モデルにより得られた結果は、１１−ＯＨ−エリトラビン及びエリトラビンが、３及び１０ｍｇ／ｋｇの用量で経口により投与すると、抗不安作用を示すことを実証した。
【００８３】
予備的急性毒性試験（７日間、経口）は、用量（２００〜３，６００ｍｇ／ｋｇ）を使用して、粗抽出物がオス又はメスのハツカネズミの死亡を引き起こさず、したがって毒性が低いことを実証した。
【００８４】
したがって、本明細書のデータは、エリトリン ムルング（Ｅｒｙｔｈｒｉｎｅ Ｍｕｌｕｎｇｕ）の単離アルカロイド（すなわち、１１−ＯＨ−エリトラビン、エリトラビン及びエリトラルチン）が抗不安作用に関連する主要な活性成分であり、これらは粗抽出物又は精製画分（Ｆ２）で投与するときですらこの活性を維持することを示した以前の結果を確証するものであり、自然の形態での本植物の使用に関する共通の問題に直面することなしに、標準化され、特定の治療の要求に対する適切な薬理作用を有する医薬組成物の調製を提供することを越えて、本植物の鎮痛薬としての広く一般的な普及を説明するものである。このことを越えて、単離アルカロイド又は高純度アルカロイド精製画分のいずれかからなる試験により観察することができる、以前の研究で観察された粗抽出物の抗不安作用が、その組成内にエリトリンアルカロイドが存在する理由によるものであると言うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】Ｅ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール粗抽出物の抽出及び分画化、並びにＥ．ムルング（Ｅ．ｍｕｌｕｎｇｕ）の水アルコール粗抽出物を用いたアルカロイドのエリトラルチン、エリトラビン及び１１−ＯＨ−エリトラビンの単離の過程の一般的な説明スキームである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精製画分が総エリトリンアルカロイドの少なくとも２０％を含み、総エリトリンアルカロイドの少なくとも０．１％；並びに
エリトリンアルカロイドのエリトラビン、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の少なくとも１０％
を含むことを特徴とする、よく利用される野菜の粗抽出物の、脊椎動物のコリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の調整のための医薬組成物の調製における使用。
【請求項２】
一般式
【化１】
を示すことを特徴とする作用物質、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の、脊椎動物のコリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の調整のための医薬組成物の調製における使用。
【請求項３】
抗不安薬として適用される関連物質の事実を特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
精製画分が総エリトリンアルカロイドの少なくとも２０％を含み、総エリトリンアルカロイドの少なくとも０．１％；並びに
エリトリンアルカロイドのエリトラビン、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の少なくとも１０％
を含むことを特徴とする、コリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の機能障害に関連した障害の治療のための医薬組成物。
【請求項５】
薬学的に許容されるビヒクル及び一般式
【化２】
の作用物質の少なくとも１つを含むことを特徴とする、コリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の機能障害に関連した障害の治療のための医薬組成物。
【請求項６】
抗不安薬として適用される関連物質の事実を特徴とする、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項７】
エリトラルチン及び／又はエリトラビンを更に含むという事実を特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
関連作用物質を含むエリトリン ムルングの水アルコール抽出物を含む事実を特徴とする、請求項４、５又は６に記載の組成物。
【請求項９】
薬学的に許容されるビヒクルの調製ステップと；
一般式
【化３】
の少なくとも１つの作用物質、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の関連ビヒクルへの組入れステップと
を含む事実を特徴とする、脊椎動物のコリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の調整のための薬物の製造方法。
【請求項１０】
前記の関連作用物質が化学合成によって得られるという事実を特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記関連作用物質エリトラルチン及び／又はエリトラビンを、関連ビヒクルに更に組み入れるという事実を特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記関連作用物質がエリトリン属の植物の水アルコール抽出によって得られるという事実を特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記関連作用物質がエリトリン ムルング属の植物の水アルコール抽出によって得られるという事実を特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【請求項１】
精製画分が総エリトリンアルカロイドの少なくとも２０％を含み、総エリトリンアルカロイドの少なくとも０．１％；並びに
エリトリンアルカロイドのエリトラビン、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の少なくとも１０％
を含むことを特徴とする、よく利用される野菜の粗抽出物の、脊椎動物のコリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の調整のための医薬組成物の調製における使用。
【請求項２】
一般式
【化１】
を示すことを特徴とする作用物質、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の、脊椎動物のコリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の調整のための医薬組成物の調製における使用。
【請求項３】
抗不安薬として適用される関連物質の事実を特徴とする、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
精製画分が総エリトリンアルカロイドの少なくとも２０％を含み、総エリトリンアルカロイドの少なくとも０．１％；並びに
エリトリンアルカロイドのエリトラビン、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の少なくとも１０％
を含むことを特徴とする、コリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の機能障害に関連した障害の治療のための医薬組成物。
【請求項５】
薬学的に許容されるビヒクル及び一般式
【化２】
の作用物質の少なくとも１つを含むことを特徴とする、コリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の機能障害に関連した障害の治療のための医薬組成物。
【請求項６】
抗不安薬として適用される関連物質の事実を特徴とする、請求項４又は５に記載の組成物。
【請求項７】
エリトラルチン及び／又はエリトラビンを更に含むという事実を特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
関連作用物質を含むエリトリン ムルングの水アルコール抽出物を含む事実を特徴とする、請求項４、５又は６に記載の組成物。
【請求項９】
薬学的に許容されるビヒクルの調製ステップと；
一般式
【化３】
の少なくとも１つの作用物質、又はこれらの同配体、塩、誘導体及び／又は薬学的に許容されるこれらの溶媒和物の関連ビヒクルへの組入れステップと
を含む事実を特徴とする、脊椎動物のコリン作動系及び／又はセロトニン作動及び／又はＧＡＢＡ作動の調整のための薬物の製造方法。
【請求項１０】
前記の関連作用物質が化学合成によって得られるという事実を特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記関連作用物質エリトラルチン及び／又はエリトラビンを、関連ビヒクルに更に組み入れるという事実を特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記関連作用物質がエリトリン属の植物の水アルコール抽出によって得られるという事実を特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記関連作用物質がエリトリン ムルング属の植物の水アルコール抽出によって得られるという事実を特徴とする、請求項１２に記載の方法。
【図１】
【公表番号】特表２００９−５１１６１１（Ｐ２００９−５１１６１１Ａ）
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３５８５５（Ｐ２００８−５３５８５５）
【出願日】平成１８年１０月２０日（２００６．１０．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＢＲ２００６／０００２２０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４５０６０
【国際公開日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【出願人】（５０７１３０６０２）ユニベルシダデ エスタドゥアル パウリスタ ジュリオ デ メスクイタ フィルオ − ウネスプ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月２０日（２００６．１０．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＢＲ２００６／０００２２０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０４５０６０
【国際公開日】平成１９年４月２６日（２００７．４．２６）
【出願人】（５０７１３０６０２）ユニベルシダデ エスタドゥアル パウリスタ ジュリオ デ メスクイタ フィルオ − ウネスプ (2)
【Ｆターム（参考）】
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