エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びプロオピオメラノコルチンｍＲＮＡ発現上昇抑制剤
【課題】エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供する。
【解決手段】エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有せしめる。また、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有せしめる。
【解決手段】エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有せしめる。また、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有せしめる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びプロオピオメラノコルチンｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着症等は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化することにより、メラニンの産生が著しく亢進した結果として生じるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
従来の美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、近年、紫外線ＵＶ−Ｂ照射後に表皮ケラチノサイトから産生され、メラノサイトを活性化するサイトカインとして、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１、一酸化窒素（ＮＯ）等が知られており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニンの産生を抑制して美白効果を導く各種作用剤の開発が盛んに行われてきている。
【０００４】
また、循環器系疾患（例えば、心筋梗塞、高血圧、虚血性心疾患等）や腎疾患（例えば、急性腎不全等）の患者において、血中エンドセリン−１濃度が上昇していることが知られているため、エンドセリン−１の過剰分泌を抑制すること、すなわちエンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇を抑制することによって、これらの疾患の予防・治療効果が期待できると考えられる。
【０００５】
このような考えに基づき、エンドセリン−１のメラノサイトへの作用を阻害する生薬としては、カミツレ抽出物・アルテア抽出物（非特許文献１参照）等が知られており、表皮ケラチノサイトからのエンドセリン−１産生を抑制する生薬としては、ジユ抽出物（非特許文献１参照）、β−グリチルレチン酸ステアリル（特許文献１参照）等が知られている。
【０００６】
塩基性線維芽細胞増殖因子（basic Fibroblast Growth Factor，ｂＦＧＦ）は、ＦＧＦ−２とも呼ばれ、紫外線照射により角化細胞からの遊離が促進され、遊離されたｂＦＧＦが色素細胞に作用してメラニン合成を促進し、かつ色素細胞の細胞分裂をも促進すると考えられている（非特許文献２参照）。また、ｂＦＧＦは、血管新生促進因子として知られており、腫瘍細胞（特に、悪性腫瘍細胞）における血管新生を促進すること等が知られている。
【０００７】
そのため、ｂＦＧＦの異常産生は、色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、シミ、ソバカス、くすみ等の原因となると考えられる。また、ｂＦＧＦの異常産生は、腫瘍細胞における血管新生を促進し、それにより腫瘍細胞の増殖につながるものと考えられる。
【０００８】
したがって、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇を抑制することは、色素細胞の増殖を抑制し、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等を予防又は改善に有用であると考えられる。また、ｂＦＧＦの発現上昇を抑制することは、腫瘍細胞における血管新生を抑制し、腫瘍細胞の増殖を抑制することで、がん治療等に有用であると考えられる。
【０００９】
このような考えに基づき、ｂＦＧＦの作用を抑制し得るものとして、例えば、オノニスエキス等が知られている（特許文献２参照）。
【００１０】
皮膚表皮細胞から分泌されてメラニンの生成に関与するホルモンであるＡＣＴＨやメラノサイトを活性化するサイトカインとしてのα−ＭＳＨは、プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）を前駆体として産生されることが知られている。そのため、ＰＯＭＣの産生を抑制すること、すなわちＰＯＭＣｍＲＮＡの発現上昇を抑制することで、結果的にメラニンの生成を抑制することができ、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等を予防又は改善することができると考えられる。
【００１１】
従来、ＰＯＭＣの発現を抑制する作用を有するものとしては、例えば、パンテノール、塩酸ピリドキシン及びニコチン酸アミド等が知られている（特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００４−３０００４８号公報
【特許文献２】特開２００５−１０４９０４号公報
【特許文献３】特開２００７−１７６８１０号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」，２０００年，第２８巻，第９号，ｐ．６５−７１
【非特許文献２】Halaban R. et al.，J. Cell. Biol.，No.107，1988，p.1611-1619
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記課題を解決するために、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防、治療又は改善可能なエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明について説明する。
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明において「抽出物」には、植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１９】
本発明において使用する抽出原料は、スターフルーツ（学名：Averrhoa carambola L.，別名：五斂子）、ヒマラヤンラズベリー（学名：Rubus ellipticus Smith，中国名：切頭懸鉤子，別名：オニイチゴ，キミノヒマラヤキイチゴ）又は甘草である。
【００２０】
スターフルーツ（Averrhoa carambola L.）は、カタバミ科ゴレンシ属に属し、新鮮な果実は食用にされる。スターフルーツは、中国では紀元前から文献に記載され、果実の断面が星形であることからスターフルーツと呼ばれている。スターフルーツは、沖縄、中国東南部や雲南その他熱帯各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、葉部、幹部、地上部、花部、果実部、種子部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００２１】
ヒマラヤンラズベリー（Rubus ellipticus Smith）は、ヒマラヤから東南アジア、中国東南部で自生し又は栽培されているバラ科キイチゴ属に属する常緑低木であり、これらの地域から容易に入手することができる。ヒマラヤンラズベリーの新鮮な果実は香りがあり、食用にされている。抽出原料として使用し得るヒマラヤンラズベリーの構成部位としては、例えば、葉部、幹部、地上部、花部、果実部、種子部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは根部である。
【００２２】
甘草には、Glychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza inflata、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza aspera、Glychyrrhiza eurycarpa、Glychyrrhiza pallidiflora、Glychyrrhiza yunnanensis、Glychyrrhiza lepidota、Glychyrrhiza echinata、Glychyrrhiza acanthocarpa等、様々な種類のものがあり、これらのうち、いずれの種類の甘草を抽出原料として使用してもよいが、特にGlychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza inflataを抽出原料として使用することが好ましい。抽出原料として使用し得る甘草の構成部位としては、葉部である。
【００２３】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種若しくは２種以上の植物からの抽出物に含有されるエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用若しくはＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質、又はヒマラヤンラズベリーからの抽出物に含有されるｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２４】
上記抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２７】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００３０】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られたスターフルーツ抽出液又は甘草葉部抽出液はそのままでもエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができ、得られたヒマラヤンラズベリー抽出液はそのままでもエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００３１】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー又は甘草葉部からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００３２】
以上のようにして得られるスターフルーツ又は甘草葉部からの抽出物は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有しているため、それらの作用を利用してエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００３３】
また、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有しているため、それらの作用を利用してエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００３４】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤においては、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部のうちのいずれか１種の植物からの抽出物を上記有効成分として用いてもよいし、それらのうちの２種以上の植物からの抽出物を混合して上記有効成分として用いてもよい。スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる２種以上の植物からの抽出物を混合して上記有効成分として用いる場合、その配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００３５】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、そのエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、エンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患の予防・治療剤等）の有効成分として用いることもできる。
【００３６】
ヒマラヤンラズベリーからの抽出物は、そのｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、血管新生抑制剤、抗がん剤、抗腫瘍剤、がん細胞の転移を抑制する医薬組成物等）の有効成分として用いることもできる。
【００３７】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、そのＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、ＰＯＭＣｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患（例えば、ストレス性の皮膚掻痒症等）の予防・治療剤の有効成分として用いることもできる。
【００３８】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物のみからなるものでもよいし、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を製剤化したものでもよい。
【００３９】
また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物のみからなるものでもよいし、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を製剤化したものでもよい。
【００４０】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を製剤化したエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を製剤化したｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の形態としては、例えば、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等が挙げられる。
【００４１】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、必要に応じて、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する天然抽出物等を、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００４２】
また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、必要に応じて、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する天然抽出物等を、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００４３】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の患者に対する投与方法としては、皮下組織内投与、筋肉内投与、静脈内投与、経口投与、経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。
【００４４】
また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００４５】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、エンドセリン−１の産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防・改善することができる。また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にも、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４６】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ｂＦＧＦの発現の上昇を抑制することができ、これにより色素細胞の増殖やメラニンの産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等を予防又は改善することができ、美白効果を得ることができる。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、腫瘍細胞における異常な血管新生を抑制し、がん等の疾患を予防、治療又は改善をすることができる。ただし、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にもｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４７】
本発明のＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ＰＯＭＣの発現の上昇を抑制することができ、これによりメラノサイトを活性化するサイトカインとしてのα−ＭＳＨの生合成を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等を予防又は改善することができ、美白効果を得ることができる。また、本発明のＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ストレス性の皮膚掻痒症等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にもＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４９】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限されるものではない。なお、本試験例においては、スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉抽出物（試料３）として、それぞれスターフルーツ抽出液、ヒマラヤンラズベリー抽出液及び甘草葉抽出液（すべて丸善製薬社製）の凍結乾燥品を使用した。
【００５０】
〔試験例１〕エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
上記スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）について、以下のようにしてエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００５１】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte，ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
【００５２】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料１〜３，試料濃度は下記表１を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００５３】
この総ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。エンドセリン−１のｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００５４】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
結果を表１に示す。
【００５５】
【表１】
【００５６】
表１に示すように、スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが判明した。
【００５７】
〔試験例２〕ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
上記ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）について、以下のようにしてｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００５８】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００５９】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料２，試料濃度：２０μｇ／ｍＬ）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００６０】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ（basic Fibroblast Growth Factor）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００６１】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中、Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
【００６２】
以上のようにして算出した結果、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率は７６．８％であり、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）は、優れたｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが判明した。
【００６３】
〔試験例３〕ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
上記スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）について、以下のようにしてＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００６４】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００６５】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料１〜３，試料濃度は下記表２を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００６６】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ＰＯＭＣ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。ＰＯＭＣのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００６７】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
結果を表２に示す。
【００６８】
【表２】
【００６９】
表２に示すように、スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）は、優れたＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等の予防・改善に大きく貢献できる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、塩基性線維芽細胞増殖因子ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びプロオピオメラノコルチンｍＲＮＡ発現上昇抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シミ、ソバカス、日焼け後の皮膚色素沈着症等は、皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化することにより、メラニンの産生が著しく亢進した結果として生じるものであり、中高年齢層における肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
従来の美白剤開発は、メラニン生成の律速酵素であるチロシナーゼに注力して進められてきたが、近年、紫外線ＵＶ−Ｂ照射後に表皮ケラチノサイトから産生され、メラノサイトを活性化するサイトカインとして、α−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン−１、一酸化窒素（ＮＯ）等が知られており、これらが関与する情報伝達系を遮断することによりメラニンの産生を抑制して美白効果を導く各種作用剤の開発が盛んに行われてきている。
【０００４】
また、循環器系疾患（例えば、心筋梗塞、高血圧、虚血性心疾患等）や腎疾患（例えば、急性腎不全等）の患者において、血中エンドセリン−１濃度が上昇していることが知られているため、エンドセリン−１の過剰分泌を抑制すること、すなわちエンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇を抑制することによって、これらの疾患の予防・治療効果が期待できると考えられる。
【０００５】
このような考えに基づき、エンドセリン−１のメラノサイトへの作用を阻害する生薬としては、カミツレ抽出物・アルテア抽出物（非特許文献１参照）等が知られており、表皮ケラチノサイトからのエンドセリン−１産生を抑制する生薬としては、ジユ抽出物（非特許文献１参照）、β−グリチルレチン酸ステアリル（特許文献１参照）等が知られている。
【０００６】
塩基性線維芽細胞増殖因子（basic Fibroblast Growth Factor，ｂＦＧＦ）は、ＦＧＦ−２とも呼ばれ、紫外線照射により角化細胞からの遊離が促進され、遊離されたｂＦＧＦが色素細胞に作用してメラニン合成を促進し、かつ色素細胞の細胞分裂をも促進すると考えられている（非特許文献２参照）。また、ｂＦＧＦは、血管新生促進因子として知られており、腫瘍細胞（特に、悪性腫瘍細胞）における血管新生を促進すること等が知られている。
【０００７】
そのため、ｂＦＧＦの異常産生は、色素細胞の異常増殖につながり、メラニン産生を亢進させ、シミ、ソバカス、くすみ等の原因となると考えられる。また、ｂＦＧＦの異常産生は、腫瘍細胞における血管新生を促進し、それにより腫瘍細胞の増殖につながるものと考えられる。
【０００８】
したがって、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇を抑制することは、色素細胞の増殖を抑制し、皮膚におけるメラニンの過剰産生を抑制し、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等を予防又は改善に有用であると考えられる。また、ｂＦＧＦの発現上昇を抑制することは、腫瘍細胞における血管新生を抑制し、腫瘍細胞の増殖を抑制することで、がん治療等に有用であると考えられる。
【０００９】
このような考えに基づき、ｂＦＧＦの作用を抑制し得るものとして、例えば、オノニスエキス等が知られている（特許文献２参照）。
【００１０】
皮膚表皮細胞から分泌されてメラニンの生成に関与するホルモンであるＡＣＴＨやメラノサイトを活性化するサイトカインとしてのα−ＭＳＨは、プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）を前駆体として産生されることが知られている。そのため、ＰＯＭＣの産生を抑制すること、すなわちＰＯＭＣｍＲＮＡの発現上昇を抑制することで、結果的にメラニンの生成を抑制することができ、日焼け後の色素沈着、シミ、ソバカス等を予防又は改善することができると考えられる。
【００１１】
従来、ＰＯＭＣの発現を抑制する作用を有するものとしては、例えば、パンテノール、塩酸ピリドキシン及びニコチン酸アミド等が知られている（特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】特開２００４−３０００４８号公報
【特許文献２】特開２００５−１０４９０４号公報
【特許文献３】特開２００７−１７６８１０号公報
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】「フレグランスジャーナル」，２０００年，第２８巻，第９号，ｐ．６５−７１
【非特許文献２】Halaban R. et al.，J. Cell. Biol.，No.107，1988，p.1611-1619
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有するものを見出し、それを有効成分とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記課題を解決するために、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防、治療又は改善可能なエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明について説明する。
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明において「抽出物」には、植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１９】
本発明において使用する抽出原料は、スターフルーツ（学名：Averrhoa carambola L.，別名：五斂子）、ヒマラヤンラズベリー（学名：Rubus ellipticus Smith，中国名：切頭懸鉤子，別名：オニイチゴ，キミノヒマラヤキイチゴ）又は甘草である。
【００２０】
スターフルーツ（Averrhoa carambola L.）は、カタバミ科ゴレンシ属に属し、新鮮な果実は食用にされる。スターフルーツは、中国では紀元前から文献に記載され、果実の断面が星形であることからスターフルーツと呼ばれている。スターフルーツは、沖縄、中国東南部や雲南その他熱帯各地で栽培されており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る部位としては、葉部、幹部、地上部、花部、果実部、種子部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは葉部である。
【００２１】
ヒマラヤンラズベリー（Rubus ellipticus Smith）は、ヒマラヤから東南アジア、中国東南部で自生し又は栽培されているバラ科キイチゴ属に属する常緑低木であり、これらの地域から容易に入手することができる。ヒマラヤンラズベリーの新鮮な果実は香りがあり、食用にされている。抽出原料として使用し得るヒマラヤンラズベリーの構成部位としては、例えば、葉部、幹部、地上部、花部、果実部、種子部、根部、全草又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは根部である。
【００２２】
甘草には、Glychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza inflata、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza aspera、Glychyrrhiza eurycarpa、Glychyrrhiza pallidiflora、Glychyrrhiza yunnanensis、Glychyrrhiza lepidota、Glychyrrhiza echinata、Glychyrrhiza acanthocarpa等、様々な種類のものがあり、これらのうち、いずれの種類の甘草を抽出原料として使用してもよいが、特にGlychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza inflataを抽出原料として使用することが好ましい。抽出原料として使用し得る甘草の構成部位としては、葉部である。
【００２３】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種若しくは２種以上の植物からの抽出物に含有されるエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用若しくはＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質、又はヒマラヤンラズベリーからの抽出物に含有されるｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からこれらの作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２４】
上記抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２５】
抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２６】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２７】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００２８】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０容量部に対して多価アルコール１０〜９０容量部を混合することが好ましい。
【００２９】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。
【００３０】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られたスターフルーツ抽出液又は甘草葉部抽出液はそのままでもエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができ、得られたヒマラヤンラズベリー抽出液はそのままでもエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００３１】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー又は甘草葉部からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。
【００３２】
以上のようにして得られるスターフルーツ又は甘草葉部からの抽出物は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有しているため、それらの作用を利用してエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００３３】
また、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物は、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有しているため、それらの作用を利用してエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の有効成分として使用することができる。
【００３４】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤においては、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部のうちのいずれか１種の植物からの抽出物を上記有効成分として用いてもよいし、それらのうちの２種以上の植物からの抽出物を混合して上記有効成分として用いてもよい。スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる２種以上の植物からの抽出物を混合して上記有効成分として用いる場合、その配合比は、それらの作用の程度に応じて適宜決定すればよい。
【００３５】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、そのエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、エンドセリン−１ｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患の予防・治療剤等）の有効成分として用いることもできる。
【００３６】
ヒマラヤンラズベリーからの抽出物は、そのｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、ｂＦＧＦｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患の予防・治療剤（例えば、血管新生抑制剤、抗がん剤、抗腫瘍剤、がん細胞の転移を抑制する医薬組成物等）の有効成分として用いることもできる。
【００３７】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、そのＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を利用して、ＰＯＭＣｍＲＮＡの発現上昇に起因する疾患（例えば、ストレス性の皮膚掻痒症等）の予防・治療剤の有効成分として用いることもできる。
【００３８】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物のみからなるものでもよいし、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を製剤化したものでもよい。
【００３９】
また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物のみからなるものでもよいし、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を製剤化したものでもよい。
【００４０】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を製剤化したエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を製剤化したｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の形態としては、例えば、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等が挙げられる。
【００４１】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、必要に応じて、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する天然抽出物等を、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００４２】
また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、必要に応じて、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有する天然抽出物等を、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。
【００４３】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の患者に対する投与方法としては、皮下組織内投与、筋肉内投与、静脈内投与、経口投与、経皮投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。
【００４４】
また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。
【００４５】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、エンドセリン−１の産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等を予防・改善することができる。また、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、心筋梗塞、高血圧等の循環器系疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にも、エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４６】
本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ｂＦＧＦの発現の上昇を抑制することができ、これにより色素細胞の増殖やメラニンの産生を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等を予防又は改善することができ、美白効果を得ることができる。また、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒマラヤンラズベリーからの抽出物が有するｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、腫瘍細胞における異常な血管新生を抑制し、がん等の疾患を予防、治療又は改善をすることができる。ただし、本発明のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にもｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４７】
本発明のＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ＰＯＭＣの発現の上昇を抑制することができ、これによりメラノサイトを活性化するサイトカインとしてのα−ＭＳＨの生合成を抑制し、シミ、ソバカス、皮膚色素沈着症等を予防又は改善することができ、美白効果を得ることができる。また、本発明のＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物が有するＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を通じて、ストレス性の皮膚掻痒症等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明のＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、これらの用途以外にもＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４８】
なお、本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤又はＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４９】
以下、試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の試験例に何ら制限されるものではない。なお、本試験例においては、スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉抽出物（試料３）として、それぞれスターフルーツ抽出液、ヒマラヤンラズベリー抽出液及び甘草葉抽出液（すべて丸善製薬社製）の凍結乾燥品を使用した。
【００５０】
〔試験例１〕エンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
上記スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）について、以下のようにしてエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００５１】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte，ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。
【００５２】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料１〜３，試料濃度は下記表１を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００５３】
この総ＲＮＡを鋳型とし、エンドセリン−１及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。エンドセリン−１のｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００５４】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
結果を表１に示す。
【００５５】
【表１】
【００５６】
表１に示すように、スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）は、優れたエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが判明した。
【００５７】
〔試験例２〕ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
上記ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）について、以下のようにしてｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００５８】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００５９】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料２，試料濃度：２０μｇ／ｍＬ）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００６０】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ｂＦＧＦ（basic Fibroblast Growth Factor）及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。ｂＦＧＦのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００６１】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中、Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
【００６２】
以上のようにして算出した結果、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）のｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制率は７６．８％であり、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）は、優れたｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが判明した。
【００６３】
〔試験例３〕ＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用試験
上記スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）について、以下のようにしてＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を試験した。
【００６４】
正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（normal human epidermal keratinocyte；ＮＨＥＫ）を８０ｃｍ２フラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地（EpiLife-KG2）において、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。
【００６５】
EpiLife-KG2を用いて３５ｍｍシャーレ（ＦＡＬＣＯＮ）に４０×１０４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬ／シャーレずつ播き、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。２４時間後に培養液を捨て、ＨＥＰＥＳ緩衝液１ｍＬを加えてＵＶ−Ｂ照射（５０ｍＪ／ｃｍ２）を行い、その後EpiLife-KG2で必要濃度に溶解した試験試料（試料１〜３，試料濃度は下記表２を参照）を各シャーレに２ｍＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。培養後、培養液を捨て、ＩＳＯＧＥＮ（ＮＩＰＰＯＮ ＧＥＮＥ社製，Cat.no．311-02501）にて総ＲＮＡを抽出し、それぞれのＲＮＡ量を分光光度計にて測定し、２００ｎｇ／μＬになるように総ＲＮＡを調製した。
【００６６】
この総ＲＮＡを鋳型とし、ＰＯＭＣ及び内部標準であるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの発現量を測定した。検出はリアルタイムＰＣＲ装置Smart Cycler（Cepheid社）を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time，code No．RR063A）によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。ＰＯＭＣのｍＲＮＡの発現量は、紫外線未照射・試料無添加、紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加でそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＧＡＰＤＨの値で補正値を求め、さらに紫外線未照射・試料無添加の補正値を１００とした時の紫外線照射・試料無添加及び紫外線照射・試料添加の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制率（％）を算出した。
【００６７】
ｍＲＮＡ発現上昇抑制率(％)＝{(Ａ−Ｂ)−(Ａ−Ｃ)}／(Ａ−Ｂ)×１００
式中Ａは「紫外線未照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｂは「紫外線照射・試料無添加時の補正値」を表し、Ｃは「紫外線照射・試料添加時の補正値」を表す。
結果を表２に示す。
【００６８】
【表２】
【００６９】
表２に示すように、スターフルーツ抽出物（試料１）、ヒマラヤンラズベリー抽出物（試料２）及び甘草葉部抽出物（試料３）は、優れたＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制作用を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７０】
本発明のエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤、ｂＦＧＦｍＲＮＡ発現上昇抑制剤及びＰＯＭＣｍＲＮＡ発現上昇抑制剤は、シミ、ソバカス、皮膚の色黒（皮膚色素沈着症）等の予防・改善に大きく貢献できる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項２】
ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項３】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項１】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするエンドセリン−１ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項２】
ヒマラヤンラズベリーからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【請求項３】
スターフルーツ、ヒマラヤンラズベリー及び甘草葉部からなる群より選ばれる１種又は２種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）ｍＲＮＡ発現上昇抑制剤。
【公開番号】特開２０１０−２１５５７１（Ｐ２０１０−２１５５７１Ａ）
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−６５０９８（Ｐ２００９−６５０９８）
【出願日】平成２１年３月１７日（２００９．３．１７）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１７日（２００９．３．１７）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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