【課題】本発明により、医薬品、工業製品、化粧品、食品等として商業的に一層価値がある高性能な多用途素材となるようなグリシン繰り返し配列タンパク質を、本来の物性が損なわれない状態で生産する形質転換体等が提供すること。
【解決手段】下記（１）〜（３）の全てのタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドが微生物細胞内に導入されて得られることを特徴とする形質転換体等。
（１）シクロスポリンＡに結合性を有するシクロフィリン系タンパク質
（２）プロリン水酸化酵素
（３）下記の特性（Ａ）及び（Ｂ）を有するグリシン繰り返し配列タンパク質
＜特性（Ａ）＞
グリシン繰り返し配列タンパク質におけるポリペプチド鎖が、連続するGly-Xaa-Yaaの繰り返し配列を有する。
＜特性（Ｂ）＞
グリシン繰り返し配列タンパク質におけるポリペプチド鎖の連続するGly-Xaa-Yaaの繰り返し配列にイミノ酸が含まれている。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）〜（３）の全てのタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドが微生物細胞内に導入されて得られることを特徴とする形質転換体。
（１）シクロスポリンＡに結合性を有するシクロフィリン系タンパク質
（２）プロリン水酸化酵素
（３）下記の特性（Ａ）及び（Ｂ）を有するグリシン繰り返し配列タンパク質
＜特性（Ａ）＞
グリシン繰り返し配列タンパク質におけるポリペプチド鎖が、連続するGly-Xaa-Yaaの繰り返し配列を有する。
＜特性（Ｂ）＞
グリシン繰り返し配列タンパク質におけるポリペプチド鎖の連続するGly-Xaa-Yaaの繰り返し配列にイミノ酸が含まれている。
【請求項２】
請求項１記載の形質転換体が、前記（１）〜（３）の全てのタンパク質をその細胞内に産生していることを特徴とする形質転換体。
【請求項３】
前記シクロフィリン系タンパク質が、シクロフィリンＢであることを特徴とする請求項１又は２記載の形質転換体。
【請求項４】
前記シクロフィリン系タンパク質が、シクロフィリンＣであることを特徴とする請求項１又は２記載の形質転換体。
【請求項５】
前記シクロフィリン系タンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドが、酵母由来のプロモーターの下流に連結されていることを特徴とする請求項１〜４のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項６】
請求項１又は２記載の形質転換体が、更に下記（４）のタンパク質をその細胞内に産生していることを特徴とする形質転換体。
（４）リジン水酸化酵素
【請求項７】
前記リジン水酸化酵素が、リジルヒドロキシラーゼ１又はリジルヒドロキシラーゼ３から選択される少なくとも１種類のリジン水酸化酵素であることを特徴とする請求項６記載の形質転換体。
【請求項８】
請求項１又は２記載の形質転換体が、更に下記（５）のタンパク質をその細胞内に産生していることを特徴とする形質転換体。
（５）Ｈｓｐ４７
【請求項９】
前記プロリン水酸化酵素が、プロリル−４−ヒドロキシラーゼであることを特徴とする請求項１又は２記載の形質転換体。
【請求項１０】
前記プロリン水酸化酵素が、プロリル−４−ヒドロキシラーゼのαサブユニット及びプロリル−４−ヒドロキシラーゼのβサブユニットからなる酵素であることを特徴とする請求項９記載の形質転換体。
【請求項１１】
前記プロリル−４−ヒドロキシラーゼのβサブユニットが酵母αファクターの分泌シグナルとの融合体であることを特徴とする請求項１０記載の形質転換体。
【請求項１２】
前記プロリル−４−ヒドロキシラーゼのαサブユニットが、α１サブユニット、α２サブユニット又はα３サブユニットであることを特徴とする請求項１０記載の形質転換体。
【請求項１３】
前記プロリン水酸化酵素のタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドの少なくとも１つが、酵母由来のプロモーターの下流に連結されていることを特徴とする請求項１〜１２のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項１４】
前記特性（Ａ）及び（Ｂ）を有するグリシン繰り返し配列タンパク質が、コラーゲンＴｙｐｅＩ〜ＴｙｐｅＸＸＩＸから選択される少なくとも１種類のコラーゲンであることを特徴とする請求項１〜１３のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項１５】
前記特性（Ａ）及び（Ｂ）を有するグリシン繰り返し配列タンパク質が、コラーゲンＴｙｐｅＩ、コラーゲンＴｙｐｅＩＩ、コラーゲンＴｙｐｅＩＩＩから選択される少なくとも１種類のコラーゲンであることを特徴とする請求項１〜１３記載のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項１６】
前記微生物細胞が、真核生物細胞であることを特徴とする請求項１〜１５のいずれかの請求項記載の形質転換体。
【請求項１７】
前記真核生物細胞が、酵母細胞であることを特徴とする請求項１６記載の形質転換体。
【請求項１８】
前記酵母細胞が、メタノール資化性酵母細胞であることを特徴とする請求項１７記載の形質転換体。
【請求項１９】
前記メタノール資化性酵母細胞が、Komagataella pastorisであることを特徴とする請求項１８記載の形質転換体。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれかの請求項記載の形質転換体が産生して得られうることを特徴とする前記特性（Ａ）及び（Ｂ）を有するグリシン繰り返し配列タンパク質。
【請求項２１】
微生物細胞内に、下記（１）〜（３）の全てのタンパク質のアミノ酸配列をコードする塩基配列を有するポリヌクレオチドを導入する第一工程、
第一工程により得られる形質転換体を培養することによりグリシン繰り返し配列タンパク質を産生させる第二工程、
第二工程で産生されたグリシン繰り返し配列タンパク質を回収する第三工程、
を含むことを特徴とするグリシン繰り返し配列タンパク質の取得方法。
（１）シクロスポリンＡに結合性を有するシクロフィリン系タンパク質
（２）プロリン水酸化酵素
（３）下記の特性（Ａ）及び（Ｂ）を有するグリシン繰り返し配列タンパク質
＜特性（Ａ）＞
グリシン繰り返し配列タンパク質におけるポリペプチド鎖が、連続するGly-Xaa-Yaaの繰り返し配列を有する。
＜特性（Ｂ）＞
グリシン繰り返し配列タンパク質におけるポリペプチド鎖の連続するGly-Xaa-Yaaの繰り返し配列にイミノ酸が含まれている。
【請求項２２】
請求項２１記載の取得方法により取得されたグリシン繰り返し配列タンパク質。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【公開番号】特開２０１１−１９０２１０（Ｐ２０１１−１９０２１０Ａ）
【公開日】平成２３年９月２９日（２０１１．９．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５７４８３（Ｐ２０１０−５７４８３）
【出願日】平成２２年３月１５日（２０１０．３．１５）
【出願人】（０００００２０９３）住友化学株式会社 (8,981)
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【出願人】（５９１０７１１０４）株式会社高研 (38)
【Ｆターム（参考）】