ジオキソアントラセンスルホン酸塩誘導体
抗炎症活性を有し得る化合物は、一般式（Ｉ）を有し、
【化１】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、あるいは、薬剤的に許容可能なその塩である。
【化１】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、あるいは、薬剤的に許容可能なその塩である。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
本発明は、あるジオキソアントラセンスルホン酸塩誘導体、この誘導体の調製のためのプロセス、ならびに、特にＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインに影響された状態、特に炎症性および自己免疫性の疾患、例えば関節炎の疾患の治療法における、薬物としてのこの化合物の使用に関する。
【０００２】
ライン（Rhein）、４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸、およびそのジアセチル化誘導体（diacetylated derivative）ジアセレインは、多数の医薬品の適用のために知られている。特に、ラインおよびジアセレインは、関節炎の疾患、特には、例えばUS 4,244,968、GB 1 578 452、EP 544 880 B1、EP 636 602 B1、およびUS 6,610,750に記述されているような変形性関節症および慢性関節リウマチ、ならびに、EP 1 248 608 B1に記述されているような乾癬および付随する状態の処置での使用のために知られている。ラインおよびジアセレインはまた、種々の状態、例えば、炎症性疾患、自己免疫性疾患、血管の疾患、痛み軽減、糖尿病性ネフローゼの処置のためにも記述されて来ている。
【０００３】
サイトカインＩＬ−１（α，β）およびＴＮＦ−αは、炎症性プロセスおよび軟骨分解の媒介において重要な役割を果たすものと考えられている。ＩＬ−１およびＴＮＦ−αはまた、菌体内毒素およびその他の感染性刺激物に対する生物学的な応答の媒介においても関係するものと考えられてもいる。炎症誘発性および抗炎症性のサイトカインの広範な評論が、C.A.Dinarello医師、およびL.L.Moldawer博士により、臨床医のための入門書“Proinflammatory and Anit-inflammatory Cytokines in Rheumatoid Arthritis”, 2000, Amgen Inc.に示されている。サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦ−αは、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、パジェット病、骨粗鬆症、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患（inflammatory bowl diseases）、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、慢性心臓病、関節硬化症、喘息といった、多数の炎症性および自己免疫性の状態のメカニズムに関係して来ている。
【０００４】
ジアセレインおよびその活性な代謝産物ラインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）ファミリー、特にＩＬ−１βの炎症誘発性異化サイトカインの合成および活動を阻害することが知られている。ラインおよびジアセレインは、ＩＬ−６、ＩＬ−８、および組織壊死因子（ＴＮＦ−α）といったその他のサイトカインの発現を阻害することが示されて来た。ラインおよびジアセレインによる炎症性サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦ−αの阻害は、例えば、WO 02/058681、WO 01/051044、J. Martel-PelletierらのJournal of Rheumatology, 1998, 25(4), 753-762、E. DouniらのArthritis Res Ther, 2004, 6: R65-R72において記述されている。
【０００５】
これらの状態に苦しむ患者からの軟骨組織は、健康な個体からの軟骨細胞に比較して、高レベルのＴＮＦ−αおよびＩＬ−１を発現し、ＩＬ−１阻害因子としてのラインの作用のこの特異的なメカニズムは、ある関節炎の状態、例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、および乾癬性関節炎の処置における、ラインおよびジアセレインの有効性の少なくとも一部を説明するものと思われる。
【０００６】
しかしながら、ジアセレイン中に存在する代謝産物アロエエモジンは、結腸および腎臓の細胞における染色体異常誘発性の影響を有することが示されて来ている。コメットアッセイ（Comet assay）によりテストされたアロエエモジンの遺伝毒性は、例えば、S.O. MuellerらのMutation Research, 371, (1996), 165-173により報告されている。
【０００７】
さらに、ラインおよびジアセレインは、水溶液における溶解性に乏しく、医薬品剤形（この剤形から治療薬を生物が利用可能である剤形）の調製を困難にするという欠点を有する。ラインおよびジアセレインの乏しい溶解度は、非経口投与のための調合物に関して特に問題である。
【０００８】
ジアセレイン、およびその活性代謝産物ラインは、長期に亘る処置中である患者に下痢性の影響を生じる傾向を有することが知られている。この下痢性の影響は、少なくとも一部で、ラインおよびジアセレインの非常に乏しい溶解度に起因するのではないか、と思われている。
【０００９】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより影響または仲介された状態、特には、関節炎の疾患を含む炎症性および自己免疫性の疾患の処置または治療法のために、さらなる化合物を提供することが今なお必要とされている。
【００１０】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害に対して活性を有し、ラインおよび／またはジアセレインのある欠点に立ち向かわせる代替の化合物を提供することがさらに有利であろう。
【００１１】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害に対して改善された活性を有する化合物を提供することがさらに有利であろう。
【００１２】
ここで、式（Ｉ）の新規な医薬品化合物が提供される。
【化１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である。
【００１３】
本発明の特定の実施形態に従うと、式（Ｉ）の化合物であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５が−ＳＯ３Ｈである化合物（式（III））が提供される。
【化２】
【００１４】
式（Ｉ）の化合物が、ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの生成を阻害することができることが、発明者らにより予想外にも見出された。Ｒ４および／またはＲ５が−ＳＯ３Ｈである式（Ｉ）の化合物はまた、有利な溶解性質を示すことも示された。
【００１５】
本発明のある一つの側面に従えば、式（Ｉ）の化合物の調製のためのプロセスが提供され、このプロセスは、式（II）の対応する化合物を硫酸（sulphuric acid）で処理することを含み、
【化３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はそれぞれ独立してＨである。
【００１６】
ここで、本発明のある一つの側面に従えば、好適な薬剤的に許容可能な賦形剤と併せて、式（Ｉ）の化合物を含む、医薬品組成物が提供される。
【００１７】
さらなる側面に従えば、本発明は、ヒトまたは獣医学の適用のための薬物としての使用のための式（Ｉ）の化合物に関し、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインに仲介または影響された状態の処置、特には、炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための式（Ｉ）の化合物に関し、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインに仲介または影響された状態、特には、炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための薬物の調製のための式（Ｉ）の化合物の使用に関し、また、対象者に治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインに仲介または影響された状態の処置のための方法に関する。
【００１８】
本発明のその他の目的および利点は、特許請求の範囲、ならびに、以下の詳細な説明、実施例、および添付の図面から明らかになるであろう。
【００１９】
本発明は、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【化４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である。
【００２０】
本発明のある一つの実施形態に従うと、Ｒ１およびＲ２は独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル基、またはＣ２−４アシル基から選択され、Ｒ３はＨであり、Ｒ４およびＲ５は、Ｈまたは−ＳＯ３Ｈであってよく、但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、−ＳＯ３Ｈである。好ましい実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、両方ともＨであるか、または両方ともアセチル基であるかのいずれかであり、Ｒ３およびＲ４は、両方ともＨであり、Ｒ５は−ＳＯ３Ｈである。
【００２１】
本発明のある一つの実施形態に従うと、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＨであり、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、または−ＳＯ３Ｈであり、但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、−ＳＯ３Ｈである。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態に従うと、式（III）の化合物（６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸）が提供される。
【化５】
【００２３】
本発明の化合物は、これらの薬剤的に許容可能な塩の形態にあってもよい。特には、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウム塩が企図される。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物は、本発明に従うプロセスにより調製されてよく、このプロセスは、式（II）の化合物を濃縮された硫酸で処理して、スルホン酸（sulphonic acid）の形態にある式（Ｉ）の対応する化合物を生成することを含み、
【化６】
ここで、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はＨである。さらなるステップにおいて、所望のＣ１−４アルキル基、またはＣ２−４アシル基が、従来の技術を用いて選択的に置換されることができる。例えば、所望のＣ２−４アシルオキシ基を導入する、Ｃ２−４アシルハロゲン化物、または対応するアシル無水物との反応、対応するエステルを形成するＣ１−４アルコールとの反応、または、例えば、Ｃ１アルキル基を導入するジアゾメタン（ＣＨ２Ｎ２）、もしくは対応するＣ２−４アルキル基を導入するＣ２−４アルキルハロゲン化物との反応である。所望の置換に応じて、既知の保護基が導入されてもよく、必要であれば、従来のプロセスを用いて開裂されてもよい。
【００２５】
硫酸が代替的に、ピロ硫酸（pyrosulphuric acid）に置き換えられることができる。
【００２６】
硫酸との反応は、好ましくは６０〜１２０℃の間の温度、好ましくはおよそ１００℃で行なわれる。
【００２７】
酸との反応時間は、例えば、反応温度、使用される酸、所望の生成物（すなわち、ジ−、またはモノ−スルホン酸置換）などに応じて、異なり得る。一般的な指標としては、１時間〜４８時間の間の反応時間、例えばおよそ２４時間が予見され得る。反応の進行は、有利には、例えばＨＰＬＣによりモニターされてもよく、所望のジ−、またはモノ−スルホン酸塩置換された生成物への反応が完了した時点で、反応が止められてもよい。
【００２８】
生成物は、例えば、対応する金属ハロゲン化物（例えば、ＮａＣｌ）、または対応する金属アルカリ化剤（metal alkalizing agent）（ＮａＯＨ、ＫＯＨ、またはＮＨ３といったもの）を加えることにより、その生成物の対応する塩の形態で単離されてもよい。予見される塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウムといった、任意の薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００２９】
このようにして得られた式（Ｉ）の化合物は、例えば、調製用ＨＰＬＣ、または液液分配（liquid-liquid partitioning）といった、任意の好適な従来の精製プロセスを用いて精製されてもよい。
【００３０】
本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害における活性を示す。
【００３１】
ヒト軟骨細胞におけるインビトロの研究において、式（Ｉ）の化合物は、ラインに比較して、インターロイキン−１（ＩＬ−１β）の改善された阻害を示すことが予想外にも示された。
【００３２】
有利なことに、式（Ｉ）の化合物は、ジアセレイン中に存在する代謝産物アロエエモジンを回避させることができる。
【００３３】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害におけるそれらの活性の点から見て、本発明の化合物は、異常に高い、または増加されたレベルのＩＬ−１により特徴づけられる状態の処置のために企図されている。
【００３４】
本発明の化合物で処置され得る状態としては、炎症性および自己免疫性の疾患を含む。言及され得る状態としては、慢性関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、乾癬（psoriaris）、アテローム性動脈硬化症、パジェット病、慢性心臓病、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、肺気腫（pneumonary emphysema）、喘息を含む。
【００３５】
したがって、本発明のある一つの側面は、健康な個体に比較して増加したレベルのＩＬ−１により特徴づけられる状態を処置する方法に関し、この方法は、対象者に、有効な量の本発明に従う化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を投与することを含む。この状態は好ましくは、炎症性疾患、または自己免疫性疾患である。特には、処置されるべき状態としては、関節の炎症性疾患、特には、変形性関節症、または慢性関節リウマチを含む。乾癬性関節炎、および乾癬もまた、特に言及され得る。
【００３６】
本発明の化合物は、ラインに比較して改善されたそれらの物理的な性質のためにも、広範囲にわたる、上述された炎症性および自己免疫性の疾患において臨床的な有用性がありそうである。
【００３７】
本発明のある一つの側面に従うと、好適な薬剤的に許容可能な賦形剤と併せて、式（Ｉ）の化合物を含む、医薬品組成物が提供される。本発明に従う医薬品組成物は、ヒト使用のためのものであってもよいし、あるいは、獣医学的な使用のためのものであってもよい。
【００３８】
本発明に従う医薬品組成物は、例えば、経口、筋肉内、静脈内、皮下、直腸、局所的、経皮的、鼻腔内、関節内（intrarticular）、舌下、および腹腔内の投与を含む、任意の経路による投与のために好適な調合物を有してもよい。
【００３９】
経口投与のための調合物としては、例えば、錠剤、硬もしくは軟ゼラチンカプセル（hard or soft gelatin capsules）、トローチ剤、水性もしくは油性懸濁液、再構成のための分散性粉末もしくは顆粒、シロップ、またはエマルジョンを含み得る。
【００４０】
非経口投与のための調合物は、任意の他の無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の無菌の注射用の溶液または懸濁液のような、無菌の注射用の水性の緩衝された溶液または懸濁液の形態、または使用時の再構成のために凍結乾燥された形態といった、任意の好適な医薬品形態であってもよい。
【００４１】
本発明の組成物は、例えば、水性もしくは油性のキャリアでの、クリーム、ゲル、軟膏、またはエマルジョンの形態で、局所的な投与のための調合物中で提供されてもよい。
【００４２】
本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、スルホネート基（sulphonate group）の存在により、ラインまたはジアセレインよりもより優れた水への溶解性を示すことが予期されている。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３がＨであり、Ｒ４およびＲ５が独立してまたは両方ともＳＯ３Ｈである本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、特に優れた水溶液への溶解性を示すことが示された。例えば、式（III）の化合物は、１．２ｍｇ／ｍＬの水への溶解度を有しており、一方、ラインおよびジアセレインは事実上、水に不溶性である。
【００４３】
本発明の化合物の優れた溶解性質は、例えば注射または注入により、特には、関節内、筋肉内、静脈内、もしくは皮下の注射または注入のように、非経口的な経路により好都合にも化合物が投与されることを可能にする。
【００４４】
医薬品組成物は、好適な薬剤的に既知の賦形剤および／または添加物を用いて、当技術分野で既知の方法に従って調製され得る。
【００４５】
任意の好適な従来の薬剤的に許容可能な賦形剤としては、例えば、選択された投与の経路に従う、希釈剤、結合剤、界面活性剤、潤滑剤、懸濁剤、乳化剤、緩衝剤、固結防止剤（anticaking agents）、水性または油性のキャリア、崩壊剤（disintegrating agents）、保存剤（preserving agents）、香味料、甘味料、着色料が企図される。
【００４６】
好適な投与計画（dosage regime）は、数ある中でも、治療上の適用、状態の重症度、および処置されるべき患者に関して、といった因子に応じて異なり得る。典型的な一日の投与量は、一日あたり、患者の体重のｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約１５０ｍｇのオーダーで異なり得る。一般的な期間では、一日あたり約１０ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば、一日あたり約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇの間の一日の投与量が予見され得る。ここからのユニット投与量における活性成分の量は、上記の因子に依存し、選ばれた投与の経路にも依存し、一般的には、ユニット剤形あたりの活性成分が１ｍｇ〜５００ｍｇの領域になるであろう。
【００４７】
本発明は、下記の非限定的な実施例によりさらに例証される。
【００４８】
〔実施例〕
＜実施例１＞
６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸の調製
９９％を超える純度を有する純粋なジアセレインの脱アセチル化により生成されたライン（１ｇ）を、濃縮された硫酸（１００ｍＬ）中に溶解した。この溶液を１００℃で加熱し、２４時間攪拌した。反応が完了するまで、ＨＰＬＣを用いてリアルタイムで反応の進行を追った。反応混合物を次に冷却させ、攪拌しながら２Ｌの水へと注いだ。結果として生じた溶液を次に、一晩４℃で保管した。未反応のライン加塩材料（rhein salting material）を、遠心機により除去した。１１０ｇの塩化ナトリウムを加えることにより、化合物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸をそのナトリウム塩として沈殿させた。結果として得られた懸濁液を１時間４℃で冷却し、その後、遠心分離して固体生成物を分離し、減圧下で乾燥した。２．３２ｇの生成物が得られた。
【００４９】
塩の除去
上記のように得られた生成物を、４℃で３０分間混合しながら水（１１５ｍＬ）に加えた。懸濁液を次に遠心分離し、デカントして残りの塩を含む上澄みを除去した。伝導率計（Radiometer CDM 206）で測定される伝導率が一定（およそ３３０μＳ／ｃｍ）になるまで、７回この操作を繰り返した。遠心分離した後の残渣を次に、減圧下で乾燥して、ＨＰＬＣにより決定されたときに９５．６％の純度を有する生成物を４８０ｍｇ得た。
【００５０】
＜実施例２＞
性質決定
１Ｈ−ＮＭＲ分析
実施例１で得られた生成物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、Bruker（登録商標）分光計を用いて４００ＭＨｚで、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で行なった。図１（ａ）〜図１（ｃ）に示されている得られたスペクトルは、生成物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸との一致を示している。
【００５１】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、４つだけの芳香族プロトンの存在を指し示しており、このうち２つがメタ位にあり、２つがオルト位にある。ヒドロキシル置換基だけを予め有していた環にスルホン酸置換が起こったことを示している。増加分に基づいて算出（caculated）された化学的な転置に匹敵する化学的な転置（シフト）が、スルホン酸基の置換がオルト位におけることを示している。
【００５２】
質量分析
Agilent 1100 LC-MS Spectrometerを用い、大気圧でのネガティブエレクトロスプレーモード（negative eletro-spray mode）のイオン化を用いて、実施例１の生成物に対して質量分光分析法を行なった。図２に示されている得られたスペクトルは、３６４にピークを示しており、このため、生成物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸、式（III）との一致を示している。
【００５３】
＜実施例３＞
６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸ナトリウム塩の調製
９９％を超える純度を有する純粋なジアセレインの脱アセチル化により生成されたライン（１ｇ）を、濃縮された硫酸（１００ｍＬ）中に溶解した。この溶液を１００℃で加熱し、２４時間攪拌した。反応が完了するまで、ＨＰＬＣを用いてリアルタイムで反応の進行を追った。反応混合物を次に、冷却させ、攪拌しながら２Ｌの水に注いだ。結果として生じた溶液を次に、一晩４℃で保管した。遠心機により、未反応のライン加塩材料を除去した。上澄み（surnatant）のｐＨを１ＭのＮａＯＨで７．０に調節した。生成物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸をそのナトリウム塩の形態で次に単離し、逆相Ｃ１８シリカカラムおよびメタノール／水／Ｈ３ＰＯ４溶出剤を用いて、調製用ＨＰＬＣによりこの溶液から精製した。１ｇの生成物が単離され、実施例２におけるようなＮＭＲおよびＭＳにより、６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸ナトリウム塩と特徴づけられた。
【００５４】
＜実施例４＞
ヒト軟骨細胞におけるＩＬ−１β阻害についてのインビトロの研究
ヒトの正常な軟骨細胞および骨関節炎（ＯＡ）軟骨細胞によるＩＬ−１βサイトカインのリポ多糖（ＬＰＳ）に刺激された生成を阻害することにおける実施例１の化合物およびラインの活性を研究した。
【００５５】
材料および方法
正常な被験者またはＯＡ患者の外傷性の骨折が原因である全股関節プロテーゼのための整形外科手術の間に、ヒト軟骨を得た。ＯＡを有する患者は、下記の基準、すなわち、（１）両側性のＯＡ、（２）放射線学および病理学のサポートによる中程度のＯＡ（Kellgren-LaurenceグレードＩ−ＩＩＩ）との診断、に基づいて選択した。
【００５６】
４人のＯＡ患者と９人の正常な被験者とから得られた軟骨試料から、単離された軟骨細胞の懸濁液を調製した。試料は、無菌状態下で入手し、維持した。軟骨を小片へと切断し、４８時間３７℃で炭酸塩／炭酸水素塩緩衝剤中で１ｍｇ／ｍＬのクロストリジウムのコラゲナーゼでインキュベートした。いったん軟骨マトリクスから分離した軟骨細胞を、１５００ＲＰＭで５分間遠心分離した。培地（１０％ＳＣＦを補ったＤＭＥＭ）中に懸濁した分離された軟骨細胞を実験のために用いた。細胞生存度を、トリパンブルー色素排除法（Trypan blue exclusion）により評価した。
【００５７】
ＩＬ−１βの生成に対する細菌性菌体内毒素（ＬＰＳ）による軟骨細胞のインビトロの刺激を以下のように行なった。
すなわち、培地中１ｘ１０６細胞／ｍＬのアリコートを、１５ｍＬのFalcon管において接種し、旋動振盪機（１００ＲＰＭ）においてかき混ぜ続けた。
【００５８】
２０ｍｇ／ｍＬのライン、または濃度を増やしていった（１、５、１０、２０、および３０μｇ／ｍＬ）テスト化合物（実施例１の化合物）を含むＭＰＳ（１０μｇ／ｍＬ）の存在下で４８時間、軟骨細胞を培養した。ラインを含むサンプルについて、ラインの疎水性の特質に関連する溶解性の問題を最小限にするために、溶液を５分間超音波処理に供した。テスト化合物の溶液については、その優れた溶解性のためにこの問題は存在しなかった。
【００５９】
軟骨組織によるＩＬ−１β生成を、ELISAキットにより種々のサンプル培養液中の培地でアッセイした。
図３は、ELISAにより評価したときの、ＬＰＳ刺激された正常な軟骨細胞およびＯＡ軟骨細胞におけるＩＬ−１β生成についての、ラインおよび実施例１の化合物で得られた結果を示している。図４は、テスト化合物（実施例１の化合物）による、正常な軟骨細胞のＩＬ−１β生成の投与量依存性の阻害を示している。図３に示した結果は、ラインに比較して、本発明の化合物が有意に増加したＩＬ−１β阻害活性を示すことを示している。図４は、本発明に従う化合物が、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの間で阻害が最大になる、ＩＬ−１β生成の有意な阻害を提供することを示している。
【００６０】
〔実施の態様〕
（１）式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩であって、
【化７】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である、
化合物またはその塩。
（２）実施態様（１）に記載の化合物において、
Ｒ１、Ｒ２は独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、Ｒ３およびＲ４はＨであり、Ｒ５は−ＳＯ３Ｈである、化合物。
（３）実施態様（１）または（２）に記載の化合物において、
式（III）を有する、化合物。
【化８】
（４）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
薬物としての使用のための、化合物。
（５）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための、化合物。
（６）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
炎症性または自己免疫性の状態の処置のための薬物としての使用のための、化合物。
（７）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
慢性関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、乾癬、アテローム性動脈硬化症、パジェット病、慢性心臓病、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、肺気腫、喘息から選択される状態の処置のための、化合物。
（８）実施態様（７）に記載の化合物において、
前記状態が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、化合物。
（９）医薬品組成物であって、
活性成分として、実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、医薬品組成物。
（１０）実施態様（９）に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、非経口投与のためのものである、医薬品組成物。
（１１）実施態様（９）に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、経口投与のためのものである、医薬品組成物。
（１２）実施態様（９）に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、局所的投与のためのものである、医薬品組成物。
（１３）ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための方法において、
治療上有効な量の、実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
（１４）炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための方法において、
治療上有効な量の、実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
（１５）実施態様（１３）に記載の方法において、
前記疾患が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、方法。
（１６）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物の使用において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための薬物の製造のための、使用。
（１７）式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩の調製のための方法において、
【化９】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、
前記方法は、
式（II）の化合物を濃縮された硫酸で処理することを含み、
【化１０】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＨである、方法。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１ａ】本発明に従う化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示している。
【図１ｂ】本発明に従う化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示している。
【図１ｃ】本発明に従う化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示している。
【図２】本発明に従う同じ化合物の質量分析を示している。
【図３】ヒト軟骨細胞におけるＩＬ−１βサイトカイン生成の阻害に対する本発明に従う化合物の影響を示すグラフ表示である。
【図４】本発明に従う化合物によるヒト軟骨細胞におけるＩＬ−１βサイトカイン生成の投与量依存性の阻害を示すグラフ表示である。
【開示の内容】
【０００１】
本発明は、あるジオキソアントラセンスルホン酸塩誘導体、この誘導体の調製のためのプロセス、ならびに、特にＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインに影響された状態、特に炎症性および自己免疫性の疾患、例えば関節炎の疾患の治療法における、薬物としてのこの化合物の使用に関する。
【０００２】
ライン（Rhein）、４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸、およびそのジアセチル化誘導体（diacetylated derivative）ジアセレインは、多数の医薬品の適用のために知られている。特に、ラインおよびジアセレインは、関節炎の疾患、特には、例えばUS 4,244,968、GB 1 578 452、EP 544 880 B1、EP 636 602 B1、およびUS 6,610,750に記述されているような変形性関節症および慢性関節リウマチ、ならびに、EP 1 248 608 B1に記述されているような乾癬および付随する状態の処置での使用のために知られている。ラインおよびジアセレインはまた、種々の状態、例えば、炎症性疾患、自己免疫性疾患、血管の疾患、痛み軽減、糖尿病性ネフローゼの処置のためにも記述されて来ている。
【０００３】
サイトカインＩＬ−１（α，β）およびＴＮＦ−αは、炎症性プロセスおよび軟骨分解の媒介において重要な役割を果たすものと考えられている。ＩＬ−１およびＴＮＦ−αはまた、菌体内毒素およびその他の感染性刺激物に対する生物学的な応答の媒介においても関係するものと考えられてもいる。炎症誘発性および抗炎症性のサイトカインの広範な評論が、C.A.Dinarello医師、およびL.L.Moldawer博士により、臨床医のための入門書“Proinflammatory and Anit-inflammatory Cytokines in Rheumatoid Arthritis”, 2000, Amgen Inc.に示されている。サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦ−αは、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、乾癬、パジェット病、骨粗鬆症、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患（inflammatory bowl diseases）、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、慢性心臓病、関節硬化症、喘息といった、多数の炎症性および自己免疫性の状態のメカニズムに関係して来ている。
【０００４】
ジアセレインおよびその活性な代謝産物ラインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１）ファミリー、特にＩＬ−１βの炎症誘発性異化サイトカインの合成および活動を阻害することが知られている。ラインおよびジアセレインは、ＩＬ−６、ＩＬ−８、および組織壊死因子（ＴＮＦ−α）といったその他のサイトカインの発現を阻害することが示されて来た。ラインおよびジアセレインによる炎症性サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦ−αの阻害は、例えば、WO 02/058681、WO 01/051044、J. Martel-PelletierらのJournal of Rheumatology, 1998, 25(4), 753-762、E. DouniらのArthritis Res Ther, 2004, 6: R65-R72において記述されている。
【０００５】
これらの状態に苦しむ患者からの軟骨組織は、健康な個体からの軟骨細胞に比較して、高レベルのＴＮＦ−αおよびＩＬ−１を発現し、ＩＬ−１阻害因子としてのラインの作用のこの特異的なメカニズムは、ある関節炎の状態、例えば、慢性関節リウマチ、変形性関節症、および乾癬性関節炎の処置における、ラインおよびジアセレインの有効性の少なくとも一部を説明するものと思われる。
【０００６】
しかしながら、ジアセレイン中に存在する代謝産物アロエエモジンは、結腸および腎臓の細胞における染色体異常誘発性の影響を有することが示されて来ている。コメットアッセイ（Comet assay）によりテストされたアロエエモジンの遺伝毒性は、例えば、S.O. MuellerらのMutation Research, 371, (1996), 165-173により報告されている。
【０００７】
さらに、ラインおよびジアセレインは、水溶液における溶解性に乏しく、医薬品剤形（この剤形から治療薬を生物が利用可能である剤形）の調製を困難にするという欠点を有する。ラインおよびジアセレインの乏しい溶解度は、非経口投与のための調合物に関して特に問題である。
【０００８】
ジアセレイン、およびその活性代謝産物ラインは、長期に亘る処置中である患者に下痢性の影響を生じる傾向を有することが知られている。この下痢性の影響は、少なくとも一部で、ラインおよびジアセレインの非常に乏しい溶解度に起因するのではないか、と思われている。
【０００９】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより影響または仲介された状態、特には、関節炎の疾患を含む炎症性および自己免疫性の疾患の処置または治療法のために、さらなる化合物を提供することが今なお必要とされている。
【００１０】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害に対して活性を有し、ラインおよび／またはジアセレインのある欠点に立ち向かわせる代替の化合物を提供することがさらに有利であろう。
【００１１】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害に対して改善された活性を有する化合物を提供することがさらに有利であろう。
【００１２】
ここで、式（Ｉ）の新規な医薬品化合物が提供される。
【化１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である。
【００１３】
本発明の特定の実施形態に従うと、式（Ｉ）の化合物であって、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４がＨであり、Ｒ５が−ＳＯ３Ｈである化合物（式（III））が提供される。
【化２】
【００１４】
式（Ｉ）の化合物が、ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの生成を阻害することができることが、発明者らにより予想外にも見出された。Ｒ４および／またはＲ５が−ＳＯ３Ｈである式（Ｉ）の化合物はまた、有利な溶解性質を示すことも示された。
【００１５】
本発明のある一つの側面に従えば、式（Ｉ）の化合物の調製のためのプロセスが提供され、このプロセスは、式（II）の対応する化合物を硫酸（sulphuric acid）で処理することを含み、
【化３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はそれぞれ独立してＨである。
【００１６】
ここで、本発明のある一つの側面に従えば、好適な薬剤的に許容可能な賦形剤と併せて、式（Ｉ）の化合物を含む、医薬品組成物が提供される。
【００１７】
さらなる側面に従えば、本発明は、ヒトまたは獣医学の適用のための薬物としての使用のための式（Ｉ）の化合物に関し、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインに仲介または影響された状態の処置、特には、炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための式（Ｉ）の化合物に関し、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインに仲介または影響された状態、特には、炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための薬物の調製のための式（Ｉ）の化合物の使用に関し、また、対象者に治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物を投与することを含む、ＩＬ−１ファミリーのサイトカインに仲介または影響された状態の処置のための方法に関する。
【００１８】
本発明のその他の目的および利点は、特許請求の範囲、ならびに、以下の詳細な説明、実施例、および添付の図面から明らかになるであろう。
【００１９】
本発明は、式（Ｉ）の化合物を提供する。
【化４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である。
【００２０】
本発明のある一つの実施形態に従うと、Ｒ１およびＲ２は独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル基、またはＣ２−４アシル基から選択され、Ｒ３はＨであり、Ｒ４およびＲ５は、Ｈまたは−ＳＯ３Ｈであってよく、但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、−ＳＯ３Ｈである。好ましい実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、両方ともＨであるか、または両方ともアセチル基であるかのいずれかであり、Ｒ３およびＲ４は、両方ともＨであり、Ｒ５は−ＳＯ３Ｈである。
【００２１】
本発明のある一つの実施形態に従うと、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＨであり、Ｒ４およびＲ５は独立して、Ｈ、または−ＳＯ３Ｈであり、但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、−ＳＯ３Ｈである。
【００２２】
本発明の好ましい実施形態に従うと、式（III）の化合物（６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸）が提供される。
【化５】
【００２３】
本発明の化合物は、これらの薬剤的に許容可能な塩の形態にあってもよい。特には、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウム塩が企図される。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物は、本発明に従うプロセスにより調製されてよく、このプロセスは、式（II）の化合物を濃縮された硫酸で処理して、スルホン酸（sulphonic acid）の形態にある式（Ｉ）の対応する化合物を生成することを含み、
【化６】
ここで、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３はＨである。さらなるステップにおいて、所望のＣ１−４アルキル基、またはＣ２−４アシル基が、従来の技術を用いて選択的に置換されることができる。例えば、所望のＣ２−４アシルオキシ基を導入する、Ｃ２−４アシルハロゲン化物、または対応するアシル無水物との反応、対応するエステルを形成するＣ１−４アルコールとの反応、または、例えば、Ｃ１アルキル基を導入するジアゾメタン（ＣＨ２Ｎ２）、もしくは対応するＣ２−４アルキル基を導入するＣ２−４アルキルハロゲン化物との反応である。所望の置換に応じて、既知の保護基が導入されてもよく、必要であれば、従来のプロセスを用いて開裂されてもよい。
【００２５】
硫酸が代替的に、ピロ硫酸（pyrosulphuric acid）に置き換えられることができる。
【００２６】
硫酸との反応は、好ましくは６０〜１２０℃の間の温度、好ましくはおよそ１００℃で行なわれる。
【００２７】
酸との反応時間は、例えば、反応温度、使用される酸、所望の生成物（すなわち、ジ−、またはモノ−スルホン酸置換）などに応じて、異なり得る。一般的な指標としては、１時間〜４８時間の間の反応時間、例えばおよそ２４時間が予見され得る。反応の進行は、有利には、例えばＨＰＬＣによりモニターされてもよく、所望のジ−、またはモノ−スルホン酸塩置換された生成物への反応が完了した時点で、反応が止められてもよい。
【００２８】
生成物は、例えば、対応する金属ハロゲン化物（例えば、ＮａＣｌ）、または対応する金属アルカリ化剤（metal alkalizing agent）（ＮａＯＨ、ＫＯＨ、またはＮＨ３といったもの）を加えることにより、その生成物の対応する塩の形態で単離されてもよい。予見される塩としては、例えば、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウムといった、任意の薬剤的に許容可能な塩を含む。
【００２９】
このようにして得られた式（Ｉ）の化合物は、例えば、調製用ＨＰＬＣ、または液液分配（liquid-liquid partitioning）といった、任意の好適な従来の精製プロセスを用いて精製されてもよい。
【００３０】
本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害における活性を示す。
【００３１】
ヒト軟骨細胞におけるインビトロの研究において、式（Ｉ）の化合物は、ラインに比較して、インターロイキン−１（ＩＬ−１β）の改善された阻害を示すことが予想外にも示された。
【００３２】
有利なことに、式（Ｉ）の化合物は、ジアセレイン中に存在する代謝産物アロエエモジンを回避させることができる。
【００３３】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインの阻害におけるそれらの活性の点から見て、本発明の化合物は、異常に高い、または増加されたレベルのＩＬ−１により特徴づけられる状態の処置のために企図されている。
【００３４】
本発明の化合物で処置され得る状態としては、炎症性および自己免疫性の疾患を含む。言及され得る状態としては、慢性関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、乾癬（psoriaris）、アテローム性動脈硬化症、パジェット病、慢性心臓病、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、肺気腫（pneumonary emphysema）、喘息を含む。
【００３５】
したがって、本発明のある一つの側面は、健康な個体に比較して増加したレベルのＩＬ−１により特徴づけられる状態を処置する方法に関し、この方法は、対象者に、有効な量の本発明に従う化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を投与することを含む。この状態は好ましくは、炎症性疾患、または自己免疫性疾患である。特には、処置されるべき状態としては、関節の炎症性疾患、特には、変形性関節症、または慢性関節リウマチを含む。乾癬性関節炎、および乾癬もまた、特に言及され得る。
【００３６】
本発明の化合物は、ラインに比較して改善されたそれらの物理的な性質のためにも、広範囲にわたる、上述された炎症性および自己免疫性の疾患において臨床的な有用性がありそうである。
【００３７】
本発明のある一つの側面に従うと、好適な薬剤的に許容可能な賦形剤と併せて、式（Ｉ）の化合物を含む、医薬品組成物が提供される。本発明に従う医薬品組成物は、ヒト使用のためのものであってもよいし、あるいは、獣医学的な使用のためのものであってもよい。
【００３８】
本発明に従う医薬品組成物は、例えば、経口、筋肉内、静脈内、皮下、直腸、局所的、経皮的、鼻腔内、関節内（intrarticular）、舌下、および腹腔内の投与を含む、任意の経路による投与のために好適な調合物を有してもよい。
【００３９】
経口投与のための調合物としては、例えば、錠剤、硬もしくは軟ゼラチンカプセル（hard or soft gelatin capsules）、トローチ剤、水性もしくは油性懸濁液、再構成のための分散性粉末もしくは顆粒、シロップ、またはエマルジョンを含み得る。
【００４０】
非経口投与のための調合物は、任意の他の無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒中の無菌の注射用の溶液または懸濁液のような、無菌の注射用の水性の緩衝された溶液または懸濁液の形態、または使用時の再構成のために凍結乾燥された形態といった、任意の好適な医薬品形態であってもよい。
【００４１】
本発明の組成物は、例えば、水性もしくは油性のキャリアでの、クリーム、ゲル、軟膏、またはエマルジョンの形態で、局所的な投与のための調合物中で提供されてもよい。
【００４２】
本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、スルホネート基（sulphonate group）の存在により、ラインまたはジアセレインよりもより優れた水への溶解性を示すことが予期されている。例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３がＨであり、Ｒ４およびＲ５が独立してまたは両方ともＳＯ３Ｈである本発明に従う式（Ｉ）の化合物は、特に優れた水溶液への溶解性を示すことが示された。例えば、式（III）の化合物は、１．２ｍｇ／ｍＬの水への溶解度を有しており、一方、ラインおよびジアセレインは事実上、水に不溶性である。
【００４３】
本発明の化合物の優れた溶解性質は、例えば注射または注入により、特には、関節内、筋肉内、静脈内、もしくは皮下の注射または注入のように、非経口的な経路により好都合にも化合物が投与されることを可能にする。
【００４４】
医薬品組成物は、好適な薬剤的に既知の賦形剤および／または添加物を用いて、当技術分野で既知の方法に従って調製され得る。
【００４５】
任意の好適な従来の薬剤的に許容可能な賦形剤としては、例えば、選択された投与の経路に従う、希釈剤、結合剤、界面活性剤、潤滑剤、懸濁剤、乳化剤、緩衝剤、固結防止剤（anticaking agents）、水性または油性のキャリア、崩壊剤（disintegrating agents）、保存剤（preserving agents）、香味料、甘味料、着色料が企図される。
【００４６】
好適な投与計画（dosage regime）は、数ある中でも、治療上の適用、状態の重症度、および処置されるべき患者に関して、といった因子に応じて異なり得る。典型的な一日の投与量は、一日あたり、患者の体重のｋｇあたり約０．０５ｍｇ〜約１５０ｍｇのオーダーで異なり得る。一般的な期間では、一日あたり約１０ｍｇ〜５００ｍｇ、例えば、一日あたり約１０ｍｇ〜約２５０ｍｇの間の一日の投与量が予見され得る。ここからのユニット投与量における活性成分の量は、上記の因子に依存し、選ばれた投与の経路にも依存し、一般的には、ユニット剤形あたりの活性成分が１ｍｇ〜５００ｍｇの領域になるであろう。
【００４７】
本発明は、下記の非限定的な実施例によりさらに例証される。
【００４８】
〔実施例〕
＜実施例１＞
６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸の調製
９９％を超える純度を有する純粋なジアセレインの脱アセチル化により生成されたライン（１ｇ）を、濃縮された硫酸（１００ｍＬ）中に溶解した。この溶液を１００℃で加熱し、２４時間攪拌した。反応が完了するまで、ＨＰＬＣを用いてリアルタイムで反応の進行を追った。反応混合物を次に冷却させ、攪拌しながら２Ｌの水へと注いだ。結果として生じた溶液を次に、一晩４℃で保管した。未反応のライン加塩材料（rhein salting material）を、遠心機により除去した。１１０ｇの塩化ナトリウムを加えることにより、化合物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸をそのナトリウム塩として沈殿させた。結果として得られた懸濁液を１時間４℃で冷却し、その後、遠心分離して固体生成物を分離し、減圧下で乾燥した。２．３２ｇの生成物が得られた。
【００４９】
塩の除去
上記のように得られた生成物を、４℃で３０分間混合しながら水（１１５ｍＬ）に加えた。懸濁液を次に遠心分離し、デカントして残りの塩を含む上澄みを除去した。伝導率計（Radiometer CDM 206）で測定される伝導率が一定（およそ３３０μＳ／ｃｍ）になるまで、７回この操作を繰り返した。遠心分離した後の残渣を次に、減圧下で乾燥して、ＨＰＬＣにより決定されたときに９５．６％の純度を有する生成物を４８０ｍｇ得た。
【００５０】
＜実施例２＞
性質決定
１Ｈ−ＮＭＲ分析
実施例１で得られた生成物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを、Bruker（登録商標）分光計を用いて４００ＭＨｚで、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で行なった。図１（ａ）〜図１（ｃ）に示されている得られたスペクトルは、生成物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸との一致を示している。
【００５１】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、４つだけの芳香族プロトンの存在を指し示しており、このうち２つがメタ位にあり、２つがオルト位にある。ヒドロキシル置換基だけを予め有していた環にスルホン酸置換が起こったことを示している。増加分に基づいて算出（caculated）された化学的な転置に匹敵する化学的な転置（シフト）が、スルホン酸基の置換がオルト位におけることを示している。
【００５２】
質量分析
Agilent 1100 LC-MS Spectrometerを用い、大気圧でのネガティブエレクトロスプレーモード（negative eletro-spray mode）のイオン化を用いて、実施例１の生成物に対して質量分光分析法を行なった。図２に示されている得られたスペクトルは、３６４にピークを示しており、このため、生成物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸、式（III）との一致を示している。
【００５３】
＜実施例３＞
６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸ナトリウム塩の調製
９９％を超える純度を有する純粋なジアセレインの脱アセチル化により生成されたライン（１ｇ）を、濃縮された硫酸（１００ｍＬ）中に溶解した。この溶液を１００℃で加熱し、２４時間攪拌した。反応が完了するまで、ＨＰＬＣを用いてリアルタイムで反応の進行を追った。反応混合物を次に、冷却させ、攪拌しながら２Ｌの水に注いだ。結果として生じた溶液を次に、一晩４℃で保管した。遠心機により、未反応のライン加塩材料を除去した。上澄み（surnatant）のｐＨを１ＭのＮａＯＨで７．０に調節した。生成物６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸をそのナトリウム塩の形態で次に単離し、逆相Ｃ１８シリカカラムおよびメタノール／水／Ｈ３ＰＯ４溶出剤を用いて、調製用ＨＰＬＣによりこの溶液から精製した。１ｇの生成物が単離され、実施例２におけるようなＮＭＲおよびＭＳにより、６−スルホ−４，５−ジヒドロキシ−９，１０−ジオキソ−２−アントラセンカルボン酸ナトリウム塩と特徴づけられた。
【００５４】
＜実施例４＞
ヒト軟骨細胞におけるＩＬ−１β阻害についてのインビトロの研究
ヒトの正常な軟骨細胞および骨関節炎（ＯＡ）軟骨細胞によるＩＬ−１βサイトカインのリポ多糖（ＬＰＳ）に刺激された生成を阻害することにおける実施例１の化合物およびラインの活性を研究した。
【００５５】
材料および方法
正常な被験者またはＯＡ患者の外傷性の骨折が原因である全股関節プロテーゼのための整形外科手術の間に、ヒト軟骨を得た。ＯＡを有する患者は、下記の基準、すなわち、（１）両側性のＯＡ、（２）放射線学および病理学のサポートによる中程度のＯＡ（Kellgren-LaurenceグレードＩ−ＩＩＩ）との診断、に基づいて選択した。
【００５６】
４人のＯＡ患者と９人の正常な被験者とから得られた軟骨試料から、単離された軟骨細胞の懸濁液を調製した。試料は、無菌状態下で入手し、維持した。軟骨を小片へと切断し、４８時間３７℃で炭酸塩／炭酸水素塩緩衝剤中で１ｍｇ／ｍＬのクロストリジウムのコラゲナーゼでインキュベートした。いったん軟骨マトリクスから分離した軟骨細胞を、１５００ＲＰＭで５分間遠心分離した。培地（１０％ＳＣＦを補ったＤＭＥＭ）中に懸濁した分離された軟骨細胞を実験のために用いた。細胞生存度を、トリパンブルー色素排除法（Trypan blue exclusion）により評価した。
【００５７】
ＩＬ−１βの生成に対する細菌性菌体内毒素（ＬＰＳ）による軟骨細胞のインビトロの刺激を以下のように行なった。
すなわち、培地中１ｘ１０６細胞／ｍＬのアリコートを、１５ｍＬのFalcon管において接種し、旋動振盪機（１００ＲＰＭ）においてかき混ぜ続けた。
【００５８】
２０ｍｇ／ｍＬのライン、または濃度を増やしていった（１、５、１０、２０、および３０μｇ／ｍＬ）テスト化合物（実施例１の化合物）を含むＭＰＳ（１０μｇ／ｍＬ）の存在下で４８時間、軟骨細胞を培養した。ラインを含むサンプルについて、ラインの疎水性の特質に関連する溶解性の問題を最小限にするために、溶液を５分間超音波処理に供した。テスト化合物の溶液については、その優れた溶解性のためにこの問題は存在しなかった。
【００５９】
軟骨組織によるＩＬ−１β生成を、ELISAキットにより種々のサンプル培養液中の培地でアッセイした。
図３は、ELISAにより評価したときの、ＬＰＳ刺激された正常な軟骨細胞およびＯＡ軟骨細胞におけるＩＬ−１β生成についての、ラインおよび実施例１の化合物で得られた結果を示している。図４は、テスト化合物（実施例１の化合物）による、正常な軟骨細胞のＩＬ−１β生成の投与量依存性の阻害を示している。図３に示した結果は、ラインに比較して、本発明の化合物が有意に増加したＩＬ−１β阻害活性を示すことを示している。図４は、本発明に従う化合物が、１０〜２０ｍｇ／ｍＬの間で阻害が最大になる、ＩＬ−１β生成の有意な阻害を提供することを示している。
【００６０】
〔実施の態様〕
（１）式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩であって、
【化７】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である、
化合物またはその塩。
（２）実施態様（１）に記載の化合物において、
Ｒ１、Ｒ２は独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、Ｒ３およびＲ４はＨであり、Ｒ５は−ＳＯ３Ｈである、化合物。
（３）実施態様（１）または（２）に記載の化合物において、
式（III）を有する、化合物。
【化８】
（４）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
薬物としての使用のための、化合物。
（５）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための、化合物。
（６）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
炎症性または自己免疫性の状態の処置のための薬物としての使用のための、化合物。
（７）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物において、
慢性関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、乾癬、アテローム性動脈硬化症、パジェット病、慢性心臓病、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、肺気腫、喘息から選択される状態の処置のための、化合物。
（８）実施態様（７）に記載の化合物において、
前記状態が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、化合物。
（９）医薬品組成物であって、
活性成分として、実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、医薬品組成物。
（１０）実施態様（９）に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、非経口投与のためのものである、医薬品組成物。
（１１）実施態様（９）に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、経口投与のためのものである、医薬品組成物。
（１２）実施態様（９）に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、局所的投与のためのものである、医薬品組成物。
（１３）ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための方法において、
治療上有効な量の、実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
（１４）炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための方法において、
治療上有効な量の、実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
（１５）実施態様（１３）に記載の方法において、
前記疾患が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、方法。
（１６）実施態様（１）〜（３）のいずれかに記載の化合物の使用において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための薬物の製造のための、使用。
（１７）式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩の調製のための方法において、
【化９】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、
前記方法は、
式（II）の化合物を濃縮された硫酸で処理することを含み、
【化１０】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＨである、方法。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１ａ】本発明に従う化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示している。
【図１ｂ】本発明に従う化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示している。
【図１ｃ】本発明に従う化合物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示している。
【図２】本発明に従う同じ化合物の質量分析を示している。
【図３】ヒト軟骨細胞におけるＩＬ−１βサイトカイン生成の阻害に対する本発明に従う化合物の影響を示すグラフ表示である。
【図４】本発明に従う化合物によるヒト軟骨細胞におけるＩＬ−１βサイトカイン生成の投与量依存性の阻害を示すグラフ表示である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩であって、
【化１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である、
化合物またはその塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物において、
Ｒ１、Ｒ２は独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、Ｒ３およびＲ４はＨであり、Ｒ５は−ＳＯ３Ｈである、化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物において、
式（III）を有する、化合物。
【化２】
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
薬物としての使用のための、化合物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための、化合物。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
炎症性または自己免疫性の状態の処置のための薬物としての使用のための、化合物。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
慢性関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、乾癬、アテローム性動脈硬化症、パジェット病、慢性心臓病、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、肺気腫、喘息から選択される状態の処置のための、化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物において、
前記状態が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、化合物。
【請求項９】
医薬品組成物であって、
活性成分として、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、医薬品組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、非経口投与のためのものである、医薬品組成物。
【請求項１１】
請求項９に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、経口投与のためのものである、医薬品組成物。
【請求項１２】
請求項９に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、局所的投与のためのものである、医薬品組成物。
【請求項１３】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための方法において、
治療上有効な量の、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
【請求項１４】
炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための方法において、
治療上有効な量の、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法において、
前記疾患が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、方法。
【請求項１６】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の使用において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための薬物の製造のための、使用。
【請求項１７】
式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩の調製のための方法において、
【化３】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、
前記方法は、
式（II）の化合物を濃縮された硫酸で処理することを含み、
【化４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＨである、方法。
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩であって、
【化１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基である、
化合物またはその塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物において、
Ｒ１、Ｒ２は独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、Ｒ３およびＲ４はＨであり、Ｒ５は−ＳＯ３Ｈである、化合物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化合物において、
式（III）を有する、化合物。
【化２】
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
薬物としての使用のための、化合物。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための、化合物。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
炎症性または自己免疫性の状態の処置のための薬物としての使用のための、化合物。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、
慢性関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、乾癬性関節炎、乾癬、アテローム性動脈硬化症、パジェット病、慢性心臓病、潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む炎症性腸疾患、子宮内膜症、ウェゲナー肉芽腫症、アルツハイマー病およびパーキンソン病といった神経性機能障害、骨髄腫、骨髄性白血病、骨転移、糖尿病性ネフローゼ、肺気腫、喘息から選択される状態の処置のための、化合物。
【請求項８】
請求項７に記載の化合物において、
前記状態が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、化合物。
【請求項９】
医薬品組成物であって、
活性成分として、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を含む、医薬品組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、非経口投与のためのものである、医薬品組成物。
【請求項１１】
請求項９に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、経口投与のためのものである、医薬品組成物。
【請求項１２】
請求項９に記載の医薬品組成物において、
前記組成物が、局所的投与のためのものである、医薬品組成物。
【請求項１３】
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための方法において、
治療上有効な量の、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
【請求項１４】
炎症性または自己免疫性の疾患の処置のための方法において、
治療上有効な量の、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩を、対象者に投与すること、
を含む、方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の方法において、
前記疾患が、変形性関節症、慢性関節リウマチ、乾癬性関節炎、および乾癬から選択される、方法。
【請求項１６】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の使用において、
ＩＬ−１ファミリーの炎症誘発性サイトカインにより仲介または影響された状態の処置のための薬物の製造のための、使用。
【請求項１７】
式（Ｉ）の化合物、またはその薬剤的に許容可能な塩の調製のための方法において、
【化３】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はそれぞれ独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、Ｈ、または式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、ここで、Ｒ６は、Ｈ、またはＣ１−４アルキル基、もしくはＣ２−４アシル基であり、
但し、Ｒ４およびＲ５の少なくとも一方は、式−ＳＯ３Ｒ６の基であり、
前記方法は、
式（II）の化合物を濃縮された硫酸で処理することを含み、
【化４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３はＨである、方法。
【図１ａ】
【図１ｂ】
【図１ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図１ｂ】
【図１ｃ】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２０１１−５０３１７０（Ｐ２０１１−５０３１７０Ａ）
【公表日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３３７０５（Ｐ２０１０−５３３７０５）
【出願日】平成２０年１１月１４日（２００８．１１．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／０５４７７７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６３４２７
【国際公開日】平成２１年５月２２日（２００９．５．２２）
【出願人】（５０９１７６３１８）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月１４日（２００８．１１．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／０５４７７７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６３４２７
【国際公開日】平成２１年５月２２日（２００９．５．２２）
【出願人】（５０９１７６３１８）
【Ｆターム（参考）】
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