テクトリゲニンのイソフラボン誘導体、その調製、および有効成分としてこれを含む抗ウィルス剤
【課題】テクトリゲニンのイソフラボン誘導体、その調製、および有効成分としてこれを含む抗ウィルス剤
【解決手段】 本発明は、下記の式（ＩＩ）で示されるようなテクトリゲニン化合物のイソフラボン誘導体、その調整方法、および有効成分としてこれを含む抗ウィルス剤に関する。化合物の構造を下記に示す。
【化１】
（式中、Ｒ1はＨ，ＮＨ2またはＳＯ3Ｍであり、Ｒ2はＯＲ’であり、Ｒ3はＨまたは−ＣＨ2ＮＲ’’（Ｒ’はＨ，−ＣＨ2ＣＯＯＮａまたは−ＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、ＮＲ’’はピペリジノ基または−ＮＭｅ2であり、ＭはＨ，Ｎａ，ＫまたはＮ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である））
【解決手段】 本発明は、下記の式（ＩＩ）で示されるようなテクトリゲニン化合物のイソフラボン誘導体、その調整方法、および有効成分としてこれを含む抗ウィルス剤に関する。化合物の構造を下記に示す。
【化１】
（式中、Ｒ1はＨ，ＮＨ2またはＳＯ3Ｍであり、Ｒ2はＯＲ’であり、Ｒ3はＨまたは−ＣＨ2ＮＲ’’（Ｒ’はＨ，−ＣＨ2ＣＯＯＮａまたは−ＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、ＮＲ’’はピペリジノ基または−ＮＭｅ2であり、ＭはＨ，Ｎａ，ＫまたはＮ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である））
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テクトリゲニン化合物の誘導体に関し、より詳細には、５，７，４’−トリヒドロキシ−６−メトキシイソフラボンの化学名を有するテクトリゲニン化合物誘導体に関する。本発明は、本発明の化合物の調製方法にも関する。本発明は、有効成分として本発明の化合物を含む抗ウィルス剤にも関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザや他の多くのウィルス感染によって引き起こされる上気道感染およびウィルス性肺炎などの疾病は、死に至らしめることさえある、一般的かつよくみられる病気である。このような気道感染症の治療には主として化学治療法が用いられている。しかしながら、薬剤耐性細菌株および薬剤耐性ウィルス株の増殖速度が、化学抗生剤の開発速度を超えてしまうということが無視できない問題となってきている。この分野においては、天然の漢方薬の利点を最大限活用すること、特に、天然の薬品から有効な薬学的成分を抽出および分離すること、および／またはそれらに基づいた新しい薬学的化合物の開発または改変を行うことが益々注目されている。
【０００３】
Ｓｕｎ Ｙｕａｎｂｉｅｔら（Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９８４，９（５））、Ｃｈｅｎｇ Ｆａｎｇｑｕｎ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｈｅｒｂａｌ ｄｒｕｇｓ １９９０，２２（２））、Ｘｕ Ｙｕｎｌｏｎｇ（Ｐｌａｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ １９９９，２１（１））、Ｊｉ Ｗｅｎｌｉａｎｇら（Ｏｖｅｒｓｅａｓ ｍｅｄｉｃｉｎｅｐｌａｎｔ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐａｒｔ ２０００，１５（２）およびＣｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｒｏｐ ２０００，２３（８））などの多くの研究報告や文献に報告されているように、式（Ｉ）で示されるテクトリゲニン化合物は、伝統的な漢方薬、すなわち、イチハツ（Ｉｒｉｓ ｔｅｃｔｏｒｉｕｍ Ｍａｘｉｍ）、ヒオウギ（Ｂｅｌａｍｃａｎｄａ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）DＣ）、野鳶尾（Ｉｒｉｓ ｄｉｃｈｏｔｏｍａ ｐａｌｌ．）、シャガ（Ｉｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）およびイチハツ（Ｉｒｉｓ ｔｅｃｔｏｒｕｍ）のような抗ウィルス性、抗菌性、および抗炎症性機能を有したアヤメ科植物中に広く存在する多くのフラボン化合物成分のなかのひとつのイソフラボンである。
【０００４】
【化１】
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような多くの文献中の研究結果には、伝統的な漢方薬であるイチハツ（Ｉｒｉｓ ｔｅｃｔｏｒｕｍ Ｍａｘｉｍ）中に含まれるイソフラボン成分が、明白な抗ウィルスおよび抗炎症機能を有していることが示されている。テクトリジンは、イチハツ中の主たる有効成分（含有量約５％）である。その文献報告と薬物動態研究とから、さらに強い抗ウィルスおよび抗炎症機能を有することが示されている。上記の式（Ｉ）に示すようなテクトリゲニンの文献および薬物動態研究から、テクトリゲニンは、テクトリジンの加水分解産物と同様のより強い抗ウィルスおよび抗炎症機能を有していることが実証されている。しかしながら、テクトリジンとテクトリゲニンのいずれも水溶性が小さく、その臨床的用途が限定されるため、それらの水溶性を改善し高めることが最初に解決すべき問題となっている。実験結果からは、テクトリジンおよびテクトリゲニンに対して、それらの薬学的有効性を維持もしくは向上しながらも、水溶性を高め、治療効果を強化し、それらの応用可能な医薬剤範囲を広げるためには、調製手順のなかで水溶性を高めることは理想的ではなく、テクトリジンおよびテクトリゲニンの化学的修飾によりそれらの化学構造を変えることだけが実現可能な手段であることが分かっている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記式（Ｉ）において示されるテクトリゲニン化合物に基づく化学的修飾によって得られる一連の誘導体を提供し、本発明の化合物は、テクトリゲニンの元の抗菌性、抗ウィルス性、抗炎症性、および解熱および鎮痛効果を少なくとも維持しつつも、その水溶性を大幅に改善し、向上させることができる。したがって、本発明は、テクトリゲニン化合物の薬学および臨床用途範囲を広げるのに非常に有利である。
【０００７】
さらに、本発明は、本発明の化合物を有効成分として含む抗ウィルス薬を提供し、特に、本発明の化合物を含有する注射用調合薬剤を提供する。
【０００８】
本発明のテクトリゲニン誘導体、すなわち、５，７，４’−トリヒドロキシ−６−メトキシイソフラボン誘導体の化学名をもつものを式（ＩＩ）に示す。
【０００９】
【化２】
【００１０】
（式中、Ｒ1はＨ，ＮＨ2またはＳＯ3Ｍであり
Ｒ2はＯＲ’であり、
Ｒ3はＨまたは−ＣＨ2ＮＲ’’であり、
Ｒ’はＨ，−ＣＨ2ＣＯＯＮａまたは−ＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、
ＮＲ’’はピペリジノ基または−ＮＭｅ2であり、
ＭはＨ，Ｎａ，ＫまたはＮ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である）。
【００１１】
上記一般式（ＩＩ）で示される化合物のうちの典型的な化合物は、Ｒ1がＳＯ3Ｍ’’（式中、Ｍ’’はＨ，Ｎａ，Ｋまたは−Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3でありうる）であり、その構造が式（ＩＩＩ）に示されるスルホン酸化合物である。
【００１２】
【化３】
【００１３】
上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物のうちの典型的な化合物は、すなわち、ＳＯ3Ｍ’’のＭ’’はＨ，ＮａまたはＫであり、その構造が式（ＩＶ）に示されるスルホン酸またはスルホネート化合物である。
【００１４】
【化４】
【００１５】
上記一般式（ＩＩＩ）に示す化合物における別の典型的な化合物は、そのスルホン酸基Ｒ1が−ＳＯ3-Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3であり、その構造が式（Ｖ）に示されるものである。
【００１６】
【化５】
【００１７】
本発明でいう一般式（ＩＩ）は、Ｒ1がＮＨ2であり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3がＨであり、その構造が式（ＶＩ）に示される典型的な化合物をも含んでいる。
【００１８】
【化６】
【００１９】
本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、Ｒ1がＨであり、Ｒ2が−ＯＣＨ2ＣＯＯＮａであり、Ｒ3がＨであり、その構造が式（ＶＩＩ）に示されるものである。
【００２０】
【化７】
【００２１】
さらに、本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、式（ＩＩ）におけるその構造において、Ｒ1およびＲ3がＨであり、Ｒ2がＯＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が式（ＶＩＩＩ）で示される。
【００２２】
【化８】
【００２３】
さらに、本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、式（ＩＩ）におけるその構造において、Ｒ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＲ’’（式中、ＮＲ’’は、ピペリジノ基である）であるものであり、その構造が式（ＩＸ）で示される。
【００２４】
【化９】
【００２５】
さらに、本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、式（ＩＩ）におけるその構造において、Ｒ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が式（Ｘ）で示される。
【００２６】
【化１０】
【００２７】
上記すべての典型的な化合物のうち、式（ＶＩ），（ＶＩＩＩ），（ＩＸ）および（Ｘ）に示す化合物は、薬学的に許容される塩化合物、たとえば、最も一般的に用いられている対応する塩酸塩化合物であってもよい。
【００２８】
式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として、種々の具体的な置換基および／または置換位置に対応する本発明における上記式（ＩＩ）に示すあらゆる化合物を、既知のものと同様の置換化合物調製の原理および方法を用いて作成することができる。
【００２９】
たとえば、本発明の化学修飾のための原料として用いる前駆化合物、すなわち、上記式（Ｉ）に示すテクトリゲニンイソフラボン化合物は、アヤメ科の多くの上記植物から、これまでに報告されたように抽出および分離することによって、より好都合かつ容易に得ることができるが、ｄｅ ｎｏｖｏ合成によって製造してもよい。たとえば、参考にできる抽出方法としては次のものがある。
【００３０】
原薬効材料であるイチハツを乾燥させ、粉砕し、粗くスクリーニングし（メッシュ＃２０によって）、抽出機に入れ、７０％エタノール（その重量は薬剤の４倍）によって加熱し、それぞれ３回再循環させ（各回１時間の持続時間）、熱いうちにろ過し、その濾液を回収する。減圧下でエタノールを回収すると、比重が１．２ｇ／ｍＬ（５０℃）の茶色のエキス状抽出物が、原薬効材料の４９〜５１（重量）％の収率で得られる。上記の抽出物に９５％エタノールを添加した後、均一になるまで攪拌し、懸濁液を沈殿させてろ過し、濾液に再度９５％エタノールを添加した後、均一になるまで攪拌し、濾液がほぼ無色になり、粗テクトリジンが得られるまで、この操作を２度繰り返す。７０％エタノールを添加した後、加熱し、再循環し、放置して淡黄色の沈殿物を遊離させ、濾去する。７０％エタノールによって再結晶させると、無色の結晶状粉末テクトリジンが、原薬効材料の４．５％の収率で得られる。
【００３１】
２００ｇのテクトリジンを丸底フラスコに入れ、２０００ｍＬの５０％エタノールを加えた後に均一に攪拌し、均一に振盪し、２００ｍＬの濃塩酸を加えた後、２時間のあいだ加熱再循環させ、熱いうちにろ過し、放置すると、淡黄色の薄くて細い針状結晶が遊離する。これをろ過し、４００ｍＬの９５％エタノール中に溶解し、８００ｍＬの沸騰水に注ぎ、冷却すると、淡黄色の薄くて細い針状結晶が遊離する。これをろ過した後、再度再結晶させ、６０℃の減圧下で乾燥させると、１２０ｇの式（Ｉ）で示すテクトリゲニンの精製イソフラボン化合物（淡黄色の薄くて細い針状結晶）が得られが、この収率は薬物量の３％であり、その含量は９８％を超える。
【００３２】
式（ＩＩＩ）に示す誘導体については、Ｒ1がＳＯ3Ｈである置換生成物は、一般に、式（Ｉ）に示すイソフラボン化合物を硫酸を用いてスルホン化することによって得られる。その最適化方法の１つとしては、１．０ｇのテクトリゲニンをとり、４．０ｍｌの濃硫酸を添加後、溶解するまで攪拌し、１．５〜２時間室温で反応させ、全反応工程を無水条件で行うことにより、Ｍ’’がＨの式（ＩＩＩ）に示す硫酸誘導体生成物が得られる。
【００３３】
これを、ＮａＣｌまたはＫＣｌなどの飽和生理食塩水によって処理すると、上記の式（ＩＶ）で示す対応するスルホン酸ナトリウムまたはスルホン酸カリウム化合物が得られる。その２段階合成ラインは以下のとおりである。
【００３４】
【化１１】
【００３５】
上記式（Ｖ）に示すテクトリゲニン化合物の調製方法：式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料に用い、濃硫酸と混合し、４０〜９０℃（最適温度は６０℃）で加熱攪拌し、冷却後、飽和塩化ナトリウム、他のアルカリ金属塩酸、臭化水素酸塩、または硝酸塩溶液中に注ぐと、３’−ナトリウムスルホネート中間生成物が得られる。これをエタノール溶液中に溶解し、これに強酸カチオン樹脂を加え、完全に溶解するまで室温で攪拌した後、トリエタノールアミンを加えて、溶媒を減圧下で蒸発させると、式（Ｖ）で示される化合物が得られる。この合成ラインは以下のとおりである。
【００３６】
【化１２】
【００３７】
上記の式（ＶＩ）に示されるテクトリゲニン化合物の調製方法：式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として、これを氷浴中で冷却しながら硝酸と濃硫酸の混合物と混合したエタノール溶液（すなわち（硝酸＋硫酸）／エタノール））を滴下することにより、３’−ニトロ中間化合物が得られる。これをメタノールに溶解し、大気圧における水素触媒還元によって３’−アミノ置換化合物（ＶＩ）を得る。さらに、式（ＶＩ）で示す対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができる。この合成ラインは以下のとおりである。
【００３８】
【化１３】
【００３９】
上記の式（ＶＩ）に示すテクトリゲニン化合物を調製する際には、式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料とし、ブタノンとＤＭＦの混合溶媒中にクロロ酢酸エチルとともに溶解し、これに無水Ｋ2ＣＯ3および触媒量のＮａＩを加え、混合物を攪拌し、再循環させ、室温まで冷却し、その不溶物質を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、残渣を適当量の水中に溶解し、酢酸エチルで抽出した後、水で洗浄し、乾燥したのち溶媒を減圧下で濃縮し、フラッシュカラム分離によって４’−エステル−エーテル中間生成物を得る。これをメタノールに溶解し、攪拌しながらＮａＯＨの水溶液を滴下して、常温にて完全に加水分解した後、ｐＨ値を酸によってｐＨ３〜４に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させることによって凝縮沈殿を得る。水洗後、ＮａＨＣＯ3と反応させることにより化合物（ＶＩＩ）（ナトリウム塩）が得られる。この合成ラインは以下のとおりである。
【００４０】
【化１４】
【００４１】
上記の式（ＶＩＩＩ）に示されるようなテクトリゲニン化合物を調製するために、β−ジメチルアミノエタノールをまず最初にジクロロスルホキシド中に滴下し、０℃で激しく攪拌し、滴下後、混合物を３５〜５０℃で攪拌し、反応させ、無水エタノールを用いて再結晶させて、中間生成物であるβ−ジメチルアミノクロライドハイドロクロライドＡを得る。式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料とし、ブタノン、アセトン、ＤＭＦ、ＴＨＦまたはジオキサンなどの溶媒中に溶解し、これに、無水Ｋ2ＣＯ3またはＮａ2ＣＯ3、ＤＭＦおよび触媒量のＮａＩを加え、これを加熱再循環させ、上記中間生成物Ａを半時間ごとに５回に分けて加えるようにしてもよい。これを約８０℃で再循環させ、薄い積層を用いてチェックし、冷却後ろ過し、ロータリーエバポレータ中、減圧下において濾液を濃縮することにより粘着物が得られ、適当な量の水（約１０重量倍量の水）によって希釈した後に酢酸エチルで抽出し、水洗後、この抽出物を乾燥させ、溶媒を蒸発させて、化合物（ＶＩＩＩ）を得る。薬学的に許容される酸との反応によって、対応する塩化合物をさらに得ることができる。合成ラインは以下のとおりである。
【００４２】
【化１５】
【００４３】
上記式（ＩＸ）で示されるテクトリゲニン化合物の調製方法：式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として用いて、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ピペリジン、および、ジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールなどの溶媒のうちの１つと混合し、反応物を再循環させた後にこれを冷却してろ過することにより、化合物（ＩＸ）を得る。さらに、式（ＩＩＩ）に示すような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができる。合成ラインは以下のとおりである。
【００４４】
【化１６】
【００４５】
実験結果から、反応生成物を完全に達成するための上記反応の化学構造の環Ａ上における位置選択性は非常に特異的であり、文献中に報告され、以前に設計された位置（環Ｃ上）とは異なることが分かる。このように、本発明は、テクトリゲニンイソフラボンを化学構造の環Ａ上で選択的に誘導体を得るための方法を提供し、その構造改造が活性に与える影響を全面的に調べるのに好ましい。しかしながら、誘導化は他の反応においては殆どが環Ｃ上で行われる。上記式（Ｘ）に示されるようなテクトリゲニン化合物は、この原理に基づいた同様の方法を用いることによって得ることができる。たとえば、式（Ｉ）に示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として使用し、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ジメチルアミノハイドロクロライド、および、ジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールなどの溶媒のうちの１つと混合し、反応物を再循環させた後に冷却し、ろ過して残渣を回収することにより、化合物（Ｘ）を得る。さらに、式（ＩＩＩ）に示されるような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができる。合成ラインは以下のとおりである。
【００４６】
【化１７】
【００４７】
抗ウィルス機能を有する対応する薬学的組成物は、有効医薬成分としての有効用量の上記式（ＩＩ）に示されるテクトリゲニン化合物の誘導体と、薬学的に許容される副材料成分とから、現行の従来的調製方法によって製造することができる。これら上記の抗ウィルス組成物について、上記の塩化合物は、抗ウィルス機能を有する注射型薬剤を調製するのに特に適しているが、これは、経口剤が普通に得られること以外に、前記塩化合物が十分な水溶性を有することができるからである。たとえば、上記典型的な化合物との比較試験は、中国薬局方第２巻、２０００年版の１０頁に掲載されている例のなかの溶解度試験法にしたがって以下のように行う。細かく粉砕した粉末試験試料をとり、２５℃±２℃の一定量の溶媒に加え、混合物を３０分間にわたって５分おきに激しく振盪し、薬局方に記された様々な溶液特性定義に従った試験を行う。得られる結果を表１に示す。
【００４８】
【表１】
【００４９】
表１の結果は、多くの容易に加塩されるおよび／または親水性の基を導入することで、本発明の様々な構造形態のテクトリゲニン誘導体の化学的に修飾されたイソフラボン化合物（ＩＩ）の溶解性が、大幅に高まること、また、これがその薬学的および臨床的用途にとって、およびｉｎ ｖｉｖｏにおける吸着および生物利用性にとっても好ましいことを示すものである。
【００５０】
注射剤中での上記式（ＩＩ）に示されるテクトリゲニン化合物誘導体の溶液安定性をさらに保証し、高めるために、注射製剤において許容される可溶化成分を、上記注射型製剤を製造する際にこれに基づいて許容量で用いることもできる。対照用に用いることができ、試験結果によって有効であることが証明されている有益な最適方法のひとつは、可溶化剤として、グルコースを、全注射量に対して２〜１５％の重量／体積比で前記注射型製剤に添加して、グルコース中のポリヒドロキシと式（ＩＩ）に示されるイソフラボンとの構造的会合により水素結合を形成させることにより、その水中溶解性を大きくすることである。
【００５１】
上記式（ＩＶ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムを例にとると、水溶性は室温で２０ｍｇ／ｍＬ（２％）であり、薬剤濃度に達することができなかったが、この水溶性は、６０〜１００℃に加熱すると５０〜６０ｍｇ／ｍＬまで高めることができ、室温まで冷却すると沈殿が遊離する。しかしながら、水または随意で糖食塩水で希釈した場合、室温および低（０℃〜５℃）温度において透明に維持することができ、注射剤に４％グルコースを加えた後でも濁ることはなかった。したがって、糖および／または食塩水中に加えた場合には、筋肉内注射だけでなく静脈注射にも使用することができる。このことは、グルコースが、上記式（ＩＶ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムの水溶性を高めつつ、注射用薬学的製剤の安定性を大幅に高めることができることを実証するものである。
【００５２】
たとえば、有効な薬学的成分として上記テクトリゲニンのイソフラボン誘導体（ＩＩ）を含有する注射製剤の調製の方法の一例として、５〜８０（重量）部のテクトリゲニン誘導体（ＩＩ）と、２０〜１５０（重量）部の注射用グルコースとを、７００〜８００（重量）部の注射用水に溶解し、完全溶解後に注射用水を加えて、全体積を１０００（重量）部とする。Ｇ４焼結ガラス漏斗によってろ過し、従来の包装および滅菌を行うと、２〜１５％グルコースと、５〜８０ｍｇ／ｍＬの有効な薬学的成分（すなわち、化合物（ＩＩ））とを含む淡黄色透明液体注射剤が得られる。
【００５３】
本発明を以下の具体例のなかでより詳細に説明する。しかしながら、本発明の主題が以下の例だけに限定されるとは理解すべきでない。当該分野における技術的常識および従来の手段による様々な置換および変更はすべて、本発明における上記技術的着想から逸脱しない限りにおいて、本発明範囲に包含される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５４】
【実施例１】
【００５５】
化合物（ＩＶ）の調製
１２０ｇの式（ＩＩ）に示されるテクトリゲニンと、４８０ｍＬの濃硫酸とを混合し、完全に溶解するまで攪拌し、１．５時間静置して反応させる。その後、この反応液を５０００ｍＬの飽和塩化ナトリウム中に攪拌しながらゆっくりと注いで、相当量の白色沈殿物を遊離させ、ろ過する。３０００ｍＬの水を沈殿に加え、これらを水浴中で沈殿が完全に溶解するまで加熱し、熱いうちにろ過し、結晶遊離およびろ過によって黄色の平らな結晶を得る。１０００ｍＬの水を結晶に加え、結晶が完全に溶解するまで混合物を水浴中で加熱し、熱いうちにろ過し、結晶を遊離させてろ過する。沈殿を減圧下、６０℃で乾燥させると、１５０ｇの式（ＶＩ）に示されるテクトリゲニンの精製スルホン酸ナトリウム生成物が得られる。これは淡黄色の薄くて細長い結晶であり、その含量は９８％を超える。
【００５６】
得られる式（ＶＩ）に示されるテクトリゲニンのスルホン酸ナトリウム生成物のスペクトルデータは以下のとおりである。
ＩＲ（ＫＢｒ圧縮錠、ｃｍ-1）：３４６５（ｓ），１６５４（ｓ），１６２２（ｓ），１５７５（ｓ），１４９４，１４６５（ｓ），１４３６，１３６７，１３４０，１２７８，１１６５（ｓ），１０９５（ｓ），１０７０，１０３１（ｓ），９９３，８３３，８１５，７６７，７３１，６６７，６３２，５６７，５４３，５０９，４５９；
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2Ｏが溶媒、ＴＭＳ内部標準、δＨｐｐｍ）：７．８８（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，１Ｈ），６．９４（ｄ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ）
【実施例２】
【００５７】
化合物（Ｖ）の調製
３００ｇ（１．０ミリモル）のテクトリゲニンイソフラボン（Ｉ）（以下、単に原料とよぶ）を５ｍＬの濃硫酸と混合し、混合物を６０℃で３時間加熱攪拌し、冷却し、２０ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液中に注ぐ。これを静置してろ過し、得られる固体物質を５％の塩化ナトリウム溶液を用いて再結晶すると、淡黄色の結晶で２８３ｍｇの中間生成物が得られる。この収率は７０％である。
【００５８】
１５０ｍｇ（０．２９４ミリモル）の上記中間生成物を５ｍＬのエタノールに懸濁し、これに前処理した強酸カチオン樹脂を過剰に加え、混合物を室温で１時間攪拌し、懸濁固体物質を完全に溶解する。混合物をろ過し、樹脂をアセトンで洗浄する。濾液に５５ｍｇのトリエタノールアミンを加え、溶媒を減圧下で蒸発させる。ジクロロメタンおよびアセトンを加えることにより、粉末固体物質の化合物（Ｖ）が得られ、この収率は９０％であり、融点は１５５〜１５９℃である。水中での溶解性は５０ｍｇ／ｍＬを超える。
【００５９】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ：７．９２（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，６Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ：１８２．４，１５９．０，１５６．５，１５５．７，１５５．０，１５４．１，１３５．８，１３３．２，１３０．３，１２４．１，１２３．２，１１９．６，１０６．９，９６．９，６２．８，５７．８，５７．５
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３３５６（ＯＨ，ＮＨ），３１５１，１６５５（Ｃ＝Ｏ），１６１２，１４４，１２９１，１１６８，１０９０
ＥＳＩ ＭＳ：３７９．１［Ｍ−ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3］-
元素分析：Ｃ22Ｈ27ＮＯ12Ｓ（％）：Ｃ４９．８４，Ｈ５．２２，Ｎ２．７１；計算値：Ｃ４９．９０，Ｈ５．１４，Ｎ２．６５
【実施例３】
【００６０】
化合物（ＶＩ）の調製
３００ｍｇ（１．０ミリモル）のテクトリゲニンイソフラボン（Ｉ）（以後、単に原料とよぶ）を５ｍＬエタノールに溶解し、エタノール溶液（３ｍＬ）を２１０ｍｇ（６８％）の硝酸と混合し、これに氷浴中で冷却しながら５００ｍｇの濃硫酸を滴下し、混合物を２４時間のあいだ攪拌する。ろ過後、１７０ｍｇの窒化化合物が得られ、その収率は４９％である。
【００６１】
融点：＞２００℃
ＥＳＩ ＭＳ：３４６．１（Ｍ＋１）+；３４４．１（Ｍ−１）-
【００６２】
１５０ｍｇの上記ニトロ化合物を４ｍＬのメタノールに溶解し、これに３０ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃを加え、化合物を大気圧において完全に水素化（５時間）する。ろ過、および減圧下におけるメタノール除去の後、生成物を５ｍＬの酢酸エチル中に溶解し、これに酢酸エチルＨＣｌ溶液を酸性（ｐＨ＝２〜３）になるまで加える。ろ過すると、式（ＶＩ）に示されるような塩酸塩生成物が得られ、その収率は８０％であり、融点は２５０℃を超える。水中の溶解度は１ｍｇ／ｍＬを超える。
【００６３】
関連構造試験データ
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１２．９４（ｓ，１Ｈ），１０．７８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．５８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８０．５，１５７．９，１５４．７，１５３．４，１５２．９，１５０．４，１３１．７，１２８．０，１２３．６，１２２．０，１２１．６，１２１．２，１１６．０，１０５．０，９４．２，６０．２
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３４２１（ＯＨ，ＮＨ），３０７９，１６４５（Ｃ＝Ｏ），１６１９，１５１８，１４７４，１２８４
ＥＳＩ ＭＳ：３１６．１（Ｍ＋１）+；３１４．１（Ｍ−１）-
元素分析：Ｃ16Ｈ14ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ５４．３５，Ｈ４．１５，Ｎ４．３５；計算値：５４．６３，Ｈ４．０１，Ｎ３．９８
【実施例４】
【００６４】
化合物（ＶＩＩ）の調製
３００ｍｇ（１ミリモル）の原料と、１３５ｍｇ（１．１ミリモル）のクロロ酢酸エチルと、８ｍｌのブタノンと、少量の５（体積）％のＤＭＦを混合し、これに２０７．３ｍｇ（１．５ミリモル）の無水Ｋ2ＣＯ3と触媒量（約５モル％）のＮａＩを加え、混合物を攪拌しながら再循環させる。これを室温まで冷却し、不溶物を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、残渣を適当量の水に溶解し、酢酸エチルで抽出し、２回水で洗浄し、乾燥させ、溶媒を減圧下で濃縮し、迅速クロマトグラフィーカラムによって分離すると、淡黄色中間生成物が得られ、その収率は３９．３％であり、融点は１６４〜１６７℃である。
【００６５】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１２．８５（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９８ｓ，３Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
ＥＳＩ ＭＳ：３８７．２（Ｍ＋１）+
【００６６】
１２５ｍｇ（０．３２ミリモル）の中間生成物を４ｍＬメタノールに溶解し、６４．８ｍｇ（１．６ミリモル）ＮａＯＨを水溶液（１ミリモル／ｍＬ）に調合し、これを上記メタノール溶液に攪拌しながら滴下し、完全に加水分解するまで常温で２４時間反応させ、溶液ｐＨを希塩酸によってｐＨ３〜４に調整し、メタノールを減圧下で蒸発させ、生成した白色綿状沈殿を酢酸エチルに溶解し、水洗し、乾燥させ、濃縮し、ＮａＨＣＯ3と反応させて、式（ＶＩＩ）に示されるナトリウム塩を製造する。この収率は８０％であり、融点は２５０℃を超える。水中での溶解度は２ｍｇ／ｍＬより高い。
【００６７】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：９．２４（ｓ，１Ｈ），１０．５８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．４７（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８０．７，１７０．３，１５８．９，１５８．２，１５４．２，１５２．９，１５２．６，１３２．２，１３０．０，１２２．３，１２０．７，１１５．４，１０５．５，９２．２，６８．５，６０．１
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３４２０（ＯＨ），１６５５（Ｃ＝Ｏ），１６１４，１４２２，１２９０，１１７６
ＥＳＩ ＭＳ：３５９．１（Ｍ−Ｎａ＋２）+，３５７．０（Ｍ−Ｎａ）-
元素分析：Ｃ18Ｈ13ＮａＯ8（％）：Ｃ５６．８２，Ｈ３．３２；計算値：Ｃ５６．８５，Ｈ３．４５
【実施例５】
【００６８】
化合物（ＶＩＩＩ）の調製
１４．５ｍＬ（０．１２ミリモル）のジクロロスルホキシドを乾燥丸底フラスコに入れ、これを氷浴上でβ−ジメチルアミノエタノールを滴下漏斗を用いて滴下し、溶液を激しく攪拌する。添加後、３５〜５０℃において１時間撹拌し、５０ｍＬの無水エタノールの添加による再結晶により、茶色の粘着物が得られ、β−ジメチルアミノクロライド塩酸塩中間生成物が得られる。これを適当量の無水エタノールとエチルエーテルで洗浄し、密閉状態で保存する。
【００６９】
１５０ｍｇ（０．５ミリモル）の原料を１５ｍＬのブタノンに溶解し、３２１４ｍｇ（１．５５ミリモル）の無水Ｋ2ＣＯ3、０．５ｍＬのＤＭＦおよび触媒量（約５モル％）のＮａＣｌを添加し、混合物を加熱して再循環させ、１１５．３ｍｇ（０．８ミリモル）の上記中間生成物を混合物中に回分式で（半時間毎に５回に分けて）添加し、後者を約８０℃で４８時間再循環させ、冷却し、不溶物質を濾去し、濾液を減圧下においてロータリ・エバポレータ中で乾燥するまで濃縮して、粘着物を得る。これをエチルアセトンによって抽出し、水洗し、乾燥させ、適当量（１０重量倍）の水によって希釈した後に濃縮すると、黄色の固体生成化合物（ＶＩＩＩ）が得られる。この収率は４６．５％である。塩酸塩は、従来の方法を用いて製造する。その融点は１９０℃（軟化）および２３５℃（分解）である。水中の溶解度は２ｍｇ／ｍＬを超える。
【００７０】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１２．９８（ｓ，１Ｈ），１０．５７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．６９（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．９４（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），２．８９（ｓ，６Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８０．９，１５７．８，１５７．２，１５７．０，１５４．８，１５３．０，１３２．２，１３０．３，１２２．４，１２１．１，１１５．４，１０６．５，９２．４，６４．４，６０．５，５５．２，４３．２
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３４１８（ＯＨ，ＮＨ），１６５６（Ｃ＝Ｏ），１６１４，１５１５，１４６０，１２７２
ＥＳＩ ＭＳ：３７２．１（Ｍ＋１）+
元素分析：Ｃ20Ｈ22ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ５８．８５，Ｈ５．７８，Ｎ３．６４；計算値：Ｃ５８．９０，Ｈ５．４４，Ｎ３．４３
【実施例６】
【００７１】
化合物（ＩＸ）の調製
３００ｍｇ（１．０ミリモル）の原材料、３７（重量）％の内容量の８１ｍｇ（１．０ミリモル）のホルムアルデヒド溶液、ピペリジン（２当量）および５ｍＬのジオキサンを混合し、３時間再循環させる。冷却およびろ過後、淡黄色の固体生成物（ＩＸ）が得られる。対応する塩酸塩は、適当量の濃塩酸をこれに加えることにより得られ、その収率は９０％である。融点は、２４５℃（分解）である。水中での溶解度は１ｍｇ／ｍＬ未満である。
【００７２】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１３．４３（ｓ，１Ｈ），１１．２６（ｓ，１Ｈ），１０．０３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．３８（ｍ，２Ｈ），２．９７（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．６３（ｍ，４Ｈ），１．３８−１．３６（ｍ，１Ｈ），１．０７−１．０４（ｍ，１Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８１．０，１５７．９，１５７．１，１５４．３，１５２．４，１３１．１，１３０．２，１２２．１，１２０．９，１１５．４，１０５．０，９５．５，８０．５，５６．２，５２．１，４８．２，２２．４，２１．２，１８．８
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３１９７（ＯＨ，ＮＨ），２９５４，１６５２（Ｃ＝Ｏ），１５８５，１５１５，１４５８，１３７４，１２２６
ＥＳＩ ＭＳ：３９８．０（Ｍ＋１）+；３９６．２（Ｍ−１）-
元素分析：Ｃ22Ｈ24ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ６０．５０，Ｈ５．７４，Ｎ３．５４；計算値：Ｃ６０．９０，Ｈ５．５８，Ｎ３．２３
【実施例７】
【００７３】
化合物（Ｘ）の調製
１５０ｍｇ（０．５ミリモル）の原料、３７（重量）％の内容量の４０．５ｍｇ（０．５ミリモル）のホルムアミド溶液、６１．２ｍｇ（０．７５ミリモル）の塩酸ジメチルアミンおよび２ｍＬのジオキサンを混合し、７０〜８０℃で１０時間再循環させる。冷却し、ろ過し、不溶物質を回収した後に、化合物（Ｘ）が得られる。生成物の塩酸塩は、酸（塩酸ｐＨ＝２〜３）の条件下でエタノールによって再結晶させると得られ、その収率は３８．７％である。融点は２４８℃（分解）である。水中での溶解性は２ｍｇ／ｍＬを超える。この生成物の位置選択性は、上記化合物（ＶＩＩ）の場合と同様である。
【００７４】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１３．４０（ｓ，１Ｈ），１１．３２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．２３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３４（ｓ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，６Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８１．０，１５７．９，１５６．９，１５４．３，１５４．２，１５２．３，１３１．１，１３０．２，１２２．２，１２０．９，１１５．４，１０５．０，９５．９，６０．６，４８．６，４２．３
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３１４５（ＯＨ，ＮＨ），１６５６（Ｃ＝Ｏ），１５７７，１４６２，１３７９，１２２３
ＥＳＩ ＭＳ：３５７．９（Ｍ＋１）+；３５６．２（Ｍ−１）-
元素分析：Ｃ19Ｈ20ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ５７．９９，Ｈ５．１１，Ｎ３．８５；計算値：Ｃ５７．９５，Ｈ５．１２，Ｎ３．５６
【実施例８】
【００７５】
様々な剤形の製剤の調製
１．注射剤
全注射量に対して、２〜１５％重量／体積比のグルコースを可溶化剤として加えることにより、水中での溶解性が飛躍的に高まる。これは、グルコース内のポリヒドロキシがイソフラボン基と会合することによって、水素結合が形成されるためである。
【００７６】
テクトリゲニンスルホン酸ナトリウムを例にとると、その水溶性は室温において２０ｍｇ／ｍＬ（２％）しかなく、製剤濃度に達することができないが、６０〜１００℃に加熱した後には、５０〜６０ｍｇ／ｍＬ（５〜６％）にまで高めることができ、室温まで冷却するとまた沈殿が遊離する。しかしながら、２〜１５％のグルコースを注射剤に添加した後には、室温および低（０℃〜５℃）温度において透明に維持することができ、水または糖食塩水によって任意に希釈することができ、濁ることもない。したがって、糖および／または食塩水中に加えた場合には、筋肉内注射だけでなく静脈注射にも使用することができる。このことは、テクトリゲニンスルホン酸ナトリウムの水中での安定性がグルコースによって高められているときには、注射用薬学的製剤の安定性を大幅に高めることができることを実証するものである。
【００７７】
１００ｇのテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムと、１５０ｇの注射用グルコースとを１５００ｍＬの注射用水に溶解し、それらを完全に溶解させた後、注射用水を加えて全体積を２０００ｍＬにする。Ｇ４焼結ガラス漏斗を用いてろ過した後に、濾液をアンプル瓶に充填し、従来の方法によって滅菌する。得られる注射剤は淡黄色の透明液体である。
【００７８】
１００ｇの式（Ｖ）に示される化合物と、１００ｇの注射用グルコースとを１５００ｍＬの注射用水に溶解し、それらを完全に溶解させた後、注射用水を加えて全体積を２０００ｍＬにする。Ｇ４焼結ガラス漏斗を用いてろ過した後に、濾液をアンプル瓶に充填し、従来の方法によって滅菌する。得られる注射剤は淡黄色の透明液体である。
【００７９】
１００ｇのテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムと、８０ｇの注射用グルコースとを１５００ｍＬの注射用水に溶解し、それらを完全に溶解させた後、注射用水を加えて全体積を２０００ｍＬにする。Ｇ４焼結ガラス漏斗を用いてろ過した後に、濾液をアンプル瓶に充填し、従来の方法によって滅菌する。得られる注射剤は淡黄色の透明液体であり、その後、凍結乾燥器で１５〜２８時間凍結乾燥させる。このようにして、注射用の黄色のさらさらとした（ｌｏｏｓｅ）凍結乾燥粉末が得られる。
【００８０】
２．経口製剤の調製
経口製剤には、錠剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、丸薬、滴下剤、ミニピルおよび様々な溶液剤が含まれる。
【００８１】
我々の合成するすべての誘導体が淡黄色および黄色固体であり、乾燥および微粉砕（すべての微粉末が篩＃５を通過することができ、９５％以上の粉末が篩＃６を通過することができることを意味する）によって得られることから、粉末剤は固体経口製剤としての様々な剤形の基礎となる。粉末は、篩にかけ、流動性と充填性を高めるために、適当な量の滑石粉補助材料を加えて得られる。
【００８２】
顆粒剤：薬剤と副材料を粉砕してよく混合した後、適当な粘着剤を加えてから顆粒化し、乾燥させ、顆粒分類を行い、充填する。
【００８３】
カプセル製剤：カプセルはソフトカプセルとハードカプセルに分けられる。ハードカプセルは薬剤粉末または顆粒のカプセル包装によって製造され、ソフトカプセルは、球形または柔らかいカプセル材料のなかに薬剤溶液を充填することによって製造される。適当な材料、すなわち乾燥ゼラチンを、グリセリンと水の比が１：０．４になるようにグリセリンおよび水と均一に混合したものをソフトカプセルの壁として使用し、薬剤溶液のｐＨ値を４．５〜７．５に調節し、メッシュ＃８０を通過する固体薬剤粉末から、滴下または圧縮プロセスによってソフトカプセルを製造することもできる。さらに、腸溶カプセルを製造することもできる。
【００８４】
さらに、エチレンビニル酢酸コポリマー（ＥＶＡ）やポリプロピレンなどの様々な副材料を選択し、使用して、常套的な調製手順にしたがって徐放および放出制御製剤のための骨格を作成するようにしてもよい。たとえば、テクトリゲニン誘導体製剤は、ミニカプセル化によって必要なだけ放出される製品にして、これを空の一般的なカプセルに充填するようにしてもよい。
【００８５】
滴下剤またはミニピル：滴下剤の利点は効果が迅速であり、高い生物利用性があり、副作用が小さく、液体製剤から作成された固形剤の薬物摂取および移送に都合がよく、薬物安定性が向上し、製造装置が簡単であり、扱いが簡単であり、重量のずれが小さく、コストが低く、粉塵もなく、多くのタイプの滴下剤を経口投与、外用、徐放、制御放出または局所治療のために用いることができることにある。
【００８６】
薬剤溶液は、ポリエチレングリコールやステアリン酸などの薬剤基質（基質は加熱）と均一に混合し、混合物を熱保護用の滴下剤機械に入れ、適当な縮合剤を入れた容器に滴下し、乾燥させ、縮合剤を洗浄除去した後に乾燥、分類し、品質を調整してから包装する。
【００８７】
錠剤：
錠剤には、通常の圧縮錠、咀嚼錠、発泡錠、複合圧縮錠、徐放錠、放出制御錠、コートされた剤形（糖衣錠、フィルムコート錠および腸溶コート錠）、分散錠剤、および口腔および舌下錠などが含まれる。
【００８８】
５０ｇのテクトリゲニン誘導体と９５０ｇのデンプンおよび粉末にした糖を、上記原料と副材料を粉砕して篩にかけた後、均一に混合し、これに適当量の粘着剤を加えて柔らかい材料を形成し、これを篩にかけて、顆粒化し、乾燥させ、分類して、それらに錠剤分解物質および潤滑剤を加えた後に完全に混合し、圧縮し、コートし、品質を調整してから包装する。
【００８９】
徐放および放出制御錠
５０ｇのテクトリゲニン誘導体をポリエチレンまたはポリプロピレン骨格と均一に混合し、圧縮して、従来の調製方法にしたがって１０００個の徐放錠を製造する。薬物はゆっくりと放出され、骨格は、薬物の放出後に排泄物とともに排出される。
【００９０】
３．外用製剤の調製
外用製剤には、ローション剤、点眼剤、噴霧剤、眼軟膏剤、ゲル剤、坐薬、塗布剤、軟膏剤、点鼻剤、点耳剤、フィルム剤および経皮ステッカーなどが含まれる。
【００９１】
眼軟膏剤：原料として誘導体を超微細な粉末（すべての粉末が篩＃７を通過でき、篩＃８を通過できる粉末を９５％より多く含むことを意味する）に粉砕し、適当な基質を添加した後、眼用のゲルまたは眼軟膏剤にする。
【００９２】
外用粉末の原料および副材料を非常に微細な粉末（すべての粉末が篩＃６を通過でき、篩＃７を通過できる粉末を９５％より多く含むことを意味する）に粉砕する。外用粉末は、一般には、ウィルスを殺すため、またはウィルス感染を防止するために用いることができる。
【００９３】
点眼剤：２０ｇのテクトリゲニン誘導体を原料として点眼剤を製造するが、そのｐＨはリン酸バッファ溶液ｐＨ値調整剤をこれに加えることによって５．９〜８．０に調節し、浸透圧は、適当量のグルコース浸透圧調整剤を加えることにより、０．６〜１．５％塩化ナトリウムの浸透圧と同等に調節する。少量の粘度調整剤（ポリエチレングリコール）と９８０ｇの水を加えた後、溶液をろ過し、濾液を滅菌後無菌状態で瓶詰めする。
【００９４】
噴霧剤、点鼻剤、および点耳剤の調製方法も同様であるが、それらの浸透圧およびｐＨ値の要件はそれほど厳しくない。
【００９５】
軟膏剤および塗布剤
４０ｇのテクトリゲニン誘導体を非常に微細な粉末に粉砕し、９６０ｇの水溶性基質ポリオキシエチレングリコール６００および２０００（４：６比）に溶解し、加熱し、均一に混合し、品質調整を行った後、混合物を包装し、外用のための一定の密度を有する半固体の製剤を得ることができる。
【００９６】
ゲル剤
４０ｇのテクトリゲニン誘導体を粉砕し、水に溶解し、水溶性基質カルボポールをハイドロゲル基質にし、後者を薬物と混合し、水を加えて１０００ｍＬにし、品質調整と包装後に、透明または半透明のゲルを得ることができる。
【００９７】
坐薬
４０ｇのテクトリゲニン誘導体を非常に微細な粉末に粉砕し、９６０ｇの水溶性基質ポリオキシエチレングリコール６００および１８０００（４：６比）に溶解し、加熱して均一に混合した後、混合物を液体パラフィンでコートした型に流し込み、冷却し、成形し、品質調整を行い、包装し、その要件に合う溶解時間制限を有する外用の固体製剤が得られる。
【００９８】
フィルムコーティング剤
外用のフィルムコーティング製剤は、テクトリゲニン誘導体と高分子フィルミング材料であるポリエチレンホルムアルデヒドおよびアセトアルデヒド縮合体（比４：９６）の両方をエタノール中に溶解することによって得ることができる。
【００９９】
経皮ステッカー
６０ｇのテクトリゲニン誘導体をまず最初に微細に粉砕し、水に溶解し、水溶性ポリマーＰＶＡまたはＰＶＰを薬剤水溶液に混合し、水と均一に混合した後ゲルプールを形成し、後者の品質調整と用量調整を行い、同時に感圧性糊（アクリル樹脂酸）を裏張り材料（ポリプロピレン）上にコーティングすることにより、ビスコース層を得、層を薬剤プールよりも大きい面積に分割し、ゲルプールと組み合わせ、粘着防止材料（ポリエチレン高重合体）の層をその表面に塗布して、経皮ステッカーを製造する。
【実施例９】
【０１００】
テクトリゲニンスルホン酸ナトリウムの急性毒性試験および抗ウィルス効果試験
以下の試験は、上記式（ＩＶ）に示されるテクトリゲニンのスルホン酸ナトリウム注射剤（５０ｍｇ／ｍＬ）を実験試料として行う。
【０１０１】
１．急性毒性試験
体重１８〜２０ｇのオスおよびメスのマウス（半分ずつ）を実験動物として、それぞれに筋肉内、静脈内および腹腔内注射による投与を行う。筋肉内注射（ｉｍ）については、０．２ｍＬ／１０ｇ（５００ｍｇ／ｋｇ）用量を両側の後肢筋に注射し；静脈内注射（ｉｖ）に対するすべての群においては尾静脈に、それぞれ、８４１．５ｍｇ／ｋｇ、７８１．２５ｍｇ／ｋｇ、７２５．２５ｍｇ／ｋｇ、６７３．２５ｍｇ／ｋｇ、５８０．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与し；腹腔内注射（ｉｐ）に対する用量は０．４ｍｇ／１０ｇ（すなわち、１０００ｍｇ／ｋｇと同等）とする。全ての群における投与後の実験動物の毒性反応および死亡については、それぞれお１４日間にわたって１日に一回観察する。動物の死亡が判明すると、迅速に解剖を行う。半致死用量は、５０％有効量確率単位法（加重線形回帰法）を用いて測定する。実験結果：1)精神状態、毛の（ｐｉｌｏｕｓ）状態、摂食、飲水、成長および発達などの反応に関して、筋肉内注射を行った実験動物には何ら異常が認められず、注射から１４日後に２０匹のうちの一匹も死亡しないことから、筋肉内注射による１回の投与を行ったマウスの最大耐量は、５００ｍｇ／ｋｇであり、それらの半致死用量は、５００ｍｇ／ｋｇを超えると想定される。2)静脈内注射による投与を行った実験動物の半致死用量ＬＤ５０は、７２５．８１ｍｇ／ｋｇであり、それらの９５％信頼限界は、６６９．９２ｍｇ／ｋｇ〜７８５．５３ｍｇ／ｋｇであり、パイロット試験製品における連続方法によって測定される半致死用量ＬＤ５０は、８６８．２ｍｇ／ｋｇであり、ＬＤ５０の９５％信頼限界は７９８．２〜９４４．４ｍｇ／ｋｇである。3)腹腔内注射による投与を行った実験動物については、１４日以内には全く死亡が認められず、腹腔内注射によって１回の投与を行ったマウスの最大耐用量は、１０００ｍｇ／ｋｇである。
【０１０２】
３つの投与方法によって実施した急性毒性試験の結果から、試験試料として用いた上述の抗ウィルス注射剤は、低い毒性しか有さず、ＬＤ５０はｉｍおよびｉｐの場合には測定不能であり、最大耐用量はそれぞれ５００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇであり、ＬＤ５０はｉｖによって投与した場合には、７２５．８１ｍｇ／ｋｇおよび８６８．２ｍｇ／ｋｇであることがわかる。
【０１０３】
２．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗ウィルス試験
試験薬物は、本発明における上記注射試料とし、対照薬物は注射用カリウムナトリウムデヒドロアンドロアンドログラホリドスクシネート（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｅｈｙｄｒｏａｎｄｒｏａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（商品名：注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ）、４０ｍｇ／ｍＬ（ロット番号：０００５０１，成都第３製薬工場製、化学構造）、ブランク対照はＨａｎｋｓ液（四川省人民病院の研究部、ウィルス研究室より提供）とする。
【０１０４】
実験株は、Ｈｅｐ−２およびＨＬ１６Ｃ細胞（すべて汕頭華盈生物工学応用研究所、細胞工学研究部より提供）である。ウィルス株は、アデノウィルスＡＤＶ３型およびＡＤＶ７型、呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウィルス（ＦｌｕＶ）Ａ１型およびＡ３型、およびコクサッキーウィルスＢ群（ＣｏｘＢＶ）（これらは、それぞれ小児科主要研究所、中国予防医科学研究所のウィルス研究所、および四川省衛生伝染病予防局より提供）の混合細胞株であり、ＴＣＩＤ５０を試験前に測定しておく。
【０１０５】
試験方法：
（１）細胞毒性試験
注射用試験試料と、注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇとをそれぞれ、Ｈａｎｋｓ液によって１０ｍｇ／ｍＬから倍数比例の法則に従って希釈する。２種類の溶液について、１０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬとなるように希釈を行う。異なる４濃度を有する上記の２種類の薬物を、それぞれＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞中に接種し、細胞対照を同時に作成し、２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ維持培地を加えて、サーモスタット下で３７℃に維持し、上述の細胞毒性反応を毎日観察する。細胞毒性試験の結果を表２に示す。
【０１０６】
【表２】
【０１０７】
（注：”−”は、細胞中で毒性反応が全く起こっていないことを意味する）
【０１０８】
表２に示す結果は、試験試料溶液、対照薬物Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇおよびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）がＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に対して全く毒性反応を有さないことを示している。
【０１０９】
（２）抗ウィルス試験
１００ＴＣＩＤ５０ ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶ、ＣｏｘＢＶおよびＲＳＶウィルスをそれぞれ、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種する（Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶはＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種）。ウィルス溶液を３０分以内に、吸収後、洗い流し、試験試料とＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ非毒性限界溶液をそれぞれに加え（すなわち、１０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬ）、ウィルス対照、細胞対照およびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）を上記薬物と同時に作成する。細胞維持培地は２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ培地であり、インキュベータ中、３７℃に維持し、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞の病理学的変化を観察し、すべての群における細胞の病理学的変化を毎日記録する。ＲＳＶ耐性試験については、ウィルスおよび非毒性限界薬物を接種した後、溶液をインキュベータ中、３７℃で２４時間水平に静置し、３５℃のロータリインキュベータ（１２回転／分）に移し、細胞の病理学的変化を毎日観察する。ｐＨ値が培養管中で下がる場合には、即時に溶液を変えなければならない。試験において細胞が正常であり、かつ細胞対照群においてよく増殖している状態で、ウィルスの対照群において２＋〜３＋の病理学的変化が起こった時点で、試験を終える。試験結果を表３に示す。
【０１１０】
表３の結果は、本発明において１０ｍｇ／ｍＬの試験試料注射溶液が、ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、Ａ３型ＦｌｕＶに対する部分阻害効果を有することを実証するものである。５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、ＡＤＶ３およびＣｏｘＢＶに対する部分阻害効果を有する。２．５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶに対する阻害効果を有する。１０ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｇｈｕｎｉｎｇ溶液は、ＡＤＶ３および７、ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有する。他の濃度を有する溶液およびブランク対照は、すべての管において、細胞の病理学的変化を阻害することができない。
【０１１１】
【表３】
【０１１２】
（注：”−”は、細胞中でいかなる病理理学的変化も起こっていないことを意味する。１＋〜３＋は、細胞の病理学的変化の程度を意味する。）
【０１１３】
上記の試験結果は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度の試験試料注射が、１００ＴＣＩＤ５０ウィルス感染の場合にＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型およびＡ３型のＦｌｕＶおよびＲＳＶに対して、様々な程度の阻害効果を示すことを実証するものである。１０ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ（対照薬物）溶液は、ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型およびＡ３型のＦｌｕＶおよびＲＳＶに対して阻害効果を有する。試験結果は、本発明における、Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶに対する試料注射の阻害効果が、現在のところ、注射にＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇを用いる場合よりも良好であることを示唆するものである。
【実施例１０】
【０１１４】
抗ウィルス剤効果試験
以下の薬学的効果試験は、上記実施例における典型的なテクトリゲニン誘導体を試験試料として行う。
【０１１５】
１．抗ウィルス試験
試験薬物は、本発明における誘導体から製造した注射試料、経口カプセル、顆粒剤、錠剤、溶液剤、ならびに外用の点眼剤、塗布剤、クリーム、ローション、および点耳剤である。対照薬物は、注射用カリウムナトリウムデヒドロアンドログラホリドスクシネート（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｅｈｙｄｒｏａｎｄｒｏａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（商品名：注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ，４０ｍｇ／ｍＬ，成都第３製薬工場製）、ピラゾールブランク対照はＨａｎｋｓ液（四川省人民病院の研究部、ウィルス研究室より提供）とする。
【０１１６】
実験株は、Ｈｅｐ−２およびＨＬ１６Ｃ細胞（すべてすべて汕頭華盈生物工学応用研究所、細胞工学研究部より提供より提供）である。ウィルス株は、アデノウィルスＡＤＶ３型およびＡＤＶ７型、呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウィルス（ＦｌｕＶ）Ａ１型およびＡ３型、およびコクサッキーウィルスＢ群（ＣｏｘＢＶ）（これらは、それぞれ小児科主要研究所、中国予防医科学研究所のウィルス研究所、および四川省衛生伝染病予防局より提供）の完全混合細胞であり、ＴＣＩＤ５０を試験前に測定しておく。
【０１１７】
試験方法：
（１）細胞毒性試験
試験試料の注射剤、経口カプセル、顆粒剤、錠剤、ピル、点眼剤、眼軟膏剤および他の外用製剤を溶解し、必要に応じた濃度を有するように調合し、これらと、注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇとをそれぞれ、Ｈａｎｋｓ液によって１０ｍｇ／ｍＬから倍数比例の法則に従って希釈する。２種類の溶液について、１０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬとなるように希釈を行う。異なる４濃度を有する上記の２種類の薬物を、それぞれＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種し、同時に細胞対照も作成し、２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ維持培地を加えて、サーモスタット下で３７℃に維持し、上述の細胞毒性反応を毎日観察する。細胞毒性試験の結果を表４に示す。
【０１１８】
【表４】
【０１１９】
（注：”−”は、細胞中で毒性反応が全く起こっていないことを意味する）
【０１２０】
表４に示す結果は、試験試料溶液、対照薬物Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇおよびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）がＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に対して全く毒性反応を有しないことを示している。
【０１２１】
（２）抗ウィルス試験
１００ＴＣＩＤ５０ ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶ、ＣｏｘＢＶおよびＲＳＶウィルスをそれぞれ、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種する（Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶはＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種）。ウィルス溶液を３０分以内に、吸収後、洗い流し、試験試料とＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ非毒性限界溶液をそれぞれに加え（すなわち、８ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬ）、ウィルス対照、細胞対照およびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）を上記薬物と同時に作成する。細胞維持培地は２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ培地であり、インキュベータ中、３７℃に維持し、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞の病理学的変化を観察し、すべての群における細胞の病理学的変化を毎日記録する。ＲＳＶ耐性試験については、ウィルスおよび非毒性限界薬物を接種した後、溶液をインキュベータ中、３７℃で２４時間水平に静置し、３５℃のロータリインキュベータ（１２回転／分）に移し、細胞の病理学的変化を毎日観察する。ｐＨ値が培養管中で下がる場合には、即時に溶液を変えなければならない。試験において細胞が正常であり、かつ細胞対照群においてよく増殖している状態で、ウィルスの対照群において２＋〜３＋の病理学的変化が起こった時点で、試験を終える。試験結果を表５に示す。
【０１２２】
表５の結果は、本発明において１０ｍｇ／ｍＬの試験試料注射溶液が、ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、Ａ３型ＦｌｕＶに対する部分阻害効果を有することを実証するものである。５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、ＡＤＶ３およびＣｏｘＢＶに対する部分阻害効果を有する。２．５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶに対する阻害効果を有する。８ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｇｈｕｎｉｎｇ溶液は、ＡＤＶ３および７、ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有する。他の濃度を有する溶液およびブランク対照は、すべての管において、細胞の病理学的変化を阻害することができない。
【０１２３】
【表５】
【０１２４】
（注：”−”は、細胞中でいかなる病理理学的変化も起こっていないことを意味する。１＋〜３＋は、細胞の病理学的変化の程度を意味する。）
【０１２５】
上記の試験結果は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度の試験試料注射が、３型アデノウィルス（ＡＤＶ３），７型アデノウィルス（ＡＤＶ７），コクサッキーウィルスＢ群（ＣｏｘＢＶ），インフルエンザウィルスＡ１型（ＦｌｕＶＡ１）およびＡ３型（ＦｌｕＶＡ３）および呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）に対して、様々な程度の阻害効果を示すとともに、１００ＴＣＩＤ５０感染状況において、インフルエンザウィルスＡ１型およびＡ３型、ならびに呼吸器合胞体ウィルスに対して優れた阻害効果を有することを実証するものである。１０ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ（対照薬物）溶液は、３型アデノウィルス、７型アデノウィルス、コクサッキーウィルスＢ群、インフルエンザウィルスＡ１型およびＡ３型、ならびに呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）に対して、阻害効果を有する。試験結果は、本発明における、Ａ１型インフルエンザウィルスおよび呼吸器合胞体ウィルスに対する試料注射の阻害効果が、注射用に現在用いているＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇおよびリバビリンの場合よりも良好であることを示唆するものである。
【０１２６】
（３）ＳＡＲＳウィルス耐性試験
Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞に対するテクトリゲニン誘導体の毒性と、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞におけるコロナウィルス阻害効果とについて、北京におけるＳＡＲＳの流行中に患者の肺組織から分離したウィルス株ＢＪ０１およびＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を用いて調べる。
【０１２７】
（３．１）実験材料
1)被験薬物：上記のテクトリゲニン誘導体を注射剤、すなわち、四川迪康科技薬業股分有限公司より提供され、ロット番号が２００３０３０１のＤｉｋａｎｇ抗ウィルス注射剤（５０ｍｇ／ｍＬ）に調合する。
【０１２８】
2)ポジティブコントロール薬物：山東新華制約股分有限公司によって提供され、認証文書Ｈ１９９９３０６３、ロット番号０２１０００２０のリバビリン（ビラゾール）注射剤、０．１ｇ／ｍＬ。その臨床的応用：これは気道細胞ウィルスに起因するウィルス性肺炎および気管支炎を治療するために用いられる。
【０１２９】
3)細胞：Ｖｅｒｏ−Ｅ６、これは我々の細胞バンク（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８６）に保存されている。
【０１３０】
4)ウィルス株：２００３年２月に北京におけるＳＡＲＳの流行中に患者の肺組織から分離したコロナウィルスであり、株ＢＪ０１と名付ける。
【０１３１】
5)試薬：ＧｉｂｃｏｌｌＢＲＬ Ｃｏｍｐａｎｙによって作成され、それぞれのロット番号が３１６００−０２６および１６０００−３６のＤＭＥＭ培地およびウシ胎仔血清。
【０１３２】
6)機器：Ｃｏｍｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ製の９６穴の細胞培養ボードと、重慶光学機器工場製のバイオティック倒立顕微鏡。
【０１３３】
（３．２）方法と結果
1)薬物調合法
被験薬物：テクトリゲニン誘導体は淡黄色の液体であり、冷蔵庫中４℃で保存する。ポジティブコントロール薬物は１０ｍｇ／ｍＬ母液に調合する。これは、細胞の成長促進媒体を用いて、使用時に必要な濃度に調合される。
【０１３４】
2)テクトリゲニン誘導体の細胞への毒性の試験
１ｍＬにつき３０００００〜４０００００個のＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を、９６穴の細胞培養ボードに接種し、ボードを５％ＣＯ2インキュベータ中、３７℃で１８時間維持し、様々な濃度の試験薬物をこれに加え、各濃度の薬物を４つの孔にそれぞれ０．４ｍＬずつ加え、同時に薬物を入れない細胞対照群を準備し、４〜５日間培養して、細胞の病理的変化（ＣＰＥ）を観察し、バイオティック倒立顕微鏡によってＣＰＥを５日目の指標として観察する。完全病理的変化を４とし、７５％の病理的変化を３とし、５０％の病理的変化を２とし、２５％の病理的変化を１とし、病理的変化が全くみられない場合を０とする。試験は２回繰り返す。中間毒性濃度（ＴＤ５０）および最大非毒性濃度（ＴＤ０）は、ＲＥＥＤ−ＭＵＥＮＣＨ法を用いて算出し、結果を表６に示す。
【０１３５】
【表６】
【０１３６】
表６の計算から、本発明の抗ウィルス注射剤の、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞に対する最大非毒性濃度（ＴＤ０）は、１ｍｇ／ｍＬであり、中間毒性濃度（ＴＤ５０）は、２．３４ｍｇ／ｍＬであることがわかる。このことは、本発明のテクトリゲニン誘導体が、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞に対して毒性が低くかつ、良好な安全性を有することを意味する。
（４）テクトリゲニン誘導体のコロナウィルス阻害試験（細胞病理変化法）
【０１３７】
Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞を９６穴の培養ボードに接種し、３７℃で単層になるまで培養し、成長促進培地を捨てる。コロナウィルスＢＪ０１株の４世代のウィルス溶液をＤＭＥＭ維持培地によって、１００ＴＣＩＤ５０／０．１ｍＬに希釈し、そのうちの０．１ｍＬを各穴内のＶｅｒｏＥ６細胞に接種し、２時間吸収させ、ウィルス溶液を捨てる。正常細胞対照群、ウィルス対照群、およびポジティブ薬物対照群を作成する。細胞を５％ＣＯ2培養インキュベータ中、３７℃に維持し、病理的変化を全５日間、毎日観察し、ＣＰＥを記録し、この試験を２回繰り返したところ、結果は基本的に同一であった。中間阻害濃度（ＩＣ５０）および治療指数（ＴＩ）は、ＲＥＥＤ−ＭＵＥＮＣＨ法を用いて計算し、結果を表７に示す
【０１３８】
【表７】
【０１３９】
表７の計算から、０．９７６ｍｇ／ｍＬの濃度を有するテクトリゲニン誘導体がコロナウィルスに対する阻害効果を有することがわかる。
結論として以下のことがいえる。
【０１４０】
【表８】
【０１４１】
上記の試験結果は以下のことを実証する。
【０１４２】
1)Ｖｅｒｏ−Ｅ６に対する本発明のテクトリゲニン誘導体の毒性：テクトリゲニン誘導体をＶｅｒｏ−Ｅ６細胞に加え、これを５日間培養する。細胞の病理的変化を指標とした場合、その中間毒性濃度（ＴＤ５０）は２．３４ｍｇ／ｍＬであり、最大非毒性濃度（ＴＤ０）は１ｍｇ／ｍＬである。
【０１４３】
2)テクトリゲニン誘導体は、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞におけるコロナウィルスに対する阻害効果を有する。テクトリゲニン誘導体注射剤をＶｅｒｏ−Ｅ６細胞に加え、これを５日間培養する。その中間効果濃度（ＩＣ５０）は０．０９７６ｍｇ／ｍＬであり、テクトリゲニン誘導体注射剤のコロナウィルスに対する最小治療指数は、２３．９８である。
【０１４４】
（５）トリインフルエンザＨ５Ｎ１およびＨ９Ｎ２サブタイプウィルス殺傷効果試験
以下は上記実施例に記載のテクトリゲニン誘導体を試験薬物とした場合の、ｉｎ ｖｉｔｒｏトリインフルエンザウィルス（ＡＩＶ）殺傷試験である。
【０１４５】
（５．１）材料と方法
1)被験薬物
上記実施例のテクトリゲニン誘導体溶液（１ｍＬあたり３０ｍｇの原料薬物を含有する淡黄色液体）
【０１４６】
2)トリインフルエンザウィルス
ウィルス株は、中国農業科学協会に属するハルビン獣医学研究所から委託を受けた農業省重要動物インフルエンザ公開研究所（ｔｈｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ’ｓ Ｋｅｙ Ａｎｉｍａｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｏｐｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に保存されているＡ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）およびＡ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ／６／９６（Ｈ９Ｎ２）である。
【０１４７】
3)ニワトリ胚
中国農業科学協会に属するハルビン獣医学研究所の実験動物センターから提供された１０日齢のＳＰＦニワトリ胚。
【０１４８】
4)予備試験
ａ．ウィルスＥＩＤ５０測定
トリインフルエンザウィルスサブタイプＨ５およびＨ９は、１０倍系列で希釈し、１０日齢のＳＰＦニワトリ胚に接種し、５つの胚に対してそれぞれの希釈を行い（０．１ｍＬ／胚）、ウィルス中間感染用量（ＥＩＤ５０）を測定する。
ｂ．試験した薬物母液調節
上述のテクトリゲニン誘導体を、１ｍＬあたりに３０ｍｇの原料薬物を含有する母液とする。
ｃ．被験薬物のニワトリ胚に対する最大非毒性用量
１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，１．８７５ｍｇ，０．９３７５ｍｇ，０．４６８７５ｍｇ，０．２３４３７５ｍｇおよび０．１１７１８７５ｍｇの被験原料薬物を含有する溶液を１０日齢のＳＰＦニワトリ胚にそれぞれ接種し最初の希釈の溶液を５つの胚（０．１ｍＬ／胚）に接種する。接種したニワトリ胚を３７℃のサーモスタット中におき、９６時間培養する。ニワトリ胚は２４時間以内に死ぬが、これを廃棄し、その死について記録する。
【０１４９】
5)被験薬物のウィルス殺傷率試験
２種（強弱）のトリインフルエンザウィルスの殺傷試験を、被検薬物により、Ｋｌｅｉｎ−Ｄｏｆｏｒｓ懸濁法を用いて行う。被験薬物を滅菌済生理学的食塩水で１０倍系列で希釈し、接種し、感染ニワトリ胚を調べる。
ａ．ウィルス懸濁液の調製
トリインフルエンザウィルスサブタイプＨ５およびＨ９を、１０７．６３ＥＩＤ５０／０．１ｍＬおよび１０８．１７ＥＩＤ５０／０．１ｍＬウィルス懸濁液に調製する。
ｂ．被験薬物母液調節
上記テクトリゲニン誘導体を滅菌済生理食塩水を用いて、殺傷試験のあいだの原料として必要な濃度に希釈する。
ｃ．Ｋｌｅｉｎ−Ｄｏｆｏｒｓ懸濁殺傷試験
１０７．６３ＥＩＤ５０トリインフルエンザサブタイプＨ５ウィルス懸濁液および１０８．１７ＥＩＤ５０Ｈ９サブタイプウィルス懸濁液を、１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，３．０ｍｇ，１．８７５ｍｇ，１．５ｍｇ，０．７５ｍｇおよび０．３７５ｍｇの原料薬物濃度のテクトリゲニン誘導体と、それぞれ１：９の比率で混合し、２０±１℃で５分間反応させた後、滅菌済生理食塩水を用いて１０倍ずつ順に希釈する。滅菌済ウィルス懸濁液の代わりに滅菌済生理食塩水を用いた対照群に対しても同様の処理を行い、希釈した溶液を１０日齢のニワトリ胚に接種し、各濃度の溶液を５つのニワトリ胚（０．１ｍＬ／胚）に接種する。接種後のニワトリ胚を３７℃の培養用インキュベータ中に維持し、ニワトリ胚の死を記録する。２４時間以内に死んだニワトリ胚は廃棄し、２４時間後に死んだニワトリ胚を取り出し、すべてのニワトリ胚を９６時間以内に取り出し、それらの尿膜腔液をＨＡ試験のために１つずつサンプリングし、ＨＡ試験によって陽性であると判明したニワトリ胚を感染したものと判断する。
試料中のニワトリ胚の感染陽性率、ＥＩＤ５０量および、試験および対照群における殺傷率は、ニワトリ胚感染結果および下記の等式にしたがって算出する。
陽性率＝ＨＡ試験で陽性が判明したニワトリ胚の量／接種したニワトリ胚の量
試料中のＥＩＤ５０量の対数＝Ｌ−ｄ（Ｓ−０．５）
（Ｌは最小希釈倍率の対数であり、ｄは希釈の差の対数であり、Ｓは各希釈列における陽性率の和である）
ウィルス殺傷率＝（対照試料におけるＥＩＤ５０量−試験試料におけるＥＩＤ５０量／対照試料におけるＥＩＤ５０×１００％）
【０１５０】
（５．２）試験結果
1)被験薬物のニワトリ胚に対する最大非毒性容量
滅菌済生理食塩水で希釈し、１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，１．８７５ｍｇ，０．９３７５ｍｇ，０．４６８７５ｍｇ，０．２３４３７５ｍｇおよび０．１１７１８７５ｍｇの原料薬物を含有するテクトリゲニン誘導体を、ニワトリ胚に注射する。試験結果は、様々な濃度の薬物によって注射後のニワトリ胚の死が引き起こされることはなく、このことから、被験薬物の原溶液および様々な濃度の薬物が、ニワトリ胚に対して視認できる毒性効果を一切有しないことが示される。結果を表９に示す。
【０１５１】
【表９】
【０１５２】
注：分子は死んだ胚の量であり、分母は接種した胚の量である。
【０１５３】
2)トリインフルエンザウィルスに対する被験薬物の殺傷効果
滅菌済生理食塩水で希釈し、１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，３．０ｍｇ，１．８７５ｍｇ，１．５ｍｇ，０．７５ｍｇおよび０．３７５ｍｇを含有するテクトリゲニン誘導体を、１０７．６３ＥＩＤ５０トリインフルエンザＨ５サブタイプウィルス溶液と５分間反応させ、そのウィルス殺傷率をそれぞれ測定し、様々な希釈濃度のテクトリゲニン誘導体を１０８．１７ＥＩＤ５０トリインフルエンザウィルスＨ９型と５分間反応させ、そのウィルス殺傷率をそれぞれ測定する。結果を表１０に示す。
【０１５４】
【表１０】
【０１５５】
上記試験結果は、（様々な濃度の）テクトリゲニン誘導体を、トリインフルエンザウィルスＨ５Ｎ１およびＨ５Ｎ２（９：１）とそれぞれ５分間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで直接接触させる、Ｋｌｅｉｎ−Ｄｅｆｏｒｓ懸濁殺傷および感染試験法によって、被験薬物のトリインフルエンザウィルス殺傷効果を調べることを示している。上記の結果は、１ｍＬあたりに３．０ｍｇの原料薬物を含有するテクトリゲニン誘導体が、トリウィルスと５分間反応した場合に、一定のウィルス殺傷効果を有すること、１ｍＬあたりに３．７５〜３０ｍｇの原料薬物を含有するテクトリゲニン誘導体が、優れたウィルス殺傷効果を有すること、およびそのウィルス殺傷率は、トリインフルエンザウィルスと５分間反応させた場合には９５％を超えることを実証するものである。
【０１５６】
その安全性試験からは、一連の母液希釈液をニワトリ胚に接種しても、ニワトリ胚の死を引き起こさないことがわかり、このことは、被験薬物母液を様々に希釈した薬物および原液がいかなる目に見える毒性効果も有しないことを示している。
【産業上の利用可能性】
【０１５７】
式（ＩＩ）に示される本発明における化学的修飾によって達成されるテクトリゲニン化合物誘導体は、その前駆物質、すなわち最初に抽出されたテクトリゲニン化合物と同等の抗ウィルスおよび抗炎症効果を維持しつつも、その水溶性と化学的安定性を大きく向上させることができる。また、調製が容易であり、コストが低く、安全かつ信頼性があり、専用の設備を必要とせず、「３大廃棄物」（すなわち、廃棄ガス、排水、および産業廃棄物）による汚染が全くない。漢方薬の成分は複雑であり、その品質安定性を制御することは困難であるので、本発明によって提供されるテクトリゲニン化合物のイソフラボン誘導体は、重要な積極的な有意性を有し、その薬学的および臨床的応用範囲を広げること、特に、抗ウィルスおよび抗炎症注射製剤に関して、明るい開発の見通しを有している。
【０１５８】
上記本発明についての詳細な説明は、本発明において限定されず、当業者は本発明に基づく様々な修正および改変を行ってもよいが、それらすべては、本発明の精神から逸脱しない限り、本発明に添付の請求項に属するものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１】式（ＩＩＩ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウム化合物のＩＲスペクトルである。
【図２】式（ＩＩＩ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウム化合物の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、テクトリゲニン化合物の誘導体に関し、より詳細には、５，７，４’−トリヒドロキシ−６−メトキシイソフラボンの化学名を有するテクトリゲニン化合物誘導体に関する。本発明は、本発明の化合物の調製方法にも関する。本発明は、有効成分として本発明の化合物を含む抗ウィルス剤にも関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザや他の多くのウィルス感染によって引き起こされる上気道感染およびウィルス性肺炎などの疾病は、死に至らしめることさえある、一般的かつよくみられる病気である。このような気道感染症の治療には主として化学治療法が用いられている。しかしながら、薬剤耐性細菌株および薬剤耐性ウィルス株の増殖速度が、化学抗生剤の開発速度を超えてしまうということが無視できない問題となってきている。この分野においては、天然の漢方薬の利点を最大限活用すること、特に、天然の薬品から有効な薬学的成分を抽出および分離すること、および／またはそれらに基づいた新しい薬学的化合物の開発または改変を行うことが益々注目されている。
【０００３】
Ｓｕｎ Ｙｕａｎｂｉｅｔら（Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９８４，９（５））、Ｃｈｅｎｇ Ｆａｎｇｑｕｎ（Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｈｅｒｂａｌ ｄｒｕｇｓ １９９０，２２（２））、Ｘｕ Ｙｕｎｌｏｎｇ（Ｐｌａｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ １９９９，２１（１））、Ｊｉ Ｗｅｎｌｉａｎｇら（Ｏｖｅｒｓｅａｓ ｍｅｄｉｃｉｎｅｐｌａｎｔ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐａｒｔ ２０００，１５（２）およびＣｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｒｏｐ ２０００，２３（８））などの多くの研究報告や文献に報告されているように、式（Ｉ）で示されるテクトリゲニン化合物は、伝統的な漢方薬、すなわち、イチハツ（Ｉｒｉｓ ｔｅｃｔｏｒｉｕｍ Ｍａｘｉｍ）、ヒオウギ（Ｂｅｌａｍｃａｎｄａ Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）DＣ）、野鳶尾（Ｉｒｉｓ ｄｉｃｈｏｔｏｍａ ｐａｌｌ．）、シャガ（Ｉｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）およびイチハツ（Ｉｒｉｓ ｔｅｃｔｏｒｕｍ）のような抗ウィルス性、抗菌性、および抗炎症性機能を有したアヤメ科植物中に広く存在する多くのフラボン化合物成分のなかのひとつのイソフラボンである。
【０００４】
【化１】
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のような多くの文献中の研究結果には、伝統的な漢方薬であるイチハツ（Ｉｒｉｓ ｔｅｃｔｏｒｕｍ Ｍａｘｉｍ）中に含まれるイソフラボン成分が、明白な抗ウィルスおよび抗炎症機能を有していることが示されている。テクトリジンは、イチハツ中の主たる有効成分（含有量約５％）である。その文献報告と薬物動態研究とから、さらに強い抗ウィルスおよび抗炎症機能を有することが示されている。上記の式（Ｉ）に示すようなテクトリゲニンの文献および薬物動態研究から、テクトリゲニンは、テクトリジンの加水分解産物と同様のより強い抗ウィルスおよび抗炎症機能を有していることが実証されている。しかしながら、テクトリジンとテクトリゲニンのいずれも水溶性が小さく、その臨床的用途が限定されるため、それらの水溶性を改善し高めることが最初に解決すべき問題となっている。実験結果からは、テクトリジンおよびテクトリゲニンに対して、それらの薬学的有効性を維持もしくは向上しながらも、水溶性を高め、治療効果を強化し、それらの応用可能な医薬剤範囲を広げるためには、調製手順のなかで水溶性を高めることは理想的ではなく、テクトリジンおよびテクトリゲニンの化学的修飾によりそれらの化学構造を変えることだけが実現可能な手段であることが分かっている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記式（Ｉ）において示されるテクトリゲニン化合物に基づく化学的修飾によって得られる一連の誘導体を提供し、本発明の化合物は、テクトリゲニンの元の抗菌性、抗ウィルス性、抗炎症性、および解熱および鎮痛効果を少なくとも維持しつつも、その水溶性を大幅に改善し、向上させることができる。したがって、本発明は、テクトリゲニン化合物の薬学および臨床用途範囲を広げるのに非常に有利である。
【０００７】
さらに、本発明は、本発明の化合物を有効成分として含む抗ウィルス薬を提供し、特に、本発明の化合物を含有する注射用調合薬剤を提供する。
【０００８】
本発明のテクトリゲニン誘導体、すなわち、５，７，４’−トリヒドロキシ−６−メトキシイソフラボン誘導体の化学名をもつものを式（ＩＩ）に示す。
【０００９】
【化２】
【００１０】
（式中、Ｒ1はＨ，ＮＨ2またはＳＯ3Ｍであり
Ｒ2はＯＲ’であり、
Ｒ3はＨまたは−ＣＨ2ＮＲ’’であり、
Ｒ’はＨ，−ＣＨ2ＣＯＯＮａまたは−ＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、
ＮＲ’’はピペリジノ基または−ＮＭｅ2であり、
ＭはＨ，Ｎａ，ＫまたはＮ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である）。
【００１１】
上記一般式（ＩＩ）で示される化合物のうちの典型的な化合物は、Ｒ1がＳＯ3Ｍ’’（式中、Ｍ’’はＨ，Ｎａ，Ｋまたは−Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3でありうる）であり、その構造が式（ＩＩＩ）に示されるスルホン酸化合物である。
【００１２】
【化３】
【００１３】
上記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物のうちの典型的な化合物は、すなわち、ＳＯ3Ｍ’’のＭ’’はＨ，ＮａまたはＫであり、その構造が式（ＩＶ）に示されるスルホン酸またはスルホネート化合物である。
【００１４】
【化４】
【００１５】
上記一般式（ＩＩＩ）に示す化合物における別の典型的な化合物は、そのスルホン酸基Ｒ1が−ＳＯ3-Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3であり、その構造が式（Ｖ）に示されるものである。
【００１６】
【化５】
【００１７】
本発明でいう一般式（ＩＩ）は、Ｒ1がＮＨ2であり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3がＨであり、その構造が式（ＶＩ）に示される典型的な化合物をも含んでいる。
【００１８】
【化６】
【００１９】
本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、Ｒ1がＨであり、Ｒ2が−ＯＣＨ2ＣＯＯＮａであり、Ｒ3がＨであり、その構造が式（ＶＩＩ）に示されるものである。
【００２０】
【化７】
【００２１】
さらに、本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、式（ＩＩ）におけるその構造において、Ｒ1およびＲ3がＨであり、Ｒ2がＯＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が式（ＶＩＩＩ）で示される。
【００２２】
【化８】
【００２３】
さらに、本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、式（ＩＩ）におけるその構造において、Ｒ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＲ’’（式中、ＮＲ’’は、ピペリジノ基である）であるものであり、その構造が式（ＩＸ）で示される。
【００２４】
【化９】
【００２５】
さらに、本発明における一般式（ＩＩ）に記載する他の典型的な化合物は、式（ＩＩ）におけるその構造において、Ｒ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が式（Ｘ）で示される。
【００２６】
【化１０】
【００２７】
上記すべての典型的な化合物のうち、式（ＶＩ），（ＶＩＩＩ），（ＩＸ）および（Ｘ）に示す化合物は、薬学的に許容される塩化合物、たとえば、最も一般的に用いられている対応する塩酸塩化合物であってもよい。
【００２８】
式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として、種々の具体的な置換基および／または置換位置に対応する本発明における上記式（ＩＩ）に示すあらゆる化合物を、既知のものと同様の置換化合物調製の原理および方法を用いて作成することができる。
【００２９】
たとえば、本発明の化学修飾のための原料として用いる前駆化合物、すなわち、上記式（Ｉ）に示すテクトリゲニンイソフラボン化合物は、アヤメ科の多くの上記植物から、これまでに報告されたように抽出および分離することによって、より好都合かつ容易に得ることができるが、ｄｅ ｎｏｖｏ合成によって製造してもよい。たとえば、参考にできる抽出方法としては次のものがある。
【００３０】
原薬効材料であるイチハツを乾燥させ、粉砕し、粗くスクリーニングし（メッシュ＃２０によって）、抽出機に入れ、７０％エタノール（その重量は薬剤の４倍）によって加熱し、それぞれ３回再循環させ（各回１時間の持続時間）、熱いうちにろ過し、その濾液を回収する。減圧下でエタノールを回収すると、比重が１．２ｇ／ｍＬ（５０℃）の茶色のエキス状抽出物が、原薬効材料の４９〜５１（重量）％の収率で得られる。上記の抽出物に９５％エタノールを添加した後、均一になるまで攪拌し、懸濁液を沈殿させてろ過し、濾液に再度９５％エタノールを添加した後、均一になるまで攪拌し、濾液がほぼ無色になり、粗テクトリジンが得られるまで、この操作を２度繰り返す。７０％エタノールを添加した後、加熱し、再循環し、放置して淡黄色の沈殿物を遊離させ、濾去する。７０％エタノールによって再結晶させると、無色の結晶状粉末テクトリジンが、原薬効材料の４．５％の収率で得られる。
【００３１】
２００ｇのテクトリジンを丸底フラスコに入れ、２０００ｍＬの５０％エタノールを加えた後に均一に攪拌し、均一に振盪し、２００ｍＬの濃塩酸を加えた後、２時間のあいだ加熱再循環させ、熱いうちにろ過し、放置すると、淡黄色の薄くて細い針状結晶が遊離する。これをろ過し、４００ｍＬの９５％エタノール中に溶解し、８００ｍＬの沸騰水に注ぎ、冷却すると、淡黄色の薄くて細い針状結晶が遊離する。これをろ過した後、再度再結晶させ、６０℃の減圧下で乾燥させると、１２０ｇの式（Ｉ）で示すテクトリゲニンの精製イソフラボン化合物（淡黄色の薄くて細い針状結晶）が得られが、この収率は薬物量の３％であり、その含量は９８％を超える。
【００３２】
式（ＩＩＩ）に示す誘導体については、Ｒ1がＳＯ3Ｈである置換生成物は、一般に、式（Ｉ）に示すイソフラボン化合物を硫酸を用いてスルホン化することによって得られる。その最適化方法の１つとしては、１．０ｇのテクトリゲニンをとり、４．０ｍｌの濃硫酸を添加後、溶解するまで攪拌し、１．５〜２時間室温で反応させ、全反応工程を無水条件で行うことにより、Ｍ’’がＨの式（ＩＩＩ）に示す硫酸誘導体生成物が得られる。
【００３３】
これを、ＮａＣｌまたはＫＣｌなどの飽和生理食塩水によって処理すると、上記の式（ＩＶ）で示す対応するスルホン酸ナトリウムまたはスルホン酸カリウム化合物が得られる。その２段階合成ラインは以下のとおりである。
【００３４】
【化１１】
【００３５】
上記式（Ｖ）に示すテクトリゲニン化合物の調製方法：式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料に用い、濃硫酸と混合し、４０〜９０℃（最適温度は６０℃）で加熱攪拌し、冷却後、飽和塩化ナトリウム、他のアルカリ金属塩酸、臭化水素酸塩、または硝酸塩溶液中に注ぐと、３’−ナトリウムスルホネート中間生成物が得られる。これをエタノール溶液中に溶解し、これに強酸カチオン樹脂を加え、完全に溶解するまで室温で攪拌した後、トリエタノールアミンを加えて、溶媒を減圧下で蒸発させると、式（Ｖ）で示される化合物が得られる。この合成ラインは以下のとおりである。
【００３６】
【化１２】
【００３７】
上記の式（ＶＩ）に示されるテクトリゲニン化合物の調製方法：式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として、これを氷浴中で冷却しながら硝酸と濃硫酸の混合物と混合したエタノール溶液（すなわち（硝酸＋硫酸）／エタノール））を滴下することにより、３’−ニトロ中間化合物が得られる。これをメタノールに溶解し、大気圧における水素触媒還元によって３’−アミノ置換化合物（ＶＩ）を得る。さらに、式（ＶＩ）で示す対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができる。この合成ラインは以下のとおりである。
【００３８】
【化１３】
【００３９】
上記の式（ＶＩ）に示すテクトリゲニン化合物を調製する際には、式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料とし、ブタノンとＤＭＦの混合溶媒中にクロロ酢酸エチルとともに溶解し、これに無水Ｋ2ＣＯ3および触媒量のＮａＩを加え、混合物を攪拌し、再循環させ、室温まで冷却し、その不溶物質を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、残渣を適当量の水中に溶解し、酢酸エチルで抽出した後、水で洗浄し、乾燥したのち溶媒を減圧下で濃縮し、フラッシュカラム分離によって４’−エステル−エーテル中間生成物を得る。これをメタノールに溶解し、攪拌しながらＮａＯＨの水溶液を滴下して、常温にて完全に加水分解した後、ｐＨ値を酸によってｐＨ３〜４に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させることによって凝縮沈殿を得る。水洗後、ＮａＨＣＯ3と反応させることにより化合物（ＶＩＩ）（ナトリウム塩）が得られる。この合成ラインは以下のとおりである。
【００４０】
【化１４】
【００４１】
上記の式（ＶＩＩＩ）に示されるようなテクトリゲニン化合物を調製するために、β−ジメチルアミノエタノールをまず最初にジクロロスルホキシド中に滴下し、０℃で激しく攪拌し、滴下後、混合物を３５〜５０℃で攪拌し、反応させ、無水エタノールを用いて再結晶させて、中間生成物であるβ−ジメチルアミノクロライドハイドロクロライドＡを得る。式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料とし、ブタノン、アセトン、ＤＭＦ、ＴＨＦまたはジオキサンなどの溶媒中に溶解し、これに、無水Ｋ2ＣＯ3またはＮａ2ＣＯ3、ＤＭＦおよび触媒量のＮａＩを加え、これを加熱再循環させ、上記中間生成物Ａを半時間ごとに５回に分けて加えるようにしてもよい。これを約８０℃で再循環させ、薄い積層を用いてチェックし、冷却後ろ過し、ロータリーエバポレータ中、減圧下において濾液を濃縮することにより粘着物が得られ、適当な量の水（約１０重量倍量の水）によって希釈した後に酢酸エチルで抽出し、水洗後、この抽出物を乾燥させ、溶媒を蒸発させて、化合物（ＶＩＩＩ）を得る。薬学的に許容される酸との反応によって、対応する塩化合物をさらに得ることができる。合成ラインは以下のとおりである。
【００４２】
【化１５】
【００４３】
上記式（ＩＸ）で示されるテクトリゲニン化合物の調製方法：式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として用いて、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ピペリジン、および、ジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールなどの溶媒のうちの１つと混合し、反応物を再循環させた後にこれを冷却してろ過することにより、化合物（ＩＸ）を得る。さらに、式（ＩＩＩ）に示すような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができる。合成ラインは以下のとおりである。
【００４４】
【化１６】
【００４５】
実験結果から、反応生成物を完全に達成するための上記反応の化学構造の環Ａ上における位置選択性は非常に特異的であり、文献中に報告され、以前に設計された位置（環Ｃ上）とは異なることが分かる。このように、本発明は、テクトリゲニンイソフラボンを化学構造の環Ａ上で選択的に誘導体を得るための方法を提供し、その構造改造が活性に与える影響を全面的に調べるのに好ましい。しかしながら、誘導化は他の反応においては殆どが環Ｃ上で行われる。上記式（Ｘ）に示されるようなテクトリゲニン化合物は、この原理に基づいた同様の方法を用いることによって得ることができる。たとえば、式（Ｉ）に示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として使用し、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ジメチルアミノハイドロクロライド、および、ジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールなどの溶媒のうちの１つと混合し、反応物を再循環させた後に冷却し、ろ過して残渣を回収することにより、化合物（Ｘ）を得る。さらに、式（ＩＩＩ）に示されるような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができる。合成ラインは以下のとおりである。
【００４６】
【化１７】
【００４７】
抗ウィルス機能を有する対応する薬学的組成物は、有効医薬成分としての有効用量の上記式（ＩＩ）に示されるテクトリゲニン化合物の誘導体と、薬学的に許容される副材料成分とから、現行の従来的調製方法によって製造することができる。これら上記の抗ウィルス組成物について、上記の塩化合物は、抗ウィルス機能を有する注射型薬剤を調製するのに特に適しているが、これは、経口剤が普通に得られること以外に、前記塩化合物が十分な水溶性を有することができるからである。たとえば、上記典型的な化合物との比較試験は、中国薬局方第２巻、２０００年版の１０頁に掲載されている例のなかの溶解度試験法にしたがって以下のように行う。細かく粉砕した粉末試験試料をとり、２５℃±２℃の一定量の溶媒に加え、混合物を３０分間にわたって５分おきに激しく振盪し、薬局方に記された様々な溶液特性定義に従った試験を行う。得られる結果を表１に示す。
【００４８】
【表１】
【００４９】
表１の結果は、多くの容易に加塩されるおよび／または親水性の基を導入することで、本発明の様々な構造形態のテクトリゲニン誘導体の化学的に修飾されたイソフラボン化合物（ＩＩ）の溶解性が、大幅に高まること、また、これがその薬学的および臨床的用途にとって、およびｉｎ ｖｉｖｏにおける吸着および生物利用性にとっても好ましいことを示すものである。
【００５０】
注射剤中での上記式（ＩＩ）に示されるテクトリゲニン化合物誘導体の溶液安定性をさらに保証し、高めるために、注射製剤において許容される可溶化成分を、上記注射型製剤を製造する際にこれに基づいて許容量で用いることもできる。対照用に用いることができ、試験結果によって有効であることが証明されている有益な最適方法のひとつは、可溶化剤として、グルコースを、全注射量に対して２〜１５％の重量／体積比で前記注射型製剤に添加して、グルコース中のポリヒドロキシと式（ＩＩ）に示されるイソフラボンとの構造的会合により水素結合を形成させることにより、その水中溶解性を大きくすることである。
【００５１】
上記式（ＩＶ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムを例にとると、水溶性は室温で２０ｍｇ／ｍＬ（２％）であり、薬剤濃度に達することができなかったが、この水溶性は、６０〜１００℃に加熱すると５０〜６０ｍｇ／ｍＬまで高めることができ、室温まで冷却すると沈殿が遊離する。しかしながら、水または随意で糖食塩水で希釈した場合、室温および低（０℃〜５℃）温度において透明に維持することができ、注射剤に４％グルコースを加えた後でも濁ることはなかった。したがって、糖および／または食塩水中に加えた場合には、筋肉内注射だけでなく静脈注射にも使用することができる。このことは、グルコースが、上記式（ＩＶ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムの水溶性を高めつつ、注射用薬学的製剤の安定性を大幅に高めることができることを実証するものである。
【００５２】
たとえば、有効な薬学的成分として上記テクトリゲニンのイソフラボン誘導体（ＩＩ）を含有する注射製剤の調製の方法の一例として、５〜８０（重量）部のテクトリゲニン誘導体（ＩＩ）と、２０〜１５０（重量）部の注射用グルコースとを、７００〜８００（重量）部の注射用水に溶解し、完全溶解後に注射用水を加えて、全体積を１０００（重量）部とする。Ｇ４焼結ガラス漏斗によってろ過し、従来の包装および滅菌を行うと、２〜１５％グルコースと、５〜８０ｍｇ／ｍＬの有効な薬学的成分（すなわち、化合物（ＩＩ））とを含む淡黄色透明液体注射剤が得られる。
【００５３】
本発明を以下の具体例のなかでより詳細に説明する。しかしながら、本発明の主題が以下の例だけに限定されるとは理解すべきでない。当該分野における技術的常識および従来の手段による様々な置換および変更はすべて、本発明における上記技術的着想から逸脱しない限りにおいて、本発明範囲に包含される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５４】
【実施例１】
【００５５】
化合物（ＩＶ）の調製
１２０ｇの式（ＩＩ）に示されるテクトリゲニンと、４８０ｍＬの濃硫酸とを混合し、完全に溶解するまで攪拌し、１．５時間静置して反応させる。その後、この反応液を５０００ｍＬの飽和塩化ナトリウム中に攪拌しながらゆっくりと注いで、相当量の白色沈殿物を遊離させ、ろ過する。３０００ｍＬの水を沈殿に加え、これらを水浴中で沈殿が完全に溶解するまで加熱し、熱いうちにろ過し、結晶遊離およびろ過によって黄色の平らな結晶を得る。１０００ｍＬの水を結晶に加え、結晶が完全に溶解するまで混合物を水浴中で加熱し、熱いうちにろ過し、結晶を遊離させてろ過する。沈殿を減圧下、６０℃で乾燥させると、１５０ｇの式（ＶＩ）に示されるテクトリゲニンの精製スルホン酸ナトリウム生成物が得られる。これは淡黄色の薄くて細長い結晶であり、その含量は９８％を超える。
【００５６】
得られる式（ＶＩ）に示されるテクトリゲニンのスルホン酸ナトリウム生成物のスペクトルデータは以下のとおりである。
ＩＲ（ＫＢｒ圧縮錠、ｃｍ-1）：３４６５（ｓ），１６５４（ｓ），１６２２（ｓ），１５７５（ｓ），１４９４，１４６５（ｓ），１４３６，１３６７，１３４０，１２７８，１１６５（ｓ），１０９５（ｓ），１０７０，１０３１（ｓ），９９３，８３３，８１５，７６７，７３１，６６７，６３２，５６７，５４３，５０９，４５９；
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ2Ｏが溶媒、ＴＭＳ内部標準、δＨｐｐｍ）：７．８８（ｓ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，１Ｈ），６．９４（ｄ，１Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ）
【実施例２】
【００５７】
化合物（Ｖ）の調製
３００ｇ（１．０ミリモル）のテクトリゲニンイソフラボン（Ｉ）（以下、単に原料とよぶ）を５ｍＬの濃硫酸と混合し、混合物を６０℃で３時間加熱攪拌し、冷却し、２０ｍＬの飽和塩化ナトリウム溶液中に注ぐ。これを静置してろ過し、得られる固体物質を５％の塩化ナトリウム溶液を用いて再結晶すると、淡黄色の結晶で２８３ｍｇの中間生成物が得られる。この収率は７０％である。
【００５８】
１５０ｍｇ（０．２９４ミリモル）の上記中間生成物を５ｍＬのエタノールに懸濁し、これに前処理した強酸カチオン樹脂を過剰に加え、混合物を室温で１時間攪拌し、懸濁固体物質を完全に溶解する。混合物をろ過し、樹脂をアセトンで洗浄する。濾液に５５ｍｇのトリエタノールアミンを加え、溶媒を減圧下で蒸発させる。ジクロロメタンおよびアセトンを加えることにより、粉末固体物質の化合物（Ｖ）が得られ、この収率は９０％であり、融点は１５５〜１５９℃である。水中での溶解性は５０ｍｇ／ｍＬを超える。
【００５９】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ：７．９２（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，６Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，Ｄ2Ｏ）δ：１８２．４，１５９．０，１５６．５，１５５．７，１５５．０，１５４．１，１３５．８，１３３．２，１３０．３，１２４．１，１２３．２，１１９．６，１０６．９，９６．９，６２．８，５７．８，５７．５
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３３５６（ＯＨ，ＮＨ），３１５１，１６５５（Ｃ＝Ｏ），１６１２，１４４，１２９１，１１６８，１０９０
ＥＳＩ ＭＳ：３７９．１［Ｍ−ＮＨ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3］-
元素分析：Ｃ22Ｈ27ＮＯ12Ｓ（％）：Ｃ４９．８４，Ｈ５．２２，Ｎ２．７１；計算値：Ｃ４９．９０，Ｈ５．１４，Ｎ２．６５
【実施例３】
【００６０】
化合物（ＶＩ）の調製
３００ｍｇ（１．０ミリモル）のテクトリゲニンイソフラボン（Ｉ）（以後、単に原料とよぶ）を５ｍＬエタノールに溶解し、エタノール溶液（３ｍＬ）を２１０ｍｇ（６８％）の硝酸と混合し、これに氷浴中で冷却しながら５００ｍｇの濃硫酸を滴下し、混合物を２４時間のあいだ攪拌する。ろ過後、１７０ｍｇの窒化化合物が得られ、その収率は４９％である。
【００６１】
融点：＞２００℃
ＥＳＩ ＭＳ：３４６．１（Ｍ＋１）+；３４４．１（Ｍ−１）-
【００６２】
１５０ｍｇの上記ニトロ化合物を４ｍＬのメタノールに溶解し、これに３０ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃを加え、化合物を大気圧において完全に水素化（５時間）する。ろ過、および減圧下におけるメタノール除去の後、生成物を５ｍＬの酢酸エチル中に溶解し、これに酢酸エチルＨＣｌ溶液を酸性（ｐＨ＝２〜３）になるまで加える。ろ過すると、式（ＶＩ）に示されるような塩酸塩生成物が得られ、その収率は８０％であり、融点は２５０℃を超える。水中の溶解度は１ｍｇ／ｍＬを超える。
【００６３】
関連構造試験データ
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１２．９４（ｓ，１Ｈ），１０．７８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．５８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３４（ｓ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．５５（ｓ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８０．５，１５７．９，１５４．７，１５３．４，１５２．９，１５０．４，１３１．７，１２８．０，１２３．６，１２２．０，１２１．６，１２１．２，１１６．０，１０５．０，９４．２，６０．２
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３４２１（ＯＨ，ＮＨ），３０７９，１６４５（Ｃ＝Ｏ），１６１９，１５１８，１４７４，１２８４
ＥＳＩ ＭＳ：３１６．１（Ｍ＋１）+；３１４．１（Ｍ−１）-
元素分析：Ｃ16Ｈ14ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ５４．３５，Ｈ４．１５，Ｎ４．３５；計算値：５４．６３，Ｈ４．０１，Ｎ３．９８
【実施例４】
【００６４】
化合物（ＶＩＩ）の調製
３００ｍｇ（１ミリモル）の原料と、１３５ｍｇ（１．１ミリモル）のクロロ酢酸エチルと、８ｍｌのブタノンと、少量の５（体積）％のＤＭＦを混合し、これに２０７．３ｍｇ（１．５ミリモル）の無水Ｋ2ＣＯ3と触媒量（約５モル％）のＮａＩを加え、混合物を攪拌しながら再循環させる。これを室温まで冷却し、不溶物を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、残渣を適当量の水に溶解し、酢酸エチルで抽出し、２回水で洗浄し、乾燥させ、溶媒を減圧下で濃縮し、迅速クロマトグラフィーカラムによって分離すると、淡黄色中間生成物が得られ、その収率は３９．３％であり、融点は１６４〜１６７℃である。
【００６５】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ：１２．８５（ｓ，１Ｈ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．３５（ｓ，１Ｈ），５．５１（ｓ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），３．９８ｓ，３Ｈ），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）
ＥＳＩ ＭＳ：３８７．２（Ｍ＋１）+
【００６６】
１２５ｍｇ（０．３２ミリモル）の中間生成物を４ｍＬメタノールに溶解し、６４．８ｍｇ（１．６ミリモル）ＮａＯＨを水溶液（１ミリモル／ｍＬ）に調合し、これを上記メタノール溶液に攪拌しながら滴下し、完全に加水分解するまで常温で２４時間反応させ、溶液ｐＨを希塩酸によってｐＨ３〜４に調整し、メタノールを減圧下で蒸発させ、生成した白色綿状沈殿を酢酸エチルに溶解し、水洗し、乾燥させ、濃縮し、ＮａＨＣＯ3と反応させて、式（ＶＩＩ）に示されるナトリウム塩を製造する。この収率は８０％であり、融点は２５０℃を超える。水中での溶解度は２ｍｇ／ｍＬより高い。
【００６７】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：９．２４（ｓ，１Ｈ），１０．５８（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），８．３２（ｓ，１Ｈ），７．２４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．４７（ｓ，１Ｈ），４．３８（ｓ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８０．７，１７０．３，１５８．９，１５８．２，１５４．２，１５２．９，１５２．６，１３２．２，１３０．０，１２２．３，１２０．７，１１５．４，１０５．５，９２．２，６８．５，６０．１
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３４２０（ＯＨ），１６５５（Ｃ＝Ｏ），１６１４，１４２２，１２９０，１１７６
ＥＳＩ ＭＳ：３５９．１（Ｍ−Ｎａ＋２）+，３５７．０（Ｍ−Ｎａ）-
元素分析：Ｃ18Ｈ13ＮａＯ8（％）：Ｃ５６．８２，Ｈ３．３２；計算値：Ｃ５６．８５，Ｈ３．４５
【実施例５】
【００６８】
化合物（ＶＩＩＩ）の調製
１４．５ｍＬ（０．１２ミリモル）のジクロロスルホキシドを乾燥丸底フラスコに入れ、これを氷浴上でβ−ジメチルアミノエタノールを滴下漏斗を用いて滴下し、溶液を激しく攪拌する。添加後、３５〜５０℃において１時間撹拌し、５０ｍＬの無水エタノールの添加による再結晶により、茶色の粘着物が得られ、β−ジメチルアミノクロライド塩酸塩中間生成物が得られる。これを適当量の無水エタノールとエチルエーテルで洗浄し、密閉状態で保存する。
【００６９】
１５０ｍｇ（０．５ミリモル）の原料を１５ｍＬのブタノンに溶解し、３２１４ｍｇ（１．５５ミリモル）の無水Ｋ2ＣＯ3、０．５ｍＬのＤＭＦおよび触媒量（約５モル％）のＮａＣｌを添加し、混合物を加熱して再循環させ、１１５．３ｍｇ（０．８ミリモル）の上記中間生成物を混合物中に回分式で（半時間毎に５回に分けて）添加し、後者を約８０℃で４８時間再循環させ、冷却し、不溶物質を濾去し、濾液を減圧下においてロータリ・エバポレータ中で乾燥するまで濃縮して、粘着物を得る。これをエチルアセトンによって抽出し、水洗し、乾燥させ、適当量（１０重量倍）の水によって希釈した後に濃縮すると、黄色の固体生成化合物（ＶＩＩＩ）が得られる。この収率は４６．５％である。塩酸塩は、従来の方法を用いて製造する。その融点は１９０℃（軟化）および２３５℃（分解）である。水中の溶解度は２ｍｇ／ｍＬを超える。
【００７０】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１２．９８（ｓ，１Ｈ），１０．５７（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．６９（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｓ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．９４（ｓ，１Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），２．８９（ｓ，６Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８０．９，１５７．８，１５７．２，１５７．０，１５４．８，１５３．０，１３２．２，１３０．３，１２２．４，１２１．１，１１５．４，１０６．５，９２．４，６４．４，６０．５，５５．２，４３．２
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３４１８（ＯＨ，ＮＨ），１６５６（Ｃ＝Ｏ），１６１４，１５１５，１４６０，１２７２
ＥＳＩ ＭＳ：３７２．１（Ｍ＋１）+
元素分析：Ｃ20Ｈ22ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ５８．８５，Ｈ５．７８，Ｎ３．６４；計算値：Ｃ５８．９０，Ｈ５．４４，Ｎ３．４３
【実施例６】
【００７１】
化合物（ＩＸ）の調製
３００ｍｇ（１．０ミリモル）の原材料、３７（重量）％の内容量の８１ｍｇ（１．０ミリモル）のホルムアルデヒド溶液、ピペリジン（２当量）および５ｍＬのジオキサンを混合し、３時間再循環させる。冷却およびろ過後、淡黄色の固体生成物（ＩＸ）が得られる。対応する塩酸塩は、適当量の濃塩酸をこれに加えることにより得られ、その収率は９０％である。融点は、２４５℃（分解）である。水中での溶解度は１ｍｇ／ｍＬ未満である。
【００７２】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１３．４３（ｓ，１Ｈ），１１．２６（ｓ，１Ｈ），１０．０３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．３８（ｍ，２Ｈ），２．９７（ｍ，２Ｈ），１．７８−１．６３（ｍ，４Ｈ），１．３８−１．３６（ｍ，１Ｈ），１．０７−１．０４（ｍ，１Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（５０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８１．０，１５７．９，１５７．１，１５４．３，１５２．４，１３１．１，１３０．２，１２２．１，１２０．９，１１５．４，１０５．０，９５．５，８０．５，５６．２，５２．１，４８．２，２２．４，２１．２，１８．８
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３１９７（ＯＨ，ＮＨ），２９５４，１６５２（Ｃ＝Ｏ），１５８５，１５１５，１４５８，１３７４，１２２６
ＥＳＩ ＭＳ：３９８．０（Ｍ＋１）+；３９６．２（Ｍ−１）-
元素分析：Ｃ22Ｈ24ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ６０．５０，Ｈ５．７４，Ｎ３．５４；計算値：Ｃ６０．９０，Ｈ５．５８，Ｎ３．２３
【実施例７】
【００７３】
化合物（Ｘ）の調製
１５０ｍｇ（０．５ミリモル）の原料、３７（重量）％の内容量の４０．５ｍｇ（０．５ミリモル）のホルムアミド溶液、６１．２ｍｇ（０．７５ミリモル）の塩酸ジメチルアミンおよび２ｍＬのジオキサンを混合し、７０〜８０℃で１０時間再循環させる。冷却し、ろ過し、不溶物質を回収した後に、化合物（Ｘ）が得られる。生成物の塩酸塩は、酸（塩酸ｐＨ＝２〜３）の条件下でエタノールによって再結晶させると得られ、その収率は３８．７％である。融点は２４８℃（分解）である。水中での溶解性は２ｍｇ／ｍＬを超える。この生成物の位置選択性は、上記化合物（ＶＩＩ）の場合と同様である。
【００７４】
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１３．４０（ｓ，１Ｈ），１１．３２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），１０．２３（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），９．７４（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），４．３４（ｓ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．７７（ｓ，６Ｈ）
１３Ｃ ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ：１８１．０，１５７．９，１５６．９，１５４．３，１５４．２，１５２．３，１３１．１，１３０．２，１２２．２，１２０．９，１１５．４，１０５．０，９５．９，６０．６，４８．６，４２．３
ＩＲ ｃｍ-1（ＫＢｒ）：３１４５（ＯＨ，ＮＨ），１６５６（Ｃ＝Ｏ），１５７７，１４６２，１３７９，１２２３
ＥＳＩ ＭＳ：３５７．９（Ｍ＋１）+；３５６．２（Ｍ−１）-
元素分析：Ｃ19Ｈ20ＣｌＮＯ6（％）：Ｃ５７．９９，Ｈ５．１１，Ｎ３．８５；計算値：Ｃ５７．９５，Ｈ５．１２，Ｎ３．５６
【実施例８】
【００７５】
様々な剤形の製剤の調製
１．注射剤
全注射量に対して、２〜１５％重量／体積比のグルコースを可溶化剤として加えることにより、水中での溶解性が飛躍的に高まる。これは、グルコース内のポリヒドロキシがイソフラボン基と会合することによって、水素結合が形成されるためである。
【００７６】
テクトリゲニンスルホン酸ナトリウムを例にとると、その水溶性は室温において２０ｍｇ／ｍＬ（２％）しかなく、製剤濃度に達することができないが、６０〜１００℃に加熱した後には、５０〜６０ｍｇ／ｍＬ（５〜６％）にまで高めることができ、室温まで冷却するとまた沈殿が遊離する。しかしながら、２〜１５％のグルコースを注射剤に添加した後には、室温および低（０℃〜５℃）温度において透明に維持することができ、水または糖食塩水によって任意に希釈することができ、濁ることもない。したがって、糖および／または食塩水中に加えた場合には、筋肉内注射だけでなく静脈注射にも使用することができる。このことは、テクトリゲニンスルホン酸ナトリウムの水中での安定性がグルコースによって高められているときには、注射用薬学的製剤の安定性を大幅に高めることができることを実証するものである。
【００７７】
１００ｇのテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムと、１５０ｇの注射用グルコースとを１５００ｍＬの注射用水に溶解し、それらを完全に溶解させた後、注射用水を加えて全体積を２０００ｍＬにする。Ｇ４焼結ガラス漏斗を用いてろ過した後に、濾液をアンプル瓶に充填し、従来の方法によって滅菌する。得られる注射剤は淡黄色の透明液体である。
【００７８】
１００ｇの式（Ｖ）に示される化合物と、１００ｇの注射用グルコースとを１５００ｍＬの注射用水に溶解し、それらを完全に溶解させた後、注射用水を加えて全体積を２０００ｍＬにする。Ｇ４焼結ガラス漏斗を用いてろ過した後に、濾液をアンプル瓶に充填し、従来の方法によって滅菌する。得られる注射剤は淡黄色の透明液体である。
【００７９】
１００ｇのテクトリゲニンスルホン酸ナトリウムと、８０ｇの注射用グルコースとを１５００ｍＬの注射用水に溶解し、それらを完全に溶解させた後、注射用水を加えて全体積を２０００ｍＬにする。Ｇ４焼結ガラス漏斗を用いてろ過した後に、濾液をアンプル瓶に充填し、従来の方法によって滅菌する。得られる注射剤は淡黄色の透明液体であり、その後、凍結乾燥器で１５〜２８時間凍結乾燥させる。このようにして、注射用の黄色のさらさらとした（ｌｏｏｓｅ）凍結乾燥粉末が得られる。
【００８０】
２．経口製剤の調製
経口製剤には、錠剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、丸薬、滴下剤、ミニピルおよび様々な溶液剤が含まれる。
【００８１】
我々の合成するすべての誘導体が淡黄色および黄色固体であり、乾燥および微粉砕（すべての微粉末が篩＃５を通過することができ、９５％以上の粉末が篩＃６を通過することができることを意味する）によって得られることから、粉末剤は固体経口製剤としての様々な剤形の基礎となる。粉末は、篩にかけ、流動性と充填性を高めるために、適当な量の滑石粉補助材料を加えて得られる。
【００８２】
顆粒剤：薬剤と副材料を粉砕してよく混合した後、適当な粘着剤を加えてから顆粒化し、乾燥させ、顆粒分類を行い、充填する。
【００８３】
カプセル製剤：カプセルはソフトカプセルとハードカプセルに分けられる。ハードカプセルは薬剤粉末または顆粒のカプセル包装によって製造され、ソフトカプセルは、球形または柔らかいカプセル材料のなかに薬剤溶液を充填することによって製造される。適当な材料、すなわち乾燥ゼラチンを、グリセリンと水の比が１：０．４になるようにグリセリンおよび水と均一に混合したものをソフトカプセルの壁として使用し、薬剤溶液のｐＨ値を４．５〜７．５に調節し、メッシュ＃８０を通過する固体薬剤粉末から、滴下または圧縮プロセスによってソフトカプセルを製造することもできる。さらに、腸溶カプセルを製造することもできる。
【００８４】
さらに、エチレンビニル酢酸コポリマー（ＥＶＡ）やポリプロピレンなどの様々な副材料を選択し、使用して、常套的な調製手順にしたがって徐放および放出制御製剤のための骨格を作成するようにしてもよい。たとえば、テクトリゲニン誘導体製剤は、ミニカプセル化によって必要なだけ放出される製品にして、これを空の一般的なカプセルに充填するようにしてもよい。
【００８５】
滴下剤またはミニピル：滴下剤の利点は効果が迅速であり、高い生物利用性があり、副作用が小さく、液体製剤から作成された固形剤の薬物摂取および移送に都合がよく、薬物安定性が向上し、製造装置が簡単であり、扱いが簡単であり、重量のずれが小さく、コストが低く、粉塵もなく、多くのタイプの滴下剤を経口投与、外用、徐放、制御放出または局所治療のために用いることができることにある。
【００８６】
薬剤溶液は、ポリエチレングリコールやステアリン酸などの薬剤基質（基質は加熱）と均一に混合し、混合物を熱保護用の滴下剤機械に入れ、適当な縮合剤を入れた容器に滴下し、乾燥させ、縮合剤を洗浄除去した後に乾燥、分類し、品質を調整してから包装する。
【００８７】
錠剤：
錠剤には、通常の圧縮錠、咀嚼錠、発泡錠、複合圧縮錠、徐放錠、放出制御錠、コートされた剤形（糖衣錠、フィルムコート錠および腸溶コート錠）、分散錠剤、および口腔および舌下錠などが含まれる。
【００８８】
５０ｇのテクトリゲニン誘導体と９５０ｇのデンプンおよび粉末にした糖を、上記原料と副材料を粉砕して篩にかけた後、均一に混合し、これに適当量の粘着剤を加えて柔らかい材料を形成し、これを篩にかけて、顆粒化し、乾燥させ、分類して、それらに錠剤分解物質および潤滑剤を加えた後に完全に混合し、圧縮し、コートし、品質を調整してから包装する。
【００８９】
徐放および放出制御錠
５０ｇのテクトリゲニン誘導体をポリエチレンまたはポリプロピレン骨格と均一に混合し、圧縮して、従来の調製方法にしたがって１０００個の徐放錠を製造する。薬物はゆっくりと放出され、骨格は、薬物の放出後に排泄物とともに排出される。
【００９０】
３．外用製剤の調製
外用製剤には、ローション剤、点眼剤、噴霧剤、眼軟膏剤、ゲル剤、坐薬、塗布剤、軟膏剤、点鼻剤、点耳剤、フィルム剤および経皮ステッカーなどが含まれる。
【００９１】
眼軟膏剤：原料として誘導体を超微細な粉末（すべての粉末が篩＃７を通過でき、篩＃８を通過できる粉末を９５％より多く含むことを意味する）に粉砕し、適当な基質を添加した後、眼用のゲルまたは眼軟膏剤にする。
【００９２】
外用粉末の原料および副材料を非常に微細な粉末（すべての粉末が篩＃６を通過でき、篩＃７を通過できる粉末を９５％より多く含むことを意味する）に粉砕する。外用粉末は、一般には、ウィルスを殺すため、またはウィルス感染を防止するために用いることができる。
【００９３】
点眼剤：２０ｇのテクトリゲニン誘導体を原料として点眼剤を製造するが、そのｐＨはリン酸バッファ溶液ｐＨ値調整剤をこれに加えることによって５．９〜８．０に調節し、浸透圧は、適当量のグルコース浸透圧調整剤を加えることにより、０．６〜１．５％塩化ナトリウムの浸透圧と同等に調節する。少量の粘度調整剤（ポリエチレングリコール）と９８０ｇの水を加えた後、溶液をろ過し、濾液を滅菌後無菌状態で瓶詰めする。
【００９４】
噴霧剤、点鼻剤、および点耳剤の調製方法も同様であるが、それらの浸透圧およびｐＨ値の要件はそれほど厳しくない。
【００９５】
軟膏剤および塗布剤
４０ｇのテクトリゲニン誘導体を非常に微細な粉末に粉砕し、９６０ｇの水溶性基質ポリオキシエチレングリコール６００および２０００（４：６比）に溶解し、加熱し、均一に混合し、品質調整を行った後、混合物を包装し、外用のための一定の密度を有する半固体の製剤を得ることができる。
【００９６】
ゲル剤
４０ｇのテクトリゲニン誘導体を粉砕し、水に溶解し、水溶性基質カルボポールをハイドロゲル基質にし、後者を薬物と混合し、水を加えて１０００ｍＬにし、品質調整と包装後に、透明または半透明のゲルを得ることができる。
【００９７】
坐薬
４０ｇのテクトリゲニン誘導体を非常に微細な粉末に粉砕し、９６０ｇの水溶性基質ポリオキシエチレングリコール６００および１８０００（４：６比）に溶解し、加熱して均一に混合した後、混合物を液体パラフィンでコートした型に流し込み、冷却し、成形し、品質調整を行い、包装し、その要件に合う溶解時間制限を有する外用の固体製剤が得られる。
【００９８】
フィルムコーティング剤
外用のフィルムコーティング製剤は、テクトリゲニン誘導体と高分子フィルミング材料であるポリエチレンホルムアルデヒドおよびアセトアルデヒド縮合体（比４：９６）の両方をエタノール中に溶解することによって得ることができる。
【００９９】
経皮ステッカー
６０ｇのテクトリゲニン誘導体をまず最初に微細に粉砕し、水に溶解し、水溶性ポリマーＰＶＡまたはＰＶＰを薬剤水溶液に混合し、水と均一に混合した後ゲルプールを形成し、後者の品質調整と用量調整を行い、同時に感圧性糊（アクリル樹脂酸）を裏張り材料（ポリプロピレン）上にコーティングすることにより、ビスコース層を得、層を薬剤プールよりも大きい面積に分割し、ゲルプールと組み合わせ、粘着防止材料（ポリエチレン高重合体）の層をその表面に塗布して、経皮ステッカーを製造する。
【実施例９】
【０１００】
テクトリゲニンスルホン酸ナトリウムの急性毒性試験および抗ウィルス効果試験
以下の試験は、上記式（ＩＶ）に示されるテクトリゲニンのスルホン酸ナトリウム注射剤（５０ｍｇ／ｍＬ）を実験試料として行う。
【０１０１】
１．急性毒性試験
体重１８〜２０ｇのオスおよびメスのマウス（半分ずつ）を実験動物として、それぞれに筋肉内、静脈内および腹腔内注射による投与を行う。筋肉内注射（ｉｍ）については、０．２ｍＬ／１０ｇ（５００ｍｇ／ｋｇ）用量を両側の後肢筋に注射し；静脈内注射（ｉｖ）に対するすべての群においては尾静脈に、それぞれ、８４１．５ｍｇ／ｋｇ、７８１．２５ｍｇ／ｋｇ、７２５．２５ｍｇ／ｋｇ、６７３．２５ｍｇ／ｋｇ、５８０．２ｍｇ／ｋｇの用量で投与し；腹腔内注射（ｉｐ）に対する用量は０．４ｍｇ／１０ｇ（すなわち、１０００ｍｇ／ｋｇと同等）とする。全ての群における投与後の実験動物の毒性反応および死亡については、それぞれお１４日間にわたって１日に一回観察する。動物の死亡が判明すると、迅速に解剖を行う。半致死用量は、５０％有効量確率単位法（加重線形回帰法）を用いて測定する。実験結果：1)精神状態、毛の（ｐｉｌｏｕｓ）状態、摂食、飲水、成長および発達などの反応に関して、筋肉内注射を行った実験動物には何ら異常が認められず、注射から１４日後に２０匹のうちの一匹も死亡しないことから、筋肉内注射による１回の投与を行ったマウスの最大耐量は、５００ｍｇ／ｋｇであり、それらの半致死用量は、５００ｍｇ／ｋｇを超えると想定される。2)静脈内注射による投与を行った実験動物の半致死用量ＬＤ５０は、７２５．８１ｍｇ／ｋｇであり、それらの９５％信頼限界は、６６９．９２ｍｇ／ｋｇ〜７８５．５３ｍｇ／ｋｇであり、パイロット試験製品における連続方法によって測定される半致死用量ＬＤ５０は、８６８．２ｍｇ／ｋｇであり、ＬＤ５０の９５％信頼限界は７９８．２〜９４４．４ｍｇ／ｋｇである。3)腹腔内注射による投与を行った実験動物については、１４日以内には全く死亡が認められず、腹腔内注射によって１回の投与を行ったマウスの最大耐用量は、１０００ｍｇ／ｋｇである。
【０１０２】
３つの投与方法によって実施した急性毒性試験の結果から、試験試料として用いた上述の抗ウィルス注射剤は、低い毒性しか有さず、ＬＤ５０はｉｍおよびｉｐの場合には測定不能であり、最大耐用量はそれぞれ５００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇであり、ＬＤ５０はｉｖによって投与した場合には、７２５．８１ｍｇ／ｋｇおよび８６８．２ｍｇ／ｋｇであることがわかる。
【０１０３】
２．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ抗ウィルス試験
試験薬物は、本発明における上記注射試料とし、対照薬物は注射用カリウムナトリウムデヒドロアンドロアンドログラホリドスクシネート（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｅｈｙｄｒｏａｎｄｒｏａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）（商品名：注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ）、４０ｍｇ／ｍＬ（ロット番号：０００５０１，成都第３製薬工場製、化学構造）、ブランク対照はＨａｎｋｓ液（四川省人民病院の研究部、ウィルス研究室より提供）とする。
【０１０４】
実験株は、Ｈｅｐ−２およびＨＬ１６Ｃ細胞（すべて汕頭華盈生物工学応用研究所、細胞工学研究部より提供）である。ウィルス株は、アデノウィルスＡＤＶ３型およびＡＤＶ７型、呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウィルス（ＦｌｕＶ）Ａ１型およびＡ３型、およびコクサッキーウィルスＢ群（ＣｏｘＢＶ）（これらは、それぞれ小児科主要研究所、中国予防医科学研究所のウィルス研究所、および四川省衛生伝染病予防局より提供）の混合細胞株であり、ＴＣＩＤ５０を試験前に測定しておく。
【０１０５】
試験方法：
（１）細胞毒性試験
注射用試験試料と、注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇとをそれぞれ、Ｈａｎｋｓ液によって１０ｍｇ／ｍＬから倍数比例の法則に従って希釈する。２種類の溶液について、１０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬとなるように希釈を行う。異なる４濃度を有する上記の２種類の薬物を、それぞれＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞中に接種し、細胞対照を同時に作成し、２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ維持培地を加えて、サーモスタット下で３７℃に維持し、上述の細胞毒性反応を毎日観察する。細胞毒性試験の結果を表２に示す。
【０１０６】
【表２】
【０１０７】
（注：”−”は、細胞中で毒性反応が全く起こっていないことを意味する）
【０１０８】
表２に示す結果は、試験試料溶液、対照薬物Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇおよびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）がＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に対して全く毒性反応を有さないことを示している。
【０１０９】
（２）抗ウィルス試験
１００ＴＣＩＤ５０ ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶ、ＣｏｘＢＶおよびＲＳＶウィルスをそれぞれ、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種する（Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶはＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種）。ウィルス溶液を３０分以内に、吸収後、洗い流し、試験試料とＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ非毒性限界溶液をそれぞれに加え（すなわち、１０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬ）、ウィルス対照、細胞対照およびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）を上記薬物と同時に作成する。細胞維持培地は２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ培地であり、インキュベータ中、３７℃に維持し、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞の病理学的変化を観察し、すべての群における細胞の病理学的変化を毎日記録する。ＲＳＶ耐性試験については、ウィルスおよび非毒性限界薬物を接種した後、溶液をインキュベータ中、３７℃で２４時間水平に静置し、３５℃のロータリインキュベータ（１２回転／分）に移し、細胞の病理学的変化を毎日観察する。ｐＨ値が培養管中で下がる場合には、即時に溶液を変えなければならない。試験において細胞が正常であり、かつ細胞対照群においてよく増殖している状態で、ウィルスの対照群において２＋〜３＋の病理学的変化が起こった時点で、試験を終える。試験結果を表３に示す。
【０１１０】
表３の結果は、本発明において１０ｍｇ／ｍＬの試験試料注射溶液が、ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、Ａ３型ＦｌｕＶに対する部分阻害効果を有することを実証するものである。５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、ＡＤＶ３およびＣｏｘＢＶに対する部分阻害効果を有する。２．５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶに対する阻害効果を有する。１０ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｇｈｕｎｉｎｇ溶液は、ＡＤＶ３および７、ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有する。他の濃度を有する溶液およびブランク対照は、すべての管において、細胞の病理学的変化を阻害することができない。
【０１１１】
【表３】
【０１１２】
（注：”−”は、細胞中でいかなる病理理学的変化も起こっていないことを意味する。１＋〜３＋は、細胞の病理学的変化の程度を意味する。）
【０１１３】
上記の試験結果は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度の試験試料注射が、１００ＴＣＩＤ５０ウィルス感染の場合にＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型およびＡ３型のＦｌｕＶおよびＲＳＶに対して、様々な程度の阻害効果を示すことを実証するものである。１０ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ（対照薬物）溶液は、ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型およびＡ３型のＦｌｕＶおよびＲＳＶに対して阻害効果を有する。試験結果は、本発明における、Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶに対する試料注射の阻害効果が、現在のところ、注射にＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇを用いる場合よりも良好であることを示唆するものである。
【実施例１０】
【０１１４】
抗ウィルス剤効果試験
以下の薬学的効果試験は、上記実施例における典型的なテクトリゲニン誘導体を試験試料として行う。
【０１１５】
１．抗ウィルス試験
試験薬物は、本発明における誘導体から製造した注射試料、経口カプセル、顆粒剤、錠剤、溶液剤、ならびに外用の点眼剤、塗布剤、クリーム、ローション、および点耳剤である。対照薬物は、注射用カリウムナトリウムデヒドロアンドログラホリドスクシネート（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｓｏｄｉｕｍ Ｄｅｈｙｄｒｏａｎｄｒｏａｎｄｒｏｇｒａｐｈｏｌｉｄｅ Ｓｕｃｃｉｎａｔｅ）（商品名：注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ，４０ｍｇ／ｍＬ，成都第３製薬工場製）、ピラゾールブランク対照はＨａｎｋｓ液（四川省人民病院の研究部、ウィルス研究室より提供）とする。
【０１１６】
実験株は、Ｈｅｐ−２およびＨＬ１６Ｃ細胞（すべてすべて汕頭華盈生物工学応用研究所、細胞工学研究部より提供より提供）である。ウィルス株は、アデノウィルスＡＤＶ３型およびＡＤＶ７型、呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）、インフルエンザウィルス（ＦｌｕＶ）Ａ１型およびＡ３型、およびコクサッキーウィルスＢ群（ＣｏｘＢＶ）（これらは、それぞれ小児科主要研究所、中国予防医科学研究所のウィルス研究所、および四川省衛生伝染病予防局より提供）の完全混合細胞であり、ＴＣＩＤ５０を試験前に測定しておく。
【０１１７】
試験方法：
（１）細胞毒性試験
試験試料の注射剤、経口カプセル、顆粒剤、錠剤、ピル、点眼剤、眼軟膏剤および他の外用製剤を溶解し、必要に応じた濃度を有するように調合し、これらと、注射用Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇとをそれぞれ、Ｈａｎｋｓ液によって１０ｍｇ／ｍＬから倍数比例の法則に従って希釈する。２種類の溶液について、１０ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬとなるように希釈を行う。異なる４濃度を有する上記の２種類の薬物を、それぞれＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種し、同時に細胞対照も作成し、２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ維持培地を加えて、サーモスタット下で３７℃に維持し、上述の細胞毒性反応を毎日観察する。細胞毒性試験の結果を表４に示す。
【０１１８】
【表４】
【０１１９】
（注：”−”は、細胞中で毒性反応が全く起こっていないことを意味する）
【０１２０】
表４に示す結果は、試験試料溶液、対照薬物Ｃｈｕａｎｈｕｎｉｎｇおよびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）がＨｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に対して全く毒性反応を有しないことを示している。
【０１２１】
（２）抗ウィルス試験
１００ＴＣＩＤ５０ ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶ、ＣｏｘＢＶおよびＲＳＶウィルスをそれぞれ、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種する（Ａ１型およびＡ３型ＦｌｕＶはＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞に接種）。ウィルス溶液を３０分以内に、吸収後、洗い流し、試験試料とＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ非毒性限界溶液をそれぞれに加え（すなわち、８ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬおよび１．２５ｍｇ／ｍＬ）、ウィルス対照、細胞対照およびブランク対照（Ｈａｎｋｓ液）を上記薬物と同時に作成する。細胞維持培地は２％子牛血清Ｅａｇｌｅｓ培地であり、インキュベータ中、３７℃に維持し、Ｈｅｐ−２およびＺ−ＨＬ１６Ｃ細胞の病理学的変化を観察し、すべての群における細胞の病理学的変化を毎日記録する。ＲＳＶ耐性試験については、ウィルスおよび非毒性限界薬物を接種した後、溶液をインキュベータ中、３７℃で２４時間水平に静置し、３５℃のロータリインキュベータ（１２回転／分）に移し、細胞の病理学的変化を毎日観察する。ｐＨ値が培養管中で下がる場合には、即時に溶液を変えなければならない。試験において細胞が正常であり、かつ細胞対照群においてよく増殖している状態で、ウィルスの対照群において２＋〜３＋の病理学的変化が起こった時点で、試験を終える。試験結果を表５に示す。
【０１２２】
表５の結果は、本発明において１０ｍｇ／ｍＬの試験試料注射溶液が、ＡＤＶ３，ＡＤＶ７，ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、Ａ３型ＦｌｕＶに対する部分阻害効果を有することを実証するものである。５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有し、ＡＤＶ３およびＣｏｘＢＶに対する部分阻害効果を有する。２．５ｍｇ／ｍＬの溶液は、Ａ１型ＦｌｕＶに対する阻害効果を有する。８ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｇｈｕｎｉｎｇ溶液は、ＡＤＶ３および７、ＣｏｘＢＶ，Ａ１型ＦｌｕＶおよびＲＳＶの細胞病原性に対する阻害効果を有する。他の濃度を有する溶液およびブランク対照は、すべての管において、細胞の病理学的変化を阻害することができない。
【０１２３】
【表５】
【０１２４】
（注：”−”は、細胞中でいかなる病理理学的変化も起こっていないことを意味する。１＋〜３＋は、細胞の病理学的変化の程度を意味する。）
【０１２５】
上記の試験結果は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度の試験試料注射が、３型アデノウィルス（ＡＤＶ３），７型アデノウィルス（ＡＤＶ７），コクサッキーウィルスＢ群（ＣｏｘＢＶ），インフルエンザウィルスＡ１型（ＦｌｕＶＡ１）およびＡ３型（ＦｌｕＶＡ３）および呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）に対して、様々な程度の阻害効果を示すとともに、１００ＴＣＩＤ５０感染状況において、インフルエンザウィルスＡ１型およびＡ３型、ならびに呼吸器合胞体ウィルスに対して優れた阻害効果を有することを実証するものである。１０ｍｇ／ｍＬのＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇ（対照薬物）溶液は、３型アデノウィルス、７型アデノウィルス、コクサッキーウィルスＢ群、インフルエンザウィルスＡ１型およびＡ３型、ならびに呼吸器合胞体ウィルス（ＲＳＶ）に対して、阻害効果を有する。試験結果は、本発明における、Ａ１型インフルエンザウィルスおよび呼吸器合胞体ウィルスに対する試料注射の阻害効果が、注射用に現在用いているＣｈｕａｎｈｕｎｉｎｇおよびリバビリンの場合よりも良好であることを示唆するものである。
【０１２６】
（３）ＳＡＲＳウィルス耐性試験
Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞に対するテクトリゲニン誘導体の毒性と、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞におけるコロナウィルス阻害効果とについて、北京におけるＳＡＲＳの流行中に患者の肺組織から分離したウィルス株ＢＪ０１およびＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を用いて調べる。
【０１２７】
（３．１）実験材料
1)被験薬物：上記のテクトリゲニン誘導体を注射剤、すなわち、四川迪康科技薬業股分有限公司より提供され、ロット番号が２００３０３０１のＤｉｋａｎｇ抗ウィルス注射剤（５０ｍｇ／ｍＬ）に調合する。
【０１２８】
2)ポジティブコントロール薬物：山東新華制約股分有限公司によって提供され、認証文書Ｈ１９９９３０６３、ロット番号０２１０００２０のリバビリン（ビラゾール）注射剤、０．１ｇ／ｍＬ。その臨床的応用：これは気道細胞ウィルスに起因するウィルス性肺炎および気管支炎を治療するために用いられる。
【０１２９】
3)細胞：Ｖｅｒｏ−Ｅ６、これは我々の細胞バンク（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８６）に保存されている。
【０１３０】
4)ウィルス株：２００３年２月に北京におけるＳＡＲＳの流行中に患者の肺組織から分離したコロナウィルスであり、株ＢＪ０１と名付ける。
【０１３１】
5)試薬：ＧｉｂｃｏｌｌＢＲＬ Ｃｏｍｐａｎｙによって作成され、それぞれのロット番号が３１６００−０２６および１６０００−３６のＤＭＥＭ培地およびウシ胎仔血清。
【０１３２】
6)機器：Ｃｏｍｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ製の９６穴の細胞培養ボードと、重慶光学機器工場製のバイオティック倒立顕微鏡。
【０１３３】
（３．２）方法と結果
1)薬物調合法
被験薬物：テクトリゲニン誘導体は淡黄色の液体であり、冷蔵庫中４℃で保存する。ポジティブコントロール薬物は１０ｍｇ／ｍＬ母液に調合する。これは、細胞の成長促進媒体を用いて、使用時に必要な濃度に調合される。
【０１３４】
2)テクトリゲニン誘導体の細胞への毒性の試験
１ｍＬにつき３０００００〜４０００００個のＶｅｒｏ−Ｅ６細胞を、９６穴の細胞培養ボードに接種し、ボードを５％ＣＯ2インキュベータ中、３７℃で１８時間維持し、様々な濃度の試験薬物をこれに加え、各濃度の薬物を４つの孔にそれぞれ０．４ｍＬずつ加え、同時に薬物を入れない細胞対照群を準備し、４〜５日間培養して、細胞の病理的変化（ＣＰＥ）を観察し、バイオティック倒立顕微鏡によってＣＰＥを５日目の指標として観察する。完全病理的変化を４とし、７５％の病理的変化を３とし、５０％の病理的変化を２とし、２５％の病理的変化を１とし、病理的変化が全くみられない場合を０とする。試験は２回繰り返す。中間毒性濃度（ＴＤ５０）および最大非毒性濃度（ＴＤ０）は、ＲＥＥＤ−ＭＵＥＮＣＨ法を用いて算出し、結果を表６に示す。
【０１３５】
【表６】
【０１３６】
表６の計算から、本発明の抗ウィルス注射剤の、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞に対する最大非毒性濃度（ＴＤ０）は、１ｍｇ／ｍＬであり、中間毒性濃度（ＴＤ５０）は、２．３４ｍｇ／ｍＬであることがわかる。このことは、本発明のテクトリゲニン誘導体が、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞に対して毒性が低くかつ、良好な安全性を有することを意味する。
（４）テクトリゲニン誘導体のコロナウィルス阻害試験（細胞病理変化法）
【０１３７】
Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞を９６穴の培養ボードに接種し、３７℃で単層になるまで培養し、成長促進培地を捨てる。コロナウィルスＢＪ０１株の４世代のウィルス溶液をＤＭＥＭ維持培地によって、１００ＴＣＩＤ５０／０．１ｍＬに希釈し、そのうちの０．１ｍＬを各穴内のＶｅｒｏＥ６細胞に接種し、２時間吸収させ、ウィルス溶液を捨てる。正常細胞対照群、ウィルス対照群、およびポジティブ薬物対照群を作成する。細胞を５％ＣＯ2培養インキュベータ中、３７℃に維持し、病理的変化を全５日間、毎日観察し、ＣＰＥを記録し、この試験を２回繰り返したところ、結果は基本的に同一であった。中間阻害濃度（ＩＣ５０）および治療指数（ＴＩ）は、ＲＥＥＤ−ＭＵＥＮＣＨ法を用いて計算し、結果を表７に示す
【０１３８】
【表７】
【０１３９】
表７の計算から、０．９７６ｍｇ／ｍＬの濃度を有するテクトリゲニン誘導体がコロナウィルスに対する阻害効果を有することがわかる。
結論として以下のことがいえる。
【０１４０】
【表８】
【０１４１】
上記の試験結果は以下のことを実証する。
【０１４２】
1)Ｖｅｒｏ−Ｅ６に対する本発明のテクトリゲニン誘導体の毒性：テクトリゲニン誘導体をＶｅｒｏ−Ｅ６細胞に加え、これを５日間培養する。細胞の病理的変化を指標とした場合、その中間毒性濃度（ＴＤ５０）は２．３４ｍｇ／ｍＬであり、最大非毒性濃度（ＴＤ０）は１ｍｇ／ｍＬである。
【０１４３】
2)テクトリゲニン誘導体は、Ｖｅｒｏ−Ｅ６細胞におけるコロナウィルスに対する阻害効果を有する。テクトリゲニン誘導体注射剤をＶｅｒｏ−Ｅ６細胞に加え、これを５日間培養する。その中間効果濃度（ＩＣ５０）は０．０９７６ｍｇ／ｍＬであり、テクトリゲニン誘導体注射剤のコロナウィルスに対する最小治療指数は、２３．９８である。
【０１４４】
（５）トリインフルエンザＨ５Ｎ１およびＨ９Ｎ２サブタイプウィルス殺傷効果試験
以下は上記実施例に記載のテクトリゲニン誘導体を試験薬物とした場合の、ｉｎ ｖｉｔｒｏトリインフルエンザウィルス（ＡＩＶ）殺傷試験である。
【０１４５】
（５．１）材料と方法
1)被験薬物
上記実施例のテクトリゲニン誘導体溶液（１ｍＬあたり３０ｍｇの原料薬物を含有する淡黄色液体）
【０１４６】
2)トリインフルエンザウィルス
ウィルス株は、中国農業科学協会に属するハルビン獣医学研究所から委託を受けた農業省重要動物インフルエンザ公開研究所（ｔｈｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ’ｓ Ｋｅｙ Ａｎｉｍａｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｏｐｅｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に保存されているＡ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）およびＡ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ／６／９６（Ｈ９Ｎ２）である。
【０１４７】
3)ニワトリ胚
中国農業科学協会に属するハルビン獣医学研究所の実験動物センターから提供された１０日齢のＳＰＦニワトリ胚。
【０１４８】
4)予備試験
ａ．ウィルスＥＩＤ５０測定
トリインフルエンザウィルスサブタイプＨ５およびＨ９は、１０倍系列で希釈し、１０日齢のＳＰＦニワトリ胚に接種し、５つの胚に対してそれぞれの希釈を行い（０．１ｍＬ／胚）、ウィルス中間感染用量（ＥＩＤ５０）を測定する。
ｂ．試験した薬物母液調節
上述のテクトリゲニン誘導体を、１ｍＬあたりに３０ｍｇの原料薬物を含有する母液とする。
ｃ．被験薬物のニワトリ胚に対する最大非毒性用量
１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，１．８７５ｍｇ，０．９３７５ｍｇ，０．４６８７５ｍｇ，０．２３４３７５ｍｇおよび０．１１７１８７５ｍｇの被験原料薬物を含有する溶液を１０日齢のＳＰＦニワトリ胚にそれぞれ接種し最初の希釈の溶液を５つの胚（０．１ｍＬ／胚）に接種する。接種したニワトリ胚を３７℃のサーモスタット中におき、９６時間培養する。ニワトリ胚は２４時間以内に死ぬが、これを廃棄し、その死について記録する。
【０１４９】
5)被験薬物のウィルス殺傷率試験
２種（強弱）のトリインフルエンザウィルスの殺傷試験を、被検薬物により、Ｋｌｅｉｎ−Ｄｏｆｏｒｓ懸濁法を用いて行う。被験薬物を滅菌済生理学的食塩水で１０倍系列で希釈し、接種し、感染ニワトリ胚を調べる。
ａ．ウィルス懸濁液の調製
トリインフルエンザウィルスサブタイプＨ５およびＨ９を、１０７．６３ＥＩＤ５０／０．１ｍＬおよび１０８．１７ＥＩＤ５０／０．１ｍＬウィルス懸濁液に調製する。
ｂ．被験薬物母液調節
上記テクトリゲニン誘導体を滅菌済生理食塩水を用いて、殺傷試験のあいだの原料として必要な濃度に希釈する。
ｃ．Ｋｌｅｉｎ−Ｄｏｆｏｒｓ懸濁殺傷試験
１０７．６３ＥＩＤ５０トリインフルエンザサブタイプＨ５ウィルス懸濁液および１０８．１７ＥＩＤ５０Ｈ９サブタイプウィルス懸濁液を、１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，３．０ｍｇ，１．８７５ｍｇ，１．５ｍｇ，０．７５ｍｇおよび０．３７５ｍｇの原料薬物濃度のテクトリゲニン誘導体と、それぞれ１：９の比率で混合し、２０±１℃で５分間反応させた後、滅菌済生理食塩水を用いて１０倍ずつ順に希釈する。滅菌済ウィルス懸濁液の代わりに滅菌済生理食塩水を用いた対照群に対しても同様の処理を行い、希釈した溶液を１０日齢のニワトリ胚に接種し、各濃度の溶液を５つのニワトリ胚（０．１ｍＬ／胚）に接種する。接種後のニワトリ胚を３７℃の培養用インキュベータ中に維持し、ニワトリ胚の死を記録する。２４時間以内に死んだニワトリ胚は廃棄し、２４時間後に死んだニワトリ胚を取り出し、すべてのニワトリ胚を９６時間以内に取り出し、それらの尿膜腔液をＨＡ試験のために１つずつサンプリングし、ＨＡ試験によって陽性であると判明したニワトリ胚を感染したものと判断する。
試料中のニワトリ胚の感染陽性率、ＥＩＤ５０量および、試験および対照群における殺傷率は、ニワトリ胚感染結果および下記の等式にしたがって算出する。
陽性率＝ＨＡ試験で陽性が判明したニワトリ胚の量／接種したニワトリ胚の量
試料中のＥＩＤ５０量の対数＝Ｌ−ｄ（Ｓ−０．５）
（Ｌは最小希釈倍率の対数であり、ｄは希釈の差の対数であり、Ｓは各希釈列における陽性率の和である）
ウィルス殺傷率＝（対照試料におけるＥＩＤ５０量−試験試料におけるＥＩＤ５０量／対照試料におけるＥＩＤ５０×１００％）
【０１５０】
（５．２）試験結果
1)被験薬物のニワトリ胚に対する最大非毒性容量
滅菌済生理食塩水で希釈し、１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，１．８７５ｍｇ，０．９３７５ｍｇ，０．４６８７５ｍｇ，０．２３４３７５ｍｇおよび０．１１７１８７５ｍｇの原料薬物を含有するテクトリゲニン誘導体を、ニワトリ胚に注射する。試験結果は、様々な濃度の薬物によって注射後のニワトリ胚の死が引き起こされることはなく、このことから、被験薬物の原溶液および様々な濃度の薬物が、ニワトリ胚に対して視認できる毒性効果を一切有しないことが示される。結果を表９に示す。
【０１５１】
【表９】
【０１５２】
注：分子は死んだ胚の量であり、分母は接種した胚の量である。
【０１５３】
2)トリインフルエンザウィルスに対する被験薬物の殺傷効果
滅菌済生理食塩水で希釈し、１ｍＬあたりに３０ｍｇ，１５ｍｇ，７．５ｍｇ，３．７５ｍｇ，３．０ｍｇ，１．８７５ｍｇ，１．５ｍｇ，０．７５ｍｇおよび０．３７５ｍｇを含有するテクトリゲニン誘導体を、１０７．６３ＥＩＤ５０トリインフルエンザＨ５サブタイプウィルス溶液と５分間反応させ、そのウィルス殺傷率をそれぞれ測定し、様々な希釈濃度のテクトリゲニン誘導体を１０８．１７ＥＩＤ５０トリインフルエンザウィルスＨ９型と５分間反応させ、そのウィルス殺傷率をそれぞれ測定する。結果を表１０に示す。
【０１５４】
【表１０】
【０１５５】
上記試験結果は、（様々な濃度の）テクトリゲニン誘導体を、トリインフルエンザウィルスＨ５Ｎ１およびＨ５Ｎ２（９：１）とそれぞれ５分間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで直接接触させる、Ｋｌｅｉｎ−Ｄｅｆｏｒｓ懸濁殺傷および感染試験法によって、被験薬物のトリインフルエンザウィルス殺傷効果を調べることを示している。上記の結果は、１ｍＬあたりに３．０ｍｇの原料薬物を含有するテクトリゲニン誘導体が、トリウィルスと５分間反応した場合に、一定のウィルス殺傷効果を有すること、１ｍＬあたりに３．７５〜３０ｍｇの原料薬物を含有するテクトリゲニン誘導体が、優れたウィルス殺傷効果を有すること、およびそのウィルス殺傷率は、トリインフルエンザウィルスと５分間反応させた場合には９５％を超えることを実証するものである。
【０１５６】
その安全性試験からは、一連の母液希釈液をニワトリ胚に接種しても、ニワトリ胚の死を引き起こさないことがわかり、このことは、被験薬物母液を様々に希釈した薬物および原液がいかなる目に見える毒性効果も有しないことを示している。
【産業上の利用可能性】
【０１５７】
式（ＩＩ）に示される本発明における化学的修飾によって達成されるテクトリゲニン化合物誘導体は、その前駆物質、すなわち最初に抽出されたテクトリゲニン化合物と同等の抗ウィルスおよび抗炎症効果を維持しつつも、その水溶性と化学的安定性を大きく向上させることができる。また、調製が容易であり、コストが低く、安全かつ信頼性があり、専用の設備を必要とせず、「３大廃棄物」（すなわち、廃棄ガス、排水、および産業廃棄物）による汚染が全くない。漢方薬の成分は複雑であり、その品質安定性を制御することは困難であるので、本発明によって提供されるテクトリゲニン化合物のイソフラボン誘導体は、重要な積極的な有意性を有し、その薬学的および臨床的応用範囲を広げること、特に、抗ウィルスおよび抗炎症注射製剤に関して、明るい開発の見通しを有している。
【０１５８】
上記本発明についての詳細な説明は、本発明において限定されず、当業者は本発明に基づく様々な修正および改変を行ってもよいが、それらすべては、本発明の精神から逸脱しない限り、本発明に添付の請求項に属するものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１】式（ＩＩＩ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウム化合物のＩＲスペクトルである。
【図２】式（ＩＩＩ）に示されるテクトリゲニンスルホン酸ナトリウム化合物の１ＨＮＭＲスペクトルである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
５，７，４’−トリヒドロキシ−６−メトキシイソフラボンの化学名をもつ下記式（ＩＩ）で表されるテクトリゲニン誘導体。
【化１】
（式中、Ｒ1はＨ，ＮＨ2またはＳＯ3Ｍであり
Ｒ2はＯＲ’であり、
Ｒ3はＨまたは−ＣＨ2ＮＲ’’であり、
Ｒ’はＨ，−ＣＨ2ＣＯＯＮａまたは−ＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、
ＮＲ’’はピペリジノ基または−ＮＭｅ2であり、
ＭはＨ，Ｎａ，ＫまたはＮ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である）。
【請求項２】
Ｒ1がＳＯ3Ｍ’’（式中、Ｍ’’はＨ，Ｎａ，Ｋまたは−Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である）であり、その構造が式（ＩＩＩ）に示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化２】
【請求項３】
前記式（ＩＩＩ）に示されるＭ’’がＮａであり、その構造が下記式（ＩＶ）で示されることを特徴とする請求項２に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化３】
【請求項４】
前記式（ＩＩＩ）に示されるＲ1が−ＳＯ3-Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3であり、その構造が下記の式（Ｖ）によって示されることを特徴とする、請求項２に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化４】
【請求項５】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＮＨ2であり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3がＨであり、その構造が下記の式（ＶＩ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化５】
【請求項６】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＨであり、Ｒ2が−ＯＣＨ2ＣＯＯＮａであり、Ｒ3がＨであり、その構造が下記の式（ＶＩＩ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化６】
【請求項７】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1およびＲ3がＨであり、Ｒ2がＯＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が下記の式（ＶＩＩＩ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化７】
【請求項８】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＲ’’（式中、ＮＲ’’は、ピペリジノ基である）であり、その構造が式（ＩＸ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化８】
【請求項９】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が下記の式（Ｘ）に示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化９】
【請求項１０】
前記化合物は、その薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項５，７，８または９に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【請求項１１】
前記塩化合物は塩酸塩であることを特徴とする請求項１０に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【請求項１２】
Ｒ1がスルホン酸またはスルホン酸塩である式（ＩＩＩ）のテクトリゲニン化合物誘導体の調製方法であって、
式（Ｉ）に示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として、硫酸とのスルホン化反応によって、Ｍ’’がＨである式（ＩＩＩ）に示されるスルホン酸誘導体生成物を得、ＮａＣｌまたはＫＣｌ飽和塩溶液によって処理することにより、上記式（ＶＩ）に示される対応するスルホン化ナトリウムまたはスルホン化カリウム化合物をさらに得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１０】
【請求項１３】
式（Ｖ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料に用い、濃硫酸と混合し、４０〜９０℃で加熱攪拌し、冷却後、飽和塩化ナトリウム、他のアルカリ金属塩酸、臭化水素酸塩、または硝酸塩溶液中に注ぐと、３’−ナトリウムスルホネート中間生成物が得られ、これをエタノール溶液中に溶解し、強酸カチオン樹脂を加え、完全に溶解するまで室温で攪拌し、トリエタノールアミンを加えて、溶媒を減圧下で蒸発させると、式（Ｖ）で示される化合物が得られ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１１】
【請求項１４】
式（ＶＩ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として、これを氷浴中で冷却しながら硝酸および濃硫酸と混合したエタノール溶液を滴下することにより、３’−ニトロ中間化合物が得られ、これをメタノールに溶解し、大気圧下での水素触媒還元により３’−アミノ置換化合物（ＶＩ）を得、さらに式（ＶＩ）で示す対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１２】
【請求項１５】
式（ＶＩＩ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料とし、ブタノンとＤＭＦの混合溶媒中にクロロ酢酸エチルとともに溶解し、これに無水Ｋ2ＣＯ3および触媒量のＮａＩを加え、混合物を攪拌し、再循環させた後、室温まで冷却し、その不溶物質を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、残渣を適当量の水中に溶解し、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、乾燥したのち溶媒を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムで分離すると、４’−エステル−エーテル中間生成物が得られ、これをメタノールに溶解し、攪拌しながらＮａＯＨの水溶液を滴下して、常温にて完全に加水分解した後、ｐＨ値を酸によってｐＨ３〜４に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させた後、凝縮沈殿を得、これを酢酸エチルに溶解し、凝縮沈殿を水洗、乾燥、濃縮後、ＮａＨＣＯ3と反応させることにより化合物（ＶＩＩ）のナトリウム塩が得られ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１３】
【請求項１６】
式（ＶＩＩＩ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
β−ジメチルアミノエタノールをまず最初に０℃のジクロロスルホキシド中に滴下し、激しく攪拌し、３５〜５０℃で攪拌しながら反応させて、中間生成物β−ジメチルアミノクロライドハイドロクロライドＡを得、無水エタノールによって再結晶させ、式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として、ブタノン、アセトン、ＤＭＦ、ＴＨＦまたはジオキサンに溶解し、これに、無水Ｋ2ＣＯ3またはＮａ2ＣＯ3、ならびにＤＭＦおよび触媒量のＮａＩを加え、再循環されるまで混合物を加熱し、上記中間生成物Ａを分けて加え、約８０℃で再循環させ、冷却後ろ過し、濾液を濃縮して粘着物を得、該粘着物を適当量の水で希釈した後、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗して溶媒を除去してから乾燥させ、化合物（ＶＩＩＩ）を得、薬学的に許容される酸との反応によって、対応する塩化合物をさらに得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１４】
【請求項１７】
式（ＩＸ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として用いて、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ピペリジン、ならびにジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールのうちの１つと混合し、反応物を再循環させた後に冷却しろ過することにより、化合物（ＩＸ）を得、さらに、式（ＩＩＩ）に示すような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１５】
【請求項１８】
式（Ｘ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）に示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として使用し、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ジメチルアミノハイドロクロライド、ならびにジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールのうちの１つと混合し、再循環後に冷却し、ろ過して残渣を回収することにより、化合物（Ｘ）を得、さらに、式（ＩＩＩ）に示されるような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができ、合成ラインが以下に示される方法。
【化１６】
【請求項１９】
有効薬学的成分としての、有効用量の式（ＩＩ）のテクトリゲニン化合物誘導体と、薬学的に許容されるさらなる追加成分と、からなる抗ウィルス薬剤。
【請求項２０】
前記薬剤は、注射型調製物であることを特徴とする請求項１９に記載の抗ウィルス薬剤。
【請求項２１】
式（ＩＩ）のテクトリゲニン化合物誘導体が有効薬学的成分である注射薬剤の調製方法であって、
５〜８０（重量）部のテクトリゲニン誘導体（ＩＩ）と、２０〜１５０（重量）部の注射用グルコースとを、７００〜８００（重量）部の注射用水に溶解し、完全溶解後に注射用水を加えて、全体積を１０００（重量）部とし、Ｇ４焼結ガラス漏斗によってろ過し、従来の包装および滅菌を行い、２〜１５％グルコースと、５〜８０ｍｇ／ｍＬの有効な薬学的成分とを含む淡黄色透明液体注射剤が得られる方法。
【請求項１】
５，７，４’−トリヒドロキシ−６−メトキシイソフラボンの化学名をもつ下記式（ＩＩ）で表されるテクトリゲニン誘導体。
【化１】
（式中、Ｒ1はＨ，ＮＨ2またはＳＯ3Ｍであり
Ｒ2はＯＲ’であり、
Ｒ3はＨまたは−ＣＨ2ＮＲ’’であり、
Ｒ’はＨ，−ＣＨ2ＣＯＯＮａまたは−ＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、
ＮＲ’’はピペリジノ基または−ＮＭｅ2であり、
ＭはＨ，Ｎａ，ＫまたはＮ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である）。
【請求項２】
Ｒ1がＳＯ3Ｍ’’（式中、Ｍ’’はＨ，Ｎａ，Ｋまたは−Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3である）であり、その構造が式（ＩＩＩ）に示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化２】
【請求項３】
前記式（ＩＩＩ）に示されるＭ’’がＮａであり、その構造が下記式（ＩＶ）で示されることを特徴とする請求項２に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化３】
【請求項４】
前記式（ＩＩＩ）に示されるＲ1が−ＳＯ3-Ｎ+Ｈ（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）3であり、その構造が下記の式（Ｖ）によって示されることを特徴とする、請求項２に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化４】
【請求項５】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＮＨ2であり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3がＨであり、その構造が下記の式（ＶＩ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化５】
【請求項６】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＨであり、Ｒ2が−ＯＣＨ2ＣＯＯＮａであり、Ｒ3がＨであり、その構造が下記の式（ＶＩＩ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化６】
【請求項７】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1およびＲ3がＨであり、Ｒ2がＯＣＨ2ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が下記の式（ＶＩＩＩ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化７】
【請求項８】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＲ’’（式中、ＮＲ’’は、ピペリジノ基である）であり、その構造が式（ＩＸ）で示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化８】
【請求項９】
前記式（ＩＩ）に示されるＲ1がＨであり、Ｒ2がＯＨであり、Ｒ3が−ＣＨ2ＮＭｅ2であり、その構造が下記の式（Ｘ）に示されることを特徴とする、請求項１に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【化９】
【請求項１０】
前記化合物は、その薬学的に許容される塩であることを特徴とする請求項５，７，８または９に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【請求項１１】
前記塩化合物は塩酸塩であることを特徴とする請求項１０に記載のテクトリゲニン化合物誘導体。
【請求項１２】
Ｒ1がスルホン酸またはスルホン酸塩である式（ＩＩＩ）のテクトリゲニン化合物誘導体の調製方法であって、
式（Ｉ）に示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として、硫酸とのスルホン化反応によって、Ｍ’’がＨである式（ＩＩＩ）に示されるスルホン酸誘導体生成物を得、ＮａＣｌまたはＫＣｌ飽和塩溶液によって処理することにより、上記式（ＶＩ）に示される対応するスルホン化ナトリウムまたはスルホン化カリウム化合物をさらに得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１０】
【請求項１３】
式（Ｖ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料に用い、濃硫酸と混合し、４０〜９０℃で加熱攪拌し、冷却後、飽和塩化ナトリウム、他のアルカリ金属塩酸、臭化水素酸塩、または硝酸塩溶液中に注ぐと、３’−ナトリウムスルホネート中間生成物が得られ、これをエタノール溶液中に溶解し、強酸カチオン樹脂を加え、完全に溶解するまで室温で攪拌し、トリエタノールアミンを加えて、溶媒を減圧下で蒸発させると、式（Ｖ）で示される化合物が得られ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１１】
【請求項１４】
式（ＶＩ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として、これを氷浴中で冷却しながら硝酸および濃硫酸と混合したエタノール溶液を滴下することにより、３’−ニトロ中間化合物が得られ、これをメタノールに溶解し、大気圧下での水素触媒還元により３’−アミノ置換化合物（ＶＩ）を得、さらに式（ＶＩ）で示す対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１２】
【請求項１５】
式（ＶＩＩ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料とし、ブタノンとＤＭＦの混合溶媒中にクロロ酢酸エチルとともに溶解し、これに無水Ｋ2ＣＯ3および触媒量のＮａＩを加え、混合物を攪拌し、再循環させた後、室温まで冷却し、その不溶物質を濾去し、濾液を減圧下で濃縮し、残渣を適当量の水中に溶解し、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄し、乾燥したのち溶媒を減圧下で濃縮し、フラッシュカラムで分離すると、４’−エステル−エーテル中間生成物が得られ、これをメタノールに溶解し、攪拌しながらＮａＯＨの水溶液を滴下して、常温にて完全に加水分解した後、ｐＨ値を酸によってｐＨ３〜４に調整し、減圧下でメタノールを蒸発させた後、凝縮沈殿を得、これを酢酸エチルに溶解し、凝縮沈殿を水洗、乾燥、濃縮後、ＮａＨＣＯ3と反応させることにより化合物（ＶＩＩ）のナトリウム塩が得られ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１３】
【請求項１６】
式（ＶＩＩＩ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
β−ジメチルアミノエタノールをまず最初に０℃のジクロロスルホキシド中に滴下し、激しく攪拌し、３５〜５０℃で攪拌しながら反応させて、中間生成物β−ジメチルアミノクロライドハイドロクロライドＡを得、無水エタノールによって再結晶させ、式（Ｉ）に示すテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として、ブタノン、アセトン、ＤＭＦ、ＴＨＦまたはジオキサンに溶解し、これに、無水Ｋ2ＣＯ3またはＮａ2ＣＯ3、ならびにＤＭＦおよび触媒量のＮａＩを加え、再循環されるまで混合物を加熱し、上記中間生成物Ａを分けて加え、約８０℃で再循環させ、冷却後ろ過し、濾液を濃縮して粘着物を得、該粘着物を適当量の水で希釈した後、酢酸エチルで抽出し、抽出物を水洗して溶媒を除去してから乾燥させ、化合物（ＶＩＩＩ）を得、薬学的に許容される酸との反応によって、対応する塩化合物をさらに得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１４】
【請求項１７】
式（ＩＸ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）で示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原材料として用いて、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ピペリジン、ならびにジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールのうちの１つと混合し、反応物を再循環させた後に冷却しろ過することにより、化合物（ＩＸ）を得、さらに、式（ＩＩＩ）に示すような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができ、その合成ラインが以下に示される方法。
【化１５】
【請求項１８】
式（Ｘ）のテクトリゲニン化合物の調製方法であって、
式（Ｉ）に示されるテクトリゲニンのイソフラボン化合物を原料として使用し、３７（重量）％のホルムアルデヒド溶液、ジメチルアミノハイドロクロライド、ならびにジオキサン、ＴＨＦ、メタノールまたはエタノールのうちの１つと混合し、再循環後に冷却し、ろ過して残渣を回収することにより、化合物（Ｘ）を得、さらに、式（ＩＩＩ）に示されるような対応する塩化合物を、薬学的に許容される酸との反応によって得ることができ、合成ラインが以下に示される方法。
【化１６】
【請求項１９】
有効薬学的成分としての、有効用量の式（ＩＩ）のテクトリゲニン化合物誘導体と、薬学的に許容されるさらなる追加成分と、からなる抗ウィルス薬剤。
【請求項２０】
前記薬剤は、注射型調製物であることを特徴とする請求項１９に記載の抗ウィルス薬剤。
【請求項２１】
式（ＩＩ）のテクトリゲニン化合物誘導体が有効薬学的成分である注射薬剤の調製方法であって、
５〜８０（重量）部のテクトリゲニン誘導体（ＩＩ）と、２０〜１５０（重量）部の注射用グルコースとを、７００〜８００（重量）部の注射用水に溶解し、完全溶解後に注射用水を加えて、全体積を１０００（重量）部とし、Ｇ４焼結ガラス漏斗によってろ過し、従来の包装および滅菌を行い、２〜１５％グルコースと、５〜８０ｍｇ／ｍＬの有効な薬学的成分とを含む淡黄色透明液体注射剤が得られる方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００７−５１５３８９（Ｐ２００７−５１５３８９Ａ）
【公表日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２９５５５（Ｐ２００６−５２９５５５）
【出願日】平成１６年５月１４日（２００４．５．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００４／０００４８１
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１１１０２７
【国際公開日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【出願人】（３０６０４１８６８）成都迪康▲ヤオ▼物研究所 (1)
【出願人】（３０６０４１８７９）四川迪康科技▲ヤオ▼▲イエ▼股▲フン▼有限公司 (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年５月１４日（２００４．５．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＮ２００４／０００４８１
【国際公開番号】ＷＯ２００４／１１１０２７
【国際公開日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【出願人】（３０６０４１８６８）成都迪康▲ヤオ▼物研究所 (1)
【出願人】（３０６０４１８７９）四川迪康科技▲ヤオ▼▲イエ▼股▲フン▼有限公司 (1)
【Ｆターム（参考）】
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