トリプチセン類化合物の製造方法
【課題】
機能性材料や医薬品等の原料として広い分野で有効に利用されるトリプチセン誘導体の光学活性体を、より安価で、操作が煩雑でなく、かつ安全性にも優れた生化学的手法による方法で製造する方法を提供すること。
【解決手段】
エステル基などの加水分解され得る官能基を有するトリプチセン誘導体の光学異性体混合物に、コレステロールエステラーゼなどの不斉加水分解する能力を有する加水分解酵素を作用させ、光学活性なトリプチセン誘導体を得る。
機能性材料や医薬品等の原料として広い分野で有効に利用されるトリプチセン誘導体の光学活性体を、より安価で、操作が煩雑でなく、かつ安全性にも優れた生化学的手法による方法で製造する方法を提供すること。
【解決手段】
エステル基などの加水分解され得る官能基を有するトリプチセン誘導体の光学異性体混合物に、コレステロールエステラーゼなどの不斉加水分解する能力を有する加水分解酵素を作用させ、光学活性なトリプチセン誘導体を得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、機能性材料として有用な光学活性トリプチセン誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学式１で示されるトリプチセン誘導体は機能性材料として有用である。例えばトリプチセン誘導体を含むポリマーは、照明及びディスプレイデバイスに用いられるエレクトロルミネッセント材料への応用が検討されている（例えば、特許文献１、２参照。）。またトリプチセン誘導体を含むポリマーは、耐熱性、透明性、低屈折率性に加えて、低複屈折性を併せ持つことが報告されており、光導波路、光フィルタ、レンズ等の光部品に応用可能であることが示唆されている（例えば、特許文献３参照。）。トリプチセン誘導体そのものも電気エネルギーを光に変換する発光素子として利用可能である（例えば、特許文献４参照。）。またトリプチセンは、三個のベンゼン環が三枚羽根の歯車のように配置した構造をとり、π電子を有することから、有機化学的にも非常にユニークな化合物である。近年、光学活性体（キラル化合物）は医薬品を中心にその重要性を増しているため、トリプチセン誘導体についても光学活性体が容易に入手可能となれば、医薬品や化粧品の合成に用いられる不斉触媒の原料や医薬品、化粧品の原料等、有機合成の分野においての応用も期待できる。
【０００３】
トリプチセン誘導体の合成法としては、アントラセンとキノンの付加物から誘導する方法（例えば、非特許文献１参照。）、アントラニル酸誘導体のジアゾ化物からベンザインを生成させ、アントラセン誘導体と反応させる方法（例えば、非特許文献２〜５、特許文献５参照。）等が知られている。
【０００４】
また光学活性なトリプチセン誘導体の合成法としては、上記方法にて得られたラセミ体化合物をジアステレオマー塩の分別再結晶を利用して光学分割する方法（例えば、非特許文献６〜８参照。）が知られている。しかし本方法においては、用いられる光学活性体が非常に高価であることや、再結晶等の精製工程が煩雑であること等が問題となっていた。そこで、光学活性なトリプチセン誘導体を簡便かつ安価に製造する方法の開発が強く求められていた。
【０００５】
【特許文献１】特表２００２−５３２８４６号公報
【特許文献２】特表２００２−５３９２８６号公報
【特許文献３】特開２００４−１８２９６２号公報
【特許文献４】特開２００２−１５８７１号公報
【特許文献５】特開２００４−２１７５３６号公報
【非特許文献１】「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」，（米国），１９４２年，６４巻，ｐ．２６４９−２６５３
【非特許文献２】「Ａｎｇｅｗａｎｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ」，（ドイツ），１９５６年，６８巻，ｐ．４０
【非特許文献３】「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」，（米国），１９６３年，８５巻，ｐ．１５４９
【非特許文献４】「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」，（米国），１９６５年，８７巻，ｐ．４６４９−４６５１
【非特許文献５】「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，（米国），１９６９年，３４巻，ｐ．３４２６−３４３０
【非特許文献６】「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ」，１９６２年，３５巻，ｐ．８５３−８５７
【非特許文献７】「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ」，１９７３年，４６巻，ｐ．６０５−６１０
【非特許文献８】「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ」，１９７３年，４６巻，ｐ．６１１−６１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、化学式１で示されるトリプチセン誘導体の光学活性体を、より安価、簡便で、かつ安全性が高い方法で製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者らは鋭意検討した結果、特定の能力を有する加水分解酵素を用いる生化学的手法が、上記課題を解決し得ることを見出し、これらの知見に基づき本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、
１）トリプチセン誘導体の光学異性体混合物に酵素を作用させ、光学活性なトリプチセン誘導体を得ることを特徴とする、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
２）トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、化学式１で示され、式中、Ｒ１〜Ｒ８のいずれか少なくとも一つは加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、上記１）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
３）トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、化学式１の式中、Ｒ２とＲ６の両方もしくはいずれか一つが加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、上記２）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
４）加水分解され得る官能基がエステル基であることを特徴とする、上記２）又は３）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
５）酵素が、不斉加水分解する能力を有する加水分解酵素であることを特徴とする、上記１）乃至４）のいずれかに記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
６）加水分解酵素が、エステル加水分解酵素であることを特徴とする、上記５）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
７）エステル加水分解酵素が、コレステロールエステラーゼであることを特徴とする、上記６）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、操作が煩雑でなく、安価で、安全性にも優れた生化学的手法による、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法が提供された。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に使用しうる化学式１で示されるトリプチセン誘導体においては、Ｒ１〜Ｒ８のいずれか少なくとも一つは加水分解され得る官能基である。ここで述べる加水分解とは、結合切断の一形式であり、形の上からは一つの結合が切断するときにその結合がイオン的に開裂し、Ｈ２Ｏ１分子がＨ＋，ＯＨ−に分かれて付加する反応を言う。加水分解により切断される結合として、エステル結合、アミド結合、ペプチド結合、エーテル結合、グリコシド結合、チオエーテル結合、ニトリル等が挙げられる。よって、本発明で述べる「加水分解され得る官能基」とはエステル基、アミド基、エーテル基、チオエーテル基、ニトリル基等を指し、特にエステル基は本発明の酵素加水分解反応に好適である。エステル基を有するトリプチセン誘導体には、トリプチセン側の水酸基にカルボン酸が縮合した化学式２で示される化合物、もしくはトリプチセン側のカルボン酸にアルコールが縮合した化学式３で示される化合物が存在するが、特に化学式２で示される、トリプチセン側の水酸基にカルボン酸が縮合したエステル化合物が好ましく用いられる。
【００１１】
【化１】
【００１２】
【化２】
（式中Ｒａは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示すが、特に存在してもしなくてもよい。またＲｂは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００１３】
【化３】
（式中Ｒａは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示すが、特に存在してもしなくてもよい。またＲｂは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００１４】
化学式２で示されるＯ−アシル基として、より具体的には、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル基、ウンデカニル基、ドデカニル基、トリデカニル基、ピバロイル基、ベンゾイル基等が用いられるが、ペンタノイル基が特に好ましく用いられる。
【００１５】
さらに化学式１で示されるトリプチセン誘導体は、光学異性体が存在しうる形で置換基Ｒ１〜Ｒ８のいずれかを有していなければならない。ここで述べる光学異性体とは鏡像関係にある２種類の異なる分子を言い、例えば化学式４〜７で示される化合物の組み合わせ等が挙げられる。
【００１６】
【化４】
【００１７】
【化５】
【００１８】
【化６】
【００１９】
【化７】
【００２０】
化学式４〜７の式中について、説明の便宜上、置換基は２つずつのみ記載し、その他の置換基は省略した。式中のＸ，Ｙ，Ｚの少なくとも一つは加水分解され得る官能基である。ＸとＹは同じであってもよいが、ＸとＺは異なる置換基でなければならない。置換基の種類は特に限定されないが、例えば水酸基、エステル基、アミノ基、アミド基、エーテル基、チオエーテル基、ニトリル基、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールエーテル基、アリールチオエーテル基、アリール基、複素環基、ハロゲン、ハロアルカン、ハロアルケン、ハロアルキン、シアノ基、アルデヒド基、カルボニル基、カルボキシル基、カルバモイル基、ニトロ基、シリル基、水素等が挙げられる。
【００２１】
また、化学式１で示されるトリプチセン誘導体のＲ１〜Ｒ１４の残りの置換基については特に制限されないが、例えば上述した置換基の中から選ぶことができる。中でも化学式１で示されるトリプチセン誘導体のＲ２とＲ６の両方もしくはいずれか一方が加水分解され得る官能基である化合物とその光学異性体の混合物（化学式４）が酵素反応の基質として好ましく用いられる。さらに具体的には、化学式１で示されるトリプチセン誘導体のＲ２とＲ６の両方もしくはいずれか一方が−Ｏ−Ａｃｙｌである（±）−２，６−ジアシルオキシトリプチセン（化学式８）、もしくは（±）−２−ヒドロキシ−６−アシルオキシトリプチセン（化学式９）が用いられる。
【００２２】
【化８】
（Ｒはアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００２３】
【化９】
（Ｒはアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００２４】
本発明において使用しうる化学式１で示されるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物の混合比は任意であり、１：１のラセミ体でもよく、一方の比率を高めたものを用いてもよい。
【００２５】
本発明において使用しうる化学式１で示されるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物は、例えば置換アントラセンとベンザインを反応させる方法に準じて合成し、これをエステル、アミド、エーテル等に誘導することにより製造することができる。
【００２６】
このようなトリプチセン誘導体の具体的な例としては、例えば、（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１，５−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１−ヒドロキシ−５−ペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１，３−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１−ヒドロキシ−３−ペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１，２−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１−ヒドロキシ−２−ペンタノイルオキシトリプチセン等が挙げられるが、これらに限られるものではない。
【００２７】
本発明に使用しうる酵素は、化学式１で示されるトリプチセン誘導体の加水分解され得る官能基を認識し、鏡像体の一方を優先的に加水分解する能力を有する酵素であればよい。このような能力を有する加水分解酵素は、狭義のリパーゼを含むエステラーゼや狭義のアシラーゼ、アシルアミダーゼを含むアミダーゼ、さらにプロテアーゼ、エーテルヒドロラーゼ、グリコシダーゼ、チオエーテルヒドロラーゼ、ニトリルヒドロラーゼ等であり、ウシ、ブタ、ヒト等の動物由来でも、ヒマ等の植物由来でも、キサントモナス属、シュードモナス属、アスペルギルス属、キャンディダ属、フザリウム属、ジオトリカム属、ムコール属、ノカルディア属、ペニシリウム属、リゾプス属、サッカロマイセス属、アクロモバクター属、アシネトバクター属、アルカリジェネス属、クロモバクテリウム属、エシェリヒア属、スフィンゴモナス属、バチルス属、バークホルデリア属、モレキセラ属、ラクトバチルス属、スタフィロコッカス属、セラチア属、ヤロウイア属等に属する微生物由来でもかまわない。また、これらの加水分解酵素の遺伝子を組換えＤＮＡ技術により単離し、同じ属に属する宿主細胞又は異なる属に属する宿主細胞に導入することにより得られた形質転換体が産生する加水分解酵素でもよい。加水分解酵素の中でも、特にエステル加水分解酵素が好ましく用いられ、その一種であるコレステロールエステラーゼが好適である。
【００２８】
本発明に使用しうるコレステロールエステラーゼは特に限定されないが、キサントモナス、トリコデルマ、シュードモナス等の微生物由来の酵素や、ウシ、ブタ等の動物由来の酵素等を用いることができる。特に、特開２００１−１６１３７５号公報に記載されているキサントモナス由来のコレステロールエステラーゼが、優れた鏡像体選択性と反応性の点からより好適である。
【００２９】
本発明に使用しうる加水分解酵素は、それ自体を含有する微生物又は細胞の培養物の形で反応に利用しても良いが、該培養物または当該加水分解酵素を含有する組織から分離して粗酵素や精製酵素等の形で反応に利用しても良い。このような粗酵素や精製酵素等は、例えば、１）超音波処理、２）ガラスビーズ又はアルミナを用いる摩砕処理、３）フレンチプレス処理、４）リゾチーム等の酵素処理、５）ワーリングブレンダー処理等により菌体、細胞、または組織等を破砕し、得られた破砕物から６）硫安などを用いる塩析、７）有機溶媒、ポリエチレングリコール等の有機ポリマーによる沈澱、８）イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等の各種のクロマトグラフィー、９）電気泳動等の通常の方法により調製することができる。さらにまた、加水分解酵素を、共有結合、イオン結合、吸着などにより担体に結合させる担体結合法、高分子の網目構造の中に閉じ込める包括法等の固定化の方法によって不溶化し、反応液から容易に分離可能な状態に加工した固定物の形で利用することもできる。
【００３０】
本発明の反応温度は、１０〜７０℃が可能であるが、酵素の至適温度と安定性の点から、２５〜５０℃の範囲がより好ましい。
【００３１】
本発明の反応は緩衝液中で行うが、必要に応じ、トリプチセン誘導体を溶解するためにエタノール等の有機溶媒や界面活性剤、酵素の安定化剤を添加してもよい。緩衝液としては、ｐＨ５〜９の通常の緩衝液、例えばリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、各種グッドバッファー等を挙げることができる。酵素の至適ｐＨと安定性の点から、ｐＨ６〜８で反応を行うことがさらに好ましい。
【００３２】
本発明の反応時間は、１時間から１週間であるが、さらに具体的には６時間から３日間程度で反応を停止させるのが好ましい。
【００３３】
本発明の反応液からの反応生成物の回収は、例えば、ジエチルエーテルや酢酸エチル等の有機溶媒を用いる抽出、分別蒸留、シリカゲルやイオン交換樹脂等を用いるカラムクラマトグラフィーの方法を適宜用いることができる。特に、ジエチルエーテルを用いて抽出後、有機溶媒を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクラマトグラフィーで精製する方法が簡便な方法と言える。
【００３４】
このようにして回収した光学活性トリプチセン誘導体に化学的処理を施し、他の光学活性トリプチセン誘導体に変換することができる。化学的処理の方法については特に限定されないが、一例として、回収された加水分解され得る官能基を有するトリプチセン誘導体を通常のアルカリや酸等を用いて化学的に加水分解することが挙げられる。
【００３５】
以下、実施例を示し本発明を説明するが、本発明の技術的範囲はこれによって何ら限定されることはない。
【実施例１】
【００３６】
（±）−２，６−ジアシルオキシトリプチセン（化学式８）の合成
水酸化カリウム（１８．０ｇ）をエタノール（１Ｌ）に溶かし、２，６−ジヒドロキシアントラキノン（アルドリッチ社製、２０．０ｇ）と臭化ブチル（１５０ｍｌ）を加え、７日間加熱還流した。水（１Ｌ）を加えた後、塩酸でｐＨ７．０に調整し、生じた結晶をろ過、水洗し、２，６−ジブトキシアントラキノンを褐色結晶として２４．１ｇ（収率８２％）得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．００（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１．５３（４Ｈ，ｓｅｘ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．８３（４Ｈ，ｍ），４．１５（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ），７．２２（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．７Ｈｚ），７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），８．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）
【００３７】
上記にて得られた２，６−ジブトキシアントラキノン（６．０ｇ）をメタノール（５００ｍｌ）に溶解し、氷冷後、水素化ホウ素ナトリウム（４．４ｇ）を１時間かけて添加した。本反応液を０℃にて１時間撹拌後、水（４００ｍｌ）を添加して結晶を析出させた。ろ過して得た結晶に１０％塩酸（３００ｍｌ）を添加し、５時間還流した。冷却後、ろ過、水洗して得られた残渣を２−プロパノール（３００ｍｌ）に溶解し、還流した。これに水素化ホウ素ナトリウム（４．０ｇ）を１時間かけて添加し、３６時間還流した。２０％塩酸（７００ｍｌ）を添加して生じた暗褐色の物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、２，６−ジブトキシアントラセンの黄色結晶を２．１ｇ（収率３６％）得た。融点１９８．５−２０２．４℃、１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．０１８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１．５６（４Ｈ，ｍ），１．８６（４Ｈ，ｍ），４．１１（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），７．１１−７．２６（４Ｈ，ｍ），７．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ） ，８．１７（２Ｈ，ｓ）
【００３８】
上記にて得られた２，６−ジブトキシアントラセン（１．０ｇ）の１，２−ジクロロエタン溶液（９０ｍｌ）を加熱沸騰させ、これに２．１３ｇのアントラニル酸から予め調製されたＢｅｎｚｅｎｅｄｉａｚｏｎｉｕｍ−２−Ｃａｒｏｘｙｌａｔｅの１，２−ジクロロエタン溶液（４０ｍＬ）を２時間かけて滴下し、さらに２時間加熱還流した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝１：１）で精製し、（±）−２，６−ジブトキシトリプチセンを黄色油状物質として０．９ｇ（収率７３％）得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９２（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．４１（４Ｈ，ｍ），１．６８（４Ｈ，ｍ）, ３．８６（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），５．２６（２Ｈ，ｓ），６．４５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．４Ｈｚ），６．９５（２Ｈ，ｍ），６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．4 Ｈｚ），７．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３２（２Ｈ，ｍ）
【００３９】
上記にて得られた（±）−２，６−ジブトキシトリプチセン（４００ｍｇ）の１，２−ジクロロメタン溶液（５０ｍｌ）を−８０℃に冷却し、１Ｍの三臭化ホウ素 ジクロロメタン溶液（１．６ｍｌ）を滴下した。これを−８０℃にて５時間、さらに室温で８時間反応させた。反応液を水で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、（±）−２，６−ジヒドロキシトリプチセンを白色結晶として１８０ｍｇ（収率６３％）得た。融点 １９９．０−２００．９℃、１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）： ５．３１（２Ｈ，ｓ），６．２９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，２．４Ｈｚ），６．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），６．９４ （２Ｈ，ｍ），７．１３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．３３（２Ｈ，ｍ），９．１６（２Ｈ，ｓ，ＯＨ）
【００４０】
上記にて得られた（±）−２，６−ジヒドロキシトリプチセン（２００ｍｇ）を無水ジエチルエーテル（１０ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（０．１９ｍｌ）と各種酸クロリドを入れ、窒素気流下で２時間反応させた。ジエチルエーテルにて抽出し、水にて洗浄後、有機層を硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濃縮した。これを減圧蒸留し（３．７〜２．３Ｔｏｒｒ，８７．０〜１３０．０℃）、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）にかけ、各種（±）−２，６−ジアシルオキシトリプチセンを収率７０−８０％で得た。
（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．８９（６Ｈ，ｔ），１．３４（４Ｈ，ｍ），１．５７（４Ｈ，ｍ），２．５２（４Ｈ，ｔ），５．６９（２Ｈ，ｓ），６．７３（２Ｈ，ｍ），７．０２（２Ｈ，ｍ），７．２３（２Ｈ，ｄ），７．４４（４Ｈ，ｍ）
【実施例２】
【００４１】
トリプチセン誘導体の不斉加水分解の最適基質と最適酵素の探索
０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌにキサントモナス由来コレステロールエステラーゼＣＨＥ−ＸＥ（キッコーマン社製）、ウシ膵臓由来コレステロールエステラーゼＣＨＥ−Ｂ（シグマ社製）、リパーゼＰＳ（アマノエンザイム社製）の各種加水分解酵素を２０ｍｇずつそれぞれ溶解させ、ここに化１２、１３に示される各種トリプチセン誘導体のラセミ体化合物２０ｍｇを１．５ｍｌのエタノールに溶解してそれぞれ加え、４０℃で反応を行った。２４時間反応後、反応液をジエチルエーテルで抽出した。回収した有機溶媒層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことにより反応生成物を得、反応の進行状況をジエステル体、モノエステル体、ジオール体の比をガスクロマトグラフィー［ＤＢ−１（Ｊ＆Ｗ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社），ヘリウム，２５０℃］で分析することにより確認した。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン：酢酸エチル（４：１）］により分離し、得られた各種生成物の光学純度をＨＰＬＣ［ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＡ（ダイセル社），ヘキサン：２−プロパノール＝７：１、流速 ０．５ｍｌ／ｍｉｎ］で分析した。
【００４２】
表１に示したとおり、基質として化学式８のＲ＝ブチル基である（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン、加水分解酵素としてＣＨＥ−ＸＥを用いたとき、最も光学純度が高いモノエステル体である（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンを得ることができた。
【００４３】
【表１】
【実施例３】
【００４４】
光学活性な（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンおよび（−）−２，６−ジヒドロキシトリプチセンの合成
０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）６０ｍｌにコレステロールエステラーゼＣＨＥ−ＸＥ（キッコーマン社製）１２０ｍｇを溶解させ、（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン１２０ｍｇを９．０ｍｌのエタノールに溶解して加え、４０℃で反応を行った。２４時間反応後、反応液をジエチルエーテルで抽出した。回収した有機溶媒層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことにより反応生成物を得た。これをガスクロマトグラフィーで分析したところ、原料であるジエステル体が３５％、加水分解産物であるモノエステル体、ジオール体がそれぞれ３２％、３３％ずつ含まれる混合物であることがわかった。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により分離し、モノエステル体である（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンを３７．７ｍｇ得た。これをＨＰＬＣで分析した結果、光学純度が６９％であることが分かった。旋光度［α］Ｄ＝−１５．５（ｃ＝０．５１，メタノール）
【００４５】
０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１９ｍｌにＣＨＥ−ＸＥ ３７．７ｍｇを溶解させ、先の酵素反応で得られた、６９％光学純度のモノエステル体（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセン ３７．７ｍｇを２ｍｌのエタノールに溶解して加え、４０℃で反応を行った。２４時間反応後、反応液をジエチルエーテルで抽出した。回収した有機溶媒層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことにより反応生成物を得た。これをガスクロマトグラフィーで分析したところ、原料であるモノエステル体が３０％、加水分解産物であるジオール体が７０％の混合物であることがわかった。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により分離し、モノエステル体である（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンを光学純度９９％で１３．５ｍｇ得た。
【００４６】
得られたモノエステル体を水酸化ナトリウムで処理し、光学純度が９９％のジオール体（−）−２，６−ジヒドロキシトリプチセンを９．５ｍｇ得た。旋光度［α］Ｄ＝−２１．９（ｃ＝０．５０，メタノール）
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明は、トリプチセン誘導体の光学活性体をより安価、簡便、かつ安全に提供し、機能性材料や医薬品等の原料として広い分野で有効に利用される。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、機能性材料として有用な光学活性トリプチセン誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化学式１で示されるトリプチセン誘導体は機能性材料として有用である。例えばトリプチセン誘導体を含むポリマーは、照明及びディスプレイデバイスに用いられるエレクトロルミネッセント材料への応用が検討されている（例えば、特許文献１、２参照。）。またトリプチセン誘導体を含むポリマーは、耐熱性、透明性、低屈折率性に加えて、低複屈折性を併せ持つことが報告されており、光導波路、光フィルタ、レンズ等の光部品に応用可能であることが示唆されている（例えば、特許文献３参照。）。トリプチセン誘導体そのものも電気エネルギーを光に変換する発光素子として利用可能である（例えば、特許文献４参照。）。またトリプチセンは、三個のベンゼン環が三枚羽根の歯車のように配置した構造をとり、π電子を有することから、有機化学的にも非常にユニークな化合物である。近年、光学活性体（キラル化合物）は医薬品を中心にその重要性を増しているため、トリプチセン誘導体についても光学活性体が容易に入手可能となれば、医薬品や化粧品の合成に用いられる不斉触媒の原料や医薬品、化粧品の原料等、有機合成の分野においての応用も期待できる。
【０００３】
トリプチセン誘導体の合成法としては、アントラセンとキノンの付加物から誘導する方法（例えば、非特許文献１参照。）、アントラニル酸誘導体のジアゾ化物からベンザインを生成させ、アントラセン誘導体と反応させる方法（例えば、非特許文献２〜５、特許文献５参照。）等が知られている。
【０００４】
また光学活性なトリプチセン誘導体の合成法としては、上記方法にて得られたラセミ体化合物をジアステレオマー塩の分別再結晶を利用して光学分割する方法（例えば、非特許文献６〜８参照。）が知られている。しかし本方法においては、用いられる光学活性体が非常に高価であることや、再結晶等の精製工程が煩雑であること等が問題となっていた。そこで、光学活性なトリプチセン誘導体を簡便かつ安価に製造する方法の開発が強く求められていた。
【０００５】
【特許文献１】特表２００２−５３２８４６号公報
【特許文献２】特表２００２−５３９２８６号公報
【特許文献３】特開２００４−１８２９６２号公報
【特許文献４】特開２００２−１５８７１号公報
【特許文献５】特開２００４−２１７５３６号公報
【非特許文献１】「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」，（米国），１９４２年，６４巻，ｐ．２６４９−２６５３
【非特許文献２】「Ａｎｇｅｗａｎｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ」，（ドイツ），１９５６年，６８巻，ｐ．４０
【非特許文献３】「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」，（米国），１９６３年，８５巻，ｐ．１５４９
【非特許文献４】「Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」，（米国），１９６５年，８７巻，ｐ．４６４９−４６５１
【非特許文献５】「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」，（米国），１９６９年，３４巻，ｐ．３４２６−３４３０
【非特許文献６】「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ」，１９６２年，３５巻，ｐ．８５３−８５７
【非特許文献７】「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ」，１９７３年，４６巻，ｐ．６０５−６１０
【非特許文献８】「Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｊａｐａｎ」，１９７３年，４６巻，ｐ．６１１−６１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明が解決しようとする課題は、化学式１で示されるトリプチセン誘導体の光学活性体を、より安価、簡便で、かつ安全性が高い方法で製造する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者らは鋭意検討した結果、特定の能力を有する加水分解酵素を用いる生化学的手法が、上記課題を解決し得ることを見出し、これらの知見に基づき本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、
１）トリプチセン誘導体の光学異性体混合物に酵素を作用させ、光学活性なトリプチセン誘導体を得ることを特徴とする、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
２）トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、化学式１で示され、式中、Ｒ１〜Ｒ８のいずれか少なくとも一つは加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、上記１）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
３）トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、化学式１の式中、Ｒ２とＲ６の両方もしくはいずれか一つが加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、上記２）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
４）加水分解され得る官能基がエステル基であることを特徴とする、上記２）又は３）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
５）酵素が、不斉加水分解する能力を有する加水分解酵素であることを特徴とする、上記１）乃至４）のいずれかに記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
６）加水分解酵素が、エステル加水分解酵素であることを特徴とする、上記５）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
７）エステル加水分解酵素が、コレステロールエステラーゼであることを特徴とする、上記６）記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、操作が煩雑でなく、安価で、安全性にも優れた生化学的手法による、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法が提供された。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に使用しうる化学式１で示されるトリプチセン誘導体においては、Ｒ１〜Ｒ８のいずれか少なくとも一つは加水分解され得る官能基である。ここで述べる加水分解とは、結合切断の一形式であり、形の上からは一つの結合が切断するときにその結合がイオン的に開裂し、Ｈ２Ｏ１分子がＨ＋，ＯＨ−に分かれて付加する反応を言う。加水分解により切断される結合として、エステル結合、アミド結合、ペプチド結合、エーテル結合、グリコシド結合、チオエーテル結合、ニトリル等が挙げられる。よって、本発明で述べる「加水分解され得る官能基」とはエステル基、アミド基、エーテル基、チオエーテル基、ニトリル基等を指し、特にエステル基は本発明の酵素加水分解反応に好適である。エステル基を有するトリプチセン誘導体には、トリプチセン側の水酸基にカルボン酸が縮合した化学式２で示される化合物、もしくはトリプチセン側のカルボン酸にアルコールが縮合した化学式３で示される化合物が存在するが、特に化学式２で示される、トリプチセン側の水酸基にカルボン酸が縮合したエステル化合物が好ましく用いられる。
【００１１】
【化１】
【００１２】
【化２】
（式中Ｒａは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示すが、特に存在してもしなくてもよい。またＲｂは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００１３】
【化３】
（式中Ｒａは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示すが、特に存在してもしなくてもよい。またＲｂは例えばアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００１４】
化学式２で示されるＯ−アシル基として、より具体的には、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基、ヘプタノイル基、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル基、ウンデカニル基、ドデカニル基、トリデカニル基、ピバロイル基、ベンゾイル基等が用いられるが、ペンタノイル基が特に好ましく用いられる。
【００１５】
さらに化学式１で示されるトリプチセン誘導体は、光学異性体が存在しうる形で置換基Ｒ１〜Ｒ８のいずれかを有していなければならない。ここで述べる光学異性体とは鏡像関係にある２種類の異なる分子を言い、例えば化学式４〜７で示される化合物の組み合わせ等が挙げられる。
【００１６】
【化４】
【００１７】
【化５】
【００１８】
【化６】
【００１９】
【化７】
【００２０】
化学式４〜７の式中について、説明の便宜上、置換基は２つずつのみ記載し、その他の置換基は省略した。式中のＸ，Ｙ，Ｚの少なくとも一つは加水分解され得る官能基である。ＸとＹは同じであってもよいが、ＸとＺは異なる置換基でなければならない。置換基の種類は特に限定されないが、例えば水酸基、エステル基、アミノ基、アミド基、エーテル基、チオエーテル基、ニトリル基、アルキル基、シクロアルキル基、アラルキル基、アルケニル基、シクロアルケニル基、アルキニル基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アリールエーテル基、アリールチオエーテル基、アリール基、複素環基、ハロゲン、ハロアルカン、ハロアルケン、ハロアルキン、シアノ基、アルデヒド基、カルボニル基、カルボキシル基、カルバモイル基、ニトロ基、シリル基、水素等が挙げられる。
【００２１】
また、化学式１で示されるトリプチセン誘導体のＲ１〜Ｒ１４の残りの置換基については特に制限されないが、例えば上述した置換基の中から選ぶことができる。中でも化学式１で示されるトリプチセン誘導体のＲ２とＲ６の両方もしくはいずれか一方が加水分解され得る官能基である化合物とその光学異性体の混合物（化学式４）が酵素反応の基質として好ましく用いられる。さらに具体的には、化学式１で示されるトリプチセン誘導体のＲ２とＲ６の両方もしくはいずれか一方が−Ｏ−Ａｃｙｌである（±）−２，６−ジアシルオキシトリプチセン（化学式８）、もしくは（±）−２−ヒドロキシ−６−アシルオキシトリプチセン（化学式９）が用いられる。
【００２２】
【化８】
（Ｒはアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００２３】
【化９】
（Ｒはアルキル基、ハロゲン化アルキル基等を示す。）
【００２４】
本発明において使用しうる化学式１で示されるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物の混合比は任意であり、１：１のラセミ体でもよく、一方の比率を高めたものを用いてもよい。
【００２５】
本発明において使用しうる化学式１で示されるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物は、例えば置換アントラセンとベンザインを反応させる方法に準じて合成し、これをエステル、アミド、エーテル等に誘導することにより製造することができる。
【００２６】
このようなトリプチセン誘導体の具体的な例としては、例えば、（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１，５−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１−ヒドロキシ−５−ペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１，３−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１−ヒドロキシ−３−ペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１，２−ジペンタノイルオキシトリプチセン、（±）−１−ヒドロキシ−２−ペンタノイルオキシトリプチセン等が挙げられるが、これらに限られるものではない。
【００２７】
本発明に使用しうる酵素は、化学式１で示されるトリプチセン誘導体の加水分解され得る官能基を認識し、鏡像体の一方を優先的に加水分解する能力を有する酵素であればよい。このような能力を有する加水分解酵素は、狭義のリパーゼを含むエステラーゼや狭義のアシラーゼ、アシルアミダーゼを含むアミダーゼ、さらにプロテアーゼ、エーテルヒドロラーゼ、グリコシダーゼ、チオエーテルヒドロラーゼ、ニトリルヒドロラーゼ等であり、ウシ、ブタ、ヒト等の動物由来でも、ヒマ等の植物由来でも、キサントモナス属、シュードモナス属、アスペルギルス属、キャンディダ属、フザリウム属、ジオトリカム属、ムコール属、ノカルディア属、ペニシリウム属、リゾプス属、サッカロマイセス属、アクロモバクター属、アシネトバクター属、アルカリジェネス属、クロモバクテリウム属、エシェリヒア属、スフィンゴモナス属、バチルス属、バークホルデリア属、モレキセラ属、ラクトバチルス属、スタフィロコッカス属、セラチア属、ヤロウイア属等に属する微生物由来でもかまわない。また、これらの加水分解酵素の遺伝子を組換えＤＮＡ技術により単離し、同じ属に属する宿主細胞又は異なる属に属する宿主細胞に導入することにより得られた形質転換体が産生する加水分解酵素でもよい。加水分解酵素の中でも、特にエステル加水分解酵素が好ましく用いられ、その一種であるコレステロールエステラーゼが好適である。
【００２８】
本発明に使用しうるコレステロールエステラーゼは特に限定されないが、キサントモナス、トリコデルマ、シュードモナス等の微生物由来の酵素や、ウシ、ブタ等の動物由来の酵素等を用いることができる。特に、特開２００１−１６１３７５号公報に記載されているキサントモナス由来のコレステロールエステラーゼが、優れた鏡像体選択性と反応性の点からより好適である。
【００２９】
本発明に使用しうる加水分解酵素は、それ自体を含有する微生物又は細胞の培養物の形で反応に利用しても良いが、該培養物または当該加水分解酵素を含有する組織から分離して粗酵素や精製酵素等の形で反応に利用しても良い。このような粗酵素や精製酵素等は、例えば、１）超音波処理、２）ガラスビーズ又はアルミナを用いる摩砕処理、３）フレンチプレス処理、４）リゾチーム等の酵素処理、５）ワーリングブレンダー処理等により菌体、細胞、または組織等を破砕し、得られた破砕物から６）硫安などを用いる塩析、７）有機溶媒、ポリエチレングリコール等の有機ポリマーによる沈澱、８）イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等の各種のクロマトグラフィー、９）電気泳動等の通常の方法により調製することができる。さらにまた、加水分解酵素を、共有結合、イオン結合、吸着などにより担体に結合させる担体結合法、高分子の網目構造の中に閉じ込める包括法等の固定化の方法によって不溶化し、反応液から容易に分離可能な状態に加工した固定物の形で利用することもできる。
【００３０】
本発明の反応温度は、１０〜７０℃が可能であるが、酵素の至適温度と安定性の点から、２５〜５０℃の範囲がより好ましい。
【００３１】
本発明の反応は緩衝液中で行うが、必要に応じ、トリプチセン誘導体を溶解するためにエタノール等の有機溶媒や界面活性剤、酵素の安定化剤を添加してもよい。緩衝液としては、ｐＨ５〜９の通常の緩衝液、例えばリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、トリス−塩酸緩衝液、各種グッドバッファー等を挙げることができる。酵素の至適ｐＨと安定性の点から、ｐＨ６〜８で反応を行うことがさらに好ましい。
【００３２】
本発明の反応時間は、１時間から１週間であるが、さらに具体的には６時間から３日間程度で反応を停止させるのが好ましい。
【００３３】
本発明の反応液からの反応生成物の回収は、例えば、ジエチルエーテルや酢酸エチル等の有機溶媒を用いる抽出、分別蒸留、シリカゲルやイオン交換樹脂等を用いるカラムクラマトグラフィーの方法を適宜用いることができる。特に、ジエチルエーテルを用いて抽出後、有機溶媒を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクラマトグラフィーで精製する方法が簡便な方法と言える。
【００３４】
このようにして回収した光学活性トリプチセン誘導体に化学的処理を施し、他の光学活性トリプチセン誘導体に変換することができる。化学的処理の方法については特に限定されないが、一例として、回収された加水分解され得る官能基を有するトリプチセン誘導体を通常のアルカリや酸等を用いて化学的に加水分解することが挙げられる。
【００３５】
以下、実施例を示し本発明を説明するが、本発明の技術的範囲はこれによって何ら限定されることはない。
【実施例１】
【００３６】
（±）−２，６−ジアシルオキシトリプチセン（化学式８）の合成
水酸化カリウム（１８．０ｇ）をエタノール（１Ｌ）に溶かし、２，６−ジヒドロキシアントラキノン（アルドリッチ社製、２０．０ｇ）と臭化ブチル（１５０ｍｌ）を加え、７日間加熱還流した。水（１Ｌ）を加えた後、塩酸でｐＨ７．０に調整し、生じた結晶をろ過、水洗し、２，６−ジブトキシアントラキノンを褐色結晶として２４．１ｇ（収率８２％）得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．００（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１．５３（４Ｈ，ｓｅｘ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．８３（４Ｈ，ｍ），４．１５（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５ Ｈｚ），７．２２（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．７Ｈｚ），７．７０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ），８．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ）
【００３７】
上記にて得られた２，６−ジブトキシアントラキノン（６．０ｇ）をメタノール（５００ｍｌ）に溶解し、氷冷後、水素化ホウ素ナトリウム（４．４ｇ）を１時間かけて添加した。本反応液を０℃にて１時間撹拌後、水（４００ｍｌ）を添加して結晶を析出させた。ろ過して得た結晶に１０％塩酸（３００ｍｌ）を添加し、５時間還流した。冷却後、ろ過、水洗して得られた残渣を２−プロパノール（３００ｍｌ）に溶解し、還流した。これに水素化ホウ素ナトリウム（４．０ｇ）を１時間かけて添加し、３６時間還流した。２０％塩酸（７００ｍｌ）を添加して生じた暗褐色の物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、２，６−ジブトキシアントラセンの黄色結晶を２．１ｇ（収率３６％）得た。融点１９８．５−２０２．４℃、１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１．０１８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１．５６（４Ｈ，ｍ），１．８６（４Ｈ，ｍ），４．１１（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），７．１１−７．２６（４Ｈ，ｍ），７．８３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ） ，８．１７（２Ｈ，ｓ）
【００３８】
上記にて得られた２，６−ジブトキシアントラセン（１．０ｇ）の１，２−ジクロロエタン溶液（９０ｍｌ）を加熱沸騰させ、これに２．１３ｇのアントラニル酸から予め調製されたＢｅｎｚｅｎｅｄｉａｚｏｎｉｕｍ−２−Ｃａｒｏｘｙｌａｔｅの１，２−ジクロロエタン溶液（４０ｍＬ）を２時間かけて滴下し、さらに２時間加熱還流した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ジクロロメタン＝１：１）で精製し、（±）−２，６−ジブトキシトリプチセンを黄色油状物質として０．９ｇ（収率７３％）得た。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．９２（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），１．４１（４Ｈ，ｍ），１．６８（４Ｈ，ｍ）, ３．８６（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），５．２６（２Ｈ，ｓ），６．４５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，２．４Ｈｚ），６．９５（２Ｈ，ｍ），６．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．4 Ｈｚ），７．２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３２（２Ｈ，ｍ）
【００３９】
上記にて得られた（±）−２，６−ジブトキシトリプチセン（４００ｍｇ）の１，２−ジクロロメタン溶液（５０ｍｌ）を−８０℃に冷却し、１Ｍの三臭化ホウ素 ジクロロメタン溶液（１．６ｍｌ）を滴下した。これを−８０℃にて５時間、さらに室温で８時間反応させた。反応液を水で洗浄し、有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：酢酸エチル＝５：１）で精製し、（±）−２，６−ジヒドロキシトリプチセンを白色結晶として１８０ｍｇ（収率６３％）得た。融点 １９９．０−２００．９℃、１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ（ｐｐｍ）： ５．３１（２Ｈ，ｓ），６．２９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，２．４Ｈｚ），６．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），６．９４ （２Ｈ，ｍ），７．１３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），７．３３（２Ｈ，ｍ），９．１６（２Ｈ，ｓ，ＯＨ）
【００４０】
上記にて得られた（±）−２，６−ジヒドロキシトリプチセン（２００ｍｇ）を無水ジエチルエーテル（１０ｍｌ）に溶かし、トリエチルアミン（０．１９ｍｌ）と各種酸クロリドを入れ、窒素気流下で２時間反応させた。ジエチルエーテルにて抽出し、水にて洗浄後、有機層を硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、濃縮した。これを減圧蒸留し（３．７〜２．３Ｔｏｒｒ，８７．０〜１３０．０℃）、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）にかけ、各種（±）−２，６−ジアシルオキシトリプチセンを収率７０−８０％で得た。
（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：０．８９（６Ｈ，ｔ），１．３４（４Ｈ，ｍ），１．５７（４Ｈ，ｍ），２．５２（４Ｈ，ｔ），５．６９（２Ｈ，ｓ），６．７３（２Ｈ，ｍ），７．０２（２Ｈ，ｍ），７．２３（２Ｈ，ｄ），７．４４（４Ｈ，ｍ）
【実施例２】
【００４１】
トリプチセン誘導体の不斉加水分解の最適基質と最適酵素の探索
０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１０ｍｌにキサントモナス由来コレステロールエステラーゼＣＨＥ−ＸＥ（キッコーマン社製）、ウシ膵臓由来コレステロールエステラーゼＣＨＥ−Ｂ（シグマ社製）、リパーゼＰＳ（アマノエンザイム社製）の各種加水分解酵素を２０ｍｇずつそれぞれ溶解させ、ここに化１２、１３に示される各種トリプチセン誘導体のラセミ体化合物２０ｍｇを１．５ｍｌのエタノールに溶解してそれぞれ加え、４０℃で反応を行った。２４時間反応後、反応液をジエチルエーテルで抽出した。回収した有機溶媒層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことにより反応生成物を得、反応の進行状況をジエステル体、モノエステル体、ジオール体の比をガスクロマトグラフィー［ＤＢ−１（Ｊ＆Ｗ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社），ヘリウム，２５０℃］で分析することにより確認した。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー［ヘキサン：酢酸エチル（４：１）］により分離し、得られた各種生成物の光学純度をＨＰＬＣ［ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＩＡ（ダイセル社），ヘキサン：２−プロパノール＝７：１、流速 ０．５ｍｌ／ｍｉｎ］で分析した。
【００４２】
表１に示したとおり、基質として化学式８のＲ＝ブチル基である（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン、加水分解酵素としてＣＨＥ−ＸＥを用いたとき、最も光学純度が高いモノエステル体である（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンを得ることができた。
【００４３】
【表１】
【実施例３】
【００４４】
光学活性な（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンおよび（−）−２，６−ジヒドロキシトリプチセンの合成
０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）６０ｍｌにコレステロールエステラーゼＣＨＥ−ＸＥ（キッコーマン社製）１２０ｍｇを溶解させ、（±）−２，６−ジペンタノイルオキシトリプチセン１２０ｍｇを９．０ｍｌのエタノールに溶解して加え、４０℃で反応を行った。２４時間反応後、反応液をジエチルエーテルで抽出した。回収した有機溶媒層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことにより反応生成物を得た。これをガスクロマトグラフィーで分析したところ、原料であるジエステル体が３５％、加水分解産物であるモノエステル体、ジオール体がそれぞれ３２％、３３％ずつ含まれる混合物であることがわかった。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により分離し、モノエステル体である（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンを３７．７ｍｇ得た。これをＨＰＬＣで分析した結果、光学純度が６９％であることが分かった。旋光度［α］Ｄ＝−１５．５（ｃ＝０．５１，メタノール）
【００４５】
０．１Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）１９ｍｌにＣＨＥ−ＸＥ ３７．７ｍｇを溶解させ、先の酵素反応で得られた、６９％光学純度のモノエステル体（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセン ３７．７ｍｇを２ｍｌのエタノールに溶解して加え、４０℃で反応を行った。２４時間反応後、反応液をジエチルエーテルで抽出した。回収した有機溶媒層を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮を行うことにより反応生成物を得た。これをガスクロマトグラフィーで分析したところ、原料であるモノエステル体が３０％、加水分解産物であるジオール体が７０％の混合物であることがわかった。これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）により分離し、モノエステル体である（−）−２−ヒドロキシ−６−ペンタノイルオキシトリプチセンを光学純度９９％で１３．５ｍｇ得た。
【００４６】
得られたモノエステル体を水酸化ナトリウムで処理し、光学純度が９９％のジオール体（−）−２，６−ジヒドロキシトリプチセンを９．５ｍｇ得た。旋光度［α］Ｄ＝−２１．９（ｃ＝０．５０，メタノール）
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明は、トリプチセン誘導体の光学活性体をより安価、簡便、かつ安全に提供し、機能性材料や医薬品等の原料として広い分野で有効に利用される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリプチセン誘導体の光学異性体混合物に酵素を作用させ、光学活性なトリプチセン誘導体を得ることを特徴とする、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項２】
トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、下記の化学式１で示され、式中、Ｒ１〜Ｒ８のいずれか少なくとも一つは加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、請求項１記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【化１】
【請求項３】
トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、化学式１の式中、Ｒ２とＲ６の両方もしくはいずれか一つが加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、請求項２記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項４】
加水分解され得る官能基がエステル基であることを特徴とする、請求項２又は３記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項５】
酵素が、不斉加水分解する能力を有する加水分解酵素であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれかの項に記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項６】
加水分解酵素が、エステル加水分解酵素であることを特徴とする、請求項５記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項７】
エステル加水分解酵素が、コレステロールエステラーゼであることを特徴とする、請求項６記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項１】
トリプチセン誘導体の光学異性体混合物に酵素を作用させ、光学活性なトリプチセン誘導体を得ることを特徴とする、光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項２】
トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、下記の化学式１で示され、式中、Ｒ１〜Ｒ８のいずれか少なくとも一つは加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、請求項１記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【化１】
【請求項３】
トリプチセン誘導体の光学異性体混合物が、化学式１の式中、Ｒ２とＲ６の両方もしくはいずれか一つが加水分解され得る官能基であるトリプチセン誘導体とその光学異性体の混合物であることを特徴とする、請求項２記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項４】
加水分解され得る官能基がエステル基であることを特徴とする、請求項２又は３記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項５】
酵素が、不斉加水分解する能力を有する加水分解酵素であることを特徴とする、請求項１乃至４のいずれかの項に記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項６】
加水分解酵素が、エステル加水分解酵素であることを特徴とする、請求項５記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【請求項７】
エステル加水分解酵素が、コレステロールエステラーゼであることを特徴とする、請求項６記載の光学活性なトリプチセン誘導体の製造方法。
【公開番号】特開２００６−１８７２２５（Ｐ２００６−１８７２２５Ａ）
【公開日】平成１８年７月２０日（２００６．７．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５６６（Ｐ２００５−５６６）
【出願日】平成１７年１月５日（２００５．１．５）
【出願人】（０００００４４７７）キッコーマン株式会社 (212)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年７月２０日（２００６．７．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１月５日（２００５．１．５）
【出願人】（０００００４４７７）キッコーマン株式会社 (212)
【Ｆターム（参考）】
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