本願は、ＲＮＡ干渉技術(ＲＮＡｉ)を利用してヘッジホッグシグナリング経路を調節する方法及び試薬に関係する。この出願は、ヘッジホッグＲＮＡｉの潜在的標的、更なるヘッジホッグシグナリング経路の成分を同定する方法、ｓｉＲＮＡを利用してヘッジホッグシグナリング標的を阻害する方法、及び多くの病気の治療におけるそれらの利用を提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
望ましくない細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻止する方法であって、該方法は、該細胞を、有効量のヘッジホッグ経路の標的配列に対するヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることを含み；該標的配列がヘッジホッグ経路の正のレギュレーターであり、該細胞を該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることが細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させる当該方法。
【請求項２】
望ましい細胞の成長、増殖、分化又は生存の少なくとも一つを刺激する方法であって、該方法は、該細胞を、有効量のヘッジホッグ経路の標的配列に対するヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることを含み；該標的配列がヘッジホッグ経路の負のレギュレーターであり、該細胞を該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることが細胞の成長、増殖、分化又は生存の少なくとも一つを増大させる当該方法。
【請求項３】
前記の細胞が、ｇｌｉ遺伝子を発現させるかどうかを測定すること、及びｇｌｉ遺伝子を発現する該細胞を有効量のヘッジホッグ経路の標的配列に対するヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記のｇｌｉ遺伝子が、ｇｌｉ−１である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記の望ましくない細胞増殖が、癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記の望ましくない細胞増殖が、良性の肥厚である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記の癌が、泌尿生殖器癌である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記の癌が、悪性の神経膠腫、髄膜腫、髄芽細胞腫、神経外胚葉性腫瘍及び上衣細胞腫を含む神経系の癌である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記の癌が、肺、前立腺、乳房、卵巣、子宮、筋肉、膀胱、結腸、腎臓、膵臓及び肝臓組織の少なくとも一つと関係している、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記の乳房組織と関係する癌の形態が、下位腺管癌、下葉癌腫、腺管内癌腫、髄質癌腫及び管状腺癌から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記の肺組織と関係する癌が、腺癌、気管支肺胞腺癌及び小細胞癌から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記の前立腺と関係する癌が、腺癌である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
望ましくない細胞増殖が、望ましくない血管形成である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
望ましくない血管形成が、腫瘍成長、腫瘍転移、又は内皮細胞による異常成長(新血管新生疾患、加齢関連黄斑変性、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植の拒絶、新血管新生性緑内障、水晶体後繊維増殖症、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ疲労症、アトピー性角膜炎、上輪部角結膜炎、表皮爪膜乾燥症、シェーグレン酒性座瘡、フリクテン症、梅毒、ミコバクテリア感染症、脂質退行変性、化学的火傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹、原虫感染症、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性、辺縁表皮剥離、慢性関節リウマチ、全身性狼瘡、多発性動脈炎、外傷、ウェゲナー肉芽腫症、類肉腫症、鞏膜炎、スティーヴンズ-ジョンソン病、周辺放射角膜切開、角膜移植片拒絶、慢性関節リウマチ、骨関節症慢性的炎症(例えば、潰瘍性大腸炎又はクローン病)、血管腫、遺伝性出血性毛細管拡張症及び遺伝性出血性毛細管拡張症を含む)において起きる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記の望ましくない血管形成が、傷の治癒、排卵、及び受精後の胞胚の着床を含む正常な生理的過程において起きる 、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記の細胞の望ましくない成長、増殖又は生存が、正常な毛髪の成長、異所発毛症、多毛症、多毛性早熟症、又は毛嚢炎(脱毛性毛嚢炎、網状瘢痕性紅斑性毛嚢炎、ケロイド毛嚢炎及び擬似毛嚢炎を含む)において起きる 、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記の望ましい分化が、未拘束の培養幹細胞の、脳内移植における利用のための最終分化した神経細胞への分化である、請求項２に記載の方法。
【請求項１８】
前記の最終分化した神経細胞に、グリア細胞、シュワン細胞、クロム親和性細胞、コリン作動性交感神経又は副交感神経ニューロン、及びペプチド作動性及びセロトニン作動性ニューロンが含まれる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストが、前記の未拘束の幹細胞の特定の分化の運命を一層増進する他の神経栄養性因子と組み合わせて利用される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記の望ましい成長、増殖、分化又は生存が、(ｉ)外傷性傷害、化学的傷害、血管傷害、及び発作、感染／炎症及び腫瘍誘導性傷害の結果生じる欠乏、虚血を含む神経系に対する急性、亜急性、又は慢性の傷害；(ii)アルツハイマー病を含む神経系の加齢；(iii)パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症及び脊髄小脳変性症を含む神経系の慢性的な神経退行性疾患；及び(iv)多発性硬化症を含む神経系の(即ち、神経系に影響する)慢性免疫疾患に由来する神経病学的条件において起きる、請求項２に記載の方法。
【請求項２１】
前記の望ましい成長、増殖、分化、又は生存が、軟骨形成及び／又は骨形成において起きる、請求項２に記載の方法。
【請求項２２】
前記の軟骨形成及び／又は骨形成が、可動関節又は顎関節の軟骨の治療又は軟骨移植及び補綴デバイス治療における治療介入において起きる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記の軟骨形成及び／又は骨形成が、骨格組織が欠損している動物の部位における骨の形成(骨形成)のための養生法において起きる、請求項３２に記載の方法。
【請求項２４】
前記の望ましい成長、増殖、分化又は生存が、毛髪の再生又は再成長において起きる、請求項２に記載の方法。
【請求項２５】
前記の毛髪の再生又は再成長は、化学療法又は放射線療法の後で起きる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
ＲＮＡｉアンタゴニストが、ｓｉＲＮＡアンタゴニストである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２７】
前記のｓｉＲＮＡアンタゴニストが、プラスミド(ＲＮＡｉ発現ベクター)からの転写又は外因性の合成後に形成されるｓｉＲＮＡである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記のｓｉＲＮＡが、前記のプラスミド(ＲＮＡｉ発現ベクター)の単一プロモーターからの転写後に形成される短いヘアピンｓｉＲＮＡである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記のｓｉＲＮＡが、前記のプラスミド(ＲＮＡｉ発現ベクター)上の２つの隣接コンバージェントプロモーターからの転写後に形成される短いｄｓＲＮＡである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
前記のｓｉＲＮＡが、約１９〜３０ヌクレオチド長である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項３１】
前記のｓｉＲＮＡが、２１〜２３ヌクレオチド長である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記のｓｉＲＮＡが、一層長い少なくとも２５、５０、１００、２００、３００、４００、又は４００〜８００塩基長の二本鎖ＲＮＡのヌクレアーゼダイシングにより生成される断片である 、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記のｓｉＲＮＡが、二本鎖であり、一端又は両端に短いオーバーハングを含む 、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
前記の短いオーバーハングが、３’末端で１〜６ヌクレオチド長であり、３’末端で２〜４ヌクレオチド長であり、又は３’末端で１〜３ヌクレオチド長である 、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記のｓｉＲＮＡの一の鎖が３’オーバーハングを有して、他の鎖は鈍端であり、又は他の鎖も同じ若しくは異なる長さのオーバーハングを有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記の３’オーバーハングが、分解に対して安定化されている、請求項３３〜３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記の３’オーバーハングが、プリンヌクレオチドのアデノシン又はグアノシンを含有することにより分解に対して安定化されている、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記の３’オーバーハングが、ピリミジンヌクレオチドを改変類似体により置換することにより例えばウリジンヌクレオチド３’オーバーハングの２’−デオキシチミジンによる置換によって分解に対して安定化されている、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記のｓｉＲＮＡが、化学的に合成されたものである、請求項２６に記載の方法。
【請求項４０】
前記のＲＮＡｉが、前記の標的核酸配列と同一若しくは実質的に同一である二本鎖ＲＮＡの長いストレッチ、又は該標的核酸配列の一領域にのみ同一若しくは実質的に同一である二本鎖ＲＮＡの短いストレッチの何れかを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４１】
前記の標的配列が、表Ｘに列記した正のＨＨシグナリング成分である、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
前記の標的配列が、表Ｙに列記した負のＨＨシグナリング成分である、請求項２に記載の方法。
【請求項４３】
前記の標的配列が、ヒトの配列である、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記の標的配列が、非ヒト配列である、請求項４１又は４２に記載の方法。
【請求項４５】
前記の標的配列が、表Ｘ又はＹに列記した配列の何れか一つの同族体であるが、表Ｘ又はＹに列記されたもの自体ではない、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４６】
前記のＲＮＡｉアンタゴニストが、同じＨＨシグナリング成分の幾つかの同族体の一のメンバーに特異的である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４７】
前記のＨＨシグナリング成分が、哺乳動物のヘッジホッグであり、前記のＲＮＡｉアンタゴニストが、Ｓｈｈに特異的である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記のＲＮＡｉアンタゴニストが、同じＨＨシグナリング成分の幾つかの同族体の一のメンバーについて、他のすべてのメンバーの少なくとも１．５倍、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍選択的である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記のＲＮＡｉアンタゴニストが、ＨＨシグナリング経路に特異的であり、他の細胞シグナリング経路に有意の影響を与えない、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５０】
前記の他の細胞シグナリング経路が、ウイングレス経路である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
肺細胞における界面活性物質産生を刺激する方法であって、該細胞を、界面活性物質産生を刺激するのに有効な量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることを含む当該方法。
【請求項５２】
肺細胞におけるラメラ体形成を刺激する方法であって、該細胞を、ラメラ体形成を刺激するのに有効な量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることを含む当該方法。
【請求項５３】
前記の肺細胞が、未熟児の肺組織に存在する、請求項５１又は５２に記載の方法。
【請求項５４】
患者の腫瘍を治療する方法であって、該方法は、該患者に、腫瘍の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させるのに十分な量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを投与することを含み、該腫瘍がヘッジホッグ遺伝子又はｇｌｉ遺伝子の少なくとも一つを発現する、当該方法。
【請求項５５】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを、癌治療養生法の部分として投与する、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
望ましくない細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻害する方法であって、該方法は、下記：
(ａ)該細胞がヘッジホッグ遺伝子を発現するかどうか測定して、
(ｂ)該ヘッジホッグ遺伝子を発現する該細胞を有効量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させる；
ことを含み、該細胞を該ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることが細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させる、当該方法。
【請求項５７】
前記のヘッジホッグ遺伝子は、ソニックヘッジホッグである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記の望ましくない細胞の成長、増殖又は生存が、癌である 、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを、製薬上許容しうるキャリアー中に配合する、前記の請求項の何れかに記載の方法。
【請求項６０】
患者の腫瘍を治療する方法であって、該患者に、該腫瘍の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを減少させるのに有効な量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを投与することを含む当該方法。
【請求項６１】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを、癌治療養生法の部分として投与する、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストの、患者の腫瘍を治療するための医薬の製造における利用。
【請求項６３】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを、癌治療養生法の部分として投与する、請求項６２に記載の利用。
【請求項６４】
ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストの、望ましくない細胞の成長、増殖又は生存の少なくとも一つを阻害するための医薬の製造における利用。
【請求項６５】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストを、癌治療養生法の部分として投与する、請求項６４に記載の利用。
【請求項６６】
細胞内のヘッジホッグに媒介される経路におけるシグナル変換を減少させる方法であって、該方法は、該細胞を、有効量のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストと接触させることを含み、該ヘッジホッグに媒介される経路が、Ｐｔｃ、Ｓｍｏ及び／又はＧｌｉに依存しない当該方法。
【請求項６７】
前記のヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストが、ＳｈｈｓｉＲＮＡアンタゴニストである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ヘッジホッグＲＮＡｉアンタゴニストの、培養における幹細胞の増殖、分化又は生存を調節するための医薬の製造における利用。
【請求項６９】
前記の幹細胞が、神経幹細胞である、請求項６８に記載の利用。
【請求項７０】
前記の幹細胞が、胚、胎児及び成体の幹細胞である、請求項６８に記載の利用。
【請求項７１】
前記の細胞が、成体幹細胞であり、該成体幹細胞が、造血幹細胞、間充織幹細胞、神経幹細胞、神経冠幹細胞、心筋幹細胞又は膵臓幹細胞の何れかから選択される、請求項７０に記載の利用。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【公表番号】特表２００７−５３０５７１（Ｐ２００７−５３０５７１Ａ）
【公表日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０５１４９（Ｐ２００７−５０５１４９）
【出願日】平成１７年３月２３日（２００５．３．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／００９７３９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９７２０７
【国際公開日】平成１７年１０月２０日（２００５．１０．２０）
【出願人】（５０１１８８８８９）キュリス　インコーポレイテッド (23)
【Ｆターム（参考）】