ヘリコバクター・ピロリに関連する疾患を治療する際の、生姜の根茎から抽出された有効産物の使用
【課題】生姜の根茎から調製されるヘリコバクター・ピロリに関する疾患の治療に使用される有効産物を提供することを目的とする。
【解決手段】 本発明は、有機溶剤抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムにかけることで得られる水性の溶出液は、前記ヘリコバクター・ピロリに関する疾患を治療する際に非常に弱い効能を示し、比較的弱い極性を有する溶離剤の溶出液である。
【解決手段】 本発明は、有機溶剤抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムにかけることで得られる水性の溶出液は、前記ヘリコバクター・ピロリに関する疾患を治療する際に非常に弱い効能を示し、比較的弱い極性を有する溶離剤の溶出液である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃炎、胃潰瘍または十二指腸潰瘍のようなヘリコバクター・ピロリに関連する疾患を治療する際に使用される、生姜の根茎から抽出された有効産物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
中国の生薬またはスパイス、すなわち生姜（Zingiber officinale）、クローブ（Eugeniacaryophyllata）、にんにく（Alliumsativum）は、薬や食物の味付けに用いられてきた。粗生姜は、制吐薬や去痰薬、咳止め、消化促進剤として用いられる。セミドライの古い粗生姜はまた、胃痛、胸痛、腰痛、咳、普通感冒に用いられ、また、「水浮腫（"stagnate of water".）」と呼ばれる浮腫の形態の治療用いられる。
【０００３】
ジンゲロン（Zingerone）は、生姜の辛味の特徴の主な原因となる主成分であり；ジンジャオール（gingerol）およびショーガオール（shogaol）は、生姜中の他の辛味成分である。ジンジャオールは、強心作用を有し、マウスにおける摘出された門脈（isolated portal veins）の収縮を抑制し、マウスおよびラットの血管のエイコサノイド−誘起収縮を緩和する。ジンジャオールおよびショーガオールはいずれも突然変異原性があって、生姜（ginger）およびジンゲロンは、抗変異原活性を示すことが分かってきた。
【０００４】
ショーガオールは、カラゲニン浮腫および血小板凝集において阻害活性を有する（特許文献１；発明の背景）。特許文献２は、胃潰瘍用治療組成物およびそれを調整する工程について開示し、Aegle marmetosおよびWithania somnifraの植物部位から得られる抽出物および８つの植物からなる群から選択される少なくとも１つの部材の植物部位から得られる抽出物を含み、それの一つが生姜である。前記組成物の抽出物は、好ましくは、水性の抽出物である。
【０００５】
特許文献３は、病気予防に有用な抗ヘリコバクターピロリの有効産物ならびに胃炎ならびに胃および十二指腸潰瘍治療を開示し、カッコウ、センブリ、オウゴン、シソシ、ウイキョウ、カンキョウ、ビャクジュツ、サンショウ、コロンボ、ショウキョウ、モッコウ、クジン、アセンヤク、アロエ及びシャクヤクからなる群から選択される一以上の本草薬の使用を含む病気予防に有用な抗ヘリコバクターピロリ有効産物ならびに胃炎ならびに胃および十二指腸潰瘍治療を開示している。
【０００６】
ジンジャオールを含む生姜の根抽出物は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＣａｇＡ＋ｓｔｒａｉｎｓの成長を抑制することが記載されている（非特許文献１）。
【特許文献１】米国特許第５，８０４，６０３号明細書
【特許文献２】米国特許第６，８５５，３４７号明細書
【特許文献３】特開２００４−１１５５３６号公報
【非特許文献１】Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２３（５Ａ）：３６９９−３７０２，２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
生姜の根茎から調製されるヘリコバクター・ピロリに関する疾患の治療に使用される有効産物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
粗有機溶剤抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムにかけることで得られる水性の溶出液は、前記疾患を治療する際に非常に弱い効能を示し、比較的弱い極性を有する溶離剤の溶出液は向上した効能を有する。驚くべきことに、溶出液に６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールのいずれもがなくなるような弱い極性を有する溶離剤による溶出液は、非常に強い効能を示すことを見出した。この知見は、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールは、辛味成分であり、比較的不安定であるため、有効なものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明において調製される有効産物は、生姜の根茎由来の水性の粗抽出物または有機溶剤粗抽出物と比較して顕著に有意な効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明を好適ないくつかの実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態は、これに制限されるものでないが、以下を含む。
【００１２】
１． 生姜の根茎由来の、治療上有効な量の有効産物を含むヘリコバクター・ピロリが関連する疾患の治療用薬剤組成物であって、
前記有効産物が、下記段階を含む工程：
ａ）６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、生姜の根茎由来の粗抽出物を調製する；
ｂ）粗抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムまたは順相クロマトグラフィーカラムに導入し、第１溶離剤、第２溶離剤の順でカラムから溶出し、この際、ｉ）逆相クロマトグラフィーカラムを使用するときは、前記第１溶離剤は、水よりも弱い極性を有し、および、前記第２溶離剤は、第１溶離剤よりも弱い極性を有し、または、ｉｉ）順相クロマトグラフィーカラムを用いるときは、前記第２溶離剤は、酢酸エチルおよびメタノールの混合物（１：１の質量比）よりも弱い極性を有し、および、前記第１溶離剤は、第２溶離剤よりも弱い極性を有し、第１溶離剤の溶出により第１溶出液および第２溶離剤の溶出により第２溶出液を得；さらに、
ｃ）エバポレーションにより、第１溶出液から第１溶離剤を除去し、第１濃縮溶出液を得、有効産物として使用し、または、エバポレーションにより、第２溶出液から第２溶離剤を除去し、第２濃縮溶出液を得、有効産物として使用し；
前記段階ａ）は、段階ｉ）〜ｉｖ）、または、段階Ｉ）、段階Ｉ’）もしくは段階Ｉ”）を含み、
前記段階ｉ）〜ｉｖ）は；
ｉ）新鮮な生姜の根茎をすりおろし、その結果生じた混合物をろ過し、ろ液および残渣を得；
ｉｉ）第１有機溶剤により、前記ろ液を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第１有機溶剤を蒸発させ、第１濃縮抽出溶液を得；
ｉｉｉ）第２有機溶剤により残渣を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第２有機溶剤を蒸発させ、第２濃縮抽出溶液を得；さらに、
ｉｖ）前記第１濃縮抽出溶液および前記第２濃縮抽出溶液を混ぜ、粗抽出物溶液を得；
前記段階Ｉ）は：
Ｉ）前記第２有機溶剤と同じ有機溶剤で、乾燥した生姜の根茎を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から前記有機溶剤を蒸発させ、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ’）は：
Ｉ’）乾燥した生姜の根茎を水蒸気蒸留し、エバポレーションにより生じる蒸留液を濃縮して、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ”）は：
Ｉ”）超臨界ＣＯ２にて生姜の根茎の乾燥粉末を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液からＣＯ２をエバポレーションして、粗抽出物を得る、
により調製される、薬剤組成物。
【００１３】
２．前記疾患は胃潰瘍である、上記１に係る薬剤組成物。
【００１４】
３．前記粗抽出物は、段階ｉ）〜ｉｖ）を含む方法により調製される、上記１または２に係る薬剤組成物。
【００１５】
４．前記第１有機溶剤が、エチルエーテルで、前記第２有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、上記３に係る薬剤組成物。
【００１６】
５．前記第２有機溶剤が、アセトンである、上記４に係る薬剤組成物。
【００１７】
６．前記粗抽出物が、段階Ｉ）を含む方法により調製される、上記１または２に係る薬剤組成物。
【００１８】
７．前記有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである上記６に係る薬剤組成物。
【００１９】
８．前記有機溶剤が、アセトン、エタノールまたはエタノールおよび水の混合物である、上記７に係る薬剤組成物。
【００２０】
９．前記逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、上記１に係る薬剤組成物。
【００２１】
１０．前記第１溶離剤が、メタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノール、エタノールおよび水の混合物、アセトンおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、上記９に係る薬剤組成物。
【００２２】
１１．前記第１溶離剤が、エタノールおよび水の混合物である、上記１０に係る薬剤組成物。
【００２３】
１２．前記逆相クロマトグラフィーカラムが、第１溶離剤の前に水またはエタノール２０質量％を含むエタノールおよび水の混合物で溶出される、上記１１に係る薬剤組成物。
【００２４】
１３．前記有効産物は、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、上記９に係る薬剤組成物。
【００２５】
１４．逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物は、前記第２濃縮溶出液であり、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、上記１、１０、１１または１２に係る薬剤組成物。
【００２６】
１５．前記第２溶離剤は、アセトン、アセトンおよび水の混合物、アセトンおよびメタノールの混合物、アセトンおよびエタノールの混合物、アセトンおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、炭素数４〜６のアルカン、メタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、エタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、またはこれらの組み合わせである、上記１４に係る薬剤組成物。
【００２７】
１６．前記第２溶離剤が、アセトンである、上記１５に係る薬剤組成物。
【００２８】
１７．前記第２濃縮溶出液に、ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、上記１４に係る薬剤組成物。なお、「ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない」とは、「全く存在しない」との概念のみならず、「実質的にジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない」との概念をも含む。具体的には、下記実施例で規定されているＨＰＬＣ分析の検出限界を超える値を意味する。
【００２９】
１８．前記第２濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールいずれも存在しない、上記１４に係る薬剤組成物。なお、「６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールいずれも存在しない」とは、上記と同様、「全く存在しない」との概念のみならず、「実質的にジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない」との概念をも含む。具体的には、下記実施例で規定されているＨＰＬＣ分析の検出限界を超える値を意味する。
【００３０】
１９．前記順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）よりも極性が弱い、上記１に係る薬剤組成物。
【００３１】
２０．前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比９：１）と近い極性を有する、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３２】
２１．第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比９：１）である、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３３】
２２．前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３４】
２３．前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールのいずれも存在しない、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３５】
２４．前記順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第２濃縮溶出液であり、前記第２溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）の極性と近いまたは同じ、そして、前記第２濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、上記１に係る薬剤組成物。
【００３６】
２５．前記第２溶離剤は、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）である、上記２４に係る薬剤組成物。
【００３７】
２６．前記薬剤組成物は、さらに、希釈剤、賦形剤または担体を含んでもよい。
【００３８】
上記発明は、生姜の根茎由来の、治療上有効な量の有効産物を含むヘリコバクター・ピロリが関連する疾患の治療用薬剤組成物の製造方法としても、好ましい。
【００３９】
本願出願人は、イギリス特許第２３６６５６５号において、消炎、抗血小板凝集および抗真菌活性に有効な生姜由来の抽出物を調製する方法であって、下記段階を含むものを開示する：
有機溶剤もしくは超臨界ＣＯ２または蒸気による蒸留によって抽出された生姜の根茎由来の粗液を調製し；
前記粗液を、逆相クロマトグラフィーカラムに導入し、水、第１溶離剤、第１溶離剤よりも低い極性を有するがクロロホルムよりも高い極性を有する第２溶離剤により、カラムで溶出し、第１溶離剤の溶離により第１溶出液と、第２溶離剤の溶離により第２溶出液と、を得；
エバポレーションにて、第１溶出液および第２溶出液から、それぞれ、第１溶離剤および第２溶離剤を除去し、有効な抽出物として、第１濃縮溶出液および第２濃縮溶出液を得る。
【００４０】
本発明をさらに実施例を以って詳しく説明するが、これに制限されるものではない。なお、パーセントおよび他の量は、特に記載がなければ、すべて質量とする。また、全量は１００％とする。
【実施例】
【００４１】
［実施例１］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０の篩に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間、還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ａと残渣を得た。前記残渣を９５％エタノールと混ぜ（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００４２】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃のウォーターバスで濃縮し、「ＲｏｔａｖａｐｏｒＲ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空にして濃縮した。その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）Ｄｉａｉｏｎ（登録商標）を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）に導入し、「水 ５ベッドボリューム、４０％エタノール ４ベッドボリュームおよびアセトン ４ベッドボリューム」をこの順で抽出した。
【００４３】
４０％エタノールで溶出した溶出液およびアセトンで溶出した溶出液を、それぞれ回収した。
【００４４】
４０％エタノールで溶出した溶出液を、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、次いで、８０℃ウォーターバスで１時間再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１を得た。
【００４５】
アセトンで溶出した溶出液を、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル２を得た。
【００４６】
［実施例２］
４０％エタノール溶離剤を７０％エタノールに置き換えた以外は、実施例１の手順と同様に行った。
【００４７】
サンプル３は、７０％エタノールで溶出することにより得、サンプル４は、アセトンで溶出することにより得た。
【００４８】
［実施例３］
４０％エタノールの溶離剤を９５％エタノールに置き換えた以外は、実施例１の手順と同様に行い、サンプル５を得た。
【００４９】
［実施例４］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ａと残渣を得た。
【００５０】
前記残渣を、９５％エタノールに混合し（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００５１】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスにて濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、当初の１／５の質量になるようにした。
【００５２】
その結果生じた濃縮物の４倍の質量の水を、当初の質量に戻るように加え、その結果生じた液体を、逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）にかけ、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍に相当するＤｉａｉｏｎ（登録商標）を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）ＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）に導入し、「２０％ エタノール １ベッドボリュームおよび７０％エタノール ４ベッドボリューム」の順で溶離した。
【００５３】
７０％エタノールで溶出した溶出液を回収し、「ＲｏｔａｖａｐｏｒＲ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル６を得た。
【００５４】
［実施例５］
７０％エタノール溶離剤を９５％エタノールに置き換えた以外は、実施例４の手順と同様の方法を行い、サンプル７を得た。
【００５５】
［実施例６］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合させ、その結果生じた混合物を、ホモゲナイザー ２０００ｒｐｍ（ＴｙｐｅＸ５０／１０，Ｙｓｔｒａｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で、１時間で攪拌し、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。
【００５６】
前記残渣を、９５％エタノールと混合し（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、１時間、ホモゲナイザー ２０００ｒｐｍで攪拌し、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００５７】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスにて濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、当初の質量の１／５にした。その結果生じた濃縮物の質量の４倍の水を、当初の質量に戻るように加えた。
【００５８】
その結果生じた液体を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＤｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰ−２０（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）樹脂を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）に導入し、「２０％エタノール １ベッドボリュームおよび７０％エタノール ４ベッドボリューム」の順で溶離した。
【００５９】
７０％エタノールで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル８を得た。
【００６０】
［実施例７］
７０％エタノールの溶離剤を９５％エタノールに置き換えた以外は、実施例６の手順の同様の方法でサンプル９を得た。
【００６１】
［実施例８］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０の篩に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、アセトン ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。
【００６２】
前記残渣を、アセトンに混合し（質量比 １：８）、その結果生じた混合物を、１時間還流下で、沸騰させ、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００６３】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスで濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮した。
【００６４】
その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＤｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）が充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍｘ９０ｃｍ）に導入し、「水 ５ベッドボリューム、４０％エタノール ４ベッドボリュームおよびアセトン ２ベッドボリューム」の順で溶離した。
【００６５】
アセトンで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空乾燥し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１０を得た。
【００６６】
［実施例９］
４０％エタノールの溶離剤を７０％エタノールに置き換えた以外は、実施例８の手順と同様に行いサンプル１１を得た。７０％エタノールで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１１を得た。
【００６７】
［実施例１０］
粉末および残渣を、アセトンの代わりに酢酸エチルで沸騰させた（還流させた）以外は、実施例８の手順と同様に行い、サンプル１２を得た。
【００６８】
［実施例１１］
粉末および残渣を、アセトンの代わりに酢酸エチルで沸騰させた（還流させた）以外は、実施例９の手順と同様の方法を行い、サンプル１３を得た。
【００６９】
［実施例１２］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０の篩に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰し、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。前記残渣を、９５％エタノールに混合し（質量比１：８）、ろ液Ｂを得た。
【００７０】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスで濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮した。
【００７１】
その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の質量の２０倍のシリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を充填した順相クロマトグラフィーカラムに導入し、「ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの混合溶離剤（９：１） ４ベッドボリューム、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの混合溶離剤（６：４） ３ベッドボリュームおよび酢酸エチル：メタノールの混合溶離剤（１：１） ２ベッドボリューム」をこの順で溶離した。
【００７２】
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（９：１）の溶離による溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスにて再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１４を得た。
【００７３】
サンプル１４を得るのと同様の手順により、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（６：４）、酢酸エチル：メタノール（１：１）により、サンプル１５およびサンプル１６を得た。
【００７４】
［実施例１３］
９５％エタノールをアセトンに置き換えた以外は、実施例１２の手順と同様に行った。
【００７５】
サンプル１７、サンプル１８およびサンプル１９は、「ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：４，および酢酸エチル：メタノール＝１：１」でそれぞれ溶離して得た。
【００７６】
［実施例１４］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰し、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。
【００７７】
前記残渣を、９５％エタノールと混合し（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、還流下で沸騰し、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００７８】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、薄膜バキュームエバポレーター（ＣＥＰ−Ｌ，ＯｋａｗａｒａＭｆｇ．Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）にて濃縮し、当初の質量の１／５にした。
【００７９】
その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＤｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（３４．５ｃｍ×１００ｃｍ）に導入し、「９５％エタノール ２ベッドボリュームおよびアセトン ２ベッドボリューム」を順に、溶離した。
【００８０】
アセトンで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル２０を得た。
【００８１】
ＨＰＬＣ分析サンプル調製：
サンプルを秤量し、サンプルボトルに入れ、１０ｍｇ／ｍｌの濃度のサンプル溶液になるようにメタノールで希釈した。
【００８２】
０．４５μｍろ紙で、サンプル溶液をろ過し、ＨＰＬＣでろ液を分析した。
【００８３】
【表１】
【００８４】
上記に調製されたサンプル１〜サンプル２０のＨＰＬＣ分析の結果を、図１〜図２０に示す。
【００８５】
サンプル中の６−ジンジャオールおよび６−ショーガオール成分（ｍｇ／ｇ）をＨＰＬＣ分析で算出し、サンプル調製の使用した抽出条件および溶離条件とともに表１にリストアップした。
【００８６】
【表２−１】
【００８７】
【表２−２】
【００８８】
サンプル１〜１３および２０は、逆相クロマトグラフィーカラムを用いて調製した。
【００８９】
図１〜４に示すＨＰＬＣ分析の特徴と比較して、４０％エタノールで溶出した溶出液は、６−ジンジャオールよりも強い極性を有する化合物を含み（サンプル１）、７０％エタノールで溶出した溶出液は、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールよりも強い極性を有する化合物を含み（サンプル３）、アセトンで溶出した溶出液は、比較的弱い極性を有する残りの化合物であることが分かる（サンプル２およびサンプル４）。
【００９０】
図６および図７を見ると、溶離剤として７０％エタノールを使用したものと比較して、９５％エタノールを使用したものは、より右側にピークが見られることが分かる。同様の傾向が、抽出条件は異なるものの、図６および７のように図８および９で観察できる。
【００９１】
図１０および１２に示す特徴は、抽出条件は異なるが、溶離条件が同じである点、図２に示すそれと似ている。
【００９２】
図１１および１３に示す特徴は、抽出条件は異なるが、溶離条件が同じである点、図３に示すそれと似ている。
【００９３】
サンプル２０は、弱い極性を有する化合物を多く含み、図２０に示すように６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを観察することができず、それは、９５％エタノール溶離剤が、逆相クロマトグラフィーカラムから、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む比較的強い極性を有するものを溶出したことを示唆する。
【００９４】
サンプル１３〜１５は、ＨＰＬＣ分析において、抽出条件が異なるが、順相クロマトグラフィーカラムの溶離条件が同じである点、サンプル１６〜１９と似ている（図１３〜１９）。
【００９５】
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１溶離剤を使用すると、図１４（図１６）で示すように、サンプル１４（サンプル１６）の成分の殆どが無極性化合物であり、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：４溶離剤を使用すると、サンプル１５（サンプル１７）は、かなりの量の６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む。
【００９６】
１．抗菌試験
ヘリコバクター・ピロリにおけるサンプルの最小（発育）阻止濃度（ＭＩＣ）は、寒天希釈法［Malanosk G.J. et al. Effect of pH variation on the susceptibility of Helicobacter pylori to three marcolide antimicrobial agents and temafloxacin. Eur. J. Clin. Microbial Infect Dis. 12: pp. 131-133, 1993.］により測定した。
【００９７】
前記検体を溶解し、ＤＭＳＯに連続的に希釈し、所望の濃度にした。
【００９８】
それぞれの濃度試験のために、７％のウサギの脱線維素血液が培地されたＣｏｌｕｍｂｉａａｇａｒｂａｓｅ（Ｏｘｏｉｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）０．９９ｍｌ含む４８−ｗｅｌｌｐｌａｔｅに、アリコート０．０１ｍｌを加える。
【００９９】
ヘリコバクター・ピロリ（ＡＴＣＣ４３５０４）接種材料は、５×１０５ＣＦＵ／ｍｌの密度のブレインハートインフュージョン培養液に懸濁させることで、調製する。
【０１００】
ＤＭＳＯの最終的な最大濃度は、１％であり、最初の検体濃度は、３００μｇ／ｍｌである。
【０１０１】
前記プレートを、微好気的条件（混合ガスＮ２ ８５％，ＣＯ２ １０％およびＯ２ ５％）３５℃７２時間培養し、視診し、コロニー増殖の抑制を、「陽性（＋）」とスコア−し、コロニー増殖の影響がない場合、「陰性（−）」とした。
【０１０２】
担体−対照およびゲンタマイシンを、それぞれブランクおよび陽性対照として使用した。
【０１０３】
各濃度は、２回評価した。
【０１０４】
結果を表２に示す。
【０１０５】
【表３】
【０１０６】
２．ヘリコバクター・ピロリ誘起胃潰瘍
ヘリコバクター・ピロリ−誘起胃潰瘍におけるサンプルの影響は、先に示されている［[Marchetti, M., Arico, B., Burroni, D., Figura, N., Rappuoli, R. and Ghiara, P. Development of a mouse model of Helicobacter pylori infection that mimics human disease. Science 267: 1655-1658, 1995.］により評価する。
【０１０７】
質量２４±２ｇのマウスで分けられた５つのオスのＣＤ−１（Ｃｒｌ．）の群は、「３．２×１０９コロニー形成ユニット／０．４ｍｌ／ｍｏｕｓｅ」の懸濁における臨床分離されたヘリコバクター・ピロリの胃内接種の前に１８時間絶食させた。
【０１０８】
ヘリコバクター・ピロリ接種の１時間後、７日連続で１日２回（１０：００ａｍおよび４：００ｐｍ）試験サンプルおよび担体（２％ＣＭＣ，１０ｍｌ／ｋｇ）が、それぞれ試験動物に経口投与された。
【０１０９】
オメプラゾール（Ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）（１ｍｇ／ｋｇ）と、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）（１０ｍｇ／ｋｇ）と、が組み合わされ、陽性の制御因子のために使用され、一日一回７日連続で同じスケジュールの下、試験動物に経口投与した。
【０１１０】
感染８日後、すべての動物を夜通し絶食させ、殺し、大弯に沿って胃を解剖した。
【０１１１】
胃潰瘍性は、出血および潰瘍性病巣の重篤性の程度により４つのレベルにスコアした。
【０１１２】
０＝通常の外見
１＝緩やかな赤い点
２＝適度な赤い点および／または出血点
３＝著しい出血点
ヘリコバクター・ピロリ-誘起胃潰瘍における抑制性の割合は、下記の通り、算出することができる。
【０１１３】
（担体群スコア-試験群スコア）／（担体群スコア）×１００％
結果を表３に示す。
【０１１４】
【表４】
【０１１５】
上記実施例により調製されたサンプル中ヘリコバクター・ピロリに誘起された胃潰瘍治療において、サンプル１のみ６−ジンジャオールより効果が弱かった。
【０１１６】
サンプル２０が、一番効果があり１００ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの投与においてヘリコバクター・ピロリ-誘起胃潰瘍の抑制性が、それぞれ８３％，７５％，６７％および５０％であった。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】サンプル１のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図２】サンプル２のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図３】サンプル３のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図４】サンプル４のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図５】サンプル５のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図６】サンプル６のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図７】サンプル７のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図８】サンプル８のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図９】サンプル９のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１０】サンプル１０のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１１】サンプル１１のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１２】サンプル１２のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１３】サンプル１３のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１４】サンプル１４のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１５】サンプル１５のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１６】サンプル１６のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１７】サンプル１７のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１８】サンプル１８のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１９】サンプル１９のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図２０】サンプル２０のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃炎、胃潰瘍または十二指腸潰瘍のようなヘリコバクター・ピロリに関連する疾患を治療する際に使用される、生姜の根茎から抽出された有効産物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
中国の生薬またはスパイス、すなわち生姜（Zingiber officinale）、クローブ（Eugeniacaryophyllata）、にんにく（Alliumsativum）は、薬や食物の味付けに用いられてきた。粗生姜は、制吐薬や去痰薬、咳止め、消化促進剤として用いられる。セミドライの古い粗生姜はまた、胃痛、胸痛、腰痛、咳、普通感冒に用いられ、また、「水浮腫（"stagnate of water".）」と呼ばれる浮腫の形態の治療用いられる。
【０００３】
ジンゲロン（Zingerone）は、生姜の辛味の特徴の主な原因となる主成分であり；ジンジャオール（gingerol）およびショーガオール（shogaol）は、生姜中の他の辛味成分である。ジンジャオールは、強心作用を有し、マウスにおける摘出された門脈（isolated portal veins）の収縮を抑制し、マウスおよびラットの血管のエイコサノイド−誘起収縮を緩和する。ジンジャオールおよびショーガオールはいずれも突然変異原性があって、生姜（ginger）およびジンゲロンは、抗変異原活性を示すことが分かってきた。
【０００４】
ショーガオールは、カラゲニン浮腫および血小板凝集において阻害活性を有する（特許文献１；発明の背景）。特許文献２は、胃潰瘍用治療組成物およびそれを調整する工程について開示し、Aegle marmetosおよびWithania somnifraの植物部位から得られる抽出物および８つの植物からなる群から選択される少なくとも１つの部材の植物部位から得られる抽出物を含み、それの一つが生姜である。前記組成物の抽出物は、好ましくは、水性の抽出物である。
【０００５】
特許文献３は、病気予防に有用な抗ヘリコバクターピロリの有効産物ならびに胃炎ならびに胃および十二指腸潰瘍治療を開示し、カッコウ、センブリ、オウゴン、シソシ、ウイキョウ、カンキョウ、ビャクジュツ、サンショウ、コロンボ、ショウキョウ、モッコウ、クジン、アセンヤク、アロエ及びシャクヤクからなる群から選択される一以上の本草薬の使用を含む病気予防に有用な抗ヘリコバクターピロリ有効産物ならびに胃炎ならびに胃および十二指腸潰瘍治療を開示している。
【０００６】
ジンジャオールを含む生姜の根抽出物は、Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＣａｇＡ＋ｓｔｒａｉｎｓの成長を抑制することが記載されている（非特許文献１）。
【特許文献１】米国特許第５，８０４，６０３号明細書
【特許文献２】米国特許第６，８５５，３４７号明細書
【特許文献３】特開２００４−１１５５３６号公報
【非特許文献１】Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２３（５Ａ）：３６９９−３７０２，２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
生姜の根茎から調製されるヘリコバクター・ピロリに関する疾患の治療に使用される有効産物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
粗有機溶剤抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムにかけることで得られる水性の溶出液は、前記疾患を治療する際に非常に弱い効能を示し、比較的弱い極性を有する溶離剤の溶出液は向上した効能を有する。驚くべきことに、溶出液に６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールのいずれもがなくなるような弱い極性を有する溶離剤による溶出液は、非常に強い効能を示すことを見出した。この知見は、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールは、辛味成分であり、比較的不安定であるため、有効なものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明において調製される有効産物は、生姜の根茎由来の水性の粗抽出物または有機溶剤粗抽出物と比較して顕著に有意な効果がある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明を好適ないくつかの実施形態について詳細に説明する。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態は、これに制限されるものでないが、以下を含む。
【００１２】
１． 生姜の根茎由来の、治療上有効な量の有効産物を含むヘリコバクター・ピロリが関連する疾患の治療用薬剤組成物であって、
前記有効産物が、下記段階を含む工程：
ａ）６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、生姜の根茎由来の粗抽出物を調製する；
ｂ）粗抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムまたは順相クロマトグラフィーカラムに導入し、第１溶離剤、第２溶離剤の順でカラムから溶出し、この際、ｉ）逆相クロマトグラフィーカラムを使用するときは、前記第１溶離剤は、水よりも弱い極性を有し、および、前記第２溶離剤は、第１溶離剤よりも弱い極性を有し、または、ｉｉ）順相クロマトグラフィーカラムを用いるときは、前記第２溶離剤は、酢酸エチルおよびメタノールの混合物（１：１の質量比）よりも弱い極性を有し、および、前記第１溶離剤は、第２溶離剤よりも弱い極性を有し、第１溶離剤の溶出により第１溶出液および第２溶離剤の溶出により第２溶出液を得；さらに、
ｃ）エバポレーションにより、第１溶出液から第１溶離剤を除去し、第１濃縮溶出液を得、有効産物として使用し、または、エバポレーションにより、第２溶出液から第２溶離剤を除去し、第２濃縮溶出液を得、有効産物として使用し；
前記段階ａ）は、段階ｉ）〜ｉｖ）、または、段階Ｉ）、段階Ｉ’）もしくは段階Ｉ”）を含み、
前記段階ｉ）〜ｉｖ）は；
ｉ）新鮮な生姜の根茎をすりおろし、その結果生じた混合物をろ過し、ろ液および残渣を得；
ｉｉ）第１有機溶剤により、前記ろ液を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第１有機溶剤を蒸発させ、第１濃縮抽出溶液を得；
ｉｉｉ）第２有機溶剤により残渣を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第２有機溶剤を蒸発させ、第２濃縮抽出溶液を得；さらに、
ｉｖ）前記第１濃縮抽出溶液および前記第２濃縮抽出溶液を混ぜ、粗抽出物溶液を得；
前記段階Ｉ）は：
Ｉ）前記第２有機溶剤と同じ有機溶剤で、乾燥した生姜の根茎を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から前記有機溶剤を蒸発させ、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ’）は：
Ｉ’）乾燥した生姜の根茎を水蒸気蒸留し、エバポレーションにより生じる蒸留液を濃縮して、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ”）は：
Ｉ”）超臨界ＣＯ２にて生姜の根茎の乾燥粉末を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液からＣＯ２をエバポレーションして、粗抽出物を得る、
により調製される、薬剤組成物。
【００１３】
２．前記疾患は胃潰瘍である、上記１に係る薬剤組成物。
【００１４】
３．前記粗抽出物は、段階ｉ）〜ｉｖ）を含む方法により調製される、上記１または２に係る薬剤組成物。
【００１５】
４．前記第１有機溶剤が、エチルエーテルで、前記第２有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、上記３に係る薬剤組成物。
【００１６】
５．前記第２有機溶剤が、アセトンである、上記４に係る薬剤組成物。
【００１７】
６．前記粗抽出物が、段階Ｉ）を含む方法により調製される、上記１または２に係る薬剤組成物。
【００１８】
７．前記有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである上記６に係る薬剤組成物。
【００１９】
８．前記有機溶剤が、アセトン、エタノールまたはエタノールおよび水の混合物である、上記７に係る薬剤組成物。
【００２０】
９．前記逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、上記１に係る薬剤組成物。
【００２１】
１０．前記第１溶離剤が、メタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノール、エタノールおよび水の混合物、アセトンおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、上記９に係る薬剤組成物。
【００２２】
１１．前記第１溶離剤が、エタノールおよび水の混合物である、上記１０に係る薬剤組成物。
【００２３】
１２．前記逆相クロマトグラフィーカラムが、第１溶離剤の前に水またはエタノール２０質量％を含むエタノールおよび水の混合物で溶出される、上記１１に係る薬剤組成物。
【００２４】
１３．前記有効産物は、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、上記９に係る薬剤組成物。
【００２５】
１４．逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物は、前記第２濃縮溶出液であり、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、上記１、１０、１１または１２に係る薬剤組成物。
【００２６】
１５．前記第２溶離剤は、アセトン、アセトンおよび水の混合物、アセトンおよびメタノールの混合物、アセトンおよびエタノールの混合物、アセトンおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、炭素数４〜６のアルカン、メタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、エタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、またはこれらの組み合わせである、上記１４に係る薬剤組成物。
【００２７】
１６．前記第２溶離剤が、アセトンである、上記１５に係る薬剤組成物。
【００２８】
１７．前記第２濃縮溶出液に、ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、上記１４に係る薬剤組成物。なお、「ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない」とは、「全く存在しない」との概念のみならず、「実質的にジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない」との概念をも含む。具体的には、下記実施例で規定されているＨＰＬＣ分析の検出限界を超える値を意味する。
【００２９】
１８．前記第２濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールいずれも存在しない、上記１４に係る薬剤組成物。なお、「６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールいずれも存在しない」とは、上記と同様、「全く存在しない」との概念のみならず、「実質的にジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない」との概念をも含む。具体的には、下記実施例で規定されているＨＰＬＣ分析の検出限界を超える値を意味する。
【００３０】
１９．前記順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）よりも極性が弱い、上記１に係る薬剤組成物。
【００３１】
２０．前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比９：１）と近い極性を有する、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３２】
２１．第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比９：１）である、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３３】
２２．前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３４】
２３．前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールのいずれも存在しない、上記１９に係る薬剤組成物。
【００３５】
２４．前記順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第２濃縮溶出液であり、前記第２溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）の極性と近いまたは同じ、そして、前記第２濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、上記１に係る薬剤組成物。
【００３６】
２５．前記第２溶離剤は、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）である、上記２４に係る薬剤組成物。
【００３７】
２６．前記薬剤組成物は、さらに、希釈剤、賦形剤または担体を含んでもよい。
【００３８】
上記発明は、生姜の根茎由来の、治療上有効な量の有効産物を含むヘリコバクター・ピロリが関連する疾患の治療用薬剤組成物の製造方法としても、好ましい。
【００３９】
本願出願人は、イギリス特許第２３６６５６５号において、消炎、抗血小板凝集および抗真菌活性に有効な生姜由来の抽出物を調製する方法であって、下記段階を含むものを開示する：
有機溶剤もしくは超臨界ＣＯ２または蒸気による蒸留によって抽出された生姜の根茎由来の粗液を調製し；
前記粗液を、逆相クロマトグラフィーカラムに導入し、水、第１溶離剤、第１溶離剤よりも低い極性を有するがクロロホルムよりも高い極性を有する第２溶離剤により、カラムで溶出し、第１溶離剤の溶離により第１溶出液と、第２溶離剤の溶離により第２溶出液と、を得；
エバポレーションにて、第１溶出液および第２溶出液から、それぞれ、第１溶離剤および第２溶離剤を除去し、有効な抽出物として、第１濃縮溶出液および第２濃縮溶出液を得る。
【００４０】
本発明をさらに実施例を以って詳しく説明するが、これに制限されるものではない。なお、パーセントおよび他の量は、特に記載がなければ、すべて質量とする。また、全量は１００％とする。
【実施例】
【００４１】
［実施例１］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０の篩に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間、還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ａと残渣を得た。前記残渣を９５％エタノールと混ぜ（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００４２】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃のウォーターバスで濃縮し、「ＲｏｔａｖａｐｏｒＲ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空にして濃縮した。その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）Ｄｉａｉｏｎ（登録商標）を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）に導入し、「水 ５ベッドボリューム、４０％エタノール ４ベッドボリュームおよびアセトン ４ベッドボリューム」をこの順で抽出した。
【００４３】
４０％エタノールで溶出した溶出液およびアセトンで溶出した溶出液を、それぞれ回収した。
【００４４】
４０％エタノールで溶出した溶出液を、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、次いで、８０℃ウォーターバスで１時間再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１を得た。
【００４５】
アセトンで溶出した溶出液を、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル２を得た。
【００４６】
［実施例２］
４０％エタノール溶離剤を７０％エタノールに置き換えた以外は、実施例１の手順と同様に行った。
【００４７】
サンプル３は、７０％エタノールで溶出することにより得、サンプル４は、アセトンで溶出することにより得た。
【００４８】
［実施例３］
４０％エタノールの溶離剤を９５％エタノールに置き換えた以外は、実施例１の手順と同様に行い、サンプル５を得た。
【００４９】
［実施例４］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ａと残渣を得た。
【００５０】
前記残渣を、９５％エタノールに混合し（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００５１】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスにて濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、当初の１／５の質量になるようにした。
【００５２】
その結果生じた濃縮物の４倍の質量の水を、当初の質量に戻るように加え、その結果生じた液体を、逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）にかけ、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍に相当するＤｉａｉｏｎ（登録商標）を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）ＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）に導入し、「２０％ エタノール １ベッドボリュームおよび７０％エタノール ４ベッドボリューム」の順で溶離した。
【００５３】
７０％エタノールで溶出した溶出液を回収し、「ＲｏｔａｖａｐｏｒＲ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル６を得た。
【００５４】
［実施例５］
７０％エタノール溶離剤を９５％エタノールに置き換えた以外は、実施例４の手順と同様の方法を行い、サンプル７を得た。
【００５５】
［実施例６］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合させ、その結果生じた混合物を、ホモゲナイザー ２０００ｒｐｍ（ＴｙｐｅＸ５０／１０，Ｙｓｔｒａｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で、１時間で攪拌し、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。
【００５６】
前記残渣を、９５％エタノールと混合し（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、１時間、ホモゲナイザー ２０００ｒｐｍで攪拌し、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００５７】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスにて濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、当初の質量の１／５にした。その結果生じた濃縮物の質量の４倍の水を、当初の質量に戻るように加えた。
【００５８】
その結果生じた液体を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＤｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰ−２０（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）樹脂を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍ×９０ｃｍ）に導入し、「２０％エタノール １ベッドボリュームおよび７０％エタノール ４ベッドボリューム」の順で溶離した。
【００５９】
７０％エタノールで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル８を得た。
【００６０】
［実施例７］
７０％エタノールの溶離剤を９５％エタノールに置き換えた以外は、実施例６の手順の同様の方法でサンプル９を得た。
【００６１】
［実施例８］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０の篩に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、アセトン ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰させ、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。
【００６２】
前記残渣を、アセトンに混合し（質量比 １：８）、その結果生じた混合物を、１時間還流下で、沸騰させ、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００６３】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスで濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮した。
【００６４】
その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＤｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）が充填した逆相クロマトグラフィーカラム（７．１ｃｍｘ９０ｃｍ）に導入し、「水 ５ベッドボリューム、４０％エタノール ４ベッドボリュームおよびアセトン ２ベッドボリューム」の順で溶離した。
【００６５】
アセトンで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空乾燥し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１０を得た。
【００６６】
［実施例９］
４０％エタノールの溶離剤を７０％エタノールに置き換えた以外は、実施例８の手順と同様に行いサンプル１１を得た。７０％エタノールで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１１を得た。
【００６７】
［実施例１０］
粉末および残渣を、アセトンの代わりに酢酸エチルで沸騰させた（還流させた）以外は、実施例８の手順と同様に行い、サンプル１２を得た。
【００６８】
［実施例１１］
粉末および残渣を、アセトンの代わりに酢酸エチルで沸騰させた（還流させた）以外は、実施例９の手順と同様の方法を行い、サンプル１３を得た。
【００６９】
［実施例１２］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０の篩に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰し、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。前記残渣を、９５％エタノールに混合し（質量比１：８）、ろ液Ｂを得た。
【００７０】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、７０℃ウォーターバスで濃縮し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮した。
【００７１】
その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の質量の２０倍のシリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を充填した順相クロマトグラフィーカラムに導入し、「ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの混合溶離剤（９：１） ４ベッドボリューム、ｎ−ヘキサン：酢酸エチルの混合溶離剤（６：４） ３ベッドボリュームおよび酢酸エチル：メタノールの混合溶離剤（１：１） ２ベッドボリューム」をこの順で溶離した。
【００７２】
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（９：１）の溶離による溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスにて再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル１４を得た。
【００７３】
サンプル１４を得るのと同様の手順により、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（６：４）、酢酸エチル：メタノール（１：１）により、サンプル１５およびサンプル１６を得た。
【００７４】
［実施例１３］
９５％エタノールをアセトンに置き換えた以外は、実施例１２の手順と同様に行った。
【００７５】
サンプル１７、サンプル１８およびサンプル１９は、「ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：４，および酢酸エチル：メタノール＝１：１」でそれぞれ溶離して得た。
【００７６】
［実施例１４］
スライスし陰干した生姜の根茎を粉砕し、篩の目開きメッシュＮｏ．１０に通した。その結果生じた粉末 １質量部を、９５％エタノール ８質量部と混合し、その結果生じた混合物を、１時間還流下で沸騰し、ろ過し、ろ液Ａおよび残渣を得た。
【００７７】
前記残渣を、９５％エタノールと混合し（質量比１：８）、その結果生じた混合物を、還流下で沸騰し、ろ過し、ろ液Ｂを得た。
【００７８】
ろ液Ａおよびろ液Ｂを合わせ、薄膜バキュームエバポレーター（ＣＥＰ−Ｌ，ＯｋａｗａｒａＭｆｇ．Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）にて濃縮し、当初の質量の１／５にした。
【００７９】
その結果生じた濃縮物を、前記濃縮物の乾燥質量の２０倍の量のＤｉａｉｏｎ（登録商標）ＨＰ−２０樹脂（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）を充填した逆相クロマトグラフィーカラム（３４．５ｃｍ×１００ｃｍ）に導入し、「９５％エタノール ２ベッドボリュームおよびアセトン ２ベッドボリューム」を順に、溶離した。
【００８０】
アセトンで溶出した溶出液を回収し、「Ｒｏｔａｖａｐｏｒ Ｒ−２２０，ＢＵＣＨＩ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ」にて真空濃縮し、８０℃ウォーターバスで再度濃縮し、１時間真空濃縮（４０ｍｂａｒ）し、サンプル２０を得た。
【００８１】
ＨＰＬＣ分析サンプル調製：
サンプルを秤量し、サンプルボトルに入れ、１０ｍｇ／ｍｌの濃度のサンプル溶液になるようにメタノールで希釈した。
【００８２】
０．４５μｍろ紙で、サンプル溶液をろ過し、ＨＰＬＣでろ液を分析した。
【００８３】
【表１】
【００８４】
上記に調製されたサンプル１〜サンプル２０のＨＰＬＣ分析の結果を、図１〜図２０に示す。
【００８５】
サンプル中の６−ジンジャオールおよび６−ショーガオール成分（ｍｇ／ｇ）をＨＰＬＣ分析で算出し、サンプル調製の使用した抽出条件および溶離条件とともに表１にリストアップした。
【００８６】
【表２−１】
【００８７】
【表２−２】
【００８８】
サンプル１〜１３および２０は、逆相クロマトグラフィーカラムを用いて調製した。
【００８９】
図１〜４に示すＨＰＬＣ分析の特徴と比較して、４０％エタノールで溶出した溶出液は、６−ジンジャオールよりも強い極性を有する化合物を含み（サンプル１）、７０％エタノールで溶出した溶出液は、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールよりも強い極性を有する化合物を含み（サンプル３）、アセトンで溶出した溶出液は、比較的弱い極性を有する残りの化合物であることが分かる（サンプル２およびサンプル４）。
【００９０】
図６および図７を見ると、溶離剤として７０％エタノールを使用したものと比較して、９５％エタノールを使用したものは、より右側にピークが見られることが分かる。同様の傾向が、抽出条件は異なるものの、図６および７のように図８および９で観察できる。
【００９１】
図１０および１２に示す特徴は、抽出条件は異なるが、溶離条件が同じである点、図２に示すそれと似ている。
【００９２】
図１１および１３に示す特徴は、抽出条件は異なるが、溶離条件が同じである点、図３に示すそれと似ている。
【００９３】
サンプル２０は、弱い極性を有する化合物を多く含み、図２０に示すように６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを観察することができず、それは、９５％エタノール溶離剤が、逆相クロマトグラフィーカラムから、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む比較的強い極性を有するものを溶出したことを示唆する。
【００９４】
サンプル１３〜１５は、ＨＰＬＣ分析において、抽出条件が異なるが、順相クロマトグラフィーカラムの溶離条件が同じである点、サンプル１６〜１９と似ている（図１３〜１９）。
【００９５】
ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１溶離剤を使用すると、図１４（図１６）で示すように、サンプル１４（サンプル１６）の成分の殆どが無極性化合物であり、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝６：４溶離剤を使用すると、サンプル１５（サンプル１７）は、かなりの量の６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む。
【００９６】
１．抗菌試験
ヘリコバクター・ピロリにおけるサンプルの最小（発育）阻止濃度（ＭＩＣ）は、寒天希釈法［Malanosk G.J. et al. Effect of pH variation on the susceptibility of Helicobacter pylori to three marcolide antimicrobial agents and temafloxacin. Eur. J. Clin. Microbial Infect Dis. 12: pp. 131-133, 1993.］により測定した。
【００９７】
前記検体を溶解し、ＤＭＳＯに連続的に希釈し、所望の濃度にした。
【００９８】
それぞれの濃度試験のために、７％のウサギの脱線維素血液が培地されたＣｏｌｕｍｂｉａａｇａｒｂａｓｅ（Ｏｘｏｉｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ）０．９９ｍｌ含む４８−ｗｅｌｌｐｌａｔｅに、アリコート０．０１ｍｌを加える。
【００９９】
ヘリコバクター・ピロリ（ＡＴＣＣ４３５０４）接種材料は、５×１０５ＣＦＵ／ｍｌの密度のブレインハートインフュージョン培養液に懸濁させることで、調製する。
【０１００】
ＤＭＳＯの最終的な最大濃度は、１％であり、最初の検体濃度は、３００μｇ／ｍｌである。
【０１０１】
前記プレートを、微好気的条件（混合ガスＮ２ ８５％，ＣＯ２ １０％およびＯ２ ５％）３５℃７２時間培養し、視診し、コロニー増殖の抑制を、「陽性（＋）」とスコア−し、コロニー増殖の影響がない場合、「陰性（−）」とした。
【０１０２】
担体−対照およびゲンタマイシンを、それぞれブランクおよび陽性対照として使用した。
【０１０３】
各濃度は、２回評価した。
【０１０４】
結果を表２に示す。
【０１０５】
【表３】
【０１０６】
２．ヘリコバクター・ピロリ誘起胃潰瘍
ヘリコバクター・ピロリ−誘起胃潰瘍におけるサンプルの影響は、先に示されている［[Marchetti, M., Arico, B., Burroni, D., Figura, N., Rappuoli, R. and Ghiara, P. Development of a mouse model of Helicobacter pylori infection that mimics human disease. Science 267: 1655-1658, 1995.］により評価する。
【０１０７】
質量２４±２ｇのマウスで分けられた５つのオスのＣＤ−１（Ｃｒｌ．）の群は、「３．２×１０９コロニー形成ユニット／０．４ｍｌ／ｍｏｕｓｅ」の懸濁における臨床分離されたヘリコバクター・ピロリの胃内接種の前に１８時間絶食させた。
【０１０８】
ヘリコバクター・ピロリ接種の１時間後、７日連続で１日２回（１０：００ａｍおよび４：００ｐｍ）試験サンプルおよび担体（２％ＣＭＣ，１０ｍｌ／ｋｇ）が、それぞれ試験動物に経口投与された。
【０１０９】
オメプラゾール（Ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅ）（１ｍｇ／ｋｇ）と、クラリスロマイシン（ｃｌａｒｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ）（１０ｍｇ／ｋｇ）と、が組み合わされ、陽性の制御因子のために使用され、一日一回７日連続で同じスケジュールの下、試験動物に経口投与した。
【０１１０】
感染８日後、すべての動物を夜通し絶食させ、殺し、大弯に沿って胃を解剖した。
【０１１１】
胃潰瘍性は、出血および潰瘍性病巣の重篤性の程度により４つのレベルにスコアした。
【０１１２】
０＝通常の外見
１＝緩やかな赤い点
２＝適度な赤い点および／または出血点
３＝著しい出血点
ヘリコバクター・ピロリ-誘起胃潰瘍における抑制性の割合は、下記の通り、算出することができる。
【０１１３】
（担体群スコア-試験群スコア）／（担体群スコア）×１００％
結果を表３に示す。
【０１１４】
【表４】
【０１１５】
上記実施例により調製されたサンプル中ヘリコバクター・ピロリに誘起された胃潰瘍治療において、サンプル１のみ６−ジンジャオールより効果が弱かった。
【０１１６】
サンプル２０が、一番効果があり１００ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇの投与においてヘリコバクター・ピロリ-誘起胃潰瘍の抑制性が、それぞれ８３％，７５％，６７％および５０％であった。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】サンプル１のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図２】サンプル２のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図３】サンプル３のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図４】サンプル４のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図５】サンプル５のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図６】サンプル６のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図７】サンプル７のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図８】サンプル８のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図９】サンプル９のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１０】サンプル１０のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１１】サンプル１１のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１２】サンプル１２のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１３】サンプル１３のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１４】サンプル１４のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１５】サンプル１５のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１６】サンプル１６のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１７】サンプル１７のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１８】サンプル１８のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図１９】サンプル１９のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【図２０】サンプル２０のＨＰＬＣ分析の結果を示したものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生姜（Zingiber officinale）の根茎由来の、治療上有効な量の有効産物を含むヘリコバクター・ピロリが関連する疾患の治療用薬剤組成物であって、
前記有効産物が、下記段階を含む工程：
ａ）６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、生姜の根茎由来の粗抽出物を調製する；
ｂ）粗抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムまたは順相クロマトグラフィーカラムに導入し、第１溶離剤、第２溶離剤の順でカラムから溶出し、この際、ｉ）逆相クロマトグラフィーカラムを使用するときは、前記第１溶離剤は、水よりも弱い極性を有し、および、前記第２溶離剤は、第１溶離剤よりも弱い極性を有し、または、ｉｉ）順相クロマトグラフィーカラムを用いるときは、前記第２溶離剤は、酢酸エチルおよびメタノールの混合物（１：１の質量比）よりも弱い極性を有し、および、前記第１溶離剤は、第２溶離剤よりも弱い極性を有し、第１溶離剤の溶出により第１溶出液および第２溶離剤の溶出により第２溶出液を得；さらに、
ｃ）エバポレーションにより、第１溶出液から第１溶離剤を除去し、第１濃縮溶出液を得、有効産物として使用し、または、エバポレーションにより、第２溶出液から第２溶離剤を除去し、第２濃縮溶出液を得、有効産物として使用し；
前記段階ａ）は、段階ｉ）〜ｉｖ）、または、段階Ｉ）、段階Ｉ’）もしくは段階Ｉ”）を含み、
前記段階ｉ）〜ｉｖ）は；
ｉ）生姜の根茎をすりおろし、その結果生じた混合物をろ過し、ろ液および残渣を得；
ｉｉ）第１有機溶剤により、前記ろ液を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第１有機溶剤を蒸発させ、第１濃縮抽出溶液を得；
ｉｉｉ）第２有機溶剤により残渣を抽出し、抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第２有機溶剤を蒸発させ、第２濃縮抽出溶液を得；さらに、
ｉｖ）前記第１濃縮抽出溶液および前記第２濃縮抽出溶液を混ぜ、粗抽出物溶液を得；
前記段階Ｉ）は：
Ｉ）前記第２有機溶剤と同じ有機溶剤で、乾燥した生姜の根茎を抽出し、抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から前記有機溶剤を蒸発させ、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ’）は：
Ｉ’）乾燥した生姜の根茎を水蒸気蒸留し、エバポレーションにより生じる蒸留液を濃縮して、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ”）は：
Ｉ”）超臨界ＣＯ２にて生姜の根茎の乾燥粉末を抽出し、抽出溶液を回収し、前記抽出溶液からＣＯ２をエバポレーションして、粗抽出物を得る、
により調製される、薬剤組成物。
【請求項２】
前記疾患は胃潰瘍である、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
前記粗抽出物は、段階ｉ）〜ｉｖ）を含む方法により調製される、請求項１または２に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
前記第１有機溶剤が、エチルエーテルで、前記第２有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、請求項３に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
前記第２有機溶剤が、アセトンである、請求項４に記載の薬剤組成物。
【請求項６】
前記粗抽出物が、段階Ｉ）を含む方法により調製される、請求項１または２に記載の薬剤組成物。
【請求項７】
前記有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである請求項６に記載の薬剤組成物。
【請求項８】
前記有機溶剤が、アセトン、エタノールまたはエタノールおよび水の混合物である、請求項７に記載の薬剤組成物。
【請求項９】
前記逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
前記第１溶離剤が、メタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノール、エタノールおよび水の混合物、アセトンおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
前記第１溶離剤が、エタノールおよび水の混合物である、請求項１０に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
前記逆相クロマトグラフィーカラムが、第１溶離剤の前に水またはエタノール２０質量％を含むエタノールおよび水の混合物で溶出される、請求項１１に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
前記有効産物は、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項１４】
逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物は、前記第２濃縮溶出液であり、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、請求項１、１０、１１または１２に記載の薬剤組成物。
【請求項１５】
前記第２溶離剤は、アセトン、アセトンおよび水の混合物、アセトンおよびメタノールの混合物、アセトンおよびエタノールの混合物、アセトンおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、炭素数４〜６のアルカン、メタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、エタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、またはこれらの組み合わせである、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１６】
前記第２溶離剤が、アセトンである、請求項１５に記載の薬剤組成物。
【請求項１７】
前記第２濃縮溶出液に、ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１８】
前記第２濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールいずれも存在しない、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１９】
順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）よりも極性が弱い、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項２０】
前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比９：１）である、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２１】
前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２２】
前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールのいずれも存在しない、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
前記順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第２濃縮溶出液であり、前記第２溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）であり、前記第２濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項２４】
前記第２溶離剤は、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）である、請求項２３に記載の薬剤組成物。
【請求項２５】
希釈剤、賦形剤または担体をさらに含む、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項１】
生姜（Zingiber officinale）の根茎由来の、治療上有効な量の有効産物を含むヘリコバクター・ピロリが関連する疾患の治療用薬剤組成物であって、
前記有効産物が、下記段階を含む工程：
ａ）６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、生姜の根茎由来の粗抽出物を調製する；
ｂ）粗抽出物を、逆相クロマトグラフィーカラムまたは順相クロマトグラフィーカラムに導入し、第１溶離剤、第２溶離剤の順でカラムから溶出し、この際、ｉ）逆相クロマトグラフィーカラムを使用するときは、前記第１溶離剤は、水よりも弱い極性を有し、および、前記第２溶離剤は、第１溶離剤よりも弱い極性を有し、または、ｉｉ）順相クロマトグラフィーカラムを用いるときは、前記第２溶離剤は、酢酸エチルおよびメタノールの混合物（１：１の質量比）よりも弱い極性を有し、および、前記第１溶離剤は、第２溶離剤よりも弱い極性を有し、第１溶離剤の溶出により第１溶出液および第２溶離剤の溶出により第２溶出液を得；さらに、
ｃ）エバポレーションにより、第１溶出液から第１溶離剤を除去し、第１濃縮溶出液を得、有効産物として使用し、または、エバポレーションにより、第２溶出液から第２溶離剤を除去し、第２濃縮溶出液を得、有効産物として使用し；
前記段階ａ）は、段階ｉ）〜ｉｖ）、または、段階Ｉ）、段階Ｉ’）もしくは段階Ｉ”）を含み、
前記段階ｉ）〜ｉｖ）は；
ｉ）生姜の根茎をすりおろし、その結果生じた混合物をろ過し、ろ液および残渣を得；
ｉｉ）第１有機溶剤により、前記ろ液を抽出し、前記抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第１有機溶剤を蒸発させ、第１濃縮抽出溶液を得；
ｉｉｉ）第２有機溶剤により残渣を抽出し、抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から第２有機溶剤を蒸発させ、第２濃縮抽出溶液を得；さらに、
ｉｖ）前記第１濃縮抽出溶液および前記第２濃縮抽出溶液を混ぜ、粗抽出物溶液を得；
前記段階Ｉ）は：
Ｉ）前記第２有機溶剤と同じ有機溶剤で、乾燥した生姜の根茎を抽出し、抽出溶液を回収し、前記抽出溶液から前記有機溶剤を蒸発させ、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ’）は：
Ｉ’）乾燥した生姜の根茎を水蒸気蒸留し、エバポレーションにより生じる蒸留液を濃縮して、粗抽出物を得；
前記段階Ｉ”）は：
Ｉ”）超臨界ＣＯ２にて生姜の根茎の乾燥粉末を抽出し、抽出溶液を回収し、前記抽出溶液からＣＯ２をエバポレーションして、粗抽出物を得る、
により調製される、薬剤組成物。
【請求項２】
前記疾患は胃潰瘍である、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
前記粗抽出物は、段階ｉ）〜ｉｖ）を含む方法により調製される、請求項１または２に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
前記第１有機溶剤が、エチルエーテルで、前記第２有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、請求項３に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
前記第２有機溶剤が、アセトンである、請求項４に記載の薬剤組成物。
【請求項６】
前記粗抽出物が、段階Ｉ）を含む方法により調製される、請求項１または２に記載の薬剤組成物。
【請求項７】
前記有機溶剤が、アセトン、メタノール、エタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノールおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである請求項６に記載の薬剤組成物。
【請求項８】
前記有機溶剤が、アセトン、エタノールまたはエタノールおよび水の混合物である、請求項７に記載の薬剤組成物。
【請求項９】
前記逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
前記第１溶離剤が、メタノール、メタノールおよび水の混合物、エタノール、エタノールおよび水の混合物、アセトンおよび水の混合物またはこれらの組み合わせである、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
前記第１溶離剤が、エタノールおよび水の混合物である、請求項１０に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
前記逆相クロマトグラフィーカラムが、第１溶離剤の前に水またはエタノール２０質量％を含むエタノールおよび水の混合物で溶出される、請求項１１に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
前記有効産物は、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項１４】
逆相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物は、前記第２濃縮溶出液であり、第１溶離剤が、エタノール４０質量％を含むエタノールおよび水の混合物よりも弱い極性を有する、請求項１、１０、１１または１２に記載の薬剤組成物。
【請求項１５】
前記第２溶離剤は、アセトン、アセトンおよび水の混合物、アセトンおよびメタノールの混合物、アセトンおよびエタノールの混合物、アセトンおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、炭素数４〜６のアルカン、メタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、エタノールおよび炭素数４〜６のアルカンの混合物、またはこれらの組み合わせである、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１６】
前記第２溶離剤が、アセトンである、請求項１５に記載の薬剤組成物。
【請求項１７】
前記第２濃縮溶出液に、ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１８】
前記第２濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールいずれも存在しない、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１９】
順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第１濃縮溶出液であり、前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）よりも極性が弱い、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項２０】
前記第１溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比９：１）である、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２１】
前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールまたは６−ショーガオールが存在しない、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２２】
前記第１濃縮溶出液に、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールのいずれも存在しない、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
前記順相クロマトグラフィーカラムを用いるときに、前記有効産物が、前記第２濃縮溶出液であり、前記第２溶離剤が、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）であり、前記第２濃縮溶出液が、６−ジンジャオールおよび６−ショーガオールを含む、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項２４】
前記第２溶離剤は、ｎ−ヘキサンおよび酢酸エチルの混合物（質量比６：４）である、請求項２３に記載の薬剤組成物。
【請求項２５】
希釈剤、賦形剤または担体をさらに含む、請求項１に記載の薬剤組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【公開番号】特開２００９−９６７８９（Ｐ２００９−９６７８９Ａ）
【公開日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−３０１９１６（Ｐ２００７−３０１９１６）
【出願日】平成１９年１１月２１日（２００７．１１．２１）
【出願人】（５００３９００３２）財団法人醫藥工業技術發展中心 (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年５月７日（２００９．５．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月２１日（２００７．１１．２１）
【出願人】（５００３９００３２）財団法人醫藥工業技術發展中心 (3)
【Ｆターム（参考）】
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