ボラノホスフェートモノマー
【課題】ボラノホスフェートオリゴマーの効率的な製造に有用なボラノホスフェートモノマーを提供する。
【解決手段】下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］。
【解決手段】下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ボラノホスフェートモノマー及びそれの製造方法並びにボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在遺伝子治療の分野で注目されている手法の一つにアンチセンス法がある。アンチセンス法とは、ｍＲＮＡに相補的な塩基配列を持つアンチセンス分子を用いてＤＮＡから転写されたｍＲＮＡと選択的に二重鎖を形成させ、標的とするタンパク質合成のみを制御する方法である。
【０００３】
ここで、アンチセンス分子が有効に機能するための必要条件として、第一に高い細胞膜透過性を有していること、第二に細胞内でヌクレアーゼによる加水分解を受けにくいこと、第三に特定のｍＲＮＡとのみ選択的に安定な二重鎖を形成できることなどが挙げられる。
【０００４】
しかし、天然型のアンチセンス分子は、生体内に導入されると、ヌクレアーゼにより速やかに加水分解される上、細胞膜透過性が低いという問題点がある。そこで、より有用なアンチセンス分子の設計及びその効率的な製造方法の開発が求められていた。
【０００５】
これまで多くのアンチセンス分子が設計され、合成されてきたが、その中で現在、実用化に向けて研究されているホスホロチオエートＤＮＡには、細胞毒性がある、選択性が低いといった問題点があった。
【０００６】
近年、新しい骨格のアンチセンス分子であるボラノホスフェートオリゴマーが開発されている。この分子は、例えば、
（１）リン原子がボランに配位しているため、天然型のものと比較して脂溶性が高く、高い細胞膜透過性が期待できる、
（２）ヌクレアーゼに対する耐性が高い、
（３）標的ｍＲＮＡに対する選択性が高い、
（４）ボラノホスフェートＤＮＡとＲＮＡが形成する二重鎖がＲＮａｓｅＨの基質となり、標的ｍＲＮＡが効果的に分解される、
（５）ホウ素中性子補捉療法（ＢＮＣＴ）への応用が期待できる、
といった有利な特徴を持つことで知られており、実用的なアンチセンス分子として注目されてきている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、従来開発されたボラノホスフェートオリゴマーに見られた問題点、即ち、
（ｉ） 鎖を延長するたびにボラノ化を繰り返し行わなければならない、
（ｉｉ）ボラノ化試薬による核酸塩基部位への副反応
といった問題点を排除した手法、即ち、下記式で示される、予めボラノ化したモノマーを用いてオリゴヌクレオチドを合成する手法を報告してきた（日本化学会第７８回年会予稿集７４６頁（２０００年）、日本化学会第７９回年会予稿集９４２頁（２００１年）、日本化学会第８１回年会予稿集９３７頁（２００２年）、アンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡ研究会予稿集４８頁（２００２年）、日本化学会第８３回年会予稿集９４４頁（２００３年）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．４３（２００２）４２３７）。
【化１】
［式中、ＤＭＴｒは、ジメトキシトリチル基を示す。］
【０００８】
しかしながら、この手法によれば、上記問題点（ｉ）及び（ｉｉ）は解決されるものの、リン原子上の保護基を除去する際に、オリゴヌクレオチドが分解してしまうという致命的な問題が生ずることがわかった。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで、上記問題点（ｉ）及び（ｉｉ）を解決しつつ、かつ実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供する手法が望まれていた。
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意検討した結果、リン原子上の保護基としてシアノエチル基を用いることで、オリゴヌクレオチドを分解させずに保護基を除去することができることを見出し、更に、このような嵩高い保護基を用いることによってオリゴマーの縮合が阻害されることを見出し、この点については、塩基と、特殊な縮合剤との存在下で縮合反応をさせることにより解決できることを見出し、本発明を完成させた。
即ち、本発明の第１態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーが提供される。
【００１１】
【化２】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
【００１２】
本発明の第２態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを製造する方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第２態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法であって、
【化３】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
シアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、
【化４】
［式中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ7-は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
【化５】
［式中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ15-は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、
【化６】
下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体と
【化７】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
を反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、ボラノホスフェートモノマーの製造方法が提供される。
【００１３】
本発明の第２態様において、前記ボラノホスホリル化剤が、トリス−２−シアノエチルホスファイトをボラノ化して下記式で示されるトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得、
【化８】
得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミンを反応させることにより得られることが好ましい。
【００１４】
本発明の第３態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いた二量体の製造方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第３態様では、下記一般式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと
【化９】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
上記式（１）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、
【化１０】
［式中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ7-は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
【化１１】
［式中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ15-は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体と
【化１２】
［式中、Ｂ2は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ3は、保護基を表し、Ｒ4は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
を反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法が提供される。
【化１３】
［式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、前記と同義を表す。］
【００１５】
本発明の第３態様では、前記強塩基が、下記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体であってもよい。
【化１４】
［式中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基であり、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、電子供与基である。］
【００１６】
この場合、前記式（７ａ）中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4が、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であり、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10が、水素原子、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又はＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であることが好ましい。
【００１７】
また、本発明の第３態様では、前記縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物であってもよく、この場合は、前記式（４ａ）中のＱ環基が、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であり、Ａ7-が、ＰＦ6-、ＢＦ4-、ＣｌＯ4-、ＣＦ3ＳＯ2Ｏ-、又は、（ＣＦ3ＳＯ2）2Ｎ-であることが好ましい。
【００１８】
また、本発明の第３態様では、前記縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物であり、前記強塩基が下記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体であってもよい。
【化１５】
［式中、Ｙ1は、水素原子、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又は、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、Ｙ2及びＹ3は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基である。］
【００１９】
この場合、前記式（４ｂ）中のＳ環基が、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であり、Ａ15-が、ＰＦ6-、ＢＦ4-、ＣｌＯ4-、ＣＦ3ＳＯ2Ｏ-、又は、（ＣＦ3ＳＯ2）2Ｎ-であることが好ましく、また、前記式（７ｂ）中、Ｙ1が水素原子、又は、メチル基であり、Ｙ2及びＹ3が、メチル基であることが好ましい。
【００２０】
本発明の第４態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法の一態様が提供される。即ち、下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、
【化１６】
［式中、Ｂ1及びＢ2は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2及びＲ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基であり、Ｒ3は、保護基であり、ｎは１以上の整数を示す。］
脱保護試薬とを反応させて、Ｒ1を脱離させた後、上記式（８）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）、又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、
【化１７】
［式中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ7-は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
【化１８】
［式中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ15-は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと
【化１９】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記と同義である。］
を反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が提供される。
【化２０】
［式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びｎは、前記と同義を表す。］
【００２１】
本発明の第４態様において、反応が固相で行われることが好ましい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明により、従来開発されたボラノホスフェートオリゴマーに見られた問題点を解決しつつ、かつ実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供することが可能となる。本発明により得られるボラノホスフェートオリゴマーはアンチセンス分子として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の第１態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーが提供される。
【化２１】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００２４】
上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、リン原子上の保護基がシアノエチル基であるため、アンモニア等を用いて保護基を除去する場合、シアノエチル基はβ脱離によって除去される。このため、当該ボラノホスフェートモノマーを用いてオリゴマーを得た後にこの保護基を除去しても、オリゴマーを分解させることはない。したがって、本発明により、実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供することが可能となる。
【００２５】
上記式中、Ｂ1は、チミン、シトシン、ウラシル等のピリミジン塩基；アデニン、グアニン等のプリン塩基；または５−メチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルシトシン等のそれらの誘導体を表す。
【００２６】
溶媒への溶解度を向上させるために、塩基部位に、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（ＰＡＣ）、４−（ｔ−ブチル）フェノキシアセチル（ＢＰＡ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、２−［（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）メチル］ベンゾイル（ＳｉＯＭＢ）、２−（アセチルメチル）ベンゾイル（ＡＭＢ）、２−アジドベンゾイル（ＡＺＭＢ）、ジフェニルカルバモイル（ＤＰＣ）、フェニルアセチル（ＰＡ）等の保護基を導入してもよい。
【００２７】
本発明の第１態様において、Ｂ1は、シトシン、チミン、アデニン、グアニンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらに保護基が導入されたものであることが好ましい。
上記式中、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、又は、モノメトキシトリチル基である。
【００２８】
本発明の第１態様において、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基であることが好ましい。
【００２９】
上記式中、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。
【００３０】
本明細書において、「アルコキシ基」としては、制限するわけではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ等を挙げることができる。
【００３１】
本明細書において、「アルケニルオキシ基」としては、制限するわけではないが、ビニルオキシ、アリルオキシ、１−プロペニルオキシ、イソプロペニルオキシ、２−メチル−１−プロペニルオキシ、２−メチルアリルオキシ、２−ブテニルオキシ等を挙げることができる。
【００３２】
本明細書において、「アシルオキシ基」としては、制限するわけではないが、Ｃ1-6アルキル−カルボニルオキシ（たとえばメチルカルボニルオキシ、エチルカルボニルオキシ等）、Ｃ6-10アリール−カルボニルオキシ（たとえばベンゾイルオキシ）などが挙げられる。
【００３３】
本明細書において、「トリアルキルシリルオキシ基」としては、制限するわけではないが、トリメチルシリルオキシ基、トリエチルシリルオキシ基などを挙げることができる。
【００３４】
本発明の第１態様において、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、トリアルキルシリルオキシ基であることが好ましい。
【００３５】
本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーをＲＮＡ誘導体合成のために使用する場合には、Ｒ2はトリアルキルシリルオキシ基であることが好ましく、ｔ−ブチルジメチルシリル基であることがより好ましい。
【００３６】
本発明の第２態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを製造する方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第２態様では、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法が提供される。
【００３７】
【化２２】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００３８】
本発明の第２態様において、上記式中のＢ1、Ｒ1及びＲ2についての説明は、本発明の第１態様〜第２態様においてしたのと同様である。
【００３９】
本発明の第２態様では、下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤が用いられる。
【化２３】
【００４０】
また、本発明の第２態様では、下記一般式（３）で示されるヌクレオシド誘導体が用いられる。
【化２４】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００４１】
本発明の第２態様において、使用される上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤の量は、ボラノホスホリル化反応を定量的に進行させるために、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
【００４２】
また、本発明の第２態様では、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させる際に、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基が用いられる。
【００４３】
本明細書において、「シアノエチル基をβ脱離させない強塩基」としては、例えば、解離したプロトンのみを捕捉し、かつ捕捉する側に平衡が偏っている塩基を挙げることができる。
【００４４】
このような強塩基の一態様として、例えば、下記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を挙げることができる。
【化２５】
上記式（７ａ）中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基である。
【００４５】
本明細書において、「Ｃ1〜Ｃ10アルキル基」としては、制限するわけではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等を挙げることができる。
【００４６】
本発明において、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であることが好ましい。
【００４７】
上記式（７ａ）中、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、電子供与基である。
【００４８】
本明細書において、「電子供与基」としては、制限するわけではないが、水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキル基、アリール基などを挙げることができる。
【００４９】
本明細書において、「アリール基」としては、制限するわけではないが、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、インデニル、ビフェニリル、アントリル、フェナントリル等を挙げることができる。
【００５０】
本発明の第２態様において、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又はＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であることが好ましく、水素原子、メチル基、エチル基、メトキシ基、ジメチルアミノ基であることがより好ましい。
【００５１】
また、本明細書において、「シアノエチル基をβ脱離させない強塩基」の他の態様としては、例えば、下記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を挙げることができる。
【化２６】
上記式（７ｂ）中、Ｙ1は、水素原子、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又は、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基である。また、Ｙ2及びＹ3は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基である。
【００５２】
ピリジンはその窒素原子求核性ゆえボランを脱離させてしまうが、２，６−位にアルキル基を導入することで、求核性のない化合物とすることができる。
【００５３】
本発明の第２態様において、Ｙ1は、水素原子又はＣ1〜Ｃ10アルキル基であることが好ましく、水素原子又はメチル基であることがより好ましい。
本発明の第２態様において、Ｙ2及びＹ3は、メチル基であることが好ましい。
【００５４】
本発明の第２態様において、反応を完結させるために、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基は、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【００５５】
また、本発明の第２態様では、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させる際に、縮合剤が用いられる。
【００５６】
本発明で用いられる縮合剤は、リン原子上の保護基がシアノエチル基のように嵩高い基であっても縮合反応が進行するものである必要がある。このような縮合剤の一態様として、下記式（４ａ）で示される縮合剤を挙げることができる。
【００５７】
【化２７】
上記式（４ａ）中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基（例えば、メチル基、エチル基であることが好ましい）であり、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよい。
【００５８】
本明細書において、「飽和環又は不飽和環」としては、４員環〜１０員環の飽和環又は不飽和環であることが好ましく、４員環〜７員環の飽和環又は不飽和環であることが更に好ましく、５員環の飽和環又は不飽和環であることが特に好ましい。
【００５９】
例えば、下記式で表されるように、Ａ1及びＡ2、Ａ3及びＡ4、並びに、Ａ5及びＡ6が、それぞれ互いに架橋して５員飽和環を形成する場合、Ａ2及びＡ3、並びに、Ａ5及びＡ6が架橋して５員飽和環を形成し、Ａ1及びＡ4がメチル基である場合などを好ましく挙げることができる。
【００６０】
【化２８】
［式中、Ａ7-及びＱ環基は、上記の意味を有する。］
【００６１】
上記式（４ａ）中、Ａ7-は、求核性のないアニオン種である。
本明細書において、「求核性のないアニオン種」としては、例えば、ＰＦ6-、ＢＦ4-、ＣｌＯ4-、ＣＦ3ＳＯ2Ｏ-、又は、（ＣＦ3ＳＯ2）2Ｎ-を挙げることができる。
本発明の第２態様において、Ａ7-は、ＰＦ6-又はＢＦ4-であることが好ましい。
【００６２】
上記式（４ａ）中、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。
【００６３】
本明細書において、「炭化水素芳香環」としては、例えば、ベンゼンのような単環式炭化水素芳香環；ビフェニル、トリフェニル、ナフタレン、インデン、アントラセン、フェナントレンのような多環式炭化水素芳香環を挙げることができる。
【００６４】
本明細書において、「窒素含有芳香環」としては、例えば、ピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンのような単環式窒素含有芳香環；インドール、キノリン、イソキノリン、プリン、シンノリン、キノキサリン、キナゾリジン、フタラジン、カルバゾール、アクリジン、フェナジン、フェナントリジンのような多環式窒素含有芳香環を挙げることができる。
【００６５】
本明細書において、窒素原子を２以上含む５員環基としては、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基を挙げることができる。
【００６６】
本発明の第２態様において、Ｑ環基で示される「炭化水素芳香環」、「窒素含有芳香環」、「窒素原子を２以上含む５員環基」には、置換基が導入されていてもよい。この置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ10炭化水素基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル、ナフチル、インデニル、トリル、キシリル、ベンジル等）、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ基（例えば、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、ビフェニルオキシ等）、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、水酸基、又はハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などを挙げることができる。この場合、置換基は、置換可能な位置に１個以上導入されていてもよく、好ましくは１個〜４個導入されていてもよい。置換基数が２個以上である場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
【００６７】
本発明の第２態様において、Ｑ環基は、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることが好ましく、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基若しくはトリフルオロメチル基等の電子吸引型の置換基を有するイミダゾリル基、トリアゾリル基若しくはテトラゾリル基、又は、ピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることがより好ましい。
【００６８】
また、本発明の第２態様で用いられる縮合剤の他の態様として、下記式（４ｂ）で示される縮合剤を挙げることができる。
【化２９】
上記式（４ｂ）中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基（例えば、メチル基、エチル基であることが好ましい）であり、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよい。
【００６９】
例えば、下記式で表されるように、Ａ12及びＡ13が、互いに架橋して５員飽和環を形成し、Ａ11及びＡ14がメチル基である場合などを好ましく挙げることができる。
【化３０】
［式中、Ａ15-及びＳ環基は、上記の意味を有する。］
【００７０】
上記式（４ｂ）中、Ａ15-は、求核性のないアニオン種である。
本発明の第２態様において、Ａ15-は、ＰＦ6-又はＢＦ4-であることが好ましい。
【００７１】
上記式（４ｂ）中、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。
【００７２】
本発明の第２態様において、Ｓ環基で示される「炭化水素芳香環」、「窒素含有芳香環」、「窒素原子を２以上含む５員環基」には、置換基が導入されていてもよい。この置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ10炭化水素基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル、ナフチル、インデニル、トリル、キシリル、ベンジル等）、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ基（例えば、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、ビフェニルオキシ等）、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、水酸基、又はハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などを挙げることができる。この場合、置換基は、置換可能な位置に１個以上導入されていてもよく、好ましくは１個〜４個導入されていてもよい。置換基数が２個以上である場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
【００７３】
本発明の第２態様において、Ｓ環基は、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることが好ましく、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基若しくはトリフルオロメチル基等の電子吸引型の置換基を有するイミダゾリル基、トリアゾリル基若しくはテトラゾリル基、又は、ピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることがより好ましい。
【００７４】
本発明の第２態様において、使用される縮合剤の量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
【００７５】
本発明の第２態様において、縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いることが好ましい。
【００７６】
また、本発明の第２態様において、縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いてもよいし、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いてもよい。アニオン化したヌクレオシド誘導体と縮合剤との反応を避ける観点からは、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いることが好ましい。
【００７７】
また、本発明の第２態様では、続いて、ボラノホスホリル化剤とヌクレオシド誘導体とを反応させ得られた反応生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンとを反応させる。これにより、リン原子上のシアノエチル基が一つ除去され、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーを得ることができる。
【００７８】
本発明の第２態様において、反応を完結させるために、トリエチルアミンは、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【００７９】
本発明の第２態様において、典型的には、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体の溶液に、縮合剤と強塩基を加えて攪拌し、得られた生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンを反応させることで、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーを得る。具体的には、下記のスキームに従って進むと考えられる。
【００８０】
【化３１】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００８１】
本発明の第２態様において、溶媒としては上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【００８２】
本発明の第２態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【００８３】
本発明の第２態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【００８４】
本発明の第２態様で用いられる上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤は、例えば、トリス−２−シアノエチルホスファイトをＢＨ3・ＴＨＦ錯体、ＢＨ3・ＳＭｅ2錯体等でボラノ化してトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得て、得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミンを反応させることにより得ることができる。
【００８５】
【化３２】
【００８６】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、使用されるＢＨ3・ＴＨＦ錯体、ＢＨ3・ＳＭｅ2錯体等のボラノ化剤の量は、ボラノ化反応を定量的に進行させるために、トリス−２−シアノエチルホスファイト１モルに対して１モル〜２モルであることが好ましく、１．２モル〜１．５モルであることが更に好ましい。
【００８７】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、反応を完結させるために、トリエチルアミンは、得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、トリス−２−シアノエチルボラノホスフェート１モルに対して、５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【００８８】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、典型的には、トリス−２−シアノエチルホスファイトの溶液にＢＨ3・ＴＨＦ錯体を加えて攪拌し、得られた反応生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンと反応させることで、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤を得る。
【００８９】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、溶媒としてはトリス−２−シアノエチルホスファイトが溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【００９０】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【００９１】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、圧力は、大気圧であることが好ましい。また、雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【００９２】
本発明の第３態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いた二量体の製造方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第３態様では、下記一般式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（１）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法が提供される。
【００９３】
【化３３】
［式中、Ｂ1、Ｒ1、Ｒ2は、上記の意味を有する。］
【００９４】
上記式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2についての説明は、本発明の第１態様〜第２態様においてしたのと同様である。
【００９５】
本発明の第３態様では、下記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体を用いる。
【化３４】
上記式（５）中、Ｂ2は、チミン、シトシン、ウラシル等のピリミジン塩基；アデニン、グアニン等のプリン塩基；または５−メチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルシトシン等のそれらの誘導体を表す。
【００９６】
溶媒への溶解度を向上させるために、塩基部位に、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（ＰＡＣ）、４−（ｔ−ブチル）フェノキシアセチル（ＢＰＡ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、２−［（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）メチル］ベンゾイル（ＳｉＯＭＢ）、２−（アセチルメチル）ベンゾイル（ＡＭＢ）、２−アジドベンゾイル（ＡＺＭＢ）、ジフェニルカルバモイル、フェニルアセチル等の保護基を導入してもよい。
【００９７】
本発明の第３態様において、Ｂ2は、シトシン、チミン、アデニン、グアニンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらに保護基が導入されたものであることが好ましい。
【００９８】
上記式（５）中、Ｒ3は、保護基を表す。
本明細書において、保護基としては、二量体の製造方法が固相反応である場合には固相反応用の保護基（担体）を、液相反応の場合は液相反応用の各種保護基を挙げることができる。
【００９９】
本明細書において、液相反応用の保護基としては、アルキル基、アルケニル基、アシル基、置換基を有していてもよいシリル基、アルコキシアシル基、アリールオキシアシル基等を挙げることができる。
【０１００】
本明細書において、「アルケニル基」としては、制限するわけではないが、ビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチルアリル、２−ブテニル等を挙げることができる。
【０１０１】
本明細書において、「アシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ1-6アルキル−カルボニル（たとえばメチルカルボニル、エチルカルボニル等）、Ｃ6-10アリール−カルボニル（たとえばベンゾイル）などが挙げられる。
【０１０２】
本明細書において、「置換基を有していてもよいシリル基」としては、制限するわけではないが、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基などを挙げることができる。
【０１０３】
本明細書において、「アルコキシアシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-6アルキル−カルボニル（たとえばメトキシメチルカルボニル、エトキシエチルカルボニル等）、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ6-10アリール−カルボニル（たとえばメトキシベンゾイル）などが挙げられる。
【０１０４】
本明細書において、「アリールオキシアシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ6-10アリールオキシ−Ｃ1-6アルキル−カルボニル（たとえばフェノキシアセチル、フェノキシエチルカルボニル等）、Ｃ6-10アリールオキシ−Ｃ6-10アリール−カルボニル（たとえばフェノキシベンゾイル）などが挙げられる。
【０１０５】
本明細書において、固相反応用の担体としては、たとえば、アミノアルキル化された孔径が制御された多孔性ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ：ＣＰＧ）、アミノアルキル化された高架橋性ポリスチレン（ＨＣＰ）といった固相法に用いられる公知の高分子担体であって、できるだけ膨潤性がなく、過剰に用いた試薬を洗浄によって簡単に除去できるものを特に制限なく挙げることができる。
【０１０６】
担体とヌクレオシドの水酸基はコハク酸エステル、シュウ酸エステル、フタル酸エステル等のリンカーを介して結合していてもよい。
【０１０７】
本発明の第３態様において、Ｒ3は、二量体の製造方法が固相反応である場合には、ＣＰＧ又はＨＣＰ、あるいはリンカーを有する担体であることが好ましく、二量体の製造方法が液相反応である場合には、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基であることが好ましい。
【０１０８】
上記式（５）中、Ｒ4は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。
【０１０９】
本発明の第３態様において、Ｒ4は、水素原子、メトキシ基、又はアシルオキシ基であることが好ましい。
【０１１０】
本発明の第３態様において、反応が固相反応の場合には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜５０モル用いることが好ましく、１０モル〜４０モル用いることが更に好ましく、２０モル〜３０モル用いることが更になお好ましい。
【０１１１】
本発明の第３態様において、反応が液相反応の場合には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
【０１１２】
また、本発明の第３態様では、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させるに際して、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基が用いられる。
【０１１３】
本発明の第３態様において、強塩基の説明は、本発明の第２態様においてしたのと同様である。
【０１１４】
本発明の第３態様において、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を完結させるために、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基は、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【０１１５】
また、本発明の第３態様では、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させるに際して、所定の縮合剤が用いられる。
【０１１６】
本発明の第３態様において、当該所定の縮合剤の説明は、本発明の第２態様においてしたのと同様である。
【０１１７】
本発明の第３態様において、使用される縮合剤は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第３態様においても、本発明の第２態様と同様に、縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いることが好ましい。
【０１１８】
また、本発明の第３態様において、縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いてもよいし、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いてもよい。アニオン化したヌクレオシド誘導体と縮合剤との反応を避ける観点からは、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いることが好ましい。
【０１１９】
本発明の第３態様において、典型的には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体の溶液に、縮合剤と強塩基を加えて攪拌することで、上記式（６）で示される二量体を得る。
【０１２０】
本発明の第３態様において、溶媒としては上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【０１２１】
本発明の第３態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【０１２２】
本発明の第３態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【０１２３】
本発明の第４態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法の一態様が提供される。即ち、下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、脱保護試薬とを反応させて、Ｒ1を脱離させた後、上記式（８）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記式（５）で示されるボラノホスフェートモノマーとを反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリヌクレオチド誘導体の製造方法が提供される。
【０１２４】
【化３５】
［式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、上記の意味を有する。］
【０１２５】
本発明の第４態様にしたがって脱保護反応及び縮合反応を繰り返すことで、任意の鎖長までオリゴヌクレオチド鎖を延長することができる。また、任意の核酸塩基を有するボラノホスフェートモノマー（１）を用いることで任意の塩基配列を有するオリゴマーを合成することができる。
【０１２６】
本発明の第４態様において、上記式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4についての説明は、本発明の第１態様〜第３態様においてしたのと同様である。
【０１２７】
本発明の第４態様において、まず、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と脱保護試薬とを反応させて、Ｒ1を脱離させる。
【０１２８】
ここで、上記式（８）中、ｎは、１以上の整数を示し、１〜１００であることが好ましく、１０〜７０であることがより好ましく、１０〜３０であることが更に好ましい。
本発明の第４態様において、脱保護試薬は、たとえば、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸を好ましく挙げることができる。
【０１２９】
本発明の第４態様において、脱保護試薬は、反応を完結させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して、２モル〜１００モル用いることが好ましく、５モル〜５０モル用いることが更に好ましく、１０モル〜２０モル用いることが更になお好ましい。
【０１３０】
本発明の第４態様において、脱保護反応によって生成するトリチルカチオンがボラノホスフェートに作用して分解反応を引き起こす恐れがあるため、脱保護反応は、トリチルカチオンを還元する試薬（トリチルカチオンスカベンジャー）存在下で行うことが好ましい。このような試薬としては、トリエチルシラン、ＢＨ3・ピリジン錯体を挙げることができる。
【０１３１】
本発明の第４態様において、トリチルカチオンを還元する試薬は、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体に対して、大過剰用いることが好ましい。例えば、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して、２モル〜１００モル用いることが好ましく、５モル〜５０モル用いることが更に好ましく、１０モル〜２０モル用いることが更になお好ましい。
【０１３２】
本発明の第４態様において、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と脱保護試薬とを反応させてＲ1を脱離させた後、本発明の第３態様にかかる縮合反応と同様の縮合反応を行い、上記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体を製造する。
【０１３３】
本発明の第４態様において、オリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が固相反応である場合には、使用される上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して１モル〜５０モル用いることが好ましく、１０モル〜４０モル用いることが更に好ましく、２０モル〜３０モル用いることが更になお好ましい。
【０１３４】
本発明の第４態様において、オリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が液相反応である場合には、使用される上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
【０１３５】
本発明の第４態様で用いられる強塩基は、本発明の第２態様で説明したのと同様である。
本発明の第４態様において、強塩基は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【０１３６】
本発明の第４態様で用いられる縮合剤は、本発明の第３態様で説明したのと同様である。
本発明の第４態様において、縮合剤は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
【０１３７】
本発明の第４態様において、典型的には、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の溶液に、脱保護試薬を加え、反応生成物を得る。次いで、反応生成物の溶液に、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体を加え、強塩基及び縮合剤を添加し、攪拌してオリゴヌクレオチド誘導体（９）を得る。
【０１３８】
本発明の第４態様において、溶媒としては上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【０１３９】
本発明の第４態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【０１４０】
本発明の第４態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【０１４１】
本発明の第４態様によって任意の鎖長を有するオリゴヌクレオチド誘導体が得られた場合には、まず、５'−末端のＲ1を本発明の第４態様において説明した脱保護反応によって除去する。
【０１４２】
次いで、得られた５'−位に遊離の水酸基を有するオリゴマーから、リン原子上の保護基である２−シアノエチル基をＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン）等で除去する。次いで、アンモニアで処理することにより、核塩基の保護基およびＲ4で示される担体が除去され、ボラノホスフェートオリゴマーが得られる。
【実施例】
【０１４３】
以下、本発明を実施例に基づいて説明する。ただし、本発明は、下記の実施例に制限されるものではない。
反応に用いた溶媒は、市販のものを蒸留した後ナトリウムまたはモレキュラーシーブ４Ａで乾燥したものを用いた。その他の試薬は市販のものをそのまま用いた。
【０１４４】
各種分析機器は、以下に示した機種を用いた。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（1Ｈ−ＮＭＲ）：バリアン Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００（３００ＭＨｚ）
31Ｐ−核磁気共鳴スペクトル（31Ｐ−ＮＭＲ）：バリアン Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００（１２１．５ＭＨｚ）
カラムクロマトグラフィーに充填するシリカゲルには、ＫＡＮＴＯ ＣＨＥＭＩＣＡＬのＳｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０Ｎを用いた。
【０１４５】
参考例１
トリス−２−シアノエチル ボラノホスフェートの調製
【化３６】
【０１４６】
トリス−２−シアノエチルホスファイト（２４．７ｇ，１０２．４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（１０３ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、ＢＨ3・ＴＨＦ／ＴＨＦ（１２１．５ｍＬ，１１３ｍｍｏｌ）の０．９３Ｍ溶液を０℃で滴下にて加えた。反応混合物を１時間室温にて攪拌し、反応混合物を減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラムで精製した（１５０ｇ）。カラムクロマトグラフィーは、酢酸エチルを用いて行った。トリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを含む部分を集めて減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色油状物質として得た（２２．９ｇ，８８％）。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ４．３１（６Ｈ，ｍ），２．７９（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１９．８−１１６．９（ｍ）．
【０１４７】
参考例２
トリエチルアンモニウム ビス−２−シアノエチルボラノホスフェートの調製
【化３７】
【０１４８】
参考例１で得たトリス−２−シアノエチルボラノホスフェート（２２．８ｇ，８９．４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液（８９．４ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、Ｅｔ3Ｎ（１２４ｍＬ，８９４ｍｍｏｌ）を室温で滴下にて加え、昇温させ、還流した。１時間攪拌した後、反応混合物を室温まで冷却した。残渣を減圧下で乾燥させ、無水トルエン及びＣＨＣｌ3で共沸を繰り返し、表題化合物を無色油状物質として得た（２７．１ｇ，定量的）。
【０１４９】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．５８（１Ｈ，ｂｓ），４．１４−４．０４（４Ｈ，ｍ），３．０７（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．７４−２．６６（４Ｈ，ｍ）１．３４（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９６．６４（ｑ，ＪPB＝１２７．３７Ｈｚ）
【０１５０】
参考例１〜参考例２の反応スキームを下記に示す。
【化３８】
［式中、「ＣＥ」はシアノエチル基を表す。］
【０１５１】
参考例３
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化３９】
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン（１．３１ｇ，２．００ｍｍｏｌ）及び参考例２で得られたトリエチルアンモニウム ビス−２−シアノエチルボラノホスフェート（０．７３０ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）を、無水ピリジンによる共沸、次いで無水トルエンによる共沸を繰り返すことで乾燥させた後、無水アセトニトリル（２０．０ｍＬ）に溶解させた。溶液に、引き続いて、２，６−ルチジン（２．３０ｍＬ，２０．０ｍｍｏｌ）、ＰｙＮＴＰ（トリス（ピロリジン−１−イル）３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール−１−イル ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート）（２．４０ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、水層をＣＨＣｌ3（２ｘ５０ｍＬ）で逆抽出した。有機層及び洗浄液を集めて、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣を無水トルエンで共沸を繰り返し、シリカゲルカラムで精製した（１００ｇ）。カラムクロマトグラフィーは、酢酸エチルを用いて行った。ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートを含む部分を集めて、減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色泡状物として得た（１．２９ｇ，７７％）。
【０１５２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９．０３（１Ｈ，ｂｓ），８．７２（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ），８．０７−７．１８（１４Ｈ，ｍ），６．８１（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｍ），４．３８（１Ｈ，ｍ），４．２９−４．１７（４Ｈ，ｍ），３．７８（６Ｈ，ｓ），３．４４（２Ｈ，ｍ），２．８２−２．５７（６Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２０．０−１１６．８（ｍ）．
【０１５３】
参考例４
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４０】
【０１５４】
参考例３と同様の手順を行った。但し、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２"−デオキシアデノシンの代わりに、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジンを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（粗生成物）。
【０１５５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．６６（１Ｈ，ｓ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．９４−７．１８（１５Ｈ，ｍ），６．８６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），６．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），５．１６−５．０６（１Ｈ，ｍ），４．３５−４．２９（１Ｈ，ｍ），４．２５−４．１３（２Ｈ，ｍ），３．７８（６Ｈ，ｓ），３．５１−３．４７（２Ｈ，ｍ），２．９４−２．３７（４Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１９．８−１１６．４（ｍ）．
参考例５
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−ジフェニルカルバモイル−Ｎ2−フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４１】
【０１５６】
参考例３と同様の手順を行った。但し、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２'−デオキシアデノシンの代わりに、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6ジフェニルカルバモイル−Ｎ2フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシンを用いた。表題化合物を淡黄色泡状物として得た（収率９０％）。
【０１５７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．１０（１Ｈ，ｓ），７．９１（１Ｈ，ｓ），７．４６−７．１４（２４Ｈ，ｍ），６．７８（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｍ），４．３２（１Ｈ，ｍ），４．２２−４．０８（４Ｈ，ｍ），３．９８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2 ｏｆ Ｐａ），３．７４（６Ｈ，ｓ），３．４６−３．３１（２Ｈ，ｍ），２．９９−２．５０（６Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１９．０２−１１５．６１（ｍ）．
【０１５８】
参考例６
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−３'−イルボラノホスフェート
【化４２】
【０１５９】
参考例３と同様の手順を行った。但し、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２'−デオキシアデノシンの代わりに、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3ベンゾイルチミジンを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率９８％）。
【０１６０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ７．９５，７．９３（２Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｓ），７．６８−７．２１（１２Ｈ，ｍ），６．８７（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４５，６．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ1',2'／Ｊ1',2"＝５．７Ｈｚ ａｎｄ ８．７Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），４．２９−４．１１（５Ｈ，ｍ），３．８０（６Ｈ，ｓ），３．４８−３．４４（２Ｈ，ｍ，５'−Ｈ ａｎｄ ５"−Ｈ），２．８２−２．４６（６Ｈ，ｍ），１．４６（３Ｈ，ｓ，５−ＣＨ3），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１８．７９−１１５．４８（ｍ）．
【０１６１】
実施例１
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４３】
【０１６２】
参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェート（１．２９ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液（２ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、Ｅｔ3Ｎ（２．８ｍＬ，２０ｍｍｏｌ）を室温にて滴下により加えた。反応混合物を１時間、室温にて攪拌し、反応混合物を減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラム（４０）で精製した。カラムクロマトグラフィーの溶出は、０．５％Ｅｔ3Ｎを含むＣＨ2Ｃｌ2によって行い、メタノール（０−４％）により勾配を与えた。トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートを含む部分を集めて乾燥させた。過剰なＥｔ3Ｎは、無水トルエンによって数回共沸させることにより除去し、表題化合物を無色泡状物質として得た（６９８．６ｍｇ，５１％）。
【０１６３】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９．１８（１Ｈ，ｂｓ），８．７１（１Ｈ，ｓ，８−Ｈ），８．２０（１Ｈ，ｓ），８．０２，８．０５（２Ｈ，２ｍ），７．６５−７．１５（１２Ｈ，ｍ），６．７９（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｍ），５．１４（１Ｈ，ｍ），４．４３（１Ｈ，ｍ），４．０８−３．９１（２Ｈ，ｍ），３．７７（６Ｈ，ｓ），３．４１（２Ｈ，ｍ），３．０４（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．９６−２．４６（４Ｈ，ｍ），１．３１（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９８．５５−９３．８０（ｍ）．
【０１６４】
実施例２
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４４】
【０１６５】
実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートの代わりに、参考例４で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率５６％，２段階）。
【０１６６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．５０（１Ｈ，ｂｓ），８．７０（１Ｈ，ｂｓ），８．２４（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．９０，７．８７（２Ｈ，２ｍ），７．６５−７．１１（１３Ｈ，ｍ），６．９４−６．７９（４Ｈ，ｍ），６．３６−６．２６（１Ｈ，ｍ），５．０４（１Ｈ，ｍ），４．４１−４．３１（１Ｈ，ｍ），４．００−３．８８（２Ｈ，ｍ），３．７９（６Ｈ，ｓ），３．５２−３．４４（２Ｈ，ｍ），３．０４（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．９０−２．７８（１Ｈ，ｍ），２．７２−２．４７（２Ｈ，ｍ），２．３９−２．２４（１Ｈ，ｍ），１．３１（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ3 ｏｆ Ｅｔ3ＮＨ+），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９８．９３−９３．６７（ｍ）．
【０１６７】
実施例３
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−ジフェニルカルバモイル−Ｎ2−フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４５】
【０１６８】
実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートの代わりに、参考例５で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−ジフェニルカルバモイル−Ｎ2−フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシン−３'−イル ボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率９０％）。
【０１６９】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．５２（１Ｈ，ｂｓ），８．０８（１Ｈ，ｂｓ），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．５１−７．０９（２４Ｈ，ｍ），６．７５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４５，６．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ1',2'／Ｊ1',2"＝６．３Ｈｚ ａｎｄ １２．９Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，ｍ），４．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），４．０７−３．８６（４Ｈ，ｍ），３．６９（６Ｈ，ｓ），３．３８−３．２８（２Ｈ，ｍ），２．９８（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．８７−２．４４（４Ｈ，ｍ），１．２６（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９９．０９−９３．２３（ｍ）．
【０１７０】
実施例４
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４６】
【０１７１】
実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートの代わりに、参考例６で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−３'−イル ボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率７４％）。
【０１７２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．４２（１Ｈ，ｂｓ），７．９７−７．２０（１６Ｈ，ｍ），６．８４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４６，６．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ1',2'／Ｊ1',2"＝５．７Ｈｚ ａｎｄ ８．１Ｈｚ），５．２１−５．１０（１Ｈ，ｍ，３'−Ｈ），４．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，４'−Ｈ），４．０３−３．８６（２Ｈ，ｍ），３．７９（６Ｈ，ｓ），３．４５−３．４２（２Ｈ，ｍ），２．９６（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６８−２．３９（４Ｈ，ｍ），１．３９，１．３５（３Ｈ，２ｓ），１．２５（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９８．３１−９３．５９（ｍ）．
【０１７３】
実施例５
２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ３'−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−５'−イル ボラノホスフェート
【化４７】
【０１７４】
３'−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン（４５．０ｍｇ，０．１００ｍｍｏｌ）及び実施例２で得られたトリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート（１０３．９ｍｇ，０．１２０ｍｏｌ）を、無水ピリジンによる共沸、次いで無水トルエンによる共沸を繰り返すことで乾燥させた後、無水ＣＨ3ＣＮ（１．００ｍＬ）に溶解させた。溶液に、引き続いて、２，６−ルチジン（１１６μＬ，１．００ｍｍｏｌ）、ＰｙＮＴＰ（１２０ｍｇ，０．２４０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（３ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、水層をＣＨＣｌ3（２ｘ１０ｍＬ）で逆抽出した。有機層及び洗浄液を集めて、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラムで精製した（１０ｇ）。カラムクロマトグラフィーの溶出は、ＣＨ2Ｃｌ2を用いて行い、メタノール（０−１．５％）により勾配を与えた。
【０１７５】
２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ３'−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−５'−イル ボラノホスフェートを含む部分を集めて、減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色泡状物として得た（１１３．４ｍｇ，９５％）。
【０１７６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．２０−８．１３（１Ｈ，ｍ），８．０６−７．１６（２６Ｈ，ｍ），６．９１−６．８２（４Ｈ，ｍ），６．５４−６．４６（１Ｈ，ｍ），６．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．５５−５．４０（１Ｈ，ｍ），５．２３−５．１４（１Ｈ，ｍ），４．５４−４．０９（６Ｈ，ｍ），３．９３−３．６４（６Ｈ，ｍ），３．５６−３．４６（２Ｈ，ｍ），３．０６−２．３５（６Ｈ，ｍ），２．０１，１．９９（３Ｈ，２ｓ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２１．２１−１１７．５５（ｍ）．
【０１７７】
参考例３〜実施例５の反応スキームを下記に示す。
【化４８】
［式中、「ＣＥ」はシアノエチル基を表す。］
【０１７８】
実施例６
Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ３'−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−５'−イル ボラノホスフェート
【化４９】
【０１７９】
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジンの３'−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（２９．２ｍｇ、０．５μｍｏｌ）をＣＨ2Ｃｌ2−Ｅｔ3ＳｉＨ（１：１，ｖ／ｖ）の３％ＤＣＡ（ジクロロ酢酸）溶液で各５秒間・３回洗い、次いで無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液、無水ＣＨ3ＣＮ溶液で各０．５ｍｌ×３回洗い、減圧乾燥した。１０分後、ＭＮＴＰ（１，３−ジメチル−２−ピロリジン−１−イル−２−（３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−１，３，２−ジアザホスホリジニウム ヘキサフルオロホスフェート）（８．７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、実施例２で得られたトリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート（８．９ｍｇ、２０μｍｏｌ）を加え、再び減圧乾燥した。０．５Ｍ２，６−ルチジン／ＣＨ3ＣＮ溶液を１００μｌ加え、３分間攪拌した（二量体の合成）。
【０１８０】
その後無水ＣＨ3ＣＮ溶液、無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液で洗浄し、ＣＨ2Ｃｌ2−Ｅｔ3ＳｉＨ（１：１，ｖ／ｖ）の３％ＤＣＡ溶液で各５秒間・３回洗浄した（ジメトキシトリチル基の除去）。
次に無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液、無水ＴＨＦ溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／無水酢酸／ＴＨＦ溶液（２：１：７、ｖ／ｖ／ｖ）溶液を加え、３０秒攪拌した。その後無水ＴＨＦ溶液、無水ＣＨ3ＣＮ溶液で洗浄し、０．２Ｍ ＤＢＵ／ＣＨ3ＣＮ溶液を加え、５分間攪拌した（２−シアノエチル基の除去）。
【０１８１】
その後無水ＣＨ3ＣＮ溶液で洗浄し、減圧乾燥後、アンモニア・メタノール溶液０．５ｍｌを加え、密栓をする。室温で１２時間攪拌した後、吸引濾過を行ないＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した（担体の除去）。
反応混合物をジエチルエーテル（５ｘ３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１ｘ３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた（生成物の精製）。
残渣を逆相ＨＰＬＣで分析した。（０−１５％アセトニトリルの０．１Ｍ酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ７．０）による線形勾配、４５分、５０℃、流速１ｍｌ／分）ＨＰＬＣのピークの積分値より算出した収率は９５％。
【０１８２】
実施例７
ボラノホスフェート４量体及び１２量体の合成
（１）４量体の合成
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジンの３'−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（０．５μｍｏｌ）に対し、下記表１に示した合成サイクルにより、ボラノホスフェート４量体ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）を合成した。
【０１８３】
【表１】
【０１８４】
表１−ステップ１０で脱保護した粗精製の４量体に対し、吸引濾過を行いＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をジエチルエーテル（５×３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１×３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた。陰イオン交換ＨＰＬＣにより分離精製後、Ｃ18逆相カラムカートリッジで脱塩を行ったところ、単離収率３０％で、目的とするボラノホスフェート４量体；ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）を得ることができた。
【０１８５】
（２）１２量体の合成
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ３−ベンゾイルチミジンの３'−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（０．５μｍｏｌ）に対し、表１に示した合成サイクルにより、ボラノホスフェート１２量体ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）3を合成した。
上記表１−ステップ１０で脱保護した粗精製の１２量体に対し、吸引濾過を行ないＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をジエチルエーテル（５×３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１×３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた。１５％ＰＡＧＥ／７Ｍ Ｕｒｅａ（１ｍｍ厚、４０×２０ｃｍ）により精製を行なったところ、単離収率１６％で、目的とするボラノホスフェート１２量体；ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）3を得ることができた。
【０１８６】
実施例７における合成スキームを以下に示す。
【化５０】
【０１８７】
上記表１及び合成スキーム中、「モノマー」「ＭＮＴＰ」「ＤＭＡＮ」の構造式は下記の通りである。
【化５１】
【産業上の利用可能性】
【０１８８】
本発明により、ボラノホスフェートオリゴマーが提供される。本発明により得られるボラノホスフェートオリゴマーはアンチセンス分子として有用であり、試薬又は医薬品として利用することが可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ボラノホスフェートモノマー及びそれの製造方法並びにボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在遺伝子治療の分野で注目されている手法の一つにアンチセンス法がある。アンチセンス法とは、ｍＲＮＡに相補的な塩基配列を持つアンチセンス分子を用いてＤＮＡから転写されたｍＲＮＡと選択的に二重鎖を形成させ、標的とするタンパク質合成のみを制御する方法である。
【０００３】
ここで、アンチセンス分子が有効に機能するための必要条件として、第一に高い細胞膜透過性を有していること、第二に細胞内でヌクレアーゼによる加水分解を受けにくいこと、第三に特定のｍＲＮＡとのみ選択的に安定な二重鎖を形成できることなどが挙げられる。
【０００４】
しかし、天然型のアンチセンス分子は、生体内に導入されると、ヌクレアーゼにより速やかに加水分解される上、細胞膜透過性が低いという問題点がある。そこで、より有用なアンチセンス分子の設計及びその効率的な製造方法の開発が求められていた。
【０００５】
これまで多くのアンチセンス分子が設計され、合成されてきたが、その中で現在、実用化に向けて研究されているホスホロチオエートＤＮＡには、細胞毒性がある、選択性が低いといった問題点があった。
【０００６】
近年、新しい骨格のアンチセンス分子であるボラノホスフェートオリゴマーが開発されている。この分子は、例えば、
（１）リン原子がボランに配位しているため、天然型のものと比較して脂溶性が高く、高い細胞膜透過性が期待できる、
（２）ヌクレアーゼに対する耐性が高い、
（３）標的ｍＲＮＡに対する選択性が高い、
（４）ボラノホスフェートＤＮＡとＲＮＡが形成する二重鎖がＲＮａｓｅＨの基質となり、標的ｍＲＮＡが効果的に分解される、
（５）ホウ素中性子補捉療法（ＢＮＣＴ）への応用が期待できる、
といった有利な特徴を持つことで知られており、実用的なアンチセンス分子として注目されてきている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、従来開発されたボラノホスフェートオリゴマーに見られた問題点、即ち、
（ｉ） 鎖を延長するたびにボラノ化を繰り返し行わなければならない、
（ｉｉ）ボラノ化試薬による核酸塩基部位への副反応
といった問題点を排除した手法、即ち、下記式で示される、予めボラノ化したモノマーを用いてオリゴヌクレオチドを合成する手法を報告してきた（日本化学会第７８回年会予稿集７４６頁（２０００年）、日本化学会第７９回年会予稿集９４２頁（２００１年）、日本化学会第８１回年会予稿集９３７頁（２００２年）、アンチセンスＤＮＡ／ＲＮＡ研究会予稿集４８頁（２００２年）、日本化学会第８３回年会予稿集９４４頁（２００３年）、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．４３（２００２）４２３７）。
【化１】
［式中、ＤＭＴｒは、ジメトキシトリチル基を示す。］
【０００８】
しかしながら、この手法によれば、上記問題点（ｉ）及び（ｉｉ）は解決されるものの、リン原子上の保護基を除去する際に、オリゴヌクレオチドが分解してしまうという致命的な問題が生ずることがわかった。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで、上記問題点（ｉ）及び（ｉｉ）を解決しつつ、かつ実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供する手法が望まれていた。
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するために鋭意検討した結果、リン原子上の保護基としてシアノエチル基を用いることで、オリゴヌクレオチドを分解させずに保護基を除去することができることを見出し、更に、このような嵩高い保護基を用いることによってオリゴマーの縮合が阻害されることを見出し、この点については、塩基と、特殊な縮合剤との存在下で縮合反応をさせることにより解決できることを見出し、本発明を完成させた。
即ち、本発明の第１態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーが提供される。
【００１１】
【化２】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
【００１２】
本発明の第２態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを製造する方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第２態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法であって、
【化３】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
シアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、
【化４】
［式中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ7-は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
【化５】
［式中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ15-は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、
【化６】
下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体と
【化７】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
を反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、ボラノホスフェートモノマーの製造方法が提供される。
【００１３】
本発明の第２態様において、前記ボラノホスホリル化剤が、トリス−２−シアノエチルホスファイトをボラノ化して下記式で示されるトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得、
【化８】
得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミンを反応させることにより得られることが好ましい。
【００１４】
本発明の第３態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いた二量体の製造方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第３態様では、下記一般式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと
【化９】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
上記式（１）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、
【化１０】
［式中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ7-は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
【化１１】
［式中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ15-は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体と
【化１２】
［式中、Ｂ2は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ3は、保護基を表し、Ｒ4は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
を反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法が提供される。
【化１３】
［式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、前記と同義を表す。］
【００１５】
本発明の第３態様では、前記強塩基が、下記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体であってもよい。
【化１４】
［式中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基であり、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、電子供与基である。］
【００１６】
この場合、前記式（７ａ）中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4が、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であり、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10が、水素原子、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又はＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であることが好ましい。
【００１７】
また、本発明の第３態様では、前記縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物であってもよく、この場合は、前記式（４ａ）中のＱ環基が、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であり、Ａ7-が、ＰＦ6-、ＢＦ4-、ＣｌＯ4-、ＣＦ3ＳＯ2Ｏ-、又は、（ＣＦ3ＳＯ2）2Ｎ-であることが好ましい。
【００１８】
また、本発明の第３態様では、前記縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物であり、前記強塩基が下記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体であってもよい。
【化１５】
［式中、Ｙ1は、水素原子、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又は、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基であり、Ｙ2及びＹ3は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基である。］
【００１９】
この場合、前記式（４ｂ）中のＳ環基が、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であり、Ａ15-が、ＰＦ6-、ＢＦ4-、ＣｌＯ4-、ＣＦ3ＳＯ2Ｏ-、又は、（ＣＦ3ＳＯ2）2Ｎ-であることが好ましく、また、前記式（７ｂ）中、Ｙ1が水素原子、又は、メチル基であり、Ｙ2及びＹ3が、メチル基であることが好ましい。
【００２０】
本発明の第４態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法の一態様が提供される。即ち、下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、
【化１６】
［式中、Ｂ1及びＢ2は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、Ｒ2及びＲ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基であり、Ｒ3は、保護基であり、ｎは１以上の整数を示す。］
脱保護試薬とを反応させて、Ｒ1を脱離させた後、上記式（８）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、下記式（４ａ）、又は、下記式（４ｂ）で示される縮合剤存在下、
【化１７】
［式中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ7-は、求核性のないアニオン種であり、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
【化１８】
［式中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基であり、ただし、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよく、Ａ15-は、求核性のないアニオン種であり、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。］
下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと
【化１９】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記と同義である。］
を反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が提供される。
【化２０】
［式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びｎは、前記と同義を表す。］
【００２１】
本発明の第４態様において、反応が固相で行われることが好ましい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明により、従来開発されたボラノホスフェートオリゴマーに見られた問題点を解決しつつ、かつ実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供することが可能となる。本発明により得られるボラノホスフェートオリゴマーはアンチセンス分子として有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明の第１態様では、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーが提供される。
【化２１】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００２４】
上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、リン原子上の保護基がシアノエチル基であるため、アンモニア等を用いて保護基を除去する場合、シアノエチル基はβ脱離によって除去される。このため、当該ボラノホスフェートモノマーを用いてオリゴマーを得た後にこの保護基を除去しても、オリゴマーを分解させることはない。したがって、本発明により、実用に耐えうるボラノホスフェートオリゴマーを提供することが可能となる。
【００２５】
上記式中、Ｂ1は、チミン、シトシン、ウラシル等のピリミジン塩基；アデニン、グアニン等のプリン塩基；または５−メチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルシトシン等のそれらの誘導体を表す。
【００２６】
溶媒への溶解度を向上させるために、塩基部位に、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、アセチル（Ａｃ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（ＰＡＣ）、４−（ｔ−ブチル）フェノキシアセチル（ＢＰＡ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、２−［（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）メチル］ベンゾイル（ＳｉＯＭＢ）、２−（アセチルメチル）ベンゾイル（ＡＭＢ）、２−アジドベンゾイル（ＡＺＭＢ）、ジフェニルカルバモイル（ＤＰＣ）、フェニルアセチル（ＰＡ）等の保護基を導入してもよい。
【００２７】
本発明の第１態様において、Ｂ1は、シトシン、チミン、アデニン、グアニンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらに保護基が導入されたものであることが好ましい。
上記式中、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、又は、モノメトキシトリチル基である。
【００２８】
本発明の第１態様において、Ｒ1は、ジメトキシトリチル基であることが好ましい。
【００２９】
上記式中、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。
【００３０】
本明細書において、「アルコキシ基」としては、制限するわけではないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ等を挙げることができる。
【００３１】
本明細書において、「アルケニルオキシ基」としては、制限するわけではないが、ビニルオキシ、アリルオキシ、１−プロペニルオキシ、イソプロペニルオキシ、２−メチル−１−プロペニルオキシ、２−メチルアリルオキシ、２−ブテニルオキシ等を挙げることができる。
【００３２】
本明細書において、「アシルオキシ基」としては、制限するわけではないが、Ｃ1-6アルキル−カルボニルオキシ（たとえばメチルカルボニルオキシ、エチルカルボニルオキシ等）、Ｃ6-10アリール−カルボニルオキシ（たとえばベンゾイルオキシ）などが挙げられる。
【００３３】
本明細書において、「トリアルキルシリルオキシ基」としては、制限するわけではないが、トリメチルシリルオキシ基、トリエチルシリルオキシ基などを挙げることができる。
【００３４】
本発明の第１態様において、Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、トリアルキルシリルオキシ基であることが好ましい。
【００３５】
本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーをＲＮＡ誘導体合成のために使用する場合には、Ｒ2はトリアルキルシリルオキシ基であることが好ましく、ｔ−ブチルジメチルシリル基であることがより好ましい。
【００３６】
本発明の第２態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを製造する方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第２態様では、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、下記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させ反応生成物を得る工程と、前記反応生成物とトリエチルアミンとを反応させる工程とを含むことを特徴とする、下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの製造方法が提供される。
【００３７】
【化２２】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００３８】
本発明の第２態様において、上記式中のＢ1、Ｒ1及びＲ2についての説明は、本発明の第１態様〜第２態様においてしたのと同様である。
【００３９】
本発明の第２態様では、下記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤が用いられる。
【化２３】
【００４０】
また、本発明の第２態様では、下記一般式（３）で示されるヌクレオシド誘導体が用いられる。
【化２４】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００４１】
本発明の第２態様において、使用される上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤の量は、ボラノホスホリル化反応を定量的に進行させるために、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
【００４２】
また、本発明の第２態様では、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させる際に、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基が用いられる。
【００４３】
本明細書において、「シアノエチル基をβ脱離させない強塩基」としては、例えば、解離したプロトンのみを捕捉し、かつ捕捉する側に平衡が偏っている塩基を挙げることができる。
【００４４】
このような強塩基の一態様として、例えば、下記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を挙げることができる。
【化２５】
上記式（７ａ）中、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基である。
【００４５】
本明細書において、「Ｃ1〜Ｃ10アルキル基」としては、制限するわけではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等を挙げることができる。
【００４６】
本発明において、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3及びＸ4は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、メチル基、又は、エチル基であることが好ましい。
【００４７】
上記式（７ａ）中、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、電子供与基である。
【００４８】
本明細書において、「電子供与基」としては、制限するわけではないが、水素原子、ヒドロキシ基、アルコキシ基、アミノ基、ジアルキルアミノ基、アルキル基、アリール基などを挙げることができる。
【００４９】
本明細書において、「アリール基」としては、制限するわけではないが、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、インデニル、ビフェニリル、アントリル、フェナントリル等を挙げることができる。
【００５０】
本発明の第２態様において、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7、Ｘ8、Ｘ9及びＸ10は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又はＣ1〜Ｃ10アルコキシ基であることが好ましく、水素原子、メチル基、エチル基、メトキシ基、ジメチルアミノ基であることがより好ましい。
【００５１】
また、本明細書において、「シアノエチル基をβ脱離させない強塩基」の他の態様としては、例えば、下記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を挙げることができる。
【化２６】
上記式（７ｂ）中、Ｙ1は、水素原子、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基、又は、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基である。また、Ｙ2及びＹ3は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、Ｃ1〜Ｃ10アルキル基である。
【００５２】
ピリジンはその窒素原子求核性ゆえボランを脱離させてしまうが、２，６−位にアルキル基を導入することで、求核性のない化合物とすることができる。
【００５３】
本発明の第２態様において、Ｙ1は、水素原子又はＣ1〜Ｃ10アルキル基であることが好ましく、水素原子又はメチル基であることがより好ましい。
本発明の第２態様において、Ｙ2及びＹ3は、メチル基であることが好ましい。
【００５４】
本発明の第２態様において、反応を完結させるために、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基は、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【００５５】
また、本発明の第２態様では、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と、上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させる際に、縮合剤が用いられる。
【００５６】
本発明で用いられる縮合剤は、リン原子上の保護基がシアノエチル基のように嵩高い基であっても縮合反応が進行するものである必要がある。このような縮合剤の一態様として、下記式（４ａ）で示される縮合剤を挙げることができる。
【００５７】
【化２７】
上記式（４ａ）中、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基（例えば、メチル基、エチル基であることが好ましい）であり、Ａ1、Ａ2、Ａ3、Ａ4、Ａ5及びＡ6のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよい。
【００５８】
本明細書において、「飽和環又は不飽和環」としては、４員環〜１０員環の飽和環又は不飽和環であることが好ましく、４員環〜７員環の飽和環又は不飽和環であることが更に好ましく、５員環の飽和環又は不飽和環であることが特に好ましい。
【００５９】
例えば、下記式で表されるように、Ａ1及びＡ2、Ａ3及びＡ4、並びに、Ａ5及びＡ6が、それぞれ互いに架橋して５員飽和環を形成する場合、Ａ2及びＡ3、並びに、Ａ5及びＡ6が架橋して５員飽和環を形成し、Ａ1及びＡ4がメチル基である場合などを好ましく挙げることができる。
【００６０】
【化２８】
［式中、Ａ7-及びＱ環基は、上記の意味を有する。］
【００６１】
上記式（４ａ）中、Ａ7-は、求核性のないアニオン種である。
本明細書において、「求核性のないアニオン種」としては、例えば、ＰＦ6-、ＢＦ4-、ＣｌＯ4-、ＣＦ3ＳＯ2Ｏ-、又は、（ＣＦ3ＳＯ2）2Ｎ-を挙げることができる。
本発明の第２態様において、Ａ7-は、ＰＦ6-又はＢＦ4-であることが好ましい。
【００６２】
上記式（４ａ）中、Ｑ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。
【００６３】
本明細書において、「炭化水素芳香環」としては、例えば、ベンゼンのような単環式炭化水素芳香環；ビフェニル、トリフェニル、ナフタレン、インデン、アントラセン、フェナントレンのような多環式炭化水素芳香環を挙げることができる。
【００６４】
本明細書において、「窒素含有芳香環」としては、例えば、ピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジンのような単環式窒素含有芳香環；インドール、キノリン、イソキノリン、プリン、シンノリン、キノキサリン、キナゾリジン、フタラジン、カルバゾール、アクリジン、フェナジン、フェナントリジンのような多環式窒素含有芳香環を挙げることができる。
【００６５】
本明細書において、窒素原子を２以上含む５員環基としては、例えば、ピロリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基を挙げることができる。
【００６６】
本発明の第２態様において、Ｑ環基で示される「炭化水素芳香環」、「窒素含有芳香環」、「窒素原子を２以上含む５員環基」には、置換基が導入されていてもよい。この置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ10炭化水素基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル、ナフチル、インデニル、トリル、キシリル、ベンジル等）、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ基（例えば、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、ビフェニルオキシ等）、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、水酸基、又はハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などを挙げることができる。この場合、置換基は、置換可能な位置に１個以上導入されていてもよく、好ましくは１個〜４個導入されていてもよい。置換基数が２個以上である場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
【００６７】
本発明の第２態様において、Ｑ環基は、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることが好ましく、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基若しくはトリフルオロメチル基等の電子吸引型の置換基を有するイミダゾリル基、トリアゾリル基若しくはテトラゾリル基、又は、ピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることがより好ましい。
【００６８】
また、本発明の第２態様で用いられる縮合剤の他の態様として、下記式（４ｂ）で示される縮合剤を挙げることができる。
【化２９】
上記式（４ｂ）中、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14は、それぞれ、互いに独立し、同一または異なって、置換基を有していてもよいＣ1〜Ｃ10アルキル基（例えば、メチル基、エチル基であることが好ましい）であり、Ａ11、Ａ12、Ａ13及びＡ14のいずれか組み合わせが、互いに架橋して飽和環又は不飽和環を形成してもよく、かつ、置換基を有していてもよい。
【００６９】
例えば、下記式で表されるように、Ａ12及びＡ13が、互いに架橋して５員飽和環を形成し、Ａ11及びＡ14がメチル基である場合などを好ましく挙げることができる。
【化３０】
［式中、Ａ15-及びＳ環基は、上記の意味を有する。］
【００７０】
上記式（４ｂ）中、Ａ15-は、求核性のないアニオン種である。
本発明の第２態様において、Ａ15-は、ＰＦ6-又はＢＦ4-であることが好ましい。
【００７１】
上記式（４ｂ）中、Ｓ環基は、置換基を有していてもよい炭化水素芳香環若しくは置換基を有していてもよい窒素含有芳香環と縮合した１，２，４−トリアゾール−１−イルオキシ基、又は、置換基を有していてもよい、窒素原子を２以上含む５員環基である。
【００７２】
本発明の第２態様において、Ｓ環基で示される「炭化水素芳香環」、「窒素含有芳香環」、「窒素原子を２以上含む５員環基」には、置換基が導入されていてもよい。この置換基としては、例えば、Ｃ1〜Ｃ10炭化水素基（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、フェニル、ナフチル、インデニル、トリル、キシリル、ベンジル等）、Ｃ1〜Ｃ10アルコキシ基（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ等）、Ｃ6〜Ｃ10アリールオキシ基（例えば、フェニルオキシ、ナフチルオキシ、ビフェニルオキシ等）、ニトロ基、シアノ基、トリフルオロメチル基、水酸基、又はハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）などを挙げることができる。この場合、置換基は、置換可能な位置に１個以上導入されていてもよく、好ましくは１個〜４個導入されていてもよい。置換基数が２個以上である場合、各置換基は同一であっても異なっていてもよい。
【００７３】
本発明の第２態様において、Ｓ環基は、置換基を有していてもよいイミダゾリル基、置換基を有していてもよいトリアゾリル基、置換基を有していてもよいテトラゾリル基、又は、置換基を有しても良いベンゼン環若しくは置換基を有しても良いピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることが好ましく、ニトロ基、ハロゲン原子、シアノ基若しくはトリフルオロメチル基等の電子吸引型の置換基を有するイミダゾリル基、トリアゾリル基若しくはテトラゾリル基、又は、ピリジン環と縮合したトリアゾリルオキシ基であることがより好ましい。
【００７４】
本発明の第２態様において、使用される縮合剤の量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
【００７５】
本発明の第２態様において、縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いることが好ましい。
【００７６】
また、本発明の第２態様において、縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いてもよいし、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いてもよい。アニオン化したヌクレオシド誘導体と縮合剤との反応を避ける観点からは、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いることが好ましい。
【００７７】
また、本発明の第２態様では、続いて、ボラノホスホリル化剤とヌクレオシド誘導体とを反応させ得られた反応生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンとを反応させる。これにより、リン原子上のシアノエチル基が一つ除去され、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーを得ることができる。
【００７８】
本発明の第２態様において、反応を完結させるために、トリエチルアミンは、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【００７９】
本発明の第２態様において、典型的には、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体の溶液に、縮合剤と強塩基を加えて攪拌し、得られた生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンを反応させることで、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーを得る。具体的には、下記のスキームに従って進むと考えられる。
【００８０】
【化３１】
［式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2は、上記の意味を有する。］
【００８１】
本発明の第２態様において、溶媒としては上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤と上記式（３）で示されるヌクレオシド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【００８２】
本発明の第２態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【００８３】
本発明の第２態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【００８４】
本発明の第２態様で用いられる上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤は、例えば、トリス−２−シアノエチルホスファイトをＢＨ3・ＴＨＦ錯体、ＢＨ3・ＳＭｅ2錯体等でボラノ化してトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを得て、得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートとトリエチルアミンを反応させることにより得ることができる。
【００８５】
【化３２】
【００８６】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、使用されるＢＨ3・ＴＨＦ錯体、ＢＨ3・ＳＭｅ2錯体等のボラノ化剤の量は、ボラノ化反応を定量的に進行させるために、トリス−２−シアノエチルホスファイト１モルに対して１モル〜２モルであることが好ましく、１．２モル〜１．５モルであることが更に好ましい。
【００８７】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、反応を完結させるために、トリエチルアミンは、得られたトリス−２−シアノエチルボラノホスフェートに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、トリス−２−シアノエチルボラノホスフェート１モルに対して、５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【００８８】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、典型的には、トリス−２−シアノエチルホスファイトの溶液にＢＨ3・ＴＨＦ錯体を加えて攪拌し、得られた反応生成物を単離精製した後に、トリエチルアミンと反応させることで、上記式（２）で示されるボラノホスホリル化剤を得る。
【００８９】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、溶媒としてはトリス−２−シアノエチルホスファイトが溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【００９０】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【００９１】
ボラノホスホリル化剤の製造方法において、圧力は、大気圧であることが好ましい。また、雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【００９２】
本発明の第３態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いた二量体の製造方法の一態様が提供される。即ち、本発明の第３態様では、下記一般式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（１）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記一般式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させ、下記一般式（６）で示される二量体を製造する方法が提供される。
【００９３】
【化３３】
［式中、Ｂ1、Ｒ1、Ｒ2は、上記の意味を有する。］
【００９４】
上記式中、Ｂ1、Ｒ1及びＲ2についての説明は、本発明の第１態様〜第２態様においてしたのと同様である。
【００９５】
本発明の第３態様では、下記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体を用いる。
【化３４】
上記式（５）中、Ｂ2は、チミン、シトシン、ウラシル等のピリミジン塩基；アデニン、グアニン等のプリン塩基；または５−メチルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ヒドロキシメチルシトシン等のそれらの誘導体を表す。
【００９６】
溶媒への溶解度を向上させるために、塩基部位に、ジメトキシトリチル基（ＤＭＴｒ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、イソブチリル（ｉＢｕ）、フェノキシアセチル（ＰＡＣ）、４−（ｔ−ブチル）フェノキシアセチル（ＢＰＡ）、アリルオキシカルボニル（ＡＯＣ）、２−［（ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）メチル］ベンゾイル（ＳｉＯＭＢ）、２−（アセチルメチル）ベンゾイル（ＡＭＢ）、２−アジドベンゾイル（ＡＺＭＢ）、ジフェニルカルバモイル、フェニルアセチル等の保護基を導入してもよい。
【００９７】
本発明の第３態様において、Ｂ2は、シトシン、チミン、アデニン、グアニンまたはそれらの誘導体、あるいはそれらに保護基が導入されたものであることが好ましい。
【００９８】
上記式（５）中、Ｒ3は、保護基を表す。
本明細書において、保護基としては、二量体の製造方法が固相反応である場合には固相反応用の保護基（担体）を、液相反応の場合は液相反応用の各種保護基を挙げることができる。
【００９９】
本明細書において、液相反応用の保護基としては、アルキル基、アルケニル基、アシル基、置換基を有していてもよいシリル基、アルコキシアシル基、アリールオキシアシル基等を挙げることができる。
【０１００】
本明細書において、「アルケニル基」としては、制限するわけではないが、ビニル、アリル、１−プロペニル、イソプロペニル、２−メチル−１−プロペニル、２−メチルアリル、２−ブテニル等を挙げることができる。
【０１０１】
本明細書において、「アシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ1-6アルキル−カルボニル（たとえばメチルカルボニル、エチルカルボニル等）、Ｃ6-10アリール−カルボニル（たとえばベンゾイル）などが挙げられる。
【０１０２】
本明細書において、「置換基を有していてもよいシリル基」としては、制限するわけではないが、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基などを挙げることができる。
【０１０３】
本明細書において、「アルコキシアシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-6アルキル−カルボニル（たとえばメトキシメチルカルボニル、エトキシエチルカルボニル等）、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ6-10アリール−カルボニル（たとえばメトキシベンゾイル）などが挙げられる。
【０１０４】
本明細書において、「アリールオキシアシル基」としては、制限するわけではないが、Ｃ6-10アリールオキシ−Ｃ1-6アルキル−カルボニル（たとえばフェノキシアセチル、フェノキシエチルカルボニル等）、Ｃ6-10アリールオキシ−Ｃ6-10アリール−カルボニル（たとえばフェノキシベンゾイル）などが挙げられる。
【０１０５】
本明細書において、固相反応用の担体としては、たとえば、アミノアルキル化された孔径が制御された多孔性ガラス（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｐｏｒｅ ｇｌａｓｓ：ＣＰＧ）、アミノアルキル化された高架橋性ポリスチレン（ＨＣＰ）といった固相法に用いられる公知の高分子担体であって、できるだけ膨潤性がなく、過剰に用いた試薬を洗浄によって簡単に除去できるものを特に制限なく挙げることができる。
【０１０６】
担体とヌクレオシドの水酸基はコハク酸エステル、シュウ酸エステル、フタル酸エステル等のリンカーを介して結合していてもよい。
【０１０７】
本発明の第３態様において、Ｒ3は、二量体の製造方法が固相反応である場合には、ＣＰＧ又はＨＣＰ、あるいはリンカーを有する担体であることが好ましく、二量体の製造方法が液相反応である場合には、ベンゾイル基、フェノキシアセチル基であることが好ましい。
【０１０８】
上記式（５）中、Ｒ4は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。
【０１０９】
本発明の第３態様において、Ｒ4は、水素原子、メトキシ基、又はアシルオキシ基であることが好ましい。
【０１１０】
本発明の第３態様において、反応が固相反応の場合には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体に対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜５０モル用いることが好ましく、１０モル〜４０モル用いることが更に好ましく、２０モル〜３０モル用いることが更になお好ましい。
【０１１１】
本発明の第３態様において、反応が液相反応の場合には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーは、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
【０１１２】
また、本発明の第３態様では、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させるに際して、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基が用いられる。
【０１１３】
本発明の第３態様において、強塩基の説明は、本発明の第２態様においてしたのと同様である。
【０１１４】
本発明の第３態様において、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を完結させるために、シアノエチル基をβ脱離させない強塩基は、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【０１１５】
また、本発明の第３態様では、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体とを反応させるに際して、所定の縮合剤が用いられる。
【０１１６】
本発明の第３態様において、当該所定の縮合剤の説明は、本発明の第２態様においてしたのと同様である。
【０１１７】
本発明の第３態様において、使用される縮合剤は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
本発明の第３態様においても、本発明の第２態様と同様に、縮合剤が前記式（４ａ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いることが好ましい。
【０１１８】
また、本発明の第３態様において、縮合剤が前記式（４ｂ）で示される化合物である場合には、強塩基としては、より塩基性の強い上記式（７ａ）で示されるナフタレン誘導体を用いてもよいし、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いてもよい。アニオン化したヌクレオシド誘導体と縮合剤との反応を避ける観点からは、やや塩基性が弱い上記式（７ｂ）で示されるピリジン誘導体を用いることが好ましい。
【０１１９】
本発明の第３態様において、典型的には、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体の溶液に、縮合剤と強塩基を加えて攪拌することで、上記式（６）で示される二量体を得る。
【０１２０】
本発明の第３態様において、溶媒としては上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーと上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【０１２１】
本発明の第３態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【０１２２】
本発明の第３態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【０１２３】
本発明の第４態様では、本発明の第１態様にかかるボラノホスフェートモノマーを用いたオリゴヌクレオチド誘導体の製造方法の一態様が提供される。即ち、下記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と、脱保護試薬とを反応させて、Ｒ1を脱離させた後、上記式（８）中のシアノエチル基をβ脱離させない強塩基、及び、所定の縮合剤存在下、下記式（５）で示されるボラノホスフェートモノマーとを反応させることを特徴とする、下記式（９）で示されるオリヌクレオチド誘導体の製造方法が提供される。
【０１２４】
【化３５】
［式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4は、上記の意味を有する。］
【０１２５】
本発明の第４態様にしたがって脱保護反応及び縮合反応を繰り返すことで、任意の鎖長までオリゴヌクレオチド鎖を延長することができる。また、任意の核酸塩基を有するボラノホスフェートモノマー（１）を用いることで任意の塩基配列を有するオリゴマーを合成することができる。
【０１２６】
本発明の第４態様において、上記式中、Ｂ1、Ｂ2、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＲ4についての説明は、本発明の第１態様〜第３態様においてしたのと同様である。
【０１２７】
本発明の第４態様において、まず、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と脱保護試薬とを反応させて、Ｒ1を脱離させる。
【０１２８】
ここで、上記式（８）中、ｎは、１以上の整数を示し、１〜１００であることが好ましく、１０〜７０であることがより好ましく、１０〜３０であることが更に好ましい。
本発明の第４態様において、脱保護試薬は、たとえば、トリフルオロ酢酸、トリクロロ酢酸、ジクロロ酢酸を好ましく挙げることができる。
【０１２９】
本発明の第４態様において、脱保護試薬は、反応を完結させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して、２モル〜１００モル用いることが好ましく、５モル〜５０モル用いることが更に好ましく、１０モル〜２０モル用いることが更になお好ましい。
【０１３０】
本発明の第４態様において、脱保護反応によって生成するトリチルカチオンがボラノホスフェートに作用して分解反応を引き起こす恐れがあるため、脱保護反応は、トリチルカチオンを還元する試薬（トリチルカチオンスカベンジャー）存在下で行うことが好ましい。このような試薬としては、トリエチルシラン、ＢＨ3・ピリジン錯体を挙げることができる。
【０１３１】
本発明の第４態様において、トリチルカチオンを還元する試薬は、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体に対して、大過剰用いることが好ましい。例えば、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して、２モル〜１００モル用いることが好ましく、５モル〜５０モル用いることが更に好ましく、１０モル〜２０モル用いることが更になお好ましい。
【０１３２】
本発明の第４態様において、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体と脱保護試薬とを反応させてＲ1を脱離させた後、本発明の第３態様にかかる縮合反応と同様の縮合反応を行い、上記式（９）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体を製造する。
【０１３３】
本発明の第４態様において、オリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が固相反応である場合には、使用される上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して１モル〜５０モル用いることが好ましく、１０モル〜４０モル用いることが更に好ましく、２０モル〜３０モル用いることが更になお好ましい。
【０１３４】
本発明の第４態様において、オリゴヌクレオチド誘導体の製造方法が液相反応である場合には、使用される上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーの量は、縮合反応を定量的に進行させるために、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体１モルに対して１モル〜３モル用いることが好ましく、１．２モル〜１．５モル用いることが更に好ましい。
【０１３５】
本発明の第４態様で用いられる強塩基は、本発明の第２態様で説明したのと同様である。
本発明の第４態様において、強塩基は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマーに対して過剰量用いることが好ましい。例えば、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して５モル以上用いることが好ましく、７モル〜２０モル用いることが更に好ましい。
【０１３６】
本発明の第４態様で用いられる縮合剤は、本発明の第３態様で説明したのと同様である。
本発明の第４態様において、縮合剤は、反応が液相、固相のいずれの場合であっても、反応を定量的に進行させるために、上記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー１モルに対して、１モル〜２０モル用いることが好ましく、１．５モル〜１０モル用いることが更に好ましく、２モル〜３モル用いることが更になお好ましい。
【０１３７】
本発明の第４態様において、典型的には、上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体の溶液に、脱保護試薬を加え、反応生成物を得る。次いで、反応生成物の溶液に、上記式（５）で示されるヌクレオシド誘導体を加え、強塩基及び縮合剤を添加し、攪拌してオリゴヌクレオチド誘導体（９）を得る。
【０１３８】
本発明の第４態様において、溶媒としては上記式（８）で示されるオリゴヌクレオチド誘導体および縮合剤が溶解できるものが好ましい。たとえば、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを挙げることができ、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであることが好ましい。
【０１３９】
本発明の第４態様において、反応温度としては、−３０℃〜５０℃が好ましく、０℃〜４０℃がさらに好ましく、１５℃〜３０℃が更になお好ましい。所望により、光を遮断して反応を進行させてもよい。
【０１４０】
本発明の第４態様において、圧力は、大気圧であることが好ましい。雰囲気は、アルゴン等の不活性ガス雰囲気であることが好ましい。
【０１４１】
本発明の第４態様によって任意の鎖長を有するオリゴヌクレオチド誘導体が得られた場合には、まず、５'−末端のＲ1を本発明の第４態様において説明した脱保護反応によって除去する。
【０１４２】
次いで、得られた５'−位に遊離の水酸基を有するオリゴマーから、リン原子上の保護基である２−シアノエチル基をＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン）等で除去する。次いで、アンモニアで処理することにより、核塩基の保護基およびＲ4で示される担体が除去され、ボラノホスフェートオリゴマーが得られる。
【実施例】
【０１４３】
以下、本発明を実施例に基づいて説明する。ただし、本発明は、下記の実施例に制限されるものではない。
反応に用いた溶媒は、市販のものを蒸留した後ナトリウムまたはモレキュラーシーブ４Ａで乾燥したものを用いた。その他の試薬は市販のものをそのまま用いた。
【０１４４】
各種分析機器は、以下に示した機種を用いた。
1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（1Ｈ−ＮＭＲ）：バリアン Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００（３００ＭＨｚ）
31Ｐ−核磁気共鳴スペクトル（31Ｐ−ＮＭＲ）：バリアン Ｍｅｒｃｕｒｙ ３００（１２１．５ＭＨｚ）
カラムクロマトグラフィーに充填するシリカゲルには、ＫＡＮＴＯ ＣＨＥＭＩＣＡＬのＳｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０Ｎを用いた。
【０１４５】
参考例１
トリス−２−シアノエチル ボラノホスフェートの調製
【化３６】
【０１４６】
トリス−２−シアノエチルホスファイト（２４．７ｇ，１０２．４ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（１０３ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、ＢＨ3・ＴＨＦ／ＴＨＦ（１２１．５ｍＬ，１１３ｍｍｏｌ）の０．９３Ｍ溶液を０℃で滴下にて加えた。反応混合物を１時間室温にて攪拌し、反応混合物を減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラムで精製した（１５０ｇ）。カラムクロマトグラフィーは、酢酸エチルを用いて行った。トリス−２−シアノエチルボラノホスフェートを含む部分を集めて減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色油状物質として得た（２２．９ｇ，８８％）。
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ４．３１（６Ｈ，ｍ），２．７９（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１９．８−１１６．９（ｍ）．
【０１４７】
参考例２
トリエチルアンモニウム ビス−２−シアノエチルボラノホスフェートの調製
【化３７】
【０１４８】
参考例１で得たトリス−２−シアノエチルボラノホスフェート（２２．８ｇ，８９．４ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液（８９．４ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、Ｅｔ3Ｎ（１２４ｍＬ，８９４ｍｍｏｌ）を室温で滴下にて加え、昇温させ、還流した。１時間攪拌した後、反応混合物を室温まで冷却した。残渣を減圧下で乾燥させ、無水トルエン及びＣＨＣｌ3で共沸を繰り返し、表題化合物を無色油状物質として得た（２７．１ｇ，定量的）。
【０１４９】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．５８（１Ｈ，ｂｓ），４．１４−４．０４（４Ｈ，ｍ），３．０７（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．７４−２．６６（４Ｈ，ｍ）１．３４（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９６．６４（ｑ，ＪPB＝１２７．３７Ｈｚ）
【０１５０】
参考例１〜参考例２の反応スキームを下記に示す。
【化３８】
［式中、「ＣＥ」はシアノエチル基を表す。］
【０１５１】
参考例３
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化３９】
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン（１．３１ｇ，２．００ｍｍｏｌ）及び参考例２で得られたトリエチルアンモニウム ビス−２−シアノエチルボラノホスフェート（０．７３０ｇ，２．４０ｍｍｏｌ）を、無水ピリジンによる共沸、次いで無水トルエンによる共沸を繰り返すことで乾燥させた後、無水アセトニトリル（２０．０ｍＬ）に溶解させた。溶液に、引き続いて、２，６−ルチジン（２．３０ｍＬ，２０．０ｍｍｏｌ）、ＰｙＮＴＰ（トリス（ピロリジン−１−イル）３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール−１−イル ホスホニウム ヘキサフルオロホスフェート）（２．４０ｇ，４．８０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ3（５０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、水層をＣＨＣｌ3（２ｘ５０ｍＬ）で逆抽出した。有機層及び洗浄液を集めて、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣を無水トルエンで共沸を繰り返し、シリカゲルカラムで精製した（１００ｇ）。カラムクロマトグラフィーは、酢酸エチルを用いて行った。ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートを含む部分を集めて、減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色泡状物として得た（１．２９ｇ，７７％）。
【０１５２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９．０３（１Ｈ，ｂｓ），８．７２（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｓ），８．０７−７．１８（１４Ｈ，ｍ），６．８１（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｍ），４．３８（１Ｈ，ｍ），４．２９−４．１７（４Ｈ，ｍ），３．７８（６Ｈ，ｓ），３．４４（２Ｈ，ｍ），２．８２−２．５７（６Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２０．０−１１６．８（ｍ）．
【０１５３】
参考例４
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４０】
【０１５４】
参考例３と同様の手順を行った。但し、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２"−デオキシアデノシンの代わりに、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジンを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（粗生成物）。
【０１５５】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．６６（１Ｈ，ｓ），８．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），７．９４−７．１８（１５Ｈ，ｍ），６．８６（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），６．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），５．１６−５．０６（１Ｈ，ｍ），４．３５−４．２９（１Ｈ，ｍ），４．２５−４．１３（２Ｈ，ｍ），３．７８（６Ｈ，ｓ），３．５１−３．４７（２Ｈ，ｍ），２．９４−２．３７（４Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１９．８−１１６．４（ｍ）．
参考例５
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−ジフェニルカルバモイル−Ｎ2−フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４１】
【０１５６】
参考例３と同様の手順を行った。但し、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２'−デオキシアデノシンの代わりに、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6ジフェニルカルバモイル−Ｎ2フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシンを用いた。表題化合物を淡黄色泡状物として得た（収率９０％）。
【０１５７】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．１０（１Ｈ，ｓ），７．９１（１Ｈ，ｓ），７．４６−７．１４（２４Ｈ，ｍ），６．７８（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｍ），４．３２（１Ｈ，ｍ），４．２２−４．０８（４Ｈ，ｍ），３．９８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2 ｏｆ Ｐａ），３．７４（６Ｈ，ｓ），３．４６−３．３１（２Ｈ，ｍ），２．９９−２．５０（６Ｈ，ｍ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１９．０２−１１５．６１（ｍ）．
【０１５８】
参考例６
ビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−３'−イルボラノホスフェート
【化４２】
【０１５９】
参考例３と同様の手順を行った。但し、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6ベンゾイル−２'−デオキシアデノシンの代わりに、５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3ベンゾイルチミジンを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率９８％）。
【０１６０】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ７．９５，７．９３（２Ｈ，ｍ），７．７２（１Ｈ，ｓ），７．６８−７．２１（１２Ｈ，ｍ），６．８７（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４５，６．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ1',2'／Ｊ1',2"＝５．７Ｈｚ ａｎｄ ８．７Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），４．２９−４．１１（５Ｈ，ｍ），３．８０（６Ｈ，ｓ），３．４８−３．４４（２Ｈ，ｍ，５'−Ｈ ａｎｄ ５"−Ｈ），２．８２−２．４６（６Ｈ，ｍ），１．４６（３Ｈ，ｓ，５−ＣＨ3），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１１８．７９−１１５．４８（ｍ）．
【０１６１】
実施例１
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４３】
【０１６２】
参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェート（１．２９ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液（２ｍＬ）に、アルゴン雰囲気下で、Ｅｔ3Ｎ（２．８ｍＬ，２０ｍｍｏｌ）を室温にて滴下により加えた。反応混合物を１時間、室温にて攪拌し、反応混合物を減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラム（４０）で精製した。カラムクロマトグラフィーの溶出は、０．５％Ｅｔ3Ｎを含むＣＨ2Ｃｌ2によって行い、メタノール（０−４％）により勾配を与えた。トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートを含む部分を集めて乾燥させた。過剰なＥｔ3Ｎは、無水トルエンによって数回共沸させることにより除去し、表題化合物を無色泡状物質として得た（６９８．６ｍｇ，５１％）。
【０１６３】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９．１８（１Ｈ，ｂｓ），８．７１（１Ｈ，ｓ，８−Ｈ），８．２０（１Ｈ，ｓ），８．０２，８．０５（２Ｈ，２ｍ），７．６５−７．１５（１２Ｈ，ｍ），６．７９（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．５８（１Ｈ，ｍ），５．１４（１Ｈ，ｍ），４．４３（１Ｈ，ｍ），４．０８−３．９１（２Ｈ，ｍ），３．７７（６Ｈ，ｓ），３．４１（２Ｈ，ｍ），３．０４（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．９６−２．４６（４Ｈ，ｍ），１．３１（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３５Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９８．５５−９３．８０（ｍ）．
【０１６４】
実施例２
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４４】
【０１６５】
実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートの代わりに、参考例４で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率５６％，２段階）。
【０１６６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．５０（１Ｈ，ｂｓ），８．７０（１Ｈ，ｂｓ），８．２４（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），７．９０，７．８７（２Ｈ，２ｍ），７．６５−７．１１（１３Ｈ，ｍ），６．９４−６．７９（４Ｈ，ｍ），６．３６−６．２６（１Ｈ，ｍ），５．０４（１Ｈ，ｍ），４．４１−４．３１（１Ｈ，ｍ），４．００−３．８８（２Ｈ，ｍ），３．７９（６Ｈ，ｓ），３．５２−３．４４（２Ｈ，ｍ），３．０４（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），２．９０−２．７８（１Ｈ，ｍ），２．７２−２．４７（２Ｈ，ｍ），２．３９−２．２４（１Ｈ，ｍ），１．３１（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ3 ｏｆ Ｅｔ3ＮＨ+），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９８．９３−９３．６７（ｍ）．
【０１６７】
実施例３
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−ジフェニルカルバモイル−Ｎ2−フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４５】
【０１６８】
実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートの代わりに、参考例５で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ6−ジフェニルカルバモイル−Ｎ2−フェニルアセチル−２'−デオキシグアノシン−３'−イル ボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率９０％）。
【０１６９】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．５２（１Ｈ，ｂｓ），８．０８（１Ｈ，ｂｓ），８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．５１−７．０９（２４Ｈ，ｍ），６．７５（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４５，６．４１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ1',2'／Ｊ1',2"＝６．３Ｈｚ ａｎｄ １２．９Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，ｍ），４．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），４．０７−３．８６（４Ｈ，ｍ），３．６９（６Ｈ，ｓ），３．３８−３．２８（２Ｈ，ｍ），２．９８（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．８７−２．４４（４Ｈ，ｍ），１．２６（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９９．０９−９３．２３（ｍ）．
【０１７０】
実施例４
トリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−３'−イル ボラノホスフェート
【化４６】
【０１７１】
実施例１と同様の手順で行った。但し、参考例３で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシアデノシン−３'−イル ボラノホスフェートの代わりに、参考例６で得たビス−２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−３'−イル ボラノホスフェートを用いた。表題化合物を無色泡状物として得た（収率７４％）。
【０１７２】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２．４２（１Ｈ，ｂｓ），７．９７−７．２０（１６Ｈ，ｍ），６．８４（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．４６，６．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ1',2'／Ｊ1',2"＝５．７Ｈｚ ａｎｄ ８．１Ｈｚ），５．２１−５．１０（１Ｈ，ｍ，３'−Ｈ），４．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，４'−Ｈ），４．０３−３．８６（２Ｈ，ｍ），３．７９（６Ｈ，ｓ），３．４５−３．４２（２Ｈ，ｍ），２．９６（６Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６８−２．３９（４Ｈ，ｍ），１．３９，１．３５（３Ｈ，２ｓ），１．２５（９Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ９８．３１−９３．５９（ｍ）．
【０１７３】
実施例５
２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ３'−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−５'−イル ボラノホスフェート
【化４７】
【０１７４】
３'−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン（４５．０ｍｇ，０．１００ｍｍｏｌ）及び実施例２で得られたトリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート（１０３．９ｍｇ，０．１２０ｍｏｌ）を、無水ピリジンによる共沸、次いで無水トルエンによる共沸を繰り返すことで乾燥させた後、無水ＣＨ3ＣＮ（１．００ｍＬ）に溶解させた。溶液に、引き続いて、２，６−ルチジン（１１６μＬ，１．００ｍｍｏｌ）、ＰｙＮＴＰ（１２０ｍｇ，０．２４０ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応混合物をＣＨＣｌ3（１０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（３ｘ１０ｍＬ）で洗浄し、水層をＣＨＣｌ3（２ｘ１０ｍＬ）で逆抽出した。有機層及び洗浄液を集めて、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲルカラムで精製した（１０ｇ）。カラムクロマトグラフィーの溶出は、ＣＨ2Ｃｌ2を用いて行い、メタノール（０−１．５％）により勾配を与えた。
【０１７５】
２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ３'−Ｏ−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−５'−イル ボラノホスフェートを含む部分を集めて、減圧下で乾燥させ、表題化合物を無色泡状物として得た（１１３．４ｍｇ，９５％）。
【０１７６】
1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ８．２０−８．１３（１Ｈ，ｍ），８．０６−７．１６（２６Ｈ，ｍ），６．９１−６．８２（４Ｈ，ｍ），６．５４−６．４６（１Ｈ，ｍ），６．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），５．５５−５．４０（１Ｈ，ｍ），５．２３−５．１４（１Ｈ，ｍ），４．５４−４．０９（６Ｈ，ｍ），３．９３−３．６４（６Ｈ，ｍ），３．５６−３．４６（２Ｈ，ｍ），３．０６−２．３５（６Ｈ，ｍ），２．０１，１．９９（３Ｈ，２ｓ），１−０（３Ｈ，ｂｑ，ＢＨ3）；31Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ１２１．２１−１１７．５５（ｍ）．
【０１７７】
参考例３〜実施例５の反応スキームを下記に示す。
【化４８】
［式中、「ＣＥ」はシアノエチル基を表す。］
【０１７８】
実施例６
Ｎ4−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ３'−ベンゾイル−Ｎ3−ベンゾイルチミジン−５'−イル ボラノホスフェート
【化４９】
【０１７９】
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジンの３'−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（２９．２ｍｇ、０．５μｍｏｌ）をＣＨ2Ｃｌ2−Ｅｔ3ＳｉＨ（１：１，ｖ／ｖ）の３％ＤＣＡ（ジクロロ酢酸）溶液で各５秒間・３回洗い、次いで無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液、無水ＣＨ3ＣＮ溶液で各０．５ｍｌ×３回洗い、減圧乾燥した。１０分後、ＭＮＴＰ（１，３−ジメチル−２−ピロリジン−１−イル−２−（３−ニトロ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）−１，３，２−ジアザホスホリジニウム ヘキサフルオロホスフェート）（８．７ｍｇ、１０μｍｏｌ）、実施例２で得られたトリエチルアンモニウム ２−シアノエチル ５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ6−ベンゾイル−２'−デオキシシチジン−３'−イル ボラノホスフェート（８．９ｍｇ、２０μｍｏｌ）を加え、再び減圧乾燥した。０．５Ｍ２，６−ルチジン／ＣＨ3ＣＮ溶液を１００μｌ加え、３分間攪拌した（二量体の合成）。
【０１８０】
その後無水ＣＨ3ＣＮ溶液、無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液で洗浄し、ＣＨ2Ｃｌ2−Ｅｔ3ＳｉＨ（１：１，ｖ／ｖ）の３％ＤＣＡ溶液で各５秒間・３回洗浄した（ジメトキシトリチル基の除去）。
次に無水ＣＨ2Ｃｌ2溶液、無水ＴＨＦ溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／無水酢酸／ＴＨＦ溶液（２：１：７、ｖ／ｖ／ｖ）溶液を加え、３０秒攪拌した。その後無水ＴＨＦ溶液、無水ＣＨ3ＣＮ溶液で洗浄し、０．２Ｍ ＤＢＵ／ＣＨ3ＣＮ溶液を加え、５分間攪拌した（２−シアノエチル基の除去）。
【０１８１】
その後無水ＣＨ3ＣＮ溶液で洗浄し、減圧乾燥後、アンモニア・メタノール溶液０．５ｍｌを加え、密栓をする。室温で１２時間攪拌した後、吸引濾過を行ないＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した（担体の除去）。
反応混合物をジエチルエーテル（５ｘ３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１ｘ３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた（生成物の精製）。
残渣を逆相ＨＰＬＣで分析した。（０−１５％アセトニトリルの０．１Ｍ酢酸アンモニウムバッファー（ｐＨ７．０）による線形勾配、４５分、５０℃、流速１ｍｌ／分）ＨＰＬＣのピークの積分値より算出した収率は９５％。
【０１８２】
実施例７
ボラノホスフェート４量体及び１２量体の合成
（１）４量体の合成
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ3−ベンゾイルチミジンの３'−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（０．５μｍｏｌ）に対し、下記表１に示した合成サイクルにより、ボラノホスフェート４量体ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）を合成した。
【０１８３】
【表１】
【０１８４】
表１−ステップ１０で脱保護した粗精製の４量体に対し、吸引濾過を行いＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をジエチルエーテル（５×３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１×３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた。陰イオン交換ＨＰＬＣにより分離精製後、Ｃ18逆相カラムカートリッジで脱塩を行ったところ、単離収率３０％で、目的とするボラノホスフェート４量体；ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）を得ることができた。
【０１８５】
（２）１２量体の合成
５'−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ３−ベンゾイルチミジンの３'−水酸基にサクシニルリンカーを介してＣＰＧに担持させた固相担体（０．５μｍｏｌ）に対し、表１に示した合成サイクルにより、ボラノホスフェート１２量体ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）3を合成した。
上記表１−ステップ１０で脱保護した粗精製の１２量体に対し、吸引濾過を行ないＣＰＧと濾別し減圧乾燥後、水（３ｍＬ）で希釈した。反応混合物をジエチルエーテル（５×３ｍＬ）で洗浄し、エーテル層を水（１×３ｍＬ）で逆抽出した。水層及び洗浄液を集めて、減圧下で乾燥させた。１５％ＰＡＧＥ／７Ｍ Ｕｒｅａ（１ｍｍ厚、４０×２０ｃｍ）により精製を行なったところ、単離収率１６％で、目的とするボラノホスフェート１２量体；ｄ（ＣPBＡPBＧPBＴ）3を得ることができた。
【０１８６】
実施例７における合成スキームを以下に示す。
【化５０】
【０１８７】
上記表１及び合成スキーム中、「モノマー」「ＭＮＴＰ」「ＤＭＡＮ」の構造式は下記の通りである。
【化５１】
【産業上の利用可能性】
【０１８８】
本発明により、ボラノホスフェートオリゴマーが提供される。本発明により得られるボラノホスフェートオリゴマーはアンチセンス分子として有用であり、試薬又は医薬品として利用することが可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー。
【化１】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、
Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、
Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、
又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
【請求項１】
下記式（１）で示されるボラノホスフェートモノマー。
【化１】
［式中、Ｂ1は、ピリミジン塩基、プリン塩基、又は、それらの誘導体を表し、
Ｒ1は、ジメトキシトリチル基、又は、モノメトキシトリチル基であり、
Ｒ2は、水素原子、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アシルオキシ基、
又は、トリアルキルシリルオキシ基を表す。］
【公開番号】特開２０１１−２２５５９８（Ｐ２０１１−２２５５９８Ａ）
【公開日】平成２３年１１月１０日（２０１１．１１．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１５６３８５（Ｐ２０１１−１５６３８５）
【出願日】平成２３年７月１５日（２０１１．７．１５）
【分割の表示】特願２００６−５１０６２７（Ｐ２００６−５１０６２７）の分割
【原出願日】平成１７年２月４日（２００５．２．４）
【出願人】（５０８３３７９７２）株式会社キラルジェン (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１１月１０日（２０１１．１１．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年７月１５日（２０１１．７．１５）
【分割の表示】特願２００６−５１０６２７（Ｐ２００６−５１０６２７）の分割
【原出願日】平成１７年２月４日（２００５．２．４）
【出願人】（５０８３３７９７２）株式会社キラルジェン (4)
【Ｆターム（参考）】
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