マンノース認識型低分子レクチン
【課題】低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材の提供。
【解決手段】式（１）で示されるベンズアミド誘導体。
【化３】
（式中、Ｘは９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むペプチド構造を表す。但し、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。また、ＲはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3またはＨを表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７の整数を表す。）
【解決手段】式（１）で示されるベンズアミド誘導体。
【化３】
（式中、Ｘは９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むペプチド構造を表す。但し、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。また、ＲはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3またはＨを表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７の整数を表す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低分子の糖鎖認識物質および糖鎖認識素材に関するものである。より詳しくは、低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材、および、それらによるマンノース提示物質の検出、分離、精製の方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生体の中で重要な役割を果たしている糖鎖の機能解析を行うために、糖鎖を認識する蛋白質であるレクチンが頻繁に用いられている。しかし、レクチンは蛋白質であるために、大量調製に手間が掛かるばかりでなく、変性や分解等の問題もあり、必ずしも扱い易い物質ではない。
そのため、低分子を用いてレクチンの持つ糖鎖認識機能を実現しようとする研究が盛んに行われているが、多くの研究は有機溶媒中での実験であり、糖鎖が機能している水溶液中で糖鎖を認識する低分子化合物はほとんど知られていない。
【０００３】
水溶液中で糖鎖を認識する低分子化合物として、ファージディスプレイ法を用いたランダムペプチドライブラリーから選別されたペプチドの報告がある。例えば、Ｔ抗原に結合するペプチド（非特許文献１参照）やＧＭ１に結合するペプチド（非特許文献２参照）が見出されている。この方法の問題点として、構造既知の糖鎖サンプルが大量に必要であること、ペプチドの設計はできないので、ペプチドの選別に多大な労力を要すること、糖鎖解析の基本となる単糖を認識するペプチドが上手く選別できないこと等が挙げられる。
【０００４】
糖鎖認識蛋白質の部分配列に相当するペプチドが、糖鎖を認識する場合もあることも報告されている。例えば、百日咳毒素のフラグメント（非特許文献３参照）や植物レクチンのフラグメント（非特許文献４参照）等が挙げられる。これらの場合は、蛋白質と糖鎖との複合体の結晶構造等から、アミノ酸配列の設計も可能であり、植物レクチンの場合には、単糖の認識も可能になる。これらのペプチドの最大の問題は、その糖鎖に対する結合力が低く、工業的な利用が難しい点にあった。
【０００５】
我々は、ペプチドを人工脂質に結合させた化合物を合成し、その脂質部分を用いて疎水表面に固定することにより、ペプチドの機能を工業的に利用する方法を開発し（特許文献１参照）、それを低分子の糖鎖認識物質へと応用している（特許文献２参照）。しかし、その糖鎖認識素子としてマメ科レクチンの配列を用いる限り、ガラクトースを認識するものしか得られなかった。高マンノース型の糖鎖を有する多くの糖蛋白質やマンナン等、自然界にはマンノースを提示する物質も多く、マンノースを認識する低分子の糖鎖認識物質や糖鎖認識素材の開発が望まれていた。
【特許文献１】特開２００２−２６５４２７号公報
【特許文献２】特開２００４−２６２７８９号公報
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J. Mol. Biol.）、１９９７年、２７０巻、ｐ．３７４−３８４
【非特許文献２】トレンズ・イン・グライコサイエンス・アンド・グライコバイオロジー（Trends Glycosci. Glycobiol.）、２００１年、１３巻、ｐ．５５７−５６０
【非特許文献３】ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、１９９２年、３６巻、ｐ．２５８１０−２５８１５
【非特許文献４】蛋白質核酸酵素、１９９２年、３７巻、ｐ．１８２０−１８２９
【０００６】
以下で、ＡｌａはＬ−アラニン残基の、ＡｒｇはＬ−アルギニン残基の、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基の、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基の、ＣｙｓはＬ−システイン残基の、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基の、ＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基の、Ｇｌｙはグリシン残基の、ＩｌｅはＬ−イソロイシン残基の、ＬｅｕはＬ−ロイシン残基の、ＬｙｓはＬ−リジン残基の、ＰｈｅはＬ−フェニルアラニン残基の、ＰｒｏはＬ−プロリン残基の、ＳｅｒはＬ−セリン残基の、ＴｈｒはＬ−スレオニン残基の、ＴｙｒはＬ−チロシン残基の、ＶａｌはＬ−バリン残基の、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基の、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基の、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカルボニルの、ｔＢｕはｔ−ブチルの、ＯｔＢｕはｔ−ブチル（オキシ）の、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニルの、Ｐｍｃは２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニルの、ＩＰＥはジイソプロピルエーテルの、Ｔｒｔはトリフェニルメチルの、ＷＳＣ・ＨＣｌは水溶性カルボジイミドの、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの、ＰｙＢＯＰはベンゾリアゾール−１−イルーオキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩の、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンの略号である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材およびマンノース提示物質の検出、分離、精製の方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を鋭意検討した結果、本発明者らは、糖鎖認識に関わるアミノ酸配列としてマメ科レクチンの部分配列ではなく、マンノース特異的な認識が知られているGalanthus nivalisレクチンのファミリーに属する蛋白質の部分配列を人工脂質に結合させることにより、低分子のマンノース認識物質が得られ、その低分子を疎水性表面に固定することにより、マンノース認識素材が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、式（１）で示されるベンズアミド誘導体、および、９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつその配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒ（配列番号１〜１６）なる配列を含むペプチド構造を固定化した糖鎖認識素材、および、これらを用いてマンノース提示物質を検出または分離または精製する方法を提供する。
【化２】
（式中、Ｘは９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒ（配列番号１〜１６）なる配列を含むペプチド構造を表す。但し、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。また、ＲはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3またはＨを表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７の整数を表す。）
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、自然界に多種多様な形で存在するマンノース提示物質を認識する機能素子を、低分子のマンノース認識化合物およびマンノース認識素材として提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の化合物の合成は如何なる方法によっても構わない。
例えば、我々が既にＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐが結合した人工脂質の合成に用いた方法（特開２００２−２６５４２７号公報）に従って、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドや、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，４，５−トリス（ドデシルオキシ）ベンズアミド等の人工脂質を原料として、Ｆｍｏｃ法によって合成することが出来る。
【００１２】
ペプチド構造のアミノ酸配列としては、９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むものであれば、何であっても構わない。マンノースを認識するGalanthus nivalisレクチンのファミリーには、既に多くの類縁蛋白質が同定されており、マンノースの認識が確認され、Ｘ線構造解析によって立体構造上の対応も明らかな配列として、例えば、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１８）、または、
Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号１９）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２０）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２１）、または、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２２）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２３）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２４）、または、
Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２５）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２６）、または、
Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２７）
といった配列を用いることもできるし、マンノース認識が確認されていれば、アミノ酸配列のみが決定されている類縁蛋白質の対応する配列を用いることもできる。
【００１３】
上記のコンセンサス配列を含んでいればよいので、その周囲の配列の選択は自由であり、例えば、各々の配列の由来する元の蛋白質の配列からコンセンサス配列を含んで１５残基以下の配列を選択することもできるし、他の部分を自由に選択した、例えば、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号２８）や
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２９）
等の人工的な配列であっても構わない。
【００１４】
９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むペプチド構造を素材表面に固定化する方法は如何なる方法を用いても構わない。
例えば、式（１）で示されるベンズアミド誘導体等の、上記の配列を持ったペプチドを疎水性を持つ部分構造に結合した化合物を、クロロホルムやエタノール等の適当な溶媒に溶解し、プラスチック容器、ビーズ、不織布等の任意の形状を持つ疎水性表面にコーティングすることで、マンノース認識素材とすることができる。あるいは、ポリスチレン、ポリエステル、ポリアミド、セファロース、キトサン等の高分子素材、または、シリカゲル、酸化チタン、金等の無機素材の表面の官能基を利用して、あるいは、アミノ基やカルボキシル基等の適当な官能基を導入して、上記の配列を持ったペプチドを化学的に結合させることもできる。
【００１５】
マンノース認識物質やマンノース認識素材には様々な用途があるが、例えば、バイオセンサーの疎水性表面に固定化すればマンノース提示物質を検出する素材として、ポリスチレンディッシュにコートすればマンノース提示物質を吸着させる素材として、多孔質ビーズにコートすればマンノース提示物質を分離する素材として用いることが出来る。
【００１６】
遊離のペプチドでは弱かった糖鎖との相互作用は、マンノース認識物質を疎水表面に高い密度で固定化することにより、いわゆるクラスター効果によって、増強することができる。また、マンノース認識物質を表面プラズモン共鳴バイオセンサー等の高感度検出器に固定化することによって、実用に耐える糖鎖認識素材とすることができる。
【００１７】
以下に、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の記述に限定されるものではない。
【実施例１】
【００１８】
（Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドの合成（配列番号３０））
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（1.29 g, 4.33 mmol）、水溶性カルボジイミド（831 mg, 4.33 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（663 mg, 4.33 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.70 g, 2.89 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ（Ｆｍｏｃ）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（2.29 g, 2.64 mmol, 91%）を得た。
【００１９】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ（Ｆｍｏｃ）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.37 g, 1.58 mmol）をジクロロメタン（3 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて、３時間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.00 g, 1.55 mmol, 98%）を得た。
【００２０】
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（1.01 g, 2.19 mmol）、水溶性カルボジイミド（600 mg, 3.13 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（498 mg, 3.26 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（509 mg, 0.788 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（770 mg, 0.799 mmol, 99%）を得た。
【００２１】
Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（850 mg, 0.860 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて、１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（650 mg, 0.849 mmol, 99%）を得た。
【００２２】
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ（484 mg, 1.37 mmol）、水溶性カルボジイミド（322 mg, 1.68 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（248 mg, 1.62 mmol）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（602 mg, 0.786 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ（Ｆｍｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（856 mg, 0.777 mmol, 99%）を得た。
【００２３】
Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ（Ｆｍｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（830 mg, 0.754 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて、３時間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（656 mg, 0.746 mmol, 99%）を得た。
【００２４】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（432 mg, 1.27 mmol）、水溶性カルボジイミド（328 mg, 1.71 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（206 mg, 1.35 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（630 mg, 0.717 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応中に生じた白色沈殿物をろ過後、沈殿物をジクロロメタンで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（818 mg, 0.682 mmol, 95%）を得た。
【００２５】
Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.43 g, 1.19 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.15 g, 1.17 mmol, 98%）を得た。
【００２６】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（470 mg, 1.38 mmol）、水溶性カルボジイミド（308 mg, 1.60 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（209 mg, 1.36 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.09 mg, 1.12 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応中に生じた白色沈殿物をろ過後、沈殿物をジクロロメタンで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.33 g, 1.02 mmol, 91%）を得た。
【００２７】
Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.32 g, 1.01 mmol）をクロロホルム（20 ml）、メタノール（5 ml）に溶解し、ピペリジン（3 ml）を加えて、３０分間還流した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.00 g, 0.929 mmol, 92%）を得た。
【００２８】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（360 mg, 0.604 mmol）、ＰｙＢＯＰ（323 mg, 0.620 mmol）、ＤＭＡＰ（11.2 mg, 0.0917 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.00 g, 0.600 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（662 mg, 0.400 mmol, 98%）を得た。
【００２９】
Ｎ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（225 mg, 0.136 mmol）をジクロロメタン（1 ml）、メタノール（0.5 ml）に溶解し、ピペリジン（1 ml）を加えて、６時間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（190 mg, 0.132 mmol, 97%）を得た。
【００３０】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ・ＩＰＥ（233 mg, 0.304 mmol）、ＰｙＢＯＰ（227 mg, 0.435 mmol）、ＤＭＡＰ（8.20 mg, 0.0671 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（126 mg, 0.0880 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（175 mg, 0.0843 mmol, 96%）を得た。
【００３１】
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）（117 mg, 0.0563 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（1 ml）を加えて、１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（99.2 mg, 0.0534 mmol, 95%）を得た。
【００３２】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（81.3 mg, 0.198 mmol）、水溶性カルボジイミド（73.3 mg, 0.382 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（57.2 mg, 0.374 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（99.2 mg, 0.0534 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（100 mg, 0.0488 mmol, 91%）を得た。
【００３３】
Ｎ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）（95.2 mg, 0.0423 mmol）をジクロロメタン（1 ml）に溶解し、ピペリジン（0.5 ml）を加えて、１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（81.5 mg, 0.0402 mmol, 95%）を得た。
【００３４】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（71.9 mg, 0.153 mmol）、水溶性カルボジイミド（68.1 mg, 0.355 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（50.7 mg, 0.331 mmol）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（76.8 mg, 0.379 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（92.1 mg, 0.0372 mmol, 98%）を得た。
【００３５】
Ｎ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）（90.0 mg, 0.0363 mmol）をジクロロメタン（1.5 ml）、メタノール（1.5 ml）に溶解し、ピペリジン（0.5 ml）を加えて、２０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（79.5 mg, 0.0352 mmol, 97%）を得た。
【００３６】
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（53.0 mg, 0.0868 mmol）、水溶性カルボジイミド（32.6 mg, 0.170 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（22.4 mg, 0.164 mmol）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（76.0 mg, 0.0337 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（96.0 mg, 0.0337 mmol, 100%）を得た。
【００３７】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（95.2 mg, 0.0334 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（1 ml）を加えて、２０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（85.5 mg, 0.0314 mmol, 94%）を得た。
【００３８】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（80.0 mg, 0.0294 mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝９：１（2 ml）を加えて、１時間撹拌した。反応終了後メタノールを加え、生じた白色沈澱をジクロロメタン、メタノールで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（37.6 mg, 0.0226 mmol, 77%）を得た。
MALDI-TOFMS: (matrix: α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1763.01 ([M+H]+).
【実施例２】
【００３９】
（Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドとリボヌクレアーゼＡおよびＢとの相互作用）
上で得られたベンズアミド誘導体とリボヌクレアーゼＡおよびＢとの相互作用は、分子間相互作用解析装置であるＩＡｓｙｓ Ｐｌｕｓ（Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｓｅｎｓｏｒｓ社製）を用いて解析した。
疎水性キュベットを、界面活性剤、バッファー、２−プロパノールで洗浄の後、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドの０．４ｍＭ溶液（２−プロパノール：クロロホルム＝１９：１）を添加して固定化を行った。固定化量は８６４Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓだった。
このキュベットを、バッファー、塩酸水溶液、水酸化ナトリウム水溶液で洗浄の後、牛血清アルブミンでブロッキングを行い、バッファーで洗浄の後、相互作用を確認した。
【００４０】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドを固定化したキュベットに、リボヌクレアーゼＡの１００μＭ溶液を５０μｌ添加したところ、５分後の吸着量は２１６Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであり、バッファー洗浄後、５分経過した時の吸着量は４Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであった。
また、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドを固定化したキュベットに、リボヌクレアーゼＢの１００μＭ溶液を５０μｌ添加したところ、５分後の吸着量は２２４Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであり、バッファー洗浄後、５分経過した時の吸着量は５３Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであった。
従って、高マンノース型糖鎖を持つリボヌクレアーゼＢとは結合し、高マンノース型糖鎖を持たないリボヌクレアーゼＡとはほとんど結合しないことが示され、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドはマンノース提示物質を認識することが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明は、低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材を提供するものであり、バイオセンサー、アフィニティークロマトグラフィー等の主要な構成要素として、マンノース提示物質の検出、分離、精製への利用が期待される。
【配列表フリーテキスト】
【００４２】
配列番号１-３０：糖結合ペプチドである。
配列番号１-１６：Xaa（存在位置２位、４位）は蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、低分子の糖鎖認識物質および糖鎖認識素材に関するものである。より詳しくは、低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材、および、それらによるマンノース提示物質の検出、分離、精製の方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
生体の中で重要な役割を果たしている糖鎖の機能解析を行うために、糖鎖を認識する蛋白質であるレクチンが頻繁に用いられている。しかし、レクチンは蛋白質であるために、大量調製に手間が掛かるばかりでなく、変性や分解等の問題もあり、必ずしも扱い易い物質ではない。
そのため、低分子を用いてレクチンの持つ糖鎖認識機能を実現しようとする研究が盛んに行われているが、多くの研究は有機溶媒中での実験であり、糖鎖が機能している水溶液中で糖鎖を認識する低分子化合物はほとんど知られていない。
【０００３】
水溶液中で糖鎖を認識する低分子化合物として、ファージディスプレイ法を用いたランダムペプチドライブラリーから選別されたペプチドの報告がある。例えば、Ｔ抗原に結合するペプチド（非特許文献１参照）やＧＭ１に結合するペプチド（非特許文献２参照）が見出されている。この方法の問題点として、構造既知の糖鎖サンプルが大量に必要であること、ペプチドの設計はできないので、ペプチドの選別に多大な労力を要すること、糖鎖解析の基本となる単糖を認識するペプチドが上手く選別できないこと等が挙げられる。
【０００４】
糖鎖認識蛋白質の部分配列に相当するペプチドが、糖鎖を認識する場合もあることも報告されている。例えば、百日咳毒素のフラグメント（非特許文献３参照）や植物レクチンのフラグメント（非特許文献４参照）等が挙げられる。これらの場合は、蛋白質と糖鎖との複合体の結晶構造等から、アミノ酸配列の設計も可能であり、植物レクチンの場合には、単糖の認識も可能になる。これらのペプチドの最大の問題は、その糖鎖に対する結合力が低く、工業的な利用が難しい点にあった。
【０００５】
我々は、ペプチドを人工脂質に結合させた化合物を合成し、その脂質部分を用いて疎水表面に固定することにより、ペプチドの機能を工業的に利用する方法を開発し（特許文献１参照）、それを低分子の糖鎖認識物質へと応用している（特許文献２参照）。しかし、その糖鎖認識素子としてマメ科レクチンの配列を用いる限り、ガラクトースを認識するものしか得られなかった。高マンノース型の糖鎖を有する多くの糖蛋白質やマンナン等、自然界にはマンノースを提示する物質も多く、マンノースを認識する低分子の糖鎖認識物質や糖鎖認識素材の開発が望まれていた。
【特許文献１】特開２００２−２６５４２７号公報
【特許文献２】特開２００４−２６２７８９号公報
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（J. Mol. Biol.）、１９９７年、２７０巻、ｐ．３７４−３８４
【非特許文献２】トレンズ・イン・グライコサイエンス・アンド・グライコバイオロジー（Trends Glycosci. Glycobiol.）、２００１年、１３巻、ｐ．５５７−５６０
【非特許文献３】ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol. Chem.）、１９９２年、３６巻、ｐ．２５８１０−２５８１５
【非特許文献４】蛋白質核酸酵素、１９９２年、３７巻、ｐ．１８２０−１８２９
【０００６】
以下で、ＡｌａはＬ−アラニン残基の、ＡｒｇはＬ−アルギニン残基の、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基の、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基の、ＣｙｓはＬ−システイン残基の、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基の、ＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基の、Ｇｌｙはグリシン残基の、ＩｌｅはＬ−イソロイシン残基の、ＬｅｕはＬ−ロイシン残基の、ＬｙｓはＬ−リジン残基の、ＰｈｅはＬ−フェニルアラニン残基の、ＰｒｏはＬ−プロリン残基の、ＳｅｒはＬ−セリン残基の、ＴｈｒはＬ−スレオニン残基の、ＴｙｒはＬ−チロシン残基の、ＶａｌはＬ−バリン残基の、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基の、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基の、Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメチルオキシカルボニルの、ｔＢｕはｔ−ブチルの、ＯｔＢｕはｔ−ブチル（オキシ）の、Ｂｏｃはｔ−ブチルオキシカルボニルの、Ｐｍｃは２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニルの、ＩＰＥはジイソプロピルエーテルの、Ｔｒｔはトリフェニルメチルの、ＷＳＣ・ＨＣｌは水溶性カルボジイミドの、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの、ＰｙＢＯＰはベンゾリアゾール−１−イルーオキシ−トリス−ピロリジノ−ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩の、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンの略号である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材およびマンノース提示物質の検出、分離、精製の方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を鋭意検討した結果、本発明者らは、糖鎖認識に関わるアミノ酸配列としてマメ科レクチンの部分配列ではなく、マンノース特異的な認識が知られているGalanthus nivalisレクチンのファミリーに属する蛋白質の部分配列を人工脂質に結合させることにより、低分子のマンノース認識物質が得られ、その低分子を疎水性表面に固定することにより、マンノース認識素材が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、式（１）で示されるベンズアミド誘導体、および、９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつその配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒ（配列番号１〜１６）なる配列を含むペプチド構造を固定化した糖鎖認識素材、および、これらを用いてマンノース提示物質を検出または分離または精製する方法を提供する。
【化２】
（式中、Ｘは９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒ（配列番号１〜１６）なる配列を含むペプチド構造を表す。但し、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。また、ＲはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3またはＨを表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７の整数を表す。）
【発明の効果】
【００１０】
本発明は、自然界に多種多様な形で存在するマンノース提示物質を認識する機能素子を、低分子のマンノース認識化合物およびマンノース認識素材として提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の化合物の合成は如何なる方法によっても構わない。
例えば、我々が既にＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐが結合した人工脂質の合成に用いた方法（特開２００２−２６５４２７号公報）に従って、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドや、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，４，５−トリス（ドデシルオキシ）ベンズアミド等の人工脂質を原料として、Ｆｍｏｃ法によって合成することが出来る。
【００１２】
ペプチド構造のアミノ酸配列としては、９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むものであれば、何であっても構わない。マンノースを認識するGalanthus nivalisレクチンのファミリーには、既に多くの類縁蛋白質が同定されており、マンノースの認識が確認され、Ｘ線構造解析によって立体構造上の対応も明らかな配列として、例えば、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１８）、または、
Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号１９）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２０）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２１）、または、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２２）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２３）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２４）、または、
Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２５）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２６）、または、
Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２７）
といった配列を用いることもできるし、マンノース認識が確認されていれば、アミノ酸配列のみが決定されている類縁蛋白質の対応する配列を用いることもできる。
【００１３】
上記のコンセンサス配列を含んでいればよいので、その周囲の配列の選択は自由であり、例えば、各々の配列の由来する元の蛋白質の配列からコンセンサス配列を含んで１５残基以下の配列を選択することもできるし、他の部分を自由に選択した、例えば、
Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ａｌａ（配列番号２８）や
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２９）
等の人工的な配列であっても構わない。
【００１４】
９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むペプチド構造を素材表面に固定化する方法は如何なる方法を用いても構わない。
例えば、式（１）で示されるベンズアミド誘導体等の、上記の配列を持ったペプチドを疎水性を持つ部分構造に結合した化合物を、クロロホルムやエタノール等の適当な溶媒に溶解し、プラスチック容器、ビーズ、不織布等の任意の形状を持つ疎水性表面にコーティングすることで、マンノース認識素材とすることができる。あるいは、ポリスチレン、ポリエステル、ポリアミド、セファロース、キトサン等の高分子素材、または、シリカゲル、酸化チタン、金等の無機素材の表面の官能基を利用して、あるいは、アミノ基やカルボキシル基等の適当な官能基を導入して、上記の配列を持ったペプチドを化学的に結合させることもできる。
【００１５】
マンノース認識物質やマンノース認識素材には様々な用途があるが、例えば、バイオセンサーの疎水性表面に固定化すればマンノース提示物質を検出する素材として、ポリスチレンディッシュにコートすればマンノース提示物質を吸着させる素材として、多孔質ビーズにコートすればマンノース提示物質を分離する素材として用いることが出来る。
【００１６】
遊離のペプチドでは弱かった糖鎖との相互作用は、マンノース認識物質を疎水表面に高い密度で固定化することにより、いわゆるクラスター効果によって、増強することができる。また、マンノース認識物質を表面プラズモン共鳴バイオセンサー等の高感度検出器に固定化することによって、実用に耐える糖鎖認識素材とすることができる。
【００１７】
以下に、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の記述に限定されるものではない。
【実施例１】
【００１８】
（Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドの合成（配列番号３０））
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（1.29 g, 4.33 mmol）、水溶性カルボジイミド（831 mg, 4.33 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（663 mg, 4.33 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.70 g, 2.89 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ（Ｆｍｏｃ）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（2.29 g, 2.64 mmol, 91%）を得た。
【００１９】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ（Ｆｍｏｃ）−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.37 g, 1.58 mmol）をジクロロメタン（3 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて、３時間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.00 g, 1.55 mmol, 98%）を得た。
【００２０】
Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（1.01 g, 2.19 mmol）、水溶性カルボジイミド（600 mg, 3.13 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（498 mg, 3.26 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（509 mg, 0.788 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（770 mg, 0.799 mmol, 99%）を得た。
【００２１】
Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（850 mg, 0.860 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて、１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（650 mg, 0.849 mmol, 99%）を得た。
【００２２】
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ（484 mg, 1.37 mmol）、水溶性カルボジイミド（322 mg, 1.68 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（248 mg, 1.62 mmol）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（602 mg, 0.786 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ（Ｆｍｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（856 mg, 0.777 mmol, 99%）を得た。
【００２３】
Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ（Ｆｍｏｃ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（830 mg, 0.754 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて、３時間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（656 mg, 0.746 mmol, 99%）を得た。
【００２４】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（432 mg, 1.27 mmol）、水溶性カルボジイミド（328 mg, 1.71 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（206 mg, 1.35 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（630 mg, 0.717 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応中に生じた白色沈殿物をろ過後、沈殿物をジクロロメタンで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（818 mg, 0.682 mmol, 95%）を得た。
【００２５】
Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.43 g, 1.19 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（2 ml）を加えて１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製し、Ｎ−（Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.15 g, 1.17 mmol, 98%）を得た。
【００２６】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（470 mg, 1.38 mmol）、水溶性カルボジイミド（308 mg, 1.60 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（209 mg, 1.36 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.09 mg, 1.12 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応中に生じた白色沈殿物をろ過後、沈殿物をジクロロメタンで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.33 g, 1.02 mmol, 91%）を得た。
【００２７】
Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.32 g, 1.01 mmol）をクロロホルム（20 ml）、メタノール（5 ml）に溶解し、ピペリジン（3 ml）を加えて、３０分間還流した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.00 g, 0.929 mmol, 92%）を得た。
【００２８】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（360 mg, 0.604 mmol）、ＰｙＢＯＰ（323 mg, 0.620 mmol）、ＤＭＡＰ（11.2 mg, 0.0917 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（1.00 g, 0.600 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（662 mg, 0.400 mmol, 98%）を得た。
【００２９】
Ｎ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）（Ｆｍｏｃ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（225 mg, 0.136 mmol）をジクロロメタン（1 ml）、メタノール（0.5 ml）に溶解し、ピペリジン（1 ml）を加えて、６時間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（190 mg, 0.132 mmol, 97%）を得た。
【００３０】
Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−ＯＨ・ＩＰＥ（233 mg, 0.304 mmol）、ＰｙＢＯＰ（227 mg, 0.435 mmol）、ＤＭＡＰ（8.20 mg, 0.0671 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（126 mg, 0.0880 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（175 mg, 0.0843 mmol, 96%）を得た。
【００３１】
Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）（117 mg, 0.0563 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（1 ml）を加えて、１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（99.2 mg, 0.0534 mmol, 95%）を得た。
【００３２】
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（81.3 mg, 0.198 mmol）、水溶性カルボジイミド（73.3 mg, 0.382 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（57.2 mg, 0.374 mmol）をジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（99.2 mg, 0.0534 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で3時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（100 mg, 0.0488 mmol, 91%）を得た。
【００３３】
Ｎ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）（95.2 mg, 0.0423 mmol）をジクロロメタン（1 ml）に溶解し、ピペリジン（0.5 ml）を加えて、１０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（81.5 mg, 0.0402 mmol, 95%）を得た。
【００３４】
Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（71.9 mg, 0.153 mmol）、水溶性カルボジイミド（68.1 mg, 0.355 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（50.7 mg, 0.331 mmol）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（76.8 mg, 0.379 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で４時間撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（92.1 mg, 0.0372 mmol, 98%）を得た。
【００３５】
Ｎ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）（90.0 mg, 0.0363 mmol）をジクロロメタン（1.5 ml）、メタノール（1.5 ml）に溶解し、ピペリジン（0.5 ml）を加えて、２０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（79.5 mg, 0.0352 mmol, 97%）を得た。
【００３６】
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（53.0 mg, 0.0868 mmol）、水溶性カルボジイミド（32.6 mg, 0.170 mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（22.4 mg, 0.164 mmol）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、室温で１時間撹拌した後、Ｎ−（Ｎ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（76.0 mg, 0.0337 mmol）のジクロロメタン溶液を加え、更に室温で一夜撹拌した。反応終了後、反応溶液を水洗し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。硫酸マグネシウムをろ別し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルＮ６０（クロロホルム：メタノール＝９８：２）で精製し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（96.0 mg, 0.0337 mmol, 100%）を得た。
【００３７】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）（Ｆｍｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（95.2 mg, 0.0334 mmol）をジクロロメタン（2 ml）に溶解し、ピペリジン（1 ml）を加えて、２０分間撹拌した。反応溶液をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（クロロホルム：メタノール＝１：１）で精製しＮ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（85.5 mg, 0.0314 mmol, 94%）を得た。
【００３８】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（80.0 mg, 0.0294 mmol）にトリフルオロ酢酸：水＝９：１（2 ml）を加えて、１時間撹拌した。反応終了後メタノールを加え、生じた白色沈澱をジクロロメタン、メタノールで洗浄し、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミド（37.6 mg, 0.0226 mmol, 77%）を得た。
MALDI-TOFMS: (matrix: α-cyano-4-hydroxycinnamic acid) 1763.01 ([M+H]+).
【実施例２】
【００３９】
（Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドとリボヌクレアーゼＡおよびＢとの相互作用）
上で得られたベンズアミド誘導体とリボヌクレアーゼＡおよびＢとの相互作用は、分子間相互作用解析装置であるＩＡｓｙｓ Ｐｌｕｓ（Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｓｅｎｓｏｒｓ社製）を用いて解析した。
疎水性キュベットを、界面活性剤、バッファー、２−プロパノールで洗浄の後、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドの０．４ｍＭ溶液（２−プロパノール：クロロホルム＝１９：１）を添加して固定化を行った。固定化量は８６４Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓだった。
このキュベットを、バッファー、塩酸水溶液、水酸化ナトリウム水溶液で洗浄の後、牛血清アルブミンでブロッキングを行い、バッファーで洗浄の後、相互作用を確認した。
【００４０】
Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドを固定化したキュベットに、リボヌクレアーゼＡの１００μＭ溶液を５０μｌ添加したところ、５分後の吸着量は２１６Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであり、バッファー洗浄後、５分経過した時の吸着量は４Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであった。
また、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドを固定化したキュベットに、リボヌクレアーゼＢの１００μＭ溶液を５０μｌ添加したところ、５分後の吸着量は２２４Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであり、バッファー洗浄後、５分経過した時の吸着量は５３Ａｒｃ ｓｅｃｏｎｄｓであった。
従って、高マンノース型糖鎖を持つリボヌクレアーゼＢとは結合し、高マンノース型糖鎖を持たないリボヌクレアーゼＡとはほとんど結合しないことが示され、Ｎ−（Ｎ−Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−６−アミノヘキシル）−３，５−ビス（ドデシルオキシ）ベンズアミドはマンノース提示物質を認識することが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明は、低分子のマンノース認識物質およびマンノース認識素材を提供するものであり、バイオセンサー、アフィニティークロマトグラフィー等の主要な構成要素として、マンノース提示物質の検出、分離、精製への利用が期待される。
【配列表フリーテキスト】
【００４２】
配列番号１-３０：糖結合ペプチドである。
配列番号１-１６：Xaa（存在位置２位、４位）は蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で示されるベンズアミド誘導体。
【化１】
（式中、Ｘは９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むペプチド構造（配列番号１〜１６）を表す。但し、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。また、ＲはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3またはＨを表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７の整数を表す。）
【請求項２】
９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒ（配列番号１〜１６）なる配列を含むペプチド構造を固定化した糖鎖認識素材。
（但し、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。）
【請求項３】
請求項１のベンズアミド誘導体または請求項２の糖鎖認識素材で、９残基以上で１５残基以下のペプチド構造に含まれる配列が、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１８）、または、
Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号１９）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２０）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２１）、または、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２２）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２３）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２４）、または、
Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２５）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２６）、または、
Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２７）
である、ベンズアミド誘導体または糖鎖認識素材。
（但し、ＡｒｇはＬ−アルギニン残基を、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、Ｃｙｓはシステイン残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基を、Ｇｌｙはグリシン残基を、ＩｌｅはＬ−イソロイシン残基を、ＬｅｕはＬ−ロイシン残基を、ＬｙｓはＬ−リジン残基を、ＰｈｅはＬ−フェニルアラニン残基を、ＰｒｏはＬ−プロリン残基を、ＳｅｒはＬ−セリン残基を、ＴｈｒはＬ−スレオニン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を表す。）
【請求項４】
請求項１または請求項２または請求項３に記載のベンズアミド誘導体または糖鎖認識素材を用いて、マンノース提示物質を検出または分離または精製する方法。
【請求項１】
式（１）で示されるベンズアミド誘導体。
【化１】
（式中、Ｘは９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒなる配列を含むペプチド構造（配列番号１〜１６）を表す。但し、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。また、ＲはＯ（ＣＨ2）nＣＨ3またはＨを表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７の整数を表す。）
【請求項２】
９残基以上で１５残基以下のペプチド構造で、かつ、その配列中にＧｌｎ−Ｘａａ−Ａｓｐ−Ｘａａ−Ａｓｎ−Ｂａａ−Ｖａｌ−Ｂａａ−Ｔｙｒ（配列番号１〜１６）なる配列を含むペプチド構造を固定化した糖鎖認識素材。
（但し、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を、ＢａａはＬ−イソロイシン残基またはＬ−ロイシン残基またはＬ−フェニルアラニン残基またはＬ−バリン残基を、Ｘａａは蛋白質を構成する２０種類のアミノ酸の中の任意のアミノ酸残基を表す。）
【請求項３】
請求項１のベンズアミド誘導体または請求項２の糖鎖認識素材で、９残基以上で１５残基以下のペプチド構造に含まれる配列が、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号１７）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１８）、または、
Ｇｌｎ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号１９）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２０）、または、
Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号２１）、または、
Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２２）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２３）、または、
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２４）、または、
Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２５）、または、
Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（配列番号２６）、または、
Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ（配列番号２７）
である、ベンズアミド誘導体または糖鎖認識素材。
（但し、ＡｒｇはＬ−アルギニン残基を、ＡｓｎはＬ−アスパラギン残基を、ＡｓｐはＬ−アスパラギン酸残基を、Ｃｙｓはシステイン残基を、ＧｌｎはＬ−グルタミン残基を、ＧｌｕはＬ−グルタミン酸残基を、Ｇｌｙはグリシン残基を、ＩｌｅはＬ−イソロイシン残基を、ＬｅｕはＬ−ロイシン残基を、ＬｙｓはＬ−リジン残基を、ＰｈｅはＬ−フェニルアラニン残基を、ＰｒｏはＬ−プロリン残基を、ＳｅｒはＬ−セリン残基を、ＴｈｒはＬ−スレオニン残基を、ＴｙｒはＬ−チロシン残基を、ＶａｌはＬ−バリン残基を表す。）
【請求項４】
請求項１または請求項２または請求項３に記載のベンズアミド誘導体または糖鎖認識素材を用いて、マンノース提示物質を検出または分離または精製する方法。
【公開番号】特開２００７−８９０６（Ｐ２００７−８９０６Ａ）
【公開日】平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−１９５４４０（Ｐ２００５−１９５４４０）
【出願日】平成１７年７月４日（２００５．７．４）
【出願人】（０００１７３９２４）財団法人野口研究所 (108)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１月１８日（２００７．１．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月４日（２００５．７．４）
【出願人】（０００１７３９２４）財団法人野口研究所 (108)
【Ｆターム（参考）】
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