ラクトバチルス・パラカゼイと体重管理
本発明は概して、肥満及び／又は代謝異常の分野に関する。本発明は特に、肥満及び／又は代謝異常を治療するためのプロバイオティクスの使用に関する。本発明の一実施形態は、代謝異常を治療又は予防するための組成物の調製のための、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は概して、肥満及び／又は代謝異常の分野に関する。特に、本発明は、過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療又は予防するためのプロバイオティクスの使用に関する。
【０００２】
過去数十年の間に、肥満の罹患率は世界中で流行病の割合にまで増加した。世界で約１０億人が過体重又は肥満の状態にあり、死亡、移動及び経済的コストを増加させている。肥満は、エネルギー摂取量がエネルギー消費量よりも高く、余剰エネルギーが主に脂肪として脂肪組織に貯蔵されると起こる。エネルギー摂取量又はバイオアベイラビリティを減少させること、エネルギー消費量を増やすこと、及び／又は脂肪としての貯蔵を減少させることにより、体重の減少及び体重増加の予防を実現することができる。肥満は、糖尿病、アテローム性動脈硬化、変性疾患、気道疾患及びいくつかの癌を含む多くの慢性疾患を伴うので、健康への深刻な脅威となる。
【０００３】
最近、腸内細菌叢の改変が肥満と関連付けられた。このような変化は腸管内微生物叢の潜在代謝能力に影響し、結果として食物からのエネルギー回収能力を高めることが、肥満マウスにおいて示された（Ｔｕｒｎｂａｕｇｈ ＰＪ，Ｌｅｙ ＲＥ，Ｍａｈｏｗａｌｄ ＭＡ，Ｍａｇｒｉｎｉ Ｖ，Ｍａｒｄｉｓ ＥＲ，Ｇｏｒｄｏｎ ＪＩ．Ａｎ Ｏｂｅｓｉｔｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃａｐａｃｉｔｙ ｆｏｒ ｅｎｅｒｇｙ ｈａｒｖｅｓｔ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６；Ｌｅｙ ＲＥ，Ｔｕｒｎｂａｕｇｈ ＰＪ，Ｋｌｅｉｎ Ｓ，Ｇｏｒｄｏｎ ＪＩ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｈｕｍａｎ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６）。腸管内微生物叢のそのような改変は、肥満の病態生理に寄与するといわれている。食物又は栄養補助食品に存在する有益な細菌であるプロバイオティクスは、腸内微生物叢を改変させることで知られている（Ｆｕｌｌｅｒ Ｒ ＆ Ｇｉｂｓｏｎ ＧＲ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｕｓｉｎｇ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ．Ｓｃａｎｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１９９７）。
【０００４】
例えば、ＵＳ７００１７５６及びＣＮ１６７０１８３では、単離された微生物株、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＧＭ−０２０が提供され、それが肥満の治療に有効であることが見出されている。
【０００５】
しかし、ある微生物の摂取よりも他の微生物の摂取に対して耐性が高い生物もいる可能性があるので、治療対象の必要性に応じて選択可能な種々の微生物が入手可能であることが望ましい。
【０００６】
ＷＯ０３０５５９８７では、キムチの発酵液から単離、同定された特定のラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）株、ラクトバチルス・パラカゼイｖｉｒｏ−０１が開示されている。この菌株は、プロバイオティクスとして使用でき、下痢の発生を減少させる。
【０００７】
ＷＯ２００７０１５１３２では、特にアレルギー及び免疫不全を治療及び／又は予防するための免疫調節組成物の調製に使用可能なラクトバチルス・パラカゼイ株、Ｉ １６８８が開示されている。
【０００８】
この先行技術に基づいて、本発明は、肥満及び／又は代謝異常の治療又は予防に使用できる代替的なプロバイオティクス細菌を同定することを目的としていた。
【０００９】
本発明者らは、驚くべきことに、ラクトバチルス・パラカゼイにより本発明の目的が達成できることを見出した。
【００１０】
本発明の目的に特に有効なラクトバチルス・パラカゼイ株の一つはラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１である。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、ブダペスト条約に基づいてパスツール研究所（２８ ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ Ｒｏｕｘ ７５０２４ Ｐａｒｉｓ Ｃｅｄｅｘ １５）に寄託され、ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６と命名されている。
【００１１】
本発明者らは、プロバイオティックなラクトバチルス・パラカゼイが自律神経活動に作用し、血中グルコース及び心血管機能を制御することを示した。本発明者らは、ラクトバチルス・パラカゼイ（例えばラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の摂取により体重及び腹部脂肪重量が減少することを見出した。この効果は、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を長期摂取した後に特に顕著であった。本発明者らは、驚くべきことに、ラクトバチルス・パラカゼイ（例えばラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の摂取が自律神経に作用し、脂肪分解を促進し、体重を減少させることを見出した。
【００１２】
好ましいラクトバチルス・パラカゼイ株はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１である。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、他のラクトバチルス・パラカゼイ株とは異なり多種多様な糖で増殖することが見出されている。この特性により、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は多種多様な糖と共生的に相互作用することが可能となり、それ故、より大きな健康上の利益をもたらすことになる。
【００１３】
例えば、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、他のラクトバチルス・パラカゼイ株が増殖しなかったタガトース（フルクトースの立体異性体）で増殖することができた。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、試験した他の４種のラクトバチルス・パラカゼイ株が増殖しなかったラフチリンＨＰ（長鎖フラクトオリゴ糖、イヌリン）で増殖することが見出された。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、他の８種のラクトバチルス・パラカゼイ株が増殖しなかったポリデキストロースで増殖することが見出された。
【００１４】
したがって、本発明の目的は、請求項１に記載の使用により達成される。
【００１５】
すなわち、本発明の一実施形態は、過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療又は予防するための組成物の調製のための、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の使用である。
【００１６】
本発明はまた、過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療及び／又は予防するための組成物であって、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含む組成物に関する。
【００１７】
本明細書において、下記の語の意味は下記のとおりである。
【００１８】
「ラクトバチルス・パラカゼイ」という語は、当該細菌そのもの、当該細菌を有する細胞増殖培地、又はラクトバチルス・パラカゼイが培養された細胞増殖培地を包含するものとする。
【００１９】
「ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１」という語は、当該細菌そのもの、当該細菌を有する細胞増殖培地、又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１が培養された細胞増殖培地を包含するものとする。
【００２０】
「ボディマス指数」又は「ＢＭＩ」とは、体重（ｋｇ）を身長（ｍ）の２乗で割って得られる比を意味する。
【００２１】
「過体重」は、成人については、２５〜３０のＢＭＩを有することと定義する。
【００２２】
「肥満」とは、動物（特に、ヒトやその他の哺乳動物）の脂肪組織に貯蔵されるエネルギーの量が、ある種の健康状態又は死亡率上昇がもたらされる程度にまで増加した状態である。「肥満」は、成人については、３０より大きいＢＭＩを有することと定義する。
【００２３】
「プロバイオティクス」とは、宿主の衛生又は健康に有益な効果を及ぼす微生物細胞の調製物又は微生物細胞の成分を意味する（Ｓａｌｍｉｎｅｎ Ｓ，Ｏｕｗｅｈａｎｄ Ａ，Ｂｅｎｎｏ Ｙ．ｅｔ ａｌ“Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ ｓｈｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｄｅｆｉｎｅｄ”Ｔｒｅｎｄｓ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９：１０ １０７−１０）。
【００２４】
「プレバイオティクス」とは、腸内におけるプロバイオティクスの増殖を促進する食物のことである。プレバイオティクスは、それを摂取したヒトの胃及び／又は腸上部で分解されたり消化管で吸収されたりすることはないが、消化管内細菌叢及び／又はプロバイオティクスにより発酵される。プレバイオティクスは、例えばＧｌｅｎｎ Ｒ．Ｇｉｂｓｏｎ ａｎｄ Ｍａｒｃｅｌ Ｂ．Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ，Ｄｉｅｔａｒｙ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９５ １２５：１４０１−１４１２により定義されている。
【００２５】
「食品用微生物」とは、食品で使用され、食品用として一般に安全と認められている微生物を意味する。
【００２６】
「長期投与」は、好ましくは、６週間以上の継続的な投与である。
【００２７】
「短期投与」は、好ましくは、６週間未満の継続的な投与である。
【００２８】
本発明の使用により調製される組成物は、医薬品、食品、ペットフード製品、食品添加物又は機能性食品であってもよい。
【００２９】
本発明の組成物は、保護親水コロイド（例えば、ゴム、タンパク質、加工デンプン）、結合剤、膜形成剤、カプセル化剤／材料、壁／シェル材、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、界面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、蝋、レシチン等）、吸着剤、担体、充填剤、共化合物（ｃｏ−ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動化剤、矯味剤、増量剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、抗酸化剤及び抗菌剤をさらに含有してもよい。
【００３０】
本発明の組成物は、公知の医薬品添加物、アジュバント、賦形剤及び希釈剤（例えば、水、ゼラチン、植物性ガム、リグニンスルホン酸塩、タルク、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、香味料、保存料、安定剤、乳化剤、緩衝液、滑沢剤、着色料、湿潤剤、充填剤。これらに限定されるわけではない。）をさらに含有してもよい。いずれの場合も、このような追加成分は、投与対象の個体への適合性を考慮して選択される。
【００３１】
本発明の組成物は、総合栄養食（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｆｏｒｍｕｌａ）であってもよい。
【００３２】
本発明の組成物は、タンパク質源を含んでもよい。
【００３３】
任意の好適な食餌性タンパク質（例えば、動物性タンパク質（乳タンパク質、食肉タンパク質、卵タンパク質等）；植物性タンパク質（大豆タンパク質、小麦タンパク質、米タンパク質、エンドウ豆タンパク質等）；遊離アミノ酸の混合物；又はそれらの組合せ）を使用することができる。乳タンパク質（例えば、カゼイン、ホエイ）及び大豆タンパク質が特に好ましい。
【００３４】
タンパク質は、インタクトなタンパク質、タンパク質の加水分解物、又はインタクトなタンパク質とタンパク質の加水分解物との混合物であってもよい。例えば、牛乳アレルギーを起こすリスクがあると考えられる動物に対しては、タンパク質の部分加水分解物（加水分解度：２〜２０％）を与えることが望ましい。タンパク質の加水分解物が必要な場合、加水分解は必要に応じて公知の方法で行うことができる。例えば、ホエイタンパク質の加水分解物は、一つ又は複数のステップでホエイ画分を酵素で加水分解することによって調製できる。出発物質として使用するホエイ画分にラクトースが実質的に含まれない場合、タンパク質は、加水分解の過程でリジンの損失を受けにくくなることが見出されている。このことにより、リジンの損失の程度を、総リジンの約１５重量％からリジンの約１０重量％未満へ減少させることができる。例えば、リジンの約７重量％に減少させて、タンパク質源の栄養価を大幅に改善することができる。
【００３５】
本発明の組成物は、炭水化物源及び／又は脂肪源をさらに含有してもよい。
【００３６】
組成物が脂肪源を含有する場合、脂肪源は、好ましくは、該組成物のエネルギーの５〜４０％（例えば２０〜３０％）を供給する。好適な脂肪プロファイルは、キャノーラ油、コーン油及び高オレイン酸ヒマワリ油のブレンドを用いて得ることもできる。
【００３７】
炭水化物源を組成物に添加してもよい。
【００３８】
炭水化物源は、好ましくは、該組成物のエネルギーの４０〜８０％を供給する。任意の好適な炭水化物（例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形物、マルトデキストリン及びそれらの混合物）を使用することができる。必要に応じて食物繊維をさらに添加してもよい。食物繊維は、酵素で消化されずに小腸を通過し、天然の増量剤及び緩下剤として機能する。食物繊維は水溶性でも不溶性でもよいが、一般には両者のブレンドが好ましい。食物繊維の好適な供給源としては、例えば、大豆、エンドウ豆、燕麦、ペクチン、グアーガム、アラビアゴム、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シアリルラクトース及び動物乳由来のオリゴ糖が挙げられる。好ましい繊維ブレンドは、イヌリンとそれよりも短鎖のフラクトオリゴ糖との混合物である。好ましくは、繊維が存在する場合、繊維含有量は、摂取される組成物１Ｌ当たり２〜４０ｇ、より好ましくは４〜１０ｇである。
【００３９】
本発明の組成物は、政府機関（ＵＳＲＤＡ等）の推奨に従って、ミネラル及び微量栄養素（微量元素、ビタミン等）をさらに含有してもよい。例えば、組成物は一日量当たり、下記微量栄養素の１種又は複数を下記範囲で含有してもよい。カルシウム ３００〜５００ｍｇ；マグネシウム ５０〜１００ｍｇ；リン １５０〜２５０ｍｇ；鉄 ５〜２０ｍｇ；亜鉛 １〜７ｍｇ；銅 ０．１〜０．３ｍｇ；ヨウ素 ５０〜２００μｇ；セレン ５〜１５μｇ；ベータカロテン １０００〜３０００μｇ；ビタミンＣ １０〜８０ｍｇ；ビタミンＢ１ １〜２ｍｇ；ビタミンＢ６ ０．５〜１．５ｍｇ；ビタミンＢ２ ０．５〜２ｍｇ；ナイアシン ５〜１８ｍｇ；ビタミンＢ１２ ０．５〜２．０μｇ；葉酸 １００〜８００μｇ；ビオチン ３０〜７０μｇ；ビタミンＤ １〜５μｇ；ビタミンＥ ３〜１０μｇ。
【００４０】
必要に応じて１種又は複数の食品用乳化剤（例えば、モノ−及びジグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、レシチン、モノ−及びジグリセリド）を組成物に組み込んでもよい。同様に、適当な塩及び安定剤を含んでもよい。
【００４１】
本発明の組成物は、好ましくは経口又は経腸投与可能なものである。例えば、ミルク又は水で戻す粉末の形態のものである。
【００４２】
ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は、任意の好適な方法に従って培養することができ、組成物に添加するために、例えば凍結乾燥法又は噴霧乾燥法で調製することができる。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）に適した培養法は当分野で知られている。或いは、細菌調製物は専門業者から購入してもよい。
【００４３】
概して、本発明の組成物は幼児、子供及び／又は成人を対象とする。
【００４４】
本発明の一実施形態において、本発明の使用により調製された組成物による治療の対象となるのは少なくとも２歳である。この年齢制限は特にヒトに適用される。本発明の使用により調製された組成物による治療の対象が例えばイヌ又はネコである場合、イヌ又はネコは少なくとも４ヵ月齢であるべきである。
【００４５】
本発明の組成物は医薬品であってもよい。医薬品としてのラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の用量は、医師の勧めに従い慎重に調整すべきである。
【００４６】
本発明に従って調製された組成物は食品であってもよい。食品としてのラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の有益な効果は誰もが享受できる。代謝異常、過体重及び／又は肥満の治療は、ごく初期に低コストで始めることができる。さらに、食品であれば、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）ははるかに摂取しやすい。本発明に適用可能な食品としては、例えば、ヨーグルト、ミルク、風味付けされたミルク、アイスクリーム、デザート製品、粉末（例えばミルク又は水で戻す粉末）、チョコレートミルク飲料、麦芽飲料、Ｒｅａｄｙ Ｔｏ Ｅａｔ食品、ヒト用のインスタント食品又は飲料、或いはペット又は家畜用の飼料又はその一部となる食品組成物が挙げられる。
【００４７】
したがって、一実施形態において、本発明の組成物は、ヒト、ペット又は家畜を対象とする食品である。
【００４８】
本発明の組成物は、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、家禽又はヒトからなる群から選択される動物を対象とするものであってもよい。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、成熟した動物（特に成人）を対象とする食品である。
【００４９】
ラクトバチルス・パラカゼイは、褐色脂肪組織にも作用することが見出されている。褐色脂肪組織は、寒冷適応動物の熱産生の主たる場所である。したがって、本発明の組成物は、多量の褐色脂肪組織を有する動物（例えばイヌ）に特に好適である。
【００５０】
本発明の組成物は、少なくとも１種の他の食品用微生物（特に細菌又は酵母）をさらに含んでもよい。食品用微生物はプロバイオティクスであってもよく、好ましくは、乳酸菌、ビフィズス菌、プロピオン酸菌又はそれらの混合物からなる群から選択される。
【００５１】
いかなるプロバイオティクスも本発明に従って使用可能である。好ましくは、プロバイオティクスは、ビフィズス菌、乳酸桿菌、乳酸球菌、腸球菌、連鎖球菌、サッカロマイセス又はそれらの混合物からなる群から選択され、特に、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）又はそれらの混合物からなる群から選択されたものであり、好ましくは、ラクトバチルス・ジョンソニイＮＣＣ５３３（ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ビフィドバクテリウム・ロングムＮＣＣ４９０（ＣＮＣＭ Ｉ−２１７０）、ビフィドバクテリウム・ロングムＮＣＣ２７０５（ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８）、ビフィドバクテリウム・ラクティス２８１８（ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＣＧＭＣＣ １．３７２４）、エンテロコッカス・フェシウムＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ１０４１５）及びそれらの混合物からなる群から選択される。
【００５２】
例えば、プロバイオティクスは、ビフィズス菌に特異的な腸内微生物叢の形成を促進することもできる。これに適したプロバイオティックなビフィズス菌株としては上述のビフィズス菌株が挙げられ、さらには、デンマークのＣｈｒｉｓｔｉａｎ Ｈａｎｓｅｎより商標Ｂｂ１２の下に販売されているビフィドバクテリウム・ラクティス株（ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、日本の森永乳業より商標ＢＢ５３６の下に販売されているビフィドバクテリウム・ロングム株（ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９）、Ｄａｎｉｓｃｏより商標Ｂｂ−０３の下に販売されているビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）株、森永乳業より商標Ｍ−１６Ｖの下に販売されているビフィドバクテリウム・ブレーベ株、及びＩｎｓｔｉｔｕｔ Ｒｏｓｅｌｌ（Ｌａｌｌｅｍａｎｄ）より商標Ｒ００７０の下に販売されているビフィドバクテリウム・ブレーベ株が挙げられる。適当なプロバイオティックな乳酸菌とビフィズス菌との混合物を使用してもよい。
【００５３】
食品用酵母としては、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）及び／又はサッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）を使用することができる。
【００５４】
本発明の好ましい一実施形態において、組成物は、少なくとも一種のプレバイオティクスをさらに含有する。プレバイオティクスは、腸内において、ある種の食品用細菌（特にプロバイオティクス）の増殖を促進できるので、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の効果を増強することができる。さらに、例えば消化に対して好ましい影響を及ぼすプレバイオティクスもある。
【００５５】
本発明に従って使用可能なプレバイオティクスに特に制限はなく、腸内におけるプロバイオティクスの増殖を促進するすべての食物が包含される。好ましくは、プレバイオティクスは、オリゴ糖（フルクトース、ガラクトース、マンノースを含有してもよい）、食物繊維（特に水溶性繊維である大豆繊維）、イヌリン又はそれらの混合物からなる群から選択することができる。好ましいプレバイオティクスは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＩＯＳ）、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖、グリコシルスクロース（ＧＳ）、ラクトスクロース（ＬＳ）、ラクツロース（ＬＡ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖（ＭＯＳ）、ゴム及び／又はその加水分解物、ペクチン及び／又はその加水分解物である。
【００５６】
本発明の利点の一つは、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）が生菌であっても非複製性細菌種であっても有効なことである。したがって、生菌が存在できなくなる条件下であっても、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の有効性は失われない。
【００５７】
しかし、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の少なくとも一部は組成物中で生存しているのが好ましく、さらには、生存したまま腸に到達するのが好ましい。この場合、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は腸内でコロニーを形成し、増殖によりその有効性を増大することができる。
【００５８】
しかし、特別な無菌食品又は医薬品については、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は組成物中で生存していないのが好ましい。故に、本発明の一実施形態において、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の少なくとも一部は組成物中で生存していない。
【００５９】
ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）はいかなる濃度でも有効である。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）が生存したまま腸に到達した場合、単一細菌であってもコロニー形成及び増殖により強力な効果をもたらす。
【００６０】
本発明の組成物の一日量は、一般に、１０２〜１０１２ｃｆｕ（コロニー形成単位）のラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な一日量は１０５〜１０１１ｃｆｕであり、より好ましくは１０７〜１０１０ｃｆｕである。
【００６１】
非複製性ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の場合、組成物の一日量は、一般に、１０２〜１０１２個（ｃｅｌｌｓ）のラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な一日量は１０５〜１０１１個であり、より好ましくは１０７〜１０１０個である。
【００６２】
本発明の組成物は、一般に、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０３〜１０１２ｃｆｕのラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な量は組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０５〜１０１１ｃｆｕであり、より好ましくは組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０７〜１０１０ｃｆｕである。
【００６３】
非複製性ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の場合、組成物は、一般に、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０３〜１０１２個（ｃｅｌｌｓ）のラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な量は組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０５〜１０１１個であり、より好ましくは組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０７〜１０１０個である。
【００６４】
本発明において、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含む組成物はまた、体重減少及び／又は体重維持を支援するために使用することができる。
【００６５】
本発明の組成物は、特に組成物の長期投与については、体重増加を減少させるために使用することもできる。
【００６６】
他方、特に短期投与については、本発明の組成物は摂食抑制剤として使用することもできる。
【００６７】
本発明の組成物を摂取することにより、腹部脂肪の総生成量、特に腸間膜脂肪組織、精巣上体脂肪組織及び／又は腎周囲脂肪組織の生成量が減少することが見出されている。
【００６８】
本発明の組成物は、高脂肪食に起因する過体重及び／又は肥満の治療又は予防に特に好適である。高脂肪食は、一般に推奨されている食餌に含まれる脂肪量の少なくとも１１０％を含有する食餌である。
【００６９】
適正な体重（とりわけ許容可能な体脂肪率）の確立・維持が代謝異常を治療又は予防するための重要なステップであるので、本発明において、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含む組成物はさらに、代謝異常（例えば、糖尿病、高血圧、肝硬変、メタボリックシンドローム及び／又は心血管疾患）を治療又は予防するために使用することができる。故に、本発明により調製される組成物は、現代人（とりわけ先進国の人々）の健康に大きく貢献することができる。
【００７０】
本明細書に記載の本発明の特徴はすべて、開示された本発明の範囲から逸脱することなく自由に組み合わせ可能であることは、当業者には理解されよう。特に、本発明の使用について記載された特徴は本発明の組成物に適用することができ、その逆もまた同様である。
【００７１】
本発明の他の利点及び特徴は、下記実施例及び図面から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】高脂肪食を１１週間与えた場合の、体重（Ａ）及び摂食量（Ｂ）に対するラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）の効果を示すグラフである。データは各群の平均値±ＳＥＭで表す。使用した動物の数は括弧内に示す。水とラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１との有意差はＡＮＯＶＡで分析した。＊Ｐ＜０．０５。
【図２】水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１を注射したラットのＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡ（Ａ）、及びヘキサメトニウムクロリドの静脈注射に対するＢＡＴ−ＳＮＡの応答（Ｂ）の典型的な記録データを示す図である。注射した時点は矢印で示す。
【図３】自律神経活動に対する、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＤ注射の効果を示すグラフである。水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１のＩＤ注射後のＷＡＴ−ＳＮＡ（Ａ）、ＢＡＴ−ＳＮＡ（Ｂ）、ＡＳＮＡ（Ｃ）、ＨＶＮＡ（Ｄ）及びＨＲ（Ｅ）は、０分時の値に対するパーセンテージの平均値±ＳＥＭで表す。使用した動物の数は括弧内に示す。水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の十二指腸内注射後５〜６０分の値の有意差（＊Ｐ＜０．０５）はＡＮＯＶＡで分析する。
【図４】ＢＡＴ−Ｔ及びＢＴに対する、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＧ注射の効果を示すグラフである。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１のＩＧ注射後のＢＡＴ−Ｔ（Ａ）及びＢＴ（Ｂ）は、０分時の値に対するパーセンテージの平均値±ＳＥＭで表す。使用した動物の数は括弧内に示す。注射後５〜６０分の両群の値の有意差（＊Ｐ＜０．０５）はＡＮＯＶＡで分析する。
【図５】ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＧ注射後の血漿ＦＦＡの変化を示すグラフである。データ（平均値±ＳＥＭ）は、０分時に測定されたＦＦＡレベルに対するパーセンテージで示す。使用した動物の数は括弧内に示す。１５〜６０分の両群の値の有意差（＊Ｐ＜０．０５）はＡＮＯＶＡで分析した。
【図６】ＳＣＮ及びＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞に対する、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＧ注射の効果を示す図である。冠状切片の顕微鏡写真は、ＳＣＮ及びＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞に対する水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果を示す（Ａ）。略語：３Ｖ：第三脳室；ＯＣ：視交叉。スケールバー＝２００μｍ。水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射後のＳＣＮ及びＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞を計数した（Ｂ）。使用した動物の数は括弧内に示す。データは平均値±ＳＥＭで表す。＊有意差はＰ＜０．０５で示す（マン・ホイットニーのＵ検定）。
【実施例】
【００７３】
動物：
８週齢の雄ウィスターラット８匹を使用し、室内（２４±１℃に維持。光を毎日１２時間（７時〜１９時）照射。）で個別に飼育した。ラットは実験の少なくとも１週間前から環境に順応させ、２群に分けて水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）を１１週間与えた。ウレタン麻酔したラットでＷＡＴ−ＳＮＡの用量反応を調べて、その用量を決定した（表１）。両群には高脂肪食［Ｏｒｉｅｎｔａｌ Ｙｅａｓｔ，東京，日本。食餌組成（％、カロリーベース）：脂肪３０％（牛脂１４％＋ラード１４％＋大豆油２％）、カゼイン２５％、コーンスターチ１５％、スクロース２０％、セルロース５％、ミネラル混合（ＡＩＮ−９３Ｇ）４％、ビタミン混合（ＡＩＮ−９３）１％］を与えた。飼料と水は自由に摂取できるようにした。実験期間中はすべてのラットの体重をモニターし、屠殺後、腹部脂肪（腸間膜脂肪組織＋精巣上体脂肪組織＋腎周囲脂肪組織）の重量を測定した。
【００７４】
【表１】
【００７５】
電気生理学的検査：
体重３００〜３３０ｇの雄ウィスターラットを使用した。ラットは室内（２４±１℃に維持。光を毎日１２時間（７時〜１９時）照射。）で飼育した。飼料と水は自由に摂取できるようにした。ラットは実験の少なくとも１週間前から環境に順応させた。実験当日、手術の３〜４時間前に飼料を取り除いた。一般的な準備は、Ｔａｎｉｄａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ ２００５；１０５８（１−２）：４４−５５（参照されることにより本明細書に組み込まれる。）に記載のとおりに行った。簡単に説明すると、次のとおりである。ウレタン１ｇ／ｋｇの腹腔内（ＩＰ）注射による麻酔下、静脈内注射及び十二指腸内注射のために、ポリエチレン製カテーテルをそれぞれ左大腿静脈及び十二指腸腔に挿入した。次いで、ラットの気管内にカニューレを挿入し、定位固定装置でラットを固定し、３７．０〜３７．５℃に維持した。遠心性のＷＡＴ−ＳＮＡ（白色脂肪組織−シナプス神経活動）を記録するために、精巣上体の右ＷＡＴの血管に平行に走る交感神経枝の神経線維を顕微鏡下で注意深く分離した。遠心性のＢＡＴ−ＳＮＡ（褐色脂肪組織−シナプス神経活動）を記録するために、解剖顕微鏡を用いて、左背部の切開により肩甲骨間のＢＡＴに分布する左交感神経を露出した。副腎交感神経活動（ＡＳＮＡ）を記録するために、左側腹部の切開により左副腎神経を後腹膜に露出した。肝迷走神経活動を記録するために、腹部横隔膜下迷走神経の肝臓枝を同定し、腹部正中線切開後、食道上に露出した。神経の遠位端は結紮し、次いで、遠心性の神経活動を記録するために一対の銀線電極に接続した。記録電極は、神経の乾燥防止及び電気絶縁のために、流動パラフィンオイルのプール又は温かいワセリンと流動パラフィンオイルとの混合物に浸した。記録電極の設置後３０〜４０分間ラットを静置した。ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡ（肝迷走神経活動）の電気的変化を増幅し、選別し、オシロスコープでモニターした。神経活動の生データをＷｉｎｄｏｗ Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｏｒで標準パルスに変換した。２つの針電極を右腕及び左下肢の皮膚下に設置して、心電図を記録し、心拍数（ＨＲ）をモニターした。信号を生体電気増幅器で増幅した。これらのアナログ信号をＡ／Ｄ変換器（Ｐｏｗｅｒ−Ｌａｂモデル４ｓｐ，ＡＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，米国）でデジタル信号に変換し、サンプリングし、オフライン分析のためにハードディスクに保存した。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）又は水（２ｍＬ）のＩＤ注射前の５分間、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＲ及びＨＶＮＡのベースラインの測定を行った。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の凍結乾燥培養物を水に溶解後、実験に使用した。注射後６０分間、上記パラメータを記録した。実験の最後に、記録のノイズレベルを判定するために、ヘキサメトニウムクロリド（１０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与して節後神経の活動電位をブロックした。
【００７６】
テレメトリー記録：
ＢＴ（体温）及びＢＡＴ−Ｔ（褐色脂肪組織−温度）を測定するために、テレメトリーシステム１８１（Ｓｔａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ，日本）をＴａｎｉｇｕｃｈｉ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２００６；３９８（１−２）：１０２−６に記載のとおりに使用した。一部のラット（ｎ＝８）については、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の胃内（ＩＧ）注射の１０〜１４日前に、温度センサー、電池及び送信機（モデル１０Ｔ−Ｔ，Ｓｔａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ）の入った１ａカプセルを、ペントバルビタール麻酔（３５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）下、腹腔内又はＢＡＴの脂肪パッドの上に埋め込んだ。受信機の出力信号をアナログからデジタルに変換し、モニターし、ＰＣに保存した。このシステムにより得られたデータを、１６ｃｈ−Ｅｉｇｈｔ Ｓｔａｒ Ｐｒｏｇｒａｍ（Ｓｔａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ）により分析した。実験当日、注射の４〜６時間前に飼料を取り除いた。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１又は水のＩＧ注射（明期（１４時））の直前５分間、動物が覚醒した状態で、ＢＡＴ−Ｔ又はＢＴのベースラインの測定を行った。注射後、これらのパラメータを６０分間記録した。
【００７７】
血中ＦＦＡレベルの測定：
実験の３日前に、ＩＰペントバルビタール麻酔下、外科的にカテーテル挿入を行った。末端が心房のすぐ外に位置するように右外頸静脈に埋め込まれた長期留置シリコーンカテーテルから血液試料を採取し、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）又は水（２ｍＬ）のＩＧ注射前後に実施した。ＦＦＡ（遊離脂肪酸）の測定のために、血漿を直ちに分離した。ＮＥＦＡ−Ｃ−ｔｅｓｔキット（和光純薬工業，カタログ番号２７９−７５４０１）を用いるアシルＣｏＡシンテターゼ−アシルＣｏＡオキシダーゼ法によりＦＦＡを測定した。
【００７８】
免疫組織化学的検査：
ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）又は水（２ｍＬ）のＩＧ注射後、ＳＣＮ（視交叉上核）及びＰＶＮにおけるｃ−Ｆｏｓタンパク質の誘導を調べた。注射はすべて１４時に実施した。注射から６０分後、ラットに麻酔（ペントバルビタール３５ｍＬ／ｋｇ、ＩＰ）をかけ、氷冷生理食塩水、次いでリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で心臓内を灌流した。脳を摘出し、ＰＢＳ中４％ＰＦＡに一晩４℃で後固定し、２０％スクロース中で凍結を防止しつつ二晩静置した。次いで、脳を凍結ミクロトーム（ＣＭ１９００，Ｌｅｉｃａ，ドイツ）でスライスして厚さ３０μｍの切片を得た。一次抗体としてｃ−Ｆｏｓに対する特異的ウサギポリクローナル抗体（１０００倍希釈；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用いて、ＳＣＮ及びＰＶＮにおけるｃ−Ｆｏｓの免疫組織化学的分析を行った。発色基質としてジアミノベンジジン（Ｓｉｇｍａ，日本）を用いて、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）で免疫反応を可視化した。ＳＣＮ又はＰＶＮの領域を特定するために、実験動物の近傍の切片をクレシルバイオレット（Ｓｉｇｍａ，日本）で染色し、ＳＣＮの輪郭を明らかにした。顕微鏡（ＢＸ５１，Ｏｌｙｍｐｕｓ，日本）で切片の像を観察し、Ｉｍａｇｅ Ｊプログラムを用いてＳＣＮ又はＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ免疫反応性（ｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ）細胞を計数した。
【００７９】
統計解析：
ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射後、５分毎にＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＶＮＡ、ＨＲ、ＢＡＴ−Ｔ及びＢＴを測定し、デジタル信号処理により解析した。すべてのデータは平均値±ＳＥＭで表した。マン・ホイットニーのＵ検定を用いて各群の基礎値を比較した。注射前の状態に個体間のバラツキがあるため、神経発火データ及び温度データについては、それぞれベースラインからの変化率及び温度変化を計算した。二元ＡＮＯＶＡを用いて、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＶＮＡ、ＨＲ、ＢＡＴ−Ｔ、ＢＴ、体重及び血漿ＦＦＡレベルにおける両群の応答を比較した。
【００８０】
結果：
図１Ａは、実験中の両群の体重の変化を示す。水群又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群のいずれにおいても、ＨＦＤ（高脂肪食）を与えることにより体重の漸進的増加が生じたが、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群では、体重増加の有意な減少が確認された。さらに、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１を摂取すると、腹部脂肪（腸間膜脂肪組織＋精巣上体脂肪組織＋腎周囲脂肪組織）の最終的な重量が、水を摂取したラットに比べて有意に減少した（表２）。
【００８１】
【表２】
【００８２】
水群とラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群との間で、実験期間中の長期的な飼料の摂取量に有意差は見出されなかった（図１Ｂ）。また、全実験期間中の水摂取量でも、水群（３２４８±２９５ｍＬ）とラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群（２７３８±４１５ｍＬ）とで有意差は認められなかった。図２Ａに、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の腸内注射後６０分間の、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡの典型的な記録を示す。ウレタン麻酔したラットにおいて、水の注射はＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡに影響を与えなかったが、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ）の注射は、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ及びＡＳＮＡを有意に上昇させ、ＨＶＮＡを抑制した。さらに、図２Ｂは、ヘキサメトニウムクロリドの静脈注射によりＢＡＴでの神経発火が明らかに抑制されたことを示すヒストグラムデータである（注射前レベル：２８３．３±９０．４スパイク／５秒；注射１０分後レベル：１３．１±５．２スパイク／５秒）。
【００８３】
図３Ａ〜Ｅは、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１又は水の注射後の、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＶＮＡ及びＨＲの時間変化を示す。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ）の注射により、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＲは徐々に上昇した。ＷＡＴ−ＳＮＡは調査の最後の６０分に最高値の１４７．２±７．３％に達し（図３Ａ）、ＢＡＴ−ＳＮＡは５５分に２６７．２±８８．６％に達し（図３Ｂ）、ＡＳＮＡは調査の最後の６０分に２５９．２±７２．５％に達し（図３Ｃ）、ＨＲは調査の最後の５０分に１０７．９±４．０％に達した（図３Ｅ）。さらに、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射により、ＨＶＮＡは徐々に抑制され、５０分時に最低値の６５．６±１４．４％に達した（図３Ｄ）。対照的に、水の注射では、少なくとも注射後６０分までは、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＲ及びＨＶＮＡのレベルに有意な影響が見られなかった。０分時の基礎値については、両群間に有意差は見出されなかった（表３）。
【００８４】
【表３】
【００８５】
次に、覚醒ラットでＢＡＴ−Ｔ及びＢＴに対するラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果が引き起こされるかどうかを調べた。図４に示すとおり、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ）のＩＧ注射により、ＢＡＴ−Ｔ及びＢＴは有意に上昇した（図４Ａ及び４Ｂ）。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射後、ＢＡＴ−Ｔ（図４Ａ）及びＢＴ（図４Ｂ）は徐々に上昇し、最高値はそれぞれ５５分及び６０分で得られ、それぞれ０．４５±０．０９℃及び１．４１±０．４３℃であった。しかし、水の注射はＢＡＴ−Ｔ（図４Ａ）及びＢＴ（図４Ｂ）に影響を及ぼさなかった。図３に示す実験のＢＡＴ−Ｔ及びＢＴの基礎値（絶対値）（０分）を表３に示す。両群の基礎値に統計的有意差はなかった（マン・ホイットニーのＵ検定）。
【００８６】
最後に、ＳＣＮ及びＰＶＮを含む視床下部の神経核におけるｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ神経細胞に対するラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果を調べた。図６Ａは、ラットＳＣＮ及びＰＶＮの冠状切片の顕微鏡写真であり、ｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞に対する水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果を示す。図６Ｂは、ＳＣＮ及びＰＶＮにおけるｃ−Ｆｏｓ誘導のデータを示す。ＳＣＮ及びＰＶＮのいずれにおいても、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射により、水注射の場合よりも高いｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞の発現が誘起された（Ｐ＜０．０５）。
【００８７】
結果：
本研究では、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）（ラクトバチルス・パラカゼイ一般の特に好適な一例である。）を摂取させることにより、摂食量を変えることなくＨＦＤ摂取ラットの体重及び腹部脂肪重量の増加を防ぐことに成功した。
【００８８】
また、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）によりＢＡＴ−ＳＮＡ及びＷＡＴ−ＳＮＡが有意に亢進されることを見出した（図２）。さらに、血中ＦＦＡレベル（脂肪分解マーカーの一つであり、ＷＡＴ−ＳＮＡの亢進により刺激される。）は、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の投与により有意に上昇した（図５）。
【００８９】
以上のデータは、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）が肥満（特にＨＦＤによる肥満）を抑制することを示している。
【００９０】
理論に縛られることを望まないが、本発明者らは、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は、部分的に又は完全に中枢ヒスタミン神経系のシグナル伝達を介して、自律神経に作用し体重を減少させるものと考えている。
【００９１】
交感神経の活性化によるＢＡＴでの熱産生は、脱共役タンパク質１（ミトコンドリアでのＡＴＰ産生から酸化を脱共役させることによって熱産生及びエネルギー消費を促進する。）を介して行われ、ＷＡＴでの脂肪分解は、交感神経の興奮を介したトリアシルグリセロールの加水分解により誘導される。
【００９２】
本発明者らはさらに、覚醒ラットにおけるＢＡＴ−Ｔ及び血漿ＦＦＡレベルに対するラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の効果を調べ、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）がＢＡＴ−Ｔ及び血漿ＦＦＡレベルを上昇させることを示すデータを得ている（図４及び５）。すなわち、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は自律神経に作用し、熱発生及びＷＡＴの脂肪分解を亢進させるものと思われる。
【００９３】
本研究では、交感神経活動だけでなく副交感神経活動に対するラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の効果も分析した。ＨＶＮＡ（肝臓でのグリコーゲン合成を通じて血中グルコースレベルの調節に関与する。）が、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の摂取により抑制されることが見出されている（図２）。
【００９４】
本研究では、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）により交感神経の亢進及び副交感神経の抑制が引き起こされることが示されている。副交感神経の抑制は摂食阻害と関連があることが知られている（Ｓｈｅｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２００５；３８０（３）：２８９−９４）。本研究では、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の長期摂取は摂食に影響を与えない（おそらく消化管の適応による。）ことが示されているが、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は、特に短期間使用される場合は摂食抑制剤として使用可能である。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は概して、肥満及び／又は代謝異常の分野に関する。特に、本発明は、過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療又は予防するためのプロバイオティクスの使用に関する。
【０００２】
過去数十年の間に、肥満の罹患率は世界中で流行病の割合にまで増加した。世界で約１０億人が過体重又は肥満の状態にあり、死亡、移動及び経済的コストを増加させている。肥満は、エネルギー摂取量がエネルギー消費量よりも高く、余剰エネルギーが主に脂肪として脂肪組織に貯蔵されると起こる。エネルギー摂取量又はバイオアベイラビリティを減少させること、エネルギー消費量を増やすこと、及び／又は脂肪としての貯蔵を減少させることにより、体重の減少及び体重増加の予防を実現することができる。肥満は、糖尿病、アテローム性動脈硬化、変性疾患、気道疾患及びいくつかの癌を含む多くの慢性疾患を伴うので、健康への深刻な脅威となる。
【０００３】
最近、腸内細菌叢の改変が肥満と関連付けられた。このような変化は腸管内微生物叢の潜在代謝能力に影響し、結果として食物からのエネルギー回収能力を高めることが、肥満マウスにおいて示された（Ｔｕｒｎｂａｕｇｈ ＰＪ，Ｌｅｙ ＲＥ，Ｍａｈｏｗａｌｄ ＭＡ，Ｍａｇｒｉｎｉ Ｖ，Ｍａｒｄｉｓ ＥＲ，Ｇｏｒｄｏｎ ＪＩ．Ａｎ Ｏｂｅｓｉｔｙ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃａｐａｃｉｔｙ ｆｏｒ ｅｎｅｒｇｙ ｈａｒｖｅｓｔ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６；Ｌｅｙ ＲＥ，Ｔｕｒｎｂａｕｇｈ ＰＪ，Ｋｌｅｉｎ Ｓ，Ｇｏｒｄｏｎ ＪＩ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｈｕｍａｎ ｇｕｔ ｍｉｃｒｏｂｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｏｂｅｓｉｔｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２００６）。腸管内微生物叢のそのような改変は、肥満の病態生理に寄与するといわれている。食物又は栄養補助食品に存在する有益な細菌であるプロバイオティクスは、腸内微生物叢を改変させることで知られている（Ｆｕｌｌｅｒ Ｒ ＆ Ｇｉｂｓｏｎ ＧＲ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ ｕｓｉｎｇ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ．Ｓｃａｎｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１９９７）。
【０００４】
例えば、ＵＳ７００１７５６及びＣＮ１６７０１８３では、単離された微生物株、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＧＭ−０２０が提供され、それが肥満の治療に有効であることが見出されている。
【０００５】
しかし、ある微生物の摂取よりも他の微生物の摂取に対して耐性が高い生物もいる可能性があるので、治療対象の必要性に応じて選択可能な種々の微生物が入手可能であることが望ましい。
【０００６】
ＷＯ０３０５５９８７では、キムチの発酵液から単離、同定された特定のラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）株、ラクトバチルス・パラカゼイｖｉｒｏ−０１が開示されている。この菌株は、プロバイオティクスとして使用でき、下痢の発生を減少させる。
【０００７】
ＷＯ２００７０１５１３２では、特にアレルギー及び免疫不全を治療及び／又は予防するための免疫調節組成物の調製に使用可能なラクトバチルス・パラカゼイ株、Ｉ １６８８が開示されている。
【０００８】
この先行技術に基づいて、本発明は、肥満及び／又は代謝異常の治療又は予防に使用できる代替的なプロバイオティクス細菌を同定することを目的としていた。
【０００９】
本発明者らは、驚くべきことに、ラクトバチルス・パラカゼイにより本発明の目的が達成できることを見出した。
【００１０】
本発明の目的に特に有効なラクトバチルス・パラカゼイ株の一つはラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１である。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、ブダペスト条約に基づいてパスツール研究所（２８ ｒｕｅ ｄｕ Ｄｏｃｔｅｕｒ Ｒｏｕｘ ７５０２４ Ｐａｒｉｓ Ｃｅｄｅｘ １５）に寄託され、ＣＮＣＭ Ｉ−２１１６と命名されている。
【００１１】
本発明者らは、プロバイオティックなラクトバチルス・パラカゼイが自律神経活動に作用し、血中グルコース及び心血管機能を制御することを示した。本発明者らは、ラクトバチルス・パラカゼイ（例えばラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の摂取により体重及び腹部脂肪重量が減少することを見出した。この効果は、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を長期摂取した後に特に顕著であった。本発明者らは、驚くべきことに、ラクトバチルス・パラカゼイ（例えばラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の摂取が自律神経に作用し、脂肪分解を促進し、体重を減少させることを見出した。
【００１２】
好ましいラクトバチルス・パラカゼイ株はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１である。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、他のラクトバチルス・パラカゼイ株とは異なり多種多様な糖で増殖することが見出されている。この特性により、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は多種多様な糖と共生的に相互作用することが可能となり、それ故、より大きな健康上の利益をもたらすことになる。
【００１３】
例えば、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、他のラクトバチルス・パラカゼイ株が増殖しなかったタガトース（フルクトースの立体異性体）で増殖することができた。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、試験した他の４種のラクトバチルス・パラカゼイ株が増殖しなかったラフチリンＨＰ（長鎖フラクトオリゴ糖、イヌリン）で増殖することが見出された。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１は、他の８種のラクトバチルス・パラカゼイ株が増殖しなかったポリデキストロースで増殖することが見出された。
【００１４】
したがって、本発明の目的は、請求項１に記載の使用により達成される。
【００１５】
すなわち、本発明の一実施形態は、過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療又は予防するための組成物の調製のための、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の使用である。
【００１６】
本発明はまた、過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療及び／又は予防するための組成物であって、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含む組成物に関する。
【００１７】
本明細書において、下記の語の意味は下記のとおりである。
【００１８】
「ラクトバチルス・パラカゼイ」という語は、当該細菌そのもの、当該細菌を有する細胞増殖培地、又はラクトバチルス・パラカゼイが培養された細胞増殖培地を包含するものとする。
【００１９】
「ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１」という語は、当該細菌そのもの、当該細菌を有する細胞増殖培地、又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１が培養された細胞増殖培地を包含するものとする。
【００２０】
「ボディマス指数」又は「ＢＭＩ」とは、体重（ｋｇ）を身長（ｍ）の２乗で割って得られる比を意味する。
【００２１】
「過体重」は、成人については、２５〜３０のＢＭＩを有することと定義する。
【００２２】
「肥満」とは、動物（特に、ヒトやその他の哺乳動物）の脂肪組織に貯蔵されるエネルギーの量が、ある種の健康状態又は死亡率上昇がもたらされる程度にまで増加した状態である。「肥満」は、成人については、３０より大きいＢＭＩを有することと定義する。
【００２３】
「プロバイオティクス」とは、宿主の衛生又は健康に有益な効果を及ぼす微生物細胞の調製物又は微生物細胞の成分を意味する（Ｓａｌｍｉｎｅｎ Ｓ，Ｏｕｗｅｈａｎｄ Ａ，Ｂｅｎｎｏ Ｙ．ｅｔ ａｌ“Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ：ｈｏｗ ｓｈｏｕｌｄ ｔｈｅｙ ｂｅ ｄｅｆｉｎｅｄ”Ｔｒｅｎｄｓ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９：１０ １０７−１０）。
【００２４】
「プレバイオティクス」とは、腸内におけるプロバイオティクスの増殖を促進する食物のことである。プレバイオティクスは、それを摂取したヒトの胃及び／又は腸上部で分解されたり消化管で吸収されたりすることはないが、消化管内細菌叢及び／又はプロバイオティクスにより発酵される。プレバイオティクスは、例えばＧｌｅｎｎ Ｒ．Ｇｉｂｓｏｎ ａｎｄ Ｍａｒｃｅｌ Ｂ．Ｒｏｂｅｒｆｒｏｉｄ，Ｄｉｅｔａｒｙ Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｌｏｎｉｃ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ：Ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｏｎｃｅｐｔ ｏｆ Ｐｒｅｂｉｏｔｉｃｓ，Ｊ．Ｎｕｔｒ．１９９５ １２５：１４０１−１４１２により定義されている。
【００２５】
「食品用微生物」とは、食品で使用され、食品用として一般に安全と認められている微生物を意味する。
【００２６】
「長期投与」は、好ましくは、６週間以上の継続的な投与である。
【００２７】
「短期投与」は、好ましくは、６週間未満の継続的な投与である。
【００２８】
本発明の使用により調製される組成物は、医薬品、食品、ペットフード製品、食品添加物又は機能性食品であってもよい。
【００２９】
本発明の組成物は、保護親水コロイド（例えば、ゴム、タンパク質、加工デンプン）、結合剤、膜形成剤、カプセル化剤／材料、壁／シェル材、マトリックス化合物、コーティング、乳化剤、界面活性剤、可溶化剤（油、脂肪、蝋、レシチン等）、吸着剤、担体、充填剤、共化合物（ｃｏ−ｃｏｍｐｏｕｎｄ）、分散剤、湿潤剤、加工助剤（溶媒）、流動化剤、矯味剤、増量剤、ゼリー化剤、ゲル形成剤、抗酸化剤及び抗菌剤をさらに含有してもよい。
【００３０】
本発明の組成物は、公知の医薬品添加物、アジュバント、賦形剤及び希釈剤（例えば、水、ゼラチン、植物性ガム、リグニンスルホン酸塩、タルク、糖、デンプン、アラビアゴム、植物油、ポリアルキレングリコール、香味料、保存料、安定剤、乳化剤、緩衝液、滑沢剤、着色料、湿潤剤、充填剤。これらに限定されるわけではない。）をさらに含有してもよい。いずれの場合も、このような追加成分は、投与対象の個体への適合性を考慮して選択される。
【００３１】
本発明の組成物は、総合栄養食（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｆｏｒｍｕｌａ）であってもよい。
【００３２】
本発明の組成物は、タンパク質源を含んでもよい。
【００３３】
任意の好適な食餌性タンパク質（例えば、動物性タンパク質（乳タンパク質、食肉タンパク質、卵タンパク質等）；植物性タンパク質（大豆タンパク質、小麦タンパク質、米タンパク質、エンドウ豆タンパク質等）；遊離アミノ酸の混合物；又はそれらの組合せ）を使用することができる。乳タンパク質（例えば、カゼイン、ホエイ）及び大豆タンパク質が特に好ましい。
【００３４】
タンパク質は、インタクトなタンパク質、タンパク質の加水分解物、又はインタクトなタンパク質とタンパク質の加水分解物との混合物であってもよい。例えば、牛乳アレルギーを起こすリスクがあると考えられる動物に対しては、タンパク質の部分加水分解物（加水分解度：２〜２０％）を与えることが望ましい。タンパク質の加水分解物が必要な場合、加水分解は必要に応じて公知の方法で行うことができる。例えば、ホエイタンパク質の加水分解物は、一つ又は複数のステップでホエイ画分を酵素で加水分解することによって調製できる。出発物質として使用するホエイ画分にラクトースが実質的に含まれない場合、タンパク質は、加水分解の過程でリジンの損失を受けにくくなることが見出されている。このことにより、リジンの損失の程度を、総リジンの約１５重量％からリジンの約１０重量％未満へ減少させることができる。例えば、リジンの約７重量％に減少させて、タンパク質源の栄養価を大幅に改善することができる。
【００３５】
本発明の組成物は、炭水化物源及び／又は脂肪源をさらに含有してもよい。
【００３６】
組成物が脂肪源を含有する場合、脂肪源は、好ましくは、該組成物のエネルギーの５〜４０％（例えば２０〜３０％）を供給する。好適な脂肪プロファイルは、キャノーラ油、コーン油及び高オレイン酸ヒマワリ油のブレンドを用いて得ることもできる。
【００３７】
炭水化物源を組成物に添加してもよい。
【００３８】
炭水化物源は、好ましくは、該組成物のエネルギーの４０〜８０％を供給する。任意の好適な炭水化物（例えば、スクロース、ラクトース、グルコース、フルクトース、コーンシロップ固形物、マルトデキストリン及びそれらの混合物）を使用することができる。必要に応じて食物繊維をさらに添加してもよい。食物繊維は、酵素で消化されずに小腸を通過し、天然の増量剤及び緩下剤として機能する。食物繊維は水溶性でも不溶性でもよいが、一般には両者のブレンドが好ましい。食物繊維の好適な供給源としては、例えば、大豆、エンドウ豆、燕麦、ペクチン、グアーガム、アラビアゴム、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、シアリルラクトース及び動物乳由来のオリゴ糖が挙げられる。好ましい繊維ブレンドは、イヌリンとそれよりも短鎖のフラクトオリゴ糖との混合物である。好ましくは、繊維が存在する場合、繊維含有量は、摂取される組成物１Ｌ当たり２〜４０ｇ、より好ましくは４〜１０ｇである。
【００３９】
本発明の組成物は、政府機関（ＵＳＲＤＡ等）の推奨に従って、ミネラル及び微量栄養素（微量元素、ビタミン等）をさらに含有してもよい。例えば、組成物は一日量当たり、下記微量栄養素の１種又は複数を下記範囲で含有してもよい。カルシウム ３００〜５００ｍｇ；マグネシウム ５０〜１００ｍｇ；リン １５０〜２５０ｍｇ；鉄 ５〜２０ｍｇ；亜鉛 １〜７ｍｇ；銅 ０．１〜０．３ｍｇ；ヨウ素 ５０〜２００μｇ；セレン ５〜１５μｇ；ベータカロテン １０００〜３０００μｇ；ビタミンＣ １０〜８０ｍｇ；ビタミンＢ１ １〜２ｍｇ；ビタミンＢ６ ０．５〜１．５ｍｇ；ビタミンＢ２ ０．５〜２ｍｇ；ナイアシン ５〜１８ｍｇ；ビタミンＢ１２ ０．５〜２．０μｇ；葉酸 １００〜８００μｇ；ビオチン ３０〜７０μｇ；ビタミンＤ １〜５μｇ；ビタミンＥ ３〜１０μｇ。
【００４０】
必要に応じて１種又は複数の食品用乳化剤（例えば、モノ−及びジグリセリドのジアセチル酒石酸エステル、レシチン、モノ−及びジグリセリド）を組成物に組み込んでもよい。同様に、適当な塩及び安定剤を含んでもよい。
【００４１】
本発明の組成物は、好ましくは経口又は経腸投与可能なものである。例えば、ミルク又は水で戻す粉末の形態のものである。
【００４２】
ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は、任意の好適な方法に従って培養することができ、組成物に添加するために、例えば凍結乾燥法又は噴霧乾燥法で調製することができる。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）に適した培養法は当分野で知られている。或いは、細菌調製物は専門業者から購入してもよい。
【００４３】
概して、本発明の組成物は幼児、子供及び／又は成人を対象とする。
【００４４】
本発明の一実施形態において、本発明の使用により調製された組成物による治療の対象となるのは少なくとも２歳である。この年齢制限は特にヒトに適用される。本発明の使用により調製された組成物による治療の対象が例えばイヌ又はネコである場合、イヌ又はネコは少なくとも４ヵ月齢であるべきである。
【００４５】
本発明の組成物は医薬品であってもよい。医薬品としてのラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の用量は、医師の勧めに従い慎重に調整すべきである。
【００４６】
本発明に従って調製された組成物は食品であってもよい。食品としてのラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の有益な効果は誰もが享受できる。代謝異常、過体重及び／又は肥満の治療は、ごく初期に低コストで始めることができる。さらに、食品であれば、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）ははるかに摂取しやすい。本発明に適用可能な食品としては、例えば、ヨーグルト、ミルク、風味付けされたミルク、アイスクリーム、デザート製品、粉末（例えばミルク又は水で戻す粉末）、チョコレートミルク飲料、麦芽飲料、Ｒｅａｄｙ Ｔｏ Ｅａｔ食品、ヒト用のインスタント食品又は飲料、或いはペット又は家畜用の飼料又はその一部となる食品組成物が挙げられる。
【００４７】
したがって、一実施形態において、本発明の組成物は、ヒト、ペット又は家畜を対象とする食品である。
【００４８】
本発明の組成物は、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、家禽又はヒトからなる群から選択される動物を対象とするものであってもよい。好ましい実施形態において、本発明の組成物は、成熟した動物（特に成人）を対象とする食品である。
【００４９】
ラクトバチルス・パラカゼイは、褐色脂肪組織にも作用することが見出されている。褐色脂肪組織は、寒冷適応動物の熱産生の主たる場所である。したがって、本発明の組成物は、多量の褐色脂肪組織を有する動物（例えばイヌ）に特に好適である。
【００５０】
本発明の組成物は、少なくとも１種の他の食品用微生物（特に細菌又は酵母）をさらに含んでもよい。食品用微生物はプロバイオティクスであってもよく、好ましくは、乳酸菌、ビフィズス菌、プロピオン酸菌又はそれらの混合物からなる群から選択される。
【００５１】
いかなるプロバイオティクスも本発明に従って使用可能である。好ましくは、プロバイオティクスは、ビフィズス菌、乳酸桿菌、乳酸球菌、腸球菌、連鎖球菌、サッカロマイセス又はそれらの混合物からなる群から選択され、特に、ビフィドバクテリウム・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ジョンソニイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルス・プランタルム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）又はそれらの混合物からなる群から選択されたものであり、好ましくは、ラクトバチルス・ジョンソニイＮＣＣ５３３（ＣＮＣＭ Ｉ−１２２５）、ビフィドバクテリウム・ロングムＮＣＣ４９０（ＣＮＣＭ Ｉ−２１７０）、ビフィドバクテリウム・ロングムＮＣＣ２７０５（ＣＮＣＭ Ｉ−２６１８）、ビフィドバクテリウム・ラクティス２８１８（ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、ラクトバチルス・ラムノサスＧＧ（ＡＴＣＣ５３１０３）、ラクトバチルス・ラムノサスＮＣＣ４００７（ＣＧＭＣＣ １．３７２４）、エンテロコッカス・フェシウムＳＦ６８（ＮＣＩＭＢ１０４１５）及びそれらの混合物からなる群から選択される。
【００５２】
例えば、プロバイオティクスは、ビフィズス菌に特異的な腸内微生物叢の形成を促進することもできる。これに適したプロバイオティックなビフィズス菌株としては上述のビフィズス菌株が挙げられ、さらには、デンマークのＣｈｒｉｓｔｉａｎ Ｈａｎｓｅｎより商標Ｂｂ１２の下に販売されているビフィドバクテリウム・ラクティス株（ＣＮＣＭ Ｉ−３４４６）、日本の森永乳業より商標ＢＢ５３６の下に販売されているビフィドバクテリウム・ロングム株（ＡＴＣＣ ＢＡＡ−９９９）、Ｄａｎｉｓｃｏより商標Ｂｂ−０３の下に販売されているビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ）株、森永乳業より商標Ｍ−１６Ｖの下に販売されているビフィドバクテリウム・ブレーベ株、及びＩｎｓｔｉｔｕｔ Ｒｏｓｅｌｌ（Ｌａｌｌｅｍａｎｄ）より商標Ｒ００７０の下に販売されているビフィドバクテリウム・ブレーベ株が挙げられる。適当なプロバイオティックな乳酸菌とビフィズス菌との混合物を使用してもよい。
【００５３】
食品用酵母としては、例えば、サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）及び／又はサッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）を使用することができる。
【００５４】
本発明の好ましい一実施形態において、組成物は、少なくとも一種のプレバイオティクスをさらに含有する。プレバイオティクスは、腸内において、ある種の食品用細菌（特にプロバイオティクス）の増殖を促進できるので、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の効果を増強することができる。さらに、例えば消化に対して好ましい影響を及ぼすプレバイオティクスもある。
【００５５】
本発明に従って使用可能なプレバイオティクスに特に制限はなく、腸内におけるプロバイオティクスの増殖を促進するすべての食物が包含される。好ましくは、プレバイオティクスは、オリゴ糖（フルクトース、ガラクトース、マンノースを含有してもよい）、食物繊維（特に水溶性繊維である大豆繊維）、イヌリン又はそれらの混合物からなる群から選択することができる。好ましいプレバイオティクスは、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ガラクトオリゴ糖（ＩＯＳ）、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、大豆オリゴ糖、グリコシルスクロース（ＧＳ）、ラクトスクロース（ＬＳ）、ラクツロース（ＬＡ）、パラチノースオリゴ糖（ＰＡＯ）、マルトオリゴ糖（ＭＯＳ）、ゴム及び／又はその加水分解物、ペクチン及び／又はその加水分解物である。
【００５６】
本発明の利点の一つは、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）が生菌であっても非複製性細菌種であっても有効なことである。したがって、生菌が存在できなくなる条件下であっても、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の有効性は失われない。
【００５７】
しかし、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の少なくとも一部は組成物中で生存しているのが好ましく、さらには、生存したまま腸に到達するのが好ましい。この場合、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は腸内でコロニーを形成し、増殖によりその有効性を増大することができる。
【００５８】
しかし、特別な無菌食品又は医薬品については、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は組成物中で生存していないのが好ましい。故に、本発明の一実施形態において、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の少なくとも一部は組成物中で生存していない。
【００５９】
ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）はいかなる濃度でも有効である。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）が生存したまま腸に到達した場合、単一細菌であってもコロニー形成及び増殖により強力な効果をもたらす。
【００６０】
本発明の組成物の一日量は、一般に、１０２〜１０１２ｃｆｕ（コロニー形成単位）のラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な一日量は１０５〜１０１１ｃｆｕであり、より好ましくは１０７〜１０１０ｃｆｕである。
【００６１】
非複製性ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の場合、組成物の一日量は、一般に、１０２〜１０１２個（ｃｅｌｌｓ）のラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な一日量は１０５〜１０１１個であり、より好ましくは１０７〜１０１０個である。
【００６２】
本発明の組成物は、一般に、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０３〜１０１２ｃｆｕのラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な量は組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０５〜１０１１ｃｆｕであり、より好ましくは組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０７〜１０１０ｃｆｕである。
【００６３】
非複製性ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の場合、組成物は、一般に、組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０３〜１０１２個（ｃｅｌｌｓ）のラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含むのが好ましい。ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の特に好適な量は組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０５〜１０１１個であり、より好ましくは組成物の乾燥重量１ｇ当たり１０７〜１０１０個である。
【００６４】
本発明において、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含む組成物はまた、体重減少及び／又は体重維持を支援するために使用することができる。
【００６５】
本発明の組成物は、特に組成物の長期投与については、体重増加を減少させるために使用することもできる。
【００６６】
他方、特に短期投与については、本発明の組成物は摂食抑制剤として使用することもできる。
【００６７】
本発明の組成物を摂取することにより、腹部脂肪の総生成量、特に腸間膜脂肪組織、精巣上体脂肪組織及び／又は腎周囲脂肪組織の生成量が減少することが見出されている。
【００６８】
本発明の組成物は、高脂肪食に起因する過体重及び／又は肥満の治療又は予防に特に好適である。高脂肪食は、一般に推奨されている食餌に含まれる脂肪量の少なくとも１１０％を含有する食餌である。
【００６９】
適正な体重（とりわけ許容可能な体脂肪率）の確立・維持が代謝異常を治療又は予防するための重要なステップであるので、本発明において、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）を含む組成物はさらに、代謝異常（例えば、糖尿病、高血圧、肝硬変、メタボリックシンドローム及び／又は心血管疾患）を治療又は予防するために使用することができる。故に、本発明により調製される組成物は、現代人（とりわけ先進国の人々）の健康に大きく貢献することができる。
【００７０】
本明細書に記載の本発明の特徴はすべて、開示された本発明の範囲から逸脱することなく自由に組み合わせ可能であることは、当業者には理解されよう。特に、本発明の使用について記載された特徴は本発明の組成物に適用することができ、その逆もまた同様である。
【００７１】
本発明の他の利点及び特徴は、下記実施例及び図面から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】高脂肪食を１１週間与えた場合の、体重（Ａ）及び摂食量（Ｂ）に対するラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）の効果を示すグラフである。データは各群の平均値±ＳＥＭで表す。使用した動物の数は括弧内に示す。水とラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１との有意差はＡＮＯＶＡで分析した。＊Ｐ＜０．０５。
【図２】水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１を注射したラットのＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡ（Ａ）、及びヘキサメトニウムクロリドの静脈注射に対するＢＡＴ−ＳＮＡの応答（Ｂ）の典型的な記録データを示す図である。注射した時点は矢印で示す。
【図３】自律神経活動に対する、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＤ注射の効果を示すグラフである。水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１のＩＤ注射後のＷＡＴ−ＳＮＡ（Ａ）、ＢＡＴ−ＳＮＡ（Ｂ）、ＡＳＮＡ（Ｃ）、ＨＶＮＡ（Ｄ）及びＨＲ（Ｅ）は、０分時の値に対するパーセンテージの平均値±ＳＥＭで表す。使用した動物の数は括弧内に示す。水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の十二指腸内注射後５〜６０分の値の有意差（＊Ｐ＜０．０５）はＡＮＯＶＡで分析する。
【図４】ＢＡＴ−Ｔ及びＢＴに対する、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＧ注射の効果を示すグラフである。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１のＩＧ注射後のＢＡＴ−Ｔ（Ａ）及びＢＴ（Ｂ）は、０分時の値に対するパーセンテージの平均値±ＳＥＭで表す。使用した動物の数は括弧内に示す。注射後５〜６０分の両群の値の有意差（＊Ｐ＜０．０５）はＡＮＯＶＡで分析する。
【図５】ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＧ注射後の血漿ＦＦＡの変化を示すグラフである。データ（平均値±ＳＥＭ）は、０分時に測定されたＦＦＡレベルに対するパーセンテージで示す。使用した動物の数は括弧内に示す。１５〜６０分の両群の値の有意差（＊Ｐ＜０．０５）はＡＮＯＶＡで分析した。
【図６】ＳＣＮ及びＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞に対する、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）のＩＧ注射の効果を示す図である。冠状切片の顕微鏡写真は、ＳＣＮ及びＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞に対する水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果を示す（Ａ）。略語：３Ｖ：第三脳室；ＯＣ：視交叉。スケールバー＝２００μｍ。水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射後のＳＣＮ及びＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞を計数した（Ｂ）。使用した動物の数は括弧内に示す。データは平均値±ＳＥＭで表す。＊有意差はＰ＜０．０５で示す（マン・ホイットニーのＵ検定）。
【実施例】
【００７３】
動物：
８週齢の雄ウィスターラット８匹を使用し、室内（２４±１℃に維持。光を毎日１２時間（７時〜１９時）照射。）で個別に飼育した。ラットは実験の少なくとも１週間前から環境に順応させ、２群に分けて水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）を１１週間与えた。ウレタン麻酔したラットでＷＡＴ−ＳＮＡの用量反応を調べて、その用量を決定した（表１）。両群には高脂肪食［Ｏｒｉｅｎｔａｌ Ｙｅａｓｔ，東京，日本。食餌組成（％、カロリーベース）：脂肪３０％（牛脂１４％＋ラード１４％＋大豆油２％）、カゼイン２５％、コーンスターチ１５％、スクロース２０％、セルロース５％、ミネラル混合（ＡＩＮ−９３Ｇ）４％、ビタミン混合（ＡＩＮ−９３）１％］を与えた。飼料と水は自由に摂取できるようにした。実験期間中はすべてのラットの体重をモニターし、屠殺後、腹部脂肪（腸間膜脂肪組織＋精巣上体脂肪組織＋腎周囲脂肪組織）の重量を測定した。
【００７４】
【表１】
【００７５】
電気生理学的検査：
体重３００〜３３０ｇの雄ウィスターラットを使用した。ラットは室内（２４±１℃に維持。光を毎日１２時間（７時〜１９時）照射。）で飼育した。飼料と水は自由に摂取できるようにした。ラットは実験の少なくとも１週間前から環境に順応させた。実験当日、手術の３〜４時間前に飼料を取り除いた。一般的な準備は、Ｔａｎｉｄａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ ２００５；１０５８（１−２）：４４−５５（参照されることにより本明細書に組み込まれる。）に記載のとおりに行った。簡単に説明すると、次のとおりである。ウレタン１ｇ／ｋｇの腹腔内（ＩＰ）注射による麻酔下、静脈内注射及び十二指腸内注射のために、ポリエチレン製カテーテルをそれぞれ左大腿静脈及び十二指腸腔に挿入した。次いで、ラットの気管内にカニューレを挿入し、定位固定装置でラットを固定し、３７．０〜３７．５℃に維持した。遠心性のＷＡＴ−ＳＮＡ（白色脂肪組織−シナプス神経活動）を記録するために、精巣上体の右ＷＡＴの血管に平行に走る交感神経枝の神経線維を顕微鏡下で注意深く分離した。遠心性のＢＡＴ−ＳＮＡ（褐色脂肪組織−シナプス神経活動）を記録するために、解剖顕微鏡を用いて、左背部の切開により肩甲骨間のＢＡＴに分布する左交感神経を露出した。副腎交感神経活動（ＡＳＮＡ）を記録するために、左側腹部の切開により左副腎神経を後腹膜に露出した。肝迷走神経活動を記録するために、腹部横隔膜下迷走神経の肝臓枝を同定し、腹部正中線切開後、食道上に露出した。神経の遠位端は結紮し、次いで、遠心性の神経活動を記録するために一対の銀線電極に接続した。記録電極は、神経の乾燥防止及び電気絶縁のために、流動パラフィンオイルのプール又は温かいワセリンと流動パラフィンオイルとの混合物に浸した。記録電極の設置後３０〜４０分間ラットを静置した。ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡ（肝迷走神経活動）の電気的変化を増幅し、選別し、オシロスコープでモニターした。神経活動の生データをＷｉｎｄｏｗ Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｏｒで標準パルスに変換した。２つの針電極を右腕及び左下肢の皮膚下に設置して、心電図を記録し、心拍数（ＨＲ）をモニターした。信号を生体電気増幅器で増幅した。これらのアナログ信号をＡ／Ｄ変換器（Ｐｏｗｅｒ−Ｌａｂモデル４ｓｐ，ＡＤ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，米国）でデジタル信号に変換し、サンプリングし、オフライン分析のためにハードディスクに保存した。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）又は水（２ｍＬ）のＩＤ注射前の５分間、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＲ及びＨＶＮＡのベースラインの測定を行った。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の凍結乾燥培養物を水に溶解後、実験に使用した。注射後６０分間、上記パラメータを記録した。実験の最後に、記録のノイズレベルを判定するために、ヘキサメトニウムクロリド（１０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与して節後神経の活動電位をブロックした。
【００７６】
テレメトリー記録：
ＢＴ（体温）及びＢＡＴ−Ｔ（褐色脂肪組織−温度）を測定するために、テレメトリーシステム１８１（Ｓｔａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ，日本）をＴａｎｉｇｕｃｈｉ Ｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２００６；３９８（１−２）：１０２−６に記載のとおりに使用した。一部のラット（ｎ＝８）については、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の胃内（ＩＧ）注射の１０〜１４日前に、温度センサー、電池及び送信機（モデル１０Ｔ−Ｔ，Ｓｔａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ）の入った１ａカプセルを、ペントバルビタール麻酔（３５ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）下、腹腔内又はＢＡＴの脂肪パッドの上に埋め込んだ。受信機の出力信号をアナログからデジタルに変換し、モニターし、ＰＣに保存した。このシステムにより得られたデータを、１６ｃｈ−Ｅｉｇｈｔ Ｓｔａｒ Ｐｒｏｇｒａｍ（Ｓｔａｒ Ｍｅｄｉｃａｌ）により分析した。実験当日、注射の４〜６時間前に飼料を取り除いた。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１又は水のＩＧ注射（明期（１４時））の直前５分間、動物が覚醒した状態で、ＢＡＴ−Ｔ又はＢＴのベースラインの測定を行った。注射後、これらのパラメータを６０分間記録した。
【００７７】
血中ＦＦＡレベルの測定：
実験の３日前に、ＩＰペントバルビタール麻酔下、外科的にカテーテル挿入を行った。末端が心房のすぐ外に位置するように右外頸静脈に埋め込まれた長期留置シリコーンカテーテルから血液試料を採取し、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）又は水（２ｍＬ）のＩＧ注射前後に実施した。ＦＦＡ（遊離脂肪酸）の測定のために、血漿を直ちに分離した。ＮＥＦＡ−Ｃ−ｔｅｓｔキット（和光純薬工業，カタログ番号２７９−７５４０１）を用いるアシルＣｏＡシンテターゼ−アシルＣｏＡオキシダーゼ法によりＦＦＡを測定した。
【００７８】
免疫組織化学的検査：
ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ／２ｍＬ水）又は水（２ｍＬ）のＩＧ注射後、ＳＣＮ（視交叉上核）及びＰＶＮにおけるｃ−Ｆｏｓタンパク質の誘導を調べた。注射はすべて１４時に実施した。注射から６０分後、ラットに麻酔（ペントバルビタール３５ｍＬ／ｋｇ、ＩＰ）をかけ、氷冷生理食塩水、次いでリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で心臓内を灌流した。脳を摘出し、ＰＢＳ中４％ＰＦＡに一晩４℃で後固定し、２０％スクロース中で凍結を防止しつつ二晩静置した。次いで、脳を凍結ミクロトーム（ＣＭ１９００，Ｌｅｉｃａ，ドイツ）でスライスして厚さ３０μｍの切片を得た。一次抗体としてｃ−Ｆｏｓに対する特異的ウサギポリクローナル抗体（１０００倍希釈；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用いて、ＳＣＮ及びＰＶＮにおけるｃ−Ｆｏｓの免疫組織化学的分析を行った。発色基質としてジアミノベンジジン（Ｓｉｇｍａ，日本）を用いて、Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＡＢＣキット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）で免疫反応を可視化した。ＳＣＮ又はＰＶＮの領域を特定するために、実験動物の近傍の切片をクレシルバイオレット（Ｓｉｇｍａ，日本）で染色し、ＳＣＮの輪郭を明らかにした。顕微鏡（ＢＸ５１，Ｏｌｙｍｐｕｓ，日本）で切片の像を観察し、Ｉｍａｇｅ Ｊプログラムを用いてＳＣＮ又はＰＶＮのｃ−Ｆｏｓ免疫反応性（ｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ）細胞を計数した。
【００７９】
統計解析：
ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射後、５分毎にＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＶＮＡ、ＨＲ、ＢＡＴ−Ｔ及びＢＴを測定し、デジタル信号処理により解析した。すべてのデータは平均値±ＳＥＭで表した。マン・ホイットニーのＵ検定を用いて各群の基礎値を比較した。注射前の状態に個体間のバラツキがあるため、神経発火データ及び温度データについては、それぞれベースラインからの変化率及び温度変化を計算した。二元ＡＮＯＶＡを用いて、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＶＮＡ、ＨＲ、ＢＡＴ−Ｔ、ＢＴ、体重及び血漿ＦＦＡレベルにおける両群の応答を比較した。
【００８０】
結果：
図１Ａは、実験中の両群の体重の変化を示す。水群又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群のいずれにおいても、ＨＦＤ（高脂肪食）を与えることにより体重の漸進的増加が生じたが、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群では、体重増加の有意な減少が確認された。さらに、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１を摂取すると、腹部脂肪（腸間膜脂肪組織＋精巣上体脂肪組織＋腎周囲脂肪組織）の最終的な重量が、水を摂取したラットに比べて有意に減少した（表２）。
【００８１】
【表２】
【００８２】
水群とラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群との間で、実験期間中の長期的な飼料の摂取量に有意差は見出されなかった（図１Ｂ）。また、全実験期間中の水摂取量でも、水群（３２４８±２９５ｍＬ）とラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１群（２７３８±４１５ｍＬ）とで有意差は認められなかった。図２Ａに、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の腸内注射後６０分間の、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡの典型的な記録を示す。ウレタン麻酔したラットにおいて、水の注射はＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＶＮＡに影響を与えなかったが、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ）の注射は、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ及びＡＳＮＡを有意に上昇させ、ＨＶＮＡを抑制した。さらに、図２Ｂは、ヘキサメトニウムクロリドの静脈注射によりＢＡＴでの神経発火が明らかに抑制されたことを示すヒストグラムデータである（注射前レベル：２８３．３±９０．４スパイク／５秒；注射１０分後レベル：１３．１±５．２スパイク／５秒）。
【００８３】
図３Ａ〜Ｅは、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１又は水の注射後の、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＶＮＡ及びＨＲの時間変化を示す。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ）の注射により、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ及びＨＲは徐々に上昇した。ＷＡＴ−ＳＮＡは調査の最後の６０分に最高値の１４７．２±７．３％に達し（図３Ａ）、ＢＡＴ−ＳＮＡは５５分に２６７．２±８８．６％に達し（図３Ｂ）、ＡＳＮＡは調査の最後の６０分に２５９．２±７２．５％に達し（図３Ｃ）、ＨＲは調査の最後の５０分に１０７．９±４．０％に達した（図３Ｅ）。さらに、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射により、ＨＶＮＡは徐々に抑制され、５０分時に最低値の６５．６±１４．４％に達した（図３Ｄ）。対照的に、水の注射では、少なくとも注射後６０分までは、ＷＡＴ−ＳＮＡ、ＢＡＴ−ＳＮＡ、ＡＳＮＡ、ＨＲ及びＨＶＮＡのレベルに有意な影響が見られなかった。０分時の基礎値については、両群間に有意差は見出されなかった（表３）。
【００８４】
【表３】
【００８５】
次に、覚醒ラットでＢＡＴ−Ｔ及びＢＴに対するラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果が引き起こされるかどうかを調べた。図４に示すとおり、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（１×１０９ｃｆｕ）のＩＧ注射により、ＢＡＴ−Ｔ及びＢＴは有意に上昇した（図４Ａ及び４Ｂ）。ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射後、ＢＡＴ−Ｔ（図４Ａ）及びＢＴ（図４Ｂ）は徐々に上昇し、最高値はそれぞれ５５分及び６０分で得られ、それぞれ０．４５±０．０９℃及び１．４１±０．４３℃であった。しかし、水の注射はＢＡＴ−Ｔ（図４Ａ）及びＢＴ（図４Ｂ）に影響を及ぼさなかった。図３に示す実験のＢＡＴ−Ｔ及びＢＴの基礎値（絶対値）（０分）を表３に示す。両群の基礎値に統計的有意差はなかった（マン・ホイットニーのＵ検定）。
【００８６】
最後に、ＳＣＮ及びＰＶＮを含む視床下部の神経核におけるｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ神経細胞に対するラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果を調べた。図６Ａは、ラットＳＣＮ及びＰＶＮの冠状切片の顕微鏡写真であり、ｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞に対する水又はラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の効果を示す。図６Ｂは、ＳＣＮ及びＰＶＮにおけるｃ−Ｆｏｓ誘導のデータを示す。ＳＣＮ及びＰＶＮのいずれにおいても、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の注射により、水注射の場合よりも高いｃ−Ｆｏｓ−ｉｒ細胞の発現が誘起された（Ｐ＜０．０５）。
【００８７】
結果：
本研究では、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１（ＮＣＣ２４６１）（ラクトバチルス・パラカゼイ一般の特に好適な一例である。）を摂取させることにより、摂食量を変えることなくＨＦＤ摂取ラットの体重及び腹部脂肪重量の増加を防ぐことに成功した。
【００８８】
また、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）によりＢＡＴ−ＳＮＡ及びＷＡＴ−ＳＮＡが有意に亢進されることを見出した（図２）。さらに、血中ＦＦＡレベル（脂肪分解マーカーの一つであり、ＷＡＴ−ＳＮＡの亢進により刺激される。）は、ラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１の投与により有意に上昇した（図５）。
【００８９】
以上のデータは、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）が肥満（特にＨＦＤによる肥満）を抑制することを示している。
【００９０】
理論に縛られることを望まないが、本発明者らは、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は、部分的に又は完全に中枢ヒスタミン神経系のシグナル伝達を介して、自律神経に作用し体重を減少させるものと考えている。
【００９１】
交感神経の活性化によるＢＡＴでの熱産生は、脱共役タンパク質１（ミトコンドリアでのＡＴＰ産生から酸化を脱共役させることによって熱産生及びエネルギー消費を促進する。）を介して行われ、ＷＡＴでの脂肪分解は、交感神経の興奮を介したトリアシルグリセロールの加水分解により誘導される。
【００９２】
本発明者らはさらに、覚醒ラットにおけるＢＡＴ−Ｔ及び血漿ＦＦＡレベルに対するラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の効果を調べ、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）がＢＡＴ−Ｔ及び血漿ＦＦＡレベルを上昇させることを示すデータを得ている（図４及び５）。すなわち、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は自律神経に作用し、熱発生及びＷＡＴの脂肪分解を亢進させるものと思われる。
【００９３】
本研究では、交感神経活動だけでなく副交感神経活動に対するラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の効果も分析した。ＨＶＮＡ（肝臓でのグリコーゲン合成を通じて血中グルコースレベルの調節に関与する。）が、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の摂取により抑制されることが見出されている（図２）。
【００９４】
本研究では、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）により交感神経の亢進及び副交感神経の抑制が引き起こされることが示されている。副交感神経の抑制は摂食阻害と関連があることが知られている（Ｓｈｅｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｌｅｔｔ ２００５；３８０（３）：２８９−９４）。本研究では、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）の長期摂取は摂食に影響を与えない（おそらく消化管の適応による。）ことが示されているが、ラクトバチルス・パラカゼイ（特にラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１）は、特に短期間使用される場合は摂食抑制剤として使用可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療又は予防するための組成物の調製のための、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）の使用。
【請求項２】
前記ラクトバチルス・パラカゼイがラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記組成物が、ヒト又は動物、特にペット、家畜及び／又はコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）の治療を目的としている、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記組成物が、医薬品、食品、ペットフード製品、食品添加物又は機能性食品である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記組成物が幼児、子供及び／又は成人を対象とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、少なくとも１種の他の食品用微生物（例えば、細菌及び／又は酵母）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記食品用微生物がプロバイオティクスである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記プレバイオティクスは、オリゴ糖（フルクトース、ガラクトース、マンノース、大豆オリゴ糖及び／又はイヌリンを含有してもよい）、食物繊維又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記ラクトバチルス・パラカゼイの少なくとも一部は前記組成物中で生存している、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記ラクトバチルス・パラカゼイの少なくとも一部は前記組成物中で非複製性である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、一日量当たり１０２〜１０１２個のラクトバチルス・パラカゼイを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
体重減少及び／又は体重維持を支援するための、及び／又は特に短期投与については摂食抑制剤としての、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
特に、一定の摂食量が維持されている場合に、
脂肪分解を亢進し、及び／又は特に長期投与については体重増加を減少させるための、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記関連代謝異常が、糖尿病、高血圧、肝硬変、メタボリックシンドローム、心血管疾患及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１】
過体重、肥満及び／又は関連代謝異常を治療又は予防するための組成物の調製のための、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）の使用。
【請求項２】
前記ラクトバチルス・パラカゼイがラクトバチルス・パラカゼイＳＴ１１である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記組成物が、ヒト又は動物、特にペット、家畜及び／又はコンパニオンアニマル（例えば、イヌ又はネコ）の治療を目的としている、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記組成物が、医薬品、食品、ペットフード製品、食品添加物又は機能性食品である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記組成物が幼児、子供及び／又は成人を対象とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、少なくとも１種の他の食品用微生物（例えば、細菌及び／又は酵母）を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記食品用微生物がプロバイオティクスである、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、少なくとも１種のプレバイオティクスをさらに含有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記プレバイオティクスは、オリゴ糖（フルクトース、ガラクトース、マンノース、大豆オリゴ糖及び／又はイヌリンを含有してもよい）、食物繊維又はそれらの混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
前記ラクトバチルス・パラカゼイの少なくとも一部は前記組成物中で生存している、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記ラクトバチルス・パラカゼイの少なくとも一部は前記組成物中で非複製性である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記組成物が、一日量当たり１０２〜１０１２個のラクトバチルス・パラカゼイを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
体重減少及び／又は体重維持を支援するための、及び／又は特に短期投与については摂食抑制剤としての、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
特に、一定の摂食量が維持されている場合に、
脂肪分解を亢進し、及び／又は特に長期投与については体重増加を減少させるための、
請求項１〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
前記関連代謝異常が、糖尿病、高血圧、肝硬変、メタボリックシンドローム、心血管疾患及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２０１１−５２３４０７（Ｐ２０１１−５２３４０７Ａ）
【公表日】平成２３年８月１１日（２０１１．８．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０８９１７（Ｐ２０１１−５０８９１７）
【出願日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５５８２２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３８４４８
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年８月１１日（２０１１．８．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５５８２２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３８４４８
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
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