医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含むか、又は支持することのできる支持構造を備える医療デバイスであり、担体又は賦形剤は、１種又は複数種の治療剤又は治療物質を含むことができ、この担体は、その表面に被膜を含んでおり、この被膜は、例えば薬物などの治療物質を含んでいる。この発明において、使用に適した医療デバイスの支持構造として、それだけに限らないが、冠血管ステント、末梢ステント、カテーテル、動静脈移植片、バイパス移植片及び脈管構造において用いられる薬物送達バルーンが挙げられる。本発明で使用するのに適した薬物として、それだけに限らないが。この薬物は、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗血栓剤、細胞毒性薬、サイトカイン又はケモカイン結合を阻害する薬剤、細胞脱分化阻害剤、抗リパエデミック剤、基質メタロプロテイナーゼ阻害剤、細胞増殖抑制薬、又はこれらの薬物の組合せから選択されるものを含めた、別の薬物と組み合わせて用いることができる。

【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［０１］［技術分野］
［０２］本発明は、免疫調節活性及び／又は抗再狭窄活性を有する新規な化学化合物、並びにこの新規な化合物の調製に有用な合成中間体に関し、特にマクロライド系免疫調節薬に関する。より詳細には、本発明は、ラパマイシンの半合成類似体、それらの調製手段、そのような化合物を含有する医薬組成物、及びこの医薬組成物を用いる治療方法に関する。
【０００２】
［０３］［発明の背景］
［０４］化合物シクロスポリン（シクロスポリンＡ）は、臓器移植及び免疫調節の分野でのその導入以来、広く用いられ、移植処置に対する成功率の著しい増加をもたらしてきた。最近、強力な免疫調節活性を有するいくつかの種類の大環状化合物が発見されてきた。Ｏｋｕｈａｒａらは、１９８６年６月１１日に公表された、欧州特許出願第１８４１６２号明細書において、免疫抑制剤ＦＫ−５０６、すなわちＳ．ツクバエンシス（ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）の系統から単離された、２３員環大環状ラクトンを含めた、ストレプトマイセス属から単離された多数の大環状化合物を開示している。
【０００３】
［０５］Ｃ−２１でのそれらのアルキル置換基において、ＦＫ−５０６と異なるＦＲ−９００５２０及びＦＲ−９００５２３などの他の関連した天然産物は、Ｓ．ハイグロスコピカスヤクシムナエンシス（ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ ｙａｋｕｓｈｉｍｎａｅｎｓｉｓ）から単離されてきた。Ｓ．ツクバエンシスから産生される、別の類似体、ＦＲ−９００５２５は、ピペコリン酸部分のプロリン基への置換において、ＦＫ−５０６と異なる。腎毒性などの、シクロスポリン及びＦＫ−５０６に関係する不満足な副作用は、局所的に有効であるが、全身的には無効である免疫抑制剤を含めた、改善された効力及び安全性を有する免疫抑制化合物の探索の継続をまねいている（米国特許第５４５７１１１号明細書）。
【０００４】
［０６］ラパマイシンは、ストレプトマイセスハイグロスコピカスによって産生される、大環状トリエン抗生物質であり、これは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方において、特にカンジダアルビカンスに対して抗真菌活性を有することが判明した（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７５、２８、７２１；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７５、２８、７２７；Ｈ．Ａ．Ｂａｋｅｒら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７８、３１、５３９；米国特許第３９２９９９２号明細書；及び米国特許第３９９３７４９号明細書）。
【０００５】
【化１】

【０００６】
［０７］単独の（米国特許第４８８５１７１号明細書）又はピシバニールと組み合わせた（米国特許第４４０１６５３号明細書）ラパマイシンは、抗腫瘍活性を有することが示されてきた。１９７７年に、ラパマイシンはまた、多発性硬化症のモデルである実験的なアレルギー性脳脊髄炎モデル、関節リウマチのモデルであるアジュバント関節炎モデルにおいて、免疫抑制剤として有効であることが示され、ＩｇＥ様抗体の形成を有効に阻害することが示された（Ｒ．Ｍａｒｔｅｌら、Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９７７、５５、４８）。
【０００７】
［０８］ラパマイシンの免疫抑制作用はまた、組織不適合性のげっ歯類において、臓器移植片の生残時間を延長する能力を有するとして、ＦＡＳＥＢ、１９８９、３、３４１１に開示された（Ｒ．Ｍｏｒｒｉｓ、Ｍｅｄ．Ｓｃｉ、Ｒｅｓ．、１９８９、１７、６０９）。ラパマイシンの、Ｔ細胞活性化を阻害する能力は、Ｍ．Ｓｔｒａｕｃｈによって開示された（ＦＡＳＥＢ、１９８９、３、３４１１）。ラパマイシンのこれらの及び他の生物学的作用は、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１９９２、６、３９〜８７において、以前に概説された。
【０００８】
［０９］ラパマイシンは、動物モデルにおける新生内膜増殖を低減し、ヒトにおける再狭窄の割合を低減することが示されてきた。ラパマイシンが、関節リウマチの治療用薬剤としてのその選択を支持した特性である、抗炎症作用も示すということを示す証拠が公表されてきた。細胞増殖及び炎症はともに、バルーン血管形成及びステント配置後の再狭窄病変の形成における原因因子であると考えられるので、ラパマイシン及びその類似体が、再狭窄の予防のために提案されてきた。
【０００９】
［０１０］ラパマイシンのモノエステル誘導体及びジエステル誘導体（位置３１及び４２でのエステル化）は、抗真菌剤として（米国特許第４３１６８８５号明細書）、及びラパマイシンの水溶性プロドラッグとして（米国特許第４６５０８０３号明細書）有用であることが示されてきた。
【００１０】
［０１１］ラパマイシン及び３０−デメトキシラパマイシンの発酵及び精製は、文献に記載されてきた（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）、１９７５、２８（１０）、７２１；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）、１９７５、２８（１０）、７２７；１９８３、３６（４）、３５１；Ｎ．Ｌ．Ｐａｉｖａら、Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、１９９１、５４（１）、１６７〜１７７）。
【００１１】
［０１２］多数のラパマイシンの化学修飾が試みられてきた。これらには、ラパマイシンのモノ−及びジエステル誘導体（国際公開特許第９２／０５１７９号パンフレット）、ラパマイシンの２７−オキシム（ＥＰ０４６７６０６）；ラパマイシンの４２−オキソ類似体（米国特許第５０２３２６２号明細書）；二環式ラパマイシン（米国特許第５１２０７２５号明細書）；ラパマイシン二量体（米国特許第５１２０７２７号明細書）；ラパマイシンのシリルエーテル（米国特許第５１２０８４２号明細書）；並びにアリールスルホネート及びスルファメート（米国特許第５１７７２０３号明細書）の調製が含まれる。ラパマイシンは、その自然発生的鏡像異性形態として最近合成された（Ｋ．Ｃ．Ｎｉｃｏｌａｏｕら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９３、１１５、４４１９〜４４２０；Ｄ．Ｒｏｍｏら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９３、１１５、７９０６〜７９０７；Ｃ．Ｈａｙｗａｒｄ、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９３、１１５、９３４５〜９３４６。
【００１２】
［０１３］ＦＫ−５０６のように、ラパマイシンは、ＦＫＢＰ−１２に結合することが知られていた（Ｓｉｅｋｉｅｒｋａ，Ｊ．Ｊ．；Ｈｕｎｇ，Ｓ．Ｈ．Ｙ．；Ｐｏｅ，Ｍ．；Ｌｉｎ，Ｃ．Ｓ．；Ｓｉｇａｌ，Ｎ．Ｈ．Ｎａｔｕｒｅ、１９８９、３４１、７５５〜７５７；Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｍ．Ｗ．；Ｇａｌａｔ，Ａ．；Ｕｅｈｌｉｎｇ，Ｄ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９８９、３４１、７５８〜７６０；Ｄｕｍｏｎｔ，Ｆ．Ｊ．；Ｍｅｌｉｎｏ，Ｍ．Ｒ．；Ｓｔａｒｕｃｈ，Ｍ．Ｊ．；Ｋｏｐｒａｋ，Ｓ．Ｌ．；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｐ．Ａ．；Ｓｉｇａｌ，Ｎ．Ｈ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０、１４４、１４１８〜１４２４；Ｂｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．；Ｂｕｒａｋｏｆｆ，Ｓ．Ｊ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１、２１、４３９〜４４５；Ｆｒｅｔｚ，Ｈ．；Ａｌｂｅｒｓ，Ｍ．Ｗ．；Ｇａｌａｔ，Ａ．；Ｓｔａｎｄａｅｒｔ，Ｒ．Ｆ．；Ｌａｎｅ，Ｗ．Ｓ．；Ｂｕｒａｋｏｆｆ，Ｓ．Ｊ．；Ｂｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ，Ｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９１、１１３、１４０９〜１４１１）。ラパマイシン／ＦＫＢＰ−１２複合体は、ＦＫ−５０６／ＦＫＢＰ−１２複合体が阻害するタンパク質である、カルシニューリンと異なる、さらに別のタンパク質のｍ−ＴＯＲに結合することも示されてきた（Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｊ．；Ａｌｂｅｒｓ，Ｍ．Ｗ．；Ｓｈｉｎ，Ｔ．Ｂ．；Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ｋ．；Ｋｅｉｔｈ，Ｃ．Ｔ．；Ｌａｎｅ，Ｗ．Ｓ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ １９９４、３６９、７５６〜７５８；Ｓａｂａｔｉｎｉ，Ｄ．Ｍ．；Ｅｒｄｊｕｍｅｎｔ−Ｂｒｏｍａｇｅ，Ｈ．；Ｌｕｉ，Ｍ．；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．；Ｓｎｙｄｅｒ，Ｓ．Ｈ．Ｃｅｌｌ、１９９４、７８、３５〜４３）。
【００１３】
［０１４］他の薬物が、望まれない細胞増殖に対抗するために用いられてきた。これらの例は、パクリタキセルである。タイヘイヨウイチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｙｅｗ）、セイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）から抽出された複合アルカロイドであるパクリタキセルは、細胞分裂に決定的である細胞骨格の成分（チューブリン、微小管の構成要素）を安定化し、したがって細胞増殖を防止している。
【００１４】
［０１５］経皮的経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）が、１９７０年代にＡｎｄｒｅａｓ Ｇｒｕｎｔｚｉｇによって開発された。１９７５年９月２４日に、最初のイヌの冠血管拡張が行われ、翌年、ＰＴＣＡの使用を示す研究が、米国心臓協会の年次総会で発表された。その後間もなく、最初のヒト患者が、スイスのチューリッヒで研究され、その後にサンフランシスコ及びニューヨークにおいて最初のアメリカのヒト患者が続いた。この処置は、閉塞性冠動脈疾患を有する患者の治療に関して、介入心臓病学（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ）の慣習を変えたが、この処置により、長期的な解決策は提供されなかった。患者は、血管閉塞に関係する胸痛の一時的な寛解しか受けず、反復処置が多くの場合必要であった。再狭窄病変の存在は、新処置の有用性を著しく制限することが確認された。１９８０年代後半に、血管形成術後の血管開通性を維持するために、ステントが導入された。ステント術は、現在行われる血管形成術の９０％に関与している。ステントの導入前は、再狭窄の割合は、バルーン血管形成術で治療された患者の３０〜５０％の範囲であった。ステント術の導入は、１５３０％の再狭窄の割合を伴って、転帰のさらなる改善をもたらした。ステント術の後、再狭窄病変は、主に新生内膜過形成によって引き起こされ、これは、時間経過及び病理組織学的外観の両方において動脈硬化性疾患と明確に異なる。再狭窄は、損傷した冠動脈壁の治癒プロセスであり、新生内膜組織が、血管腔に大きく作用している。血管近接照射療法は、ステント内再狭窄病変に対して効果的であると思われる。しかし、放射線照射は、実用性及び費用の制限、並びに安全性及び耐久性について長引いている問題を有する。
【００１５】
［０１６］薬物溶出ステントを作製し、評価するために介入デバイス（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｄｅｖｉｃｅ）コミュニティーによって取り組まれた大きな努力は、少なくとも５０％再狭窄を低減することによって本来の目的を満たした。しかし、改善された局所薬物送達デバイス、例えば、再狭窄を予防し、治療するための、安全で効果的な手段を提供する、薬物含浸ポリマー被覆ステントの必要性が依然として残っている。例えば、２つの市販の単一薬物溶出ステントは、再狭窄を低減し、患者の転帰を改善するが、再狭窄を解消しないか、又は有害な安全性の問題がない。患者、及び特に糖尿病を含めたリスクのある患者、小血管を有する患者及び急性冠症候群を有する患者は、改善された性能を有するステントを含めた局所薬物送達デバイスから恩恵を得ることができるだろう。
【００１６】
［０１７］薬物の組合せを含む薬物送達デバイスは、知られている。しかし、当技術分野が、局所的に投与される、例えばステントから溶出される、特に有効な薬物の組合せを教示しているように思われない。例えば、以下にさらに考察されるように、Ｆａｌｏｔｉｃｏは、ラパマイシン／デキサメタゾンの組合せを含むＥＶＡ−ＰＢＭＡポリマー被覆ステントは、ラパマイシン単独、又はデキサメタゾン単独を送達するステントよりも、新生内膜面積、面積狭窄率、及び炎症スコアを低減することにおいて「極めて効果が弱かった」ことを教示している。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】サルに投薬されたテトラゾール含有ラパマイシン類似体の血中濃度±標準誤差（ｎ＝３）を示す。
【図２】本発明での使用に適したステントを示す、立面側面図（ｓｉｄｅ ｖｉｅｗ ｉｎ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ）である。
【図３Ａ】ポリマーのみで被覆されたステントが配置された血管セグメントの断面図である。
【図３Ｂ】ポリマーと薬物で被覆されたステントが配置された血管セグメントの断面図である。
【図４】ヒトにおけるゾタロリムスの単回段階的増加静脈内投与に対する、線形目盛での平均血中濃度−時間のプロットを示す。
【図５】ヒトにおけるゾタロリムスの単回段階的増加静脈内投与後の、対数−線形目盛での平均血中濃度−時間のプロットを示す。
【図６】ヒトにおける単回段階的増加静脈内投与後の、ゾタロリムスのＣ_ｍａｘ及びＡＵＣパラメータの用量比例関係を示す。
【図７】ヒトにおける複数回静脈内投与後の、ゾタロリムスの平均血中濃度−時間のプロットを示す。
【図８】第１日（図８ａ）、第１４日（図８ｂ）、及び第１〜１４日（図８ｃ）の、２００、４００及び８００μｇＱＤ（毎日）投与群についての、平均ゾタロリムス血中濃度−時間特性を示す。
【図９】８００μｇＱＤ投与群についての、第１日から第１４日にわたる、観察されたゾタロリムス濃度−時間のデータを示す。
【図１０Ａ】ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒトの単球による、ＬＰＳに誘導されるＭＣＰ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α産生に対するゾタロリムス、デキサメタゾン及びパクリタキセルの効果を示すグラフである。
【図１０Ｂ】ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒトの単球による、ＬＰＳに誘導されるＭＣＰ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α産生に対するゾタロリムス、デキサメタゾン及びパクリタキセルの効果を示すグラフである。
【図１１】ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒトの単球による、ＬＰＳに誘導されるＭＣＰ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦ−α産生に対するゾタロリムス、デキサメタゾン及びパクリタキセルの効果を示すグラフである。
【図１２】タクロリムスの存在下でのゾタロリムスの抗増殖活性の減弱を示すグラフであり、ｉｎ ｖｉｔｒｏで平滑筋細胞において、タクロリムスが、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断することを示す。
【図１３Ａ】ヒト冠動脈平滑筋細胞及び内皮細胞における、ゾタロリムス単独、デキサメタゾン単独、及びゾタロリムス／デキサメタゾンの組合せの抗増殖活性のグラフである。
【図１３Ｂ】ヒト冠動脈平滑筋細胞及び内皮細胞における、ゾタロリムス単独、デキサメタゾン単独、及びゾタロリムス／デキサメタゾンの組合せの抗増殖活性のグラフである。
【図１４】ヒト冠動脈平滑筋細胞における、ゾタロリムス／デキサメタゾンの組合せの抗増殖活性のアイソボログラムを示す。
【図１５】ヒト冠動脈平滑筋細胞における、いくつかのゾタロリムス／デキサメタゾンの組合せの抗増殖活性の併用指数活性のグラフである。
【図１６】ゾタロリムス又はデキサメタゾンを添加したステントからの加速された溶出速度のグラフである。
【図１７】ゾタロリムス又はデキサメタゾンを添加したステントからの加速された溶出速度のグラフである。
【図１８】単独及びデキサメタゾンの存在下でのゾタロリムスの溶出速度を示すグラフである。
【図１９】単一薬物溶出ステント及び対照ステントに対する、ゾタロリムス／デキサメタゾン溶出ステントの植込み後２８日の、ブタにおける新生内膜面積を示す棒グラフである。
【図２０】単一薬物溶出ステント及び対照ステントに対する、ゾタロリムス／デキサメタゾン溶出ステントの植込み後２８日の、ブタにおける新生内膜厚を示す棒グラフである。
【図２１】単一薬物溶出ステント及び対照ステントに対する、ゾタロリムス／デキサメタゾン溶出ステントの植込み後２８日の、ブタにおける面積狭窄率を示す棒グラフである。
【図２２】単一薬物溶出ステント及び対照ステントに対する、ゾタロリムス／デキサメタゾン溶出ステントの植込み後の、２頭のブタの研究からの新生内膜面積測定値（３０％過剰拡張）を比較している棒グラフである。
【図２３】単一薬物溶出ステント及び対照ステントに対する、ゾタロリムス／デキサメタゾン溶出ステントの植込み後の、２頭のブタの研究からの面積狭窄率（３０％過剰拡張）を比較している棒グラフである。
【図２４】ゾタロリムス／デキサメタゾン溶出ステントの植込み後の、２頭のブタの研究における、平均応答を示す顕微鏡写真である。図２４ａ〜ｅは、ブタの研究からの代表的な血管の断面の顕微鏡写真を示し、各群についての平均新生内膜面積を表している。図２４ａ、ＴｒｉＭａｘｘ（商標）、ステント；２４ｂ、ＺｏＭａｘｘ（商標）、ステント；２４ｃ、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）ステント；２４ｄ、Ｔａｘｕｓ（登録商標）ステント；２４ｅ、ゾタロリムス：パクリタキセル、１０μｇ／ｍｍ：１μｇ／ｍｍステント。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
［０４２］［発明の概要］
［０４３］本発明の実施形態の一態様では、構造式：
【００１９】
【化２】

【００２０】
［０４４］によって表される化合物、又は医薬として許容可能なその塩又はプロドラッグが開示される。
【００２１】
［０４５］本発明の別の態様では、本発明は、治療量の第１の薬物及び治療量の第２の薬物を有する組成物を含む、血管腔における新生内膜過形成の治療又は阻害用の薬物の制御放出送達を提供するためのシステムに関し、第１の薬物は、少なくとも１種のオリムス（ｏｌｉｍｕｓ）薬物並びにそれらのその塩、エステル、プロドラッグ及びそれらの誘導体を含み、この第１の薬物は、治療上有効であり、治療量の第２の薬物の存在下で、第２の薬物の活性を補完し、この第２の薬物は、治療上有効であり、治療量の第１の薬物の存在下で、第１の薬物の活性を補完する。
【００２２】
［０４６］さらに別の態様では、本発明は、少なくとも１種のオリムス薬物及び少なくとも１種のグルココルチコステリオド（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｉｏｄ）を含む、局所的に投与される、新生内膜過形成を低減するための医薬組成物に関し、オリムス薬物（複数も）とグルココルチコステリオド（複数も）は、約１０：１から約１：１０の間の比である。
【００２３】
［０４７］一態様では、本発明の実施形態は、少なくとも１種の医薬として許容可能な担体又は賦形剤、並びにゾタロリムス及びデキサメタゾン又はそれらの誘導体、プロドラッグ、若しくは塩を有する治療組成物を含む支持構造を有する薬物送達システムに関し、対照システムと比較したとき、このシステムが対象の血管の管腔中に植え込まれる場合、新生内膜過形成の形成が低減される。この薬物送達システムは、ステントを含むことができ、第３の若しくはより多くの薬物、又は生物製剤を含めた他の治療物質を含むことができる。他の治療物質として、それだけに限らないが、抗増殖剤、抗血小板剤、ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤、抗血栓剤、及び血栓溶解剤が挙げられる。対象は、それだけに限らないが、ヒト及びブタを含めた哺乳動物とすることができる。
【００２４】
［０４８］本発明の実施形態の別の目的は、発酵によって得られる出発材料からそのような化合物を調製するための合成プロセス、並びにそのような合成プロセスに有用な化学中間体を提供することである。
【００２５】
［０４９］本発明の実施形態のさらなる目的は、活性成分として、上記化合物の少なくとも１種を含有する医薬組成物を提供することである。
【００２６】
［０５０］本発明の実施形態のさらに別の目的は、再狭窄、移植後の組織拒絶反応、免疫機能不全及び自己免疫機能不全、真菌増殖、及び癌を含めた様々な疾患状態を治療する方法を提供することである。
【００２７】
［０５１］本発明の実施形態の別の態様では、その表面の少なくとも一部に被膜を有する支持構造を備える医療デバイスが提供され、この被膜は、例えば薬物などの治療物質を含んでいる。本発明で用いるのに適した医療デバイス用の支持構造として、それだけに限らないが、冠血管ステント、末梢ステント、カテーテル、動静脈移植片、バイパス移植片、及び血管形成バルーンを含めた、脈管構造に用いられる薬物送達バルーンが挙げられる。本発明で用いるのに適した薬物として、それだけに限らないが、
【００２８】
【化３】

【００２９】
［０５２］又は医薬として許容可能なその塩若しくはプロドラッグが挙げられ、これは、
【００３０】
【化４】

【００３１】
［０５３］又は医薬として許容可能なその塩若しくはプロドラッグ（以下、代わりにゾタロリムス並びにＡ−１７９５７８と称される）、及び
【００３２】
【化５】

【００３３】
［０５４］又は医薬として許容可能なその塩若しくはプロドラッグ；
【００３４】
【化６】

【００３５】
［０５５］又は医薬として許容可能なその塩若しくはプロドラッグ（以下、代わりにＡ−９４５０７と称される）を含む。
【００３６】
［０５６］さらに別の態様では、本発明の実施形態は、ゾタロリムス及びデキサメタゾンを含む薬物組合せの安全で有効な局所送達に関する。この薬物組合せは、現在の臨床実践で見出されるもの（Ｔａｘｕｓ（登録商標）及びＣｙｐｈｅｒ（登録商標））を含めた、単一薬物溶出ステントに対して、安全性及び効力における改善を提供する。
【００３７】
［０５７］別の態様では、本発明の実施形態は、薬物組合せを送達する局所送達デバイスに関係する、新生内膜面積、新生内膜厚及び面積狭窄率を安全に、及び有効にさらに低減するための方法及びデバイスを提供する。特に、ゾタロリムス／デキサメタゾンの組合せは、いずれの薬物の活性にも悪影響を及ぼすとは観察されていない。逆に、この組合せは、Ｔａｘｕｓ（登録商標）やＣｙｐｈｅｒ（登録商標）などの、単一薬物溶出ステントに対して、安全性及び効力における改善を示してきた。
【００３８】
［０５８］本発明の実施形態に用いるのに適した被覆剤として、それだけに限らないが、治療剤が有効に分散され得る、任意のポリマー材料を含むポリマー被覆剤が挙げられる。被覆剤は、親水性、疎水性、生分解性、又は非生分解性とすることができる。この医療デバイスは、脈管構造における再狭窄を有効に低減する、適切な速度で薬物を放出する。ゾタロリムスを含む薬物の、直接の冠血管送達は、約１５％未満のレベルまで再狭窄の割合を低減することが予期されている。
【００３９】
［０５９］［発明の実施形態の詳細な説明］
［０６０］用語の定義
［０６１］用語「付随する」は、本明細書で用いられる場合、それだけに限らないが、混合された、混合されていない、微粒子、被覆剤と混合された、支持構造物と混合された形態を含めた、多くの形態であり得る化合物を指す。当業者は、薬物、被膜／薬物、及び薬物／被膜／支持構造物の間の相互作用の変化を理解するだろう。
【００４０】
［０６２］用語「補完的な」は、本明細書で用いられる場合、組合せ物における少なくとも２種の薬物によって示される挙動であって、それらのそれぞれの医薬活性が、ある場合には相加的な活性を有することによって、ある場合には別々であるが、哺乳動物において、全体的な所望の薬理学的効果を助長する有利な活性を有することによって、組合せ物から恩恵を得る場合、及び組合せ薬物が、互いの生物活性を積極的に低減しない場合の挙動を指す。
【００４１】
［０６３］用語「プロドラッグ」は、本明細書で用いられる場合、ｉｎ ｖｉｖｏで、例えば、血中での加水分解によって、上記式の親化合物に速やかに変換される化合物を指す。詳細な考察が、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ ａｓ Ｎｏｖｅｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓの１４巻によって、及びＥｄｗａｒｄ Ｂ．Ｒｏｃｈｅ、編集、「Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ」、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、１９８７年に提供されており、両方とも参照により、本明細書に組み込まれている。
【００４２】
［０６４］用語「医薬として許容可能なプロドラッグ」は、本明細書で用いられる場合、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、及びアレルギー応答を伴うことなく、ヒト及び下等哺乳動物の組織に接触させて用いるのに適しており、妥当な利益／リスク比と見合っており、それらの使用目的に有効である、本発明の実施形態における化合物のプロドラッグを指す。他の実施形態は、Ｃ−３１ヒドロキシル基で誘導体化される、医薬として許容可能なプロドラッグを含む。
【００４３】
【化７】


Ｒ＝Ｒ^１Ｃ（Ｏ）Ｒ^２Ｒ^３；Ｒ^１Ｃ（Ｓ）Ｒ^２Ｒ^３
ここで、Ｒ^１＝Ｏ、Ｓ
Ｒ^２＝なし、０、Ｎ、Ｓ、様々なアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環、アリール
Ｒ^３＝なし、様々なアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環、アリール
アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、複素環基、アリール基は、置換されていても置換されていなくてもよい。
【００４４】
［０６５］用語「プロドラッグエステル」は、本明細書で用いられる場合、生理的条件下で加水分解される、任意のいくつかのエステル形成基を指す。プロドラッグエステル基の例として、アセチル、プロピオニル（ｐｒｏｐｉｏｎｙｌ）、ピバロイル、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、フタリジル、メトキシメチル、インダニルなど、並びに自然発生又は非自然発生アミノ酸の、本発明の実施形態の化合物のＣ−３１ヒドロキシル基へのカップリングから誘導されるエステル基が挙げられる。
【００４５】
［０６６］用語「支持構造」は、医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含むか、又は支持することのできる骨組みを意味し、この担体又は賦形剤は、１種又は複数種の治療剤又は治療物質、例えば、１種又は複数種の薬物及び／又は他の化合物を含むことができる。支持構造は、典型的には、金属又はポリマー材料で形成される。治療剤又は治療物質を含むことのできる、生分解性ポリマーを含めたポリマー材料で形成される適当な支持構造として、制限なく、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第６４１３２７２号明細書及び第５５２７３３７号明細書に開示されているものが挙げられる。
【００４６】
［０６７］「対象」は、それだけに限らないが、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、雌ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ラット、マウス、モルモット、及びヒトを含めた哺乳動物を含む脊椎動物を意味する。
【００４７】
［０６８］「治療物質」は、適切な用量で適切に対象に投与される場合、その対象に有益な効果を有する任意の物質を意味する。
【００４８】
［０６９］実施形態
［０７０］本発明の一実施形態では、式
【００４９】
【化８】


の化合物である。
【００５０】
［０７１］本発明の別の実施形態では、式
【００５１】
【化９】


の化合物である。
【００５２】
［０７２］治療方法
［０７３］それだけに限らないが、実施例で特定されるものを含めて、本発明の化合物は、哺乳動物（ヒトを含めて）において免疫調節活性を有する。免疫抑制剤として、本発明の実施形態の化合物は、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｕｍ ｔｅｎｕｅ）、肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸（ｓｍａｌｌ−ｂｏｗｅｌ）、膵島細胞などを含めた臓器又は組織の移植による抵抗性を含めた免疫介在性疾患；骨髄移植によってもたらされる移植片対宿主疾患；関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎などを含めた自己免疫疾患の治療及び予防に有用である。さらなる使用には、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎及びさらに、湿疹性皮膚炎、セボロエイス（ｓｅｂｏｒｒｈｏｅｉｓ）皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、じん麻疹、血管性浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、紅斑性狼瘡、アクネ及び円形脱毛症を含めた炎症性及び過剰増殖性皮膚疾患及び免疫学的介在性疾病の皮膚発現；角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関係するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー、角膜白斑、及び眼天疱瘡を含めた様々な眼疾患（自己免疫性又は別の）の治療及び予防が含まれる。さらに、喘息（例えば、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息及び塵埃喘息）、特に慢性又は難治性喘息（例えば、遅発型喘息及び気道応答性亢進）、気管支炎、アレルギー性鼻炎などを含めた可逆性閉鎖性気道疾患は、本発明の化合物によって標的にされている。胃潰瘍を含めた粘膜及び血管の炎症、虚血性疾患及び血栓症によって起こる血管損傷。さらに、特に生物又は機械介在性血管傷害後の、内膜平滑筋細胞過形成、再狭窄及び血管閉塞を含めた過剰増殖性血管疾患は、本発明の化合物によって治療又は予防することができるだろう。
【００５３】
［０７４］本明細書に記載される化合物又は薬物は、ポリマー化合物で被覆されたステントに施すことができる。ステントのポリマー被膜中への化合物又は薬物の組込みは、ポリマー被覆ステントを、化合物又は薬物を含む溶液中に十分な時間（例えば、５分など）浸漬し、次いで例えば、十分な時間（例えば、３０分など）の空気乾燥などによって被覆されたステントを乾燥させることによって行うことができる。噴霧を含めた、治療物質を施す他の方法も用いることができる。次いで、化合物又は薬物を含むポリマー被覆ステントは、バルーンカテーテルからの配置によって、又は自己展開ステントによって冠血管に送達することができる。ステントに加えて、本発明の薬物を脈管構造に導入するために用いることのできる他のデバイスとして、それだけに限らないが、移植片、カテーテル、及びバルーンが挙げられる。さらに、本発明の薬物の代わりに用いることのできる他の化合物又は薬物には、それだけに限らないが、Ａ−９４５０７及びＳＤＺ ＲＡＤ（別名エベロリムス）が含まれる。
【００５４】
［０７５］ポリマー被覆ステントに用いるための、本明細書に記載された化合物は、他の薬剤と組み合わせて用いることができる。本発明の化合物を組み合わせて、再狭窄を予防するのに最も有効であると思われる薬剤は、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗血栓剤、及び血栓溶解剤の部類に分類することができる。これらの分類は、さらに細分することができる。例えば、抗増殖剤は、抗有糸分裂性とすることができる。抗有糸分裂剤は、細胞分裂を阻害するか、又は細胞分裂に影響を及ぼし、それによって細胞分裂に通常関与するプロセスが起こらない。抗有糸分裂剤の一サブクラスには、ビンカアルカロイドが含まれる。ビンカアルカロイドの代表的な例として、それだけに限らないが、ビンクリスチン、パクリタキセル、エトポシド、ノコダゾール、インジルビン、並びに例えばダウノルビシン、ダウノマイシン、及びプリカマイシンなどのアントラサイクリン誘導体が挙げられる。抗有糸分裂剤の他のサブクラスとして、例えば、タウロムスチン、ボフムスチン、及びホテムスチンなどの抗有糸分裂性アルキル化剤、並びに例えば、メトトレキセート、フルオロウラシル、５−ブロモデオキシウリジン、６−アザシチジン、及びシタラビンなどの抗有糸分裂性代謝産物が挙げられる。抗有糸分裂性アルキル化剤は、共有結合的にＤＮＡ、ＲＮＡ、又はタンパク質を修飾することによって細胞分裂に影響を及ぼし、それによってＤＮＡ複製、ＲＮＡ転写、ＲＮＡ翻訳、タンパク質合成、又は前述の組合せを阻害する。
【００５５】
［０７６］抗有糸分裂剤の例には、それだけに限らないが、パクリタキセルが含まれる。本明細書で用いられる場合、パクリタキセルは、アルカロイド自体、その自然発生形態及び誘導体、並びにその合成及び半合成形態を含む。
【００５６】
［０７７］抗血小板剤は、（１）表面、典型的には血栓形成表面への血小板の接着を阻害する、（２）血小板の凝集を阻害する、（３）血小板の活性化を阻害する、又は（４）前述の組合せによって作用する、治療構成要素である。血小板の活性化は、それによって血小板が、静止性の休止状態から、血小板が血栓形成表面に接触することによって誘発される多数の形態変化を起こす状態に変換されるプロセスである。これらの変化には、偽足の形成、膜受容体への結合、並びに例えば、ＡＤＰや血小板因子４などの小分子及びタンパク質の分泌を伴う、血小板の形状の変化が含まれる。血小板の接着の阻害剤として作用する抗血小板剤として、それだけに限らないが、エプチフィバチド、チロフィバン、ｇｐＩＩｂＩＩＩａ又はαｖβ３への結合を阻害するＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）ベースのペプチド、ｇｐＩＩａＩＩＩｂ又はαｖβ３への結合を遮断する抗体、抗Ｐ−セレクチン抗体、抗Ｅ−セレクチン抗体、Ｐ−セレクチン又はＥ−セレクチンの、それらのそれぞれのリガンドへの結合を遮断する化合物、サラチン（ｓａｒａｔｉｎ）、及び抗フォンウィルブランド因子抗体が挙げられる。ＡＤＰ介在性血小板凝集を阻害する薬剤として、それだけに限らないが、ジサグレジン（ｄｉｓａｇｒｅｇｉｎ）及びシロスタゾールが挙げられる。
【００５７】
［０７８］抗炎症剤も用いることができる。これらの例として、それだけに限らないが、プレドニゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、エストラジオール、トリアムシノロン、モメタゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、並びに例えば、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、アダリムマブ及びスリンダクなどの非ステロイド系抗炎症剤が挙げられる。アラキドン酸代謝産物プロスタサイクリン又はプロスタサイクリン類似体は、血管作動性抗増殖剤の例である。これらの薬剤の他の例には、サイトカイン活性を遮断するか、又はサイトカイン若しくはケモカインの同族受容体への結合を阻害することによって、サイトカイン若しくはケモカインによって伝達される炎症促進性シグナルを阻害するものが含まれる。これらの薬剤の代表的な例として、それだけに限らないが、抗ＩＬ１、抗１Ｌ２、抗ＩＬ３、抗ＩＬ４、抗ＩＬ８、抗ＩＬ１５、抗ＩＬ１８、抗ＭＣＰ１、抗ＣＣＲ２、抗ＧＭ−ＣＳＦ、及び抗ＴＮＦ抗体が挙げられる。他の実施形態は、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド（ｂｅｄｅｓｏｎｉｄｅ）、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾンを含めたグルココルチコステリオド、並びにそれらのその塩、エステル、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、第２の薬物を含んでいる。他の実施形態では、第２の薬物は、エストラジオールを含めたステロイドホルモン、並びにそれらの塩、エステル、プロドラッグ、及び誘導体又は任意の組合せである。
【００５８】
［０７９］本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の薬剤には、例えば、フェノフィブラート、アトルバスタチン、フルバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン及びシンバスタチンなどの抗リパエデミック（ａｎｔｉ−ｌｉｐａｅｄｅｍｉｃ）剤が含まれる。さらなる薬剤として、例えば、バチミスタット（ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ）などの基質メタロプロテイナーゼ阻害剤、並びに例えば、ダルセンタンなどのエンドセリン−Ａ受容体のアンタゴニスト、及びαｖβ３インテグリン受容体のアンタゴニストが挙げられる。
【００５９】
［０８０］抗血栓剤には、凝固経路の任意の段階で介在することのできる、化学及び生物構成要素が含まれる。具体的な構成要素の例には、それだけに限らないが、因子Ｘａの活性を阻害する小分子が含まれる。さらに、例えば、ヘパリン、ヘパラン硫酸、例えば、商標Ｃｌｉｖａｒｉｎ（登録商標）を有する化合物などの低分子量ヘパリン、例えば商標Ａｒｉｘｔｒａ（登録商標）を有する化合物などの合成オリゴ糖などの、ＦＸａ及びトロンビンの両方を、直接的に又は間接的に阻害することのできるヘパリノイド型薬剤（ｈｅｐａｒｉｎｏｉｄ−ｔｙｐｅ ａｇｅｎｔ）。例えば、メラガトラン、キシメラガトラン、アルガトロバン、イノガトラン及びトロンビンに対するＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇフィブリノーゲン基質の結合部位のペプチド模倣剤などの直接トロンビン阻害剤も含まれる。送達されることのできる抗血栓剤の別の分類は、例えば、抗因子ＶＩＩ／ＶＩＩａ抗体、ｒＮＡＰｃ２、及び組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）などの因子ＶＩＩ／ＶＩＩａ阻害剤である。
【００６０】
［０８１］血栓（血餅）を分解するのを助長する薬剤として定義することのできる血栓溶解剤も、補助剤として用いることができるが、これは血餅を溶解する作用が、血栓のフィブリン基質内に捕捉された血小板を分散させるのを助長するためである。血栓溶解剤の代表的な例として、それだけに限らないが、ウロキナーゼ又は組換えウロキナーゼ、プロウロキナーゼ又は組換えプロウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター又はその組換え型、及びストレプトキナーゼが挙げられる。
【００６１】
［０８２］本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の薬物は、例えば、ＴＧＦなどのアポトーシス誘発剤、及び１０−ヒドロキシカンプトテシン、イリノテカン、及びドキソルビシンを含めたトポイソメラーゼ阻害剤などの細胞毒性薬である。本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の分類の薬物は、細胞脱分化を阻害する薬物及び細胞増殖抑制薬である。
【００６２】
［０８３］本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の薬剤として、例えば、フェノフィブラートなどの抗リパエデミック剤、例えば、バチミスタットなどの基質メタロプロテイナーゼ阻害剤、例えば、ダルセンタンなどのエンドセリン−Ａ受容体のアンタゴニスト、及びαｖβ３インテグリン受容体のアンタゴニストが挙げられる。
【００６３】
［０８４］本発明の実施形態は、第３の薬物又は物質をさらに含む。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が利用される場合、それには、それだけに限らないが、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、グルココルチコステリオドである場合、それには、それだけに限らないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾン、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ステロイドホルモンである場合、それには、それだけに限らないが、エストラジオール並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。実施形態では、第２の薬物及び／又は第３の治療薬の場合、それは、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤とすることができる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗ＴＮＦα療法を利用する場合、それには、それだけに限らないが、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せが含まれる。前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗増殖剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン及びロムスチンを含めた、アルキル化剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン及びペントスタチンを含めた抗代謝剤、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含めたビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ブレオマイシン及びマイトマイシンを含めた抗生物質、シスプラチン、プロカルバジン、エトポシド及びテニポシドを含めた抗増殖剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗血小板剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、アブシキシマブ、エプチフィバチド及びチロフィバンを含めた糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤、ジピリダモールを含めたアデノシン再取り込み阻害剤、クロピドグレル及びチクロピジンを含めたＡＤＰ阻害剤、アセチルサリチル酸を含めたシクロオキシゲナーゼ阻害剤、並びにシロスタゾールを含めた、ホスホジエステラーゼ阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗炎症剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、モメタゾン及びエストラジオールを含めたステロイド、並びにアセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ピロキシカム、メファナム酸（ｍｅｆａｎａｍｉｃ ａｃｉｄ）を含めた非ステロイド系抗炎症剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＴＮＦに対する抗体を含めた、サイトカイン又はケモカインの受容体への結合を阻害することによって、炎症促進性シグナルを阻害するもの、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗血栓剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、未分画ヘパリン並びにクリバリン（ｃｌｉｖａｒｉｎ）、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン及びチンザパリンを含めた低分子量ヘパリンを含めたヘパリン、アルガトロバン、ヒルジン、ヒルログ、ヒルゲン（ｈｉｒｕｇｅｎ）を含めた直接トロンビン阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗高脂血症剤を利用する場合、それには、メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチンを含めたＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、フェノフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジルを含めたフィブリン酸誘導体、ニコチン酸、プロブコールを含めた脂質低下剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、血栓溶解剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼや、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクタプラーゼ（ｔｅｎｅｃｔａｐｌａｓｅ）を含めた組織プラスミノーゲンアクチベーター、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。
【００６４】
［０８５］ポリマー
［０８６］本発明に用いられる場合、被覆材は、そのポリマー材料中で治療剤、すなわち薬物が、実質的に溶解性であるか、有効に分散される、任意のポリマー材料を含むことができる。被膜の目的は、病変部位で送達されるための、治療剤用の制御放出ビヒクルとして、又は治療剤用のリザーバーとして機能を果すことである。被覆材はポリマーとすることができ、さらに親水性、疎水性、生分解性、又は非生分解性とすることができる。ポリマー被膜用の材料は、ポリカルボン酸、セルロースポリマー、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸ポリマー、ポリアミド、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、グリコサミノグリカン、多糖類、ポリエステル、ポリウレタン、シリコーン、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリアンヒドリド（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシブチレートバレレート、ポリアクリルアミド、ポリエーテル、並びに前述の混合物及びコポリマーからなる群から選択することができる。ポリウレタン分散系（ＢＡＹＨＹＤＲＯＬなど）及びアクリル酸ラテックス分散系を含めたポリマー分散系から調製される被覆材も、本発明の治療剤とともに用いることができる。
【００６５】
［０８７］本発明に用いることのできる生分解性ポリマーとして、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（ＤＬ−乳酸）、ポリカプロラクトン、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリグリコリド（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）、ポリ（ジアキサノン）（ｐｏｌｙ（ｄｉａｘａｎｏｎｅ））、ポリ（ヒドロキシバレレート）、ポリオルトエステルを含めたポリマー；ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリヒドロキシ（ブチレート−ｃｏ−バレレート）、ポリグリコリド−ｃｏ−トリメチレンカーボネートを含めたコポリマー；ポリアンヒドリド；ポリリン酸エステル；ポリリン酸エステル−ウレタン；ポリアミノ酸；ポリシアノアクリレート；フィブリン、フィブリノーゲン、セルロース、デンプン、コラーゲン及びヒアルロン酸を含めた生体分子；並びに前述の混合物が挙げられる。本発明に用いるのに適した生体安定性（ｂｉｏｓｔａｂｌｅ）材料として、ポリウレタン、シリコーン、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリカプロラクタム、ポリイミド、ポリ塩化ビニル、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルアルコール、アクリルポリマー及びコポリマー、ポリアクリロニトリル、ビニルモノマーのオレフィンとのポリスチレンコポリマー（スチレンアクリロニトリルコポリマー、エチレンメチルメタクリレートコポリマー、エチレン酢酸ビニルを含めて）、ポリエーテル、レーヨン、セルロース化合物（酢酸セルロース、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロースなどを含めて）、パリレン及びその誘導体を含めたポリマー；並びに前述の混合物及びコポリマーが挙げられる。
【００６６】
［０８８］いくつかの実施形態では、ポリマーとして、それだけに限らないが、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−プロピルメタクリレート）、ポリ（イソプロピルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ｓｅｃ−ブチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ブチルメタクリレート）、ポリ（２−エチルヘキシルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ヘキシルメタクリレート）、ポリ（シクロヘキシルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソボルニルメタクリレート）、及びポリ（トリメチルシクロヘキシルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（エチルアクリレート）、ポリ（ｎ−プロピルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（ｎ−ブチルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（ｓｅｃ−ブチルアクリレート）、ポリ（ペンチルアクリレート）、ポリ（ｎ−ヘキシルアクリレート）、ポリ（シクロヘキシルアクリレート）などのポリ（アクリレート）並びに任意のそれらの誘導体、類似体、同族体、同属種、塩、コポリマー及び組合せが挙げられる。
【００６７】
［０８９］いくつかの実施形態では、ポリマーとして、それだけに限らないが、ポリ（エステルウレタン）、ポリ（エーテルウレタン）、ポリ（ウレアウレタン）、ポリ（ウレタン）；シリコーン；フルオロシリコーン、ポリ（エステル）；ポリ（エチレン）；ポリ（プロピレン）；ポリ（オレフィン）；ポリ（イソブチレン）のコポリマー；スチレンとイソブチレンのトリブロックコポリマー；スチレンとエチレン／ブチレンのトリブロックコポリマー；スチレンとブタジエンのトリブロックコポリマー；エチレン−アルファオレフィンのコポリマー；（ポリ塩化ビニル）やポリ（フッ化ビニル）などのハロゲン化ビニルポリマー及びコポリマー；例えば、ポリ（塩化ビニリデン）及びポリ（フッ化ビニリデン）などのポリ（ハロゲン化ビニリデン）；ポリ（フッ化ビニリデン−ｃｏ−ヘキサフルオロプロピレン）、ポリ（テトラフルオロエチレン）；ポリ（テトラフルオロエチレン−ｃｏ−クロロトリフルオロエチレン）；例えば、ポリ（ビニルメチルエーテル）などのポリ（ビニルエーテル）；ポリ（アクリロニトリル）；ポリ（ビニルケトン）；ポリ（スチレン）などのポリ（ビニル芳香族化合物）；ポリ（酢酸ビニル）などのポリ（ビニルエステル）；メタクリル酸のコポリマーなどのビニルモノマーとオレフィンのコポリマー；アクリル酸のコポリマー；Ｎ−ビニルピロリドンのコポリマー；ポリ（ビニルアルコール）；ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアルコール）（ＥＶＡＬ）、ポリ（シアノアクリレート）；ポリ（無水マレイン酸）及び無水マレイン酸のコポリマー；アクリロニトリル−スチレンのコポリマー、ＡＢＳ樹脂、及びエチレン酢酸ビニルのコポリマー；並びにそれらの任意の誘導体、類似体、同族体、同属種、塩、コポリマー及び組合せが挙げられる。
【００６８】
［０９０］いくつかの実施形態では、ポリマーとして、それだけに限らないが、ナイロン６６及びポリ（カプロラクタム）などのポリ（アミド）；アルキド樹脂；ポリ（カーボネート）；ポリ（スルホン）；ポリ（オキシメチレン）；ポリ（イミド）；ポリ（エステルアミド）；例えば、ポリ（エチレングリコール）及びポリ（プロピレングリコール）などのポリ（アルキレングリコール）を含めたポリ（エーテル）；エポキシ樹脂；レーヨン；レーヨン−トリアセテート；例えば、フィブリン、フィブリノーゲン、デンプン、ポリ（アミノ酸）；ペプチド、タンパク質、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸（Ｄ−グルクロン酸又はＬ−イズロン酸とＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンのコポリマー）、コラーゲン、ヒアルロン酸、及びグリコサミノグリカンなどの生体分子；例えば、ポリ（Ｎ−アセチルグルコサミン）、キチン、キトサン、セルロース、酢酸セルロース、セルロースブチレート、酢酸セルロースブチレート、セロハン、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロース、セルロースエーテル、及びカルボキシメチルセルロースなどの他の多糖類；並びにそれらの任意の誘導体、類似体、同族体、同属種、塩、コポリマー及び組合せが挙げられる。
【００６９】
［０９１］本発明に用いることのできる別のポリマーは、ポリ（ＭＰＣ_ｗ：ＬＡＭ_ｘ：ＨＰＭＡ_ｙ：ＴＳＭＡ_ｚ）であり、ｗ、ｘ、ｙ、及びｚは、ポリマーを調製するための供給原料に用いられるモノマーのモル比を表し、ＭＰＣは、単位２−メタクリオイルオキシエチルホスホリルコリン（ｍｅｔｈａｃｒｙｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）を表し、ＬＭＡは、単位ラウリルメタクリレートを表し、ＨＰＭＡは、単位２−ヒドロキシプロピルメタクリレートを表し、ＴＳＭＡは、単位３−トリメトキシシリルプロピルメタクリレートを表す。薬物含浸ステントは、血栓及び／又は動脈硬化性プラークによって以前に閉塞された冠動脈の開存性を維持するために用いることができる。抗増殖剤の送達により、ステント内再狭窄の割合が低減される。本発明に用いることのできるポリマーには、ホスホリルコリン単位を含む双性イオンポリマーが含まれる。
【００７０】
［０９２］他の治療可能な状態として、それだけに限らないが、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎や、小児脂肪便症、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病及び潰瘍性大腸炎を含めた腸炎症／腸アレルギー；多発性筋炎、ギランバレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ）、多発性神経炎（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、単発神経炎及び神経根症を含めた神経疾患；甲状腺機能亢進症及びバセドー病を含めた内分泌疾患；赤芽球癆、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、再生不良性貧血（ｈｙｐｏｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血及び赤血球形成不全を含めた血液疾患；骨粗鬆症を含めた骨疾患；サルコイドーシス、肺線維症及び特発性間質性肺炎を含めた呼吸器疾患；皮膚筋炎、尋常性白斑（ｌｅｕｋｏｄｅｒｍａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）、尋常性魚鱗癬、光アレルギー性過敏症及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫を含めた皮膚疾患；動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発性動脈炎及び心筋症を含めた循環疾患；強皮症、ヴェグナー肉芽腫及びシェーグレン症候群を含めたコラーゲン疾患；脂肪過多；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯周組織、歯槽骨及び歯のセメント質の病変を含めた歯周疾患；糸球体腎炎を含めたネフローゼ症候群；脱毛の予防又は毛の発芽の提供及び／又は毛の生成の促進及び発毛による男性型脱毛症又は老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症及びセザリー症候群；アジソン病；例えば、保存、移植又は虚血性疾患（例えば、血栓症及び心筋梗塞）で起こる、臓器（心臓、肝臓、腎臓及び消化管を含めて）の虚血再灌流傷害を含めた臓器傷害のような活性酸素介在疾患；内毒素ショック、偽膜性大腸炎及び薬物又は放射線照射によって生じる大腸炎を含めた腸疾患；虚血性急性腎不全及び慢性腎不全を含めた腎疾患；肺酸素又は薬物（例えば、パラコルト（ｐａｒａｃｏｒｔ）及びブレオマイシン）によって生じる中毒症、肺癌及び肺気腫を含めた肺疾患；白内障、鉄沈着症、網膜炎、色素変性症（ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、老人性黄斑変性症、硝子体瘢痕（ｖｉｔｒｅａｌ ｓｃａｒｒｉｎｇ）及び角膜のアルカリによるやけどを含めた眼疾患；多形性紅斑；線状ＩｇＡバロウス（ｂａｌｌｏｕｓ）皮膚炎及びセメント皮膚炎を含めた皮膚炎；並びに歯肉炎、歯周病、敗血症、膵炎、環境汚染（例えば、大気汚染）によって生じる疾患、加齢、発癌、癌の転移及び高山病を含めた他のもの；ヒスタミン又はロイコトリエン−Ｃ４の放出によって生じる疾患；腸−、血管−又は神経−ベーチェット病を含むベーチェット病、及びまた、口腔、皮膚、眼、外陰部、関節、精巣上体、肺、腎臓などに影響を及ぼすベーチェット病が挙げられる。さらに、本発明の化合物は、免疫原性疾患（例えば、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変及び硬化性胆管炎を含めた慢性自己免疫性肝臓疾患）、肝臓部分切除、急性肝壊死（例えば、毒素、ウイルス性肝炎、ショック又は無酸素症によって生じる壊死）、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ型／非Ｂ型肝炎、肝硬変（アルコール性肝硬変を含めて）、並びに劇症肝炎、遅発性肝不全及び「慢性状態の急性（ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ）」肝不全（慢性肝臓疾患での急性肝不全）を含めた肝不全を含む肝臓疾患の治療及び予防に有用であり、さらに、患者が既に服用している場合のある薬物の主な化学療法効果、抗ウイルス作用、抗炎症作用、及び強心作用の増大における、これらの化合物の潜在的に有用な活性のために、様々な疾患に対して有用である。
【００７１】
［０９３］本発明の化合物の、増殖性疾患を治療する能力は、Ｂｕｎｃｈｍａｎ ＥＴ及びＣＡ Ｂｒｏｏｋｓｈｉｒｅ、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｅｄ．２３ ９６７〜９６８（１９９１）；Ｙａｍａｇｉｓｈｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９１ ８４０〜８４６（１９９３）；並びにＳｈｉｃｈｉｒｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７ １８６７〜１８７１（１９９１）において以前に説明されている方法によって実証されることができる。増殖性疾患として、平滑筋増殖、全身性硬化症、肝臓の硬変、成人呼吸窮迫症候群、特発性心筋症、紅斑性狼瘡、糖尿病性網膜症又は他の網膜症、乾癬、強皮症、前立腺肥大症、心臓肥大（ｃａｒｄｉａｃ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、動脈傷害後の再狭窄又は血管の他の病的狭窄が挙げられる。さらに、これらの化合物は、いくつかの増殖因子に対する細胞応答をアンタゴナイズし、したがって抗血管新生特性を有し、これらの化合物を特定の腫瘍の増殖、並びに肺、肝臓、及び腎臓の線維性疾患を制御するか又は回復させるのに有用な薬剤にしている。
【００７２】
［０９４］本発明の実施形態の水性液体組成物は、自己免疫疾患（例えば、円錐角膜、角膜炎、ジソフィアエピテリアリスコルネア（ｄｙｓｏｐｈｉａ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｓ ｃｏｒｎｅａｅ）、白斑、モーレン潰瘍、スクレビチス（ｓｃｌｅｖｉｔｉｓ）及びグレーブス眼症を含めて）及び角膜移植の拒絶反応を含めた眼の様々な疾患の治療及び予防に特に有用である。
【００７３】
［０９５］上記又は他の治療に用いられる場合、治療有効量の本発明の実施形態の化合物の１つは、純粋な形態又は、医薬として許容可能な塩、エステル又はプロドラッグの形態が存在する場合、そのような形態として用いることができる。或いは、化合物は、１種又は複数種の医薬として許容可能な賦形剤と組み合わせた、対象の化合物を含む医薬組成物として投与することができる。「治療有効量」の本発明の化合物という語句は、任意の医療処置に適用できる妥当な利益／リスク比で、障害を治療するのに十分な量の化合物を意味する。しかし、本発明の実施形態の化合物及び組成物の全日使用量は、適切な医学的判断の範囲内で担当医によって決定されることが理解されよう。任意の特定の患者に対する、具体的な治療有効用量レベルは、治療中の障害及び障害の重症度；用いられる具体的な化合物の活性；用いられる具体的な組成；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別及び食餌；用いられる具体的な化合物の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療の継続期間；用いられる具体的な化合物と組み合わせて、又は同時に用いられる薬物；並びに医学分野で周知の同様な要因を含めた様々な要因に依存することになる。例えば、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルでの化合物の用量から開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、十分当分野の技術の範囲内である。
【００７４】
［０９６］ヒト又は下等動物に投与される、本発明の実施形態における化合物の全日用量は、約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲とすることができる。経口投与の目的に対しては、用量は、約０．００１から約３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内とすることができる。ステントからの局所送達の目的に対しては、患者が受けることとなる日用量は、ステントの長さに依存する。例えば、１５ｍｍの冠血管ステントは、約１から約６００マイクログラムの範囲の量で薬物を含むことができ、数時間から数週間の範囲の期間にわたってその薬物を送達することができる。必要に応じて、有効日用量は、投与の目的のために複数の用量に分割することができ、したがって、１回の用量の組成物は、そのような量又はその約数を含むことによって日用量を構成することができる。当業者は、局所投与のために本発明を用いることができ、用量は、適用部位に依存するだろう。
【００７５】
［０９７］本発明の範囲内で、適当な薬物添加ポリマー層を提供することにおいて、多くの柔軟性が存在する。例えば、対象の薬物に関係する治療ウインドウパラメータ内で（一般に治療有効レベルと毒性レベルの間のレベル）、組合せ物において用いられる薬物の比は、互いに相関して変更することができる。例えば、一実施形態は、９０：１０の全薬物：ポリマー比を有し、ここで組合せにおける薬物の比は、１：１とすることができる。したがって、本発明によるゾタロリムス／デキサメタゾン組合せ物を送達するステントは、５ｍｃｇ／ｍｍのＰＣの上塗り層を有するＰＣポリマー層中に、１０ｍｃｇ／ｍｍのゾタロリムス及び１０ｍｃｇ／ｍｍのデキサメタゾンを含むことができる。しかし、全薬物：ポリマー比は、より低くすることができ、例えば、４０：６０以下である。薬物の全量に対する上限は、選択されたポリマー中での選択された薬物の混和性、薬物／ポリマー混合物の安定性、例えば、滅菌との適合性、及び混合物の物理的特性、例えば、流動性／処理性、弾性、脆性、粘性（ステントストラット同士の間でクモの巣状になったり、架橋したりしない）、実質的にステントの輪郭に加わるか、又は層間剥離若しくは亀裂の原因となるか、又は圧着することが困難な、被膜の厚さを含めたいくつかの要因に依存することになる。本発明の実施形態は、約６０〜８０ミクロン離れて配置されたステントストラットを含み、薬物／ポリマー／ポリマー上塗り層の厚さの上限が約３０ミクロンであることを示しているが、それらの実施形態に説明されるように、任意のステントサイズ、ストラットサイズ及び空間間隔、及び／又はステント構造を、薬物送達のために用いることができる。実施形態では、治療量のオリムス薬物は、ゾタロリムス又はエベロリムスを含み、ステント１ｍｍ当たり少なくとも１μｇである。別の実施形態では、第２の薬物は、グルココルチコステリオドである。第２の薬物が、実施形態で用いられる場合、この第２の薬物はデキサメタゾンであり、治療量は、ステント１ｍｍ当たり少なくとも０．５μｇである。
【００７６】
［０９８］上塗り層の厚さ（上塗り層が用いられる場合）は、望ましくは、薬物の放出動態を過度に妨害すべきではない。上塗り層はまた、下にある薬物添加ポリマー層中の薬物と同じであるか、又は異なっていることのできる、１種又は複数種の薬物を添加されることができる。
【００７７】
［０９９］一般的にいえば、本発明の組合せ物に有用な薬物は、組合せ物中の他の薬物の所望の活性に悪く影響することにはならない。組合せ物に用いるために提案される薬物は、おそらく補完的な活性又は作用機序を有する。したがって、提案された組合せ物中の一薬物は、他の薬物の所望の活性、例えば抗増殖活性を阻害すべきではない。また、いずれの薬物も、他の薬物の分解を生じさせたり、増強したりすべきではない。しかし、例えば、滅菌の間に分解するために、他の点では不適当であると思われる場合のある薬物は、実際には、別の薬物による相互作用のために有用となり得る。したがって、単独ではＥｔＯ滅菌の間に分解することが観察されたデキサメタゾンは、ゾタロリムスの疎水性のために、ゾタロリムスと組み合わせて首尾よく用いることができる。さらに、出願者の同時係属中の米国特許出願第１０／７９６４２３号明細書に記載されているように、ゾタロリムスは、デキサメタゾンの溶出速度を低減させることが観察された。
【００７８】
［０１００］本発明の実施形態の医薬組成物は、化合物及び医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含み、これは、経口的、経直腸的、非経口的、大槽内、膣内、腹腔内、局所的（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）（粉末、軟膏、滴剤又は経皮パッチによるような）、経口又は鼻内噴霧のような口腔内、或いはバルーンカテーテル内のような脈管構造内に配置されたステント内、又は心膜空間若しくは心筋内若しくは心筋上への送達のように局所的（ｌｏｃａｌｌｙ）に投与することができる。語句「医薬として許容可能な担体」は、無毒性の固体、半固体、液体増量剤、希釈剤、封入材料又は任意の種類の製剤助剤を意味する。本明細書で用いられる場合、用語「非経口的」は、経口以外のすべての様式の投与を指し、これには、それだけに限らないが、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）、皮下及び関節内注射、注入、経皮、及び例えば、脈管構造内などの配置が挙げられる。
【００７９】
［０１０１］非経口注射用の本発明の医薬組成物は、医薬として許容可能な滅菌水性又は非水性の溶液、分散系、懸濁液、ナノ粒子懸濁液、又はエマルジョン、並びに使用直前に滅菌注射用溶液若しくは分散系に再構成するための滅菌粉末を含む。適当な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどを含めて）、カルボキシメチルセルロース及びそれらの適当な混合物、植物油（オリーブ油を含めて）、及びオレイン酸エチルを含めた注射用有機エステルが挙げられる。レシチンを含めた被覆材料の使用によって、分散系の場合における所定の粒径の維持によって、及び界面活性物質の使用によって、適切な流動性を維持することができる。
【００８０】
［０１０２］これらの組成物は、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの補助剤も含むことができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどを含めた等張剤を含めることも望ましい場合がある。注射用医薬形態の吸収の延長は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含めた、吸収を遅延させる剤を含めることによってもたらすことができる。
【００８１】
［０１０３］場合によっては、薬物の効果を延長するために、皮下又は筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、難水溶性を有する結晶性又は非結晶性物質の液体懸濁剤を用いることによって達成することができる。その場合、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、これはさらには、結晶サイズ及び結晶形態に依存する場合がある。或いは、非経口的に投与される薬物形態の吸収の遅延は、薬物を油ビヒクル中に溶解又は懸濁させることによって達成される。
【００８２】
［０１０４］注射用デポー形態は、ポリ乳酸−ポリグリコリドを含めた生分解性ポリマー中に、薬物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することにより作製される。薬物とポリマーの比及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）及びポリ（アンヒドリド）が含まれる。デポー注射用製剤は、薬物を、体組織と適合するリポソーム又はマイクロエマルジョン中に封入することによっても調製される。
【００８３】
［０１０５］注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、又は使用直前に滅菌水又は他の滅菌注射用媒体に溶解又は分散させることのできる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を混入することによって滅菌することができる。
【００８４】
［０１０６］経口投与用の固体剤形として、カプセル、錠剤、ピル、粉末、及び顆粒が挙げられる。このような固体剤形では、活性化合物は、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムを含めた、少なくとも１種の不活性な、医薬として許容可能な賦形剤又は担体及び／又はａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸を含めた増量剤（ｆｉｌｌｅｒ）又は増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールを含めた湿潤剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムを含めた崩壊剤、ｅ）パラフィンを含めた溶解遅延剤、ｆ）四級アンモニウム化合物を含めた吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、ｈ）カオリン及びベントナイト粘土を含めた吸収剤、並びにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムを含めた潤滑剤、並びにそれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤、及びピルの場合、剤形は緩衝剤も含むことができる。
【００８５】
［０１０７］類似の種類の固体組成物は、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、軟、半固体及び硬充填ゼラチンカプセル又は液体充填カプセル中の増量剤として用いることもできる。
【００８６】
［０１０８］錠剤、糖衣丸、カプセル、ピル、及び顆粒に限らず、経口投与用の固体剤形は、腸溶コーティング及び医薬製剤分野で周知の他の被覆剤を含めた被覆剤及びシェルとともに調製することができる。それらは、場合によって乳白剤を含有することができ、それらが活性成分（複数も）を、腸管の特定の部分のみに又はその部分に優先的に、場合によって遅延された様式で放出する組成物となることもできる。用いることのできる包埋組成物の例には、ポリマー物質及びワックスが含まれる。薬物を含むこれらの包埋組成物は、ステント、移植片、カテーテル及びバルーンを含めた医療デバイス上に配置することができる。
【００８７】
［０１０９］活性化合物は、適切な場合、１種又は複数種の上述の賦形剤とともにマイクロカプセル化形態とすることもできる。
【００８８】
［０１１０］経口投与用の液体剤形として、医薬として許容可能なエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。活性化合物に加えて、液体剤形は、例えば、水又は他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール，１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物を含めた可溶化剤及び乳化剤などの当技術分野で一般に用いられる不活性な希釈剤を含むことができる。
【００８９】
［０１１１］不活性な希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、着香剤及び芳香剤を含めた補助剤も含むことができる。
【００９０】
［０１１２］懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステルなどの懸濁剤、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、及びトラガカント、及びそれらの混合物を含むことができる。
【００９１】
［０１１３］局所投与には、眼の表面を含めた皮膚への投与が含まれる。皮膚上の局所使用のための組成物には、軟膏、クリーム、ローション、及びゲルも含まれる。局所投与の別の形態は、自己免疫疾患、アレルギー性又は炎症性状態、及び角膜移植を含めた眼の免疫介在状態の治療用のような、眼に対してである。本発明の化合物は、医薬として許容可能な眼のビヒクルで送達され、その結果この化合物が、眼の表面に十分な時間接触して維持されることによって、化合物が眼の角膜領域及び内部領域、例として前房、後房、硝子体、房水、硝子体液、角膜、虹彩／シラリ（ｃｉｌａｒｙ）、水晶体、脈絡膜／網膜及び強膜に浸透することを可能にする。医薬として許容可能な眼のビヒクルは、例えば、軟膏、植物油又は封入材料とすることができる。
【００９２】
［０１１４］粘膜投与用の組成物、特に吸入用の組成物は、乾燥粉末として調製することができ、これは加圧されていても加圧されていなくてもよい。加圧されていない粉末組成物において、微細に分割された形態での活性成分は、例えば、直径最大１００マイクロメートルのサイズを有する粒子を含む、より大きなサイズの医薬として許容可能な、不活性な担体との混合物として用いることができる。適当な不活性な担体には、ラクトースを含めた糖が含まれる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５重量％が、０．０１から１０マイクロメートルの範囲の有効粒径を有する。直腸又は膣の経粘膜投与において、製剤は、座剤又は停留浣腸を含み、これらは、本発明の化合物を、カカオ脂、ポリエチレングリコール、又は座剤ワックスを含めた、適当な非刺激性の賦形剤又は担体と混合することによって調製することができ、これらは、室温で固体であるが、体温で液体であり、したがって直腸又は膣腔内で融解し、活性化合物を放出する。
【００９３】
［０１１５］或いは、組成物は、加圧され、窒素を含めた圧縮ガス又は液化ガス噴射剤を含むことができる。液化噴射剤媒体及び実際には全組成物は、活性成分が任意の実質的限度までその中に溶解しないようになっている。加圧された組成物は、界面活性剤も含むことができる。界面活性剤は、液体又は固体の非イオン性界面活性剤とすることができるか、又は固体の陰イオン性界面活性剤とすることができる。他の実施形態では、個体の陰イオン性界面活性剤の使用は、ナトリウム塩の形態としてである。
【００９４】
［０１１６］本発明の実施形態の化合物は、リポソームの形態で投与することもできる。当技術分野で知られているように、リポソームは、リン脂質又は他の脂質物質から一般に得られる。リポソームは、水性媒体中に分散されている、単層又は多層の水和液晶によって形成される。リポソームを形成することのできる、任意の無毒の生理的に許容可能で代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形態での組成物の実施形態は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含むことができる。実施形態での脂質は、リン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）であり、両方とも天然及び合成である。リポソームを形成する方法は、当技術分野で知られている。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ、編集、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７６）、ｐ．３３以下参照を参照されたい。
【００９５】
［０１１７］本発明の実施形態の化合物は、１種又は複数種の全身免疫抑制剤とともに同時投与することもできる。本発明の範囲内の免疫抑制剤として、それだけに限らないが、ＩＭＵＲＡＮ（登録商標）アザチオプリンナトリウム、ブレキナルナトリウム、ＳＰＡＮＩＤＩＮ（登録商標）グスペリムス三塩酸塩（デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）としても知られる）、ミゾリビン（ブレジニン（ｂｒｅｄｉｎｉｎ）としても知られる）、ＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）ミコフェノール酸モフェチル、ＮＥＯＲＡＬ（登録商標）シルオスポリン（Ｃｙｌｏｓｐｏｒｉｎ）Ａ（商標ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（登録商標）の下で、シクロスポリンＡの異なる製剤としても販売されている）、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標）タクロリムス（ＦＫ−５０６としても知られる）、シロリムス及びＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、エベロリムス、レフルノミド（ＨＷＡ−４８６としても知られる）、プレドニゾロン及びその誘導体を含めた糖質コルチコイド、オルソクローン（ＯＫＴ３）及びＺｅｎａｐａｘ（登録商標）を含めた抗体療法、白血病療法、及びチモグロブリンを含めたアンチチミオサイト（ａｎｔｉｔｈｙｍｙｏｃｙｔｅ）グロブリンが挙げられる。
【００９６】
［０１１８］本発明の化合物の調製
［０１１９］本発明の実施形態の化合物及びプロセスは、本発明の化合物を調製することのできる方法を図示している以下の合成スキームに関連して、より良好に理解されよう。
【００９７】
［０１２０］本発明の化合物は、様々な合成経路によって調製することができる。代表的な手順は、スキーム１に示されている。
［０１２１］
【００９８】
【化１０】

【００９９】
［０１２２］スキーム１に示すように、ラパマイシンのＣ−４２ヒドロキシルの、トリフルオロメタンスルホネート又はフルオロスルホネート脱離基への変換により、Ａが得られた。２，６−ルチジン、ジイソプロピルエチルアミンを含む、ヒンダード非求核塩基（ｈｉｎｄｅｒｅｄ，ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｉｃ ｂａｓｅ）の存在下での、この脱離基のテトラゾールとの置換により、異性体Ｂ及びＣが得られ、これらはフラッシュカラムクロマトグラフィーによって分離精製された。
【０１００】
［０１２３］合成方法
［０１２４］前述のことは、以下の実施例を参照してより良好に理解することができ、これらは本発明の化合物を調製することができる方法を例示し、添付の特許請求の範囲で定義された本発明の範囲を限定することを意図していない。
【０１０１】
［０１２５］実施例１ ４２−（２−テトラゾリル）−ラパマイシン（極性の低い異性体）
［０１２６］実施例１Ａ
［０１２７］窒素雰囲気下、−７８℃の、ラパマイシン（１００ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．６ｍＬ）溶液を、２，６−ルチジン（５３μＬ、０．４６ｍｍｏｌ、４．３当量）及びトリフルオロメタンスルホン酸無水物（３７μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）で順次処理し、その後１５分間攪拌し、室温まで加温し、ジエチルエーテルを用いてシリカゲル（６ｍＬ）のパッドを通して溶出した。トリフレートを含む画分をプールし、濃縮することによって、指定した化合物を琥珀色の発泡体として得た。
【０１０２】
［０１２８］実施例１Ｂ ４２−（２−テトラゾリル）−ラパマイシン（極性の低い異性体）
［０１２９］実施例１Ａの酢酸イソプロピル（０．３ｍＬ）溶液を、ジイソプロピルエチルアミン（８７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（３５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）で順次処理し、その後１８時間攪拌した。この混合物を、水（１０ｍＬ）とエーテル（１０ｍＬ）の間で分配した。有機物をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ_２ＳＯ_４）。この有機物を濃縮することより、粘着性の黄色固体を得、これをヘキサン（１０ｍＬ）、ヘキサン：エーテル（４：１（１０ｍＬ）、３：１（１０ｍＬ）、２：１（１０ｍＬ）、１：１（１０ｍＬ））、エーテル（３０ｍＬ）、ヘキサン：アセトン（１：１（３０ｍＬ））で溶出するシリカゲル（３．５ｇ、７０〜２３０メッシュ）でのクロマトグラフィーによって精製した。異性体のうちの１つをエーテル画分として採取した。
［０１３０］ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９６６（Ｍ）⁻
【０１０３】
［０１３１］実施例２ ４２−（１−テトラゾリル）−ラパマイシン（極性の高い異性体）
［０１３２］実施例１Ｂにおいて、ヘキサン：アセトン（１：１）移動相を用いるクロマトグラフィーカラムから、より遅く移動するバンドを採取することにより、指定した化合物を得た。
［０１３３］ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９６６（Ｍ）⁻
【０１０４】
［０１３４］ラパマイシン類似体のファーマコート動態（ｐｈａｒｍａｃｏａｔ ｋｉｎｅｔｉｃｓ）
［０１３５］本発明の実施形態の化合物の免疫抑制活性を、ラパマイシン並びに２種のラパマイシン類似体：両方とも米国特許第５５２７９０７号明細書に開示されている、４０−エピ−Ｎ−［２’−ピリドン］−ラパマイシン及び４０−エピ−Ｎ−［４’−ピリドン］−ラパマイシンと比較した。活性は、Ｋｉｎｏ，Ｔ．らによって、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ、ＸＩＸ（５）：３６〜３９、Ｓｕｐｐｌ．６（１９８７）に記載されている、ヒト混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを用いて判定した。このアッセイの結果は、本発明の化合物が、表１に示すように、ナノモル濃度で有効な免疫調節薬であることを実証する。
【０１０５】
【表１】

【０１０６】
［０１３６］実施例１及び実施例２の薬物動態学的挙動を、カニクイザル（１群当たりｎ＝３）における、単回の２．５ｍｇ／ｋｇ静脈内用量の後に特徴づけた。各化合物は、エタノール２０％：プロピレングリコール３０％：クレモホル（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ２％：水ビヒクル中５％のデキストロース４８％の２．５ｍｇ／ｍＬ溶液として調製した。１ｍＬ／ｋｇの静脈内用量を、サルの伏在静脈中に緩徐な大量瞬時投与（約１〜２分）として投与した。血液試料は、投薬前及び投薬後０．１（静脈内のみ）、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、９、１２、２４、及び３０時間に、各動物の大腿動脈又は静脈から得た。ＥＤＴＡ含有試料（ＥＤＴＡ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｓａｍｐｌｅ）を完全に混合し、引き続く分析のために抽出した。
【０１０７】
［０１３７］血液のアリコート（１．０ｍＬ）を、内部標準物質を含む、水中２０％のメタノール（０．５ｍｌ）で溶血させた。溶血させた試料を、酢酸エチルとヘキサン（１：１（ｖ／ｖ）、６．０ｍＬ）の混合物で抽出した。有機層を、室温で窒素流を用いて乾燥するまで蒸発させた。試料を、メタノール：水（１：１、１５０μＬ）で再構成した。表題の化合物（５０μＬ注射剤）を、ＵＶ検出を用いる逆相ＨＰＬＣを用いて混在物から分離した。試料は、実施中冷却を保った（４．０℃）。各研究からのすべての試料を、ＨＰＬＣで単一バッチとして分析した。
【０１０８】
［０１３８］実施例１、実施例２及び内部標準物質の曲線下面積（ＡＵＣ）測定値は、Ｓｃｉｅｘ ＭａｃＱｕａｎ（商標）ソフトウェアを用いて求めた。検量線は、スパイク血液（ｓｐｉｋｅｄ ｂｌｏｏｄ）標準物質のピーク面積比（親薬物／内部標準物質）から、理論濃度に対する比の最小二乗線形回帰を用いて得た。この方法は、０．１ｎｇ／ｍＬの推定定量限界を伴った標準曲線の範囲にわたって、両方の化合物について線形であった（相関＞０．９９）。最高血中濃度（Ｃ_ＭＡＸ）及び最高血中濃度に到達するまでの時間（Ｔ_ＭＡＸ）は、観察された血中濃度−時間データから直接読み取った。血中濃度データをＣＳＴＲＩＰを用いる多次指数関数的曲線フィッティングにかけることによって、薬物動態学的パラメータの推定値を得た。推定したパラメータは、ＮＯＮＬＩＮ８４を用いてさらに特徴づけた。投薬後０からｔ時間（最終の測定可能な血中濃度時点）の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ_０〜ｔ）を、血液−時間特性に対して線形台形則を用いて計算した。無限大まで外挿した残余面積を、終末消失速度定数（β）で除した最終測定血中濃度（Ｃ_ｔ）として求め、ＡＵＣ_０〜ｔに加えることによって全曲線下面積（ＡＵＣ_０〜ｔ）を作出した。
【０１０９】
［０１３９］図１及び表２に示すように、実施例１及び実施例２の両方は、ラパマイシンと比較した場合、驚くほど相当に短い終末消失半減期（ｔ_１／２）を有していた。したがって、本発明の化合物のみが、十分な効力（表１）及びより短い終末半減期（表２）の両方を提供する。
【０１１０】
【表２】

【０１１１】
［０１４０］実施例３
［０１４１］本実施例の目的は、ステントを含んでいるブタの冠動脈における新生内膜形成に対するラパマイシン類似体の効果を判定することであった。本実施例は、ラパマイシン類似体ゾタロリムスは、合成され、ＢｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓのＢｉｏｄｉｖｉＹｓｉｏ ＰＣ Ｃｏｒｏｎａｒｙステントから送達される場合、ブタ冠動脈における新生内膜過形成及び管腔サイズに有利に影響を及ぼすことを例示する。この知見は、医療デバイスからのゾタロリムスの送達が、新生内膜過形成を制限することによってヒトにおいて適切に適用される場合、相当な臨床上の利点となり得ることを示す。
【０１１２】
［０１４２］薬剤ゾタロリムスは、米国特許第６０１５８１５号明細書に記載され、特許請求されているラパマイシン類似体である。本実施例で説明する研究は、ブタの冠血管ステントモデルにおいて、ラパマイシン類似体ゾタロリムスの、新生内膜過形成を低減する能力を評価するために構築した。このモデルにおけるゾタロリムスの効力は、経皮的血管再生後のステントにおける冠血管再狭窄及び血管再狭窄の制限及び治療に対する、その臨床的可能性を示すだろう。家畜のブタを用いたが、これは、このモデルが、ヒト被験者において新生内膜過形成を制限することを探求する他の研究と比較可能な結果をもたらすように思われるためである。
【０１１３】
［０１４３］実施例では、未成熟の飼育場のブタ中に配置した冠血管ステントから溶出するゾタロリムスを試験し、これらの結果を対照ステントと比較した。対照ステントは、薬物なしでポリマー被覆されている。ポリマー自体は、重大な程度に新生内膜過形成を刺激してはならないので、これは重要である。溶出した薬物が消失すると、ポリマーに対する炎症応答は、再狭窄プロセスは停止されないが、代わりに遅らされる、遅発型の「追い上げ現象」をおそらくもたらし得るだろう。この現象は、ヒト被験者において、後日再狭窄をもたらすだろう。
【０１１４】
［０１４４］ステントは、各ブタの２本の血管に植え込んだ。このモデルで用いたブタは、一般に２〜４カ月の年齢で、３０〜４０ｋｇの体重であった。こうして２つの冠血管ステントを、１．１〜１．２の通常のステント：動脈比を視覚的に評価することによって、各ブタに植え込んだ。
【０１１５】
［０１４５］この処置の日の最初に、経口アスピリン（１日３２５ｍｇ）をブタに投与し、残りの過程を継続した。全身麻酔は、筋肉内注射によって達成し、その後静脈内ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（３ｍｇ／ｋｇ）が続いた。誘導時の追加の薬物投与は、筋肉内に投与されるアトロピン（１ｍｇ）及びフロシリン（ｆｌｏｃｉｌｌｉｎ）（１ｇ）を含んでいた。ステント術処置の間、１００００ユニットのヘパリンを動脈内に大量瞬時投与した。
【０１１６】
［０１４６］動脈アクセスは、右外側頸動脈の切開及び８Ｆシースの配置によって得た。処置後、動物を、コレステロール又は他の特別な補充のない通常の食餌で維持した。
【０１１７】
［０１４７］ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントは、３．０ｍｍの通常の血管標的サイズで用いた。図２を参照されたい。ブタ１頭当たり２本の冠動脈を、ステントの配置に無作為に割り当てた。ステントは、薬物溶出ステント（ポリマーと薬物のステント）又はポリマーのみで被覆されたステント（ポリマーのみのステント）のいずれかであった。ステントは、標準的なガイドカテーテル及びワイヤーによって送達した。ステントバルーンを３０秒未満で適切なサイズに膨張させた。
【０１１８】
［０１４８］各ブタは、各ブタが１つの薬物用ステント及び１つの対照用ステントを有するように、別々の冠動脈内に配置された、１つのポリマーのみのステント及び１つのポリマーと薬物のステントを有した。
【０１１９】
［０１４９］合計２０頭のブタの試料サイズは、指数０．９５及びベータ０．０５で、０．１５ｍｍの標準偏差を有する０．１２ｍｍの新生内膜厚の予測される差異を検出するために選択した。
【０１２０】
［０１５０］動物は、病理組織学的検査及び定量化のために２８日目に安楽死させた。灌流ポンプ系から心臓を取り出した後、近位の冠動脈にアクセスするために左心耳を除去した。傷害を有する冠動脈セグメントを、心外膜を取り除いて解剖した。病変部を含むセグメントを単離し、それによって十分な組織が、いずれの端にも未関与の血管を含むようにさせた。それぞれ長さおよそ２．５ｃｍの前述のセグメントを、標準的なプラスチック包埋技法によって包埋し、処理した。この組織を、ヘマトキシリン−エオシン及びエラスチック−ワンギーソン（ｅｌａｓｔｉｃ−ｖａｎ Ｇｉｅｓｏｎ）技法で引き続いて処理し染色した。
【０１２１】
［０１５１］低強度光及び高強度光の顕微鏡観察法を用いることによって、較正されたレチクル、及び較正された分析ソフトウェアを使用するコンピュータに接続されたデジタル顕微鏡観察装置により、顕微鏡視野の平面内で長さの測定を行った。
【０１２２】
［０１５２］血管傷害の重症度及び新生内膜応答を、較正されたデジタル顕微鏡観察法によって測定した。内弾性板の完全性の重要性は、当業者に周知である。ステント血管における病理組織学的傷害スコアは、新生内膜厚に密接に関連すると認証されてきた。このスコアは、傷害深度に関連し、以下のようなものである。
【０１２３】
【表３】

【０１２４】
［０１５３］傷害のこの定量的測定を、各ステントセクションのすべてのステントストラットについて評価した。較正されたデジタル画像も、各ステントストラット部位で新生内膜厚を測定するために用いた。管腔面積、内弾性板に含まれる面積、及び外弾性板内の面積も測定した。
【０１２５】
［０１５４］中位のステントセグメントを、測定、分析及び比較のために用いた。近位及び遠位のセグメントについてのデータも記録した（本報告のデータの節に含めた）。
【０１２６】
［０１５５］対応のあるｔ−検定を行うことによって、ポリマーのみのステント（対照群）及びポリマーと薬物のステント（治療群）にわたって変数を比較した。この研究において、予定した時点の前に死んだ動物はいなかった。
【０１２７】
［０１５６］表３は、用いたブタ及び動脈を示す。表３において、ＬＣＸは、左冠動脈の回旋枝を意味し、ＬＡＤは、左冠動脈前下行枝を意味し、ＲＣＡは、右冠動脈を意味する。
【０１２８】
【表４】

【０１２９】
［０１５７］表４は、近位、中位、及び遠位セグメントを含めた、各ステントの平均傷害及び新生内膜厚に関するすべてのデータについての概要結果を示す。表４は、内弾性板（ＩＥＬ）及び外弾性板（ＥＥＬ）によって測定した場合の、管腔サイズ、狭窄率、及び動脈サイズも示す。
【０１３０】
［０１５８］試験群（ポリマーと薬物のステント）又は対照群（ポリマーのみのステント）内で、近位、中位、又は遠位セグメントにわたって、新生内膜面積又は厚さについての統計学的に有意な差異はなかった。この観察結果は、前の研究とまったく一致しており、したがって試験デバイス（ポリマーと薬物のステント）対対照デバイス（ポリマーのみのステント）の統計的比較に対して、中位セグメントのみを用いることを可能にする。
【０１３１】
［０１５９］表５は、試験群及び対照群にわたる統計学的ｔ−検定の比較を示す。新生内膜厚、新生内膜面積、管腔サイズ、及び管腔狭窄率において統計学的に有意な差異があり、薬物溶出ステントが明らかに好都合であった。逆に、平均傷害スコア、外弾性板面積、又は内弾性板面積については、試験群（ポリマーと薬物のステント）及び対照群（ポリマーのみのステント）の間で統計学的に有意な差異はなかった。
【０１３２】
［０１６０］ステントセグメントに対して近位及び遠位の参照動脈を観察し、定量化した。これらの血管は、すべての場合において正常であり、対照群（ポリマーのみのステント）及び試験群（ポリマーと薬物のステント）の両方において未損傷であると思われた。図３Ａ及び３Ｂを参照されたい。以下のデータは、対照群のステントと試験群のステントの間でサイズに統計学的に有意な差異がないことを示す。
【０１３３】
【表５】

【０１３４】
【表６】

【０１３５】
【表７】

【０１３６】
［０１６１］データは、効力のモルホロメトリックな（ｍｏｒｐｈｏｒｏｍｅｔｒｉｃ）測定値に対して、統計学的に有意な差異が存在し、ゾタロリムスを溶出するステントが好都合であることを実証する。本発明のステントは、より小さい新生内膜面積、より小さい新生内膜厚、及びより大きな管腔面積をもたらす。炎症又は傷害パラメータに関して、試験群（ポリマーと薬物のステント）及び対照群（ポリマーのみのステント）内に有意な差異はなかった。試験群と比較した対照群について、動脈サイズ（ステントを含む）に有意な差異はなかった。これらの後者の知見は、薬物を含むポリマー被膜の動脈リモデリング特性に有意な差異のないことを示す。
【０１３７】
［０１６２］最大限でも、ポリマーと薬物のステント及びポリマーのみのステントの両方で、軽度の炎症しか見つからなかった。この知見は、ポリマーが、薬物を添加していなくても、満足な生体適合性を示すことを示す。他の研究は、薬物がポリマーから完全になくなった場合、ポリマー自体が新生内膜を生じるのに十分な炎症を引き起こすことを示す。この観察結果は、臨床上遅発性再狭窄の遅発型追い上げ現象の原因となる場合がある。本実施例のポリマーは、冠動脈において炎症を引き起こさなかったので、薬物がなくなった後のポリマーに関連する遅発問題は起こりそうにない。
【０１３８】
［０１６３］結論として、ポリマーから化合物ゾタロリムスを溶出するステントは、冠動脈に配置した場合、ブタモデルにおいて新生内膜過形成の低減を示した。
【０１３９】
［０１６４］実施例４
［０１６５］本実施例の目的は、ホスホリルコリン側基を含む生体適合性ポリマーで被覆された３１６Ｌ電解研磨ステンレス鋼クーポン（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｌｉｓｈｅｄ Ｓｔａｉｎｌｅｓｓ Ｓｔｅａｌ Ｃｏｕｐｏｎ）からのゾタロリムス薬の放出速度を求めることである。
【０１４０】
［０１６６］ＨＰＬＣバイアルの蓋のゴムセプタムをバイアルから取り出し、「テフロン」側が上になるようにガラスバイアル中に置いた。これらのセプタムは、試験試料の支持体として機能した。試験試料は、ホスホリルコリン側基を含む生体適合性ポリマー（ＰＣポリマー）で予め被覆された３１６Ｌステンレス鋼クーポンであった。冠血管ステントは、３１６Ｌステンレス鋼で一般に作製されており、ＰＣポリマーで被覆することによって、薬物を添加するためのデポー部位を提供することができる。ステントをシミュレートするために機能する、被覆されたクーポンは、セプタムの上に置いた。ガラスのハミルトンシリンジを用いることによって、ゾタロリムスとエタノールの溶液（１０μｌ）を各クーポンの表面に適用した。この溶液は、１００％エタノール（３．０ｍｌ）中に溶解させたゾタロリムス（３０．６ｍｇ）を含んでいた。シリンジは、各適用の間にエタノールで洗浄した。ガラスバイアルのキャップは、バイアルの上にゆるく置き、それによって適当な通気を保証した。このクーポンを最低１．５時間乾燥させた。１２個のクーポンをこのようにして装備し、６個をデバイスに添加された薬物の平均量を求めるために用い、６個をデバイスから薬物を放出するのに必要な時間を測定するために用いた。
【０１４１】
［０１６７］クーポンに添加されたゾタロリムスの全量を求めるために、クーポンをバイアルから取り出し、５０／５０のアセトニトリル／０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０、５．０ｍｌ）中に入れた。このクーポンを、５２１０ Ｂｒａｎｓｏｎ超音波処理器上に１時間置いた。次いでこのクーポンを溶液から取り出し、この溶液をＨＰＬＣでアッセイした。
【０１４２】
［０１６８］時間放出研究は、以下の時間間隔、５、１５、３０及び６０分のそれぞれにおいて、個々のクーポンをｐＨ６．０の０．０１Ｍリン酸緩衝液の新鮮なアリコート（１０．０ｍｌ）に浸漬し、次いで取り出すことによって行った。１２０、１８０、２４０、３００、３６０分の残りの時点については、５．０ｍｌの容量の緩衝液を用いた。薬物放出段階の間の混合を促進するため、試料を、低速に設定したＥｂｅｒｂａｃｈ振盪機上に置いた。最後の試料の試験が完了した後、すべての溶液アリコートをＨＰＬＣによってアッセイした。
【０１４３】
［０１６９］ＨＰＬＣ分析は、以下の設定を有するＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄシリーズ１１００測定器で行った。
注入容量 ＝ １００μｌ
収集時間 ＝ ４０分
流速 ＝ １．０ｍｌ／分
カラム ＝ ４０℃
波長 ＝ ２７８ｎｍ
移動相 ＝ ６５％アセトニトリル／３５％Ｈ_２Ｏ
カラム ＝ ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ Ｓ５μｍ、４．６×２５０ｍｍ パート番号Ａ１２０５２５４６ＷＴ
［０１７０］上記実験からの結果は、以下の放出データ、表６を示した。
【０１４４】
【表８】

【０１４５】
［０１７１］実施例５
［０１７２］本実施例の目的は、１５ｍｍ ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ薬物送達ステントからのゾタロリムスの添加及び放出を求めることであった。
【０１４６】
［０１７３］ステントに薬物を添加するために、５０ｍｇ／ｍｌの濃度でゾタロリムスのエタノール溶液を調製し、１２個のバイアル中に分注した。１２個の個々のポリマー被覆ステントを、ステントを垂直位置に保持するために構築された固定具上に配置し、これらのステントを、薬物溶液中に垂直に５分間浸漬した。ステント及び固定具をバイアルから取り出し、過剰の薬物溶液は、ステントを吸収材に接触させることによって吸い取った。次いでこれらのステントを、反転した垂直位置で、空気中で３０分間乾燥させた。
【０１４７】
［０１７４］ステントを固定具から取り外し、各ステントを、５０／５０のアセトニトリル／リン酸緩衝液（ｐＨ５．１、２．０ｍｌ）中に入れ、１時間超音波処理した。ステントを溶液から取り出し、薬物濃度について溶液をアッセイし、これはステントに最初にあった薬物の量の計算を可能にした。この方法は、ステント被膜から少なくとも９５％の薬物を取り出すことを独立に示した。平均して、ステントは、１２０±９マイクログラムの薬物を含んでいた。
【０１４８】
［０１７５］薬物添加ステントを、固定具に配置し、個々のバイアルの０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０、１．９ｍｌ）中に入れた。これらの試料を、低速に設定したＥｂｅｒｂａｃｈ振盪機上に置くことにより、往復攪拌を提供した。緩衝液中で薬物が飽和状態に接近するのを回避するため、ステントを、以下の時点で、新鮮な緩衝液のバイアルに定期的に移した；１５、３０、４５、６０、１２０、１３５、１５０、１６５、１８０、２４０、３９０分。研究した薬物放出期間の最後の薬物濃度について、溶解緩衝液のバイアルをＨＰＬＣによってアッセイした。時間の関数としての薬物の累積放出（％）として表したデータを、表形式で以下の表７に示す。
【０１４９】
【表９】

【０１５０】
［０１７６］実施例６
［０１７７］ラパマイシンのテトラゾール類似体である、ゾタロリムスは、ブタの冠血管ステント誘導性傷害（Ｔｏｕｃｈａｒｄ ＡＧ、Ｂｕｒｋｅ ＳＥ、Ｔｏｎｅｒ ＪＬ、Ｃｒｏｍａｃｋ Ｋ及びＳｃｈｗａｒｔｚ ＲＳ．Ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ−ｅｌｕｔｉｎｇ ｓｔｅｎｔｓ ｒｅｄｕｃｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ ａｆｔｅｒ ４ ｗｅｅｋｓ．Ｅｕｒ Ｈｅａｒｔ Ｊ．２７：９８８〜９９３、２００６）．Ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ ＰＣ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ｓｔｅｎｔｓ ｉｎ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｃｏｒｏｎａｒｙ Ａｒｔｅｒｉｅｓ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｒｅｐｏｒｔ、Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ ａｎｄ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＭＮ）及びラットのバルーン血管形成術（Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｃ．Ｓｕｍｍａｒｙ ｏｆ Ｓｔｕｄｙ Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ ｉｎ ａ Ｒａｔ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｎｊｕｒｙ）のモデルにおいて、抗再狭窄活性を有することが示された。本実施例の目的は、健康な男性における、ゾタロリムスの段階的増加単回静脈内（ＩＶ）用量の安全性及び薬物動態（ＰＫ）を評価することであった。
【０１５１】
［０１７８］この、ヒトにおける最初の（ｆｉｒｓｔ−ｔｉｍｅ−ｉｎ−ｍａｎ）研究において、ゾタロリムスの安全性及び薬物動態を、１００から９００μｇの用量範囲にわたる、ゾタロリムスの静脈内大量瞬時投与後に調査した。静脈内大量瞬時投与用量の投与は、ｉｎ ｖｉｖｏで、薬物被覆ステントからのゾタロリムスの最も急速で予期されない放出を模倣するだろう。
【０１５２】
［０１７９］これは、フェーズ１、単回段階的増加用量、二重盲検、無作為化、プラセボ対照、単一施設研究であった。６０人の健康な成人男性を、１００、３００、５００、７００、及び９００μｇの、５つのＩＶ用量群に分割した。被験者についての個体群統計情報を表８に要約する。
【０１５３】
【表１０】

【０１５４】
［０１８０］被験者を、表９に示す投薬スキームに示すように、空腹条件下で、ゾタロリムスの単回静脈内用量又は適合する静脈内プラセボ（ｍａｔｃｈｉｎｇ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｐｌａｃｅｂｏ）を受けるように無作為に割り当てた。
【０１５５】
【表１１】

【０１５６】
［０１８１］先行する低用量群からの安全性データを評価した後、高用量を投与した。処置群は、少なくとも７日隔てた。安全性の理由のため、各処置群を、６被験者の２つのコホートに分け、１つの群の２つのコホートの投薬を、少なくとも１日隔てた。
【０１５７】
［０１８２］用量は、８被験者に、３分にわたってＩＶ大量瞬時投与として投与した。各用量群において、４被験者がゾタロリムスを受け、４被験者がプラセボを受けた。血液を１６８時間試料採取し、ゾタロリムスの濃度を、０．２０ｎｇ／ｍＬのＬＯＱを有するＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて測定した。
【０１５８】
［０１８３］研究第１日の投薬前（０時間）及び投薬後０．０８３（５分）、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２、１６、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、及び１６８時間に、７ｍＬの血液試料を、静脈穿刺によってエデト酸（ＥＤＴＡ）を含んだ真空採取管中に採取した。
【０１５９】
［０１８４］ゾタロリムスの血中濃度は、有効な液／液抽出ＨＰＬＣタンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて求めた。（Ｊｉ，ＱＣ，Ｒｅｉｍｅｒ ＭＴ，Ｅｌ−Ｓｈｏｕｒｂａｇｙ，ＴＡ．：Ａ ９６−ｗｅｌｌ ｌｉｑｕｉｄ−ｌｉｑｕｉｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＢＴ−５７８ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ、Ｊ．ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８０５、６７〜７５（２００４））。ゾタロリムスの定量化の下限値は、０．３ｍＬの血液試料を用いて０．２０ｎｇ／ｍＬであった。すべての検量線は、０．９９２３以上の決定係数（ｒ^２）値を有していた。
【０１６０】
［０１８５］安全性は、有害事象、理学的検査、バイタルサイン、ＥＣＧ、注射部位及び検査室検査の評価に基づいて評価した。
【０１６１】
［０１８６］ゾタロリムスの薬物動態学的パラメータの値は、非コンパートメント法を用いて推定した。これらのパラメータは、ゾタロリムス投与後５分での濃度（Ｃ_５）、用量規格化Ｃ_５、消失速度定数（β）、半減期（ｔ_１／２）、時間０から最終測定可能濃度の時間までの血中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}）、用量規格化ＡＵＣ_{０〜ｌａｓｔ}、無限時間まで外挿した、血中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ_{０〜ｉｎｆ}）、用量規格化ＡＵＣ_{０〜ｉｎｆ}、総クリアランス（ＣＬ）、及び分布容積（Ｖｄ_β）を含んでいた。
【０１６２】
［０１８７］ゾタロリムスの静脈内投与後の平均血中濃度−時間のプロットを、図４及び５にそれぞれ線形目盛及び対数−線形目盛で示す。
【０１６３】
［０１８８］２つの投与計画のそれぞれの、投与後のゾタロリムスの薬物動態学的パラメータの平均±標準偏差を表１０に示す。
【０１６４】
【表１２】

【０１６５】
［０１８９］用量比例関係及び線形薬物動態の疑問を調査するために、共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を行った。被験者を用量レベルによって分類し、体重が共変量であった。分析した変数は、β、Ｖｄ_β、用量規格化Ｃ_５、並びに用量規格化ＡＵＣ_{０−ｌａｓｔ}の対数及び用量規格化ＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}の対数を含んでいた。用量との不変性についての仮説の初期試験は、用量の単調関数に対して良好な指数を伴う用量レベル効果に対する試験であった。さらに、最高及び最低用量レベルを、ＡＮＣＯＶＡの枠組みの中で比較した。
【０１６６】
［０１９０］図６は、ゾタロリムスのＣ_ｍａｘ、ＡＵＣ_{０−ｌａｓｔ}及びＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}の用量比例関係を示す。この図からわかるように、用量規格化Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ_{０−ｌａｓｔ}に、統計学的に有意な単調傾向は観察されず、これらのパラメータの用量比例増加を示した。ゾタロリムスの用量規格化ＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}について、用量との統計学的に有意な単調傾向が観察された（ｐ＝０．０１５２）。しかし、全群にわたる用量規格化ＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}の対比較では、１００μｇの用量規格化ＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}のみが、９００μｇ及び３００μｇの用量規格化ＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}（それぞれ、ｐ＝０．００３２及びｐ＝０．０３１６）と統計学的に有意に異なることを示した。統計学的に有意な単調傾向は、βにも観察された。この逸脱は、１００μｇ用量群でのβのわずかな過剰評価が原因であり得るだろう。表１１に示すように、平均ゾタロリムスＣ_５（５分での濃度）及びＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}は、用量に比例して増加した。
【０１６７】
【表１３】

【０１６８】
［０１９１］平均半減期は、研究した用量にわたって２６．０〜４０．２ｈであり、３００〜９００μｇの用量範囲にわたって大きく異なっていなかった。ゾタロリムスは、すべての用量で良好な耐容性を示し、臨床上重要な理学的検査結果、バイタルサイン又は検査室測定値は観察されなかった。
【０１６９】
［０１９２］安全性
［０１９３］ゾタロリムスに関係した最も一般的な、治療により発現した有害事象（任意の一治療群における２人以上の被験者によって報告された）は、注射部位の反応及び疼痛であった。
【０１７０】
［０１９４］大部分の有害事象は、重傷度において軽度であり、自然に回復した。
【０１７１】
［０１９５］本研究において、重大な有害事象は報告されなかった。
【０１７２】
［０１９６］研究の間、理学的検査の知見、バイタルサイン、臨床検査室又はＥＣＧパラメータに、臨床上重要な変化はなかった。
【０１７３】
［０１９７］結論
［０１９８］ＩＶゾタロリムスの薬物動態は、Ｃ_５及びＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}に関して、１００〜９００μｇの用量範囲にわたって用量に比例する。全体的に、ゾタロリムスの薬物動態は、Ｃ_５、ＡＵＣ_{０−ｌａｓｔ}及びＡＵＣ_{０−ｉｎｆ}の用量比例増加によって示されたように、１００μｇから９００μｇの用量範囲にわたって基本的に線形であった。最大９００μｇの単回ＩＶ大量瞬時投与用量が、安全性の問題なく投与された。
［０１９９］ゾタロリムスの平均消失半減期は、研究した用量範囲にわたって、２６．０から４０．２時間の範囲であった。平均クリアランス及び分布容積は、それぞれ２．９０から３．５５Ｌ／ｈ及び１１３から２０２Ｌの範囲であった。βに関して、及びかなりの程度で、Ｖｄ_βに関して観察された線形動態からの逸脱は、１００μｇ用量群に対するβの過剰評価によるものであった。
【０１７４】
［０２００］１００から９００μｇの単回用量でのゾタロリムスは、被験者によって一般に良好な耐容性が示された。
【０１７５】
［０２０１］実施例７
【０１７６】
［０２０２］本研究は、複数回投薬後のゾタロリムスの薬物動態を評価するため、及び健康な被験者の全身暴露を最大にする間のその安全性を評価するために計画した。主要目的は、被覆ステントから溶出される薬物の予測されたレベルを大きく超える、ゾタロリムスの全暴露を達成することであった。この研究により、健康な対象において、連続１４日間毎日の、２００、４００及び８００μｇ用量の複数回静脈内注入後の、フェーズ１、複数回用量段階的増加研究における、ゾタロリムスの薬物動態及び安全性を調査した。
【０１７７】
［０２０３］方法
［０２０４］フェーズ１、複数回段階的増加、二重盲検、プラセボ対照、無作為化研究。３つの１日１回（ＱＤ）投与計画（１投与計画当たり１６活性及び８プラセボでの２００、４００又は８００μｇＱＤ）に等しく分割された７２被験者に、連続１４日間、ゾタロリムスの６０分ＱＤ ＩＶ注入を投与した。血液試料は、最初の投与後２４時間、第１０、１１、１２、１３日の投薬前、及び第１４日の投与後１６８時間にわたって採取した。尿試料は、第１、１４、１６、１８及び２０日に２４時間にわたって採取した。血液及び尿のゾタロリムス濃度は、有効なＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて求めた。薬物動態学的パラメータは、コンパートメント解析によって求めた。全日−ＡＵＣ_０〜∞（全１４用量を含めた、時間０から無限大までの血中濃度−時間曲線下面積）を計算した。用量及び時間線形性並びに定常状態の達成を評価した。尿中に排出された薬物の割合を求めた。
［０２０５］全般に良好な健康状態にある７２人の男性及び女性の被験者をこの研究に登録した。個体群統計情報を表１２に要約する。
【０１７８】
【表１４】

【０１７９】
［０２０６］表１３に示すように、被験者を、３つの群（群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ）に対して、２つの異なるサイトで無作為化した。各群内で、被験者を２つの研究サイトで均等に分割し、各サイトは１２被験者（ゾタロリムス、８被験者；プラセボ、４被験者）を登録した。各用量群内の投薬スキームを以下に示す。
【０１８０】
【表１５】

【０１８１】
［０２０７］対象は、空腹条件下で、それぞれ群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩについて、研究第１日から１４日に、２００、４００、又は８００μｇのゾタロリムスの単回６０分毎日（ＱＤ）の静脈内注入又はプラセボの適合した静脈内注入を受けた。薬物は、ｙサイトデバイスに接続されたシリンジポンプによって投与し、このシリンジポンプは、１２５〜１５０ｍＬの５％デキストロース水溶液（Ｄ５Ｗ）も６０分にわたって注入した。これらの群に、先の群の最後の用量と次の群の最初の用量を少なくとも７日隔てて順次投薬し、その時間に先の群からの安全性のデータを分析した。用量の段階的増加は、低用量群の安全性の分析に依存した。
【０１８２】
［０２０８］５ｍＬの血液試料を、カリウムＥＤＴＡ含有管に採取することによって、投薬前（０時間）、及び研究第１及び１４日の注入開始後０．２５、０．５、１．０時間、１時間５分、１．２５、１．５、２、３、４、８、１２、１８及び２４時間にゾタロリムス濃度を評価した。研究第１４日の注入開始後３６、４８、７２、９６、１２０、１４４及び１６８時間並びに第１０、１１、１２及び１３日の投薬前に、追加の試料を採取した。尿は、保存剤なしの容器中に以下の間隔にわたって採取した：研究第１、１４、１６、１８及び２０日の注入開始後０から６、６から１２、１２から１８及び１８から２４時間。
【０１８３】
［０２０９］血液及び尿のゾタロリムス濃度は、有効な液／液抽出ＨＰＬＣタンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて求めた。ゾタロリムスの定量化の下限値は、０．３ｍＬの血液試料で０．２０ｎｇ／ｍＬ及び０．３ｍＬの尿試料で０．５０ｎｇ／ｍＬであった。
【０１８４】
［０２１０］安全性は、有害事象、理学的検査、バイタルサイン、ＥＣＧ、注射部位及び検査室検査の評価に基づいて評価した。
【０１８５】
［０２１１］結果
［０２１２］すべての被験者についてのゾタロリムス血中濃度−時間データは、１次消去（ｆｉｒｓｔ ｏｒｄｅｒ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）を伴う３コンパートメント開放モデルによって説明した。研究した投与計画にわたって、平均コンパートメント薬物動態学的パラメータは、ＣＬ ４．０〜４．６Ｌ／ｈ；Ｖ_１ １１．３〜１３．１Ｌ；Ｖ_ｓｓ ９２．５〜１１８．０Ｌ、及び終末消失ｔ_１／２ ２４．７〜３１．０ｈであった。ゾタロリムスの薬物動態は、第１及び１４日で、研究した投与計画にわたって用量線形性と一致した。薬物動態学的モデルは、第１及び１４日のデータに同時に適合し、時間線形性の薬物動態を示した。研究した投与計画に対する全日−ＡＵＣ_０〜∞は、６７７〜２３９５ｎｇ・ｈｒ／ｍＬの範囲であった。平均して、０．１％のゾタロリムス用量を、投与後２４時間以内に尿中で回収した。
【０１８６】
［０２１３］薬物動態学的及び統計学的分析
［０２１４］ゾタロリムスの薬物動態学的パラメータ値を、コンパートメント解析を用いて、個々の被験者について推定した。研究第１日の最初の用量、研究第１４日の最後の用量及び研究第１０、１１、１２及び１３日のトラフ濃度からのデータを、各個々の被験者について同時にシミュレートした。求めたパラメータは、中央コンパートメントの容積（Ｖ_１）、終末消失速度定数（ガンマ）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態の分布容積（Ｖ_ｓｓ）、半減期（ｔ_１／２）、最高濃度（Ｃ_ｍａｘ）、最高濃度の時間（Ｔ_ｍａｘ）、第１４日についての血中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ_τ）並びに対応する用量規格化Ｃ_ｍａｘ及び用量規格化ＡＵＣ_τであった。各個人に対して最適なモデルを用いることによって、１４日間にわたる個々の濃度−時間特性を予測して、研究期間にわたる慢性暴露量、すなわちＣ_ｍａｘ及び全日−ＡＵＣ_０〜∞（研究中のすべての１４用量を考慮に入れた、時間０から無限大までの予測された血中濃度−時間特性下面積）を推定した。
【０１８７】
［０２１５］研究第１４日の用量について、用量比例関係を評価するために、用量規格化Ｃ_ｍａｘの対数、用量規格化ＡＵＣ、及び終末消失速度定数に対して共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を行った。センター（ｃｅｎｔｅｒ）及び用量が因子であり、体重が共変量であった。定常状態に到達したかどうかの疑問に対処するため、研究第１０〜１４日の用量規格化投与前濃度に対して、センター及び用量レベルを因子として反復測定分析を行った。
【０１８８】
［０２１６］薬物動態
［０２１７］すべての被験者についてのゾタロリムス血中濃度−時間データは、１次消去を伴う３コンパートメント開放モデルによって説明した。第１日、第１４日及び第１から１４日についてのゾタロリムスの平均血中濃度を図７に示す。ゾタロリムスの薬物動態学的パラメータの平均±標準偏差を表１４に示す。
【０１８９】
【表１６】

【０１９０】
［０２１８］研究した投与計画にわたって観察対予測診断プロットにおいて偏りは観察されなかったので、研究した用量投与計画にわたるコンパートメント薬物動態学的パラメータの範囲は非常に狭く、２次パラメータにおいて、研究した投与計画にわたって有意な傾向は観察されず、研究した投与計画にわたって、ゾタロリムスについて用量線形性が推測された。
【０１９１】
［０２１９］以下の図は、ゾタロリムスの第１４日のＣ_ｍａｘ及びＡＵＣ_{０〜２４ｈ}における用量比例関係を示す。図８ａ、８ｂ及び８ｃは、それぞれ第１日、第１４日、及び第１〜１４日の、２００、４００及び８００μｇＱＤ用量群についての、平均ゾタロリムス血中濃度−時間特性を示す。各用量群について、図９（８００μｇＱＤ用量群のデータをフィッティングしたときの、時間に対する平均観察血中濃度及び予測血中濃度のプロットの例）に例示したように、モデルは、第１日並びに第１４日及びその間のデータを十分に説明した。線形動態を仮定する３コンパートメントモデルによる、第１日から第１４日にわたる、観察されたゾタロリムス濃度−時間のデータの良好な適合は、ゾタロリムスが、時間に不変なクリアランスを示すことを示す。
【０１９２】
［０２２０］図９に示すように、研究第１０〜１４日の用量規格化投与前濃度において、統計学的差異は観察されなかった。
【０１９３】
［０２２１］２００、４００及び８００μｇＱＤ用量群についてのＣ_ｍａｘの中央値は、それぞれ１１．４、２２．１及び３８．９ｎｇ／ｍＬであった。対応する全日−ＡＵＣ_０〜∞の中央値は、それぞれ６７７、１４３８、及び２３９５ｎｇ・ｈ／ｍＬであった。
【０１９４】
［０２２２］尿中に排出されたゾタロリムス用量の割合を、８００μｇＱＤ用量群について計算した。平均して、第１日及び第１４日の２４時間以内で、約０．１％のゾタロリムスが尿中に回収された。
【０１９５】
［０２２３］安全性
［０２２４］ゾタロリムスに関係した最も一般的な、治療により発現した有害事象は、疼痛、頭痛、注射部位の反応、乾燥皮膚、腹痛、下痢及び発疹であった。大部分の有害事象は、重傷度において軽度であり、自然に回復した。本研究において、重大な有害事象は報告されなかった。具体的には、免疫抑制、ＱＴｃ延長又は臨床上重大な有害事象の任意の臨床的又は生化学的証拠を示した被験者はいなかった。
【０１９６】
［０２２５］結論
［０２２６］ゾタロリムスの薬物動態は、研究した用量投与計画にわたって、連続１４日間静脈内に投与された場合、用量比例的であり、時間に不変であった。
【０１９７】
［０２２７］ゾタロリムスのＱＤ投薬に対する定常状態は、第１０日までに到達し、この日に最初のトラフ試料を測定した。
【０１９８】
［０２２８］１日当たり、用量の約０．１％が尿中に変化していない薬物として排泄されたので、腎排泄は、ゾタロリムスにとって排出の主要経路ではない。
【０１９９】
［０２２９］ゾタロリムスは、連続１４日間に、２００、４００、及び８００μｇの複数回用量として投与される場合、一般に良好な耐容性を示す。
【０２００】
［０２３０］実施例８ ゾタロリムス及びデキサメタゾンそれぞれの抗炎症作用
［０２３１］経皮経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）及びステント術後の炎症応答は、再狭窄に関係する血管リモデリングに役割を果すことが示されてきた｛Ｒ．Ｇ．Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｒ．Ｓ．Ｐａｎｕｓｈ及びＣ．Ｊ．Ｐｅｐｉｎｅ、Ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｕｓｅ ｏｆ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ，Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ、６０、３、１９８７、５６Ｂ〜６０Ｂ；Ｊ．Ｓ．Ｆｏｒｒｅｓｔｅｒ、Ｍ．Ｆｉｓｈｂｅｉｎ、Ｒ．Ｈｅｌｆａｎｔ及びＪ．Ｆａｇｉｎ、Ａ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏｒ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ：ｃｌｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｗ ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ ｔｈｅｒａｐｉｅｓ、Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ、１７、３、１９９１、７５８〜６９；Ｓ．Ｐ．Ｋａｒａｓ、Ｅ．Ｃ．Ｓａｎｔｏｉａｎ及びＭ．Ｂ．Ｇｒａｖａｎｉｓ、Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ、Ｃｌｉｎ Ｃａｒｄｉｏｌ、１４、１０、１９９１、７９１〜８０１；Ｐ．Ｌｉｂｂｙ及びＳ．Ｋ．Ｃｌｉｎｔｏｎ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｓ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ｎｏｕｖ Ｒｅｖ Ｆｒ Ｈｅｍａｔｏｌ、３４ Ｓｕｐｐｌ、１９９２、Ｓ４７〜５３｝。循環単球、マクロファージ、好中球、好酸球、血小板、血管平滑筋及び内皮細胞を含めた、多数の細胞型がこの応答に寄与する｛Ｒ．Ｇ．Ｍａｃｄｏｎａｌｄ、Ｒ．Ｓ．Ｐａｎｕｓｈ及びＣ．Ｊ．Ｐｅｐｉｎｅ、Ｒａｔｉｏｎａｌｅ ｆｏｒ ｕｓｅ ｏｆ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ、６０、３、１９８７、５６Ｂ〜６０Ｂ｝。ＰＴＣＡ後の免疫細胞の活性化は、サイトカイン／ケモカインの産生及び循環単球の血管壁への動員をもたらす。単球によって産生される、３種の重要なサイトカインは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１）、及びインターロイキン６（ＩＬ−６）である。それらは、ＰＴＣＡ後に増加することが示されてきており、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６のレベルの増加は、再狭窄の発症率の増加に関係する｛Ｙ．Ｈｏｊｏ、Ｕ．Ｉｋｅｄａ、Ｔ．Ｋａｔｓｕｋｉ、Ｏ．Ｍｉｚｕｎｏ、Ｈ．Ｆｕｋａｚａｗａ、Ｈ．Ｆｕｊｉｋａｗａ及びＫ．Ｓｈｉｍａｄａ、Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ ａｓ ａ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、１５６、１、２００１、１６５〜７０；Ｆ．Ｃｉｐｏｌｌｏｎｅ、Ｍ．Ｍａｒｉｎｉ、Ｍ．Ｆａｚｉａ、Ｂ．Ｐｉｎｉ、Ａ．Ｉｅｚｚｉ、Ｍ．Ｒｅａｌｅ、Ｌ．Ｐａｌｏｓｃｉａ、Ｇ．Ｍａｔｅｒａｚｚｏ、Ｅ．Ｄ’Ａｎｎｕｎｚｉｏ、Ｐ．Ｃｏｎｔｉ、Ｆ．Ｃｈｉａｒｅｌｌｉ、Ｆ．Ｃｕｃｃｕｒｕｌｌｏ及びＡ．Ｍｅｚｚｅｔｔｉ、Ｅｌｅｖａｔｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ−１ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ、２１、３、２００１、３２７〜３４｝。腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）は、再狭窄の病態生理において関係づけられてきた細胞型である、単球及び組織マクロファージによって産生される、炎症促進性サイトカインである（Ｍｏｒｅｎｏ ＰＲ、Ｂｅｒｎａｒｄｉ ＶＨ、Ｌｏｐｅｚ−Ｃｕｅｌｌａｒ Ｊ、Ｎｅｗｅｌｌ ＪＢ、ＭｃＭｅｌｌｏｎ Ｃ、Ｇｏｌｄ ＨＫ、Ｐａｌａｃｉｏｓ ＩＦ、Ｆｕｓｔｅｒ Ｖ、Ｆａｌｌｏｎ ＪＴ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ｐｒｅｄｉｃｔｓ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｆｔｅｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｕｎｓｔａｂｌｅ ａｎｇｉｎａ．Ｃｉｒｃ、９４（１２）、１９９６：３０９８〜１０２）。ＴＮＦαレベルは、ステント内再狭窄を有するヒトにおいて増加することが示されており、このサイトカインのレベルは、血管形成術後に増加する（Ｋｏｚｉｎｓｋｉ Ｍ、Ｋｒｚｅｗｉｎａ−Ｋｏｗａｌｓｌｋａ Ａ、Ｋｕｂｉｃａ Ｊ、Ｚｂｉｋｏｗｓｋａ−Ｇｏｔｚ Ｍ、Ｄｙｍｅｋ Ｇ、Ｐｉａｓｅｃｋｉ Ｒ、Ｓｕｋｉｅｎｎｉｋ Ａ、Ｇｒｚｅｓｋ Ｇ、Ｂｏｇｄａｎ Ｍ、Ｃｈｏｊｎｉｃｋｉ Ｍ、Ｄｚｉｅｄｚｉｃｚｋｏ Ａ、Ｓｙｐｎｉｅｗｓｋａ Ｇ．Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ａ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｆｏｒ ｉｎ−ｓｔｅｎｔ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ −− ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｕｎｓｔａｂｌｅ ａｎｇｉｎａ：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：５４：２００５：１８７〜９３）。ステントに添加された抗ＴＮＦα抗体は、ヒト伏在静脈培養における細胞増殖のマーカーであるＰＣＮＡを低減することが示されており、ＴＮＦαの作用を遮断することは、新生内膜過形成の低減をもたらし得ることを示している（Ｊａｖｅｄ Ｑ、Ｓｗａｎｓｏｎ Ｎ、Ｖｏｈｒａ Ｈ、Ｔｈｕｒｓｔｏｎ Ｈ、Ｇｅｒｓｈｌｉｃｋ ＡＨ．；Ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ−ａｌｐｈａ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｅｌｕｔｉｎｇ ｓｔｅｎｔｓ ｒｅｄｕｃｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｓａｐｈｅｎｏｕｓ ｖｅｉｎ ｏｒｇａｎ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｐａｔｈ、７３（２）：２００２：１０４〜１１）。さらに、ＴＮＦαレベルを増加させることにより、血管平滑筋及び内皮細胞によるサイトカイン産生を活性化することができ、これは、血管壁における炎症応答の持続を導き得る。
【０２０１】
［０２３２］グルココルチコステリオドのデキサメタゾンは、いくつかの細胞型に対して強力な抗炎症作用を有する。デキサメタゾンは、抗再狭窄剤として提案されてきており、Ｄｅｘａｍｅｔ薬物溶出ステント（Ａｂｂｏｔｔ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｉｎｃ．からヨーロッパで市販されている（確認されたい）で現在用いられている｛Ｄ．Ｗ．Ｍｕｌｌｅｒ、Ｇ．Ｇｏｌｏｍｂ、Ｄ．Ｇｏｒｄｏｎ及びＲ．Ｊ．Ｌｅｖｙ、Ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｔｅｎｔ ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ、５、５、１９９４、４３５〜４２｝。しかし、ヒト単球によるこれらの重要なサイトカインの産生に対する、免疫抑制剤ゾタロリムス及びシロリムスの作用は、以前には知られていなかった。
【０２０２】
［０２３３］さらに他の実施形態では、第２の薬物は、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤からなる群のメンバーである。なおさらに他の実施形態では、第２の薬物は、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法及びＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、並びにそれらの塩、エステル、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せの群からなる抗ＴＮＦα療法を含む。
【０２０３】
［０２３４］活性化されたヒト単球によるＴＮＦα、ＩＬ−６及びＭＣＰ−１の産生に対する、ゾタロリムス、シロリムス及びデキサメタゾンの作用を判定するために実験を行った。単球及びマクロファージに加えて、２つの他の重要な細胞型である、動脈平滑筋細胞及び内皮細胞が、再狭窄の病因に関与する。これらの細胞は、ＴＮＦαに応答して活性化され、サイトカインを産生する。デキサメタゾン、ゾタロリムス及びシロリムスの抗炎症作用を判定するため、ヒト冠動脈内皮細胞及びヒト冠動脈平滑筋細胞（それぞれｈＣａＥＣ＆ｈＣａＳＭＣ）で実験を行った。ＴＮＦα処置後のヒト冠動脈平滑筋細胞及びヒト冠動脈内皮細胞によるサイトカイン産生の活性化を、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６の産生を測定することによって判定した。以下に説明する実験結果によって示すように、これらのサイトカインは、再狭窄の発症に役割を果すので、これらの化合物のサイトカイン産生を阻害する能力は、抗再狭窄剤と組み合わせたそれらの使用を支持する。
【０２０４】
［０２３５］方法
［０２３６］ヒト単球（Ｃａｍｂｒｅｘ、Ｅａｓｔ Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ ＮＪ）を、９６ウェルマイクロプレート中に蒔き（６０，０００細胞／ウェル）、３７℃で４８時間培養し、次いで培地中の試験化合物の存在下及び非存在下で、細菌リポ多糖（ＬＰＳ、２５又は１００ｎｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。２４時間後、上澄みを慎重に採取し、ＴＮＦα、ＩＬ−６及びＭＣＰ−１のレベルをＥＬＩＳＡによって求めた。ヒト冠動脈内皮細胞及びヒト冠動脈平滑筋細胞の初代培養物は、Ｃａｍｂｒｅｘから得、この供給業者によって説明されているように維持した。細胞を、５０００細胞／ウェル（ｈＣａＳＭＣ）及び７５００細胞／ウェル（ｈＣａＥＣ）の濃度で、９６ウェルマイクロプレート中に蒔き、付着させた。２４時間後、上澄みを取り出し、様々な濃度のゾタロリムス、デキサメタゾン又はシロリムスの存在下及び非存在下で、ＴＮＦα（５ｎｇ／ｍｌ）を含有する培地と置換した。細胞を２４時間インキュベートし、上澄みを慎重に取り出し、測定まで凍結させた。サイトカインレベルを上澄み中でサンドイッチＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２０５】
［０２３７］結果及び結論
［０２３８］図１０は、デキサメタゾン、ゾタロリムス及びラパマイシンがすべて、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒト単球によるＭＣＰ−１産生を用量依存的に阻害することを示す。しかし、ゾタロリムス及びラパマイシンは、デキサメタゾンよりこの作用においてずっと強力で効果的である。逆に、デキサメタゾンは、ＴＮＦα及びＩＬ−６の産生を強力に遮断し、これらの作用は、ゾタロリムス又はラパマイシンにいずれによっても示されていない（図１０及び１１）。ｈＣａＳＭＣにおいて、活性を示す唯一の薬剤はデキサメタゾンであった。これは、サイトカイン産生を用量依存的に阻害する。デキサメタゾンは、ｈＣａＳＭＣのＭＣＰ−１産生を５７．２％、ＩＬ−６を６５．７％、及びＩＬ−８を６８．４％遮断する。全３種の細胞型についてのデータを表１５に要約する。試験した薬剤のうちで、ｈＣａＥＣによるサイトカイン産生を、対照と比較して５０％阻害したものはなかった。全３種のサイトカイン（ＴＮＦα、ＭＣＰ−１及びＩＬ−６）の産生の遮断は、再狭窄の予防において有益な抗炎症作用であるので、これらのデータは、ゾタロリムス及びデキサメタゾンの併用を支持する。
【０２０６】
【表１７】

【０２０７】
［０２３９］実施例９．ゾタロリムス及びデキサメタゾンの抗増殖活性
［０２４０］デキサメタゾンは、抗再狭窄剤として提案されてきており、Ｄｅｘａｍｅｔ薬物溶出ステント（Ａｂｂｏｔｔ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓからヨーロッパで市販されている）で現在用いられている。デキサメタゾンは、強力なｈＣａＳＭＣの抗増殖剤であるが、ｈＣａＥＣの抗増殖剤ではないことが、これまで示されてきた（Ｌｉ Ｌ、Ｂｕｒｋｅ，ＳＥ、Ｃｈｅｎ，Ｙ−ＣＪ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇｓ ｉｎ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｎｄ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．：Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｐｏｓｔｅｒ Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ；２００３年１０月２７日：Ｒ．Ｖｏｉｓａｒｄ、Ｕ．Ｓｅｉｔｚｅｒ、Ｒ．Ｂａｕｒ、Ｐ．Ｃ．Ｄａｒｔｓｃｈ、Ｈ．Ｏｓｔｅｒｈｕｅｓ、Ｍ．Ｈｏｈｅｒ及びＶ．Ｈｏｍｂａｃｈ、Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ ａｇｅｎｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ａｒｔｅｒｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ、Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ、４３、３、１９９４、２５７〜６７）。その抗増殖活性に加えて、デキサメタゾンは、強力な抗炎症活性も有する。ステント植込み後の炎症は、再狭窄を促進すると提唱されており、血管炎症応答を妨げる薬剤は、再狭窄を減弱することができる（Ｐ．Ｌｉｂｂｙ及びＳ．Ｋ．Ｃｌｉｎｔｏｎ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｓ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、Ｎｏｕｖ Ｒｅｖ Ｆｒ Ｈｅｍａｔｏｌ、３４ Ｓｕｐｐｌ、１９９２、Ｓ４７〜５３）。
【０２０８】
［０２４１］ゾタロリムスとコルチコステロイドのデキサメタゾンとの相互作用を調査するために、実験を行った。ヒト冠動脈平滑筋細胞（ｈＣａＳＭＣ）及びヒト冠動脈内皮細胞（ｈＣａＥＣ）におけるゾタロリムスの抗増殖活性に対するデキサメタゾンの作用を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖アッセイを用いて判定した。血管平滑筋細胞の血管新生内膜への増殖及び遊走は、再狭窄病変に見られる特徴的な病理的応答である（Ａ．Ｌａｆｏｎｔ及びＰ．Ｌｉｂｂｙ、Ｔｈｅ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ：ｓｉｎｎｅｒ ｏｒ ｓａｉｎｔ ｉｎ ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ？ Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ、３２、１、１９９８、２８３〜５）。結果として、ヒト冠動脈平滑筋細胞及びヒト冠動脈内皮細胞に対する候補の抗再狭窄化合物の抗増殖活性を特異的に測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより、ｉｎ ｖｉｖｏでの潜在的な抗再狭窄活性が予測されるはずである。トリチウム取込みアッセイ（ｔｒｉｔｉｕｍ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）は、細胞数及び増殖を測定するために当技術分野で用いられる正確で感受性の高い方法である。ｉｎ ｖｉｔｒｏでトリチウム取込みアッセイによって測定される場合、増殖因子介在ヒト冠動脈平滑筋細胞（ｈＣａＳＭＣ）増殖を減弱させる化合物又は化合物の組合せは、候補の抗再狭窄剤である。このアッセイは、単独で抗増殖活性を示す薬剤が、組合せ物においても同様の活性を示すかどうかを判定するために用いた。
【０２０９】
［０２４２］さらに、低い効力の抗増殖活性を示す薬剤は、組合せ物として投与される場合、より強力な抗増殖剤の活性を遮断する場合がある。ゾタロリムスの抗増殖活性のタクロリムスによる減弱は、この作用の明瞭な例である（図１２）。図でわかるように、タクロリムス（「Ｔ」）は、ｈＣａＳＭＣにおいて、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断した。タクロリムス（１００ｎＭ）は、ゾタロリムスのＩＣ５０を増大させ、タクロリムス（２５０ｎＭ以上）の存在は、ゾタロリムス（４ｎＭ）の活性を完全に遮断した。ゾタロリムス及びタクロリムスの両方は、共通の受容体ＦＫＢＰ−１２に結合するが、それぞれの結合は、異なるシグナル経路に影響を及ぼす。
【０２１０】
［０２４３］ゾタロリムスとデキサメタゾンの組合せの潜在的な抗再狭窄活性を判定するため、ｈＣａＳＭＣ及びｈＣａＥＣの増殖を、各単一化合物及び組合せ物の存在下において測定した。
【０２１１】
［０２４４］デキサメタゾンは、いくつかの細胞型における細胞分裂に必要な重要なタンパク質の合成を抑制し、強力な抗炎症剤である（Ｖｏｉｓａｒｄ Ｒ、Ｓｅｉｔｚｅｒ Ｕ、Ｂａｕｒ Ｒら、Ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ ａｇｅｎｔｓ ｉｎｈｉｂｉｔ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ｍａｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ ａｒｔｅｒｉｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９４年３月１日；４３（３）：２５７〜２６７；Ｎ．Ｂａｇｈｄａｓｓａｒｉａｎ、Ａ．Ｐｅｉｒｅｔｔｉ、Ｅ．Ｄｅｖａｕｘ、Ｐ．Ａ．Ｂｒｙｏｎ及びＭ．Ｆｒｅｎｃｈ、Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ｐ２７Ｋｉｐ１ ｉｎ ｔｈｅ Ｇ１− ａｎｄ Ｓ／Ｇ２−ｐｈａｓｅ ｌｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ、Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ、１０、６、１９９９、４０５〜１２）。ラパマイシンのように、ゾタロリムスは、ｍＴＯＲ阻害によってサイクリン依存性キナーゼを遮断し、Ｇ１−Ｓ期で細胞周期進行を阻害する（Ｓ．Ｏ．Ｍａｒｘ、Ｔ．Ｊａｙａｒａｍａｎ、Ｌ．Ｏ．Ｇｏ及びＡ．Ｒ．Ｍａｒｋｓ、Ｒａｐａｍｙｃｉｎ−ＦＫＢＰ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ、Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ、７６、３、１９９５、４１２〜７；Ｓｅｈｇａｌ Ｓ．Ｎ．、Ｒａｐａｍｕｎｅ（ＲＡＰＡ、ｒａｐａｍｙｃｉｎ、ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）：ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９８年７月；３１（５）：３３５〜３４０；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌ、Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ：ｉｔｓ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ、３５、３ Ｓｕｐｐｌ、２００３、７Ｓ〜１４Ｓ）。デキサメタゾンが、ｈＣａＳＭＣでのゾタロリムスの抗増殖活性を減弱したか又は増強したかを判断するために、増殖因子誘導増殖に対する、単独及び組合せでのこれらの薬剤の作用を判定した。血管病変部の再内皮化は、有益であると考えられるので、ｈＣａＥＣでの両薬剤の抗増殖作用を、単独及び組合せにおいて評価した。以下に説明する、アイソボログラム手法及び併用指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）分析を用いて、データを相互作用（相加性）について分析した。
【０２１２】
［０２４５］増殖アッセイ法
［０２４６］^３Ｈチミジン取込み研究
［０２４７］細胞増殖を、血清及び増殖因子によって刺激された細胞の、新規に合成されたＤＮＡへの^３Ｈ−チミジンの取込みを追跡することによってモニターした。指数関数的に増殖しているｈＣａＳＭＣを、９６ウェル平底組織培養プレート中に、５０００細胞／ウェル（ｈＣａＥＣについては１００００細胞／ウェル）で蒔いた。これらの細胞を一晩付着させた。翌日に増殖培地を取り出し、細胞を無補足（基本）培地で２回洗浄することによって、微量の血清及び増殖因子を除去した。基本培地（２００μｌ）を各ウェルに加え、細胞を、増殖因子及び血清のない培地中でインキュベートすることによって飢餓させ、それらをＧ_０状態に同調させた。血清及び増殖因子のない培地中での飢餓後（ｈＣａＳＭＣについて４８時間及びｈＣａＥＣについて３９時間）、細胞を、所望の濃度の薬物の非存在下又は存在下で、２００μｌの補足培地を補充した。すべてのウェルにおいて、ＤＭＳＯを０．１％の最終濃度で維持した。７２時間のインキュベーション期間後、２５μｌ（１μＣｉ／ウェル）の^３Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、各ウェルに加えた。細胞を３７℃で１６〜１８時間インキュベートすることによって、新規に合成されたＤＮＡ中に^３Ｈ−チミジンを取り込ませ、細胞ハーベスター（Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ ９６００、ＴＯＭＴＥＣ）を用いて、結合したガラス繊維フィルターを含む９６ウェルプレート上に細胞を収集した。フィルタープレートを一晩空気乾燥させ、ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０（２５μｌ）を各フィルターウェルに加え、これらのプレートを、ＴｏｐＣｏｕｎｔマイクロプレートシンチレーションカウンターを用いてカウントした。対照は、培地のみ、飢餓細胞、及び完全培地中の細胞を含んでいた。薬物活性は、完全培地中で増殖した細胞と比べた、新規に合成されたＤＮＡへの^３Ｈ−チミジンの取込みの阻害を測定することによって確証した。
【０２１３】
［０２４８］データは、ビヒクル処置対照と比べた^３Ｈ−チミジンの取込みの阻害率として示し、３〜４実験の平均±標準誤差として提供する。各実験からの阻害の平均値対薬物濃度の片対数プロットを作成し、各実験に対するＩＣ_５０を、薬物の非存在下の完全培地中でインキュベートした細胞と比べた、５０％阻害レベルの外挿によって求めた。最終的なＩＣ_５０は、３〜４実験の平均である。
【０２１４】
［０２４９］これらの実験において、ｘ軸は、変更される薬物の濃度を表す。これらの曲線のほとんどについては、それは単独及び固定濃度のデキサメタゾンとの組合せのゾタロリムスである。各グラフは、デキサメタゾン単独の曲線及びゾタロリムス単独の曲線を含む。各グラフの一連の曲線は、固定濃度（１、５、１０又は２５ｎＭ）のデキサメタゾンを、様々な濃度のゾタロリムス（０、０．０４、０．０８、０．８、４、８、４０ｎＭ）に加えることによって作成する。各曲線は、固定濃度のデキサメタゾン（凡例に与えられている）の存在下でのゾタロリムス（その濃度は、ｘ軸に与えられている）の用量応答を表す。ｈＣａＥＣにおいて、より高い固定濃度のデキサメタゾンを用いた（１、１０、１００、１０００ｎＭ）ことに注意されたい。
【０２１５】
［０２５０］２つの方法を用いることによって、ｈＣａＳＭＣ増殖に対するゾタロリムスとデキサメタゾンの併用効果を分析した。Ｔａｌｌａｒｉｄａの方法（Ｒ．Ｊ．Ｔａｌｌａｒｉｄａ，Ｄｒｕｇ ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ：ｉｔｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ、２９８、３、２００１、８６５〜７２）を用いて、いくつかの効果レベルでアイソボログラムを作成した。濃度応答曲線を、非線形回帰（Ｐｒｉｓｍ、ＧｒａｐｈＰａｄ）によって合わせることによって、ＥＣ_５０及びヒル勾配の値を得た。特定の抗増殖作用を誘発する濃度は、４パラメータ方程式（式１）を用いて求めた。
【０２１６】
［０２５１］Ｙ＝最下値＋（最上値−最下値）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）＊ヒル勾配））
Ｘは、濃度の対数である。Ｙは、応答である。
或いは：
【０２１７】
【数１】

【０２１８】
［０２５２］式中、Ｘ＝Ｙ応答を生じる、薬物の対数濃度であり、最上値及び最下値は、それぞれ１００及び０に限定される。アイソボログラムに加えて、以下の例外とともにＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法（Ｔ．Ｃ．Ｃｈｏｕ及びＰ．Ｔａｌａｌａｙ、Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ、２２、１９８４、２７〜５５）を用いて、データを相乗作用について分析した。非線形４パラメータ方程式は、濃度−応答曲線をより正確にシミュレートするので、各曲線に対して作成した回帰モデルを、中央値−効果（ｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ）データの代わりに用いた（対数−ロジットプロット）。中央値−効果プロットは、０．２未満及び０．８超の部分占有率の値によって大いに影響を受ける。２５％、５０％、６０％及び７５％を生じる、いくつかの薬物の組合せに対する併用指数（ＣＩ）を、式２によって計算した（Ｃｈｏｕ ＴＣ、Ｔａｌａｌａｙ Ｐ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．１９８４；２２：２７〜５５）。
【０２１９】
［０２５３］（Ｄ）_１／（Ｄ_ｘ）_１＋（Ｄ）_２／（Ｄ_ｘ）_２＋（（Ｄ）_１（Ｄ）_２）／（Ｄ_ｘ）_１（Ｄ_ｘ）_２＝ＣＩ（式２）
【０２２０】
［０２５４］式中、特定の効果レベルにおいて、（Ｄ）_１及び（Ｄ）_２は、組合せ中の薬物１及び薬物２の濃度であり、（Ｄ_ｘ）_１及び（Ｄ_ｘ）_２は、薬物１単独及び薬物２単独の濃度である。
【０２２１】
［０２５５］ＣＩ値は、各薬物がその独自の効力によって作用していたと仮定して、組合せの効果の加重を反映する。式２は、２つの相互に非排他的な化合物の組合せに対して予測される効果を記述する。各薬物が、その独自の用量依存的部分占有率に応じて併用効果に寄与する場合、ＣＩは１に等しい。ＣＩは、観察される効果のレベルに依存するので、ＣＩを、複数の薬物組合せを用いていくつかの効果レベルにおいて求めた。ＣＩ値を、それらが計算された効果レベル（又はｆａ）の関数としてプロットした。ＣＩ値は、アイソボログラム分析と同様に、効果レベル依存性であり、効果のレベルが変化すると変動し、したがって、ＣＩ値を比較する際には効果レベルを考慮することが重要である。ＣＩ値の精度は、その結果としてそれらの計算に用いる濃度値の精度に依存する。本研究では、正確な方法（ＧｒａｐｈＰａｄのソフトウェアによる反復曲線フィッティング）を用いることによって、いくつかの効果レベルでの各累積用量−応答曲線から薬物濃度を計算した。用量−応答曲線は、データに合わせることができ、これにより、わずかな用量依存活性も示すことができる。これは、高濃度の、試験薬剤のうちの１つの存在下で作成された用量−応答曲線を分析する場合、特に明白である。これらの条件下での用量−応答曲線からの薬物濃度の決定における誤差は、低効果レベル（ｆ_ａ）で高ＣＩ値をもたらす場合がある。したがって、最大半量の効果付近又は最大半量の効果の上（すなわち、ｆ_ａ〜０．５）での明瞭な用量−応答曲線から生じるＣＩ値は、薬物組合せ物の活性の最も正確な予測判断材料である。これらの条件下で、１未満のＣＩ値は、超相加的であるとみなされ、１を大きく超える値は、亜相加的であるとみなされる。１付近の値は、相加的であるとみなされる。
【０２２２】
［０２５６］結果及び結論
［０２５７］図１３は、デキサメタゾンは、ｈＣａＥＣの増殖に影響を及ぼさないが、９．３ｎＭのＩＣ_５０（表１６）を伴って、ｈＣａＳＭＣの増殖を用量依存的に遮断することを示す。さらに、データは、デキサメタゾンの存在は、ゾタロリムスの抗増殖活性を減弱させない、すなわち、組合せ中のこれらの薬物は、補完的であることを示す。データ（図１３）はまた、デキサメタゾン及びゾタロリムスの両方の濃度を増加させることは、ｈＣａＳＭＣ細胞増殖の著しい阻害をもたらすことを示す。この組合せは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでこの活性を示すので、これらのデータにより、ゾタロリムスとデキサメタゾンの組合せは、再狭窄を予防することにおいて有益となることが予測される。
【０２２３】
【表１８】

【０２２４】
［０２５８］より高いデキサメタゾンの用量は、より高いレベルの増殖阻害を達成した。ｈＣａＳＭＣについてのアイソボログラム分析を、図１４に提供し、併用指数（ＣＩ）分析を図１５に提供する。図１４において、特定のレベルの活性を生じさせる濃度は、データ平均値の非線形曲線フィッティングによって作成した用量−応答曲線から求めた。図１５において、ＣＩレベルは、上記に参照したＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法を用いて、平均データから求めた。パラメータｆ_ａは、分数の（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ）阻害率を表す。
【０２２５】
［０２５９］様々な効果レベルでアイソボログラム分析を行うことによって、ゾタロリムス及びデキサメタゾンの組合せが、細胞増殖を阻害することにおいて相加的な活性を有するかどうかを判定した。併用指数分析は同様の結果を示すが、すべての効果レベルを、１つの図で示すことができる。アイソボログラム分析及び併用指数分析の両方は、ゾタロリムスとデキサメタゾンの組合せは、増殖を遮断し、この効果は、ＣＩ値が最大半量の効果レベルで１付近なので、それぞれの単一の薬剤の効果を合計することによって予測される効果と同様であることを示す。ｈＣａＥＣからのデータに対して併用分析を行わなかったが、これは、デキサメタゾンが、この細胞型において活性を示さないためである。
【０２２６】
［０２６０］デキサメタゾンは、ｈＣａＳＭＣの増殖を遮断するが、ｈＣａＥＣの増殖には影響を及ぼさない。さらに、損傷した血管壁の再内皮化は、再狭窄の予防において有益であると考えられるので、これらのデータは、デキサメタゾンの抗再狭窄剤としての使用を支持する。
【０２２７】
［０２６１］実施例１０．溶出実験
［０２６２］Ｉ．ＰＣ−１０３６でのステントの被覆（ＰＣ−２１２６を加えるべきかについてＪｏｈｎは考えている）
【０２２８】
［０２６３］あらゆる実験の前に、被覆したステントを作製した。これらは、３．０ｍｍ×１５ｍｍの３１６Ｌ電解研磨ステンレス鋼のステントであった。それぞれの清潔なステントを、濾過した２０ｍｇ／ｍＬの、ホスホリルコリンポリマーＰＣ−１０３６（Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ Ｌｔｄ．、Ｆａｒｎｈａｍ、Ｓｕｒｒｅｙ、ＵＫの製品）のエタノール溶液を用いて、スプレー被覆した。これらのステントを最初に空気乾燥させ、次いで７０℃で１６時間硬化させた。次いでそれらを＜２５ＫＧｙのγ線照射に出した。
【０２２９】
［０２６４］ＩＩ．ステントへの対象の薬物の添加
［０２６５］これらの実験において、薬剤をステント上に添加し、溶出特性を調査した。一般に、手順は以下のようであった。複数のＰＣ被覆ステントに、薬物又は薬物組合せ物の溶液を添加した。薬物（複数も）の溶液は、通常１００％のエタノール中に、２〜２０ｍｇ／ｍＬのゾタロリムス（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ（ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ））及び１０．０ｍｇ／ｍＬのデキサメタゾンの範囲であり、この溶液に〜１０％のＰＣ−１０３６を加えることによって、被膜形成を増強した。薬物組合せ物及び個々の薬物のステントへの添加は、アイソレーターユニット（ｉｓｏｌａｔｏｒ ｕｎｉｔ）内の単一パス（ｓｉｎｇｌｅ ｐａｓｓ）スプレー装置での、所望の薬物（複数も）のステントへのスプレー添加によって達成した。すべての薬物溶出ステントは、Ａｂｂｏｔｔ専売のＴｒｉＭａｘｘの構築物である１５ｍｍ×３．０ｍｍのステントから作製し、すべてのカテーテルは、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）のＯＴＷ、１５ｍｍ×３．０ｍｍであった。各組合せのために作製した数は、溶出の加速、薬物添加含有量、不純物特性、及び動物有効性試験のために十分な数を提供した。
【０２３０】
［０２６６］ステントは、薬物溶液を添加する前に計量した。エタノール中に適切な薬物（複数も）とＰＣ１０３６を９１：９の比で含有する溶液から、すべてのステントに、それらの目標とする薬物含有量までスプレー添加した。デキサメタゾン：ゾタロリムスの組合せについては、各薬物１０μｇ／ｍｍでステントを作製した。１０μｇ／ｍｍのゾタロリムス単独を、単一薬物ステント上に添加した。添加したら、すべてのステントを、４０℃に設定した乾燥器において、開放したバイアル中で３０分間乾燥させ、計量して薬物の添加量を求めた。次いで薬物添加ステントを、１０ｍｇ／ｍｌのポリマーのエタノール溶液を用いてスプレーすることによって、５μｇ／ｍｍのＰＣ１０３６で上塗りした。
【０２３１】
［０２６７］上塗り後、ステントを、乾燥器中で７０℃で２時間硬化させた後、計量して上塗り層の重量を求めた。薬物を添加した後、ステントを、カテーテル上に取り付け、バルーン上に圧着した。次いでこのステントを、被膜及び物理的欠陥について視覚的に検査した。それぞれのステント／カテーテルを、パッケージングフープ（ｐａｃｋａｇｉｎｇ ｈｏｏｐ）中に挿入し、次いでＴｙｖｅｋのポーチ中に挿入した。このポーチを、Ｖｅｒｔｒｏｄ Ｉｍｐｕｌｓｅ Ｈｅａｔシーラーで密封した。ステント識別ラベルを、製品を含む密封領域の外側の、ポーチ正面の下隅に配置した。次いで製品を、製品詳細を張った白色の箱に入れ、ＥｔＯ滅菌のために発送した。滅菌から戻されると、製品は、酸素捕捉剤及び乾燥剤の小袋を含むホイルポーチ中に梱包されていた。これらのポーチには、ステント識別番号及び製品詳細が張られていた。これらのポーチは、窒素を流しながら密封された。
【０２３２】
［０２６８］ＩＩＩ．ステントからの薬物の抽出
［０２６９］試験したそれぞれの薬物又は薬物組合せ物に対して、３つのステントを用いることによって、上記手順によって添加された薬物の全量を評価した。ステントを、６ｍＬの５０％アセトニトリル、５０％緩衝液の溶液に浸漬し、２０分間超音波処理した。抽出溶液中の各薬物の濃度を、ＨＰＬＣによって分析した。
【０２３３】
［０２７０］以下に考察する溶出実験の最後に、ステントを溶出媒体から取り出し、６ｍＬの５０％アセトニトリル、５０％緩衝液の溶液に浸漬し、２０分間超音波処理した。これらのバイアル中の各薬物の濃度は、溶出実験の最後にステント上に残っている薬物の量を示した。
【０２３４】
［０２７１］ＩＶ．溶出プロセス
［０２７２］ｉｎ ｖｉｔｒｏでの薬物溶出の評価のために、ステント（各群についてｎ＝３）を拡張し、次いでＵＳＰ Ｔｙｐｅ ＩＩ溶解装置中の、３７℃に加熱した、１％Ｓｏｌｕｔｏｌ ＨＳ １５を含む１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ＝４．０）の溶液中に入れた。薬物は非常に低い水溶性しか有さないので、可溶化剤が必要であった。溶解媒体を緩衝することによって、６を超えるｐＨで生じる、「−オリムス」薬物の分解を最小限にした。ｐＨ４での緩衝作用は、この問題を解決する。これらの薬物は、こうしたｐＨ範囲で最小限の解離を有するので、ｐＨは、溶出速度にほとんど影響がない。
【０２３５】
［０２７３］試料を、テフロン、ステンレス鋼、又はガラス表面のみを備えたシリンジサンプラーを用いて、選択した時間間隔に溶解槽から吸い上げた。１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間、１８時間及び２４時間後にアリコートを採取した。試料を、ＨＰＬＣによってゾタロリムス及びデキサメタゾンの濃度についてアッセイする。データを、マイクログラムでの溶出した薬物及び溶出した平均百分率として表す。
【０２３６】
［０２７４］ＨＰＬＣ法において、カラム交換を用いることによって、分析カラムのＳｏｌｕｔｏｌ汚染を最小限にし、ガードカラムのすすぎを可能にすることが必要であり、さもなければシステムはＳｏｌｕｔｏｌで被覆され、クロマトグラフィーの保持が劇的に変化する。試料は、ガードカラム上に最初に注入した。分析物のピークがガードカラムから溶出し、分析カラムに移ると、ガードカラムを分析経路からはずした。次いでガードカラムを洗浄することによって、次の注入の前にＳｏｌｕｔｏｌを除去した。
【０２３７】
［０２７５］Ｖ．溶出結果
［０２７６］図１５、１６及び１７は、上記に詳述したように、ポリマーＰＣ−１０３６の５μｇ／ｍｍの上塗り層を有するステント上に、それぞれ１０μｇ／ｍｍのゾタロリムス及びデキサメタゾンを添加したステントの加速された溶出速度を示す。
【０２３８】
［０２７７］図１５（マイクログラムでの溶出した薬物）において、示された２４時間溶出特性は、抗炎症剤デキサメタゾンの組合せについてであり、抗増殖剤はゾタロリムスである。溶出は、上述したように行った。デキサメタゾンは、最初は、ゾタロリムスよりもわずかに大きなバースト放出であったが、次いで、２種の薬物放出は、およそ同じ速度になった。
【０２３９】
［０２７８］図１６（溶出した薬物（％））は、最終のステント抽出後、ステントに対して測定された全薬物によって規格化した図１５のデータを表す。図に示すように、１００％の両薬物が、ステントの被膜から回収されている。回収された全薬物は、薬物添加プロセスの間のステントの重量取込みによって予測された薬物添加量と良好に一致している。このデータは、同じバッチからのステントでの薬物効力及び関連物質試験とともに、薬物は、上記に概説したように作製される場合、ポリマー被膜中で安定であることを示す。小さなエラーバー（標準偏差を表している）は、２種薬物溶出ステントは、再現性のある溶出動態を伴って作製することができることを示す。
【０２４０】
［０２７９］図１７において、２つの曲線は、同じ条件下での、それぞれ単独及びデキサメタゾンの存在下でのゾタロリムスについての溶出特性（マイクログラムでの放出対時間）である。図に示すように、２つの曲線は非常に類似しており、デキサメタゾンは、ゾタロリムスの溶出特性にほとんど影響がないことを示している。
【０２４１】
［０２８０］実施例１１．ステント植込み後の新生内膜過形成及び内皮化についての試験
［０２８１］この試験は、新生内膜過形成及び内皮化に対する、２種の薬物の効果を判定するために用いた。この試験は、技術で認められた、ブタ冠血管過剰拡張（ｏｖｅｒｓｔｒｅｔｃｈ）モデルを利用し（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｓ．、Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｉｎｊｕｒｙ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９２年２月；１９（２）；２６７〜２７４）、通常約２〜８週間行われる。典型的には、実験構成体は、少なくとも、治療物質又はポリマーを含めた１つの変数の変化を除いた、すべての点において実験ステントと類似しているステントの対照を含む。
【０２４２】
［０２８２］一例では、各ブタにおいて、２つの主要冠動脈に、それぞれ１つの試験ステント（Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）及びＴａｘｕｓ（登録商標））を植え込むことができ、第３の主要冠動脈には、対照のＺｏＭａｘｘ（商標）を植え込む。追加の例は、各主要冠動脈に１つの、３つのＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）対照ステントの植込みを含む。これらの対照ステントに対する応答は、別々の動物に植え込まれたＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）及びＴａｘｕｓ（登録商標）ステントから得られる応答と比較することができる。
【０２４３】
［０２８３］ステントは、標準的な技法を用いて植え込む。研究の終りに、動物を安楽死させ、心臓を取り出し、洗浄し、標準的な組織学的保存技法（ホルマリン、ホルムアルデヒドなどを含めて）を用いて固定する。ステント血管を切り取り、次いで切出しのために、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）、パラフィン、又は凍結媒体（ｃｒｙｏｍｅｄｉａ）を含めた適当な媒体中に浸潤させ、包埋する。ステント血管を含むすべてのブロックは、例えば、３つのステント内切片及び２つの対照切片といった、情報価値のある切片が得られるように切断する。連続した薄い切片（約５μｍ）を、各レベルで通常採取し、染色することによって細胞及び組織を視覚化する（例えば、ヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）及びＭａｓｓｏｎのＶｅｒｈｏｅｆｆ Ｅｌａｓｔｉｎ（ＭＶＥ））。画像解析システム又は他の技術で認められた形態学的データ収集及び定量化の方法を用いて、切片を評価し、記録する。新生内膜面積、新生内膜厚、及び面積狭窄率についてのデータを記録する。
【０２４４】
［０２８４］ブタ冠血管過剰拡張モデル研究（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｓ．、Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｉｎｊｕｒｙ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｍｏｄｅｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９２年２月；１９（２）；２６７〜２７４）を行うことによって、ステント植込み後の新生内膜形成を２８日間調査した。研究により、対照のＺｏＭａｘｘ（商標）薬物含有ポリマー被覆ステントに対するいくつかの無作為化された薬物溶出ステントを評価した。各ブタにおいて、２つの主要冠動脈に、それぞれ１つの試験ステントを植え込み、第３の主要冠動脈に、１つのＺｏＭａｘｘ（商標）ステントを植え込んだ。ＺｏＭａｘｘ（商標）ステントは、１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスを活性医薬剤として含んでいる。さらに、比較のために、３頭のブタに、それぞれ３つの地金のＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）ステント（全部で９ステント）を植え込んだ。本開示の目的のために、５種類のステントを比較した：１）１０ｍｃｇ／ｍｍのゾタロリムスを含有するＺｏＭａｘｘ（商標）ステント（３．０×１５ｍｍ）；２）８．５ｍｃｇ／ｍｍのシロリムスを含む（Ｃｏｒｄｉｓ ＦＤＡ発表で定義されているように）、市販のシロリムス−ポリマー被覆Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）（３．０×１３ｍｍ）ステント；３）６．８ｍｃｇ／ｍｍのパクリタキセルを含む（計算された）、市販のパクリタキセル−ポリマー被覆Ｔａｘｕｓ（登録商標）（３．０×１６ｍｍ）ステント；４）ゾタロリムスとデキサメタゾンの組合せで被覆されたステント（１０ｍｃｇ／ｍｍのそれぞれの薬物で被覆された、３．０×１５ｍｍ）；５）非薬物含有ＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）ステント（３．０×１５ｍｍ）。
【０２４５】
［０２８５］ステントは、定量的冠血管造影によって慣例的に求められた、１．３０のバルーン／動脈比で植え込んだ。
【０２４６】
［０２８６］この研究において、心臓又はステント関連の死亡はなかった。２８日後、動物を安楽死させ、心臓を取り出し、血液が除去されるまで乳酸加リンガー溶液で、続いて１０％中性緩衝化ホルマリンで、〜１００ｍｍＨｇで灌流固定した。次いでステント血管を切り取り、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）中に浸潤させ、包埋した。ステント血管を含むすべてのブロックを、３つのステント内切片と２つの対照切片が採取されるように切断した。２つの連続した薄い切片（約５ミクロン）を各レベルで採取し、ヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）及びＭａｓｓｏｎのＶｅｒｈｏｅｆｆ Ｅｌａｓｔｉｎ（ＭＶＥ）で染色した。ＢＩＯＱＵＡＮＴ（商標）ＴＣＷ９８画像解析システムを用いて、切片を評価し、記録した。新生内膜面積、新生内膜厚、及び％面積狭窄についての、５群内のすべてのステントに対する平均値を図１８〜２０に示す。
【０２４７】
［０２８７］ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）ステントは、ＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）ステントと比較して、従来の形態計測測定で判定した場合、新生内膜形成の等価な低減を有した。ゾタロリムス／デキサメタゾンの組合せを含むステントも、ＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）ステントに対して、新生内膜過形成の著しい低減を示した。さらに、これらのゾタロリムス／デキサメタゾン組合せステント（「Ｚｏｔ／Ｄｅｘ １０／１０」）は、ＺｏＭａｘｘ（商標）ゾタロリムス−ポリマー被覆ステント、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）シロリムス−ポリマー被覆ステント、及びＴａｘｕｓ（登録商標）パクリタキセル−ポリマー被覆ステントに対して、新生内膜の低減のさらなる改善も示した。
【０２４８】
［０２８８］表１７は、対照としてのＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）ステントに対して、ＺｏＭａｘｘ（商標）ポリマー被覆ステント及びゾタロリムス／デキサメタゾン組合せ薬物ステントで得られた改善を要約する。
【０２４９】
【表１９】

【０２５０】
［０２８９］それぞれの最新式の単一薬物ステント、ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）は、ＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）対照ステントに対して、新生内膜形成の劇的な低減を示した。例えば、ＺｏＭａｘｘ（商標）ステントについての新生内膜の平均の低減は、対照に対して３４．５％であった。１０ｍｃｇ／ｍｍゾタロリムス／１０ｍｃｇ／ｍｍデキサメタゾンの組合せ（「Ｚｏｔ／Ｄｅｘ １０／１０」）を含むステントは、商業的に及び臨床試験で入手できる最良の単一薬物ステントで見られた既に印象的な結果に対して、新生内膜形成のいっそうさらなる低減を生じた。ゾタロリムス／デキサメタゾン組合せ薬物溶出ステントは、ＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）非薬物溶出ステントと比較した場合、４９．３％の新生内膜形成の平均の低減を示した。ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）薬物溶出ステントと比較して、新生内膜過形成の追加の劇的な低減は、それぞれ２２．６、２５．４、及び２５．２％であった（表１８）。
【０２５１】
【表２０】

【０２５２】
［０２９０］文献からの以前に公表されたデータ（Ｓｕｚｉｋｉ，Ｔら、Ｓｔｅｎｔ−ｂａｓｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｍｏｄｅｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００１；１０４：１１８８〜１１９３）及び特許出願（Ｆａｌｏｔｉｃｏ Ｒ．、米国特許出願公開第２００３／０２１６６９９号明細書；表６．０）に基づくと、当業者は、’ロリムス（’ｒｏｌｉｍｕｓ）薬物とデキサメタゾンの組合せは、いずれの単独の薬物に対しても、任意の抗増殖性の利点を欠いていると結論づけるだろう。実際に、表６．０には、この作用が明確に記載されていた。対照的に、本発明者らは、本発明者らの組合せ、ゾタロリムス／デキサメタゾンのステントが、非常に効果的であり、広く利用されているブタ冠血管過剰拡張モデルにおいて、新生内膜過形成の低減の改善を提供することを、予想外に実証した。一実施形態では、治療量の’ロリムス薬物は、ゾタロリムス又はエベロリムスを含み、ステント１ｍｍ当たり少なくとも１μｇである。別の実施形態では、第２の薬物は、デキサメタゾンであり、その治療量は、ステント１ｍｍ当たり少なくとも０．５μｇである。
【０２５３】
［０２９１］図２１から２４は、ゾタロリムス及びデキサメタゾンでの本発明者らの結果と、シロリムス及びデキサメタゾンでの以前に公表された結果（Ｓｕｚｉｋｉ，Ｔら、Ｓｔｅｎｔ−ｂａｓｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ ｒｅｄｕｃｅｓ ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａ ｐｏｒｃｉｎｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｍｏｄｅｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００１；１０４：１１８８〜１１９３、Ｆａｌｏｔｉｃｏ Ｒ．、米国特許出願公開第２００３／０２１６６９９号明細書；表６．０）との間の顕著な差異を示す。以前の研究では、組合せステントと単一薬物溶出ステントの間で利点は示されなかった。同じ過剰拡張比でのブタモデルにおける、ＢＸ Ｖｅｌｏｃｉｔｙ（登録商標）ステントの以前に公表されたデータと比較して、対照のＴｒｉＭａｘｘ（登録商標）ステントにおいて劇的な改善を伴っていても、本発明者らのゾタロリムス／デキサメタゾン組合せ製品は、対照より相当に良好でもあり、単一薬物溶出ステント、ＺｏＭａｘｘ（商標）より相当に、統計的に有意に良好でもあった。
【０２５４】
［０２９２］実施例１２．臨床例
［０２９３］１つの抗増殖剤を送達するステントの導入及び引き続く普及した使用により、一般の臨床集団において、再狭窄率が１０％未満に低減された。しかし、再狭窄率及び有害臨床事象をさらにいっそう低減するために、一般の臨床集団における、及び様々な心血管疾患サブセットからの両方の患者を治療するための、ステントからの適切な薬物組合せ物の送達に対する、明白な理論的根拠が存在する。例えば、ステント術を受けた糖尿病患者において、その疾患のない患者と比較した場合、再狭窄の割合が著しく増加し、ステント術に対する炎症応答が、糖尿病患者及び非糖尿病患者の両方において存在することが、十分に認められている（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．９２：９２４〜９２９、２００３）。さらに、炎症は、不安定狭心症、非ＳＴセグメント上昇心筋梗塞、並びに持続性ＳＴセグメント上昇に関係する梗塞を含めた、急性心筋虚血状態の範囲を定義する用語である、急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する患者における特徴である。これらの患者は、多くの場合、ステント配備の最も重要な候補であり、経皮的介入（ＰＣＩ）を受けている一般の患者集団と比べて、著しく高い割合の再発性虚血、再梗塞、及び引き続く反復ＰＣＩ処置の必要性を有する。最後に、肥満症は、多くの場合、炎症促進状態及び内皮障害と関係がある。両状態は、冠血管ステント配置後の早期再狭窄の独立した予測判断材料であることが知られている。実際に、肥満症、脂肪細胞によるインターロイキン−６（ＩＬ−６）産生、及び冠動脈疾患との間の関連について、症例が作成されてきており、この炎症性サイトカインの上昇とこのサブセットの患者におけるＣＡＤの発症との間の関連を示している（Ｙｕｄｋｉｎら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １４８：２０９〜２１４、２０００）。
【０２５５】
［０２９４］糖尿病患者は、非糖尿病患者より高いレベルの炎症性マーカー、ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を示すことが知られている（Ａｇｇａｒｗａｌら、Ｄａｎｄｏｎａ及びＡｌｊａｄａ、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．９０（ｓｕｐｐｌ）：２７Ｇ〜３３Ｇ、２００２）。このタンパク質は、冠動脈疾患を有する患者における、重要な炎症メディエーターとして明白に同定されてきており、重症の不安定狭心症を有する患者における有害事象の予測判断材料である（Ｂｉｏｎｄｉ−Ｚｏｃｃａｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４１：１０７１〜１０７７、２００３）。ＣＲＰは、ヒト内皮細胞による単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）の産生を刺激することが知られている。このメディエーターの放出は、単球の流入を伴い、これらの細胞は活性化され、内皮下の空間に移動し、そこでそれらが酸化低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を含有する泡沫細胞を形成するので、顕著な炎症状態をもたらす。血漿ＩＬ−６及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）は、肥満患者において、及び２型糖尿病においても上昇させられる炎症性サイトカインである。実際、高感度ＣＲＰ、ＩＬ−６又は血清血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）の上昇は、冠動脈疾患を有する患者における死亡率の増加と関係づけられた（Ｒｏｆｆｉ及びＴｏｐｏｌ、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ Ｊ．２５：１９０〜１９８、２００４）。再狭窄プロセスの特徴である新生内膜形成は、炎症によって強調されることが示されてきたので、抗炎症剤を局所血管環境に送達するステントの使用は、糖尿病患者において明白な有用性を有することが期待されるだろう。
【０２５６】
［０２９５］アテローム性プラークの破壊は、急性冠症候群の開始に対して重要である（Ｇｒｅｃｈ及びＲａｍｓｄａｌｅ、Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．、３２６：１２５９〜１２６０、２００３）。プラーク破壊は、泡沫細胞によって分泌される基質メタロプロテイナーゼの濃度の増加によって誘発される場合があり、プラークの不安定性及び発症中の病変部の上に覆い被さる、薄い繊維性キャップの決定的な破壊に導く。さらに、泡沫細胞の表面に発現される組織因子は、凝固因子ＶＩＩを活性化し、これは、トロンビンの形成を導く。このタンパク質の産生は、血小板活性化及び凝集、並びにフィブリノーゲンのフィブリンへの変換、及び血栓の明らかな形成をまねく。この設定におけるステントの配置に関する最初の懸念は、根拠のないように思われるが、これは、ステント配置及び技術の改善により、ステント術を受けた患者は、再発性虚血、再梗塞、及び反復血管形成術の必要性がより少ないことが示されたためである（Ｇｒｅｃｈ及びＲａｍｓｄａｌｅ、２００３）。炎症と冠動脈病変の発症との間の密接な関係は、抗炎症剤及び抗増殖剤の送達を、そのような患者を治療するための魅力的な手法にする。
【０２５７】
［０２９６］冠血管疾患を有する患者における抗炎症薬物の有用性を、明瞭に説明するデータが公表されている。ＩＭＰＲＥＳＳ研究において、抗炎症薬プレドニゾンでの長期経口療法を受けた患者において、イベントフリー生存率が著しく高められた（Ｖｅｒｓａｃｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．４０：１９３５〜１９４２、２００２）。さらに、抗炎症剤デキサメタゾンを溶出するステントを植え込まれた患者（Ｐａｔｔｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．９５：５０２〜５０５、２００５）は、植込み後４８時間以内にＣＲＰレベルの著しい低減を示した。この効果は、ＣＲＰ値≧３ｍｇ／ｄｌを有する患者において特に顕著であり、長期間持続した。
【０２５８】
［０２９７］デキサメタゾン溶出ステントは、ＳＴＲＩＤＥ試験において報告されたように（Ｌｉｕら、４：２６５、２００２）、安定狭心症に対して不安定狭心症を有する患者においても明白な利点を示した。デキサメタゾンの周知の抗炎症作用に加えて、血管平滑筋細胞に対するこの薬物の抗増殖作用を示す、本発明者らの知見は、強力な抗増殖性のゾタロリムス、及びデキサメタゾンの両方を含有するステントは、本明細書で報告したブタの研究の結果によって示したように、再狭窄率をさらに低減することにおいて有用性を有することになることを示す。
【０２５９】
［０２９８］本明細書で説明したステントは、冠動脈中の狭窄病変による虚血性心疾患と診断される患者において、及び再発性冠血管疾患及び他の有害臨床事象に対して高いリスクのある臨床集団のサブセットにおいて採用される。介入についての他の標的には、表層大腿動脈、腎動脈、腸骨、及び膝より下の血管における狭窄を含めた末梢血管疾患が含まれる。介入処置のための標的血管は、大腿動脈又は橈骨動脈のいずれかを経由した経皮血管アクセスを用いて到達され、ガイドカテーテルが血管中に挿入される。次いで標的病変部は、ガイドワイヤーで横断され、バルーンカテーテルが、ワイヤーによって、又は迅速交換システムを用いて挿入される。医師は、オンラインの定量的冠血管造影（ＱＣＡ）によって、又は視覚的な推定によって、植え込まれるステントの適切なサイズを決定する。ステントは、そのステントのコンプライアンスによって示される、適切な圧力を用いて配置され、次いで処置後の血管造影図を得ることができる。処置が完了すると、患者は、狭心症状態について、及び任意の有害事象の存在について定期的にモニターされる。反復処置の必要性も評価される。
【０２６０】
［０２９９］実施形態では、３０％過剰拡張でのブタ冠血管傷害モデルにおいて、第１の薬物の抗増殖活性は、新生内膜形成を、非薬物溶出ステントに対して少なくとも２５％低減する。他の実施形態では、３０％過剰拡張でのブタ傷害モデルにおいて、第１の薬物の抗増殖作用は、第２の薬物の抗増殖作用を補完し、新生内膜形成を、非薬物溶出ステントに対して少なくとも３０％低減する。
【０２６１】
［０３００］このシステムの実施形態では、薬物は、１０以下の併用指数を有する。他の実施形態では、システムは、１：１０から１０：１の比の、治療量の第１の薬物と治療量の第２の薬物の比をさらに含む。なおさらに他の実施形態では、新生内膜過形成を低減するための医薬組成物は、局所的に投与され、ゾタロリムス又はエベロリムス及びデキサメタゾンを含み、ゾタロリムス又はエベロリムスとデキサメタゾンは、約１０：１から約１：１０の間の比である。なおさらに他の実施形態では、新生内膜過形成を低減するための医薬組成物は、局所的に投与され、少なくとも１種のオリムス薬物及び少なくとも１種のグルココルチコステリオドを含み、オリムス薬物（複数も）とグルココルチコステリオド（複数も）は、約１０：１から約１：１０の間の比である。さらに、単一薬物溶出ステントに比べて、内皮化が加速される。
【０２６２】
［０３０１］前述の詳述した説明及び付随する実施例は、単に例示的であり、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物によって専ら定義される、本発明の範囲に対する限定として受け取られないことが理解される。開示した実施形態に対する様々な変更及び改変は、当業者にとって明らかとなろう。制限なく、化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、製剤及び／又は本発明の使用方法に関連するものを含めた、そのような変更及び改変は、それらの精神及び範囲から逸脱することなく行うことができる。
【０２６３】
［０３０２］参考文献
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管腔中の新生内膜過形成の治療又は阻害用の薬物の制御放出送達を提供するためのシステムであって、
治療量の第１の薬物及び治療量の第２の薬物を含む組成物を備え、前記第１の薬物は、少なくとも１種のオリムス薬物及びそれらの塩、それらのプロドラッグ及び誘導体を含み、
前記第１の薬物は、治療上有効であり、前記治療量の前記第２の薬物の存在下で、前記第２の薬物の活性を補完し、前記第２の薬物は、治療上有効であり、前記治療量の前記第１の薬物の存在下で、前記第１の薬物の活性を補完する、
システム。
【請求項２】
前記第２の薬物の前記活性が抗炎症性である、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記第１の薬物の前記活性が抗増殖性である、請求項１に記載のシステム。
【請求項４】
前記組成物が医療デバイスに付随する、請求項１に記載のシステム。
【請求項５】
前記医療デバイスがステントを備える、請求項４に記載のシステム。
【請求項６】
前記医療デバイスが血管形成バルーンを備える、請求項４に記載のシステム。
【請求項７】
前記ステントが、前記ステントの少なくとも一部の表面上に被膜をさらに備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項８】
前記組成物が前記被膜に付随する、請求項７に記載のシステム。
【請求項９】
前記被膜がポリマーを含む、請求項７に記載のシステム。
【請求項１０】
前記ポリマーがホスホリルコリンポリマーを含む、請求項９に記載のシステム。
【請求項１１】
前記ポリマーが、フルオロポリマー、ポリ（アクリレート、シリコーン、樹脂、ナイロン、及びポリ（アミド）からなる群から選択される、請求項９に記載のシステム。
【請求項１２】
前記治療量の前記’ロリムス薬物がゾタロリムス又はエベロリムスを含み、ステント１ｍｍ当たり少なくとも１μｇである、請求項１に記載のシステム。
【請求項１３】
前記第２の薬物がグルココルチコステリオドである、請求項１に記載のシステム。
【請求項１４】
前記第２の薬物がデキサメタゾンであり、前記治療量が、ステント１ｍｍ当たり少なくとも０．５μｇである、請求項１３に記載のシステム。
【請求項１５】
第３の治療薬又は治療物質をさらに備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項１６】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１５に記載のシステム。
【請求項１７】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾンからなる群を含むグルココルチコステリオド、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項１５に記載のシステム。
【請求項１８】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、エストラジオールを含めたステロイドホルモン並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項１５に記載のシステム。
【請求項１９】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤からなる群のメンバーである、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２０】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せの群からなる抗ＴＮＦα療法を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２１】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン及びロムスチンを含めたアルキル化剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン及びペントスタチンを含めた抗代謝産物、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含めたビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ブレオマイシン及びマイトマイシンを含めた抗生物質、シスプラチン、プロカルバジン、エトポシド及びテニポシドを含めた抗増殖剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗増殖剤を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２２】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、アブシキシマブ、エプチフィバチド及びチロフィバンを含めた糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤、ジピリダモールを含めたアデノシン再取り込み阻害剤、クロピドグレル及びチクロピジンを含めたＡＤＰ阻害剤、アセチルサリチル酸を含めたシクロオキシゲナーゼ阻害剤、並びにシロスタゾールを含めたホスホジエステラーゼ阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血小板剤を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２３】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、モメタゾン及びエストラジオールを含めたステロイド、並びにアセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ピロキシカム、メファナム酸を含めた非ステロイド系抗炎症剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＴＮＦに対する抗体を含めた、サイトカイン又はケモカインの受容体への結合を阻害することによって、炎症促進性シグナルを阻害するもの、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗炎症剤を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２４】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、未分画ヘパリン並びにクリバリン、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン及びチンザパリンを含めた低分子量ヘパリンを含めたヘパリン、アルガトロバン、ヒルジン、ヒルログ、ヒルゲンを含めた直接トロンビン阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血栓剤を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２５】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチンを含めたＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、フェノフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジルを含めたフィブリン酸誘導体、ニコチン酸、プロブコールを含めた脂質低下剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗高脂血症剤を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２６】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼや、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクタプラーゼを含めた組織プラスミノーゲンアクチベーター、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される血栓溶解剤を含む、請求項１５に記載のシステム。
【請求項２７】
前記第２の薬物がデキサメタゾンであり、前記治療量が、ステント１ｍｍ当たり少なくとも１μｇである、請求項１に記載のシステム。
【請求項２８】
３０％過剰拡張でのブタ冠血管傷害モデルにおいて、前記第１の薬物の前記抗増殖活性が、新生内膜形成を、非薬物溶出ステントに対して少なくとも２５％低減する、請求項３に記載のシステム。
【請求項２９】
前記薬物が１０以下の併用指数を有する、請求項１に記載のシステム。
【請求項３０】
１：１０から１０：１の前記治療量の前記第１の薬物と前記治療量の前記第２の薬物の比をさらに備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項３１】
３０％過剰拡張でのブタ傷害モデルにおいて、前記第１の薬物の抗増殖作用が、前記第２の薬物の抗増殖作用を補完し、新生内膜形成を、非薬物溶出ステントに対して少なくとも３０％低減する、請求項３に記載のシステム。
【請求項３２】
局所的に投与される、新生内膜過形成を低減するための医薬組成物であって、ゾタロリムス若しくはエベロリムス及びデキサメタゾンを含み、前記ゾタロリムス若しくはエベロリムスと前記デキサメタゾンが、約１０：１から約１：１０の比である医薬組成物。
【請求項３３】
局所的に投与される、新生内膜過形成を低減するための医薬組成物であって、少なくとも１種のロリムス薬物及び少なくとも１種のグルココルチコステリオドを含み、前記ロリムス薬物（複数も）と前記グルココルチコステリオド（複数も）が、約１０：１から約１：１０の間の比である医薬組成物。
【請求項３４】
単一薬物溶出ステントに比べて内皮化が加速される、請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
第３の治療薬又は治療物質をさらに備える、請求項３３に記載のシステム。
【請求項３６】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項３５に記載のシステム。
【請求項３７】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾンからなる群を含むグルココルチコステリオド、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項３５に記載のシステム。
【請求項３８】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、エストラジオールを含めたステロイドホルモン並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項３５に記載のシステム。
【請求項３９】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤からなる群のメンバーである、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４０】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−Ｉ療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せの群からなる抗ＴＮＦα療法を含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４１】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン及びロムスチンを含めたアルキル化剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン及びペントスタチンを含めた抗代謝産物、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含めたビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ブレオマイシン及びマイトマイシンを含めた抗生物質、シスプラチン、プロカルバジン、エトポシド及びテニポシドを含めた抗増殖剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗増殖剤を含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４２】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、アブシキシマブ、エプチフィバチド及びチロフィバンを含めた糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤、ジピリダモールを含めたアデノシン再取り込み阻害剤、クロピドグレル及びチクロピジンを含めたＡＤＰ阻害剤、アセチルサリチル酸を含めたシクロオキシゲナーゼ阻害剤、シロスタゾールを含めたホスホジエステラーゼ阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血小板剤を含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４３】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、モメタゾン及びエストラジオールを含めたステロイド、並びにアセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ピロキシカム、メファナム酸を含めた非ステロイド系抗炎症剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＴＮＦに対する抗体を含めた、サイトカイン又はケモカインの受容体への結合を阻害することによって、炎症促進性シグナルを阻害するもの、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗炎症剤を含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４４】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、未分画ヘパリン並びにクリバリン、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン及びチンザパリンを含めた低分子量ヘパリンを含めたヘパリン、アルガトロバン、ヒルジン、ヒルログ、ヒルゲンを含めた直接トロンビン阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血栓剤を含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４５】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチンを含めたＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤、フェノフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジルを含めたフィブリン酸誘導体、ニコチン酸、プロブコールを含めた脂質低下剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗高脂血症剤を含む、請求項３５に記載のシステム。
【請求項４６】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼや、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクタプラーゼを含めた組織プラスミノーゲンアクチベーター、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される血栓溶解剤を含む、請求項３２に記載のシステム。

【図１】

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１】

【図１２】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【公表番号】特表２０１０−５０６８３７（Ｐ２０１０−５０６８３７Ａ）
【公表日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３２４３６（Ｐ２００９−５３２４３６）
【出願日】平成１９年１０月１２日（２００７．１０．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２１８４６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６３３１９
【国際公開日】平成２０年５月２９日（２００８．５．２９）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
【出願人】（５０７３１６６４２）アボット　ラボラトリーズ (18)
【Ｆターム（参考）】