口腔用組成物の抗骨喪失および抗付着喪失作用
口腔の疾患および病気を処置するのに有用な化合物を同定するための方法を本明細書で記述する。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
[0001] 歯周炎は、部分的には、歯周の有機マトリックスの異常な、および過度の分解により特性付けられる。このマトリックスには、歯肉、歯周靭帯、セメント質および歯槽骨が含まれる。そのマトリックスの破壊の少なくとも一部は、亜鉛依存性エンドペプチダーゼ類のファミリーであるマトリックスメタロプロテイナーゼ類（ＭＭＰ類）の過剰産生により仲介される。ＭＭＰ類は類骨（ｏｓｔｅｏｉｄ）（すなわち、石灰化されていない新しく合成された骨マトリックス）を分解し、次いでマトリックスを分解することにより骨吸収も促進する。これらの事象は結果として歯肉後退、ポケット形成、付着の喪失、および最終的には歯の喪失を含む歯周炎の臨床症状をもたらす。
【発明の概要】
【０００２】
[0002] 本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置するための方法であって、その哺乳類の口の中の細胞をＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼを下方制御する薬剤と接触させることを含む方法を含み、ここでそのメタロプロテイナーゼの下方制御は歯周炎と関係する少なくとも１種類の症状の低減と相関する。
【０００３】
[0003] 本発明は哺乳類において歯周炎を処置するのに有用である化合物を同定する方法も含み、その方法は、細胞を試験化合物と接触させ、その試験化合物がＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼを下方制御するかどうかを決定することを含み、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼ類の少なくとも１種類の下方制御はその試験化合物が歯周炎を処置するのに有用であることを示すものである。
【０００４】
[0004] 本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔において少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼを下方制御するのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法も含み、そのマトリックスメタロプロテイナーゼはＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択され、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼの下方制御は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。
【０００５】
[0005] 本発明はさらに、それを必要とする哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼ活性を低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を含み、そのマトリックスメタロプロテイナーゼはＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択され、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の阻害は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。
【０００６】
[0006] 本発明は、それを必要とする哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼの病的過剰を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルを低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を含み、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの抑制は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらし、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼはＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される。
【０００７】
[0007] １態様において、方法は以下のものを含む口腔用組成物を含む：０〜３６重量％のシリカ性研磨剤；０．２５重量％〜０．３５重量％の、ハロゲン化ジフェニルエーテル類、ハロゲン化サリチルアニリド類、安息香酸エステル類（ｂｅｎｘｏｉｃ ｅｓｔｅｒｓ）、ハロゲン化カルバニリド類およびフェノール化合物からなるグループから選択される実質的に水に不溶性の非陽イオン性抗細菌剤；ならびに有効量の０．０１重量％〜４．０重量％の抗細菌増進剤、それは口の歯および歯肉表面への前記の抗細菌剤の送達および接着、ならびに口の歯および歯肉表面上での前記の抗細菌剤の保持を増進し、ここで前記の抗細菌増進剤は（ｉ）マレイン酸または無水マレイン酸と別の不活性なエチレン的に（ｅｔｈｙｌｅｎｉｃａｌｌｙ）不飽和な重合可能な単量体とのコポリマー、もしくは（ｉｉ）ポリ（ベータ−スチレン−ホスホン酸）またはポリ（アルファ−スチレンホスホン酸）ポリマーまたはどちらかのスチレンホスホン酸と別のエチレン的に不飽和な単量体とのコポリマーであり、その組成物は、場合によりさらに２５ｐｐｍ〜５，０００ｐｐｍのフッ化物イオンを供給するのに十分な量のフッ化物イオンを提供する源を含む。１態様において、口腔用組成物は０．０１〜３６重量％のシリカ性研磨剤を含む。別の態様において、口腔用組成物はシリカ性研磨剤を含まない。
【０００８】
[0008] １態様において、方法は抗歯石に有効な量の少なくとも１種類の水溶性の線状の分子的に脱水されたポリリン酸塩を不可欠な抗歯石剤として、抗プラークに有効な量の実質的に水に不溶性の非陽イオン性抗細菌化合物を不可欠な抗プラーク剤として、および場合により、２５ｐｐｍ〜５，０００ｐｐｍのフッ化物イオンを供給するのに十分な量のフッ化物イオンを提供する源を含む口腔用組成物を含む。１観点において、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルは組成物中に１ｐｐｍから１００ｐｐｍまでの濃度で存在する。
【０００９】
[0009] １態様において、口腔用組成物はマウスウォッシュ（ｍｏｕｔｈｗａｓｈ）またはマウスリンス（ｍｏｕｔｈｒｉｎｓｅ）である。１観点において、マウスウォッシュまたはマウスリンスはシリカ性研磨剤を含まない。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】[0010] 図１は、ＴＮＦαに誘導される単球のＭＭＰ−９産生における２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルの作用を図説する。
【図２】[0011] 図２は、ＰＴＨに誘導される骨芽細胞のＭＭＰ−１３産生における２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルの作用を図説する。
【図３】[0012] 図３は、ＰＴＨに誘導される骨芽細胞のＭＭＰ−１３産生における本発明の歯磨剤の作用を図説する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
[0013] 歯周炎における３種類の主要な破壊的ＭＭＰ類はＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３である。ＭＭＰ−８およびＭＭＰ−１３はコラゲナーゼであり、ＭＭＰ−９はゼラチナーゼである。３種類の酵素は全て、病気にかかった歯周組織および歯肉溝滲出液中に見出しうる。これらの酵素のレベルは歯周炎の臨床指標に正に相関している。すなわち、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の上昇した、または“正常より上の”レベルは、歯周炎を示すものである。その測定は、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の酵素、ＲＮＡ、または生物学的活性についてなされてよい。
【００１２】
[0014] 本明細書で述べられるように、ここで、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）を含む口腔用組成物は哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるために用いることができることが示される。１態様において、その口腔用組成物は歯磨剤である。別の態様において、その口腔用組成物はとりわけマウスウォッシュ、パッチ、またはゲルを構成する。別の観点において、抗細菌化合物は哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるために用いることができる。
【００１３】
[0015] 全体において用いられるように、範囲はその範囲内にあるそれぞれおよび全ての値を記述するための略記として用いられる。範囲内のあらゆる値は、範囲の末端として選択することができる。加えて、本明細書において引用される全ての参考文献をそのまま本明細書に援用する。本開示における定義および引用された参考文献の定義において不一致がある場合には、本開示が統制する。
【００１４】
[0016] 本明細書において用いられる用語“歯周炎”は、歯肉、歯周靭帯、セメント質および歯槽骨を含む歯周の有機マトリックスの異常な、および過度の分解を指す。歯周炎の臨床症状には、歯肉後退、ポケット形成、マトリックスの付着の喪失、歯および骨の喪失が含まれるが、それらに限定されない。歯周炎は早期歯周炎、中等度歯周炎または進行性歯周炎として特性付けることができる。しかし、当業者には理解されるであろうが、歯周炎は本明細書で述べられるそれらの症状および続発症のみに限定されるべきでは無い。早期歯周炎は、とりわけ以下の症状の１種類以上により臨床的に示される：プロービング（ｐｒｏｂｉｎｇ）の際の出血；ポケット（３〜４ｍｍ）の存在；限局性の後退の領域；付着の喪失（３〜４ｍｍ）；骨の喪失（例えば水平方向）；およびクラスＩ分岐部侵入領域（ｃｌａｓｓ Ｉ ｆｕｒｃａｔｉｏｎ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｒｅａｓ）。中等度歯周炎は、とりわけ以下の症状の１種類以上により臨床的に示される：ポケット（４〜６ｍｍ）の存在；付着の喪失（４〜６ｍｍ）の存在；プロービングの際の出血；グレードＩおよび／またはグレードＩＩ分岐部侵入領域；クラスＩ歯牙動揺；骨の喪失（例えば水平方向および／または垂直方向）；ならびに支持歯槽骨の１／３の喪失（すなわち、１：１の歯冠歯根比）。進行性歯周炎は以下の症状の１種類以上により臨床的に示される：プロービングの際の出血；ポケット（６ｍｍを超える）の存在；付着の喪失（６ｍｍを超える）；グレードＩＩおよび／またはグレードＩＩＩ分岐部侵入領域；クラスＩＩおよび／またはクラスＩＩＩ歯牙動揺；骨の喪失（例えば水平方向および／または垂直方向）；ならびに支持歯槽骨の１／３を超える喪失（すなわち、２：１以上の歯冠歯根比）。歯周炎は以下のものを含む下位分類に分けられるが、それらに限定されない：成人性歯周炎（例えばプラークと関係するもの）；早発性歯周炎（例えば青春期前、若年性、急速進行性、および同様のもの）；全身性疾患と関係する歯周炎；壊死性潰瘍性歯周炎；難治性歯周炎；インプラント周囲炎（ｐｅｒｉ−ｉｍｐｌａｎｔｉｔｉｓ）および同様のもの。
【００１５】
[0017] 本明細書で用いられる用語“処置”は、哺乳類を本発明の口腔用組成物と、および／または本発明の方法に従って接触させた際の、有害な病気の検出可能な改善および／またはその病気の症状の減少を指す。
【００１６】
[0018] 用語“歯周炎の処置”は、哺乳類における歯周炎の予防、および哺乳類における歯周炎と関係する１種類以上の前から存在する病気の進行の抑制を含むことは理解されるであろう。本明細書で用いられる用語“抑制する”および“抑制”は、療法的処置および／または予防が結果としてもたらすような、歯周炎の、処置無しでのその病気と比較した部分的な抑制または完全な抑制を指す。従って、本発明に従う歯周炎の処置は、本明細書で述べた症状および／または続発症の１種類以上の低減、抑制、改善、減少、減弱、休止、または消失を含む。
【００１７】
[0019] 本明細書で用いられる“病的過剰”は、許容される正常なレベルを上回る活性を指す。例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性の“病的過剰”は、疾患では無い状態で通常見られるレベルを上回るマトリックスメタロプロテイナーゼ活性のレベルである。本明細書で用いられる“マトリックスメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰”は、歯周炎と関係するマトリックスメタロプロテイナーゼ活性のレベルである。
【００１８】
[0020] 本明細書で用いられる用語“下方制御する”は、酵素活性の低下、酵素活性のレベルの低下、タンパク質および／またはそのようなタンパク質をコードする核酸のレベルの低下、またはタンパク質、例えばＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の内の１種類以上の存在の生化学的作用の低下を指す。
【００１９】
[0021] １観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の病的過剰を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルを低減させるのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を提供し、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの抑制は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。
【００２０】
[0022] ＭＭＰ、例えばＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３は、本明細書で述べるように口腔において多数の方式の１つで低減させることができる。１態様において、ＭＭＰは、本明細書の他の箇所で述べるように、ＭＭＰを核酸レベルで下方制御することにより口腔において低減させることができる。そのような低減は、結果としてＭＭＰをコードする核酸（例えばｍＲＮＡ）および口腔中へと発現されるＭＭＰ酵素の１種類以上の低減をもたらすことができる。ＭＭＰをコードするｍＲＮＡの低減は、例えば、当業者には理解されるであろうが、本明細書で述べられる開示で武装した際に、多数の技法の内の１種類以上により達成することができる。例にはＭＭＰをコードするｍＲＮＡの転写の低減およびＭＭＰをコードするｍＲＮＡの分解／排除が含まれる。
【００２１】
[0023] 別の態様において、ＭＭＰは口腔中でＭＭＰ酵素の量を直接低減させることにより低減させることができる。ＭＭＰ酵素の低減は、当業者には理解されるであろうが、本明細書で述べられる開示で武装した際に、多数の技法の内の１種類以上により達成することができる。例には、とりわけ小分子阻害剤によるその酵素の阻害、天然の、または生物由来の（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ−ｄｅｒｉｖｅｄ）分子による阻害、その酵素のタンパク質分解による分解、およびその酵素の口腔からの親和性に基づく排除が含まれる。ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上を低減させる薬剤は、本明細書で記述される薬剤、例えば２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）であってよく、またはそれは別の抗細菌剤であってよい。別の観点において、薬剤は抗細菌剤以外の何かであってよい。そのように、本発明は歯周炎に悩む人を処置する方法を提供する。
【００２２】
[0024] 本発明の１観点において、それを必要とする哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させるための方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼ活性を低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を提供し、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の阻害は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。別の観点において、その哺乳類の口腔に２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することは、その哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるのに有効である量で行われ、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの低減は結果としてそのマトリックスメタロプロテイナーゼの全体的な酵素活性の低減をもたらし、それは結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。１態様において、１種類以上のＭＭＰ類の病的過剰は、哺乳類の口腔におけるＭＭＰの量の低減に関して本明細書の他の箇所で記述されているように低減させることができる。すなわち、ＭＭＰは核酸およびタンパク質レベルの一方または両方で低減させることができる。本明細書の他の箇所で記述されているように、１種類以上のそのようなＭＭＰの病的過剰の低減は、哺乳類における歯周炎の処置を提供することができる。
【００２３】
[0025] 別の観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の活性を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルを低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を提供し、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの抑制は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。１態様において、その１種類以上のＭＭＰ類の活性は、哺乳類の口腔におけるＭＭＰタンパク質の量の低減に関して本明細書の他の箇所で記述されているように低減させることができる。すなわち、ＭＭＰを核酸およびタンパク質レベルの一方または両方で低減させ、それにより口腔におけるそのＭＭＰ類の活性を、そのＭＭＰの活性を直接低減させることにより、またはＭＭＰのタンパク質および／または核酸のレベルを低減させることにより間接的に、のどちらかで低減させることができる。
【００２４】
[0026] 別の観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法であって、その哺乳類の口腔中の細胞をＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の一方または両方を下方制御する薬剤と接触させることを含む方法を提供する。本発明に従って、そのメタロプロテイナーゼの下方制御は歯周炎と関係する少なくとも１種類の症状の低減と相関する。
【００２５】
[0027] ＭＭＰ、例えばＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３は、核酸レベルで下方制御することができる。限定的では無い例として、ＭＭＰは本発明に従ってＭＭＰをコードするｍＲＮＡを下方制御することにより下方制御することができる。１態様において、本発明の方法は、哺乳類の口腔をＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上を下方制御する薬剤と接触させることを含む。ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上を下方制御する薬剤は、本明細書で記述される薬剤、例えばトリクロサンであってよく、またはそれは別の抗細菌剤であってよい。別の観点において、薬剤は抗細菌剤以外の何かであってよい。そのように、本発明は歯周炎に悩む人を処置する方法を提供する。
【００２６】
[0028] 別の観点において、本発明はそれを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法を提供する。１態様において、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法は、その哺乳類の口腔にＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類を下方制御するのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含み、ここで、マトリックスメタロプロテイナーゼの下方制御は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。別の態様において、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法は、その哺乳類の口腔にＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含み、ここで、マトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの低減は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。さらに別の態様において、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法は、その哺乳類の口腔にＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の活性のレベルを低減させるのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含み、ここで、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性のレベルの低減は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。
【００２７】
[0029] その哺乳類の口腔に口腔用組成物を投与することにより歯周炎を処置する方法において、１種類以上のＭＭＰ類の活性は、哺乳類の口腔におけるＭＭＰの量の低減に関して本明細書の他の箇所で記述されているように低減させることができる。すなわち、ＭＭＰを核酸およびタンパク質レベルの一方または両方で低減させ、それにより口腔においてそのＭＭＰ類の活性を低減させることができる。同様に、ＭＭＰの下方制御またはＭＭＰのレベルの低減は、本明細書の他の箇所で詳細に記述されているように、核酸およびタンパク質レベルのどちらかまたは両方における作用により影響を受ける可能性がある。
【００２８】
[0030] 別の観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置するのに有用な化合物を同定する方法であって、細胞を試験化合物と接触させ、その試験化合物がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の一方または両方を下方制御するかどうかを決定することを含む方法を提供する。そのマトリックスメタロプロテイナーゼ類の少なくとも１種類の下方制御は、その試験化合物が歯周炎を処置するのに有用であることを示すものである。
【００２９】
[0031] １態様において、歯周炎を処置する方法は、本明細書で記述されるスクリーニングアッセイにより同定された薬剤、または歯周炎の１種類以上のマーカーを抑制する薬剤の組み合わせを投与することを含み、ここでその薬剤の少なくとも１種類は本明細書で記述されるスクリーニングアッセイにより同定された薬剤である。
【００３０】
[0032] １態様において、本発明は、歯周炎の処置のための方法であって、療法上有効量の歯周疾患および／または歯周障害を抑制する薬剤をそのような処置を必要とする対象に投与する段階を含む方法を提供する。本明細書で定められる薬剤の療法上有効量（すなわち、有効な投与量）は、０．００１から３０ｍｇ／ｋｇ体重まで、好ましくは０．０１から２５ｍｇ／ｋｇ体重まで、より好ましくは０．１から２０ｍｇ／ｋｇ体重まで、さらにもっと好ましくは１から１０ｍｇ／ｋｇ体重まで、２から９ｍｇ／ｋｇ体重まで、３から８ｍｇ／ｋｇ体重まで、４から７ｍｇ／ｋｇ体重まで、または５から６ｍｇ／ｋｇ体重までの範囲である。当業者は、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の全身の健康状態および／または年齢、および存在する他の疾患を含むがそれらに限定されない特定の要因が、対象を効果的に処置するのに必要な投与量に影響を及ぼす可能性があることを理解するであろう。さらに、療法上有効量の阻害剤を用いた対象の処置は単独の処置を含むことができ、または、好ましくは一連の処置を含むことができる。処置のために用いられる有効な投与量は個々の処置の過程にわたって増加または減少してよいことも理解されるであろう。投与量の変化は、本明細書で記述されるような診断アッセイの結果からもたらされてよい。
【００３１】
[0033] 当業者は、どのように歯周炎の存在を検出するかを理解するであろう。加えて、当業者は、どのようにＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上の高いレベルを確認するかを理解するであろう。哺乳類において歯周炎が存在することまたは存在しないことを検出するための代表的な方法は、試験対象の口腔から生物学的試料を得て、その生物学的試料においてマーカーの核酸またはその核酸によりコードされるマーカーペプチドの存在が検出されるように、その生物学的試料を、本明細書で記述される歯周炎のマーカー（すなわちＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３）、例えばマーカーの核酸（例えば、とりわけｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）またはそのマーカーの核酸によりコードされるマーカーペプチド（例えば、とりわけペプチド断片またはタンパク質）の１種類以上を検出することができる化合物または薬剤と接触させることを含む。１態様において、マーカーのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出するための薬剤は、マーカーのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにハイブリダイズすることができる標識された核酸のプローブである。その核酸のプローブは、例えば、完全長のマーカーの核酸またはその一部であることができる。本発明の診断アッセイにおける使用に関する他の適切なプローブを本明細書で記述する。別の態様において、歯周炎のマーカーの活性をそのマーカーを検出するための手段として用いる（すなわちＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の活性）。マーカーの活性を検出するための、現在知られている、または後に開発されるあらゆるアッセイを、本明細書に含める。
【００３２】
[0034] 別の態様において、マーカーペプチドを検出するための薬剤はマーカーペプチドに結合することができる抗体、例えば検出可能な標識を有する抗体である。抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであることができる。完全な抗体、またはその断片（例えばＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）を用いることができる。プローブまたは抗体に関する用語“標識された”は、検出可能な物質をそのプローブまたは抗体に結合させる（すなわち物理的に連結させる）ことによるそのプローブまたは抗体の直接的な標識、および直接標識されている別の試薬との反応性によるそのプローブまたは抗体の間接的な標識を含むことを意図する。間接的な標識の例には、蛍光標識された二次抗体を用いる一次抗体の検出、およびそれを蛍光標識されたストレプトアビジンにより検出することができるようなＤＮＡプローブのビオチンによる末端標識が含まれる。
【００３３】
[0035] 本明細書で用いられる用語“生物学的試料”は、対象の口腔から分離された組織、細胞および生物学的流体、ならびに対象の口腔内に存在する組織、細胞および流体を含むことを意図する。すなわち、本発明の検出法は、インビトロおよびインビボにおいて生物学的試料中のマーカーのｍＲＮＡ、ペプチド（例えばタンパク質）、またはゲノムＤＮＡを検出するために用いることができる。限定的では無い例として、マーカーのｍＲＮＡの検出のためのインビトロの技法にはノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチューハイブリダイゼーションが含まれる。マーカーペプチドの検出のためのインビトロの技法には酸素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が含まれる。マーカーのゲノムＤＮＡの検出のためのインビトロの技法にはサザンハイブリダイゼーションが含まれる。マーカーペプチドの検出のためのインビボの技法には、対象の口腔中への標識された抗マーカー抗体の導入が含まれる。例えば、その抗体は、対象中でのそれの存在および位置を標準的な画像化技法により検出することができる放射性マーカーで標識することができる。
【００３４】
[0036] １態様において、その方法はさらに、対照の対象から対照生物学的試料を得ること、マーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在がその生物学的試料中で検出されるように、その対照試料をマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡを検出することができる化合物または薬剤と接触させること、および対照試料中のマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在を試験試料中のマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在と比較することを含む。あるいは、試験試料中のマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在をデータベース中の、またはカルテ上の情報と比較して、結果として検出または診断をもたらすことができる。別の態様において、その方法はさらに歯周炎を有する対象から得られた対照生物学的試料を用いることを含み、ここでその対照試料は歯周炎の発症より前（すなわち、その対象が健康であった、または“正常な”、歯周炎では無い状態にあった時）にその対象から得られた。
【００３５】
[0037] 限定的では無い例として、細胞をＴＮＦαと接触させることによりＭＭＰ−９のレベルをインビトロで確認することができる。１態様において、細胞は単球である。細胞をＴＮＦαと接触させた後、ＭＭＰ−９のレベルをタンパク質または核酸レベルのどちらかで検出する。１観点において、抗細菌剤の存在下でも細胞をＴＮＦαと接触させることによりＭＭＰ−９のレベルをインビトロで確認する。１態様において、その抗細菌剤は２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルである。別の態様において、薬剤はドキシサイクリンである。別の観点において、薬剤は抗細菌剤以外の何かであってよい。１態様において、薬剤はＭＭＰ阻害剤である。
【００３６】
[0038] 本発明の態様において、ＭＭＰ−９のレベルを検出することによるＭＭＰ−９の下方制御の測定は、薬剤、例えば抗細菌剤の存在下で細胞をＴＮＦαと接触させ、抗細菌剤の非存在下で細胞をＴＮＦαと接触させることによりインビトロで確認されたＭＭＰ−９のレベルを比較することによりインビトロで確認され、ここでその実験条件はその他の点では同じである。抗細菌剤の存在下でのＭＭＰ−９のタンパク質、核酸または酵素活性の、抗細菌剤の非存在下におけるよりも低いレベルは、その抗細菌化合物がＭＭＰ−９を下方制御することを示すものである。本明細書で述べられる開示に基づいて、その同じ方法をＭＭＰ−８および／またはＭＭＰ−１３を評価するために用いてよいことは理解されるであろう。
【００３７】
[0039] ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９および／またはＭＭＰ−１３の下方制御のインビトロでの測定はインビボでの作用、観察または結果に相関させることができることは理解されるであろう。１観点において、インビトロで測定されるメタロプロテイナーゼの下方制御は、歯周炎の処置、インビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させる方法、ならびに歯周炎を処置する、および／またはインビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させるのに有用な化合物を同定する方法を含むがそれらに限定されないインビボでの観察を確証するものである。例えば、Golub et al., Inflamm. Res. (1997) 46:310-9, Preshaw et al., J. Clin. Periodontol. (2004) 31:697-707; Mantyla et al., J. Periodontal. Res. (2003) 38:436-439; Lorencini et al., Histol. Histopathol. (2009) 24:157-166;およびPozo et al., J. Periodontal Res. (2005) 40:199-207を参照。別の観点において、インビトロで測定されるメタロプロテイナーゼの下方制御は、歯周炎の処置、インビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させる方法、ならびに歯周炎を処置する、および／またはインビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させるのに有用な化合物を同定する方法を含むがそれらに限定されないインビボでの結果を予測するものである。
【００３８】
[0040] 別の限定的では無い例として、細胞を副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）と接触させることによりＭＭＰ−１３のレベルをインビトロで確認することができる。１態様において、細胞は骨芽細胞である。細胞をＰＴＨと接触させた後、ＭＭＰ−１３のレベルをタンパク質または核酸レベルのどちらかで検出する。１観点において、抗細菌剤の存在下でも細胞をＰＴＨと接触させることによりＭＭＰ−１３のレベルをインビトロで確認する。１態様において、その抗細菌剤は２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルである。抗細菌剤の存在下でのＭＭＰ−１３タンパク質、核酸または酵素活性の、抗細菌剤の非存在下におけるよりも低いレベルは、その抗細菌化合物がＭＭＰ−１３を下方制御することを示すものである。
【００３９】
[0041] １観点において、本明細書で述べた口腔用組成物の歯周炎を処置する能力は、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルのメタロプロテイナーゼの下方制御への作用をその口腔用組成物のメタロプロテイナーゼの下方制御への作用と比較することにより確認される。別の観点において、あらゆる口腔用組成物の歯周炎を処置する能力は、その口腔用組成物の作用を、インビボまたはインビトロのどちらかで、本明細書で述べた口腔用組成物の作用と比較することにより確認される。
【００４０】
[0042] 本発明はさらに、本発明の方法における使用のための口腔用組成物、例えば、とりわけ歯磨剤、ゲル、パッチ、マウスウォッシュ、またはスプレーを含む。１観点において、口腔用組成物は抗細菌剤を含む。典型的な態様において、その抗細菌剤は非陽イオン性抗細菌剤である。例えば米国特許第５，２８８，４８０号を参照、それをそのまま本明細書に援用する。その非陽イオン性抗細菌剤は、口腔用組成物中に０．２５〜０．３５重量％、好ましくは０．３％の有効抗プラーク量で存在する。その抗細菌剤は実質的に水に不溶性であり、これはその溶解度が２５℃の水中で１重量％未満であることを意味し、さらに０．１％未満であってよい。例えば口腔用組成物がマウスウォッシュである場合、抗細菌剤の濃度は別の歯磨剤、例えば練り歯磨きにおいて用いられる濃度の１０分の１を超えるまで低減させてよい。１態様において、その抗細菌剤は２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルである。別の態様において、その口腔用組成物は２種類以上の抗細菌剤を含む。
【００４１】
[0043] １態様において、抗細菌増進剤（ＡＥＡ）はその抗細菌剤の口の表面への送達およびそれの口の表面上での保持を増進する。１観点において、ＡＥＡは接着性物質を含む。本発明のＡＥＡ物質に有用である物質および組成物の記述に関して、ならびに本発明において有用な口腔用組成物、例えば歯磨組成物の一般的な記述に関して、米国特許第５，２８８，４８０号を参照。限定的では無い例として、組成物中の接着性物質は１００，０００〜２，５００，０００（両端を含む）の数平均分子量を有するポリマーである。１観点において、その接着性物質はポリビニルホスホン酸、ポリ（１−ホスホノプロペン）スルホン酸、ポリ（ベータスチレンホスホン酸）、アルファスチレンホスホン酸、合成陰イオン性ポリマー性ポリカルボキシレート、無水マレイン酸、マレイン酸、およびメチルビニルエーテルのポリマーから選択される。別の観点において、その接着性分子はメチルビニルエーテルおよび無水マレイン酸のポリマーである。抗細菌増進剤は口腔用組成物の０．０１重量％〜４．０重量％であるレベルで用いることができる。
【００４２】
[0044] 本明細書で用いられる“送達増進基”は、ＡＥＡ（抗細菌剤を運んでいる）を口（例えば歯および歯肉）の表面に付着させ、または実質的に、接着により、凝集により（ｃｏｈｅｓｉｖｅｌｙ）、もしくは他の方式で結合させ、それにより抗細菌剤をそのような表面に“送達する”基を指す。一般に疎水性である有機性の保持増進基は、その抗細菌剤をＡＥＡに付着させ、またはそうでなければ結合させ、それによりその抗細菌剤のＡＥＡへの、および間接的に口の表面上での保持を促進する。一部の場合において、特にＡＥＡが架橋されたポリマーである場合、その抗細菌剤の付着はＡＥＡによるそれの物理的な捕捉（ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）により起こり、その構造はそのような捕捉のための多くの部位を生得的に提供する。架橋されたポリマーにおけるより高い分子量、より疎水的な架橋部分の存在は、その抗細菌剤のその架橋されたＡＥＡポリマーへの、またはその架橋されたＡＥＡポリマーによるその抗細菌剤の物理的捕捉をさらにもっと促進する。
【００４３】
[0045] １態様において、前記の抗細菌剤の口の歯および歯肉表面への送達および接着、ならびにそれの口の歯および歯肉表面上での保持を増進する抗細菌増進剤は、（ｉ）マレイン酸または無水マレイン酸と別の不活性なエチレン的に不飽和な重合可能な単量体とのコポリマー、もしくは（ｉｉ）ポリ（ベータ−スチレン−ホスホン酸）またはポリ（アルファ−スチレンホスホン酸）ポリマーまたはどちらかのスチレンホスホン酸と別のエチレン的に不飽和な単量体とのコポリマーである。しかし、当業者は本発明がその特定の抗細菌増進剤により限定されないことおよび他の抗細菌増進剤が本発明に含まれることを理解するであろう。
【００４４】
[0046] 典型的な歯磨剤において、湿潤剤を有する水相を含む口に許容可能なビヒクルが存在する。水は典型的には少なくとも３重量％、一般には３〜３５％の量で存在し、湿潤剤、好ましくはグリセリンおよび／またはソルビトールは典型的には合計でその歯磨剤の６．５〜７５重量％または８０重量％、より典型的には１０〜７５％の量で存在する。本発明において必須では無いが、ここで、場合により０．２５〜０．３５％の水に不溶性の非陽イオン性抗細菌剤が存在し、その抗細菌剤の唾液中での可溶化を助ける追加の成分がその水−湿潤剤ビヒクルに組み込まれてよい。そのような任意の可溶化剤には、湿潤剤ポリオール類、例えばプロピレングリコール、ジプロピレングリコール、およびヘキシレングリコール、セロソルブ類（ｃｅｌｌｏｓｏｌｖｅｓ）、例えばメチルセロソルブおよびエチルセロソルブ、直鎖中に少なくとも１２個の炭素を含む植物油およびワックス、例えばオリーブ油、ヒマシ油およびワセリン、ならびにエステル類、例えば酢酸アミル、酢酸エチルおよび安息香酸ベンジルが含まれる。本明細書で用いられる“プロピレングリコール”には、１，２−プロピレングリコールおよび１，３−プロピレングリコールが含まれる。かなり大きな量のポリエチレングリコール、特に６００以上の分子量のものは、ポリエチレングリコールが非陽イオン性抗細菌剤の抗細菌活性を効果的に阻害するため、避けるべきである。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６００は、２５トリクロサン：１ＰＥＧ６００の重量比でトリクロサンと一緒に存在する場合、トリクロサンの抗細菌活性をポリエチレングリコールの非存在下で発揮される抗細菌活性から１０〜２０分の１に低減させる。
【００４５】
[0047] 口腔用組成物のｐＨは、一般には４．５〜１０、別の観点では６．５〜７．５の範囲にある。本発明の組成物は、５未満のｐＨで歯のエナメル質を実質的に脱灰する、または他の方式で損傷すること無く口に適用することができることは注目に値する。そのｐＨは、酸（例えばクエン酸または安息香酸）もしくは塩基（例えば水酸化ナトリウム）で制御する、または緩衝する（例えばクエン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、または炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等を用いて）ことができる。
【００４６】
[0048] あらゆる研磨性微粒子を用いてよく、それは炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム（例えばリン酸二カルシウム二水和物）、硫酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、シリカ（例えば水和シリカ）、酸化鉄、酸化アルミニウム、パーライト、プラスチック粒子、例えばポリエチレン、およびそれらの組み合わせから選択されてよい。特に、その研磨剤はリン酸カルシウム（例えばリン酸二カルシウム二水和物）、硫酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、シリカ（例えば水和シリカ）、ピロリン酸カルシウムおよび組み合わせから選択されてよい。沈降シリカ類またはシリカゲル類のようなあらゆるタイプのシリカを用いてよい。商業的に入手可能なシリカ類、例えばＩｎｅｏｓ Ｓｉｌｉｃａｓ、英国ウォリントンから入手可能なＩＮＥＯＳ ＡＣ４３が好ましい。他の研磨剤も本発明に従って用いることができる。米国特許第４，３５８，４３７号において述べられているように、研磨剤の形の粉末型炭酸カルシウムはそのような研磨剤の１つの重要な種類を構成している。これらの研磨剤の例は、製粉した石灰石もしくは大理石、白亜類、例えばアラレ石、方解石またはそれらの混合物、および合成的に沈降させた白亜類、例えば水道（ｗａｔｅｒｗｏｒｋｓ）白亜である。一般に、その炭酸カルシウムは４０ミクロン未満、好ましくは１５ミクロン未満の重量中央値直径（ｗｅｉｇｈｔ ｍｅｄｉａｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有しているべきである。第２の種類の研磨剤は粉末状シリカ類、特に米国特許第３，５３８，２３０号において定義されているシリカキセロゲル類である。
【００４７】
[0049] １態様において、口腔用組成物はシリカ性研磨剤を含む。その研磨剤はシリカ性物質、例えば含水シリカゲル、シリカキセロゲルまたは複合非晶質アルカリ金属アルミノシリケートもしくはジルコノシリケートまたは沈降シリカであってよい。コロイド状シリカ材料には、商標ＳＹＬＯＩＤの下で売られているコロイド状シリカ材料、例えばＳＹＬＯＩＤ ７２およびＳＹＬＯＩＤ ７４として売られてきたコロイド状シリカ材料が含まれる。沈降シリカ類には、商標ＺＥＯＤＥＮＴの下で売られている沈降シリカ類、例えばＺＥＯＤＥＮＴ １１３およびＺＥＯＤＥＮＴ １１５およびＺＥＯＤＥＮＴ １１９が含まれる。
【００４８】
[0050] マウスウォッシュまたはマウスリンスは一般に研磨性（ａｂｒａｓｉｖｅ）微粒子または研磨性（ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ）微粒子を含まないであろう。パッチは一般に研磨性（ａｂｒａｓｉｖｅ）微粒子または研磨性（ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ）微粒子を含まないであろう。
【００４９】
[0051] それによりこの発明の利点が得られた理論に束縛されるわけではないが、抗細菌剤（例えば２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル）のための特別な可溶化物質の非存在下においてさえも、薬剤の量が０．２５重量％〜０．３５重量％であり、ポリカルボキシレートが存在する場合、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の下方制御を経て歯周炎の処置を達成するのに十分な薬剤が存在すると信じられる。これは本明細書で記述される他の水に不溶性の非陽イオン性抗細菌剤に同様に適用可能である。
【００５０】
[0052] 口腔用組成物（例えば歯磨剤）は、フッ化物イオンの源、またはフッ素を提供する構成要素を、抗齲食剤として、２５ｐｐｍ〜５，０００ｐｐｍのフッ化物イオンを供給するのに十分な量で含んでいてもよい。これらの化合物は、水中でわずかに可溶性であってよく、または完全に水溶性であってよい。それらは、水中でフッ化物イオンを放出するそれらの能力により、および口腔用製剤の他の化合物との望まれない反応が実質的に無いことにより特性付けられる。これらの物質の中には、無機フッ化物塩類、例えば可溶性アルカリ金属、アルカリ土類金属塩類、例えば（ｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化アンモニウム、フッ化カルシウム、フッ化銅、例えばフッ化第一銅（ｃｕｐｒｏｕｓ ｆｌｕｏｒｉｄｅ）、フッ化亜鉛、フッ化バリウム、フルオロケイ酸ナトリウム、フルオロケイ酸アンモニウム、フルオロジルコン酸ナトリウム、フルオロジルコン酸アンモニウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノ−およびジ−フルオロリン酸アルミニウム、ならびにフッ素化ナトリウムカルシウムピロホスフェートがある。アルカリ金属およびスズフッ化物類、例えばフッ化ナトリウムおよびフッ化第一スズ、モノフルオロリン酸ナトリウム（ＭＦＰ）ならびにそれらの混合物が好ましい。典型的には、アルカリ金属フッ化物の場合、この構成要素は製剤の重量に基づいて２重量％まで、好ましくは０．０５％〜１％の範囲の量で存在する。モノフルオロリン酸ナトリウムの場合、その化合物は０．１〜３％、１態様において０．７〜０．８％の量で存在してよい。
【００５１】
[0053] １観点において、組成物はさらに、スズイオン剤；フッ化物化合物；フッ化ナトリウム；クロルヘキシジン；アレキシジン；ヘキセチジン；サンギナリン；塩化ベンザルコニウム；サリチルアニリド；臭化ドミフェン；塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）；塩化テトラデシルピリジニウム（ＴＰＣ）；塩化Ｎ−テトラデシル−４−エチルピリジニウム（ＴＤＥＰＣ）；オクテニジン；デルモピノール（ｄｅｌｍｏｐｉｎｏｌ）；オクタピノール（ｏｃｔａｐｉｎｏｌ）；ナイシン（ｎｉｓｉｎ）；亜鉛イオン剤；銅イオン剤；精油；フラノン類；バクテリオシン類、エチルラウロイルアルギネート（ｅｔｈｙｌｌａｕｒｏｙｌ ａｒｇｉｎａｔｅ）、マグノリアの抽出物、金属イオン源、アルギニン、重炭酸アルギニン、ホノキオール（ｈｏｎｏｋｉｏｌ）、マゴノール（ｍａｇｏｎｏｌ）、ウルソール酸（ｕｒｓｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ウルシック酸（ｕｒｓｉｃ ａｃｉｄ）、モリン、シーバックソーンの抽出物、過酸化物、酵素、ツバキ抽出物、フラボノイド、フラバン、ハロゲン化ジフェニルエーテル、クレアチン、およびプロポリスから選択される薬剤を含む。
【００５２】
[0054] 本発明の一部の態様は、口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物を同定する方法を提供し、その方法は以下のことを含む：口腔の疾患または病気を患う哺乳類から第１の歯肉試料を得て；前記の哺乳類の口腔から第２の歯肉試料を得て；前記の第１の試料を試験化合物と接触させ；前記の第２の歯肉試料を陽性対照と接触させ、ここで前記の陽性対照は１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の発現を下方制御することが知られている化合物であり；前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を測定し；前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度を測定し；そして、前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度と比較する；ここで、前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照と同等の、またはより大きな程度まで下方制御する試験化合物は口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物である。
【００５３】
[0055] 他の態様において、その１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類は次のものからなるグループから選択される：ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３。さらなる態様において、その陽性対照はＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を下方制御する。
【００５４】
[0056] 一部の態様において、その口腔の疾患または病気は歯肉炎または歯周炎である。他の態様において、その陽性対照はハロゲン化ジフェニルエーテルである。さらに他の態様において、その陽性対照はトリクロサンである。
【００５５】
[0057] 一部の態様において、その試験化合物は前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する。さらなる態様において、その試験化合物はＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する。さらにそれ以上の態様は、その試験化合物がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現をその陽性対照より大きな程度まで下方制御する方法を提供する。
【００５６】
[0058] 一部の態様において、その陽性対照はＭＭＰ−８の発現を下方制御する。一部の態様において、その陽性対照はＭＭＰ−９の発現を下方制御する。さらに他の態様において、その陽性対照はＭＭＰ−１３の発現を下方制御する。
【００５７】
[0059] 本発明は下記の実施例においてさらに記述される。その実施例は単に説明的なものであり、記述され、特許請求される本発明の範囲を限定するものでは決して無い。
【実施例】
【００５８】
実施例１：ＭＭＰ−９の調製および特性付け
[0060] Ｕ９３７細胞およびＲＰＭＩ １６４０培養培地はＡＴＣＣから得た。ヒトＭＭＰ−９ ＥＬＩＳＡキット（ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ）はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから得た。ウシ胎児血清（ＦＢＳ）はＶＷＲから得て、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）はＳｉｇｍａから得た。
【００５９】
[0061] ヒト白血病Ｕ９３７単球性リンパ腫細胞を、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン−ストレプトマイシン溶液を補ったＲＰＭＩ １６４０培地中で培養した。細胞を５％ＣＯ２および９５％空気を含む加湿した雰囲気中で３７℃で培養した。処置の前に、細胞を１％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中に一夜移した。細胞を４８ウェルプレート上に蒔いた。細胞培養培地は、ＴＮＦα（２５０ｎｇ／ｍＬ）、トリクロサン（１ｐｐｍ）のどちらかを、もしくは両方の薬剤を一緒に含んでいた、または薬剤を含んでいなかった（対照）。処置の後、細胞を２４時間培養した。馴化培地（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉａ）を集め、分析まで−８０℃で保管した。馴化培地の試料に対して、市販のＥＬＩＳＡプロトコルに従ってＭＭＰ−９に関する酸素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）を行った（図１）。
【００６０】
[0062] ＴＮＦαで刺激したＵ９３７細胞は、ＭＭＰ−９のレベルの増大をもたらした。１ｐｐｍでのトリクロサンは、ＴＮＦαで刺激したＵ９３７細胞においてＭＭＰ−９のレベルを有意に低減させた。
【００６１】
[0063] 表１：トリクロサンのＭＭＰ−９産生への作用を示す、図１に関するデータ。
【００６２】
【表１】
【００６３】
実施例２：ＭＭＰ−１３の調製および特性付け
[0064] 副甲状腺ホルモン（ラットＰＴＨ １−３４）はＳｉｇｍａから購入した。ＵＭＲ １０６−０１細胞を、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．４、１％非必須アミノ酸、１００ユニット／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、５％ウシ胎児血清を補ったイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養した。リアルタイム定量ＲＴ−ＰＣＲを次の方法に従って実施した：ＵＭＲ １０６−０１細胞を１２ウェルプレート中で蒔き、細胞培養培地中で２〜３日培養した。細胞がコンフルエントになったら、細胞飢餓（ｃｅｌｌ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ）のため、細胞培養培地を一夜１％ウシ胎児血清と交換した。細胞をトリクロサンまたはトリクロサンを含む歯磨剤（例えば米国特許第４，８９４，２２０号、第５，０３２，３８６号、および関連する特許を参照）と共に１５分間前保温し、次いでＰＴＨ（１０−８Ｍ）と共に４時間保温した。
【００６４】
[0065] ＰＴＨで刺激した、またはＰＴＨ無しのＵＭＲ １０６−０１細胞からＴＲＩｚｏｌ試薬を用いて全ＲＮＡを単離した。ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴキットを用いて、製造業者の説明書に従って全ＲＮＡ（０．１μｇ）を逆転写してｃＤＮＡにした。プライマーを用いてｃＤＮＡに対してＰＣＲを実施し、それの配列を表２に示す。それぞれのプライマー（０．２μＭ）および１２．５μｌのＰｌａｔｉｎｕｍ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ＵＤＧ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＰＣＲ混合物（２２．５μｌ）に２．５μｌのｃＤＮＡを添加することにより、全てのｃＤＮＡを増幅した。反応物を５０℃で２分間前保温してＵＤＧによりｄＵを含むＤＮＡの混入を除去し（ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅ）、次いで９５℃で２分間前保温してＵＤＧを不活性化し、Ｔａｑを活性化した。ＰＣＲプログラムは、９５℃における変性を１５秒間、６０℃におけるプライマーのアニーリングおよび伸長を３０秒間、を４９サイクル続けた。遺伝子発現の相対的定量を２−デルタデルタＣＴ法（２−ｄｅｌｔａ ｄｅｌｔａ ＣＴ ｍｅｔｈｏｄ）を用いることにより決定し、ここで遺伝子発現の倍率変化は対照試料と比較してである。全ての試料はβ−アクチンに対して標準化された。
【００６５】
[0066] 全ての結果を三つ組み（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）測定の平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）として表し、全ての実験を少なくとも３回繰り返した。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いて統計分析を行った。
【００６６】
[0067] ＰＴＨで刺激したＵＭＲ細胞は、ＭＭＰ−１３の発現の増大をもたらした。１０ｐｐｍ、４ｐｐｍ、および１ｐｐｍでのトリクロサンは、ＰＴＨで刺激したＵＭＲ細胞においてＭＭＰ−１３の発現を有意に低減させた。１０ｐｐｍのトリクロサンを含むトリクロサン含有歯磨剤スラリーは、ＰＴＨで刺激したＵＭＲ細胞においてＭＭＰ−１３の発現を有意に低減させた。
【００６７】
[0068] 表２：プライマー配列。
【００６８】
【表２】
【００６９】
[0069] 表３：トリクロサンがＭＭＰ−１３の発現を阻害することを示す、図２に関するデータ
【００７０】
【表３】
【００７１】
[0070] 表４：トリクロサン含有歯磨剤がＭＭＰ−１３の発現を阻害することを示す、図３に関するデータ
【００７２】
【表４】
【００７３】
。
【背景技術】
【０００１】
[0001] 歯周炎は、部分的には、歯周の有機マトリックスの異常な、および過度の分解により特性付けられる。このマトリックスには、歯肉、歯周靭帯、セメント質および歯槽骨が含まれる。そのマトリックスの破壊の少なくとも一部は、亜鉛依存性エンドペプチダーゼ類のファミリーであるマトリックスメタロプロテイナーゼ類（ＭＭＰ類）の過剰産生により仲介される。ＭＭＰ類は類骨（ｏｓｔｅｏｉｄ）（すなわち、石灰化されていない新しく合成された骨マトリックス）を分解し、次いでマトリックスを分解することにより骨吸収も促進する。これらの事象は結果として歯肉後退、ポケット形成、付着の喪失、および最終的には歯の喪失を含む歯周炎の臨床症状をもたらす。
【発明の概要】
【０００２】
[0002] 本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置するための方法であって、その哺乳類の口の中の細胞をＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼを下方制御する薬剤と接触させることを含む方法を含み、ここでそのメタロプロテイナーゼの下方制御は歯周炎と関係する少なくとも１種類の症状の低減と相関する。
【０００３】
[0003] 本発明は哺乳類において歯周炎を処置するのに有用である化合物を同定する方法も含み、その方法は、細胞を試験化合物と接触させ、その試験化合物がＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼを下方制御するかどうかを決定することを含み、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼ類の少なくとも１種類の下方制御はその試験化合物が歯周炎を処置するのに有用であることを示すものである。
【０００４】
[0004] 本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔において少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼを下方制御するのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法も含み、そのマトリックスメタロプロテイナーゼはＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択され、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼの下方制御は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。
【０００５】
[0005] 本発明はさらに、それを必要とする哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼ活性を低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を含み、そのマトリックスメタロプロテイナーゼはＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択され、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の阻害は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。
【０００６】
[0006] 本発明は、それを必要とする哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼの病的過剰を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルを低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を含み、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの抑制は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらし、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼはＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される。
【０００７】
[0007] １態様において、方法は以下のものを含む口腔用組成物を含む：０〜３６重量％のシリカ性研磨剤；０．２５重量％〜０．３５重量％の、ハロゲン化ジフェニルエーテル類、ハロゲン化サリチルアニリド類、安息香酸エステル類（ｂｅｎｘｏｉｃ ｅｓｔｅｒｓ）、ハロゲン化カルバニリド類およびフェノール化合物からなるグループから選択される実質的に水に不溶性の非陽イオン性抗細菌剤；ならびに有効量の０．０１重量％〜４．０重量％の抗細菌増進剤、それは口の歯および歯肉表面への前記の抗細菌剤の送達および接着、ならびに口の歯および歯肉表面上での前記の抗細菌剤の保持を増進し、ここで前記の抗細菌増進剤は（ｉ）マレイン酸または無水マレイン酸と別の不活性なエチレン的に（ｅｔｈｙｌｅｎｉｃａｌｌｙ）不飽和な重合可能な単量体とのコポリマー、もしくは（ｉｉ）ポリ（ベータ−スチレン−ホスホン酸）またはポリ（アルファ−スチレンホスホン酸）ポリマーまたはどちらかのスチレンホスホン酸と別のエチレン的に不飽和な単量体とのコポリマーであり、その組成物は、場合によりさらに２５ｐｐｍ〜５，０００ｐｐｍのフッ化物イオンを供給するのに十分な量のフッ化物イオンを提供する源を含む。１態様において、口腔用組成物は０．０１〜３６重量％のシリカ性研磨剤を含む。別の態様において、口腔用組成物はシリカ性研磨剤を含まない。
【０００８】
[0008] １態様において、方法は抗歯石に有効な量の少なくとも１種類の水溶性の線状の分子的に脱水されたポリリン酸塩を不可欠な抗歯石剤として、抗プラークに有効な量の実質的に水に不溶性の非陽イオン性抗細菌化合物を不可欠な抗プラーク剤として、および場合により、２５ｐｐｍ〜５，０００ｐｐｍのフッ化物イオンを供給するのに十分な量のフッ化物イオンを提供する源を含む口腔用組成物を含む。１観点において、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルは組成物中に１ｐｐｍから１００ｐｐｍまでの濃度で存在する。
【０００９】
[0009] １態様において、口腔用組成物はマウスウォッシュ（ｍｏｕｔｈｗａｓｈ）またはマウスリンス（ｍｏｕｔｈｒｉｎｓｅ）である。１観点において、マウスウォッシュまたはマウスリンスはシリカ性研磨剤を含まない。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】[0010] 図１は、ＴＮＦαに誘導される単球のＭＭＰ−９産生における２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルの作用を図説する。
【図２】[0011] 図２は、ＰＴＨに誘導される骨芽細胞のＭＭＰ−１３産生における２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルの作用を図説する。
【図３】[0012] 図３は、ＰＴＨに誘導される骨芽細胞のＭＭＰ−１３産生における本発明の歯磨剤の作用を図説する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
[0013] 歯周炎における３種類の主要な破壊的ＭＭＰ類はＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３である。ＭＭＰ−８およびＭＭＰ−１３はコラゲナーゼであり、ＭＭＰ−９はゼラチナーゼである。３種類の酵素は全て、病気にかかった歯周組織および歯肉溝滲出液中に見出しうる。これらの酵素のレベルは歯周炎の臨床指標に正に相関している。すなわち、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の上昇した、または“正常より上の”レベルは、歯周炎を示すものである。その測定は、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の酵素、ＲＮＡ、または生物学的活性についてなされてよい。
【００１２】
[0014] 本明細書で述べられるように、ここで、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）を含む口腔用組成物は哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるために用いることができることが示される。１態様において、その口腔用組成物は歯磨剤である。別の態様において、その口腔用組成物はとりわけマウスウォッシュ、パッチ、またはゲルを構成する。別の観点において、抗細菌化合物は哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるために用いることができる。
【００１３】
[0015] 全体において用いられるように、範囲はその範囲内にあるそれぞれおよび全ての値を記述するための略記として用いられる。範囲内のあらゆる値は、範囲の末端として選択することができる。加えて、本明細書において引用される全ての参考文献をそのまま本明細書に援用する。本開示における定義および引用された参考文献の定義において不一致がある場合には、本開示が統制する。
【００１４】
[0016] 本明細書において用いられる用語“歯周炎”は、歯肉、歯周靭帯、セメント質および歯槽骨を含む歯周の有機マトリックスの異常な、および過度の分解を指す。歯周炎の臨床症状には、歯肉後退、ポケット形成、マトリックスの付着の喪失、歯および骨の喪失が含まれるが、それらに限定されない。歯周炎は早期歯周炎、中等度歯周炎または進行性歯周炎として特性付けることができる。しかし、当業者には理解されるであろうが、歯周炎は本明細書で述べられるそれらの症状および続発症のみに限定されるべきでは無い。早期歯周炎は、とりわけ以下の症状の１種類以上により臨床的に示される：プロービング（ｐｒｏｂｉｎｇ）の際の出血；ポケット（３〜４ｍｍ）の存在；限局性の後退の領域；付着の喪失（３〜４ｍｍ）；骨の喪失（例えば水平方向）；およびクラスＩ分岐部侵入領域（ｃｌａｓｓ Ｉ ｆｕｒｃａｔｉｏｎ ｉｎｖａｓｉｏｎ ａｒｅａｓ）。中等度歯周炎は、とりわけ以下の症状の１種類以上により臨床的に示される：ポケット（４〜６ｍｍ）の存在；付着の喪失（４〜６ｍｍ）の存在；プロービングの際の出血；グレードＩおよび／またはグレードＩＩ分岐部侵入領域；クラスＩ歯牙動揺；骨の喪失（例えば水平方向および／または垂直方向）；ならびに支持歯槽骨の１／３の喪失（すなわち、１：１の歯冠歯根比）。進行性歯周炎は以下の症状の１種類以上により臨床的に示される：プロービングの際の出血；ポケット（６ｍｍを超える）の存在；付着の喪失（６ｍｍを超える）；グレードＩＩおよび／またはグレードＩＩＩ分岐部侵入領域；クラスＩＩおよび／またはクラスＩＩＩ歯牙動揺；骨の喪失（例えば水平方向および／または垂直方向）；ならびに支持歯槽骨の１／３を超える喪失（すなわち、２：１以上の歯冠歯根比）。歯周炎は以下のものを含む下位分類に分けられるが、それらに限定されない：成人性歯周炎（例えばプラークと関係するもの）；早発性歯周炎（例えば青春期前、若年性、急速進行性、および同様のもの）；全身性疾患と関係する歯周炎；壊死性潰瘍性歯周炎；難治性歯周炎；インプラント周囲炎（ｐｅｒｉ−ｉｍｐｌａｎｔｉｔｉｓ）および同様のもの。
【００１５】
[0017] 本明細書で用いられる用語“処置”は、哺乳類を本発明の口腔用組成物と、および／または本発明の方法に従って接触させた際の、有害な病気の検出可能な改善および／またはその病気の症状の減少を指す。
【００１６】
[0018] 用語“歯周炎の処置”は、哺乳類における歯周炎の予防、および哺乳類における歯周炎と関係する１種類以上の前から存在する病気の進行の抑制を含むことは理解されるであろう。本明細書で用いられる用語“抑制する”および“抑制”は、療法的処置および／または予防が結果としてもたらすような、歯周炎の、処置無しでのその病気と比較した部分的な抑制または完全な抑制を指す。従って、本発明に従う歯周炎の処置は、本明細書で述べた症状および／または続発症の１種類以上の低減、抑制、改善、減少、減弱、休止、または消失を含む。
【００１７】
[0019] 本明細書で用いられる“病的過剰”は、許容される正常なレベルを上回る活性を指す。例えば、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性の“病的過剰”は、疾患では無い状態で通常見られるレベルを上回るマトリックスメタロプロテイナーゼ活性のレベルである。本明細書で用いられる“マトリックスメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰”は、歯周炎と関係するマトリックスメタロプロテイナーゼ活性のレベルである。
【００１８】
[0020] 本明細書で用いられる用語“下方制御する”は、酵素活性の低下、酵素活性のレベルの低下、タンパク質および／またはそのようなタンパク質をコードする核酸のレベルの低下、またはタンパク質、例えばＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の内の１種類以上の存在の生化学的作用の低下を指す。
【００１９】
[0021] １観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の病的過剰を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルを低減させるのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を提供し、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの抑制は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。
【００２０】
[0022] ＭＭＰ、例えばＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３は、本明細書で述べるように口腔において多数の方式の１つで低減させることができる。１態様において、ＭＭＰは、本明細書の他の箇所で述べるように、ＭＭＰを核酸レベルで下方制御することにより口腔において低減させることができる。そのような低減は、結果としてＭＭＰをコードする核酸（例えばｍＲＮＡ）および口腔中へと発現されるＭＭＰ酵素の１種類以上の低減をもたらすことができる。ＭＭＰをコードするｍＲＮＡの低減は、例えば、当業者には理解されるであろうが、本明細書で述べられる開示で武装した際に、多数の技法の内の１種類以上により達成することができる。例にはＭＭＰをコードするｍＲＮＡの転写の低減およびＭＭＰをコードするｍＲＮＡの分解／排除が含まれる。
【００２１】
[0023] 別の態様において、ＭＭＰは口腔中でＭＭＰ酵素の量を直接低減させることにより低減させることができる。ＭＭＰ酵素の低減は、当業者には理解されるであろうが、本明細書で述べられる開示で武装した際に、多数の技法の内の１種類以上により達成することができる。例には、とりわけ小分子阻害剤によるその酵素の阻害、天然の、または生物由来の（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ−ｄｅｒｉｖｅｄ）分子による阻害、その酵素のタンパク質分解による分解、およびその酵素の口腔からの親和性に基づく排除が含まれる。ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上を低減させる薬剤は、本明細書で記述される薬剤、例えば２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）であってよく、またはそれは別の抗細菌剤であってよい。別の観点において、薬剤は抗細菌剤以外の何かであってよい。そのように、本発明は歯周炎に悩む人を処置する方法を提供する。
【００２２】
[0024] 本発明の１観点において、それを必要とする哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させるための方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のマトリックスメタロプロテイナーゼ活性を低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を提供し、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼ活性の阻害は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。別の観点において、その哺乳類の口腔に２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することは、その哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるのに有効である量で行われ、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの低減は結果としてそのマトリックスメタロプロテイナーゼの全体的な酵素活性の低減をもたらし、それは結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。１態様において、１種類以上のＭＭＰ類の病的過剰は、哺乳類の口腔におけるＭＭＰの量の低減に関して本明細書の他の箇所で記述されているように低減させることができる。すなわち、ＭＭＰは核酸およびタンパク質レベルの一方または両方で低減させることができる。本明細書の他の箇所で記述されているように、１種類以上のそのようなＭＭＰの病的過剰の低減は、哺乳類における歯周炎の処置を提供することができる。
【００２３】
[0025] 別の観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類の口腔においてＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の活性を低減させる方法であって、その哺乳類の口腔にその哺乳類の口腔においてマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルを低減させるために有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含む方法を提供し、ここでそのマトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの抑制は結果として結合組織のマトリックスタンパク質構成要素の過剰な分解の抑制をもたらす。１態様において、その１種類以上のＭＭＰ類の活性は、哺乳類の口腔におけるＭＭＰタンパク質の量の低減に関して本明細書の他の箇所で記述されているように低減させることができる。すなわち、ＭＭＰを核酸およびタンパク質レベルの一方または両方で低減させ、それにより口腔におけるそのＭＭＰ類の活性を、そのＭＭＰの活性を直接低減させることにより、またはＭＭＰのタンパク質および／または核酸のレベルを低減させることにより間接的に、のどちらかで低減させることができる。
【００２４】
[0026] 別の観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法であって、その哺乳類の口腔中の細胞をＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の一方または両方を下方制御する薬剤と接触させることを含む方法を提供する。本発明に従って、そのメタロプロテイナーゼの下方制御は歯周炎と関係する少なくとも１種類の症状の低減と相関する。
【００２５】
[0027] ＭＭＰ、例えばＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３は、核酸レベルで下方制御することができる。限定的では無い例として、ＭＭＰは本発明に従ってＭＭＰをコードするｍＲＮＡを下方制御することにより下方制御することができる。１態様において、本発明の方法は、哺乳類の口腔をＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上を下方制御する薬剤と接触させることを含む。ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上を下方制御する薬剤は、本明細書で記述される薬剤、例えばトリクロサンであってよく、またはそれは別の抗細菌剤であってよい。別の観点において、薬剤は抗細菌剤以外の何かであってよい。そのように、本発明は歯周炎に悩む人を処置する方法を提供する。
【００２６】
[0028] 別の観点において、本発明はそれを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法を提供する。１態様において、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法は、その哺乳類の口腔にＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類を下方制御するのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含み、ここで、マトリックスメタロプロテイナーゼの下方制御は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。別の態様において、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法は、その哺乳類の口腔にＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類のレベルを低減させるのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含み、ここで、マトリックスメタロプロテイナーゼのレベルの低減は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。さらに別の態様において、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置する方法は、その哺乳類の口腔にＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の活性のレベルを低減させるのに有効である量の２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルを含む口腔用組成物を投与することを含み、ここで、マトリックスメタロプロテイナーゼ活性のレベルの低減は結果としてその哺乳類における歯周炎の処置をもたらす。
【００２７】
[0029] その哺乳類の口腔に口腔用組成物を投与することにより歯周炎を処置する方法において、１種類以上のＭＭＰ類の活性は、哺乳類の口腔におけるＭＭＰの量の低減に関して本明細書の他の箇所で記述されているように低減させることができる。すなわち、ＭＭＰを核酸およびタンパク質レベルの一方または両方で低減させ、それにより口腔においてそのＭＭＰ類の活性を低減させることができる。同様に、ＭＭＰの下方制御またはＭＭＰのレベルの低減は、本明細書の他の箇所で詳細に記述されているように、核酸およびタンパク質レベルのどちらかまたは両方における作用により影響を受ける可能性がある。
【００２８】
[0030] 別の観点において、本発明は、それを必要とする哺乳類において歯周炎を処置するのに有用な化合物を同定する方法であって、細胞を試験化合物と接触させ、その試験化合物がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９およびＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の一方または両方を下方制御するかどうかを決定することを含む方法を提供する。そのマトリックスメタロプロテイナーゼ類の少なくとも１種類の下方制御は、その試験化合物が歯周炎を処置するのに有用であることを示すものである。
【００２９】
[0031] １態様において、歯周炎を処置する方法は、本明細書で記述されるスクリーニングアッセイにより同定された薬剤、または歯周炎の１種類以上のマーカーを抑制する薬剤の組み合わせを投与することを含み、ここでその薬剤の少なくとも１種類は本明細書で記述されるスクリーニングアッセイにより同定された薬剤である。
【００３０】
[0032] １態様において、本発明は、歯周炎の処置のための方法であって、療法上有効量の歯周疾患および／または歯周障害を抑制する薬剤をそのような処置を必要とする対象に投与する段階を含む方法を提供する。本明細書で定められる薬剤の療法上有効量（すなわち、有効な投与量）は、０．００１から３０ｍｇ／ｋｇ体重まで、好ましくは０．０１から２５ｍｇ／ｋｇ体重まで、より好ましくは０．１から２０ｍｇ／ｋｇ体重まで、さらにもっと好ましくは１から１０ｍｇ／ｋｇ体重まで、２から９ｍｇ／ｋｇ体重まで、３から８ｍｇ／ｋｇ体重まで、４から７ｍｇ／ｋｇ体重まで、または５から６ｍｇ／ｋｇ体重までの範囲である。当業者は、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の全身の健康状態および／または年齢、および存在する他の疾患を含むがそれらに限定されない特定の要因が、対象を効果的に処置するのに必要な投与量に影響を及ぼす可能性があることを理解するであろう。さらに、療法上有効量の阻害剤を用いた対象の処置は単独の処置を含むことができ、または、好ましくは一連の処置を含むことができる。処置のために用いられる有効な投与量は個々の処置の過程にわたって増加または減少してよいことも理解されるであろう。投与量の変化は、本明細書で記述されるような診断アッセイの結果からもたらされてよい。
【００３１】
[0033] 当業者は、どのように歯周炎の存在を検出するかを理解するであろう。加えて、当業者は、どのようにＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の内の１種類以上の高いレベルを確認するかを理解するであろう。哺乳類において歯周炎が存在することまたは存在しないことを検出するための代表的な方法は、試験対象の口腔から生物学的試料を得て、その生物学的試料においてマーカーの核酸またはその核酸によりコードされるマーカーペプチドの存在が検出されるように、その生物学的試料を、本明細書で記述される歯周炎のマーカー（すなわちＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３）、例えばマーカーの核酸（例えば、とりわけｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）またはそのマーカーの核酸によりコードされるマーカーペプチド（例えば、とりわけペプチド断片またはタンパク質）の１種類以上を検出することができる化合物または薬剤と接触させることを含む。１態様において、マーカーのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡを検出するための薬剤は、マーカーのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡにハイブリダイズすることができる標識された核酸のプローブである。その核酸のプローブは、例えば、完全長のマーカーの核酸またはその一部であることができる。本発明の診断アッセイにおける使用に関する他の適切なプローブを本明細書で記述する。別の態様において、歯周炎のマーカーの活性をそのマーカーを検出するための手段として用いる（すなわちＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、またはＭＭＰ−１３の活性）。マーカーの活性を検出するための、現在知られている、または後に開発されるあらゆるアッセイを、本明細書に含める。
【００３２】
[0034] 別の態様において、マーカーペプチドを検出するための薬剤はマーカーペプチドに結合することができる抗体、例えば検出可能な標識を有する抗体である。抗体はポリクローナルまたはモノクローナルであることができる。完全な抗体、またはその断片（例えばＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）を用いることができる。プローブまたは抗体に関する用語“標識された”は、検出可能な物質をそのプローブまたは抗体に結合させる（すなわち物理的に連結させる）ことによるそのプローブまたは抗体の直接的な標識、および直接標識されている別の試薬との反応性によるそのプローブまたは抗体の間接的な標識を含むことを意図する。間接的な標識の例には、蛍光標識された二次抗体を用いる一次抗体の検出、およびそれを蛍光標識されたストレプトアビジンにより検出することができるようなＤＮＡプローブのビオチンによる末端標識が含まれる。
【００３３】
[0035] 本明細書で用いられる用語“生物学的試料”は、対象の口腔から分離された組織、細胞および生物学的流体、ならびに対象の口腔内に存在する組織、細胞および流体を含むことを意図する。すなわち、本発明の検出法は、インビトロおよびインビボにおいて生物学的試料中のマーカーのｍＲＮＡ、ペプチド（例えばタンパク質）、またはゲノムＤＮＡを検出するために用いることができる。限定的では無い例として、マーカーのｍＲＮＡの検出のためのインビトロの技法にはノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチューハイブリダイゼーションが含まれる。マーカーペプチドの検出のためのインビトロの技法には酸素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が含まれる。マーカーのゲノムＤＮＡの検出のためのインビトロの技法にはサザンハイブリダイゼーションが含まれる。マーカーペプチドの検出のためのインビボの技法には、対象の口腔中への標識された抗マーカー抗体の導入が含まれる。例えば、その抗体は、対象中でのそれの存在および位置を標準的な画像化技法により検出することができる放射性マーカーで標識することができる。
【００３４】
[0036] １態様において、その方法はさらに、対照の対象から対照生物学的試料を得ること、マーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在がその生物学的試料中で検出されるように、その対照試料をマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡを検出することができる化合物または薬剤と接触させること、および対照試料中のマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在を試験試料中のマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在と比較することを含む。あるいは、試験試料中のマーカーのペプチド、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの存在をデータベース中の、またはカルテ上の情報と比較して、結果として検出または診断をもたらすことができる。別の態様において、その方法はさらに歯周炎を有する対象から得られた対照生物学的試料を用いることを含み、ここでその対照試料は歯周炎の発症より前（すなわち、その対象が健康であった、または“正常な”、歯周炎では無い状態にあった時）にその対象から得られた。
【００３５】
[0037] 限定的では無い例として、細胞をＴＮＦαと接触させることによりＭＭＰ−９のレベルをインビトロで確認することができる。１態様において、細胞は単球である。細胞をＴＮＦαと接触させた後、ＭＭＰ−９のレベルをタンパク質または核酸レベルのどちらかで検出する。１観点において、抗細菌剤の存在下でも細胞をＴＮＦαと接触させることによりＭＭＰ−９のレベルをインビトロで確認する。１態様において、その抗細菌剤は２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルである。別の態様において、薬剤はドキシサイクリンである。別の観点において、薬剤は抗細菌剤以外の何かであってよい。１態様において、薬剤はＭＭＰ阻害剤である。
【００３６】
[0038] 本発明の態様において、ＭＭＰ−９のレベルを検出することによるＭＭＰ−９の下方制御の測定は、薬剤、例えば抗細菌剤の存在下で細胞をＴＮＦαと接触させ、抗細菌剤の非存在下で細胞をＴＮＦαと接触させることによりインビトロで確認されたＭＭＰ−９のレベルを比較することによりインビトロで確認され、ここでその実験条件はその他の点では同じである。抗細菌剤の存在下でのＭＭＰ−９のタンパク質、核酸または酵素活性の、抗細菌剤の非存在下におけるよりも低いレベルは、その抗細菌化合物がＭＭＰ−９を下方制御することを示すものである。本明細書で述べられる開示に基づいて、その同じ方法をＭＭＰ−８および／またはＭＭＰ−１３を評価するために用いてよいことは理解されるであろう。
【００３７】
[0039] ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９および／またはＭＭＰ−１３の下方制御のインビトロでの測定はインビボでの作用、観察または結果に相関させることができることは理解されるであろう。１観点において、インビトロで測定されるメタロプロテイナーゼの下方制御は、歯周炎の処置、インビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させる方法、ならびに歯周炎を処置する、および／またはインビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させるのに有用な化合物を同定する方法を含むがそれらに限定されないインビボでの観察を確証するものである。例えば、Golub et al., Inflamm. Res. (1997) 46:310-9, Preshaw et al., J. Clin. Periodontol. (2004) 31:697-707; Mantyla et al., J. Periodontal. Res. (2003) 38:436-439; Lorencini et al., Histol. Histopathol. (2009) 24:157-166;およびPozo et al., J. Periodontal Res. (2005) 40:199-207を参照。別の観点において、インビトロで測定されるメタロプロテイナーゼの下方制御は、歯周炎の処置、インビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させる方法、ならびに歯周炎を処置する、および／またはインビボでメタロプロテイナーゼおよび／またはメタロプロテイナーゼ活性の病的過剰を低減させるのに有用な化合物を同定する方法を含むがそれらに限定されないインビボでの結果を予測するものである。
【００３８】
[0040] 別の限定的では無い例として、細胞を副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）と接触させることによりＭＭＰ−１３のレベルをインビトロで確認することができる。１態様において、細胞は骨芽細胞である。細胞をＰＴＨと接触させた後、ＭＭＰ−１３のレベルをタンパク質または核酸レベルのどちらかで検出する。１観点において、抗細菌剤の存在下でも細胞をＰＴＨと接触させることによりＭＭＰ−１３のレベルをインビトロで確認する。１態様において、その抗細菌剤は２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルである。抗細菌剤の存在下でのＭＭＰ−１３タンパク質、核酸または酵素活性の、抗細菌剤の非存在下におけるよりも低いレベルは、その抗細菌化合物がＭＭＰ−１３を下方制御することを示すものである。
【００３９】
[0041] １観点において、本明細書で述べた口腔用組成物の歯周炎を処置する能力は、２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルのメタロプロテイナーゼの下方制御への作用をその口腔用組成物のメタロプロテイナーゼの下方制御への作用と比較することにより確認される。別の観点において、あらゆる口腔用組成物の歯周炎を処置する能力は、その口腔用組成物の作用を、インビボまたはインビトロのどちらかで、本明細書で述べた口腔用組成物の作用と比較することにより確認される。
【００４０】
[0042] 本発明はさらに、本発明の方法における使用のための口腔用組成物、例えば、とりわけ歯磨剤、ゲル、パッチ、マウスウォッシュ、またはスプレーを含む。１観点において、口腔用組成物は抗細菌剤を含む。典型的な態様において、その抗細菌剤は非陽イオン性抗細菌剤である。例えば米国特許第５，２８８，４８０号を参照、それをそのまま本明細書に援用する。その非陽イオン性抗細菌剤は、口腔用組成物中に０．２５〜０．３５重量％、好ましくは０．３％の有効抗プラーク量で存在する。その抗細菌剤は実質的に水に不溶性であり、これはその溶解度が２５℃の水中で１重量％未満であることを意味し、さらに０．１％未満であってよい。例えば口腔用組成物がマウスウォッシュである場合、抗細菌剤の濃度は別の歯磨剤、例えば練り歯磨きにおいて用いられる濃度の１０分の１を超えるまで低減させてよい。１態様において、その抗細菌剤は２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテルである。別の態様において、その口腔用組成物は２種類以上の抗細菌剤を含む。
【００４１】
[0043] １態様において、抗細菌増進剤（ＡＥＡ）はその抗細菌剤の口の表面への送達およびそれの口の表面上での保持を増進する。１観点において、ＡＥＡは接着性物質を含む。本発明のＡＥＡ物質に有用である物質および組成物の記述に関して、ならびに本発明において有用な口腔用組成物、例えば歯磨組成物の一般的な記述に関して、米国特許第５，２８８，４８０号を参照。限定的では無い例として、組成物中の接着性物質は１００，０００〜２，５００，０００（両端を含む）の数平均分子量を有するポリマーである。１観点において、その接着性物質はポリビニルホスホン酸、ポリ（１−ホスホノプロペン）スルホン酸、ポリ（ベータスチレンホスホン酸）、アルファスチレンホスホン酸、合成陰イオン性ポリマー性ポリカルボキシレート、無水マレイン酸、マレイン酸、およびメチルビニルエーテルのポリマーから選択される。別の観点において、その接着性分子はメチルビニルエーテルおよび無水マレイン酸のポリマーである。抗細菌増進剤は口腔用組成物の０．０１重量％〜４．０重量％であるレベルで用いることができる。
【００４２】
[0044] 本明細書で用いられる“送達増進基”は、ＡＥＡ（抗細菌剤を運んでいる）を口（例えば歯および歯肉）の表面に付着させ、または実質的に、接着により、凝集により（ｃｏｈｅｓｉｖｅｌｙ）、もしくは他の方式で結合させ、それにより抗細菌剤をそのような表面に“送達する”基を指す。一般に疎水性である有機性の保持増進基は、その抗細菌剤をＡＥＡに付着させ、またはそうでなければ結合させ、それによりその抗細菌剤のＡＥＡへの、および間接的に口の表面上での保持を促進する。一部の場合において、特にＡＥＡが架橋されたポリマーである場合、その抗細菌剤の付着はＡＥＡによるそれの物理的な捕捉（ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）により起こり、その構造はそのような捕捉のための多くの部位を生得的に提供する。架橋されたポリマーにおけるより高い分子量、より疎水的な架橋部分の存在は、その抗細菌剤のその架橋されたＡＥＡポリマーへの、またはその架橋されたＡＥＡポリマーによるその抗細菌剤の物理的捕捉をさらにもっと促進する。
【００４３】
[0045] １態様において、前記の抗細菌剤の口の歯および歯肉表面への送達および接着、ならびにそれの口の歯および歯肉表面上での保持を増進する抗細菌増進剤は、（ｉ）マレイン酸または無水マレイン酸と別の不活性なエチレン的に不飽和な重合可能な単量体とのコポリマー、もしくは（ｉｉ）ポリ（ベータ−スチレン−ホスホン酸）またはポリ（アルファ−スチレンホスホン酸）ポリマーまたはどちらかのスチレンホスホン酸と別のエチレン的に不飽和な単量体とのコポリマーである。しかし、当業者は本発明がその特定の抗細菌増進剤により限定されないことおよび他の抗細菌増進剤が本発明に含まれることを理解するであろう。
【００４４】
[0046] 典型的な歯磨剤において、湿潤剤を有する水相を含む口に許容可能なビヒクルが存在する。水は典型的には少なくとも３重量％、一般には３〜３５％の量で存在し、湿潤剤、好ましくはグリセリンおよび／またはソルビトールは典型的には合計でその歯磨剤の６．５〜７５重量％または８０重量％、より典型的には１０〜７５％の量で存在する。本発明において必須では無いが、ここで、場合により０．２５〜０．３５％の水に不溶性の非陽イオン性抗細菌剤が存在し、その抗細菌剤の唾液中での可溶化を助ける追加の成分がその水−湿潤剤ビヒクルに組み込まれてよい。そのような任意の可溶化剤には、湿潤剤ポリオール類、例えばプロピレングリコール、ジプロピレングリコール、およびヘキシレングリコール、セロソルブ類（ｃｅｌｌｏｓｏｌｖｅｓ）、例えばメチルセロソルブおよびエチルセロソルブ、直鎖中に少なくとも１２個の炭素を含む植物油およびワックス、例えばオリーブ油、ヒマシ油およびワセリン、ならびにエステル類、例えば酢酸アミル、酢酸エチルおよび安息香酸ベンジルが含まれる。本明細書で用いられる“プロピレングリコール”には、１，２−プロピレングリコールおよび１，３−プロピレングリコールが含まれる。かなり大きな量のポリエチレングリコール、特に６００以上の分子量のものは、ポリエチレングリコールが非陽イオン性抗細菌剤の抗細菌活性を効果的に阻害するため、避けるべきである。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）６００は、２５トリクロサン：１ＰＥＧ６００の重量比でトリクロサンと一緒に存在する場合、トリクロサンの抗細菌活性をポリエチレングリコールの非存在下で発揮される抗細菌活性から１０〜２０分の１に低減させる。
【００４５】
[0047] 口腔用組成物のｐＨは、一般には４．５〜１０、別の観点では６．５〜７．５の範囲にある。本発明の組成物は、５未満のｐＨで歯のエナメル質を実質的に脱灰する、または他の方式で損傷すること無く口に適用することができることは注目に値する。そのｐＨは、酸（例えばクエン酸または安息香酸）もしくは塩基（例えば水酸化ナトリウム）で制御する、または緩衝する（例えばクエン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、または炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム等を用いて）ことができる。
【００４６】
[0048] あらゆる研磨性微粒子を用いてよく、それは炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム（例えばリン酸二カルシウム二水和物）、硫酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、シリカ（例えば水和シリカ）、酸化鉄、酸化アルミニウム、パーライト、プラスチック粒子、例えばポリエチレン、およびそれらの組み合わせから選択されてよい。特に、その研磨剤はリン酸カルシウム（例えばリン酸二カルシウム二水和物）、硫酸カルシウム、沈降炭酸カルシウム、シリカ（例えば水和シリカ）、ピロリン酸カルシウムおよび組み合わせから選択されてよい。沈降シリカ類またはシリカゲル類のようなあらゆるタイプのシリカを用いてよい。商業的に入手可能なシリカ類、例えばＩｎｅｏｓ Ｓｉｌｉｃａｓ、英国ウォリントンから入手可能なＩＮＥＯＳ ＡＣ４３が好ましい。他の研磨剤も本発明に従って用いることができる。米国特許第４，３５８，４３７号において述べられているように、研磨剤の形の粉末型炭酸カルシウムはそのような研磨剤の１つの重要な種類を構成している。これらの研磨剤の例は、製粉した石灰石もしくは大理石、白亜類、例えばアラレ石、方解石またはそれらの混合物、および合成的に沈降させた白亜類、例えば水道（ｗａｔｅｒｗｏｒｋｓ）白亜である。一般に、その炭酸カルシウムは４０ミクロン未満、好ましくは１５ミクロン未満の重量中央値直径（ｗｅｉｇｈｔ ｍｅｄｉａｎ ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有しているべきである。第２の種類の研磨剤は粉末状シリカ類、特に米国特許第３，５３８，２３０号において定義されているシリカキセロゲル類である。
【００４７】
[0049] １態様において、口腔用組成物はシリカ性研磨剤を含む。その研磨剤はシリカ性物質、例えば含水シリカゲル、シリカキセロゲルまたは複合非晶質アルカリ金属アルミノシリケートもしくはジルコノシリケートまたは沈降シリカであってよい。コロイド状シリカ材料には、商標ＳＹＬＯＩＤの下で売られているコロイド状シリカ材料、例えばＳＹＬＯＩＤ ７２およびＳＹＬＯＩＤ ７４として売られてきたコロイド状シリカ材料が含まれる。沈降シリカ類には、商標ＺＥＯＤＥＮＴの下で売られている沈降シリカ類、例えばＺＥＯＤＥＮＴ １１３およびＺＥＯＤＥＮＴ １１５およびＺＥＯＤＥＮＴ １１９が含まれる。
【００４８】
[0050] マウスウォッシュまたはマウスリンスは一般に研磨性（ａｂｒａｓｉｖｅ）微粒子または研磨性（ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ）微粒子を含まないであろう。パッチは一般に研磨性（ａｂｒａｓｉｖｅ）微粒子または研磨性（ｐｏｌｉｓｈｉｎｇ）微粒子を含まないであろう。
【００４９】
[0051] それによりこの発明の利点が得られた理論に束縛されるわけではないが、抗細菌剤（例えば２，４，４’−トリクロロ−２’−ヒドロキシジフェニルエーテル）のための特別な可溶化物質の非存在下においてさえも、薬剤の量が０．２５重量％〜０．３５重量％であり、ポリカルボキシレートが存在する場合、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９またはＭＭＰ−１３の少なくとも１種類の下方制御を経て歯周炎の処置を達成するのに十分な薬剤が存在すると信じられる。これは本明細書で記述される他の水に不溶性の非陽イオン性抗細菌剤に同様に適用可能である。
【００５０】
[0052] 口腔用組成物（例えば歯磨剤）は、フッ化物イオンの源、またはフッ素を提供する構成要素を、抗齲食剤として、２５ｐｐｍ〜５，０００ｐｐｍのフッ化物イオンを供給するのに十分な量で含んでいてもよい。これらの化合物は、水中でわずかに可溶性であってよく、または完全に水溶性であってよい。それらは、水中でフッ化物イオンを放出するそれらの能力により、および口腔用製剤の他の化合物との望まれない反応が実質的に無いことにより特性付けられる。これらの物質の中には、無機フッ化物塩類、例えば可溶性アルカリ金属、アルカリ土類金属塩類、例えば（ｏｒ ｅｘａｍｐｌｅ）フッ化ナトリウム、フッ化カリウム、フッ化アンモニウム、フッ化カルシウム、フッ化銅、例えばフッ化第一銅（ｃｕｐｒｏｕｓ ｆｌｕｏｒｉｄｅ）、フッ化亜鉛、フッ化バリウム、フルオロケイ酸ナトリウム、フルオロケイ酸アンモニウム、フルオロジルコン酸ナトリウム、フルオロジルコン酸アンモニウム、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノ−およびジ−フルオロリン酸アルミニウム、ならびにフッ素化ナトリウムカルシウムピロホスフェートがある。アルカリ金属およびスズフッ化物類、例えばフッ化ナトリウムおよびフッ化第一スズ、モノフルオロリン酸ナトリウム（ＭＦＰ）ならびにそれらの混合物が好ましい。典型的には、アルカリ金属フッ化物の場合、この構成要素は製剤の重量に基づいて２重量％まで、好ましくは０．０５％〜１％の範囲の量で存在する。モノフルオロリン酸ナトリウムの場合、その化合物は０．１〜３％、１態様において０．７〜０．８％の量で存在してよい。
【００５１】
[0053] １観点において、組成物はさらに、スズイオン剤；フッ化物化合物；フッ化ナトリウム；クロルヘキシジン；アレキシジン；ヘキセチジン；サンギナリン；塩化ベンザルコニウム；サリチルアニリド；臭化ドミフェン；塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）；塩化テトラデシルピリジニウム（ＴＰＣ）；塩化Ｎ−テトラデシル−４−エチルピリジニウム（ＴＤＥＰＣ）；オクテニジン；デルモピノール（ｄｅｌｍｏｐｉｎｏｌ）；オクタピノール（ｏｃｔａｐｉｎｏｌ）；ナイシン（ｎｉｓｉｎ）；亜鉛イオン剤；銅イオン剤；精油；フラノン類；バクテリオシン類、エチルラウロイルアルギネート（ｅｔｈｙｌｌａｕｒｏｙｌ ａｒｇｉｎａｔｅ）、マグノリアの抽出物、金属イオン源、アルギニン、重炭酸アルギニン、ホノキオール（ｈｏｎｏｋｉｏｌ）、マゴノール（ｍａｇｏｎｏｌ）、ウルソール酸（ｕｒｓｏｌｉｃ ａｃｉｄ）、ウルシック酸（ｕｒｓｉｃ ａｃｉｄ）、モリン、シーバックソーンの抽出物、過酸化物、酵素、ツバキ抽出物、フラボノイド、フラバン、ハロゲン化ジフェニルエーテル、クレアチン、およびプロポリスから選択される薬剤を含む。
【００５２】
[0054] 本発明の一部の態様は、口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物を同定する方法を提供し、その方法は以下のことを含む：口腔の疾患または病気を患う哺乳類から第１の歯肉試料を得て；前記の哺乳類の口腔から第２の歯肉試料を得て；前記の第１の試料を試験化合物と接触させ；前記の第２の歯肉試料を陽性対照と接触させ、ここで前記の陽性対照は１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の発現を下方制御することが知られている化合物であり；前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を測定し；前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度を測定し；そして、前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度と比較する；ここで、前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照と同等の、またはより大きな程度まで下方制御する試験化合物は口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物である。
【００５３】
[0055] 他の態様において、その１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類は次のものからなるグループから選択される：ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３。さらなる態様において、その陽性対照はＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を下方制御する。
【００５４】
[0056] 一部の態様において、その口腔の疾患または病気は歯肉炎または歯周炎である。他の態様において、その陽性対照はハロゲン化ジフェニルエーテルである。さらに他の態様において、その陽性対照はトリクロサンである。
【００５５】
[0057] 一部の態様において、その試験化合物は前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する。さらなる態様において、その試験化合物はＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する。さらにそれ以上の態様は、その試験化合物がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現をその陽性対照より大きな程度まで下方制御する方法を提供する。
【００５６】
[0058] 一部の態様において、その陽性対照はＭＭＰ−８の発現を下方制御する。一部の態様において、その陽性対照はＭＭＰ−９の発現を下方制御する。さらに他の態様において、その陽性対照はＭＭＰ−１３の発現を下方制御する。
【００５７】
[0059] 本発明は下記の実施例においてさらに記述される。その実施例は単に説明的なものであり、記述され、特許請求される本発明の範囲を限定するものでは決して無い。
【実施例】
【００５８】
実施例１：ＭＭＰ−９の調製および特性付け
[0060] Ｕ９３７細胞およびＲＰＭＩ １６４０培養培地はＡＴＣＣから得た。ヒトＭＭＰ−９ ＥＬＩＳＡキット（ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ）はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから得た。ウシ胎児血清（ＦＢＳ）はＶＷＲから得て、ペニシリン−ストレプトマイシン溶液および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）はＳｉｇｍａから得た。
【００５９】
[0061] ヒト白血病Ｕ９３７単球性リンパ腫細胞を、１０％ＦＢＳおよび１％ペニシリン−ストレプトマイシン溶液を補ったＲＰＭＩ １６４０培地中で培養した。細胞を５％ＣＯ２および９５％空気を含む加湿した雰囲気中で３７℃で培養した。処置の前に、細胞を１％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ中に一夜移した。細胞を４８ウェルプレート上に蒔いた。細胞培養培地は、ＴＮＦα（２５０ｎｇ／ｍＬ）、トリクロサン（１ｐｐｍ）のどちらかを、もしくは両方の薬剤を一緒に含んでいた、または薬剤を含んでいなかった（対照）。処置の後、細胞を２４時間培養した。馴化培地（Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ｍｅｄｉａ）を集め、分析まで−８０℃で保管した。馴化培地の試料に対して、市販のＥＬＩＳＡプロトコルに従ってＭＭＰ−９に関する酸素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）を行った（図１）。
【００６０】
[0062] ＴＮＦαで刺激したＵ９３７細胞は、ＭＭＰ−９のレベルの増大をもたらした。１ｐｐｍでのトリクロサンは、ＴＮＦαで刺激したＵ９３７細胞においてＭＭＰ−９のレベルを有意に低減させた。
【００６１】
[0063] 表１：トリクロサンのＭＭＰ−９産生への作用を示す、図１に関するデータ。
【００６２】
【表１】
【００６３】
実施例２：ＭＭＰ−１３の調製および特性付け
[0064] 副甲状腺ホルモン（ラットＰＴＨ １−３４）はＳｉｇｍａから購入した。ＵＭＲ １０６−０１細胞を、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．４、１％非必須アミノ酸、１００ユニット／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン、５％ウシ胎児血清を補ったイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ）中で培養した。リアルタイム定量ＲＴ−ＰＣＲを次の方法に従って実施した：ＵＭＲ １０６−０１細胞を１２ウェルプレート中で蒔き、細胞培養培地中で２〜３日培養した。細胞がコンフルエントになったら、細胞飢餓（ｃｅｌｌ ｓｔａｒｖａｔｉｏｎ）のため、細胞培養培地を一夜１％ウシ胎児血清と交換した。細胞をトリクロサンまたはトリクロサンを含む歯磨剤（例えば米国特許第４，８９４，２２０号、第５，０３２，３８６号、および関連する特許を参照）と共に１５分間前保温し、次いでＰＴＨ（１０−８Ｍ）と共に４時間保温した。
【００６４】
[0065] ＰＴＨで刺激した、またはＰＴＨ無しのＵＭＲ １０６−０１細胞からＴＲＩｚｏｌ試薬を用いて全ＲＮＡを単離した。ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴキットを用いて、製造業者の説明書に従って全ＲＮＡ（０．１μｇ）を逆転写してｃＤＮＡにした。プライマーを用いてｃＤＮＡに対してＰＣＲを実施し、それの配列を表２に示す。それぞれのプライマー（０．２μＭ）および１２．５μｌのＰｌａｔｉｎｕｍ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ＵＤＧ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＰＣＲ混合物（２２．５μｌ）に２．５μｌのｃＤＮＡを添加することにより、全てのｃＤＮＡを増幅した。反応物を５０℃で２分間前保温してＵＤＧによりｄＵを含むＤＮＡの混入を除去し（ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅ）、次いで９５℃で２分間前保温してＵＤＧを不活性化し、Ｔａｑを活性化した。ＰＣＲプログラムは、９５℃における変性を１５秒間、６０℃におけるプライマーのアニーリングおよび伸長を３０秒間、を４９サイクル続けた。遺伝子発現の相対的定量を２−デルタデルタＣＴ法（２−ｄｅｌｔａ ｄｅｌｔａ ＣＴ ｍｅｔｈｏｄ）を用いることにより決定し、ここで遺伝子発現の倍率変化は対照試料と比較してである。全ての試料はβ−アクチンに対して標準化された。
【００６５】
[0066] 全ての結果を三つ組み（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）測定の平均±標準誤差（Ｓ．Ｅ．）として表し、全ての実験を少なくとも３回繰り返した。Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いて統計分析を行った。
【００６６】
[0067] ＰＴＨで刺激したＵＭＲ細胞は、ＭＭＰ−１３の発現の増大をもたらした。１０ｐｐｍ、４ｐｐｍ、および１ｐｐｍでのトリクロサンは、ＰＴＨで刺激したＵＭＲ細胞においてＭＭＰ−１３の発現を有意に低減させた。１０ｐｐｍのトリクロサンを含むトリクロサン含有歯磨剤スラリーは、ＰＴＨで刺激したＵＭＲ細胞においてＭＭＰ−１３の発現を有意に低減させた。
【００６７】
[0068] 表２：プライマー配列。
【００６８】
【表２】
【００６９】
[0069] 表３：トリクロサンがＭＭＰ−１３の発現を阻害することを示す、図２に関するデータ
【００７０】
【表３】
【００７１】
[0070] 表４：トリクロサン含有歯磨剤がＭＭＰ−１３の発現を阻害することを示す、図３に関するデータ
【００７２】
【表４】
【００７３】
。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物を同定する方法であって、その方法が以下の：
口腔の疾患または病気を患う哺乳類から第１の歯肉試料を得て；
前記の哺乳類の口腔から第２の歯肉試料を得て；
前記の第１の試料を試験化合物と接触させ；
前記の第２の歯肉試料を陽性対照と接触させ、ここで前記の陽性対照は１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の発現を下方制御することが知られている化合物であり；
前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を測定し；
前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度を測定し；そして
前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度と比較する；
ことを含み、前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照と同等の、またはより大きな程度まで下方制御する試験化合物が口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物である、前記方法。
【請求項２】
前記の１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記の陽性対照がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を下方制御する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記の口腔の疾患または病気が歯肉炎または歯周炎である、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記の陽性対照がハロゲン化ジフェニルエーテルである、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
陽性対照がトリクロサンである、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記の試験化合物が前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記の試験化合物がＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記の試験化合物がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記の陽性対照がＭＭＰ−８の発現を下方制御する、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記の陽性対照がＭＭＰ−９の発現を下方制御する、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記の陽性対照がＭＭＰ−１３の発現を下方制御する、請求項２に記載の方法。
【請求項１】
口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物を同定する方法であって、その方法が以下の：
口腔の疾患または病気を患う哺乳類から第１の歯肉試料を得て；
前記の哺乳類の口腔から第２の歯肉試料を得て；
前記の第１の試料を試験化合物と接触させ；
前記の第２の歯肉試料を陽性対照と接触させ、ここで前記の陽性対照は１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の発現を下方制御することが知られている化合物であり；
前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を測定し；
前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度を測定し；そして
前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の試験化合物により下方制御される程度を前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現が前記の陽性対照により下方制御される程度と比較する；
ことを含み、前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照と同等の、またはより大きな程度まで下方制御する試験化合物が口腔の疾患または病気を処置するのに有用な化合物である、前記方法。
【請求項２】
前記の１種類以上のマトリックスメタロプロテイナーゼ類がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３からなるグループから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記の陽性対照がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を下方制御する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記の口腔の疾患または病気が歯肉炎または歯周炎である、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記の陽性対照がハロゲン化ジフェニルエーテルである、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
陽性対照がトリクロサンである、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記の試験化合物が前記のマトリックスメタロプロテイナーゼ類の１種類以上の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記の試験化合物がＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記の試験化合物がＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１３の発現を前記の陽性対照より大きな程度まで下方制御する、前記の請求項のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記の陽性対照がＭＭＰ−８の発現を下方制御する、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
前記の陽性対照がＭＭＰ−９の発現を下方制御する、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
前記の陽性対照がＭＭＰ−１３の発現を下方制御する、請求項２に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２０１２−５２４８８４（Ｐ２０１２−５２４８８４Ａ）
【公表日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０３７１５（Ｐ２０１２−５０３７１５）
【出願日】平成２２年４月１日（２０１０．４．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２９６７０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１５０３１
【国際公開日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【出願人】（５９０００２６１１）コルゲート・パーモリブ・カンパニー (147)
【氏名又は名称原語表記】ＣＯＬＧＡＴＥ−ＰＡＬＭＯＬＩＶＥ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１０月１８日（２０１２．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月１日（２０１０．４．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２９６７０
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１５０３１
【国際公開日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【出願人】（５９０００２６１１）コルゲート・パーモリブ・カンパニー (147)
【氏名又は名称原語表記】ＣＯＬＧＡＴＥ−ＰＡＬＭＯＬＩＶＥ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
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