台湾ツルドクダミ（ＰｏｌｙｇｏｎｕｍｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍＴｈｕｎｂ．ｅｘＭｕｒｒａｙｖａｒ．ｈｙｐｏｌｅｕｃｕｍ）の抽出物とメタボリック症候群を改善するための組成物
【課題】メタボリック症候群を改善する組成物を提供すること。
【解決手段】台湾ツルドクダミの抽出物が次の方法で調製される。その方法は、（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミを部分体又は完全体の形態で提供することと、（ｂ）その部分体又は完全体から溶媒を用いて原抽出物を抽出することと、（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて抽出生成物を得ることと、（ｄ）該抽出生成物を収集することとを備える。
【解決手段】台湾ツルドクダミの抽出物が次の方法で調製される。その方法は、（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミを部分体又は完全体の形態で提供することと、（ｂ）その部分体又は完全体から溶媒を用いて原抽出物を抽出することと、（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて抽出生成物を得ることと、（ｄ）該抽出生成物を収集することとを備える。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、台湾ツルドクダミ（タデ属；学名Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）の抽出物、特に台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）のメタボリック症候群を改善する抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリック症候群は、心臓血管疾患及び糖尿病のリスクを増加させる内科的疾患の組み合わせである。多数の人々が一団となってメタボリック症候群にかかっている。最近、食生活及び生活様式の変化に伴い、ますます多くの人々が、高血糖値、高血圧値、又は高血中脂質値を含む症状のメタボリック症候群にかかっていると診断されている。
メタボリック症候群は、具体的には抗インシュリン症候群を指す場合がある。
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）は台湾に固有の変種である。
ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の典型的な変種と異なり、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）は特徴的な肥大した根を持たず、風邪、咳、又は関節炎の治療に民間療法において広く使用されている。
【０００３】
特許文献１は、中国薬草ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の抽出物を利用する高血糖症の治療のための組成物と方法を開示している。この薬草は0.1N NH4OHを用いて抽出され、遠心分離機にかけられる。その上澄み液をSephadex G-25カラムに供し、３つの画分を収集する。１つの画分は脂肪細胞アッセイにおいて高いインシュリン相乗活性を示し、血糖値を下げることが示された。
【０００４】
特許文献２は、インシュリン相乗剤を含む組成物を提供しインシュリン活性を増加させる組成物と方法を開示している。この組成物は、ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）、ハラタケ科（Agaricaceae）、又は川桂皮（ニッケイ属；Cinnamomum mairei）の水抽出物から得た１つ以上の物質を含む。この発明もまた患者の高血糖症の治療のための方法としてインシュリン相乗剤を提供する。この方法は血糖値、グリコシル化血色素値、又はブドウ糖値を減少させるのに使用できる。
これらの先行技術は、インシュリンを活性化することでブドウ糖値を抑えるためにツルドクダミ（Polygonum multiflorum）抽出物を使用することに専ら関係している。しかし、これらの先行技術は、血中脂質を下げるのにも、メタボリック症候群を改善するのにも使用できない。
【０００５】
また、特許文献３は、ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb）、サンザシ（Fructus Crataegi）、タンジン（Salvia miltiorrhiza Bunge）、及びサンシチニンジン（Radix Notoginseng）を含む薬剤組成物を開示している。この組成物は血中脂質を下げる効果がり、従って高脂質血症の治療と予防のための薬の調合において使用できる。また、この発明は高脂質血症の治療と予防の方法を開示している。しかし、この組成物は一体で使用されなければならない。また、この特許は血糖値を下げる方法も、メタボリック症候群を改善する方法も開示していない。
【０００６】
上述のように、薬剤組成物と食品添加剤は、血糖または血中脂質を減少させる単一の効果を提供するのみである。いずれの先行技術も、メタボリック症候群の治療用に台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を使用することを開示していない。また、いずれの先行技術も、ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の典型的な変種を使用している。
メタボリック症候群の患者の人口が増加してきている。インシュリン抵抗を予防しメタボリック症候群を改善する医療効果がある化合物又は組成物、特に自然植物組成物を発見することは、当該分野において重要である。
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，５３１，９９１号明細書
【特許文献２】米国特許第６，２００，５６９号明細書
【特許文献３】欧州特許第ＥＰ１８２９５１９Ａ１号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の主たる目的は、メタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を調製することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の目的を達成するために、本発明に係るメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、次の方法で調製される。その方法は、
（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を部分体又は完全体の形態で提供することと、
（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出することと、
（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物を得ることと、
（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集することと
を備える。
【００１０】
好適な実施形態では、部分体の形態の前記生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミは、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の茎または根である。
【００１１】
別の好適な実施形態では、前記溶媒は、水、アルコール、アルコール水溶液、又は酢酸エチルである。
【００１２】
好ましくは、前記溶媒は、２５〜１００重量％のエタノールと、７５〜０重量％の水とを含む。より好ましくは、前記溶媒は、７０〜１００重量％のエタノールと、３０〜０重量％の水とを含む。
【００１３】
好適な実施形態では、前記溶媒は、酸性アルコールである。好ましくは、該酸性アルコールは、０．１％の塩化水素酸を含む。
【００１４】
好ましくは、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）と前記溶媒との重量体積比は、１：５から１：２０の間である。
好適な実施形態では、前記ステップ（ｂ）は、室温で実行される。
また、本発明は、メタボリック症候群を改善するための方法にも関する。その方法は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の治療上効果的な量の抽出物を罹患した対象者に投与することを含む。
【００１５】
好適な実施形態では、メタボリック症候群を改善するため台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の前記抽出物は、グルコシド酵素またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）を抑制し、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化し、血糖値及び血中脂質値を下げる。
【００１６】
好ましくは、前記メタボリック症候群は抗インシュリン症候群である。より好ましくは、該抗インシュリン症候群は高血糖又は高血中脂質である。
【００１７】
また、本発明は、次の方法で調製されるメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物にも関する。その方法は、
（ａ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の生の又は乾燥させた茎と根を提供することと、
（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）からアルコール溶媒を用いて原抽出物を抽出することと、
（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物とすることと、
（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集することと
を備える。
【００１８】
好適な実施形態では、前記溶媒は、２５〜１００重量％のエタノールと、７５〜０重量％の水とを含む。好ましくは、前記溶媒は、７０〜１００重量％のエタノールと、３０〜０重量％の水とを含む。
【００１９】
別の好適な実施形態では、前記溶媒は、酸性アルコールである。
【００２０】
好ましくは、前記溶媒は、０．１％の塩化水素酸を含む。
【００２１】
好適な実施形態では、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）と前記溶媒との重量体積比は、１：５から１：２０の間である。
【００２２】
別の好適な実施形態では、前記ステップ（ｂ）は、室温で実行される。
【００２３】
また、本発明は、上記の方法によって得られた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物と、１つ以上の薬剤受容キャリアまたは賦形剤とを含む薬剤組成物にも関する。
好適な実施形態では、該薬剤組成物は錠剤、粉末、懸濁液、乳び液、カプセル、粒子、丸薬、流体、アルコール溶液、又は医療シロップの形態に形成される。
【００２４】
また、本発明は、上記の方法によって得られた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を含む食品組成物にも関する。
本発明の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は容易に調製され、グルコシド酵素またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの活性を抑制し、アシル−ＣｏＡオキシダーゼを活性化することで、血糖値及び血中脂質値を下げることができる。本発明の他の目的、利点、及び新規な特徴が、添付の図面を参照する以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi) Liu, Ying & Lai（英名Taiwan tuber fleeceflower）は、Polygonum hypoleucum (Ohwi)又はPleuropterus hypoleucus (Nakai)の学名でも知られている。ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の肥大した塊根は、中国及び日本において最も有名な強壮薬の１つである。ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の固有の変種である台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）は肥大した塊根という特徴を持たず、台湾の低地から中高地によく見られる。この植物の全体は、風邪、咳、及び関節炎の治療に民間療法において使用され、その葉は切り傷治療のために患部に貼るのにも使用される。
【００２６】
本明細書において、部分体の形態の生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）の葉、茎、又は根である。
【００２７】
本明細書において、溶媒は極性溶媒であり、水、アルコール、アルコール水溶液、又は酢酸エチルであってもよい。
【００２８】
本明細書において、メタボリック症候群は、具体的には高血糖、脂質異常、及び高血圧を含む症状の抗インシュリン症候群を指す場合がある。
【００２９】
本明細書において、薬剤受容キャリアまたは薬剤キャリアは、薬剤投与に適した物質を指し、患者に１つ以上の活性薬剤を届けるための不活性剤又は賦形剤である。
その賦形剤はほぼ無毒であり、医薬組成物が安定で効能を保つのを可能にする。
【００３０】
本明細書において、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、腸内グルコシド酵素と肝酵素を含む酵素と反応することで血糖濃度及び血中脂質濃度を下げるために使用できる台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の活性な成分である。より具体的には、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）は、α−グルコシダーゼとＡＣＣの両方を抑制しＡＣＯを活性化する生化学的な効能を示す。より具体的には、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、メタボリック症候群を改善するための薬剤組成物又は食品組成物に使用できる。
【００３１】
本明細書において、用語「罹患した対象者」はメタボリック症候群を患う任意の患者である。用語「対象者」は当該分野において知られており、本明細書において、温血動物、好ましくは、ラット、マウス、猫、犬、羊、馬、牛等の人間以外の動物と人間とを含む哺乳動物を指す。１つの好適な実施形態では、対象者は人間である。
【００３２】
図１を参照すると、本発明に係るメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、次の方法によって調製される。
その方法は、（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を部分体又は完全体の形態で提供するステップ；（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出するステップ；（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物を得るステップ；（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集するステップを備える。
【００３３】
更に、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物は、メタボリック症候群を改善するための薬剤組成物を生成するために、薬剤受容キャリア又は賦形剤に加えられてもよい。また、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物は、メタボリック症候群を改善するための食品組成物を生成するために、添加されてもよい。
【００３４】
本発明に係る濃縮乾燥方法は、冷凍乾燥法、減圧濃縮法、又は他の当該分野において知られた濃縮乾燥法を含む。
【００３５】
本発明に係る薬剤組成物は、経口投与によって投薬されてもよい。投薬の形態は、丸薬、錠剤、粉末、懸濁液、乳び液、カプセル、粒子、流体、アルコールと水とを含む溶液、又は医療シロップであってよい。
【００３６】
実施例１：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物の調製
【００３７】
i) 酸性アルコール抽出
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を機械ですりつぶし、０.１％ＨＣｌを含む酸性アルコールを用いて抽出を行った。すりつぶされた台湾ツルドクダミと酸性アルコールの重量体積比は、１：８であった。その混合物をシェーキング有又は無で室温で７２時間放置し、２層のチーズクロスを通して濾過し、６０００ｒｐｍで１５分間遠心分離機にかけた。その溶液を集め、濃縮した。抽出率は約６.９％であった。
水で希釈して５０ｍｇ／ｍｌ原液を作成した。
【００３８】
ii) 温水抽出
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を温水中で２時間加熱した。台湾ツルドクダミと水の重量体積比は、１：２０であった。その抽出物を２層のチーズクロスを通して濾過し、冷凍乾燥させた。抽出率は約９.２％であった。水に溶かして５０ｍｇ／ｍｌ原液を作成した。
【００３９】
実施例２：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のα−グルコシダーゼ抑制効果
抽出物♯１と♯２は、実施例１で調製した異なるバッチの酸性アルコール抽出物であり、抽出物♯３は温水抽出物である。
【００４０】
３つの抽出物のα−グルコシダーゼ抑制効果を次のようにして測定・分析した。
【００４１】
１． 酵素α−グルコシダーゼ（EC 3.2.1.20, G5003, Sigma-Aldrich社、米国）溶液と基質ｐ−ニトロフェニルα−Ｄ−グルコピラノシド（ｐＮＰ−Ｇ）（Sigma-Aldrich社、米国）溶液とを１００ｍＭ、ｐＨ７.０リン酸緩衝液を用いて作成した。濃度はそれぞれ１Ｕ／ｍｌと５×１０-3Ｍであった。
【００４２】
２． ４０μlの０.４Ｍ、ｐＨ７.０リン酸緩衝液と、１０μlのα−グルコシダーゼと、５０μlの台湾ツルドクダミ抽出物の段階希釈液と、１７０μlの純水とを９６ウェルプレートの各ウェルに順に添加した。
【００４３】
３． 等量３０μlの予熱された基質溶液を各ウェルに添加し、完全に混合し、３７℃で１０分間定温放置した。
【００４４】
４． 定温放置前後において４０５ｎｍの波長における吸光度を測定した（Power Wave XS, Bio Tek社、米国）。ＩＣ50はα−グルコシダーゼの活性を５０％抑制するために必要な濃度を表す。表１は抽出物♯１〜３のＩＣ50の結果を示す。
表１ 抽出物♯１〜３のＩＣ50
【００４５】
【表１】
【００４６】
酸性アルコール抽出物と温水抽出物は両方ともα−グルコシダーゼの活性を抑制する効果を示した。本発明の好適な実施形態は酸性アルコール抽出物である。
実施例３：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のグリコシド酵素抑制効果
ラット腸管アセトン粉末（Sigma Chemical社、米国）をグリコシド酵素の供給源として使用し、様々なグリコシド基質（マルトース、でんぷん、スクロース）を用いて酸性アルコール抽出物の抑制効果を調べた（表２）。
表２ 様々なグリコシド酵素に対する台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物のＩＣ50の値
【００４７】
【表２】
【００４８】
表２に示すように、酸性アルコール抽出物はマルターゼ、α−アミラーゼ、及びスクラーゼの活性を抑制することができ、マルターゼに対する効果が最大である。
【００４９】
実施例４：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の脂質可溶抽出物の調製
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を機械ですりつぶし、５０重量％のメタノールを約１：１０の重量体積比で加えた。その混合物をシェーキング有で室温で２４時間放置し、濾過した。同じ体積の水・酢酸エチル（体積比１：１）を液−液抽出のために濾過液に加えた。上の層を取出し、同じ体積の５重量％の重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ3）を加え遊離した脂肪酸を取除いた。酢酸エチル層を集め、濃縮し、乾燥させた。抽出率は約０.９１％であった。得られた脂質可溶抽出物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。
【００５０】
実施例５：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）抑制効果
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は脂肪酸合成に係る重要な酵素の１つである。ＡＣＣ反応生成物であるマロニル−ＣｏＡは、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）の基質であり、カルニチンパルミトイルＣｏＡ転移酵素（ＣＰＴ）の抑制物質でもある。従って、ＡＣＣの抑制は、内生の脂質の合成を低減するだけでなく、ミトコンドリア脂肪酸の酸化を増加させる。
【００５１】
ＡＣＣはラットの肝臓から分離精製され、前述のように測定・分析された（Tanabe T., Nakanishi, S., Hashimoto T., Ogiwara, H., Nikawa J., Numa S. 1981. Acetyl-CoA carboxylase from rat liver「ラット肝臓由来のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ」, Meth. Enzymol. 71(pt C): 5-16）。
表３ 台湾ツルドクダミの抽出物のＡＣＣ抑制効果
【００５２】
【表３】
【００５３】
表３に示すように、台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物と脂質可溶抽出物は、ＡＣＣ抑制効果を示した。
【００５４】
図２は異なる濃度の酸性アルコール抽出物のＡＣＣ抑制効果を示す。ＩＣ50は０.０４ｍｇ／ｍｌであった。
【００５５】
実施例６：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物のアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化する効果
【００５６】
ＡＣＯは脂肪酸のβ酸化に係る重要な酵素の１つである。ＰＰＡＲαの下流遺伝子でもあり、脂肪酸酸化のマーカーとして使用できる。
適当な数の肝細胞Ｈ４ＩＩＥＣ３を１２ウェルプレートに種として入れた。細胞がコンフルエントに達した後、培養基をクロフィブレート又は１００μｌ／ｍｌの台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物に取り替えた。その混合溶液を適当な期間定温放置した。次に培養液を取出して、細胞をＡＣＯ分析のために収集した。
【００５７】
ＡＣＯ分析の方法は、Smallらによって記述されている（Small, G.M., Burdett, K., and ConNock, M.J. 1985. A sensitive spectrophotometric assay for peroxisomal acyl-CoA oxidase「ペルオキシソームアシル−ＣｏＡオキシダーゼの高感度分光光度測定」. Biochemical Journal. 227: 205-210）。図３Ａは時間（４８と７２時間）に対するクロフィブレートの濃度に依るＡＣＯ活性化効果を示す。
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物によるＡＣＯ活性の増倍率を図３Ｂに示す。
【００５８】
実施例７：高脂肪食で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスへの台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物の効果
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを３０％（ｇ／ｇ）のバターを含む高脂肪食で８週間飼育し、肥満、高トリグリセリド血症及び高インスリン血症の症状を起こさせた。それらの症状を持ったマウスを２つのグループに分け、一方のグループには１５００ｍｇ／ｋｇ体重の台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物を与えた（ＨＦ＋Ｎｏ．１１）。もう一方のグループである対照群（ＨＦ）には同じ体積の水を与えた。同じ高脂肪食で両方のグループの飼育を続けた。通常の餌（ＬＦ）で飼育された別のグループのマウスも調べた。５週間飼育後、経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を行った（表４）。次にマウスを屠殺し、血液と組織を分析のために収集した（表５）。
表４ ５週間飼育後の経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果
【００５９】
【表４】
【００６０】
データは平均±標準偏差として表わされている。同じ行内で同じ上付き文字を持っていない値は大きく異なる（Ｐ＜０.０５）。
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物を５週間投与することは、高脂肪食で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの絶食時血糖値（０分）をかなり減少させた。（ＨＦ＋Ｎｏ．１１）グループの血糖値（９０分及び１２０分）と１２０分の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）とは両方ともＨＦグループのよりかなり低かった。これらの結果は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物は、絶食時血糖値を下げるだけでなく、耐糖能異常も改善することを示す。
【００６１】
表５は、台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物は高脂肪食で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの体重、及び全コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）、インスリン、及びレプチンの各血中濃度を減少させることを示す。
【００６２】
【表５】
【００６３】
データは平均±標準偏差として表わされている。同じ行内で同じ上付き文字を持っていない値は大きく異なる（Ｐ＜０.０５）。
【００６４】
本発明の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、特別な溶媒も複雑な手順も必要とせず、簡単な方法で調製される。また、上記実施例は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、血糖濃度と脂質濃度を下げ、グルコシド酵素とＡＣＣの両方の活性を抑制し、ＡＣＯの活性を増加させることができることを示す。従って、上記のように、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、メタボリック症候群を改善することができる。
上記において本発明の多数の特徴と利点を本発明の構造と構成要素の詳細とともに説明したが、本開示は例を示したにすぎない。添付の請求項における用語の広義の意味によって定義される本発明の範囲内において、細部、特に構成要素の形、サイズ、及び配置の変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明に係る台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を調製する方法を示すフローチャートである。
【図２】台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）活性を抑制する効果を示すグラフである。
【図３Ａ】クロフィブレートのアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化する効果を示す。
【図３Ｂ】１００μｇ／ｍｌの台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化する効果を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、台湾ツルドクダミ（タデ属；学名Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）の抽出物、特に台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）のメタボリック症候群を改善する抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
メタボリック症候群は、心臓血管疾患及び糖尿病のリスクを増加させる内科的疾患の組み合わせである。多数の人々が一団となってメタボリック症候群にかかっている。最近、食生活及び生活様式の変化に伴い、ますます多くの人々が、高血糖値、高血圧値、又は高血中脂質値を含む症状のメタボリック症候群にかかっていると診断されている。
メタボリック症候群は、具体的には抗インシュリン症候群を指す場合がある。
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）は台湾に固有の変種である。
ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の典型的な変種と異なり、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）は特徴的な肥大した根を持たず、風邪、咳、又は関節炎の治療に民間療法において広く使用されている。
【０００３】
特許文献１は、中国薬草ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の抽出物を利用する高血糖症の治療のための組成物と方法を開示している。この薬草は0.1N NH4OHを用いて抽出され、遠心分離機にかけられる。その上澄み液をSephadex G-25カラムに供し、３つの画分を収集する。１つの画分は脂肪細胞アッセイにおいて高いインシュリン相乗活性を示し、血糖値を下げることが示された。
【０００４】
特許文献２は、インシュリン相乗剤を含む組成物を提供しインシュリン活性を増加させる組成物と方法を開示している。この組成物は、ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）、ハラタケ科（Agaricaceae）、又は川桂皮（ニッケイ属；Cinnamomum mairei）の水抽出物から得た１つ以上の物質を含む。この発明もまた患者の高血糖症の治療のための方法としてインシュリン相乗剤を提供する。この方法は血糖値、グリコシル化血色素値、又はブドウ糖値を減少させるのに使用できる。
これらの先行技術は、インシュリンを活性化することでブドウ糖値を抑えるためにツルドクダミ（Polygonum multiflorum）抽出物を使用することに専ら関係している。しかし、これらの先行技術は、血中脂質を下げるのにも、メタボリック症候群を改善するのにも使用できない。
【０００５】
また、特許文献３は、ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb）、サンザシ（Fructus Crataegi）、タンジン（Salvia miltiorrhiza Bunge）、及びサンシチニンジン（Radix Notoginseng）を含む薬剤組成物を開示している。この組成物は血中脂質を下げる効果がり、従って高脂質血症の治療と予防のための薬の調合において使用できる。また、この発明は高脂質血症の治療と予防の方法を開示している。しかし、この組成物は一体で使用されなければならない。また、この特許は血糖値を下げる方法も、メタボリック症候群を改善する方法も開示していない。
【０００６】
上述のように、薬剤組成物と食品添加剤は、血糖または血中脂質を減少させる単一の効果を提供するのみである。いずれの先行技術も、メタボリック症候群の治療用に台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を使用することを開示していない。また、いずれの先行技術も、ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の典型的な変種を使用している。
メタボリック症候群の患者の人口が増加してきている。インシュリン抵抗を予防しメタボリック症候群を改善する医療効果がある化合物又は組成物、特に自然植物組成物を発見することは、当該分野において重要である。
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，５３１，９９１号明細書
【特許文献２】米国特許第６，２００，５６９号明細書
【特許文献３】欧州特許第ＥＰ１８２９５１９Ａ１号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の主たる目的は、メタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を調製することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の目的を達成するために、本発明に係るメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、次の方法で調製される。その方法は、
（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を部分体又は完全体の形態で提供することと、
（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出することと、
（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物を得ることと、
（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集することと
を備える。
【００１０】
好適な実施形態では、部分体の形態の前記生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミは、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の茎または根である。
【００１１】
別の好適な実施形態では、前記溶媒は、水、アルコール、アルコール水溶液、又は酢酸エチルである。
【００１２】
好ましくは、前記溶媒は、２５〜１００重量％のエタノールと、７５〜０重量％の水とを含む。より好ましくは、前記溶媒は、７０〜１００重量％のエタノールと、３０〜０重量％の水とを含む。
【００１３】
好適な実施形態では、前記溶媒は、酸性アルコールである。好ましくは、該酸性アルコールは、０．１％の塩化水素酸を含む。
【００１４】
好ましくは、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）と前記溶媒との重量体積比は、１：５から１：２０の間である。
好適な実施形態では、前記ステップ（ｂ）は、室温で実行される。
また、本発明は、メタボリック症候群を改善するための方法にも関する。その方法は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の治療上効果的な量の抽出物を罹患した対象者に投与することを含む。
【００１５】
好適な実施形態では、メタボリック症候群を改善するため台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の前記抽出物は、グルコシド酵素またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）を抑制し、アシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化し、血糖値及び血中脂質値を下げる。
【００１６】
好ましくは、前記メタボリック症候群は抗インシュリン症候群である。より好ましくは、該抗インシュリン症候群は高血糖又は高血中脂質である。
【００１７】
また、本発明は、次の方法で調製されるメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物にも関する。その方法は、
（ａ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の生の又は乾燥させた茎と根を提供することと、
（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）からアルコール溶媒を用いて原抽出物を抽出することと、
（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物とすることと、
（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集することと
を備える。
【００１８】
好適な実施形態では、前記溶媒は、２５〜１００重量％のエタノールと、７５〜０重量％の水とを含む。好ましくは、前記溶媒は、７０〜１００重量％のエタノールと、３０〜０重量％の水とを含む。
【００１９】
別の好適な実施形態では、前記溶媒は、酸性アルコールである。
【００２０】
好ましくは、前記溶媒は、０．１％の塩化水素酸を含む。
【００２１】
好適な実施形態では、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）と前記溶媒との重量体積比は、１：５から１：２０の間である。
【００２２】
別の好適な実施形態では、前記ステップ（ｂ）は、室温で実行される。
【００２３】
また、本発明は、上記の方法によって得られた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物と、１つ以上の薬剤受容キャリアまたは賦形剤とを含む薬剤組成物にも関する。
好適な実施形態では、該薬剤組成物は錠剤、粉末、懸濁液、乳び液、カプセル、粒子、丸薬、流体、アルコール溶液、又は医療シロップの形態に形成される。
【００２４】
また、本発明は、上記の方法によって得られた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を含む食品組成物にも関する。
本発明の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は容易に調製され、グルコシド酵素またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼの活性を抑制し、アシル−ＣｏＡオキシダーゼを活性化することで、血糖値及び血中脂質値を下げることができる。本発明の他の目的、利点、及び新規な特徴が、添付の図面を参照する以下の詳細な説明から明らかとなるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi) Liu, Ying & Lai（英名Taiwan tuber fleeceflower）は、Polygonum hypoleucum (Ohwi)又はPleuropterus hypoleucus (Nakai)の学名でも知られている。ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の肥大した塊根は、中国及び日本において最も有名な強壮薬の１つである。ツルドクダミ（Polygonum multiflorum）の固有の変種である台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）は肥大した塊根という特徴を持たず、台湾の低地から中高地によく見られる。この植物の全体は、風邪、咳、及び関節炎の治療に民間療法において使用され、その葉は切り傷治療のために患部に貼るのにも使用される。
【００２６】
本明細書において、部分体の形態の生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)）の葉、茎、又は根である。
【００２７】
本明細書において、溶媒は極性溶媒であり、水、アルコール、アルコール水溶液、又は酢酸エチルであってもよい。
【００２８】
本明細書において、メタボリック症候群は、具体的には高血糖、脂質異常、及び高血圧を含む症状の抗インシュリン症候群を指す場合がある。
【００２９】
本明細書において、薬剤受容キャリアまたは薬剤キャリアは、薬剤投与に適した物質を指し、患者に１つ以上の活性薬剤を届けるための不活性剤又は賦形剤である。
その賦形剤はほぼ無毒であり、医薬組成物が安定で効能を保つのを可能にする。
【００３０】
本明細書において、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、腸内グルコシド酵素と肝酵素を含む酵素と反応することで血糖濃度及び血中脂質濃度を下げるために使用できる台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の活性な成分である。より具体的には、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）は、α−グルコシダーゼとＡＣＣの両方を抑制しＡＣＯを活性化する生化学的な効能を示す。より具体的には、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、メタボリック症候群を改善するための薬剤組成物又は食品組成物に使用できる。
【００３１】
本明細書において、用語「罹患した対象者」はメタボリック症候群を患う任意の患者である。用語「対象者」は当該分野において知られており、本明細書において、温血動物、好ましくは、ラット、マウス、猫、犬、羊、馬、牛等の人間以外の動物と人間とを含む哺乳動物を指す。１つの好適な実施形態では、対象者は人間である。
【００３２】
図１を参照すると、本発明に係るメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、次の方法によって調製される。
その方法は、（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を部分体又は完全体の形態で提供するステップ；（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出するステップ；（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物を得るステップ；（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集するステップを備える。
【００３３】
更に、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物は、メタボリック症候群を改善するための薬剤組成物を生成するために、薬剤受容キャリア又は賦形剤に加えられてもよい。また、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物は、メタボリック症候群を改善するための食品組成物を生成するために、添加されてもよい。
【００３４】
本発明に係る濃縮乾燥方法は、冷凍乾燥法、減圧濃縮法、又は他の当該分野において知られた濃縮乾燥法を含む。
【００３５】
本発明に係る薬剤組成物は、経口投与によって投薬されてもよい。投薬の形態は、丸薬、錠剤、粉末、懸濁液、乳び液、カプセル、粒子、流体、アルコールと水とを含む溶液、又は医療シロップであってよい。
【００３６】
実施例１：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物の調製
【００３７】
i) 酸性アルコール抽出
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を機械ですりつぶし、０.１％ＨＣｌを含む酸性アルコールを用いて抽出を行った。すりつぶされた台湾ツルドクダミと酸性アルコールの重量体積比は、１：８であった。その混合物をシェーキング有又は無で室温で７２時間放置し、２層のチーズクロスを通して濾過し、６０００ｒｐｍで１５分間遠心分離機にかけた。その溶液を集め、濃縮した。抽出率は約６.９％であった。
水で希釈して５０ｍｇ／ｍｌ原液を作成した。
【００３８】
ii) 温水抽出
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を温水中で２時間加熱した。台湾ツルドクダミと水の重量体積比は、１：２０であった。その抽出物を２層のチーズクロスを通して濾過し、冷凍乾燥させた。抽出率は約９.２％であった。水に溶かして５０ｍｇ／ｍｌ原液を作成した。
【００３９】
実施例２：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のα−グルコシダーゼ抑制効果
抽出物♯１と♯２は、実施例１で調製した異なるバッチの酸性アルコール抽出物であり、抽出物♯３は温水抽出物である。
【００４０】
３つの抽出物のα−グルコシダーゼ抑制効果を次のようにして測定・分析した。
【００４１】
１． 酵素α−グルコシダーゼ（EC 3.2.1.20, G5003, Sigma-Aldrich社、米国）溶液と基質ｐ−ニトロフェニルα−Ｄ−グルコピラノシド（ｐＮＰ−Ｇ）（Sigma-Aldrich社、米国）溶液とを１００ｍＭ、ｐＨ７.０リン酸緩衝液を用いて作成した。濃度はそれぞれ１Ｕ／ｍｌと５×１０-3Ｍであった。
【００４２】
２． ４０μlの０.４Ｍ、ｐＨ７.０リン酸緩衝液と、１０μlのα−グルコシダーゼと、５０μlの台湾ツルドクダミ抽出物の段階希釈液と、１７０μlの純水とを９６ウェルプレートの各ウェルに順に添加した。
【００４３】
３． 等量３０μlの予熱された基質溶液を各ウェルに添加し、完全に混合し、３７℃で１０分間定温放置した。
【００４４】
４． 定温放置前後において４０５ｎｍの波長における吸光度を測定した（Power Wave XS, Bio Tek社、米国）。ＩＣ50はα−グルコシダーゼの活性を５０％抑制するために必要な濃度を表す。表１は抽出物♯１〜３のＩＣ50の結果を示す。
表１ 抽出物♯１〜３のＩＣ50
【００４５】
【表１】
【００４６】
酸性アルコール抽出物と温水抽出物は両方ともα−グルコシダーゼの活性を抑制する効果を示した。本発明の好適な実施形態は酸性アルコール抽出物である。
実施例３：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のグリコシド酵素抑制効果
ラット腸管アセトン粉末（Sigma Chemical社、米国）をグリコシド酵素の供給源として使用し、様々なグリコシド基質（マルトース、でんぷん、スクロース）を用いて酸性アルコール抽出物の抑制効果を調べた（表２）。
表２ 様々なグリコシド酵素に対する台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物のＩＣ50の値
【００４７】
【表２】
【００４８】
表２に示すように、酸性アルコール抽出物はマルターゼ、α−アミラーゼ、及びスクラーゼの活性を抑制することができ、マルターゼに対する効果が最大である。
【００４９】
実施例４：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の脂質可溶抽出物の調製
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を機械ですりつぶし、５０重量％のメタノールを約１：１０の重量体積比で加えた。その混合物をシェーキング有で室温で２４時間放置し、濾過した。同じ体積の水・酢酸エチル（体積比１：１）を液−液抽出のために濾過液に加えた。上の層を取出し、同じ体積の５重量％の重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ3）を加え遊離した脂肪酸を取除いた。酢酸エチル層を集め、濃縮し、乾燥させた。抽出率は約０.９１％であった。得られた脂質可溶抽出物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に１０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた。
【００５０】
実施例５：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）抑制効果
アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）は脂肪酸合成に係る重要な酵素の１つである。ＡＣＣ反応生成物であるマロニル−ＣｏＡは、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）の基質であり、カルニチンパルミトイルＣｏＡ転移酵素（ＣＰＴ）の抑制物質でもある。従って、ＡＣＣの抑制は、内生の脂質の合成を低減するだけでなく、ミトコンドリア脂肪酸の酸化を増加させる。
【００５１】
ＡＣＣはラットの肝臓から分離精製され、前述のように測定・分析された（Tanabe T., Nakanishi, S., Hashimoto T., Ogiwara, H., Nikawa J., Numa S. 1981. Acetyl-CoA carboxylase from rat liver「ラット肝臓由来のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ」, Meth. Enzymol. 71(pt C): 5-16）。
表３ 台湾ツルドクダミの抽出物のＡＣＣ抑制効果
【００５２】
【表３】
【００５３】
表３に示すように、台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物と脂質可溶抽出物は、ＡＣＣ抑制効果を示した。
【００５４】
図２は異なる濃度の酸性アルコール抽出物のＡＣＣ抑制効果を示す。ＩＣ50は０.０４ｍｇ／ｍｌであった。
【００５５】
実施例６：台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物のアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化する効果
【００５６】
ＡＣＯは脂肪酸のβ酸化に係る重要な酵素の１つである。ＰＰＡＲαの下流遺伝子でもあり、脂肪酸酸化のマーカーとして使用できる。
適当な数の肝細胞Ｈ４ＩＩＥＣ３を１２ウェルプレートに種として入れた。細胞がコンフルエントに達した後、培養基をクロフィブレート又は１００μｌ／ｍｌの台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物に取り替えた。その混合溶液を適当な期間定温放置した。次に培養液を取出して、細胞をＡＣＯ分析のために収集した。
【００５７】
ＡＣＯ分析の方法は、Smallらによって記述されている（Small, G.M., Burdett, K., and ConNock, M.J. 1985. A sensitive spectrophotometric assay for peroxisomal acyl-CoA oxidase「ペルオキシソームアシル−ＣｏＡオキシダーゼの高感度分光光度測定」. Biochemical Journal. 227: 205-210）。図３Ａは時間（４８と７２時間）に対するクロフィブレートの濃度に依るＡＣＯ活性化効果を示す。
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物によるＡＣＯ活性の増倍率を図３Ｂに示す。
【００５８】
実施例７：高脂肪食で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスへの台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物の効果
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを３０％（ｇ／ｇ）のバターを含む高脂肪食で８週間飼育し、肥満、高トリグリセリド血症及び高インスリン血症の症状を起こさせた。それらの症状を持ったマウスを２つのグループに分け、一方のグループには１５００ｍｇ／ｋｇ体重の台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物を与えた（ＨＦ＋Ｎｏ．１１）。もう一方のグループである対照群（ＨＦ）には同じ体積の水を与えた。同じ高脂肪食で両方のグループの飼育を続けた。通常の餌（ＬＦ）で飼育された別のグループのマウスも調べた。５週間飼育後、経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）を行った（表４）。次にマウスを屠殺し、血液と組織を分析のために収集した（表５）。
表４ ５週間飼育後の経口的ブドウ糖負荷試験（ＯＧＴＴ）の結果
【００５９】
【表４】
【００６０】
データは平均±標準偏差として表わされている。同じ行内で同じ上付き文字を持っていない値は大きく異なる（Ｐ＜０.０５）。
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物を５週間投与することは、高脂肪食で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの絶食時血糖値（０分）をかなり減少させた。（ＨＦ＋Ｎｏ．１１）グループの血糖値（９０分及び１２０分）と１２０分の濃度曲線下面積（ＡＵＣ）とは両方ともＨＦグループのよりかなり低かった。これらの結果は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の酸性アルコール抽出物は、絶食時血糖値を下げるだけでなく、耐糖能異常も改善することを示す。
【００６１】
表５は、台湾ツルドクダミの酸性アルコール抽出物は高脂肪食で飼育されたＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの体重、及び全コレステロール（ＴＣ）、トリグリセリド（ＴＧ）、インスリン、及びレプチンの各血中濃度を減少させることを示す。
【００６２】
【表５】
【００６３】
データは平均±標準偏差として表わされている。同じ行内で同じ上付き文字を持っていない値は大きく異なる（Ｐ＜０.０５）。
【００６４】
本発明の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、特別な溶媒も複雑な手順も必要とせず、簡単な方法で調製される。また、上記実施例は、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、血糖濃度と脂質濃度を下げ、グルコシド酵素とＡＣＣの両方の活性を抑制し、ＡＣＯの活性を増加させることができることを示す。従って、上記のように、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物は、メタボリック症候群を改善することができる。
上記において本発明の多数の特徴と利点を本発明の構造と構成要素の詳細とともに説明したが、本開示は例を示したにすぎない。添付の請求項における用語の広義の意味によって定義される本発明の範囲内において、細部、特に構成要素の形、サイズ、及び配置の変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】本発明に係る台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を調製する方法を示すフローチャートである。
【図２】台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）活性を抑制する効果を示すグラフである。
【図３Ａ】クロフィブレートのアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化する効果を示す。
【図３Ｂ】１００μｇ／ｍｌの台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物のアシル−ＣｏＡオキシダーゼ（ＡＣＯ）を活性化する効果を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の方法で調製されるメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物であって、その方法は、
（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を部分体又は完全体の形態で提供するステップと、
（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出するステップと、
（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物を得るステップと、
（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集するステップと
を備える台湾ツルドクダミの抽出物。
【請求項２】
部分体の形態の前記生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミは、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の茎または根である請求項１に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項３】
前記溶媒は、水、アルコール、アルコール水溶液、又は酢酸エチルである請求項２に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項４】
前記溶媒は、２５〜１００重量％のエタノールと、７５〜０重量％の水とを含む請求項３に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項５】
前記溶媒は、７０〜１００重量％のエタノールと、３０〜０重量％の水とを含む請求項４に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項６】
前記溶媒は、酸性アルコールである請求項５に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項７】
前記酸性アルコールは、０．１％の塩化水素酸を含む請求項６に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項８】
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）と前記溶媒との重量体積比は、１：５から１：２０の間である請求項７に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項９】
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出する前記ステップ（ｂ）は、室温で実行される請求項８に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項１０】
メタボリック症候群を改善するための方法であって、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の治療上効果的な量の抽出物を罹患した対象者に投与することを含む方法。
【請求項１１】
メタボリック症候群を改善するため台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の前記抽出物は、解糖酵素またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼを抑制し、アシル−ＣｏＡオキシダーゼを活性化し、血糖値及び血中脂質値を下げる請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記メタボリック症候群は抗インシュリン症候群である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物と、１つ以上の薬剤受容キャリアまたは賦形剤とを含む薬剤組成物。
【請求項１４】
該薬剤組成物は錠剤、粉末、懸濁液、乳び液、カプセル、粒子、丸薬、流体、アルコール溶液、又は医療シロップの形態に形成される請求項１３に記載の薬剤組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を含む食品組成物。
【請求項１】
次の方法で調製されるメタボリック症候群を改善するための台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物であって、その方法は、
（ａ）生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）を部分体又は完全体の形態で提供するステップと、
（ｂ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出するステップと、
（ｃ）該原抽出物を濃縮し乾燥させて台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）抽出生成物を得るステップと、
（ｄ）台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の該抽出生成物を収集するステップと
を備える台湾ツルドクダミの抽出物。
【請求項２】
部分体の形態の前記生の又は乾燥させた台湾ツルドクダミは、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の茎または根である請求項１に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項３】
前記溶媒は、水、アルコール、アルコール水溶液、又は酢酸エチルである請求項２に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項４】
前記溶媒は、２５〜１００重量％のエタノールと、７５〜０重量％の水とを含む請求項３に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項５】
前記溶媒は、７０〜１００重量％のエタノールと、３０〜０重量％の水とを含む請求項４に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項６】
前記溶媒は、酸性アルコールである請求項５に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項７】
前記酸性アルコールは、０．１％の塩化水素酸を含む請求項６に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項８】
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）と前記溶媒との重量体積比は、１：５から１：２０の間である請求項７に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項９】
台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）から溶媒を用いて原抽出物を抽出する前記ステップ（ｂ）は、室温で実行される請求項８に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物。
【請求項１０】
メタボリック症候群を改善するための方法であって、台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の治療上効果的な量の抽出物を罹患した対象者に投与することを含む方法。
【請求項１１】
メタボリック症候群を改善するため台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の前記抽出物は、解糖酵素またはアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼを抑制し、アシル−ＣｏＡオキシダーゼを活性化し、血糖値及び血中脂質値を下げる請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記メタボリック症候群は抗インシュリン症候群である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物と、１つ以上の薬剤受容キャリアまたは賦形剤とを含む薬剤組成物。
【請求項１４】
該薬剤組成物は錠剤、粉末、懸濁液、乳び液、カプセル、粒子、丸薬、流体、アルコール溶液、又は医療シロップの形態に形成される請求項１３に記載の薬剤組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の台湾ツルドクダミ（Polygonum multiflorum Thunb. ex Murray var. hypoleucum (Ohwi)又はPolygonum hypoleucum (Ohwi)）の抽出物を含む食品組成物。
【図１】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【公開番号】特開２００９−３５５４８（Ｐ２００９−３５５４８Ａ）
【公開日】平成２１年２月１９日（２００９．２．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１８３７６９（Ｐ２００８−１８３７６９）
【出願日】平成２０年７月１５日（２００８．７．１５）
【出願人】（５９６０３２６９４）財団法人食品工業発展研究所 (9)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年２月１９日（２００９．２．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月１５日（２００８．７．１５）
【出願人】（５９６０３２６９４）財団法人食品工業発展研究所 (9)
【Ｆターム（参考）】
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