変異体微生物プロテアーゼを含む組成物及び方法
本発明は、タンパク質工学に用いられる方法を提供する。特に、本発明は、二以上のタンパク質の特性を最適化するライブラリーを設計するため、部位評価ライブラリーを利用する方法を提供する。本発明はさらに、様々な用途に適する変異体ズブチリシンを提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
バチルス・ズブチリシンの単離ズブチリシン変異体であって、前記ズブチリシン変異体がタンパク質分解活性を有し、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６４、６５、６６、６７、７１、７２、７３、７６、７７、７８、７９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２２、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３９、１４１、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０３、２０４、２０６、２０７、２０９、２１０、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３及び２７４から選ばれる一以上の位置での置換を含む成熟形であり、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応
する、前記単離ズブチリシン変異体。
【請求項２】
前記一以上の位置が、１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６４、６５、６６、６７、７１、７２、７３、７７、７８、７９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１８、１１９、１２２、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３９、１４１、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０３、２０４、２０６、２０７、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３及び２７４から選ばれ、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項３】
前記一以上の位置が、２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、２０、２１、２１、２２、２３、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６４、６５、６６、６７、７１、７３、７７、７８、７９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、１０２、１０５、１０６、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１２２、１２４、１２５、１２８、１２９、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６５、１６６、１６７、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８６、１８７、１８９、１９０、１９１、１９２、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０３、２０４、２０６、２０７、２１２、２１４、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４９、２５０、２５１、２５３、２５４、２５５、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３及び２７４から選ばれ、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項４】
前記ズブチリシン変異体が、１８、５２、７２、１１７、１１９、１２７、１４４、１８５、２０９及び２１３から成る群より選ばれる一以上の位置での置換をさらに含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項５】
前記置換が、Ａ００１Ｃ、Ａ００１Ｄ、Ａ００１Ｅ、Ａ００１Ｆ、Ａ００１Ｇ、Ａ００１Ｈ、Ａ００１Ｉ、Ａ００１Ｋ、Ａ００１Ｌ、Ａ００１Ｍ、Ａ００１Ｎ、Ａ００１Ｑ、Ａ００１Ｒ、Ａ００１Ｓ、Ａ００１Ｖ、Ａ００１Ｗ、Ｑ００２Ａ、Ｑ００２Ｄ、Ｑ００２Ｅ、Ｑ００２Ｇ、Ｑ００２Ｓ、Ｓ００３Ａ、Ｓ００３Ｄ、Ｓ００３Ｆ、Ｓ００３Ｇ、Ｓ００３Ｉ、Ｓ００３Ｋ、Ｓ００３Ｌ、Ｓ００３Ｍ、Ｓ００３Ｎ、Ｓ００３Ｐ、Ｓ００３Ｑ、Ｓ００３Ｒ、Ｓ００３Ｔ、Ｓ００３Ｖ、Ｓ００３Ｗ、Ｓ００３Ｙ、Ｐ００５Ｃ、Ｐ００５Ｅ、Ｐ００５Ｇ、Ｐ００５Ｑ、Ｐ００５Ｔ、Ｙ００６Ａ、Ｙ００６Ｃ、Ｙ００６Ｅ、Ｙ００６Ｆ、Ｙ００６Ｇ、Ｙ００６Ｋ、Ｙ００６Ｍ、Ｙ００６Ｎ、Ｙ００６Ｐ、Ｙ００６Ｑ、Ｙ００６Ｒ、Ｙ００６Ｔ、Ｙ００６Ｖ、Ｙ００６Ｗ、Ｓ００９Ａ、Ｓ００９Ｃ、Ｓ００９Ｅ、Ｓ００９Ｆ、Ｓ００９Ｇ、Ｓ００９Ｈ、Ｓ００９Ｋ、Ｓ００９Ｌ、Ｓ００９Ｍ、Ｓ００９Ｐ、Ｓ００９Ｑ、Ｓ００９Ｒ、Ｓ００９Ｔ、Ｓ００９Ｖ、Ｓ００９Ｗ、Ｑ０１０Ａ、Ｑ０１０Ｃ、Ｑ０１０Ｅ、Ｑ０１０Ｆ、Ｑ０１０Ｇ、Ｑ０１０Ｈ、Ｑ０１０Ｉ、Ｑ０１０Ｋ、Ｑ０１０Ｌ、Ｑ０１０Ｒ、Ｑ０１０Ｓ、Ｑ０１０Ｔ、Ｑ０１０Ｖ、Ｑ０１０Ｗ、Ｉ０１１Ｃ、Ｉ０１１Ｌ、Ｉ０１１Ｔ、Ｉ０１１Ｖ、Ｉ０１１Ｙ、Ｋ０１２Ａ、Ｋ０１２Ｃ、Ｋ０１２Ｄ、Ｋ０１２Ｅ、Ｋ０１２Ｆ、Ｋ０１２Ｇ、Ｋ０１２Ｈ、Ｋ０１２Ｉ、Ｋ０１２Ｎ、Ｋ０１２Ｑ、Ｋ０１２Ｓ、Ｋ０１２Ｔ、Ｋ０１２Ｖ、Ｋ０１２Ｗ、Ｋ０１２Ｙ、Ａ０１３Ｃ、Ａ０１３Ｆ、Ａ０１３Ｇ、Ａ０１３Ｈ、Ａ０１３Ｌ、Ａ０１３Ｒ、Ａ０１３Ｓ、Ａ０１３Ｔ、Ａ０１３Ｖ、Ｐ０１４Ａ、Ｐ０１４Ｃ、Ｐ０１４Ｄ、Ｐ０１４Ｅ、Ｐ０１４Ｆ、Ｐ０１４Ｇ、Ｐ０１４Ｋ、Ｐ０１４Ｌ、Ｐ０１４Ｍ、Ｐ０１４Ｎ、Ｐ０１４Ｑ、Ｐ０１４Ｒ、Ｐ０１４Ｓ、Ｐ０１４Ｔ、Ｐ０１４Ｖ、Ｐ０１４Ｗ、Ｐ０１４Ｙ、Ａ０１５Ｃ、Ａ０１５Ｄ、Ａ０１５Ｅ、Ａ０１５Ｆ、Ａ０１５Ｇ、Ａ０１５Ｈ、Ａ０１５Ｉ、Ａ０１５Ｋ、Ａ０１５Ｌ、Ａ０１５Ｍ、Ａ０１５Ｐ、Ａ０１５Ｑ、Ａ０１５Ｒ、Ａ０１５Ｔ、Ａ０１５Ｖ、Ａ０１５Ｙ、Ｌ０１６Ａ、Ｌ０１６Ｃ、Ｌ０１６Ｉ、Ｌ０１６Ｍ、Ｌ０１６Ｑ、Ｌ０１６Ｓ、Ｌ０１６Ｔ、Ｈ０１７Ｆ、Ｈ０１７Ｉ、Ｈ０１７Ｌ、Ｈ０１７Ｍ、Ｈ０１７Ｖ、Ｈ０１７Ｗ、Ｓ０１８Ａ、Ｓ０１８Ｅ、Ｓ０１８Ｆ、Ｓ０１８Ｇ、Ｓ０１８Ｈ、Ｓ０１８
Ｉ、Ｓ０１８Ｋ、Ｓ０１８Ｌ、Ｓ０１８Ｍ、Ｓ０１８Ｎ、Ｓ０１８Ｐ、Ｓ０１８Ｑ、Ｓ０１８Ｒ、Ｓ０１８Ｔ、Ｓ０１８Ｖ、Ｓ０１８Ｗ、Ｓ０１８Ｙ、Ｑ０１９Ａ、Ｑ０１９Ｃ、Ｑ０１９Ｄ、Ｑ０１９Ｅ、Ｑ０１９Ｇ、Ｑ０１９Ｉ、Ｑ０１９Ｋ、Ｑ０１９Ｍ、Ｑ０１９Ｒ、Ｑ０１９Ｔ、Ｑ０１９Ｖ、Ｇ０２０Ａ、Ｇ０２０Ｃ、Ｇ０２０Ｄ、Ｇ０２０Ｅ、Ｇ０２０Ｆ、Ｇ０２０Ｈ、Ｇ０２０Ｋ、Ｇ０２０Ｍ、Ｇ０２０Ｎ、Ｇ０２０Ｐ、Ｇ０２０Ｑ、Ｇ０２０Ｒ、Ｇ０２０Ｗ、Ｙ０２１Ａ、Ｙ０２１Ｃ、Ｙ０２１Ｄ、Ｙ０２１Ｅ、Ｙ０２１Ｆ、Ｙ０２１Ｇ、Ｙ０２１Ｈ、Ｙ０２１Ｋ、Ｙ０２１Ｍ、Ｙ０２１Ｒ、Ｙ０２１Ｓ、Ｙ０２１Ｔ、Ｙ０２１Ｖ、Ｙ０２１Ｗ、Ｔ０２２Ａ、Ｔ０２２Ｃ、Ｔ０２２Ｅ、Ｔ０２２Ｆ、Ｔ０２２Ｇ、Ｔ０２２Ｈ、Ｔ０２２Ｉ、Ｔ０２２Ｋ、Ｔ０２２Ｌ、Ｔ０２２Ｍ、Ｔ０２２Ｎ、Ｔ０２２Ｑ、Ｔ０２２Ｓ、Ｔ０２２Ｖ、Ｔ０２２Ｗ、Ｔ０２２Ｙ、Ｓ０２４Ｃ、Ｓ０２４Ｆ、Ｓ０２４Ｇ、Ｓ０２４Ｈ、Ｓ０２４Ｉ、Ｓ０２４Ｋ、Ｓ０２４Ｌ、Ｓ０２４Ｍ、Ｓ０２４Ｎ、Ｓ０２４Ｒ、Ｓ０２４Ｔ、Ｓ０２４Ｗ、Ｓ０２４Ｙ、Ｎ０２５Ｃ、Ｎ０２５Ｅ、Ｎ０２５Ｆ、Ｎ０２５Ｇ、Ｎ０２５Ｈ、Ｎ０２５Ｉ、Ｎ０２５Ｋ、Ｎ０２５Ｌ、Ｎ０２５Ｍ、Ｎ０２５Ｐ、Ｎ０２５Ｒ、Ｎ０２５Ｓ、Ｎ０２５Ｔ、Ｎ０２５Ｖ、Ｎ０２５Ｗ、Ｋ０２７Ａ、Ｋ０２７Ｄ、Ｋ０２７Ｅ、Ｋ０２７Ｆ、Ｋ０２７Ｇ、Ｋ０２７Ｈ、Ｋ０２７Ｌ、Ｋ０２７Ｍ、Ｋ０２７Ｐ、Ｋ０２７Ｒ、Ｋ０２７Ｓ、Ｋ０２７Ｗ、Ｋ０２７Ｙ、Ｄ０３２Ａ、Ｄ０３２Ｃ、Ｄ０３２Ｅ、Ｄ０３２Ｇ、Ｄ０３２Ｉ、Ｄ０３２Ｋ、Ｄ０３２Ｌ、Ｄ０３２Ｍ、Ｄ０３２Ｒ、Ｄ０３２Ｓ、Ｄ０３２Ｔ、Ｄ０３２Ｖ、Ｄ０３２Ｙ、Ｓ０３３Ａ、Ｓ０３３Ｆ、Ｓ０３３Ｇ、Ｓ０３３Ｈ、Ｓ０３３Ｐ、Ｓ０３３Ｔ、Ｓ０３３Ｗ、Ｉ０３５Ａ、Ｉ０３５Ｃ、Ｉ０３５Ｄ、Ｉ０３５Ｒ、Ｉ０３５Ｓ、Ｉ０３５Ｔ、Ｉ０３５Ｖ、Ｄ０３６Ａ、Ｄ０３６Ｃ、Ｄ０３６Ｅ、Ｄ０３６Ｑ、Ｄ０３６Ｓ、Ｄ０３６Ｗ、Ｓ０３７Ａ、Ｓ０３７Ｃ、Ｓ０３７Ｅ、Ｓ０３７Ｆ、Ｓ０３７Ｇ、Ｓ０３７Ｈ、Ｓ０３７Ｋ、Ｓ０３７Ｌ、Ｓ０３７Ｍ、Ｓ０３７Ｐ、Ｓ０３７Ｑ、Ｓ０３７Ｒ、Ｓ０３７Ｔ、Ｓ０３７Ｗ、Ｈ０３９Ｃ、Ｈ０３９Ｔ、Ｈ０３９Ｖ、Ｐ０４０Ａ、Ｐ０４０Ｃ、Ｐ０４０Ｅ、Ｐ０４０Ｆ、Ｐ０４０Ｇ、Ｐ０４０Ｇ、Ｐ０４０Ｈ、Ｐ０４０Ｉ、Ｐ０４０Ｋ、Ｐ０４０Ｌ、Ｐ０
４０Ｍ、Ｐ０４０Ｎ、Ｐ０４０Ｑ、Ｐ０４０Ｒ、Ｐ０４０Ｓ、Ｐ０４０Ｔ、Ｐ０４０Ｖ、Ｐ０４０Ｗ、Ｄ０４１Ｅ、Ｌ０４２Ｉ、Ｌ０４２Ｍ、Ｌ０４２Ｖ、Ｋ０４３Ａ、Ｋ０４３Ｃ、Ｋ０４３Ｄ、Ｋ０４３Ｅ、Ｋ０４３Ｆ、Ｋ０４３Ｇ、Ｋ０４３Ｉ、Ｋ０４３Ｌ、Ｋ０４３Ｍ、Ｋ０４３Ｎ、Ｋ０４３Ｒ、Ｋ０４３Ｓ、Ｋ０４３Ｔ、Ｋ０４３Ｖ、Ｋ０４３Ｗ、Ｋ０４３Ｙ、Ｖ０４４Ｃ、Ｖ０４４Ｉ、Ｖ０４４Ｌ、Ｖ０４４Ｍ、Ｖ０４４Ｐ、Ｖ０４４Ｓ、Ｖ０４４Ｔ、Ａ０４５Ｃ、Ａ０４５Ｅ、Ａ０４５Ｆ、Ａ０４５Ｈ、Ａ０４５Ｉ、Ａ０４５Ｋ、Ａ０４５Ｌ、Ａ０４５Ｍ、Ａ０４５Ｎ、Ａ０４５Ｐ、Ａ０４５Ｑ、Ａ０４５Ｓ、Ａ０４５Ｔ、Ａ０４５Ｖ、Ａ０４５Ｙ、Ｇ０４６Ａ、Ｇ０４６Ｃ、Ｇ０４６Ｅ、Ｇ０４６Ｈ、Ｇ０４６Ｋ、Ｇ０４６Ｍ、Ｇ０４６Ｎ、Ｇ０４６Ｑ、Ｇ０４６Ｔ、Ｇ０４６Ｗ、Ｇ０４６Ｙ、Ａ０４８Ｃ、Ａ０４８Ｄ、Ａ０４８Ｅ、Ａ０４８Ｆ、Ａ０４８Ｈ、Ａ０４８Ｉ、Ａ０４８Ｋ、Ａ０４８Ｍ、Ａ０４８Ｑ、Ａ０４８Ｒ、Ａ０４８Ｓ、Ａ０４８Ｔ、Ａ０４８Ｖ、Ａ０４８Ｗ、Ａ０４８Ｙ、Ｍ０５０Ａ、Ｍ０５０Ｃ、Ｍ０５０Ｆ、Ｍ０５０Ｈ、Ｍ０５０Ｉ、Ｍ０５０Ｋ、Ｍ０５０Ｌ、Ｍ０５０Ｑ、Ｍ０５０Ｒ、Ｍ０５０Ｓ、Ｍ０５０Ｔ、Ｍ０５０Ｖ、Ｍ０５０Ｗ、Ｍ０５０Ｙ、Ｖ０５１Ａ、Ｖ０５１Ｃ、Ｖ０５１Ｄ、Ｖ０５１Ｅ、Ｖ０５１Ｈ、Ｖ０５１Ｉ、Ｖ０５１Ｌ、Ｖ０５１Ｐ、Ｖ０５１Ｑ、Ｐ０５２Ｃ、Ｐ０５２Ｄ、Ｐ０５２Ｅ、Ｐ０５２Ｆ、Ｐ０５２Ｈ、Ｐ０５２Ｉ、Ｐ０５２Ｋ、Ｐ０５２Ｌ、Ｐ０５２Ｑ、Ｐ０５２Ｓ、Ｐ０５２Ｔ、Ｐ０５２Ｖ、Ｐ０５２Ｗ、Ｐ０５２Ｙ、Ｓ０５３Ｅ、Ｓ０５３Ｆ、Ｓ０５３Ｇ、Ｓ０５３Ｈ、Ｓ０５３Ｉ、Ｓ０５３Ｋ、Ｓ０５３Ｌ、Ｓ０５３Ｍ、Ｓ０５３Ｎ、Ｓ０５３Ｑ、Ｓ０５３Ｒ、Ｓ０５３Ｔ、Ｓ０５３Ｖ、Ｓ０５３Ｗ、Ｅ０５４Ａ、Ｅ０５４Ｎ、Ｅ０５４Ｑ、Ｅ０５４Ｓ、Ｔ０５５Ａ、Ｔ０５５Ｃ、Ｔ０５５Ｄ、Ｔ０５５Ｆ、Ｔ０５５Ｇ、Ｔ０５５Ｈ、Ｔ０５５Ｉ、Ｔ０５５Ｋ、Ｔ０５５Ｍ、Ｔ０５５Ｐ、Ｔ０５５Ｑ、Ｔ０５５Ｒ、Ｔ０５５Ｓ、Ｔ０５５Ｖ、Ｔ０５５Ｗ、Ｔ０５５Ｙ、Ｎ０５６Ｄ、Ｎ０５６Ｐ、Ｎ０５６Ｑ、Ｎ０５６Ｓ、Ｎ０５６Ｔ、Ｎ０５６Ｖ、Ｐ０５７Ｎ、Ｐ０５７Ｑ、Ｐ０５７Ｔ、Ｐ０５７Ｖ、Ｐ０５７Ｗ、Ｆ０５８Ｃ、Ｆ０５８Ｅ、Ｆ０５８Ｇ、Ｆ０５８Ｈ、Ｆ０５８Ｌ、Ｆ０５８Ｍ、Ｆ０５８Ｎ、Ｆ０５８Ｑ、Ｆ０５８Ｓ、
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Ｆ、Ａ０９８Ｇ、Ａ０９８Ｈ、Ａ０９８Ｉ、Ａ０９８Ｌ、Ａ０９８Ｐ、Ａ０９８Ｑ、Ａ０９８Ｒ、Ａ０９８Ｓ、Ａ０９８Ｔ、Ａ０９８Ｖ、Ａ０９８Ｙ、Ｄ０９９Ｃ、Ｄ０９９Ｅ、Ｄ０９９Ｉ、Ｄ０９９Ｌ、Ｄ０９９Ｎ、Ｄ０９９Ｐ、Ｄ０９９Ｑ、Ｄ０９９Ｒ、Ｄ０９９Ｓ、Ｄ０９９Ｔ、Ｓ１０１Ａ、Ｓ１０１Ｃ、Ｓ１０１Ｅ、Ｓ１０１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｉ、Ｓ１０１Ｋ、Ｓ１０１Ｌ、Ｓ１０１Ｍ、Ｓ１０１Ｎ、Ｓ１０１Ｐ、Ｓ１０１Ｑ、Ｓ１０１Ｒ、Ｓ１０１Ｔ、Ｓ１０１Ｖ、Ｓ１０１Ｙ、Ｇ１０２Ａ、Ｇ１０２Ｃ、Ｇ１０２Ｅ、Ｇ１０２Ｆ、Ｇ１０２Ｉ、Ｇ１０２Ｎ、Ｇ１０２Ｓ、Ｇ１０２Ｖ、Ｇ１０２Ｙ、Ｑ１０３Ａ、Ｑ１０３Ｃ、Ｑ１０３Ｅ、Ｑ１０３Ｆ、Ｑ１０３Ｇ、Ｑ１０３Ｉ、Ｑ１０３Ｋ、Ｑ１０３Ｌ、Ｑ１０３Ｎ、Ｑ１０３Ｒ、Ｑ１０３Ｓ、Ｑ１０３Ｔ、Ｑ１０３Ｖ、Ｑ１０３Ｗ、Ｓ１０５Ａ、Ｓ１０５Ｃ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｅ、Ｓ１０５Ｆ、Ｓ１０５Ｇ、Ｓ１０５Ｉ、Ｓ１０５Ｋ、Ｓ１０５Ｌ、Ｓ１０５Ｍ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ｐ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｖ、Ｓ１０５Ｗ、Ｗ１０６Ａ、Ｗ１０６Ｃ、Ｗ１０６Ｅ、Ｗ１０６Ｆ、Ｗ１０６Ｇ、Ｗ１０６Ｈ、Ｗ１０６Ｉ、Ｗ１０６Ｌ、Ｗ１０６Ｍ、Ｗ１０６Ｎ、Ｗ１０６Ｒ、Ｗ１０６Ｓ、Ｗ１０６Ｔ、Ｗ１０６Ｖ、Ｗ１０６Ｙ、Ｎ１０９Ａ、Ｎ１０９Ｃ、Ｎ１０９Ｅ、Ｎ１０９Ｆ、Ｎ１０９Ｈ、Ｎ１０９Ｌ、Ｎ１０９Ｍ、Ｎ１０９Ｐ、Ｎ１０９Ｑ、Ｎ１０９Ｒ、Ｎ１０９Ｓ、Ｎ１０９Ｔ、Ｎ１０９Ｖ、Ｎ１０９Ｗ、Ｎ１０９Ｙ、Ｉ１１１Ｃ、Ｉ１１１Ｆ、Ｉ１１１Ｌ、Ｉ１１１Ｍ、Ｉ１１１Ｎ、Ｉ１１１Ｐ、Ｉ１１１Ｔ、Ｉ１１１Ｖ、Ｉ１１１Ｗ、Ｅ１１２Ａ、Ｅ１１２Ｃ、Ｅ１１２Ｄ、Ｅ１１２Ｆ、Ｅ１１２Ｇ、Ｅ１１２Ｉ、Ｅ１１２Ｌ、Ｅ１１２Ｍ、Ｅ１１２Ｎ、Ｅ１１２Ｑ、Ｅ１１２Ｒ、Ｅ１１２Ｓ、Ｅ１１２Ｔ、Ｅ１１２Ｖ、Ｅ１１２Ｗ、Ｅ１１２Ｙ、Ｗ１１３Ｄ、Ｗ１１３Ｅ、Ｗ１１３Ｆ、Ｗ１１３Ｎ、Ｗ１１３Ｑ、Ｗ１１３Ｓ、Ｗ１１３Ｖ、Ｗ１１３Ｙ、Ｉ１１５Ｅ、Ｉ１１５Ｈ、Ｉ１１５Ｎ、Ｉ１１５Ｒ、Ｉ１１５Ｔ、Ｉ１１５Ｖ、Ｉ１１５Ｗ、Ｉ１１５Ｙ、Ａ１１６Ｃ、Ａ１１６Ｄ、Ａ１１６Ｅ、Ａ１１６Ｆ、Ａ１１６Ｇ、Ａ１１６Ｈ、Ａ１１６Ｉ、Ａ１１６Ｋ、Ａ１１６Ｌ、Ａ１１６Ｍ、Ａ１１６Ｎ、Ａ１１６Ｐ、Ａ１１６Ｑ、Ａ１１６Ｒ、Ａ１１６Ｓ、Ａ１１６Ｔ、Ａ１１６Ｖ、Ａ１１６Ｗ、Ａ１１６Ｙ、Ｎ１１８Ａ、Ｎ１
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Ａ２２３Ｙ、Ｓ２２４Ａ、Ｓ２２４Ｃ、Ｓ２２４Ｆ、Ｓ２２４Ｇ、Ｓ２２４Ｈ、Ｓ２２４Ｍ、Ｓ２２４Ｎ、Ｓ２２４Ｑ、Ｓ２２４Ｒ、Ｓ２２４Ｔ、Ｐ２２５Ａ、Ｐ２２５Ｃ、Ｐ２２５Ｆ、Ｐ２２５Ｇ、Ｐ２２５Ｈ、Ｐ２２５Ｉ、Ｐ２２５Ｋ、Ｐ２２５Ｌ、Ｐ２２５Ｍ、Ｐ２２５Ｒ、Ｐ２２５Ｔ、Ｐ２２５Ｖ、Ｐ２２５Ｙ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｓ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ｇ２２９Ａ、Ｇ２２９Ｈ、Ｇ２２９Ｉ、Ｇ２２９Ｓ、Ａ２３０Ｃ、Ａ２３０Ｅ、Ａ２３０Ｇ、Ａ２３０Ｑ、Ａ２３０Ｒ、Ａ２３０Ｓ、Ａ２３０Ｔ、Ａ２３０Ｖ、Ａ２３１Ｃ、Ａ２３１Ｉ、Ａ２３１Ｐ、Ａ２３１Ｒ、Ｉ２３４Ａ、Ｉ２３４Ｃ、Ｉ２３４Ｌ、Ｉ２３４Ｍ、Ｉ２３４Ｎ、Ｉ２３４Ｐ、Ｉ２３４Ｑ、Ｉ２３４Ｓ、Ｉ２３４Ｔ、Ｉ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｃ、Ｌ２３５Ｇ、Ｌ２３５Ｉ、Ｌ２３５Ｋ、Ｌ２３５Ｍ、Ｌ２３５Ｑ、Ｌ２３５Ｒ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、Ｌ２３５Ｖ、Ｌ２３５Ｗ、Ｌ２３５Ｙ、Ｓ２３６Ａ、Ｓ２３６Ｃ、Ｓ２３６Ｄ、Ｓ２３６Ｅ、Ｓ２３６Ｇ、Ｓ２３６Ｈ、Ｓ２３６Ｎ、Ｓ２３６Ｑ、Ｓ２３６Ｔ、Ｓ２３６Ｖ、Ｓ２３６Ｙ、Ｋ２３７Ａ、Ｋ２３７Ｅ、Ｋ２３７Ｆ、Ｋ２３７Ｇ、Ｋ２３７Ｈ、Ｋ２３７Ｉ、Ｋ２３７Ｌ、Ｋ２３７Ｍ、Ｋ２３７Ｎ、Ｋ２３７Ｑ、Ｋ２３７Ｒ、Ｋ２３７Ｓ、Ｋ２３７Ｔ、Ｋ２３７Ｖ、Ｋ２３７Ｗ、Ｋ２３７Ｙ、Ｈ２３８Ｃ、Ｈ２３８Ｄ、Ｈ２３８Ｅ、Ｈ２３８Ｆ、Ｈ２３８Ｍ、Ｈ２３８Ｒ、Ｐ２３９Ｃ、Ｐ２３９Ｄ、Ｐ２３９Ｅ、Ｐ２３９Ｆ、Ｐ２３９Ｈ、Ｐ２３９Ｌ、Ｐ２３９Ｍ、Ｐ２３９Ｎ、Ｐ２３９Ｑ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｓ、Ｐ２３９Ｔ、Ｐ２３９Ｖ、Ｐ２３９Ｗ、Ｐ２３９Ｙ、Ｎ２４０Ａ、Ｎ２４０Ｃ、Ｎ２４０Ｄ、Ｎ２４０Ｆ、Ｎ２４０Ｇ、Ｎ２４０Ｋ、Ｎ２４０Ｌ、Ｎ２４０Ｑ、Ｎ２４０Ｒ、Ｎ２４０Ｓ、Ｎ２４０Ｔ、Ｎ２４０Ｖ、Ｎ２４０Ｗ、Ｎ２４０Ｙ、Ｗ２４１Ａ、Ｗ２４１Ｆ、Ｗ２４１Ｇ、Ｗ２４１Ｈ、Ｗ２４１Ｉ、Ｗ２４１Ｋ、Ｗ２４１Ｍ、Ｗ２４１Ｑ、Ｗ２４１Ｔ、Ｗ２４１Ｖ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｐ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｓ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４３Ｃ、Ｎ２４３Ｅ、Ｎ２４３Ｆ、Ｎ２４３Ｇ、Ｎ２４３Ｉ、Ｎ２４３Ｑ、Ｎ２４３Ｓ、Ｎ２４３Ｔ、Ｎ２４３Ｖ、Ｎ２４３Ｗ、Ｎ２４３Ｙ、Ｔ２４４Ａ、Ｔ２４４Ｄ、Ｔ２４４Ｆ、Ｔ２４４
Ｇ、Ｔ２４４Ｈ、Ｔ２４４Ｋ、Ｔ２４４Ｌ、Ｔ２４４Ｍ、Ｔ２４４Ｎ、Ｔ２４４Ｐ、Ｔ２４４Ｑ、Ｔ２４４Ｒ、Ｔ２４４Ｓ、Ｔ２４４Ｖ、Ｔ２４４Ｗ、Ｔ２４４Ｙ、Ｑ２４５Ａ、Ｑ２４５Ｃ、Ｑ２４５Ｅ、Ｑ２４５Ｈ、Ｑ２４５Ｉ、Ｑ２４５Ｋ、Ｑ２４５Ｌ、Ｑ２４５Ｍ、Ｑ２４５Ｒ、Ｑ２４５Ｔ、Ｑ２４５Ｖ、Ｑ２４５Ｙ、Ｒ２４７Ｗ、Ｓ２４８Ａ、Ｓ２４８Ｅ、Ｓ２４８Ｆ、Ｓ２４８Ｇ、Ｓ２４８Ｈ、Ｓ２４８Ｉ、Ｓ２４８Ｌ、Ｓ２４８Ｍ、Ｓ２４８Ｎ、Ｓ２４８Ｑ、Ｓ２４８Ｒ、Ｓ２４８Ｔ、Ｓ２４８Ｖ、Ｓ２４８Ｗ、Ｓ２４８Ｙ、Ｓ２４９Ｃ、Ｓ２４９Ｄ、Ｓ２４９Ｈ、Ｓ２４９Ｉ、Ｓ２４９Ｋ、Ｓ２４９Ｌ、Ｓ２４９Ｍ、Ｓ２４９Ｎ、Ｓ２４９Ｑ、Ｓ２４９Ｒ、Ｓ２４９Ｔ、Ｓ２４９Ｖ、Ｓ２４９Ｗ、Ｓ２４９Ｙ、Ｌ２５０Ｆ、Ｌ２５０Ｈ、Ｌ２５０Ｉ、Ｌ２５０Ｍ、Ｌ２５０Ｔ、Ｌ２５０Ｖ、Ｅ２５１Ａ、Ｅ２５１Ｔ、Ｅ２５１Ｗ、Ｎ２５２Ａ、Ｎ２５２Ｃ、Ｎ２５２Ｅ、Ｎ２５２Ｇ、Ｎ２５２Ｈ、Ｎ２５２Ｉ、Ｎ２５２Ｌ、Ｎ２５２Ｍ、Ｎ２５２Ｑ、Ｎ２５２Ｒ、Ｎ２５２Ｓ、Ｎ２５２Ｔ、Ｎ２５２Ｖ、Ｎ２５２Ｙ、Ｔ２５３Ａ、Ｔ２５３Ｃ、Ｔ２５３Ｅ、Ｔ２５３Ｇ、Ｔ２５３Ｈ、Ｔ２５３Ｋ、Ｔ２５３Ｍ、Ｔ２５３Ｓ、Ｔ２５３Ｖ、Ｔ２５４Ａ、Ｔ２５４Ｃ、Ｔ２５４Ｌ、Ｔ２５４Ｍ、Ｔ２５４Ｒ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５４Ｖ、Ｔ２５５Ａ、Ｔ２５５Ｄ、Ｔ２５５Ｅ、Ｔ２５５Ｆ、Ｔ２５５Ｇ、Ｔ２５５Ｈ、Ｔ２５５Ｉ、Ｔ２５５Ｋ、Ｔ２５５Ｌ、Ｔ２５５Ｍ、Ｔ２５５Ｒ、Ｔ２５５Ｓ、Ｔ２５５Ｖ、Ｋ２５６Ａ、Ｋ２５６Ｃ、Ｋ２５６Ｄ、Ｋ２５６Ｅ、Ｋ２５６Ｆ、Ｋ２５６Ｈ、Ｋ２５６Ｉ、Ｋ２５６Ｌ、Ｋ２５６Ｍ、Ｋ２５６Ｎ、Ｋ２５６Ｐ、Ｋ２５６Ｑ、Ｋ２５６Ｒ、Ｋ２５６Ｓ、Ｋ２５６Ｔ、Ｋ２５６Ｖ、Ｋ２５６Ｗ、Ｋ２５６Ｙ、Ｌ２５７Ａ、Ｌ２５７Ｃ、Ｌ２５７Ｆ、Ｌ２５７Ｇ、Ｌ２５７Ｈ、Ｌ２５７Ｉ、Ｌ２５７Ｋ、Ｌ２５７Ｍ、Ｌ２５７Ｎ、Ｌ２５７Ｒ、Ｌ２５７Ｔ、Ｌ２５７Ｖ、Ｌ２５７Ｗ、Ｌ２５７Ｙ、Ｇ２５８Ｑ、Ｄ２５９Ａ、Ｄ２５９Ｅ、Ｄ２５９Ｆ、Ｄ２５９Ｇ、Ｄ２５９Ｌ、Ｄ２５９Ｎ、Ｄ２５９Ｐ、Ｄ２５９Ｑ、Ｄ２５９Ｒ、Ｄ２５９Ｓ、Ｄ２５９Ｔ、Ｄ２５９Ｖ、Ｄ２５９Ｗ、Ｄ２５９Ｙ、Ｓ２６０Ａ、Ｓ２６０Ｃ、Ｓ２６０Ｄ、Ｓ２６０Ｅ、Ｓ２６０Ｆ、Ｓ２６０Ｇ、Ｓ２６０Ｈ、Ｓ２６０Ｌ、Ｓ２６０Ｍ、Ｓ２６０Ｎ、Ｓ２６０Ｐ、Ｓ２６０Ｒ、Ｓ２６０Ｖ、Ｓ２
６０Ｗ、Ｓ２６０Ｙ、Ｆ２６１Ｈ、Ｆ２６１Ｗ、Ｙ２６２Ａ、Ｙ２６２Ｃ、Ｙ２６２Ｅ、Ｙ２６２Ｆ、Ｙ２６２Ｌ、Ｙ２６２Ｍ、Ｙ２６２Ｎ、Ｙ２６３Ｆ、Ｙ２６３Ｍ、Ｙ２６３Ｔ、Ｇ２６４Ｆ、Ｇ２６４Ｉ、Ｇ２６４Ｌ、Ｋ２６５Ａ、Ｋ２６５Ｃ、Ｋ２６５Ｅ、Ｋ２６５Ｇ、Ｋ２６５Ｈ、Ｋ２６５Ｌ、Ｋ２６５Ｍ、Ｋ２６５Ｎ、Ｋ２６５Ｑ、Ｋ２６５Ｒ、Ｋ２６５Ｓ、Ｋ２６５Ｗ、Ｋ２６５Ｙ、Ｇ２６６Ｃ、Ｇ２６６Ｆ、Ｇ２６６Ｌ、Ｇ２６６Ｍ、Ｇ２６６Ｐ、Ｇ２６６Ｒ、Ｇ２６６Ｖ、Ｇ２６６Ｗ、Ｇ２６６Ｙ、Ｌ２６７Ａ、Ｌ２６７Ｃ、Ｌ２６７Ｅ、Ｌ２６７Ｇ、Ｌ２６７Ｈ、Ｌ２６７Ｉ、Ｌ２６７Ｍ、Ｌ２６７Ｎ、Ｌ２６７Ｑ、Ｌ２６７Ｔ、Ｌ２６７Ｖ、Ｉ２６８Ａ、Ｉ２６８Ｃ、Ｉ２６８Ｋ、Ｉ２６８Ｌ、Ｉ２６８Ｍ、Ｉ２６８Ｐ、Ｉ２６８Ｒ、Ｉ２６８Ｖ、Ｎ２６９Ｄ、Ｎ２６９Ｅ、Ｎ２６９Ｋ、Ｎ２６９Ｌ、Ｎ２６９Ｐ、Ｎ２６９Ｑ、Ｎ２６９Ｓ、Ｑ２７１Ａ、Ｑ２７１Ｃ、Ｑ２７１Ｄ、Ｑ２７１Ｅ、Ｑ２７１Ｆ、Ｑ２７１Ｇ、Ｑ２７１Ｈ、Ｑ２７１Ｉ、Ｑ２７１Ｋ、Ｑ２７１Ｌ、Ｑ２７１Ｍ、Ｑ２７１Ｎ、Ｑ２７１Ｐ、Ｑ２７１Ｒ、Ｑ２７１Ｓ、Ｑ２７１Ｔ、Ｑ２７１Ｖ、Ｑ２７１Ｗ、Ｑ２７１Ｙ、Ａ２７２Ｅ、Ａ２７２Ｆ、Ａ２７２Ｇ、Ａ２７２Ｈ、Ａ２７２Ｌ、Ａ２７２Ｍ、Ａ２７２Ｎ、Ａ２７２Ｑ、Ａ２７２Ｒ、Ａ２７２Ｓ、Ａ２７２Ｔ、Ａ２７２Ｖ、Ａ２７２Ｗ、Ａ２７２Ｙ、Ａ２７４Ｃ、Ａ２７４Ｄ、Ａ２７４Ｆ、Ａ２７４Ｇ、Ａ２７４Ｈ、Ａ２７４Ｉ、Ａ２７４Ｋ、Ａ２７４Ｌ、Ａ２７４Ｑ、Ａ２７４Ｓ、Ａ２７４Ｔ及びＡ２７４Ｖの一以上を含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項６】
前記置換が、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｅ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｑ、Ｓ１０１Ｅ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４５Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｆ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４５Ｖ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｅ、Ａ０９２Ｇ−Ａ１１４Ｇ、Ｙ０２１Ｗ−Ｓ１０１Ｅ、Ｖ２６Ｑ−Ｋ２１３Ｉ及びＹ０２１Ｈ−Ｓ１０１Ｎから選ばれる置換の組み合わせを含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項７】
前記置換が、Ｓ１０１Ｎ−Ｋ２１３Ｉ、Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１１９Ｈ、Ｋ２１３Ｌ、Ｍ１１９Ｎ−Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｅ、Ｍ１１９Ｎ−Ｋ２１３Ｉ、Ｋ２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｈ−Ｋ２１３Ｎ、Ｓ１０１Ｐ−Ｋ２１３Ｎ、Ｍ１１９Ｈ−Ｙ２１７Ｑ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｆ−Ｋ２１３Ｌ、Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｆ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４８Ｅ−Ｋ２１３Ｌ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｎ、Ｖ０２６Ｎ−Ｋ２１３Ｌ、Ｖ０２６Ｎ−Ｋ２１３Ｌ、Ｖ０２６Ｙ−Ｋ２１３Ｎ、Ａ０４８Ｄ−Ｋ２１３Ｎ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｎ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｎ、Ｖ１４７Ｄ−Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｉ、Ａ０４８Ｅ−Ｋ２１３Ｌ、Ａ０４８Ｄ−Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｉ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｎ、Ｖ１４７Ｄ−Ｋ２１３Ｎ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４５Ｖ−Ｙ２１７Ｌ、Ｓ１０１Ｅ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｅ、Ａ０４５Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ及びＹ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｅから選ばれる組み合わせを含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項８】
前記置換が、Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１１９Ｈ、Ｙ２１７Ｌ、Ｍ１１９Ｎ−Ｋ２１３Ｎ、Ｓ１０１Ｅ−Ｙ２１７Ｌ及びＡ０４５Ｉ−Ｙ２１７Ｑから選ばれる組み合わせを含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項９】
請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体をコードする単離核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１０に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体を含む洗浄組成物。
【請求項１３】
前記洗浄組成物が洗濯用洗剤である、請求項１２に記載の洗浄組成物。
【請求項１４】
前記洗濯用洗剤が、冷水用洗剤、低ｐＨ用洗剤または小型洗剤である、請求項１３に記載の洗濯用洗剤。
【請求項１５】
バチルス・ズブチリシンのズブチリシン変異体を生産する方法であって、
ａ）請求項１のズブチリシン変異体をコードする核酸を含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換する工程、及び
ｂ）ズブチリシン変異体の生産に適した条件下で、前記形質転換された宿主細胞を培養し、ズブチリシン変異体を生産する工程
を含む、前記方法。
【請求項１６】
生産されたズブチリシン変異体を採取する工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記宿主細胞がバチルス種である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記バチルス種がＢ．ズブチリスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
繊維を含む表面及び／または物を、請求項１−８のいずれかに記載の単離ズブチリシン変異体を含む洗浄組成物と接触させる工程を含む、洗浄方法。
【請求項２０】
プロテアーゼ工学に用いられる方法であって、
ａ）前記プロテアーゼの同一のアミノ酸位置で、別個の置換を有する複数のプロテアーゼ変異体を各々含む、複数の部位評価ライブラリー（ＳＥＬ）を提供する工程、
ｂ）目的の特性試験で、前記ＳＥＬの前記プロテアーゼ変異体及び標準プロテアーゼを試験する工程、
ｃ）前記試験のために前記プロテアーゼ変異体の各々の性能指数（ＰＩ）を測定する工程、
ｄ）非制限的な位置としての二以上の前記アミノ酸位置を同定する工程であって、二の前記ＳＥＬの各々の少なくとも一の前記複数のプロテアーゼ変異体が、０．５より高いＰＩを有する工程、及び
ｆ）二以上の前記非制限的な位置での置換を各々含む複数の多置換プロテアーゼ変異体を含む多重変異ライブラリーを提供する工程
を含む、前記方法。
【請求項２１】
前記試験が、染み抜きアッセイ（微小布見本）、ＬＡＳ安定性、ＥＤＴＡ安定性、洗剤安定性アッセイ及び比活性度アッセイから成る群より選ばれる二以上の異なるアッセイを含む、請求項２０に記載の前記方法。
【請求項２２】
前記プロテアーゼが細菌性ズブチリシンである、請求項２０及び２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
バチルス・ズブチリシンの多置換ズブチリシン変異体を生産する方法であって、
ａ）第１特性の第１試験及び第２特性の第２試験で複数の単置換ズブチリシン変異体を試験する工程であって、親ズブチリシンの前記特性に各試験で１．０の値が与えられ、好ましい第１または第２特性が１．０より高い値を有し、過度に好ましくない第１または第２特性が約０．８０未満の値を有するか、またはいくつかの好ましい実施態様において、約０．６０未満の値を有する前記工程、
ｂ）好ましい第１特性に関連し、過度に好ましくない第２特性に関連しない、少なくとも一の単置換ズブチリシン変異体での置換を同定する工程、
ｃ）好ましい第２特性に関連し、過度に好ましくない第１特性に関連しない、少なくとも一の単置換ズブチリシン変異体での置換を同定する工程、
ｄ）前の工程の前記置換をズブチリシン内に導入し、多置換ズブチリシン変異体を得る工程
を含む、前記方法。
【請求項２４】
第１試験及び第２試験で多置換ズブチリシン変異体を試験する工程であって、改良されたズブチリシン変異体が、前記第１試験及び第２試験の両方で１．０より高い値に達するか、または第１試験で１．０より高い値であって、第２試験で０．８０〜１．０の値に達する前記工程をさらに含む、請求項２３に記載の前記方法。
【請求項２５】
前記改良されたズブチリシン変異体を生産する工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１特性及び第２特性が負に相関する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
好ましい第１特性または第２特性が約１．２より高い値を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
過度に好ましくない第１特性または第２特性が、約０．４０未満の値を有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１特性が安定性であり、前記第２特性が洗浄性能である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記安定性が洗剤中の安定性を含み、前記洗浄性能が洗剤中の血液／ミルク／インク（ＢＭＩ）洗浄性能を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
５〜１２．０のｐＨを有する粉末洗剤組成物または液体洗剤組成物内で洗浄性能が試験される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
前記親細菌性ズブチリシンが、配列番号２で示すアミノ酸配列を有するＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’の野生型成熟形である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記位置が、約５０％より高い溶媒接触可能表面（ＳＡＳ）を有する親ズブチリシン内である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
一以上の前記親ズブチリシン内の位置が、約６５％より高い溶媒接触可能表面（ＳＡＳ）を有する位置である、請求項３３に記載の方法。
【請求項１】
バチルス・ズブチリシンの単離ズブチリシン変異体であって、前記ズブチリシン変異体がタンパク質分解活性を有し、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６４、６５、６６、６７、７１、７２、７３、７６、７７、７８、７９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２２、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３９、１４１、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０３、２０４、２０６、２０７、２０９、２１０、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３及び２７４から選ばれる一以上の位置での置換を含む成熟形であり、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応
する、前記単離ズブチリシン変異体。
【請求項２】
前記一以上の位置が、１、２、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６４、６５、６６、６７、７１、７２、７３、７７、７８、７９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７、１０９、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１８、１１９、１２２、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３９、１４１、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０３、２０４、２０６、２０７、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４８、２４９、２５０、２５１、２５３、２５４、２５５、２５６、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３及び２７４から選ばれ、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項３】
前記一以上の位置が、２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１９、２０、２１、２１、２２、２３、２５、２６、２８、２９、３０、３１、３３、３５、３６、３７、３９、４０、４１、４２、４４、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６４、６５、６６、６７、７１、７３、７７、７８、７９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、１０２、１０５、１０６、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１２２、１２４、１２５、１２８、１２９、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、１５３、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６２、１６５、１６６、１６７、１６９、１７０、１７１、１７３、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、１８６、１８７、１８９、１９０、１９１、１９２、１９４、１９５、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０３、２０４、２０６、２０７、２１２、２１４、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、２２２、２２３、２２４、２２５、２２８、２２９、２３０、２３１、２３２、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２４９、２５０、２５１、２５３、２５４、２５５、２５７、２５８、２５９、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７１、２７２、２７３及び２７４から選ばれ、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項４】
前記ズブチリシン変異体が、１８、５２、７２、１１７、１１９、１２７、１４４、１８５、２０９及び２１３から成る群より選ばれる一以上の位置での置換をさらに含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項５】
前記置換が、Ａ００１Ｃ、Ａ００１Ｄ、Ａ００１Ｅ、Ａ００１Ｆ、Ａ００１Ｇ、Ａ００１Ｈ、Ａ００１Ｉ、Ａ００１Ｋ、Ａ００１Ｌ、Ａ００１Ｍ、Ａ００１Ｎ、Ａ００１Ｑ、Ａ００１Ｒ、Ａ００１Ｓ、Ａ００１Ｖ、Ａ００１Ｗ、Ｑ００２Ａ、Ｑ００２Ｄ、Ｑ００２Ｅ、Ｑ００２Ｇ、Ｑ００２Ｓ、Ｓ００３Ａ、Ｓ００３Ｄ、Ｓ００３Ｆ、Ｓ００３Ｇ、Ｓ００３Ｉ、Ｓ００３Ｋ、Ｓ００３Ｌ、Ｓ００３Ｍ、Ｓ００３Ｎ、Ｓ００３Ｐ、Ｓ００３Ｑ、Ｓ００３Ｒ、Ｓ００３Ｔ、Ｓ００３Ｖ、Ｓ００３Ｗ、Ｓ００３Ｙ、Ｐ００５Ｃ、Ｐ００５Ｅ、Ｐ００５Ｇ、Ｐ００５Ｑ、Ｐ００５Ｔ、Ｙ００６Ａ、Ｙ００６Ｃ、Ｙ００６Ｅ、Ｙ００６Ｆ、Ｙ００６Ｇ、Ｙ００６Ｋ、Ｙ００６Ｍ、Ｙ００６Ｎ、Ｙ００６Ｐ、Ｙ００６Ｑ、Ｙ００６Ｒ、Ｙ００６Ｔ、Ｙ００６Ｖ、Ｙ００６Ｗ、Ｓ００９Ａ、Ｓ００９Ｃ、Ｓ００９Ｅ、Ｓ００９Ｆ、Ｓ００９Ｇ、Ｓ００９Ｈ、Ｓ００９Ｋ、Ｓ００９Ｌ、Ｓ００９Ｍ、Ｓ００９Ｐ、Ｓ００９Ｑ、Ｓ００９Ｒ、Ｓ００９Ｔ、Ｓ００９Ｖ、Ｓ００９Ｗ、Ｑ０１０Ａ、Ｑ０１０Ｃ、Ｑ０１０Ｅ、Ｑ０１０Ｆ、Ｑ０１０Ｇ、Ｑ０１０Ｈ、Ｑ０１０Ｉ、Ｑ０１０Ｋ、Ｑ０１０Ｌ、Ｑ０１０Ｒ、Ｑ０１０Ｓ、Ｑ０１０Ｔ、Ｑ０１０Ｖ、Ｑ０１０Ｗ、Ｉ０１１Ｃ、Ｉ０１１Ｌ、Ｉ０１１Ｔ、Ｉ０１１Ｖ、Ｉ０１１Ｙ、Ｋ０１２Ａ、Ｋ０１２Ｃ、Ｋ０１２Ｄ、Ｋ０１２Ｅ、Ｋ０１２Ｆ、Ｋ０１２Ｇ、Ｋ０１２Ｈ、Ｋ０１２Ｉ、Ｋ０１２Ｎ、Ｋ０１２Ｑ、Ｋ０１２Ｓ、Ｋ０１２Ｔ、Ｋ０１２Ｖ、Ｋ０１２Ｗ、Ｋ０１２Ｙ、Ａ０１３Ｃ、Ａ０１３Ｆ、Ａ０１３Ｇ、Ａ０１３Ｈ、Ａ０１３Ｌ、Ａ０１３Ｒ、Ａ０１３Ｓ、Ａ０１３Ｔ、Ａ０１３Ｖ、Ｐ０１４Ａ、Ｐ０１４Ｃ、Ｐ０１４Ｄ、Ｐ０１４Ｅ、Ｐ０１４Ｆ、Ｐ０１４Ｇ、Ｐ０１４Ｋ、Ｐ０１４Ｌ、Ｐ０１４Ｍ、Ｐ０１４Ｎ、Ｐ０１４Ｑ、Ｐ０１４Ｒ、Ｐ０１４Ｓ、Ｐ０１４Ｔ、Ｐ０１４Ｖ、Ｐ０１４Ｗ、Ｐ０１４Ｙ、Ａ０１５Ｃ、Ａ０１５Ｄ、Ａ０１５Ｅ、Ａ０１５Ｆ、Ａ０１５Ｇ、Ａ０１５Ｈ、Ａ０１５Ｉ、Ａ０１５Ｋ、Ａ０１５Ｌ、Ａ０１５Ｍ、Ａ０１５Ｐ、Ａ０１５Ｑ、Ａ０１５Ｒ、Ａ０１５Ｔ、Ａ０１５Ｖ、Ａ０１５Ｙ、Ｌ０１６Ａ、Ｌ０１６Ｃ、Ｌ０１６Ｉ、Ｌ０１６Ｍ、Ｌ０１６Ｑ、Ｌ０１６Ｓ、Ｌ０１６Ｔ、Ｈ０１７Ｆ、Ｈ０１７Ｉ、Ｈ０１７Ｌ、Ｈ０１７Ｍ、Ｈ０１７Ｖ、Ｈ０１７Ｗ、Ｓ０１８Ａ、Ｓ０１８Ｅ、Ｓ０１８Ｆ、Ｓ０１８Ｇ、Ｓ０１８Ｈ、Ｓ０１８
Ｉ、Ｓ０１８Ｋ、Ｓ０１８Ｌ、Ｓ０１８Ｍ、Ｓ０１８Ｎ、Ｓ０１８Ｐ、Ｓ０１８Ｑ、Ｓ０１８Ｒ、Ｓ０１８Ｔ、Ｓ０１８Ｖ、Ｓ０１８Ｗ、Ｓ０１８Ｙ、Ｑ０１９Ａ、Ｑ０１９Ｃ、Ｑ０１９Ｄ、Ｑ０１９Ｅ、Ｑ０１９Ｇ、Ｑ０１９Ｉ、Ｑ０１９Ｋ、Ｑ０１９Ｍ、Ｑ０１９Ｒ、Ｑ０１９Ｔ、Ｑ０１９Ｖ、Ｇ０２０Ａ、Ｇ０２０Ｃ、Ｇ０２０Ｄ、Ｇ０２０Ｅ、Ｇ０２０Ｆ、Ｇ０２０Ｈ、Ｇ０２０Ｋ、Ｇ０２０Ｍ、Ｇ０２０Ｎ、Ｇ０２０Ｐ、Ｇ０２０Ｑ、Ｇ０２０Ｒ、Ｇ０２０Ｗ、Ｙ０２１Ａ、Ｙ０２１Ｃ、Ｙ０２１Ｄ、Ｙ０２１Ｅ、Ｙ０２１Ｆ、Ｙ０２１Ｇ、Ｙ０２１Ｈ、Ｙ０２１Ｋ、Ｙ０２１Ｍ、Ｙ０２１Ｒ、Ｙ０２１Ｓ、Ｙ０２１Ｔ、Ｙ０２１Ｖ、Ｙ０２１Ｗ、Ｔ０２２Ａ、Ｔ０２２Ｃ、Ｔ０２２Ｅ、Ｔ０２２Ｆ、Ｔ０２２Ｇ、Ｔ０２２Ｈ、Ｔ０２２Ｉ、Ｔ０２２Ｋ、Ｔ０２２Ｌ、Ｔ０２２Ｍ、Ｔ０２２Ｎ、Ｔ０２２Ｑ、Ｔ０２２Ｓ、Ｔ０２２Ｖ、Ｔ０２２Ｗ、Ｔ０２２Ｙ、Ｓ０２４Ｃ、Ｓ０２４Ｆ、Ｓ０２４Ｇ、Ｓ０２４Ｈ、Ｓ０２４Ｉ、Ｓ０２４Ｋ、Ｓ０２４Ｌ、Ｓ０２４Ｍ、Ｓ０２４Ｎ、Ｓ０２４Ｒ、Ｓ０２４Ｔ、Ｓ０２４Ｗ、Ｓ０２４Ｙ、Ｎ０２５Ｃ、Ｎ０２５Ｅ、Ｎ０２５Ｆ、Ｎ０２５Ｇ、Ｎ０２５Ｈ、Ｎ０２５Ｉ、Ｎ０２５Ｋ、Ｎ０２５Ｌ、Ｎ０２５Ｍ、Ｎ０２５Ｐ、Ｎ０２５Ｒ、Ｎ０２５Ｓ、Ｎ０２５Ｔ、Ｎ０２５Ｖ、Ｎ０２５Ｗ、Ｋ０２７Ａ、Ｋ０２７Ｄ、Ｋ０２７Ｅ、Ｋ０２７Ｆ、Ｋ０２７Ｇ、Ｋ０２７Ｈ、Ｋ０２７Ｌ、Ｋ０２７Ｍ、Ｋ０２７Ｐ、Ｋ０２７Ｒ、Ｋ０２７Ｓ、Ｋ０２７Ｗ、Ｋ０２７Ｙ、Ｄ０３２Ａ、Ｄ０３２Ｃ、Ｄ０３２Ｅ、Ｄ０３２Ｇ、Ｄ０３２Ｉ、Ｄ０３２Ｋ、Ｄ０３２Ｌ、Ｄ０３２Ｍ、Ｄ０３２Ｒ、Ｄ０３２Ｓ、Ｄ０３２Ｔ、Ｄ０３２Ｖ、Ｄ０３２Ｙ、Ｓ０３３Ａ、Ｓ０３３Ｆ、Ｓ０３３Ｇ、Ｓ０３３Ｈ、Ｓ０３３Ｐ、Ｓ０３３Ｔ、Ｓ０３３Ｗ、Ｉ０３５Ａ、Ｉ０３５Ｃ、Ｉ０３５Ｄ、Ｉ０３５Ｒ、Ｉ０３５Ｓ、Ｉ０３５Ｔ、Ｉ０３５Ｖ、Ｄ０３６Ａ、Ｄ０３６Ｃ、Ｄ０３６Ｅ、Ｄ０３６Ｑ、Ｄ０３６Ｓ、Ｄ０３６Ｗ、Ｓ０３７Ａ、Ｓ０３７Ｃ、Ｓ０３７Ｅ、Ｓ０３７Ｆ、Ｓ０３７Ｇ、Ｓ０３７Ｈ、Ｓ０３７Ｋ、Ｓ０３７Ｌ、Ｓ０３７Ｍ、Ｓ０３７Ｐ、Ｓ０３７Ｑ、Ｓ０３７Ｒ、Ｓ０３７Ｔ、Ｓ０３７Ｗ、Ｈ０３９Ｃ、Ｈ０３９Ｔ、Ｈ０３９Ｖ、Ｐ０４０Ａ、Ｐ０４０Ｃ、Ｐ０４０Ｅ、Ｐ０４０Ｆ、Ｐ０４０Ｇ、Ｐ０４０Ｇ、Ｐ０４０Ｈ、Ｐ０４０Ｉ、Ｐ０４０Ｋ、Ｐ０４０Ｌ、Ｐ０
４０Ｍ、Ｐ０４０Ｎ、Ｐ０４０Ｑ、Ｐ０４０Ｒ、Ｐ０４０Ｓ、Ｐ０４０Ｔ、Ｐ０４０Ｖ、Ｐ０４０Ｗ、Ｄ０４１Ｅ、Ｌ０４２Ｉ、Ｌ０４２Ｍ、Ｌ０４２Ｖ、Ｋ０４３Ａ、Ｋ０４３Ｃ、Ｋ０４３Ｄ、Ｋ０４３Ｅ、Ｋ０４３Ｆ、Ｋ０４３Ｇ、Ｋ０４３Ｉ、Ｋ０４３Ｌ、Ｋ０４３Ｍ、Ｋ０４３Ｎ、Ｋ０４３Ｒ、Ｋ０４３Ｓ、Ｋ０４３Ｔ、Ｋ０４３Ｖ、Ｋ０４３Ｗ、Ｋ０４３Ｙ、Ｖ０４４Ｃ、Ｖ０４４Ｉ、Ｖ０４４Ｌ、Ｖ０４４Ｍ、Ｖ０４４Ｐ、Ｖ０４４Ｓ、Ｖ０４４Ｔ、Ａ０４５Ｃ、Ａ０４５Ｅ、Ａ０４５Ｆ、Ａ０４５Ｈ、Ａ０４５Ｉ、Ａ０４５Ｋ、Ａ０４５Ｌ、Ａ０４５Ｍ、Ａ０４５Ｎ、Ａ０４５Ｐ、Ａ０４５Ｑ、Ａ０４５Ｓ、Ａ０４５Ｔ、Ａ０４５Ｖ、Ａ０４５Ｙ、Ｇ０４６Ａ、Ｇ０４６Ｃ、Ｇ０４６Ｅ、Ｇ０４６Ｈ、Ｇ０４６Ｋ、Ｇ０４６Ｍ、Ｇ０４６Ｎ、Ｇ０４６Ｑ、Ｇ０４６Ｔ、Ｇ０４６Ｗ、Ｇ０４６Ｙ、Ａ０４８Ｃ、Ａ０４８Ｄ、Ａ０４８Ｅ、Ａ０４８Ｆ、Ａ０４８Ｈ、Ａ０４８Ｉ、Ａ０４８Ｋ、Ａ０４８Ｍ、Ａ０４８Ｑ、Ａ０４８Ｒ、Ａ０４８Ｓ、Ａ０４８Ｔ、Ａ０４８Ｖ、Ａ０４８Ｗ、Ａ０４８Ｙ、Ｍ０５０Ａ、Ｍ０５０Ｃ、Ｍ０５０Ｆ、Ｍ０５０Ｈ、Ｍ０５０Ｉ、Ｍ０５０Ｋ、Ｍ０５０Ｌ、Ｍ０５０Ｑ、Ｍ０５０Ｒ、Ｍ０５０Ｓ、Ｍ０５０Ｔ、Ｍ０５０Ｖ、Ｍ０５０Ｗ、Ｍ０５０Ｙ、Ｖ０５１Ａ、Ｖ０５１Ｃ、Ｖ０５１Ｄ、Ｖ０５１Ｅ、Ｖ０５１Ｈ、Ｖ０５１Ｉ、Ｖ０５１Ｌ、Ｖ０５１Ｐ、Ｖ０５１Ｑ、Ｐ０５２Ｃ、Ｐ０５２Ｄ、Ｐ０５２Ｅ、Ｐ０５２Ｆ、Ｐ０５２Ｈ、Ｐ０５２Ｉ、Ｐ０５２Ｋ、Ｐ０５２Ｌ、Ｐ０５２Ｑ、Ｐ０５２Ｓ、Ｐ０５２Ｔ、Ｐ０５２Ｖ、Ｐ０５２Ｗ、Ｐ０５２Ｙ、Ｓ０５３Ｅ、Ｓ０５３Ｆ、Ｓ０５３Ｇ、Ｓ０５３Ｈ、Ｓ０５３Ｉ、Ｓ０５３Ｋ、Ｓ０５３Ｌ、Ｓ０５３Ｍ、Ｓ０５３Ｎ、Ｓ０５３Ｑ、Ｓ０５３Ｒ、Ｓ０５３Ｔ、Ｓ０５３Ｖ、Ｓ０５３Ｗ、Ｅ０５４Ａ、Ｅ０５４Ｎ、Ｅ０５４Ｑ、Ｅ０５４Ｓ、Ｔ０５５Ａ、Ｔ０５５Ｃ、Ｔ０５５Ｄ、Ｔ０５５Ｆ、Ｔ０５５Ｇ、Ｔ０５５Ｈ、Ｔ０５５Ｉ、Ｔ０５５Ｋ、Ｔ０５５Ｍ、Ｔ０５５Ｐ、Ｔ０５５Ｑ、Ｔ０５５Ｒ、Ｔ０５５Ｓ、Ｔ０５５Ｖ、Ｔ０５５Ｗ、Ｔ０５５Ｙ、Ｎ０５６Ｄ、Ｎ０５６Ｐ、Ｎ０５６Ｑ、Ｎ０５６Ｓ、Ｎ０５６Ｔ、Ｎ０５６Ｖ、Ｐ０５７Ｎ、Ｐ０５７Ｑ、Ｐ０５７Ｔ、Ｐ０５７Ｖ、Ｐ０５７Ｗ、Ｆ０５８Ｃ、Ｆ０５８Ｅ、Ｆ０５８Ｇ、Ｆ０５８Ｈ、Ｆ０５８Ｌ、Ｆ０５８Ｍ、Ｆ０５８Ｎ、Ｆ０５８Ｑ、Ｆ０５８Ｓ、
Ｆ０５８Ｖ、Ｆ０５８Ｙ、Ｑ０５９Ａ、Ｑ０５９Ｃ、Ｑ０５９Ｄ、Ｑ０５９Ｅ、Ｑ０５９Ｆ、Ｑ０５９Ｇ、Ｑ０５９Ｈ、Ｑ０５９Ｋ、Ｑ０５９Ｌ、Ｑ０５９Ｍ、Ｑ０５９Ｎ、Ｑ０５９Ｐ、Ｑ０５９Ｒ、Ｑ０５９Ｓ、Ｑ０５９Ｔ、Ｑ０５９Ｖ、Ｑ０５９Ｗ、Ｑ０５９Ｙ、Ｄ０６０Ｅ、Ｈ０６４Ｃ、Ｈ０６４Ｄ、Ｈ０６４Ｆ、Ｈ０６４Ｉ、Ｈ０６４Ｌ、Ｈ０６４Ｍ、Ｈ０６４Ｑ、Ｈ０６４Ｒ、Ｈ０６４Ｓ、Ｈ０６４Ｔ、Ｈ０６４Ｖ、Ｈ０６４Ｙ、Ｔ０６６Ｓ、Ｔ０６６Ｗ、Ｔ０６６Ｙ、Ｈ０６７Ａ、Ｈ０６７Ｃ、Ｈ０６７Ｆ、Ｈ０６７Ｉ、Ｈ０６７Ｌ、Ｈ０６７Ｍ、Ｈ０６７Ｎ、Ｈ０６７Ｐ、Ｈ０６７Ｒ、Ｈ０６７Ｓ、Ｈ０６７Ｔ、Ｔ０７１Ｉ、Ｔ０７１Ｙ、Ｎ０７７Ｓ、Ｓ０７８Ａ、Ｓ０７８Ｃ、Ｓ０７８Ｄ、Ｓ０７８Ｆ、Ｓ０７８Ｇ、Ｓ０７８Ｉ、Ｓ０７８Ｋ、Ｓ０７８Ｌ、Ｓ０７８Ｍ、Ｓ０７８Ｎ、Ｓ０７８Ｐ、Ｓ０７８Ｒ、Ｓ０７８Ｔ、Ｓ０７８Ｖ、Ｓ０７８Ｗ、Ｓ０７８Ｙ、Ｉ０７９Ａ、Ｉ０７９Ｃ、Ｉ０７９Ｅ、Ｉ０７９Ｆ、Ｉ０７９Ｇ、Ｉ０７９Ｈ、Ｉ０７９Ｋ、Ｉ０７９Ｌ、Ｉ０７９Ｎ、Ｉ０７９Ｑ、Ｉ０７９Ｒ、Ｉ０７９Ｓ、Ｉ０７９Ｔ、Ｉ０７９Ｖ、Ｉ０７９Ｗ、Ｉ０７９Ｙ、Ｖ０８１Ｆ、Ｖ０８１Ｉ、Ｖ０８１Ｌ、Ｖ０８１Ｍ、Ｖ０８１Ｔ、Ｇ０８３Ｆ、Ｇ０８３Ｐ、Ｑ０８４Ａ、Ｑ０８４Ｃ、Ｑ０８４Ｈ、Ｑ０８４Ｉ、Ｑ０８４Ｎ、Ｑ０８４Ｔ、Ａ０８５Ｃ、Ａ０８５Ｆ、Ａ０８５Ｇ、Ａ０８５Ｒ、Ａ０８５Ｓ、Ｐ０８６Ａ、Ｐ０８６Ｅ、Ｐ０８６Ｇ、Ｐ０８６Ｍ、Ｐ０８６Ｎ、Ｐ０８６Ｑ、Ｐ０８６Ｒ、Ｐ０８６Ｓ、Ｐ０８６Ｔ、Ｐ０８６Ｗ、Ｐ０８６Ｙ、Ｓ０８９Ｃ、Ｓ０８９Ｄ、Ｓ０８９Ｅ、Ｓ０８９Ｆ、Ｓ０８９Ｇ、Ｓ０８９Ｈ、Ｓ０８９Ｋ、Ｓ０８９Ｌ、Ｓ０８９Ｖ、Ｓ０８９Ｗ、Ｓ０８９Ｙ、Ｌ０９０Ａ、Ｌ０９０Ｄ、Ｌ０９０Ｅ、Ｌ０９０Ｇ、Ｌ０９０Ｈ、Ｌ０９０Ｍ、Ｌ０９０Ｑ、Ｌ０９０Ｔ、Ｌ０９０Ｖ、Ｙ０９１Ａ、Ｙ０９１Ｃ、Ｙ０９１Ｄ、Ｙ０９１Ｅ、Ｙ０９１Ｆ、Ｙ０９１Ｈ、Ｙ０９１Ｉ、Ｙ０９１Ｌ、Ｙ０９１Ｍ、Ｙ０９１Ｑ、Ｙ０９１Ｔ、Ｙ０９１Ｖ、Ｌ０９６Ｆ、Ｌ０９６Ｈ、Ｌ０９６Ｉ、Ｌ０９６Ｋ、Ｌ０９６Ｍ、Ｌ０９６Ｔ、Ｌ０９６Ｖ、Ｇ０９７Ａ、Ｇ０９７Ｃ、Ｇ０９７Ｄ、Ｇ０９７Ｅ、Ｇ０９７Ｈ、Ｇ０９７Ｋ、Ｇ０９７Ｌ、Ｇ０９７Ｍ、Ｇ０９７Ｐ、Ｇ０９７Ｑ、Ｇ０９７Ｒ、Ｇ０９７Ｓ、Ｇ０９７Ｔ、Ｇ０９７Ｖ、Ａ０９８Ｃ、Ａ０９８Ｄ、Ａ０９８
Ｆ、Ａ０９８Ｇ、Ａ０９８Ｈ、Ａ０９８Ｉ、Ａ０９８Ｌ、Ａ０９８Ｐ、Ａ０９８Ｑ、Ａ０９８Ｒ、Ａ０９８Ｓ、Ａ０９８Ｔ、Ａ０９８Ｖ、Ａ０９８Ｙ、Ｄ０９９Ｃ、Ｄ０９９Ｅ、Ｄ０９９Ｉ、Ｄ０９９Ｌ、Ｄ０９９Ｎ、Ｄ０９９Ｐ、Ｄ０９９Ｑ、Ｄ０９９Ｒ、Ｄ０９９Ｓ、Ｄ０９９Ｔ、Ｓ１０１Ａ、Ｓ１０１Ｃ、Ｓ１０１Ｅ、Ｓ１０１Ｆ、Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０１Ｉ、Ｓ１０１Ｋ、Ｓ１０１Ｌ、Ｓ１０１Ｍ、Ｓ１０１Ｎ、Ｓ１０１Ｐ、Ｓ１０１Ｑ、Ｓ１０１Ｒ、Ｓ１０１Ｔ、Ｓ１０１Ｖ、Ｓ１０１Ｙ、Ｇ１０２Ａ、Ｇ１０２Ｃ、Ｇ１０２Ｅ、Ｇ１０２Ｆ、Ｇ１０２Ｉ、Ｇ１０２Ｎ、Ｇ１０２Ｓ、Ｇ１０２Ｖ、Ｇ１０２Ｙ、Ｑ１０３Ａ、Ｑ１０３Ｃ、Ｑ１０３Ｅ、Ｑ１０３Ｆ、Ｑ１０３Ｇ、Ｑ１０３Ｉ、Ｑ１０３Ｋ、Ｑ１０３Ｌ、Ｑ１０３Ｎ、Ｑ１０３Ｒ、Ｑ１０３Ｓ、Ｑ１０３Ｔ、Ｑ１０３Ｖ、Ｑ１０３Ｗ、Ｓ１０５Ａ、Ｓ１０５Ｃ、Ｓ１０５Ｄ、Ｓ１０５Ｅ、Ｓ１０５Ｆ、Ｓ１０５Ｇ、Ｓ１０５Ｉ、Ｓ１０５Ｋ、Ｓ１０５Ｌ、Ｓ１０５Ｍ、Ｓ１０５Ｎ、Ｓ１０５Ｐ、Ｓ１０５Ｒ、Ｓ１０５Ｖ、Ｓ１０５Ｗ、Ｗ１０６Ａ、Ｗ１０６Ｃ、Ｗ１０６Ｅ、Ｗ１０６Ｆ、Ｗ１０６Ｇ、Ｗ１０６Ｈ、Ｗ１０６Ｉ、Ｗ１０６Ｌ、Ｗ１０６Ｍ、Ｗ１０６Ｎ、Ｗ１０６Ｒ、Ｗ１０６Ｓ、Ｗ１０６Ｔ、Ｗ１０６Ｖ、Ｗ１０６Ｙ、Ｎ１０９Ａ、Ｎ１０９Ｃ、Ｎ１０９Ｅ、Ｎ１０９Ｆ、Ｎ１０９Ｈ、Ｎ１０９Ｌ、Ｎ１０９Ｍ、Ｎ１０９Ｐ、Ｎ１０９Ｑ、Ｎ１０９Ｒ、Ｎ１０９Ｓ、Ｎ１０９Ｔ、Ｎ１０９Ｖ、Ｎ１０９Ｗ、Ｎ１０９Ｙ、Ｉ１１１Ｃ、Ｉ１１１Ｆ、Ｉ１１１Ｌ、Ｉ１１１Ｍ、Ｉ１１１Ｎ、Ｉ１１１Ｐ、Ｉ１１１Ｔ、Ｉ１１１Ｖ、Ｉ１１１Ｗ、Ｅ１１２Ａ、Ｅ１１２Ｃ、Ｅ１１２Ｄ、Ｅ１１２Ｆ、Ｅ１１２Ｇ、Ｅ１１２Ｉ、Ｅ１１２Ｌ、Ｅ１１２Ｍ、Ｅ１１２Ｎ、Ｅ１１２Ｑ、Ｅ１１２Ｒ、Ｅ１１２Ｓ、Ｅ１１２Ｔ、Ｅ１１２Ｖ、Ｅ１１２Ｗ、Ｅ１１２Ｙ、Ｗ１１３Ｄ、Ｗ１１３Ｅ、Ｗ１１３Ｆ、Ｗ１１３Ｎ、Ｗ１１３Ｑ、Ｗ１１３Ｓ、Ｗ１１３Ｖ、Ｗ１１３Ｙ、Ｉ１１５Ｅ、Ｉ１１５Ｈ、Ｉ１１５Ｎ、Ｉ１１５Ｒ、Ｉ１１５Ｔ、Ｉ１１５Ｖ、Ｉ１１５Ｗ、Ｉ１１５Ｙ、Ａ１１６Ｃ、Ａ１１６Ｄ、Ａ１１６Ｅ、Ａ１１６Ｆ、Ａ１１６Ｇ、Ａ１１６Ｈ、Ａ１１６Ｉ、Ａ１１６Ｋ、Ａ１１６Ｌ、Ａ１１６Ｍ、Ａ１１６Ｎ、Ａ１１６Ｐ、Ａ１１６Ｑ、Ａ１１６Ｒ、Ａ１１６Ｓ、Ａ１１６Ｔ、Ａ１１６Ｖ、Ａ１１６Ｗ、Ａ１１６Ｙ、Ｎ１１８Ａ、Ｎ１
１８Ｃ、Ｎ１１８Ｄ、Ｎ１１８Ｅ、Ｎ１１８Ｆ、Ｎ１１８Ｇ、Ｎ１１８Ｈ、Ｎ１１８Ｉ、Ｎ１１８Ｋ、Ｎ１１８Ｍ、Ｎ１１８Ｑ、Ｎ１１８Ｒ、Ｎ１１８Ｓ、Ｎ１１８Ｔ、Ｎ１１８Ｖ、Ｎ１１８Ｗ、Ｎ１１８Ｙ、Ｉ１２２Ａ、Ｉ１２２Ｃ、Ｉ１２２Ｈ、Ｉ１２２Ｋ、Ｉ１２２Ｌ、Ｉ１２２Ｍ、Ｉ１２２Ｎ、Ｉ１２２Ｐ、Ｍ１２４Ｃ、Ｍ１２４Ｄ、Ｍ１２４Ｉ、Ｍ１２４Ｌ、Ｍ１２４Ｓ、Ｍ１２４Ｔ、Ｍ１２４Ｖ、Ｍ１２４Ｗ、Ｓ１２５Ａ、Ｓ１２５Ｃ、Ｓ１２５Ｅ、Ｓ１２５Ｆ、Ｓ１２５Ｉ、Ｓ１２５Ｋ、Ｓ１２５Ｍ、Ｓ１２５Ｎ、Ｓ１２５Ｐ、Ｓ１２５Ｑ、Ｓ１２５Ｒ、Ｓ１２５Ｔ、Ｓ１２５Ｗ、Ｌ１２６Ａ、Ｌ１２６Ｃ、Ｌ１２６Ｉ、Ｌ１２６Ｎ、Ｌ１２６Ｒ、Ｌ１２６Ｓ、Ｌ１２６Ｔ、Ｌ１２６Ｖ、Ｌ１２６Ｗ、Ｌ１２６Ｙ、Ｇ１２７Ａ、Ｇ１２７Ｃ、Ｇ１２７Ｅ、Ｇ１２７Ｆ、Ｇ１２７Ｉ、Ｇ１２７Ｋ、Ｇ１２７Ｍ、Ｇ１２７Ｎ、Ｇ１２７Ｐ、Ｇ１２７Ｑ、Ｇ１２７Ｓ、Ｇ１２７Ｔ、Ｇ１２７Ｖ、Ｇ１２７Ｗ、Ｇ１２７Ｙ、Ｇ１２８Ａ、Ｇ１２８Ｄ、Ｇ１２８Ｆ、Ｇ１２８Ｈ、Ｇ１２８Ｌ、Ｇ１２８Ｎ、Ｇ１２８Ｐ、Ｇ１２８Ｓ、Ｇ１２８Ｔ、Ｇ１２８Ｖ、Ｇ１２８Ｗ、Ｇ１２８Ｙ、Ｐ１２９Ａ、Ｐ１２９Ｃ、Ｐ１２９Ｄ、Ｐ１２９Ｅ、Ｐ１２９Ｆ、Ｐ１２９Ｇ、Ｐ１２９Ｋ、Ｐ１２９Ｌ、Ｐ１２９Ｍ、Ｐ１２９Ｎ、Ｐ１２９Ｑ、Ｐ１２９Ｓ、Ｐ１２９Ｔ、Ｐ１２９Ｖ、Ｐ１２９Ｙ、Ｇ１３１Ａ、Ｇ１３１Ｃ、Ｇ１３１Ｅ、Ｇ１３１Ｆ、Ｇ１３１Ｋ、Ｇ１３１Ｌ、Ｇ１３１Ｍ、Ｇ１３１Ｎ、Ｇ１３１Ｐ、Ｇ１３１Ｑ、Ｇ１３１Ｒ、Ｇ１３１Ｓ、Ｇ１３１Ｔ、Ｇ１３１Ｖ、Ｇ１３１Ｗ、Ｇ１３１Ｙ、Ａ１３３Ｃ、Ａ１３３Ｄ、Ａ１３３Ｅ、Ａ１３３Ｆ、Ａ１３３Ｇ、Ａ１３３Ｉ、Ａ１３３Ｋ、Ａ１３３Ｌ、Ａ１３３Ｍ、Ａ１３３Ｐ、Ａ１３３Ｒ、Ａ１３３Ｓ、Ａ１３３Ｔ、Ａ１３３Ｖ、Ａ１３３Ｗ、Ａ１３４Ｄ、Ａ１３４Ｅ、Ａ１３４Ｆ、Ａ１３４Ｇ、Ａ１３４Ｉ、Ａ１３４Ｋ、Ａ１３４Ｌ、Ａ１３４Ｍ、Ａ１３４Ｐ、Ａ１３４Ｑ、Ａ１３４Ｒ、Ａ１３４Ｓ、Ａ１３４Ｔ、Ａ１３４Ｖ、Ａ１３４Ｗ、Ｌ１３５Ｄ、Ｌ１３５Ｅ、Ｌ１３５Ｍ、Ｌ１３５Ｒ、Ｌ１３５Ｗ、Ｌ１３５Ｙ、Ｋ１３６Ｅ、Ｋ１３６Ｈ、Ｋ１３６Ｌ、Ｋ１３６Ｍ、Ｋ１３６Ｎ、Ｋ１３６Ｒ、Ｋ１３６Ｓ、Ｋ１３６Ｔ、Ｋ１３６Ｖ、Ｋ１３６Ｗ、Ｋ１３６Ｙ、Ａ１３７Ｃ、Ａ１３７Ｅ、Ａ１３７Ｆ、Ａ１３７Ｈ、Ａ１３７Ｋ、Ａ１３７Ｌ、Ａ１３７Ｍ、
Ａ１３７Ｎ、Ａ１３７Ｑ、Ａ１３７Ｒ、Ａ１３７Ｓ、Ａ１３７Ｔ、Ａ１３７Ｖ、Ａ１３７Ｗ、Ａ１３７Ｙ、Ｖ１３９Ｃ、Ｖ１３９Ｉ、Ｖ１３９Ｌ、Ｖ１３９Ｎ、Ｖ１３９Ｓ、Ｖ１３９Ｔ、Ｋ１４１Ａ、Ｋ１４１Ｃ、Ｋ１４１Ｄ、Ｋ１４１Ｅ、Ｋ１４１Ｆ、Ｋ１４１Ｇ、Ｋ１４１Ｈ、Ｋ１４１Ｉ、Ｋ１４１Ｌ、Ｋ１４１Ｍ、Ｋ１４１Ｎ、Ｋ１４１Ｑ、Ｋ１４１Ｒ、Ｋ１４１Ｓ、Ｋ１４１Ｖ、Ｋ１４１Ｗ、Ｋ１４１Ｙ、Ｖ１４３Ａ、Ｖ１４３Ｃ、Ｖ１４３Ｄ、Ｖ１４３Ｅ、Ｖ１４３Ｆ、Ｖ１４３Ｇ、Ｖ１４３Ｋ、Ｖ１４３Ｌ、Ｖ１４３Ｍ、Ｖ１４３Ｎ、Ｖ１４３Ｒ、Ｖ１４３Ｓ、Ｖ１４３Ｔ、Ｖ１４３Ｗ、Ａ１４４Ｃ、Ａ１４４Ｄ、Ａ１４４Ｅ、Ａ１４４Ｇ、Ａ１４４Ｉ、Ａ１４４Ｋ、Ａ１４４Ｌ、Ａ１４４Ｍ、Ａ１４４Ｒ、Ａ１４４Ｓ、Ａ１４４Ｔ、Ａ１４４Ｖ、Ａ１４４Ｗ、Ｓ１４５Ａ、Ｓ１４５Ｃ、Ｓ１４５Ｄ、Ｓ１４５Ｅ、Ｓ１４５Ｆ、Ｓ１４５Ｇ、Ｓ１４５Ｈ、Ｓ１４５Ｉ、Ｓ１４５Ｌ、Ｓ１４５Ｍ、Ｓ１４５Ｑ、Ｓ１４５Ｒ、Ｓ１４５Ｔ、Ｓ１４５Ｖ、Ｓ１４５Ｗ、Ｓ１４５Ｙ、Ｇ１４６Ａ、Ｇ１４６Ｃ、Ｇ１４６Ｄ、Ｇ１４６Ｅ、Ｇ１４６Ｍ、Ｇ１４６Ｑ、Ｇ１４６Ｒ、Ｇ１４６Ｔ、Ｇ１４６Ｙ、Ａ１５３Ｓ、Ｇ１５４Ｌ、Ｇ１５４Ｐ、Ｇ１５４Ｔ、Ｅ１５６Ａ、Ｅ１５６Ｃ、Ｅ１５６Ｆ、Ｅ１５６Ｋ、Ｅ１５６Ｌ、Ｅ１５６Ｎ、Ｅ１５６Ｑ、Ｅ１５６Ｒ、Ｅ１５６Ｓ、Ｅ１５６Ｔ、Ｅ１５６Ｖ、Ｅ１５６Ｗ、Ｅ１５６Ｙ、Ｔ１５８Ａ、Ｔ１５８Ｄ、Ｔ１５８Ｅ、Ｔ１５８Ｇ、Ｔ１５８Ｈ、Ｔ１５８Ｉ、Ｔ１５８Ｋ、Ｔ１５８Ｌ、Ｔ１５８Ｍ、Ｔ１５８Ｎ、Ｔ１５８Ｑ、Ｔ１５８Ｓ、Ｔ１５８Ｖ、Ｔ１５８Ｙ、Ｓ１５９Ａ、Ｓ１５９Ｃ、Ｓ１５９Ｄ、Ｓ１５９Ｅ、Ｓ１５９Ｇ、Ｓ１５９Ｈ、Ｓ１５９Ｉ、Ｓ１５９Ｍ、Ｓ１５９Ｑ、Ｓ１５９Ｒ、Ｓ１５９Ｔ、Ｇ１６０Ｄ、Ｇ１６０Ｅ、Ｇ１６０Ｋ、Ｇ１６０Ｎ、Ｇ１６０Ｐ、Ｇ１６０Ｑ、Ｇ１６０Ｓ、Ｇ１６０Ｔ、Ｓ１６２Ａ、Ｓ１６２Ｃ、Ｓ１６２Ｅ、Ｓ１６２Ｈ、Ｓ１６２Ｋ、Ｓ１６２Ｌ、Ｓ１６２Ｍ、Ｓ１６２Ｎ、Ｓ１６２Ｑ、Ｓ１６２Ｒ、Ｓ１６２Ｔ、Ｓ１６２Ｖ、Ｓ１６３Ｇ、Ｓ１６３Ｐ、Ｙ１６７Ａ、Ｙ１６７Ｆ、Ｙ１６７Ｈ、Ｙ１６７Ｉ、Ｐ１６８Ｄ、Ｐ１６８Ｇ、Ｐ１６８Ｉ、Ｐ１６８Ｍ、Ｐ１６８Ｓ、Ｐ１６８Ｙ、Ｇ１６９Ａ、Ｇ１６９Ｅ、Ｇ１６９Ｆ、Ｇ１６９Ｈ、Ｇ１６９Ｍ、Ｇ１６９Ｎ、Ｇ１６９Ｒ、Ｇ１６９Ｔ、Ｇ１６９Ｖ、Ｇ１６９
Ｙ、Ｋ１７０Ａ、Ｋ１７０Ｃ、Ｋ１７０Ｆ、Ｋ１７０Ｇ、Ｋ１７０Ｈ、Ｋ１７０Ｒ、Ｋ１７０Ｖ、Ｋ１７０Ｗ、Ｋ１７０Ｙ、Ｙ１７１Ｇ、Ｙ１７１Ｋ、Ｙ１７１Ｐ、Ｐ１７２Ａ、Ｐ１７２Ｃ、Ｐ１７２Ｅ、Ｐ１７２Ｋ、Ｐ１７２Ｌ、Ｐ１７２Ｍ、Ｐ１７２Ｎ、Ｐ１７２Ｑ、Ｐ１７２Ｒ、Ｐ１７２Ｓ、Ｐ１７２Ｔ、Ｐ１７２Ｖ、Ｐ１７２Ｙ、Ｓ１７３Ａ、Ｓ１７３Ｃ、Ｓ１７３Ｅ、Ｓ１７３Ｉ、Ｓ１７３Ｔ、Ｓ１７３Ｖ、Ｖ１７４Ｃ、Ｖ１７４Ｆ、Ｖ１７４Ｈ、Ｖ１７４Ｔ、Ｉ１７５Ｇ、Ｉ１７５Ｌ、Ｉ１７５Ｍ、Ｉ１７５Ｒ、Ｉ１７５Ｔ、Ｉ１７５Ｖ、Ａ１７６Ｃ、Ａ１７６Ｅ、Ａ１７６Ｆ、Ａ１７６Ｋ、Ａ１７６Ｍ、Ａ１７６Ｓ、Ａ１７６Ｙ、Ａ１７９Ｇ、Ｖ１８０Ａ、Ｖ１８０Ｃ、Ｖ１８０Ｌ、Ｖ１８０Ｎ、Ｖ１８０Ｓ、Ｖ１８０Ｔ、Ｄ１８１Ｃ、Ｄ１８１Ｅ、Ｄ１８１Ｇ、Ｄ１８１Ｈ、Ｄ１８１Ｍ、Ｄ１８１Ｎ、Ｄ１８１Ｓ、Ｄ１８１Ｔ、Ｄ１８１Ｗ、Ｓ１８２Ａ、Ｓ１８２Ｃ、Ｓ１８２Ｄ、Ｓ１８２Ｆ、Ｓ１８２Ｇ、Ｓ１８２Ｈ、Ｓ１８２Ｉ、Ｓ１８２Ｋ、Ｓ１８２Ｍ、Ｓ１８２Ｐ、Ｓ１８２Ｒ、Ｓ１８２Ｖ、Ｓ１８２Ｙ、Ｓ１８３Ａ、Ｓ１８３Ｃ、Ｓ１８３Ｅ、Ｓ１８３Ｆ、Ｓ１８３Ｇ、Ｓ１８３Ｈ、Ｓ１８３Ｉ、Ｓ１８３Ｋ、Ｓ１８３Ｌ、Ｓ１８３Ｍ、Ｓ１８３Ｎ、Ｓ１８３Ｑ、Ｓ１８３Ｒ、Ｓ１８３Ｔ、Ｓ１８３Ｖ、Ｓ１８３Ｗ、Ｓ１８３Ｙ、Ｎ１８４Ｃ、Ｎ１８４Ｄ、Ｎ１８４Ｅ、Ｎ１８４Ｇ、Ｎ１８４Ｈ、Ｎ１８４Ｋ、Ｎ１８４Ｌ、Ｎ１８４Ｍ、Ｎ１８４Ｑ、Ｎ１８４Ｓ、Ｎ１８４Ｔ、Ｎ１８４Ｖ、Ｎ１８４Ｗ、Ｑ１８５Ａ、Ｑ１８５Ｃ、Ｑ１８５Ｅ、Ｑ１８５Ｆ、Ｑ１８５Ｇ、Ｑ１８５Ｈ、Ｑ１８５Ｉ、Ｑ１８５Ｌ、Ｑ１８５Ｍ、Ｑ１８５Ｎ、Ｑ１８５Ｓ、Ｑ１８５Ｔ、Ｑ１８５Ｖ、Ｑ１８５Ｗ、Ｒ１８６Ｉ、Ｒ１８６Ｌ、Ｒ１８６Ｗ、Ａ１８７Ｃ、Ａ１８７Ｄ、Ａ１８７Ｅ、Ａ１８７Ｆ、Ａ１８７Ｇ、Ａ１８７Ｐ、Ａ１８７Ｓ、Ａ１８７Ｗ、Ａ１８７Ｙ、Ｓ１８８Ａ、Ｓ１８８Ｃ、Ｓ１８８Ｄ、Ｓ１８８Ｅ、Ｓ１８８Ｆ、Ｓ１８８Ｇ、Ｓ１８８Ｈ、Ｓ１８８Ｉ、Ｓ１８８Ｋ、Ｓ１８８Ｌ、Ｓ１８８Ｍ、Ｓ１８８Ｐ、Ｓ１８８Ｑ、Ｓ１８８Ｔ、Ｓ１８８Ｖ、Ｓ１８８Ｗ、Ｓ１８８Ｙ、Ｓ１９０Ｆ、Ｓ１９０Ｈ、Ｓ１９０Ｉ、Ｓ１９０Ｋ、Ｓ１９１Ｇ、Ｓ１９１Ｎ、Ｓ１９１Ｐ、Ｖ１９２Ａ、Ｖ１９２Ｓ、Ｖ１９２Ｔ、Ｖ１９２Ｙ、Ｇ１９３Ｆ、Ｇ１９３Ｈ、Ｇ１９３Ｉ、Ｇ１９３Ｎ、Ｇ１９３Ｐ、Ｇ１
９３Ｒ、Ｇ１９３Ｔ、Ｐ１９４Ｃ、Ｐ１９４Ｅ、Ｐ１９４Ｈ、Ｐ１９４Ｉ、Ｐ１９４Ｋ、Ｐ１９４Ｌ、Ｐ１９４Ｍ、Ｐ１９４Ｑ、Ｐ１９４Ｔ、Ｐ１９４Ｖ、Ｐ１９４Ｗ、Ｌ１９６Ａ、Ｍ１９９Ｐ、Ｍ１９９Ｓ、Ａ２００Ｃ、Ａ２００Ｇ、Ａ２００Ｋ、Ａ２００Ｙ、Ｇ２０２Ｄ、Ｇ２０２Ｅ、Ｇ２０２Ｆ、Ｇ２０２Ｌ、Ｇ２０２Ｐ、Ｇ２０２Ｖ、Ｇ２０２Ｙ、Ｑ２０６Ａ、Ｑ２０６Ｄ、Ｑ２０６Ｅ、Ｑ２０６Ｆ、Ｑ２０６Ｇ、Ｑ２０６Ｈ、Ｑ２０６Ｉ、Ｑ２０６Ｌ、Ｑ２０６Ｍ、Ｑ２０６Ｎ、Ｑ２０６Ｐ、Ｑ２０６Ｒ、Ｑ２０６Ｓ、Ｑ２０６Ｔ、Ｑ２０６Ｖ、Ｑ２０６Ｗ、Ｑ２０６Ｙ、Ｓ２０７Ｄ、Ｓ２０７Ｅ、Ｓ２０７Ｋ、Ｓ２０７Ｑ、Ｓ２０７Ｔ、Ｓ２０７Ｖ、Ｐ２１０Ａ、Ｐ２１０Ｃ、Ｐ２１０Ｓ、Ｐ２１０Ｔ、Ｎ２１２Ａ、Ｎ２１２Ｃ、Ｎ２１２Ｅ、Ｎ２１２Ｆ、Ｎ２１２Ｇ、Ｎ２１２Ｈ、Ｎ２１２Ｋ、Ｎ２１２Ｌ、Ｎ２１２Ｍ、Ｎ２１２Ｐ、Ｎ２１２Ｑ、Ｎ２１２Ｒ、Ｎ２１２Ｓ、Ｎ２１２Ｖ、Ｋ２１３Ｃ、Ｋ２１３Ｄ、Ｋ２１３Ｅ、Ｋ２１３Ｆ、Ｋ２１３Ｈ、Ｋ２１３Ｉ、Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｍ、Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｑ、Ｋ２１３Ｒ、Ｋ２１３Ｓ、Ｋ２１３Ｔ、Ｋ２１３Ｖ、Ｋ２１３Ｙ、Ｙ２１４Ｗ、Ｇ２１５Ａ、Ｇ２１５Ｃ、Ｇ２１５Ｄ、Ｇ２１５Ｅ、Ｇ２１５Ｉ、Ｇ２１５Ｍ、Ｇ２１５Ｎ、Ｇ２１５Ｑ、Ｇ２１５Ｓ、Ｇ２１５Ｔ、Ｇ２１５Ｖ、Ａ２１６Ｃ、Ａ２１６Ｄ、Ａ２１６Ｅ、Ａ２１６Ｇ、Ａ２１６Ｋ、Ａ２１６Ｌ、Ａ２１６Ｍ、Ａ２１６Ｎ、Ａ２１６Ｐ、Ａ２１６Ｑ、Ａ２１６Ｒ、Ａ２１６Ｓ、Ａ２１６Ｖ、Ｙ２１７Ａ、Ｙ２１７Ｃ、Ｙ２１７Ｄ、Ｙ２１７Ｅ、Ｙ２１７Ｆ、Ｙ２１７Ｇ、Ｙ２１７Ｈ、Ｙ２１７Ｉ、Ｙ２１７Ｋ、Ｙ２１７Ｌ、Ｙ２１７Ｍ、Ｙ２１７Ｎ、Ｙ２１７Ｑ、Ｙ２１７Ｒ、Ｙ２１７Ｓ、Ｙ２１７Ｔ、Ｙ２１７Ｖ、Ｙ２１７Ｗ、Ｎ２１８Ａ、Ｎ２１８Ｃ、Ｎ２１８Ｅ、Ｎ２１８Ｆ、Ｎ２１８Ｇ、Ｎ２１８Ｈ、Ｎ２１８Ｋ、Ｎ２１８Ｍ、Ｎ２１８Ｒ、Ｎ２１８Ｓ、Ｎ２１８Ｔ、Ｎ２１８Ｗ、Ｎ２１８Ｙ、Ｇ２１９Ａ、Ｇ２１９Ｃ、Ｇ２１９Ｄ、Ｇ２１９Ｈ、Ｇ２１９Ｉ、Ｇ２１９Ｍ、Ｇ２１９Ｐ、Ｇ２１９Ｑ、Ｇ２１９Ｒ、Ｇ２１９Ｔ、Ｇ２１９Ｖ、Ｇ２１９Ｗ、Ｔ２２０Ｄ、Ｔ２２０Ｅ、Ｔ２２０Ｆ、Ｔ２２０Ｇ、Ｔ２２０Ｋ、Ｔ２２０Ｍ、Ｔ２２０Ｓ、Ｔ２２０Ｙ、Ａ２２３Ｅ、Ａ２２３Ｆ、Ａ２２３Ｌ、Ａ２２３Ｍ、Ａ２２３Ｒ、Ａ２２３Ｓ、Ａ２２３Ｖ、Ａ２２３Ｗ、
Ａ２２３Ｙ、Ｓ２２４Ａ、Ｓ２２４Ｃ、Ｓ２２４Ｆ、Ｓ２２４Ｇ、Ｓ２２４Ｈ、Ｓ２２４Ｍ、Ｓ２２４Ｎ、Ｓ２２４Ｑ、Ｓ２２４Ｒ、Ｓ２２４Ｔ、Ｐ２２５Ａ、Ｐ２２５Ｃ、Ｐ２２５Ｆ、Ｐ２２５Ｇ、Ｐ２２５Ｈ、Ｐ２２５Ｉ、Ｐ２２５Ｋ、Ｐ２２５Ｌ、Ｐ２２５Ｍ、Ｐ２２５Ｒ、Ｐ２２５Ｔ、Ｐ２２５Ｖ、Ｐ２２５Ｙ、Ａ２２８Ｐ、Ａ２２８Ｒ、Ａ２２８Ｓ、Ａ２２８Ｔ、Ａ２２８Ｗ、Ｇ２２９Ａ、Ｇ２２９Ｈ、Ｇ２２９Ｉ、Ｇ２２９Ｓ、Ａ２３０Ｃ、Ａ２３０Ｅ、Ａ２３０Ｇ、Ａ２３０Ｑ、Ａ２３０Ｒ、Ａ２３０Ｓ、Ａ２３０Ｔ、Ａ２３０Ｖ、Ａ２３１Ｃ、Ａ２３１Ｉ、Ａ２３１Ｐ、Ａ２３１Ｒ、Ｉ２３４Ａ、Ｉ２３４Ｃ、Ｉ２３４Ｌ、Ｉ２３４Ｍ、Ｉ２３４Ｎ、Ｉ２３４Ｐ、Ｉ２３４Ｑ、Ｉ２３４Ｓ、Ｉ２３４Ｔ、Ｉ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｃ、Ｌ２３５Ｇ、Ｌ２３５Ｉ、Ｌ２３５Ｋ、Ｌ２３５Ｍ、Ｌ２３５Ｑ、Ｌ２３５Ｒ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｔ、Ｌ２３５Ｖ、Ｌ２３５Ｗ、Ｌ２３５Ｙ、Ｓ２３６Ａ、Ｓ２３６Ｃ、Ｓ２３６Ｄ、Ｓ２３６Ｅ、Ｓ２３６Ｇ、Ｓ２３６Ｈ、Ｓ２３６Ｎ、Ｓ２３６Ｑ、Ｓ２３６Ｔ、Ｓ２３６Ｖ、Ｓ２３６Ｙ、Ｋ２３７Ａ、Ｋ２３７Ｅ、Ｋ２３７Ｆ、Ｋ２３７Ｇ、Ｋ２３７Ｈ、Ｋ２３７Ｉ、Ｋ２３７Ｌ、Ｋ２３７Ｍ、Ｋ２３７Ｎ、Ｋ２３７Ｑ、Ｋ２３７Ｒ、Ｋ２３７Ｓ、Ｋ２３７Ｔ、Ｋ２３７Ｖ、Ｋ２３７Ｗ、Ｋ２３７Ｙ、Ｈ２３８Ｃ、Ｈ２３８Ｄ、Ｈ２３８Ｅ、Ｈ２３８Ｆ、Ｈ２３８Ｍ、Ｈ２３８Ｒ、Ｐ２３９Ｃ、Ｐ２３９Ｄ、Ｐ２３９Ｅ、Ｐ２３９Ｆ、Ｐ２３９Ｈ、Ｐ２３９Ｌ、Ｐ２３９Ｍ、Ｐ２３９Ｎ、Ｐ２３９Ｑ、Ｐ２３９Ｒ、Ｐ２３９Ｓ、Ｐ２３９Ｔ、Ｐ２３９Ｖ、Ｐ２３９Ｗ、Ｐ２３９Ｙ、Ｎ２４０Ａ、Ｎ２４０Ｃ、Ｎ２４０Ｄ、Ｎ２４０Ｆ、Ｎ２４０Ｇ、Ｎ２４０Ｋ、Ｎ２４０Ｌ、Ｎ２４０Ｑ、Ｎ２４０Ｒ、Ｎ２４０Ｓ、Ｎ２４０Ｔ、Ｎ２４０Ｖ、Ｎ２４０Ｗ、Ｎ２４０Ｙ、Ｗ２４１Ａ、Ｗ２４１Ｆ、Ｗ２４１Ｇ、Ｗ２４１Ｈ、Ｗ２４１Ｉ、Ｗ２４１Ｋ、Ｗ２４１Ｍ、Ｗ２４１Ｑ、Ｗ２４１Ｔ、Ｗ２４１Ｖ、Ｔ２４２Ａ、Ｔ２４２Ｅ、Ｔ２４２Ｆ、Ｔ２４２Ｇ、Ｔ２４２Ｋ、Ｔ２４２Ｍ、Ｔ２４２Ｎ、Ｔ２４２Ｐ、Ｔ２４２Ｒ、Ｔ２４２Ｓ、Ｔ２４２Ｗ、Ｔ２４２Ｙ、Ｎ２４３Ｃ、Ｎ２４３Ｅ、Ｎ２４３Ｆ、Ｎ２４３Ｇ、Ｎ２４３Ｉ、Ｎ２４３Ｑ、Ｎ２４３Ｓ、Ｎ２４３Ｔ、Ｎ２４３Ｖ、Ｎ２４３Ｗ、Ｎ２４３Ｙ、Ｔ２４４Ａ、Ｔ２４４Ｄ、Ｔ２４４Ｆ、Ｔ２４４
Ｇ、Ｔ２４４Ｈ、Ｔ２４４Ｋ、Ｔ２４４Ｌ、Ｔ２４４Ｍ、Ｔ２４４Ｎ、Ｔ２４４Ｐ、Ｔ２４４Ｑ、Ｔ２４４Ｒ、Ｔ２４４Ｓ、Ｔ２４４Ｖ、Ｔ２４４Ｗ、Ｔ２４４Ｙ、Ｑ２４５Ａ、Ｑ２４５Ｃ、Ｑ２４５Ｅ、Ｑ２４５Ｈ、Ｑ２４５Ｉ、Ｑ２４５Ｋ、Ｑ２４５Ｌ、Ｑ２４５Ｍ、Ｑ２４５Ｒ、Ｑ２４５Ｔ、Ｑ２４５Ｖ、Ｑ２４５Ｙ、Ｒ２４７Ｗ、Ｓ２４８Ａ、Ｓ２４８Ｅ、Ｓ２４８Ｆ、Ｓ２４８Ｇ、Ｓ２４８Ｈ、Ｓ２４８Ｉ、Ｓ２４８Ｌ、Ｓ２４８Ｍ、Ｓ２４８Ｎ、Ｓ２４８Ｑ、Ｓ２４８Ｒ、Ｓ２４８Ｔ、Ｓ２４８Ｖ、Ｓ２４８Ｗ、Ｓ２４８Ｙ、Ｓ２４９Ｃ、Ｓ２４９Ｄ、Ｓ２４９Ｈ、Ｓ２４９Ｉ、Ｓ２４９Ｋ、Ｓ２４９Ｌ、Ｓ２４９Ｍ、Ｓ２４９Ｎ、Ｓ２４９Ｑ、Ｓ２４９Ｒ、Ｓ２４９Ｔ、Ｓ２４９Ｖ、Ｓ２４９Ｗ、Ｓ２４９Ｙ、Ｌ２５０Ｆ、Ｌ２５０Ｈ、Ｌ２５０Ｉ、Ｌ２５０Ｍ、Ｌ２５０Ｔ、Ｌ２５０Ｖ、Ｅ２５１Ａ、Ｅ２５１Ｔ、Ｅ２５１Ｗ、Ｎ２５２Ａ、Ｎ２５２Ｃ、Ｎ２５２Ｅ、Ｎ２５２Ｇ、Ｎ２５２Ｈ、Ｎ２５２Ｉ、Ｎ２５２Ｌ、Ｎ２５２Ｍ、Ｎ２５２Ｑ、Ｎ２５２Ｒ、Ｎ２５２Ｓ、Ｎ２５２Ｔ、Ｎ２５２Ｖ、Ｎ２５２Ｙ、Ｔ２５３Ａ、Ｔ２５３Ｃ、Ｔ２５３Ｅ、Ｔ２５３Ｇ、Ｔ２５３Ｈ、Ｔ２５３Ｋ、Ｔ２５３Ｍ、Ｔ２５３Ｓ、Ｔ２５３Ｖ、Ｔ２５４Ａ、Ｔ２５４Ｃ、Ｔ２５４Ｌ、Ｔ２５４Ｍ、Ｔ２５４Ｒ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５４Ｖ、Ｔ２５５Ａ、Ｔ２５５Ｄ、Ｔ２５５Ｅ、Ｔ２５５Ｆ、Ｔ２５５Ｇ、Ｔ２５５Ｈ、Ｔ２５５Ｉ、Ｔ２５５Ｋ、Ｔ２５５Ｌ、Ｔ２５５Ｍ、Ｔ２５５Ｒ、Ｔ２５５Ｓ、Ｔ２５５Ｖ、Ｋ２５６Ａ、Ｋ２５６Ｃ、Ｋ２５６Ｄ、Ｋ２５６Ｅ、Ｋ２５６Ｆ、Ｋ２５６Ｈ、Ｋ２５６Ｉ、Ｋ２５６Ｌ、Ｋ２５６Ｍ、Ｋ２５６Ｎ、Ｋ２５６Ｐ、Ｋ２５６Ｑ、Ｋ２５６Ｒ、Ｋ２５６Ｓ、Ｋ２５６Ｔ、Ｋ２５６Ｖ、Ｋ２５６Ｗ、Ｋ２５６Ｙ、Ｌ２５７Ａ、Ｌ２５７Ｃ、Ｌ２５７Ｆ、Ｌ２５７Ｇ、Ｌ２５７Ｈ、Ｌ２５７Ｉ、Ｌ２５７Ｋ、Ｌ２５７Ｍ、Ｌ２５７Ｎ、Ｌ２５７Ｒ、Ｌ２５７Ｔ、Ｌ２５７Ｖ、Ｌ２５７Ｗ、Ｌ２５７Ｙ、Ｇ２５８Ｑ、Ｄ２５９Ａ、Ｄ２５９Ｅ、Ｄ２５９Ｆ、Ｄ２５９Ｇ、Ｄ２５９Ｌ、Ｄ２５９Ｎ、Ｄ２５９Ｐ、Ｄ２５９Ｑ、Ｄ２５９Ｒ、Ｄ２５９Ｓ、Ｄ２５９Ｔ、Ｄ２５９Ｖ、Ｄ２５９Ｗ、Ｄ２５９Ｙ、Ｓ２６０Ａ、Ｓ２６０Ｃ、Ｓ２６０Ｄ、Ｓ２６０Ｅ、Ｓ２６０Ｆ、Ｓ２６０Ｇ、Ｓ２６０Ｈ、Ｓ２６０Ｌ、Ｓ２６０Ｍ、Ｓ２６０Ｎ、Ｓ２６０Ｐ、Ｓ２６０Ｒ、Ｓ２６０Ｖ、Ｓ２
６０Ｗ、Ｓ２６０Ｙ、Ｆ２６１Ｈ、Ｆ２６１Ｗ、Ｙ２６２Ａ、Ｙ２６２Ｃ、Ｙ２６２Ｅ、Ｙ２６２Ｆ、Ｙ２６２Ｌ、Ｙ２６２Ｍ、Ｙ２６２Ｎ、Ｙ２６３Ｆ、Ｙ２６３Ｍ、Ｙ２６３Ｔ、Ｇ２６４Ｆ、Ｇ２６４Ｉ、Ｇ２６４Ｌ、Ｋ２６５Ａ、Ｋ２６５Ｃ、Ｋ２６５Ｅ、Ｋ２６５Ｇ、Ｋ２６５Ｈ、Ｋ２６５Ｌ、Ｋ２６５Ｍ、Ｋ２６５Ｎ、Ｋ２６５Ｑ、Ｋ２６５Ｒ、Ｋ２６５Ｓ、Ｋ２６５Ｗ、Ｋ２６５Ｙ、Ｇ２６６Ｃ、Ｇ２６６Ｆ、Ｇ２６６Ｌ、Ｇ２６６Ｍ、Ｇ２６６Ｐ、Ｇ２６６Ｒ、Ｇ２６６Ｖ、Ｇ２６６Ｗ、Ｇ２６６Ｙ、Ｌ２６７Ａ、Ｌ２６７Ｃ、Ｌ２６７Ｅ、Ｌ２６７Ｇ、Ｌ２６７Ｈ、Ｌ２６７Ｉ、Ｌ２６７Ｍ、Ｌ２６７Ｎ、Ｌ２６７Ｑ、Ｌ２６７Ｔ、Ｌ２６７Ｖ、Ｉ２６８Ａ、Ｉ２６８Ｃ、Ｉ２６８Ｋ、Ｉ２６８Ｌ、Ｉ２６８Ｍ、Ｉ２６８Ｐ、Ｉ２６８Ｒ、Ｉ２６８Ｖ、Ｎ２６９Ｄ、Ｎ２６９Ｅ、Ｎ２６９Ｋ、Ｎ２６９Ｌ、Ｎ２６９Ｐ、Ｎ２６９Ｑ、Ｎ２６９Ｓ、Ｑ２７１Ａ、Ｑ２７１Ｃ、Ｑ２７１Ｄ、Ｑ２７１Ｅ、Ｑ２７１Ｆ、Ｑ２７１Ｇ、Ｑ２７１Ｈ、Ｑ２７１Ｉ、Ｑ２７１Ｋ、Ｑ２７１Ｌ、Ｑ２７１Ｍ、Ｑ２７１Ｎ、Ｑ２７１Ｐ、Ｑ２７１Ｒ、Ｑ２７１Ｓ、Ｑ２７１Ｔ、Ｑ２７１Ｖ、Ｑ２７１Ｗ、Ｑ２７１Ｙ、Ａ２７２Ｅ、Ａ２７２Ｆ、Ａ２７２Ｇ、Ａ２７２Ｈ、Ａ２７２Ｌ、Ａ２７２Ｍ、Ａ２７２Ｎ、Ａ２７２Ｑ、Ａ２７２Ｒ、Ａ２７２Ｓ、Ａ２７２Ｔ、Ａ２７２Ｖ、Ａ２７２Ｗ、Ａ２７２Ｙ、Ａ２７４Ｃ、Ａ２７４Ｄ、Ａ２７４Ｆ、Ａ２７４Ｇ、Ａ２７４Ｈ、Ａ２７４Ｉ、Ａ２７４Ｋ、Ａ２７４Ｌ、Ａ２７４Ｑ、Ａ２７４Ｓ、Ａ２７４Ｔ及びＡ２７４Ｖの一以上を含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項６】
前記置換が、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｅ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｑ、Ｓ１０１Ｅ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４５Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｆ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４５Ｖ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｅ、Ａ０９２Ｇ−Ａ１１４Ｇ、Ｙ０２１Ｗ−Ｓ１０１Ｅ、Ｖ２６Ｑ−Ｋ２１３Ｉ及びＹ０２１Ｈ−Ｓ１０１Ｎから選ばれる置換の組み合わせを含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項７】
前記置換が、Ｓ１０１Ｎ−Ｋ２１３Ｉ、Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１１９Ｈ、Ｋ２１３Ｌ、Ｍ１１９Ｎ−Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｅ、Ｍ１１９Ｎ−Ｋ２１３Ｉ、Ｋ２１３Ｎ−Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｈ−Ｋ２１３Ｎ、Ｓ１０１Ｐ−Ｋ２１３Ｎ、Ｍ１１９Ｈ−Ｙ２１７Ｑ、Ｋ２１３Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｆ−Ｋ２１３Ｌ、Ｙ２１７Ｑ、Ｍ１１９Ｆ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４８Ｅ−Ｋ２１３Ｌ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｎ、Ｖ０２６Ｎ−Ｋ２１３Ｌ、Ｖ０２６Ｎ−Ｋ２１３Ｌ、Ｖ０２６Ｙ−Ｋ２１３Ｎ、Ａ０４８Ｄ−Ｋ２１３Ｎ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｎ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｎ、Ｖ１４７Ｄ−Ｋ２１３Ｌ、Ｋ２１３Ｉ、Ａ０４８Ｅ−Ｋ２１３Ｌ、Ａ０４８Ｄ−Ｋ２１３Ｎ、Ｋ２１３Ｉ、Ａ０４８Ｈ−Ｋ２１３Ｎ、Ｖ１４７Ｄ−Ｋ２１３Ｎ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｑ、Ａ０４５Ｖ−Ｙ２１７Ｌ、Ｓ１０１Ｅ−Ｙ２１７Ｌ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｅ、Ａ０４５Ｉ−Ｙ２１７Ｑ、Ｙ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｌ及びＹ０２１Ｈ−Ｙ２１７Ｅから選ばれる組み合わせを含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項８】
前記置換が、Ｓ１０１Ｎ−Ｍ１１９Ｈ、Ｙ２１７Ｌ、Ｍ１１９Ｎ−Ｋ２１３Ｎ、Ｓ１０１Ｅ−Ｙ２１７Ｌ及びＡ０４５Ｉ−Ｙ２１７Ｑから選ばれる組み合わせを含み、前記位置が配列番号２で示すＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’のアミノ酸配列の位置に対応する、請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体。
【請求項９】
請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体をコードする単離核酸。
【請求項１０】
請求項９に記載の核酸を含む発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１０に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１に記載の単離ズブチリシン変異体を含む洗浄組成物。
【請求項１３】
前記洗浄組成物が洗濯用洗剤である、請求項１２に記載の洗浄組成物。
【請求項１４】
前記洗濯用洗剤が、冷水用洗剤、低ｐＨ用洗剤または小型洗剤である、請求項１３に記載の洗濯用洗剤。
【請求項１５】
バチルス・ズブチリシンのズブチリシン変異体を生産する方法であって、
ａ）請求項１のズブチリシン変異体をコードする核酸を含む発現ベクターで宿主細胞を形質転換する工程、及び
ｂ）ズブチリシン変異体の生産に適した条件下で、前記形質転換された宿主細胞を培養し、ズブチリシン変異体を生産する工程
を含む、前記方法。
【請求項１６】
生産されたズブチリシン変異体を採取する工程をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記宿主細胞がバチルス種である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記バチルス種がＢ．ズブチリスである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
繊維を含む表面及び／または物を、請求項１−８のいずれかに記載の単離ズブチリシン変異体を含む洗浄組成物と接触させる工程を含む、洗浄方法。
【請求項２０】
プロテアーゼ工学に用いられる方法であって、
ａ）前記プロテアーゼの同一のアミノ酸位置で、別個の置換を有する複数のプロテアーゼ変異体を各々含む、複数の部位評価ライブラリー（ＳＥＬ）を提供する工程、
ｂ）目的の特性試験で、前記ＳＥＬの前記プロテアーゼ変異体及び標準プロテアーゼを試験する工程、
ｃ）前記試験のために前記プロテアーゼ変異体の各々の性能指数（ＰＩ）を測定する工程、
ｄ）非制限的な位置としての二以上の前記アミノ酸位置を同定する工程であって、二の前記ＳＥＬの各々の少なくとも一の前記複数のプロテアーゼ変異体が、０．５より高いＰＩを有する工程、及び
ｆ）二以上の前記非制限的な位置での置換を各々含む複数の多置換プロテアーゼ変異体を含む多重変異ライブラリーを提供する工程
を含む、前記方法。
【請求項２１】
前記試験が、染み抜きアッセイ（微小布見本）、ＬＡＳ安定性、ＥＤＴＡ安定性、洗剤安定性アッセイ及び比活性度アッセイから成る群より選ばれる二以上の異なるアッセイを含む、請求項２０に記載の前記方法。
【請求項２２】
前記プロテアーゼが細菌性ズブチリシンである、請求項２０及び２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
バチルス・ズブチリシンの多置換ズブチリシン変異体を生産する方法であって、
ａ）第１特性の第１試験及び第２特性の第２試験で複数の単置換ズブチリシン変異体を試験する工程であって、親ズブチリシンの前記特性に各試験で１．０の値が与えられ、好ましい第１または第２特性が１．０より高い値を有し、過度に好ましくない第１または第２特性が約０．８０未満の値を有するか、またはいくつかの好ましい実施態様において、約０．６０未満の値を有する前記工程、
ｂ）好ましい第１特性に関連し、過度に好ましくない第２特性に関連しない、少なくとも一の単置換ズブチリシン変異体での置換を同定する工程、
ｃ）好ましい第２特性に関連し、過度に好ましくない第１特性に関連しない、少なくとも一の単置換ズブチリシン変異体での置換を同定する工程、
ｄ）前の工程の前記置換をズブチリシン内に導入し、多置換ズブチリシン変異体を得る工程
を含む、前記方法。
【請求項２４】
第１試験及び第２試験で多置換ズブチリシン変異体を試験する工程であって、改良されたズブチリシン変異体が、前記第１試験及び第２試験の両方で１．０より高い値に達するか、または第１試験で１．０より高い値であって、第２試験で０．８０〜１．０の値に達する前記工程をさらに含む、請求項２３に記載の前記方法。
【請求項２５】
前記改良されたズブチリシン変異体を生産する工程をさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記第１特性及び第２特性が負に相関する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
好ましい第１特性または第２特性が約１．２より高い値を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
過度に好ましくない第１特性または第２特性が、約０．４０未満の値を有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１特性が安定性であり、前記第２特性が洗浄性能である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
前記安定性が洗剤中の安定性を含み、前記洗浄性能が洗剤中の血液／ミルク／インク（ＢＭＩ）洗浄性能を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
５〜１２．０のｐＨを有する粉末洗剤組成物または液体洗剤組成物内で洗浄性能が試験される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
前記親細菌性ズブチリシンが、配列番号２で示すアミノ酸配列を有するＢ．アミロリケファシエンス・ズブチリシンＢＰＮ’の野生型成熟形である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
前記位置が、約５０％より高い溶媒接触可能表面（ＳＡＳ）を有する親ズブチリシン内である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
一以上の前記親ズブチリシン内の位置が、約６５％より高い溶媒接触可能表面（ＳＡＳ）を有する位置である、請求項３３に記載の方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図６】
【公表番号】特表２０１１−５２２５３９（Ｐ２０１１−５２２５３９Ａ）
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１２６２１（Ｐ２０１１−５１２６２１）
【出願日】平成２１年６月３日（２００９．６．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４６１５６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４９２００
【国際公開日】平成２１年１２月１０日（２００９．１２．１０）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月３日（２００９．６．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４６１５６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４９２００
【国際公開日】平成２１年１２月１０日（２００９．１２．１０）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
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