抗炎症シクロオキシゲナーゼ−２選択的インヒビター
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）酵素を強力にかつ選択的に阻害する新規抗炎症医薬組成物が開示される。製剤は、ウイリアム・ハーベイの全血アッセイ（ＷＨＭＡ）で試験して決定されるＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１濃度によって定義されるＣＯＸ−２選択性を発揮し、その範囲は約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を含む。そのような組成物は、場合により高レベルのα酸及び低レベルのβ酸、多少のフラボノイド又はポリフェノール化合物を含んでいてもよく、ほとんど又は全くエッセンシャルオイルを含有しない。そのような組成物は、炎症性疼痛として表され、又はＣＯＸ−２酵素によって悪影響を受ける病気の治療に有用である。前記組成物は、変形性関節症及び関節リウマチの治療に特に有益であり、少ない胃の副作用で慢性疼痛に用いることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症組成物及び温血動物の炎症を軽減させる方法に関する。より詳細には、本発明は、炎症を軽減させるための特定の組成物特性を有するホップ抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性疼痛のメカニズムに関する研究は、炎症に関連する生化学経路の発見をもたらした。そのような慢性炎症性疼痛の１例は、変形性関節症である。この経路の解明は、痛みと炎症を伴う、シクロオキシゲナーゼ酵素によって産生される炎症性サイトカインであるプロスタグランジンの関連を導いた。第１世代の抗炎症鎮痛剤は非ステロイド系抗炎症薬又はＮＳＡＩＤとして分類された。アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、及びインドメタシンのような一般のＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ酵素を阻害し、それによりプロスタグランジンＥ−２の産生を低下させることによって炎症を軽減させる。多くの新規ＮＳＡＩＤが過去３０年にわたって開発されておいｒ、その多くは処方薬のみで利用可能である。
【０００３】
現在ＣＯＸ−２と呼ばれるシクロオキシゲナーゼ酵素の第２形態の出現まで、作用メカニズム及びその効果に関し、種々のＮＳＡＩＤのあいだで典型的には区別されていなかった。典型的には、疼痛寛解の規模、又はＣＯＸ酵素の阻害効能のみが重要であると考えられていた。しかしながら、慢性炎症性疼痛を患う患者のＮＳＡＩＤの使用による副作用が出現した。主な副作用は胃腸毒性であり、それは胃粘膜びらん又は胃の保護粘膜層のびらんの形態で現れる。９０年代前半まで、変形性関節症及び関節リウマチの発生率が増加したため、この副作用は顕著になり、米国だけで１年に１６，５００人を越える死者をもたらした。Ｗｏｌｆ，Ｍら、非ステロイド系抗炎症薬の胃腸毒性、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．３４０、Ｎｏ．２４、１８８８−１８９９（１９９９）によるこれに関する総説記事は、本明細書にその全体が援用される。この記事によれば、１年で、ＮＳＡＩＤを摂取している関節リウマチ患者１，０００人あたり１３人が重大な胃腸合併症を有する。国立健康統計センター、並びに関節炎、リウマチ及び加齢の医薬情報システムのデータによれば、関節リウマチ又は変形性関節症を患う患者のＮＳＡＩＤ毒性による年間死亡者数（１９９７）はアメリカにおける死亡原因の第１５位である。この数字はＡＩＤＳによる死亡率（１６，６８５人）と類似しており、白血病による死亡（２０，１９７人）よりわずかに少ないのみであるが、多発性骨髄腫、喘息、子宮頚癌、又はホジキン病による死亡者数よりも顕著に多い。
【０００４】
多くのＮＳＡＩＤが、よりＣＯＸ−１型酵素に選択的であるが、それらはＣＯＸ−２型をもさまざまな程度で阻害する。インドメタシンのようなある種のＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２をある程度減少させる。驚くべきことに、ＮＳＡＩＤはＣＯＸ−２を誘導し、又はアップレギュレーションすることもできる。
【０００５】
ＮＳＡＩＤが胃粘膜びらんを引き起こし、急速にＣＯＸ−２を誘導する可能性は、ラットの胃でＣＯＸ−２がアスピリン又はインドメタシンの投与後１時間以内に誘導された動物実験の観察データから具体的に示すことができる。ＮＳＡＩＤの短期投与も長期投与も、内視鏡検査で証明されるように、胃粘膜びらんを生ずる。長期研究は、少なくとも３カ月のＮＳＡＩＤ摂取として定義されるが、通常は３〜６カ月にわたって行われる。
【０００６】
９０年代後半に出現した新規クラスの処方薬は、ＣＯＸ−２インヒビターと呼ばれる。このクラスで最初に米国ＦＤＡによって認可された２つの化合物はセレコキシブ及びロフェコキシブである。これら薬物はＣＯＸ−２を阻害し、ＣＯＸ−１に対してはほとんど又は全く作用せず、他のＮＳＡＩＤと同等の疼痛寛解を生ずるほど十分強力である。これらの化合物はＮＳＡＩＤ鎮痛剤よりも有効ではないが、典型的には胃腸毒性が軽減される。しかしながら、この分野における改善は依然として必要である。
【０００７】
ＣＯＸ−２インヒビターの市場への出現により、組成物及び方法の改善に関する継続した研究開発が存在する。これにしたがい、良好な選択的ＣＯＸ−２阻害を発揮するが、心血管又は胃腸の副作用は最低限である化合物の発見が所望される。
【発明の開示】
【０００８】
発明の概要
最低限の心血管又は胃腸の副作用で良好な選択的ＣＯＸ−２阻害を発揮する化合物を開発して製造することは有益であると認識されている。そのようなものとして、抗炎症組成物は医薬的有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含んだホップ抽出物を含むことができる。他の態様では、抗炎症組成物はＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を含むことができる。これらの態様はエッセンシャルオイルを１重量％未満の量で含めることができる。
【０００９】
更に、温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える種々の方法が提供される。そのような方法の１つは、医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。他の方法は、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。
【００１０】
本発明の更なる特徴及び利点は、実施例により本発明の特徴を具体的に説明する以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
好ましい態様の詳細な説明
本発明の具体的態様を開示して説明する前に、本発明は、ある程度改変可能であるため、本明細書に開示される具体的方法及び材料に限定されるものではないと理解されるべきである。 本発明の範囲は添付の特許請求の範囲及びその等価物によって定義されるため、本明細書で用いる用語は具体的態様を記載するためにのみ用いられ、限定されることを意図するものではないと理解されるべきである。
【００１２】
本発明について記載し、権利を主張する上で、以下の用語が使用される。
単数形「１つの」及び「その」には、内容がその他を明確に指示するものでない場合は、複数形の参照も含めるものとする。したがって、例えば「１つの色素」という参照には、１以上のそのような物質への参照が含まれるものとする。
【００１３】
本明細書において、「ＩＣ５０」又は「ＩＣ８０」という用語は、ウイリアム・ハーベイの改変ヒト全血／細胞アッセイ（ＷＨＭＡ）で記載される、ＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２の５０％又は８０％阻害を生ずる化合物又は製剤の濃度をそれぞれ意味するものとする。より詳細には、シクロオキシゲナーゼ−２インヒビターの効能を定量化する用語は、プロスタグランジンＥ−２を５０％軽減させる阻害濃度（ＩＣ）、ＩＣ５０である。もう１つの指標は８０％軽減させる阻害濃度である。これはＩＣ８０である。本発明の目的のために、ＩＣ８０という用語は、主要な炎症性サイトカイン又はプロスタグランジン（ＰＧＥ−２）を８０％軽減させる化合物の濃度を意味する。あるいは、ＣＯＸ−２酵素を８０％阻害可能な化合物の濃度をＩＣ８０と表す。同様に、ＩＣ５０という用語は、ＰＧＥ−２を５０％軽減させるか又はＣＯＸ−２酵素の活性を５０％軽減させる化合物の濃度を意味する。
【００１４】
本明細書において、ＣＯＸインヒビターの濃度はマイクログラム／ミリリットル（μｇ／ｍｌと略す）又はマイクロモル（μＭと略す）で表すものとする。
本明細書において、ＣＯＸ比はＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１、又はＩＣ８０ ＣＯＸ−２／ＩＣ８０ ＣＯＸ−１として計算されるが、ＣＯＸ−２は常にＣＯＸ−１で割られる。
【００１５】
「剤形」という用語又は「投与」工程には、経口剤形、坐薬剤形、非経口剤形、舌下剤形、経皮又は経粘膜剤形等を含めた形態での投与を含めるものとする。
本明細書において、「経口剤形」という用語は、経口投与するために設計された医薬製剤を意味するものとし、１種以上のさまざまな医薬担体及び賦形剤を含むことができる。経口剤形は、例えば錠剤、カプセル、又は口腔投与の形態であり得る。経口剤形はヒト又は動物の口腔又は胃腸管で吸収されるであろう。
【００１６】
「徐放性」という用語には、活性成分の放出を長期間にわたって設定することができ、又は血流中で化合物がより長い滞留時間を提供するよう設計され、それによって疼痛寛解が長くなる経口剤形のような剤形が含まれる。そのような徐放性組成物は、種々のポリマー、繊維、樹脂、ワックス、オイル、又は医科学分野の当業者に用いられる他の医薬賦形剤を含んで、胃腸管、血流等からの活性成分のより長い放出を生ずることができる。
【００１７】
これらの定義を考慮して、本発明は、シクロオキシゲナーゼ酵素のＣＯＸ−１アイソフォームに対する効果は最小で、ＣＯＸ−２アイソフォームの選択的阻害を発揮する組成物を提供するものである。定義のため、最小効果とは、少なくとも１％のＣＯＸ−１阻害活性を意味するものとする。例えば、ＣＯＸ−１の１％より高い阻害は、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約１：９０又は約０．０１１に対応するであろう。換言すれば、ＣＯＸ−２阻害量よりもＣＯＸ−１を５０％阻害する化合物のほうが９０倍高いであろう。これによれば、１つの態様では、抗炎症組成物は、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を含むことができる。他の関連する態様では、本発明の態様による抗炎症組成物は、医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を含むことができる。これらの態様はエッセンシャルオイルを１重量％未満の量で含めることができる。
【００１８】
更に、温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える種々の方法が提供される。そのような方法の１つは、医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。他の方法は、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。
【００１９】
本発明の更なる側面は、投与の際、胃腸及び心血管の副作用が少ない製剤を製造することを含むことができる。更に、追加の態様では、ＣＯＸ−２酵素によって悪影響を受ける疾患、特に炎症、又はＣＯＸ−２のアップレギュレーション若しくは誘導を表す疾患の治療を含む。そのような疾患の例としては、限定されるものではないが、変形性関節症、関節リウマチ、月経困難症、及び乾癬が挙げられる。より一般的には、本明細書に記載の組成物は、あらゆるタイプの炎症又は炎症に関連する痛みの治療に用いることができる。
【００２０】
ホップ中のα酸を主に含み、ほとんど又は全くβ酸及びエッセンシャルオイルを含まない組成物も記載される。更に、イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、トランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン及びそれらの組み合わせのような種々のイソ−α酸を含有する組成物も含まれる。
【００２１】
そのような化合物は、幅広い治療利益をもたらし、広範なＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比に調節可能であり、少ない副作用で有効な疼痛寛解を提供するであろう。そのような化合物は、顕著な胃粘膜びらんを伴わずに心血管のために最小限のＣＯＸ−１阻害を提供し、一方で痛みに対して顕著なＣＯＸ−２阻害を提供することもできる。
【００２２】
ＣＯＸ−２又はシクロオキシゲナーゼ−２インヒビターは、アスピリンのようなＮＳＡＩＤ薬に関連する胃粘膜びらんを生ずることなくシクロオキシゲナーゼを阻害し、プロスタグランジンを減少させる。ＣＯＸ−２インヒビターは、酵素のＣＯＸ−２型をＣＯＸ−１型よりも選択的に阻害する。良好なＣＯＸ−２インヒビターとして分類されるには、化合物はＣＯＸ−２をＣＯＸ−１の少なくとも３〜５倍阻害する必要がある。良好なＣＯＸ−２インヒビターは、ＣＯＸ−２を阻害することによって８０〜９０％痛みを軽減し、ほとんど又は全くＣＯＸ−１型酵素に作用しない血中濃度レベルを提供可能であろう。
【００２３】
ＣＯＸ−２インヒビターのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験又はスクリーニングは、プロスタグランジンＥ−２、炎症性サイトカインプロスタグランジンのヒト全血における阻害を測定することにより、実施することができる。これにより、ＩＣ５０値、即ちＣＯＸ−２を５０％阻害するのに必要とされる化合物の量若しくは濃度、又はＩＣ８０値、プロスタグランジンＥ−２を８０％軽減させるのに必要とされる化合物の濃度の計算値を生ずる。この試験モデルは、ＬＰＳ又は他のＣＯＸ−２酵素誘導物質で刺激すると、ＣＯＸ−２酵素関連経路によるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の産生を測定する。ＣＯＸ−１活性は、トロンボキサン（ＴｘＢ２）産生を測定することによって測定することができる。そのようなアッセイは、現在、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１選択性及び効能のより完全なｉｎ−ｖｉｔｒｏ図式を表すと考えられている。
【００２４】
より詳細には、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１阻害活性を測定するために、ウイリアム・ハーベイの改変ヒト全血／細胞アッセイ（ＷＨＭＡ）を用いることができる。これは、Ｔ．Ｄ．Ｗａｒｎｅｒら、非ステロイド系薬物のシクロオキシゲナーゼ−２よりもシクロオキシゲナーゼ−１への選択性はヒト胃腸毒性に関連する：完全なｉｎ ｖｉｔｒｏ解析、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：７５６３−６８（１９９９）に記載されており、本明細書にその全体が援用される。このアッセイの結果はＩＣ５０及び／又はＩＣ８０ ＷＨＭＡ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比の計算に用いることができる。これは、単にＣＯＸ−２ ＩＣ５０（又はＩＣ８０）濃度をＣＯＸ−１ ＩＣ５０（又はＩＣ８０）濃度で割った数値比である。加えて、それによりＣＯＸ−２を減少させ又は阻害する化合物の効能を決定することができる。 これは、酵素の２つのアイソフォームの阻害を、さまざまなインヒビター濃度で、非常に低濃度から開始し、少なくとも８０％阻害が生ずるまでｌｏｇ様式で増加させて測定することにより行なわれる。これは、濃度対阻害曲線、又は用量反応曲線のｌｏｇグラフを生ずる。
【００２５】
科学者の国際グループがＣＯＸ−２スクリーニングアッセイに関する一致した意見の総説を出版した：Ｂｒｏｏｋｓら；シクロオキシゲナーゼ−１とシクロオキシゲナーゼ−２の差別的阻害の臨床的意義に関する解釈、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ １９９９；３８：７７９−７８８。この一致した意見に関する論文において、委員会は、Ｐａｔｒｉｇｎａｎｉら（Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ １９９４；２７１：１７０５−１２）によって開発されたヒト全血アッセイは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の阻害を評価し、新規ＣＯＸインヒビターの価値を見極めるために利用可能な最良のアッセイであると主張している。より最近では、元の全血アッセイの延長としてウイリアム・ハーベイの改変ヒト全血アッセイが開発され、この方法を用いて大部分のＮＳＡＩＤ薬が新規ＣＯＸ−２インヒビターとともにスクリーニングされた。このアッセイの結果はＩＣ５０ ＷＨＭＡ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比を計算するために使用される。これは、ＷＨＭＡを用いて得られるＣＯＸ−２ ＩＣ５０をＣＯＸ−１ ＩＣ５０で割った単なる数値比である。
【００２６】
ヒト全血（８濃度、ｎ＝４）は静脈穿刺によってヘパリン中に回収することができる。ＣＯＸ−１を測定するには：刺激物質（Ａ２３１８７）を３０分間添加して、試験化合物のインキュベーションを１時間行なうことができる。ＣＯＸ−２を測定するには：刺激物質（Ａ２３１８７）を３０分間添加して、ヒト全血中で、Ａ５４９細胞における試験化合物のインキュベーションを１時間行なうことができる。この後、ＣＯＸ−１活性の指標としてＲＩＡでＴｘＢ２を測定することができ、ＣＯＸ−２活性の指標としてＲＩＡでＰＧＥ２を測定することができる。結果は％対照として表すことができ、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比が計算される。
【００２７】
ＮＳＡＩＤによるＧＩ副作用の相対発生率に関連する問題に戻ると、そのような副作用はこれら抗炎症剤の相対的ＣＯＸ−２特異性に関連し得る。ＣＯＸ−１に対してＣＯＸ−２への特異性が高いほど、胃腸障害の発生率は低い。したがって、ＣＯＸ−２特異性が増加したシクロオキシゲナーゼ阻害剤は、胃腸損傷又は副作用の発生率がより低い改善された抗炎症組成物を提供するかもしれない。ＮＳＡＩＤによって起こり得る胃損傷はＣＯＸ−１への作用に関連しないことが明らかになりつつある。ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の２重抑制は障害を引き起こし得る（Ｗａｌｌａｃｅ，ＪＬら、ラットにおけるＮＳＡＩＤ誘導胃損傷：シクロオキシゲナーゼ−１及びシクロオキシゲナーゼ−２を阻害するための要件、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２０００；１１９：７０６−１４）。更に、プロスタグランジン合成を大きく減少させたＣＯＸ−１の選択的阻害は、同じ研究で胃損傷を生じなかった。一方、ＣＯＸ−２の選択的阻害は、胃プロスタグランジン合成に何ら作用をしめさず、胃損傷を生じなかった。興味深いことに、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２がともに阻害された場合、胃損傷が常に観察された。本研究及び他の研究は、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２、及び胃粘膜びらんの間の相関関係の明確な図式を提供している。現在、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の組み合わせ阻害は副作用に寄与するが、ＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２単独のより高度な選択的阻害は原因にならないことは明らかである。
【００２８】
しかしながら、ＣＯＸ−１に対しＣＯＸ−２への過度の選択性は、他の理由から望ましくないと認識されている。ある種の副作用は、ＣＯＸ−２に非常に選択的なＣＯＸインヒビターから生じ得る。例えば、主要なＣＯＸ−１非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であるアスピリンの心血管への利益は、その抗血小板凝集薬としての活性によるものであると考えられている。ＣＯＸ−２阻害は抗血小板凝集を生じない。セレコキシブ又はロフェコキシブのような最近の医薬ＣＯＸ−２インヒビターは、高度に特異的なＣＯＸ−２インヒビターであり、痛みを軽減させ、ＣＯＸ−２活性を阻害するために用いられる用量で、ＣＯＸ−１阻害活性を有するとは予想されないであろう。したがって、ある種のＣＯＸ−２特異的インヒビターの使用で注目されている心臓関連副作用は、ＣＯＸ−２を顕著に阻害する一方で、ＣＯＸ−１阻害の欠如に関連しているかもしれない。
【００２９】
更に、高度に特異的なＣＯＸ−２インヒビターに関連する更なる問題は、他の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）との併用投与によって生ずる胃粘膜びらんの増加であると認識されている。例えば、患者が高度に特異的なＣＯＸ−２インヒビターを摂取しており、心血管のためにアスピリンも摂取している場合、アスピリンは胃粘膜に更にひどい障害を引き起こすであろう。特定の理論に拘束されるものではないが、この理由は、プロスタグランジンＥ−２（ＰＧＥ２）のようなシクロオキシゲナーゼインヒビターによって阻害されるプロスタグランジンは、胃粘膜を保護し、実際に潰瘍の治癒に寄与しているためであり得る。低用量アスピリンは胃に小さなびらんを引き起こし、こうした潰瘍形成部位でＣＯＸ−２酵素はアップレギュレーションされる。ＣＯＸ−２が選択的ＣＯＸ−２インヒビターによってブロックされる場合、有益なプロスタグランジンによって提供される保護は、排除され得る。したがって、選択的ＣＯＸ−２インヒビターとアスピリンとの併用投与は禁忌である。この現象は、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の２重阻害に関連した問題の表われである。したがって、胃粘膜びらんは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２を顕著に阻害する単一化合物によって、又はＯＸ−２選択的化合物をＣＯＸ−１もかなり阻害する非選択的ＣＯＸインヒビターと組み合わせることによって、更に悪化し得る。
【００３０】
ロフェコキシブ及びセレコキシブのように高度に選択的な単一物であるＣＯＸ−２インヒビターは、変形性関節症及び他の疾病に関連した痛みの治療に重要な新規薬物である一方、重篤な潜在的副作用を有する。これらの副作用を２つの主要なグループに分けることができる；１）心血管、及び２）アスピリン、又は他のＮＳＡＩＤとともに摂取したときの胃粘膜びらんの悪化。これらの副作用はともに、バランスを失ったＣＯＸ酵素の全阻害、したがって事実上完全なプロスタグランジン産生の阻害に関連しているかもしれない。プロスタグランジンは体内において肯定的機能も否定的機能も有しているため、それらの全阻害は両刃の剣となる。更に、心血管のためのアスピリンと、痛みのための選択的ＣＯＸ−２インヒビターをともに摂取している患者集団に有意な重複がある。これらの患者の多くは第１に高齢者集団を構成する。ＮＳＡＩＤ又は選択的ＣＯＸ−２インヒビターの否定的副作用を伴わない抗炎症疼痛寛解に関する顕著な必要性がある。そのような組成物は疼痛寛解を提供し、一方で血小板凝集も阻害し、胃保護機構又は細胞保護機構を通して胃粘膜を保護するであろう。これら第２世代のＣＯＸ−２インヒビターは、ＣＯＸ−１に対してＣＯＸ−２を阻害するのに十分に選択的であるが、上記の更なる副作用を生ずる程には選択的でないであろう。これらの化合物は他の有益な特性の存在のおかげで、保護活性を発揮し得る。
【００３１】
こうした認識にしたがい、全体的な危険への報酬利益に対する鍵は、所定のＣＯＸ−２阻害とともに、ちょうどよい量のＣＯＸ−１阻害を有することであると本発明の態様にしたがい決定されている。そのようなＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１は約１：９０〜約１：３、又は数値では約０．０１１〜約０．３３３であり得る。他の態様では、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１は約１：５０〜約１：２０、又は数値では約０．０２〜約０．０５であり得る。他の態様では、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１の比は少なくとも１：２０、又は数値では少なくとも０．０５であり得る。更に、１つの特定の態様では、ＷＨＭＡプロトコールを用いて試験される化合物は、ＣＯＸ−２に対するＩＣ５０が１μｇ／ｍｌ、ＣＯＸ−１に対するＩＣ５０が２０μｇ／ｍｌであり、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比は約１：２０又は０．０５となるであろう。
【００３２】
新規抗炎症化合物の探索において、多くの潜在的候補が植物界に由来する。これら植物は通常抽出され、ＣＯＸ阻害に関して種々の細胞株及び方法を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ試験される。通常、これらの方法には、ＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１の阻害に関し、ＣＯＸ−２阻害に対するプロスタグランジンＥ−２の阻害及びＣＯＸ−１阻害に対するＴｘＢ２の阻害を測定することによって、化合物をスクリーニングすることが含まれる。したがって、本明細書で計算したように、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比を計算することによって選択性を決定することができる。ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２比によって比を計算することもでき、異なる数が得られても、相対値を用いて比を有効に特定するであろう。
【００３３】
そのような候補の１つは、ホップＬ．、即ちホップとして一般に知られている植物の特別な抽出物である。ホップはホップ植物のコーンフラワー（cone flower）に由来し、何百年ものあいだビールの製造に使用されている。ホップ自体は代謝活性及び内分泌活性を発揮することができる。ホップから単離することができるものには少なくとも６種類のフラボノイド又はポリフェノール化合物があり、本発明の態様にしたがい存在することができる。これらフラボノイドのいくつかは、抗増殖作用、エストロゲン作用、及び細胞毒性を有する。ホップ中の植物エストロゲンは、ヒト乳癌細胞の増殖を阻害することも示されている。したがって、ホップから単離されたユニークなフラボノイド化合物(プレニル化フラバノイド)は、発がん物質の代謝に影響を及ぼすことによってがん化学予防剤としての可能性を有し得る。ホップに含有されるフラボンには、キサントフモール、イソキサントフモール、デスメチルキサントフモール、８−プレニルナリンゲニン、６−プレニルナリンゲニン、及び種々の他のフラボノイドが含まれる。ホップは抗菌性及び抗真菌性を発揮することもできる。
【００３４】
ホップの主要成分には、α酸及びβ酸が含まれる。α酸はフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、及びジヒドロアドフムロンとして同定されている。これらのα酸はジヒドロ−α酸として及び種々の異性体としても存在する。イソ−α酸はイソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、トランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン、及びジヒドロ−イソ−アドフムロンである。β酸はルプロン、コルプロン、アドルプロン、プレルプロン、及びポストルプロンである。β酸の異性体はない。ホップは、ミルセン、カリオフィレン、フムレン、ウンデカン−２−オン、及び２−メチル−ブト−３−エン−オールのような種々のエッセンシャルオイルも含有する。これらのオイルは主としてテルペン及びセスキテルペンとして分類することができる。少なくとも５０％のエッセンシャルオイルはテルペン、ミルセンを含む。
【００３５】
ホップから単離されたα酸の１種であるフムロンの局所適用により、マウスのアラキドン酸誘発耳浮腫が阻害され（Ｙａｓｕｋａｗａ，Ｋら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １９９５、Ｍａｒ；５２（２）：１５６−１５８）、化学投与を伴った開始後、皮膚の腫瘍形成も阻害された。純粋なフムロンはシクロオキシゲナーゼ−２の誘導を遺伝子転写のレベルで抑制することも示されている（Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２０００ Ｊａｎ １４、４６５（２−３：１０３−１０６）。この同じ研究で、フムロンは骨芽細胞(骨)ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞においてＣＯＸ−２の触媒活性をＩＣ５０ １．６μＭで阻害した。更にフムロンは、同一細胞株でＴＮＦ−α依存性のシクロオキシゲナーゼ−２の誘導を抑制した。フムロンによるＣＯＸ−２酵素の直接阻害は、遺伝子転写の阻害又はＣＯＸ−２の発現抑制に要する濃度よりも高濃度を必要とした。フムロンは、ＣＯＸ−２酵素触媒活性の直接阻害によるよりも、遺伝子転写を抑制することによって、ＣＯＸ−２の転写又は活性化を妨げる際に低濃度でより有効であると思われる。ＣＯＸ−２転写の抑制に対するＩＣ５０は３０ｎＭ（１０−９）であり、一方、触媒活性の直接阻害に対するＩＣ５０は１．６μＭ（１０−６）であった。即ち、２桁低かった。純粋なフムロンのみが本研究に使用される。
【００３６】
ホップコーンフラワーの特別な抽出は、好ましくは超臨界２酸化炭素で調製することができる。超臨界ＣＯ２抽出は、非常に高率のα酸、非常に低率のβ酸を含有し、実質的にエッセンシャルオイルがないホップ抽出物をもたらすことができる。しかしながら、本発明は、抽出技術に限定されるものではない。本発明において好ましいα酸の量は７５重量％〜９９．５重量％であり得る。α酸はフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、又はテトラ−ヒドロフムロンのようなテトラ−ヒドロ−α酸であり得る。β酸は０．５重量％〜１０重量％であり得、他の態様では約３重量％〜５重量％であり得る。場合により、組成物は実質的にミルセン又は他のテルペン若しくはセスキテルペンのようなエッセンシャルオイルがなくてもよい。実質的にないとは、微量又は些少を除いてエッセンシャルオイルが存在しないことを意味する。他の態様では、エッセンシャルオイルは１重量％未満の量で存在することができる。更に、組成物はイソ−α酸をさまざまな範囲で含有してもよい。通常、イソ−α酸のレベルは１０重量％以下、例えば０．５重量％〜１０重量％であろう。イソ−α酸は、イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、ジ−ヒドロ−イソ−フムロン、ジ−ヒドロ−イソ−アドフムロン、又はそれらの組み合わせであり得る。イソ-α酸は、ＣＯＸ−１成分を増やして、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比をＣＯＸ−２に対する選択性がより低くなるように変化させることによって製剤中でＣＯＸ−２に対する選択性を調節するのに有用であり得る。これらタイプの処方の理由は、トロンボキサンを介したＣＯＸ−１阻害からの抗血小板凝集活性を提供する心血管問題を扱うことである。この態様では、イソ−α酸でないα酸は約８０重量％より多い量で存在することができる。
【００３７】
先に述べたように、ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１のＩＣ５０比又はＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１は、約０．０１１〜約０．３３３、又は約１：９０〜約１：３であり得る。α酸の割合は、６０重量％〜９９．５重量％であり得るが、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が０．０１１〜０．３３３の特定の範囲内にある場合はこの範囲に限定されない。他の態様では、０．１３〜０．０５の範囲であり得、更に詳細には、０．０２〜０．０５であり得る。上記のように、イソ−α酸は０．５重量％〜１０重量％であり得る。これとは無関係に、β酸は０．５重量％〜１０重量％であり得る。更に、キサントフモール、イソキサントフモール、８−プレニルナリンゲニン、６−プレニルナリンゲニンのような種々のポリフェノール又はフラボノイドは、さまざまな量で存在し得る。
【００３８】
ＷＨＭＡ比に関連した態様では、本発明による組成物は、α酸及びβ酸の量又は処理方法若しくは抽出方法に限定されない。例えば、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２対ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が０．０１３（１：７５）であるホップ抽出物は、処理方法又はα酸、β酸、若しくはエッセンシャルオイルの量にかかわらず本発明の一部である。１つの態様では、上述したように、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比が約１：２０、数値では０．０５のホップ粉末を作製することができ、慢性の変形性関節症又は関節リウマチからの良好な疼痛寛解を提供する。そのような組成物は月経困難症又は生理痛、乾癬、及びＣＯＸ−２によって悪影響を受ける他の疾患の治療にも有用であり得る。
【００３９】
実施例
以下の実施例は、現在最もよく知られている本発明の態様を具体的に説明する。しかしながら、以下は単に本発明の原理の適用例又は実例であると理解されるべきである。多くの改変、並びに代替の組成物、方法及びシステムが本発明の精神及び範囲を逸脱することなく当業者によって工夫されることができる。添付の特許請求の範囲は、そのような改変及びアレンジをカバーすることを意図するものである。したがって、本発明は具体的に上述されているが、以下の実施例は、現在何が本発明の最も実践的で好ましい態様であるかに関連して更なる詳細を提供するものである。
【実施例１】
【００４０】
ホップのＣＯＸ−２阻害活性
ホップの超臨界２酸化炭素抽出により、９１重量％のα酸が生じた。その中で、主要なα酸はフムロンであることがＨＰＬＣによって証明された。この抽出物中のβ酸の量は３．２重量％であることが証明され、イソ-α酸の量は約３重量％であった。この抽出物には、典型的なホップの粉末又は抽出物中に通常見られるエッセンシャルオイルが実質的になかった。
【００４１】
ＨＰＬＣによるホップ抽出物成分：
α酸 ８８重量％
β酸 ３．２重量％
イソ−α酸 ３重量％
全α酸 ９１重量％（α及びイソ−α）
この抽出物をＤＭＳＯに溶解し、上記プロトコールにしたがい試験した。試験物質のＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性に対する効果を表１〜３に詳述した。表１〜３の結果は％対照として表し、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝４）として示した。これからＩＣ５０値を計算した（表３）。
【００４２】
【表１】
【００４３】
【表２】
【００４４】
説明のため、ｌｏｇＭは試験化合物のモル濃度のｌｏｇを意味する。例えば、１０−９はナノモル濃度のｌｏｇであり、１０−６はマイクロモル濃度のｌｏｇである、など。ホップ抽出物及びイブプロフェンの値は、％対照（これはそこに何も加えていないＤＭＳＯ溶媒である）に基づいている。
【００４５】
表１及び表２からわかるように、ＣＯＸ−１を５０％軽減させるのにやや多量のホップ抽出物が必要である（ＩＣ５０は１０−３〜１０−４である）が、ＣＯＸ−２については、５０％軽減させるのに必要な濃度は１０−６である（ＩＣ５０は１．４×１０−６μＭであった）。この９１重量％のα酸ホップ抽出物がＣＯＸ−１を５０％軽減させるにはＣＯＸ−２活性を５０％軽減させるのに必要な濃度の約１００倍必要である。比較のため、イブプロフェンも含まれている。ホップ抽出物は、イブプロフェンよりもＣＯＸ−２の阻害に関して強力で選択的であった。
【００４６】
【表３】
【００４７】
表３は、超臨界２酸化炭素抽出に由来する９１重量％のα酸を含有するホップ抽出物と、非選択的ＣＯＸインヒビターであるアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン及びインドメタシンに加えて、処方薬ＣＯＸ−２選択的インヒビターであるロフェコキシブ及びセレコキシブを含めた他の公知のＣＯＸインヒビターとの比較である。上記データからわかるように、ＷＨＭＡプロトコールにしたがって試験した場合、ホップ抽出物は選択的で強力なＣＯＸ−２インヒビターである。このホップ抽出物のＩＣ５０ ＣＯＸ−２濃度は約１．４μＭであり、多くの非ステロイド系抗炎症薬の薬理作用の範囲内である。一方、ＩＣ５０ ＣＯＸ−１濃度は約１１０μＭであった。したがって、比は０．０１２７、即ち１：９０であった。
【００４８】
【表４】
【００４９】
表４は、特別なホップ抽出物に関するＩＣ８０データを、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２を非常に低濃度で低下させる強力な非選択的ＮＳＡＩＤであるインドメタシンと比較して含む。上記表４からわかるように、ＣＯＸ−２に対するＩＣ８０は約８５μＭであり、ＩＣ８０ ＣＯＸ−２／１比は約０．０９μＭであり、比は約１：１１である。インドメタシンほど強力ではないが、ＣＯＸ−２に対する選択性は非常に高い。
【００５０】
上記実験に用いた樹脂はＣＯＸ−２酵素を有意に阻害し、ＣＯＸ−１型にはほとんど作用を及ぼさなかったが、このような樹脂は粉末にすることなく医薬剤形に使用するのが困難である。粉末にすると、さまざまな賦形剤を担体として用いることができ、樹脂の効能を希釈する傾向にある。それによってＩＣ５０又はＩＣ８０が約５０％減少し、使用すべきα酸及びイソ-α酸の種々の混合物を可能にする。
【実施例２】
【００５１】
粉末にしたホップ樹脂によるＣＯＸ−２阻害
マルトデキストリン及びケイ酸カルシウムを用いて、ジャケット付強力ミキサー中でホップ樹脂を粉末にする。得られた粉末をＨＰＬＣで解析し、以下の主要成分が生じたことを見出した：
ＨＰＬＣによるホップ粉末成分：
α酸 ２０重量％
イソ−α酸 ９．４重量％
β酸 ８重量％
この粉末を、ＣＯＸ−２をＬＰＳ（リポ多糖）で誘導し、ＣＯＸ−２活性のためにＰＧＥ−２を測定することによって、全血中の細胞株においてＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１阻害について試験した。ＣＯＸ−１活性はＴｘＢ２（トロンボキサンＢ２）を測定することによって評価した。ＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１に対するＩＣ５０の結果は以下の通りである：
IC50 COX-2 IC50COX-1 IC50 COX-2/IC50 COX-1
１μｇ／ｍｌ ３０μｇ／ｍｌ ０．０３３（１：３０）
【実施例３】
【００５２】
ホップ製剤対非選択的ＣＯＸインヒビターの胃粘膜びらん
本実施例は、ホップ製剤対アスピリンなどの伝統的な非選択的ＣＯＸインヒビターＮＳＡＩＤによる胃粘膜びらんの軽減を立証するためのものである。３０重量％のα酸（２２５ｍｇのα酸）を含む７５０ｍｇのホップ抽出物粉末を含有する錠剤の経口製剤を、１回の盲目、並行群、多用量試験において４０人の被験者に投与する。患者をホップ単独か又は１日あたり１，０００ｍｇのアスピリンを４日間の治療に無作為に割り当てる。最初の用量後４時間、そして試験第４日の最終投与後３時間行われる胃十二指腸刺激の内視鏡的評価に基づいて評価を行なう。全ての被験者が正常な健常胃十二指腸粘膜をベースラインで有していることを確実にするために、被験者を無作為抽出する前にやはり内視鏡的評価を行なう。
【００５３】
胃及び十二指腸の障害の程度及び重篤度を内視鏡検査を用いて評価する。胃及び十二指腸を内視鏡検査するあいだ、粘膜下出血、びらん、及び潰瘍形成の数及び部位を内視鏡検査医によって決定する。この発見に基づき、出血性損傷をスケール０〜４に格付けし、びらん性損傷を別のスケール０〜４に格付けする。胃と十二指腸は別々に格付けする。上記試験条件下で、内視鏡評価はホップ製剤が実質的に胃粘膜びらんを示さないことが予想されるが、アスピリン製剤は顕著な胃粘膜下出血及び全体的な胃粘膜びらんを示した。２群間の差は統計的に有意であることが予想される。アスピリンと比較したホップ製剤による胃粘膜びらんの軽減は、ＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２への選択性に関連していると考えられる。
【００５４】
本発明を好ましい態様又は具体的な態様に関連して上記しているが、これらの態様は本発明を網羅するもの又は限定するものであることを意図するものではなく、むしろ、本発明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれる代替物、改変物、又は等価物をカバーすることを意図するものである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗炎症組成物及び温血動物の炎症を軽減させる方法に関する。より詳細には、本発明は、炎症を軽減させるための特定の組成物特性を有するホップ抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性疼痛のメカニズムに関する研究は、炎症に関連する生化学経路の発見をもたらした。そのような慢性炎症性疼痛の１例は、変形性関節症である。この経路の解明は、痛みと炎症を伴う、シクロオキシゲナーゼ酵素によって産生される炎症性サイトカインであるプロスタグランジンの関連を導いた。第１世代の抗炎症鎮痛剤は非ステロイド系抗炎症薬又はＮＳＡＩＤとして分類された。アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、及びインドメタシンのような一般のＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼ酵素を阻害し、それによりプロスタグランジンＥ−２の産生を低下させることによって炎症を軽減させる。多くの新規ＮＳＡＩＤが過去３０年にわたって開発されておいｒ、その多くは処方薬のみで利用可能である。
【０００３】
現在ＣＯＸ−２と呼ばれるシクロオキシゲナーゼ酵素の第２形態の出現まで、作用メカニズム及びその効果に関し、種々のＮＳＡＩＤのあいだで典型的には区別されていなかった。典型的には、疼痛寛解の規模、又はＣＯＸ酵素の阻害効能のみが重要であると考えられていた。しかしながら、慢性炎症性疼痛を患う患者のＮＳＡＩＤの使用による副作用が出現した。主な副作用は胃腸毒性であり、それは胃粘膜びらん又は胃の保護粘膜層のびらんの形態で現れる。９０年代前半まで、変形性関節症及び関節リウマチの発生率が増加したため、この副作用は顕著になり、米国だけで１年に１６，５００人を越える死者をもたらした。Ｗｏｌｆ，Ｍら、非ステロイド系抗炎症薬の胃腸毒性、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｖｏｌ．３４０、Ｎｏ．２４、１８８８−１８９９（１９９９）によるこれに関する総説記事は、本明細書にその全体が援用される。この記事によれば、１年で、ＮＳＡＩＤを摂取している関節リウマチ患者１，０００人あたり１３人が重大な胃腸合併症を有する。国立健康統計センター、並びに関節炎、リウマチ及び加齢の医薬情報システムのデータによれば、関節リウマチ又は変形性関節症を患う患者のＮＳＡＩＤ毒性による年間死亡者数（１９９７）はアメリカにおける死亡原因の第１５位である。この数字はＡＩＤＳによる死亡率（１６，６８５人）と類似しており、白血病による死亡（２０，１９７人）よりわずかに少ないのみであるが、多発性骨髄腫、喘息、子宮頚癌、又はホジキン病による死亡者数よりも顕著に多い。
【０００４】
多くのＮＳＡＩＤが、よりＣＯＸ−１型酵素に選択的であるが、それらはＣＯＸ−２型をもさまざまな程度で阻害する。インドメタシンのようなある種のＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２をある程度減少させる。驚くべきことに、ＮＳＡＩＤはＣＯＸ−２を誘導し、又はアップレギュレーションすることもできる。
【０００５】
ＮＳＡＩＤが胃粘膜びらんを引き起こし、急速にＣＯＸ−２を誘導する可能性は、ラットの胃でＣＯＸ−２がアスピリン又はインドメタシンの投与後１時間以内に誘導された動物実験の観察データから具体的に示すことができる。ＮＳＡＩＤの短期投与も長期投与も、内視鏡検査で証明されるように、胃粘膜びらんを生ずる。長期研究は、少なくとも３カ月のＮＳＡＩＤ摂取として定義されるが、通常は３〜６カ月にわたって行われる。
【０００６】
９０年代後半に出現した新規クラスの処方薬は、ＣＯＸ−２インヒビターと呼ばれる。このクラスで最初に米国ＦＤＡによって認可された２つの化合物はセレコキシブ及びロフェコキシブである。これら薬物はＣＯＸ−２を阻害し、ＣＯＸ−１に対してはほとんど又は全く作用せず、他のＮＳＡＩＤと同等の疼痛寛解を生ずるほど十分強力である。これらの化合物はＮＳＡＩＤ鎮痛剤よりも有効ではないが、典型的には胃腸毒性が軽減される。しかしながら、この分野における改善は依然として必要である。
【０００７】
ＣＯＸ−２インヒビターの市場への出現により、組成物及び方法の改善に関する継続した研究開発が存在する。これにしたがい、良好な選択的ＣＯＸ−２阻害を発揮するが、心血管又は胃腸の副作用は最低限である化合物の発見が所望される。
【発明の開示】
【０００８】
発明の概要
最低限の心血管又は胃腸の副作用で良好な選択的ＣＯＸ−２阻害を発揮する化合物を開発して製造することは有益であると認識されている。そのようなものとして、抗炎症組成物は医薬的有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含んだホップ抽出物を含むことができる。他の態様では、抗炎症組成物はＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を含むことができる。これらの態様はエッセンシャルオイルを１重量％未満の量で含めることができる。
【０００９】
更に、温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える種々の方法が提供される。そのような方法の１つは、医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。他の方法は、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。
【００１０】
本発明の更なる特徴及び利点は、実施例により本発明の特徴を具体的に説明する以下の詳細な説明から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
好ましい態様の詳細な説明
本発明の具体的態様を開示して説明する前に、本発明は、ある程度改変可能であるため、本明細書に開示される具体的方法及び材料に限定されるものではないと理解されるべきである。 本発明の範囲は添付の特許請求の範囲及びその等価物によって定義されるため、本明細書で用いる用語は具体的態様を記載するためにのみ用いられ、限定されることを意図するものではないと理解されるべきである。
【００１２】
本発明について記載し、権利を主張する上で、以下の用語が使用される。
単数形「１つの」及び「その」には、内容がその他を明確に指示するものでない場合は、複数形の参照も含めるものとする。したがって、例えば「１つの色素」という参照には、１以上のそのような物質への参照が含まれるものとする。
【００１３】
本明細書において、「ＩＣ５０」又は「ＩＣ８０」という用語は、ウイリアム・ハーベイの改変ヒト全血／細胞アッセイ（ＷＨＭＡ）で記載される、ＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２の５０％又は８０％阻害を生ずる化合物又は製剤の濃度をそれぞれ意味するものとする。より詳細には、シクロオキシゲナーゼ−２インヒビターの効能を定量化する用語は、プロスタグランジンＥ−２を５０％軽減させる阻害濃度（ＩＣ）、ＩＣ５０である。もう１つの指標は８０％軽減させる阻害濃度である。これはＩＣ８０である。本発明の目的のために、ＩＣ８０という用語は、主要な炎症性サイトカイン又はプロスタグランジン（ＰＧＥ−２）を８０％軽減させる化合物の濃度を意味する。あるいは、ＣＯＸ−２酵素を８０％阻害可能な化合物の濃度をＩＣ８０と表す。同様に、ＩＣ５０という用語は、ＰＧＥ−２を５０％軽減させるか又はＣＯＸ−２酵素の活性を５０％軽減させる化合物の濃度を意味する。
【００１４】
本明細書において、ＣＯＸインヒビターの濃度はマイクログラム／ミリリットル（μｇ／ｍｌと略す）又はマイクロモル（μＭと略す）で表すものとする。
本明細書において、ＣＯＸ比はＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１、又はＩＣ８０ ＣＯＸ−２／ＩＣ８０ ＣＯＸ−１として計算されるが、ＣＯＸ−２は常にＣＯＸ−１で割られる。
【００１５】
「剤形」という用語又は「投与」工程には、経口剤形、坐薬剤形、非経口剤形、舌下剤形、経皮又は経粘膜剤形等を含めた形態での投与を含めるものとする。
本明細書において、「経口剤形」という用語は、経口投与するために設計された医薬製剤を意味するものとし、１種以上のさまざまな医薬担体及び賦形剤を含むことができる。経口剤形は、例えば錠剤、カプセル、又は口腔投与の形態であり得る。経口剤形はヒト又は動物の口腔又は胃腸管で吸収されるであろう。
【００１６】
「徐放性」という用語には、活性成分の放出を長期間にわたって設定することができ、又は血流中で化合物がより長い滞留時間を提供するよう設計され、それによって疼痛寛解が長くなる経口剤形のような剤形が含まれる。そのような徐放性組成物は、種々のポリマー、繊維、樹脂、ワックス、オイル、又は医科学分野の当業者に用いられる他の医薬賦形剤を含んで、胃腸管、血流等からの活性成分のより長い放出を生ずることができる。
【００１７】
これらの定義を考慮して、本発明は、シクロオキシゲナーゼ酵素のＣＯＸ−１アイソフォームに対する効果は最小で、ＣＯＸ−２アイソフォームの選択的阻害を発揮する組成物を提供するものである。定義のため、最小効果とは、少なくとも１％のＣＯＸ−１阻害活性を意味するものとする。例えば、ＣＯＸ−１の１％より高い阻害は、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約１：９０又は約０．０１１に対応するであろう。換言すれば、ＣＯＸ−２阻害量よりもＣＯＸ−１を５０％阻害する化合物のほうが９０倍高いであろう。これによれば、１つの態様では、抗炎症組成物は、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を含むことができる。他の関連する態様では、本発明の態様による抗炎症組成物は、医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を含むことができる。これらの態様はエッセンシャルオイルを１重量％未満の量で含めることができる。
【００１８】
更に、温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える種々の方法が提供される。そのような方法の１つは、医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。他の方法は、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を製剤化する工程；及びホップ抽出物を温血動物に投与する工程を含むことができる。
【００１９】
本発明の更なる側面は、投与の際、胃腸及び心血管の副作用が少ない製剤を製造することを含むことができる。更に、追加の態様では、ＣＯＸ−２酵素によって悪影響を受ける疾患、特に炎症、又はＣＯＸ−２のアップレギュレーション若しくは誘導を表す疾患の治療を含む。そのような疾患の例としては、限定されるものではないが、変形性関節症、関節リウマチ、月経困難症、及び乾癬が挙げられる。より一般的には、本明細書に記載の組成物は、あらゆるタイプの炎症又は炎症に関連する痛みの治療に用いることができる。
【００２０】
ホップ中のα酸を主に含み、ほとんど又は全くβ酸及びエッセンシャルオイルを含まない組成物も記載される。更に、イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、トランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン及びそれらの組み合わせのような種々のイソ−α酸を含有する組成物も含まれる。
【００２１】
そのような化合物は、幅広い治療利益をもたらし、広範なＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比に調節可能であり、少ない副作用で有効な疼痛寛解を提供するであろう。そのような化合物は、顕著な胃粘膜びらんを伴わずに心血管のために最小限のＣＯＸ−１阻害を提供し、一方で痛みに対して顕著なＣＯＸ−２阻害を提供することもできる。
【００２２】
ＣＯＸ−２又はシクロオキシゲナーゼ−２インヒビターは、アスピリンのようなＮＳＡＩＤ薬に関連する胃粘膜びらんを生ずることなくシクロオキシゲナーゼを阻害し、プロスタグランジンを減少させる。ＣＯＸ−２インヒビターは、酵素のＣＯＸ−２型をＣＯＸ−１型よりも選択的に阻害する。良好なＣＯＸ−２インヒビターとして分類されるには、化合物はＣＯＸ−２をＣＯＸ−１の少なくとも３〜５倍阻害する必要がある。良好なＣＯＸ−２インヒビターは、ＣＯＸ−２を阻害することによって８０〜９０％痛みを軽減し、ほとんど又は全くＣＯＸ−１型酵素に作用しない血中濃度レベルを提供可能であろう。
【００２３】
ＣＯＸ−２インヒビターのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験又はスクリーニングは、プロスタグランジンＥ−２、炎症性サイトカインプロスタグランジンのヒト全血における阻害を測定することにより、実施することができる。これにより、ＩＣ５０値、即ちＣＯＸ−２を５０％阻害するのに必要とされる化合物の量若しくは濃度、又はＩＣ８０値、プロスタグランジンＥ−２を８０％軽減させるのに必要とされる化合物の濃度の計算値を生ずる。この試験モデルは、ＬＰＳ又は他のＣＯＸ−２酵素誘導物質で刺激すると、ＣＯＸ−２酵素関連経路によるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の産生を測定する。ＣＯＸ−１活性は、トロンボキサン（ＴｘＢ２）産生を測定することによって測定することができる。そのようなアッセイは、現在、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１選択性及び効能のより完全なｉｎ−ｖｉｔｒｏ図式を表すと考えられている。
【００２４】
より詳細には、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１阻害活性を測定するために、ウイリアム・ハーベイの改変ヒト全血／細胞アッセイ（ＷＨＭＡ）を用いることができる。これは、Ｔ．Ｄ．Ｗａｒｎｅｒら、非ステロイド系薬物のシクロオキシゲナーゼ−２よりもシクロオキシゲナーゼ−１への選択性はヒト胃腸毒性に関連する：完全なｉｎ ｖｉｔｒｏ解析、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：７５６３−６８（１９９９）に記載されており、本明細書にその全体が援用される。このアッセイの結果はＩＣ５０及び／又はＩＣ８０ ＷＨＭＡ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比の計算に用いることができる。これは、単にＣＯＸ−２ ＩＣ５０（又はＩＣ８０）濃度をＣＯＸ−１ ＩＣ５０（又はＩＣ８０）濃度で割った数値比である。加えて、それによりＣＯＸ−２を減少させ又は阻害する化合物の効能を決定することができる。 これは、酵素の２つのアイソフォームの阻害を、さまざまなインヒビター濃度で、非常に低濃度から開始し、少なくとも８０％阻害が生ずるまでｌｏｇ様式で増加させて測定することにより行なわれる。これは、濃度対阻害曲線、又は用量反応曲線のｌｏｇグラフを生ずる。
【００２５】
科学者の国際グループがＣＯＸ−２スクリーニングアッセイに関する一致した意見の総説を出版した：Ｂｒｏｏｋｓら；シクロオキシゲナーゼ−１とシクロオキシゲナーゼ−２の差別的阻害の臨床的意義に関する解釈、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ １９９９；３８：７７９−７８８。この一致した意見に関する論文において、委員会は、Ｐａｔｒｉｇｎａｎｉら（Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ １９９４；２７１：１７０５−１２）によって開発されたヒト全血アッセイは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の阻害を評価し、新規ＣＯＸインヒビターの価値を見極めるために利用可能な最良のアッセイであると主張している。より最近では、元の全血アッセイの延長としてウイリアム・ハーベイの改変ヒト全血アッセイが開発され、この方法を用いて大部分のＮＳＡＩＤ薬が新規ＣＯＸ−２インヒビターとともにスクリーニングされた。このアッセイの結果はＩＣ５０ ＷＨＭＡ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比を計算するために使用される。これは、ＷＨＭＡを用いて得られるＣＯＸ−２ ＩＣ５０をＣＯＸ−１ ＩＣ５０で割った単なる数値比である。
【００２６】
ヒト全血（８濃度、ｎ＝４）は静脈穿刺によってヘパリン中に回収することができる。ＣＯＸ−１を測定するには：刺激物質（Ａ２３１８７）を３０分間添加して、試験化合物のインキュベーションを１時間行なうことができる。ＣＯＸ−２を測定するには：刺激物質（Ａ２３１８７）を３０分間添加して、ヒト全血中で、Ａ５４９細胞における試験化合物のインキュベーションを１時間行なうことができる。この後、ＣＯＸ−１活性の指標としてＲＩＡでＴｘＢ２を測定することができ、ＣＯＸ−２活性の指標としてＲＩＡでＰＧＥ２を測定することができる。結果は％対照として表すことができ、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比が計算される。
【００２７】
ＮＳＡＩＤによるＧＩ副作用の相対発生率に関連する問題に戻ると、そのような副作用はこれら抗炎症剤の相対的ＣＯＸ−２特異性に関連し得る。ＣＯＸ−１に対してＣＯＸ−２への特異性が高いほど、胃腸障害の発生率は低い。したがって、ＣＯＸ−２特異性が増加したシクロオキシゲナーゼ阻害剤は、胃腸損傷又は副作用の発生率がより低い改善された抗炎症組成物を提供するかもしれない。ＮＳＡＩＤによって起こり得る胃損傷はＣＯＸ−１への作用に関連しないことが明らかになりつつある。ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の２重抑制は障害を引き起こし得る（Ｗａｌｌａｃｅ，ＪＬら、ラットにおけるＮＳＡＩＤ誘導胃損傷：シクロオキシゲナーゼ−１及びシクロオキシゲナーゼ−２を阻害するための要件、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、２０００；１１９：７０６−１４）。更に、プロスタグランジン合成を大きく減少させたＣＯＸ−１の選択的阻害は、同じ研究で胃損傷を生じなかった。一方、ＣＯＸ−２の選択的阻害は、胃プロスタグランジン合成に何ら作用をしめさず、胃損傷を生じなかった。興味深いことに、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２がともに阻害された場合、胃損傷が常に観察された。本研究及び他の研究は、ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２、及び胃粘膜びらんの間の相関関係の明確な図式を提供している。現在、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の組み合わせ阻害は副作用に寄与するが、ＣＯＸ−１又はＣＯＸ−２単独のより高度な選択的阻害は原因にならないことは明らかである。
【００２８】
しかしながら、ＣＯＸ−１に対しＣＯＸ−２への過度の選択性は、他の理由から望ましくないと認識されている。ある種の副作用は、ＣＯＸ−２に非常に選択的なＣＯＸインヒビターから生じ得る。例えば、主要なＣＯＸ−１非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）であるアスピリンの心血管への利益は、その抗血小板凝集薬としての活性によるものであると考えられている。ＣＯＸ−２阻害は抗血小板凝集を生じない。セレコキシブ又はロフェコキシブのような最近の医薬ＣＯＸ−２インヒビターは、高度に特異的なＣＯＸ−２インヒビターであり、痛みを軽減させ、ＣＯＸ−２活性を阻害するために用いられる用量で、ＣＯＸ−１阻害活性を有するとは予想されないであろう。したがって、ある種のＣＯＸ−２特異的インヒビターの使用で注目されている心臓関連副作用は、ＣＯＸ−２を顕著に阻害する一方で、ＣＯＸ−１阻害の欠如に関連しているかもしれない。
【００２９】
更に、高度に特異的なＣＯＸ−２インヒビターに関連する更なる問題は、他の非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）との併用投与によって生ずる胃粘膜びらんの増加であると認識されている。例えば、患者が高度に特異的なＣＯＸ−２インヒビターを摂取しており、心血管のためにアスピリンも摂取している場合、アスピリンは胃粘膜に更にひどい障害を引き起こすであろう。特定の理論に拘束されるものではないが、この理由は、プロスタグランジンＥ−２（ＰＧＥ２）のようなシクロオキシゲナーゼインヒビターによって阻害されるプロスタグランジンは、胃粘膜を保護し、実際に潰瘍の治癒に寄与しているためであり得る。低用量アスピリンは胃に小さなびらんを引き起こし、こうした潰瘍形成部位でＣＯＸ−２酵素はアップレギュレーションされる。ＣＯＸ−２が選択的ＣＯＸ−２インヒビターによってブロックされる場合、有益なプロスタグランジンによって提供される保護は、排除され得る。したがって、選択的ＣＯＸ−２インヒビターとアスピリンとの併用投与は禁忌である。この現象は、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２の２重阻害に関連した問題の表われである。したがって、胃粘膜びらんは、ＣＯＸ−１とＣＯＸ−２を顕著に阻害する単一化合物によって、又はＯＸ−２選択的化合物をＣＯＸ−１もかなり阻害する非選択的ＣＯＸインヒビターと組み合わせることによって、更に悪化し得る。
【００３０】
ロフェコキシブ及びセレコキシブのように高度に選択的な単一物であるＣＯＸ−２インヒビターは、変形性関節症及び他の疾病に関連した痛みの治療に重要な新規薬物である一方、重篤な潜在的副作用を有する。これらの副作用を２つの主要なグループに分けることができる；１）心血管、及び２）アスピリン、又は他のＮＳＡＩＤとともに摂取したときの胃粘膜びらんの悪化。これらの副作用はともに、バランスを失ったＣＯＸ酵素の全阻害、したがって事実上完全なプロスタグランジン産生の阻害に関連しているかもしれない。プロスタグランジンは体内において肯定的機能も否定的機能も有しているため、それらの全阻害は両刃の剣となる。更に、心血管のためのアスピリンと、痛みのための選択的ＣＯＸ−２インヒビターをともに摂取している患者集団に有意な重複がある。これらの患者の多くは第１に高齢者集団を構成する。ＮＳＡＩＤ又は選択的ＣＯＸ−２インヒビターの否定的副作用を伴わない抗炎症疼痛寛解に関する顕著な必要性がある。そのような組成物は疼痛寛解を提供し、一方で血小板凝集も阻害し、胃保護機構又は細胞保護機構を通して胃粘膜を保護するであろう。これら第２世代のＣＯＸ−２インヒビターは、ＣＯＸ−１に対してＣＯＸ−２を阻害するのに十分に選択的であるが、上記の更なる副作用を生ずる程には選択的でないであろう。これらの化合物は他の有益な特性の存在のおかげで、保護活性を発揮し得る。
【００３１】
こうした認識にしたがい、全体的な危険への報酬利益に対する鍵は、所定のＣＯＸ−２阻害とともに、ちょうどよい量のＣＯＸ−１阻害を有することであると本発明の態様にしたがい決定されている。そのようなＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１は約１：９０〜約１：３、又は数値では約０．０１１〜約０．３３３であり得る。他の態様では、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１は約１：５０〜約１：２０、又は数値では約０．０２〜約０．０５であり得る。他の態様では、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１の比は少なくとも１：２０、又は数値では少なくとも０．０５であり得る。更に、１つの特定の態様では、ＷＨＭＡプロトコールを用いて試験される化合物は、ＣＯＸ−２に対するＩＣ５０が１μｇ／ｍｌ、ＣＯＸ−１に対するＩＣ５０が２０μｇ／ｍｌであり、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比は約１：２０又は０．０５となるであろう。
【００３２】
新規抗炎症化合物の探索において、多くの潜在的候補が植物界に由来する。これら植物は通常抽出され、ＣＯＸ阻害に関して種々の細胞株及び方法を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏ試験される。通常、これらの方法には、ＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１の阻害に関し、ＣＯＸ−２阻害に対するプロスタグランジンＥ−２の阻害及びＣＯＸ−１阻害に対するＴｘＢ２の阻害を測定することによって、化合物をスクリーニングすることが含まれる。したがって、本明細書で計算したように、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比を計算することによって選択性を決定することができる。ＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２比によって比を計算することもでき、異なる数が得られても、相対値を用いて比を有効に特定するであろう。
【００３３】
そのような候補の１つは、ホップＬ．、即ちホップとして一般に知られている植物の特別な抽出物である。ホップはホップ植物のコーンフラワー（cone flower）に由来し、何百年ものあいだビールの製造に使用されている。ホップ自体は代謝活性及び内分泌活性を発揮することができる。ホップから単離することができるものには少なくとも６種類のフラボノイド又はポリフェノール化合物があり、本発明の態様にしたがい存在することができる。これらフラボノイドのいくつかは、抗増殖作用、エストロゲン作用、及び細胞毒性を有する。ホップ中の植物エストロゲンは、ヒト乳癌細胞の増殖を阻害することも示されている。したがって、ホップから単離されたユニークなフラボノイド化合物(プレニル化フラバノイド)は、発がん物質の代謝に影響を及ぼすことによってがん化学予防剤としての可能性を有し得る。ホップに含有されるフラボンには、キサントフモール、イソキサントフモール、デスメチルキサントフモール、８−プレニルナリンゲニン、６−プレニルナリンゲニン、及び種々の他のフラボノイドが含まれる。ホップは抗菌性及び抗真菌性を発揮することもできる。
【００３４】
ホップの主要成分には、α酸及びβ酸が含まれる。α酸はフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、及びジヒドロアドフムロンとして同定されている。これらのα酸はジヒドロ−α酸として及び種々の異性体としても存在する。イソ−α酸はイソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、トランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン、及びジヒドロ−イソ−アドフムロンである。β酸はルプロン、コルプロン、アドルプロン、プレルプロン、及びポストルプロンである。β酸の異性体はない。ホップは、ミルセン、カリオフィレン、フムレン、ウンデカン−２−オン、及び２−メチル−ブト−３−エン−オールのような種々のエッセンシャルオイルも含有する。これらのオイルは主としてテルペン及びセスキテルペンとして分類することができる。少なくとも５０％のエッセンシャルオイルはテルペン、ミルセンを含む。
【００３５】
ホップから単離されたα酸の１種であるフムロンの局所適用により、マウスのアラキドン酸誘発耳浮腫が阻害され（Ｙａｓｕｋａｗａ，Ｋら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １９９５、Ｍａｒ；５２（２）：１５６−１５８）、化学投与を伴った開始後、皮膚の腫瘍形成も阻害された。純粋なフムロンはシクロオキシゲナーゼ−２の誘導を遺伝子転写のレベルで抑制することも示されている（Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｋら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２０００ Ｊａｎ １４、４６５（２−３：１０３−１０６）。この同じ研究で、フムロンは骨芽細胞(骨)ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞においてＣＯＸ−２の触媒活性をＩＣ５０ １．６μＭで阻害した。更にフムロンは、同一細胞株でＴＮＦ−α依存性のシクロオキシゲナーゼ−２の誘導を抑制した。フムロンによるＣＯＸ−２酵素の直接阻害は、遺伝子転写の阻害又はＣＯＸ−２の発現抑制に要する濃度よりも高濃度を必要とした。フムロンは、ＣＯＸ−２酵素触媒活性の直接阻害によるよりも、遺伝子転写を抑制することによって、ＣＯＸ−２の転写又は活性化を妨げる際に低濃度でより有効であると思われる。ＣＯＸ−２転写の抑制に対するＩＣ５０は３０ｎＭ（１０−９）であり、一方、触媒活性の直接阻害に対するＩＣ５０は１．６μＭ（１０−６）であった。即ち、２桁低かった。純粋なフムロンのみが本研究に使用される。
【００３６】
ホップコーンフラワーの特別な抽出は、好ましくは超臨界２酸化炭素で調製することができる。超臨界ＣＯ２抽出は、非常に高率のα酸、非常に低率のβ酸を含有し、実質的にエッセンシャルオイルがないホップ抽出物をもたらすことができる。しかしながら、本発明は、抽出技術に限定されるものではない。本発明において好ましいα酸の量は７５重量％〜９９．５重量％であり得る。α酸はフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、又はテトラ−ヒドロフムロンのようなテトラ−ヒドロ−α酸であり得る。β酸は０．５重量％〜１０重量％であり得、他の態様では約３重量％〜５重量％であり得る。場合により、組成物は実質的にミルセン又は他のテルペン若しくはセスキテルペンのようなエッセンシャルオイルがなくてもよい。実質的にないとは、微量又は些少を除いてエッセンシャルオイルが存在しないことを意味する。他の態様では、エッセンシャルオイルは１重量％未満の量で存在することができる。更に、組成物はイソ−α酸をさまざまな範囲で含有してもよい。通常、イソ−α酸のレベルは１０重量％以下、例えば０．５重量％〜１０重量％であろう。イソ−α酸は、イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、ジ−ヒドロ−イソ−フムロン、ジ−ヒドロ−イソ−アドフムロン、又はそれらの組み合わせであり得る。イソ-α酸は、ＣＯＸ−１成分を増やして、ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比をＣＯＸ−２に対する選択性がより低くなるように変化させることによって製剤中でＣＯＸ−２に対する選択性を調節するのに有用であり得る。これらタイプの処方の理由は、トロンボキサンを介したＣＯＸ−１阻害からの抗血小板凝集活性を提供する心血管問題を扱うことである。この態様では、イソ−α酸でないα酸は約８０重量％より多い量で存在することができる。
【００３７】
先に述べたように、ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１のＩＣ５０比又はＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１は、約０．０１１〜約０．３３３、又は約１：９０〜約１：３であり得る。α酸の割合は、６０重量％〜９９．５重量％であり得るが、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が０．０１１〜０．３３３の特定の範囲内にある場合はこの範囲に限定されない。他の態様では、０．１３〜０．０５の範囲であり得、更に詳細には、０．０２〜０．０５であり得る。上記のように、イソ−α酸は０．５重量％〜１０重量％であり得る。これとは無関係に、β酸は０．５重量％〜１０重量％であり得る。更に、キサントフモール、イソキサントフモール、８−プレニルナリンゲニン、６−プレニルナリンゲニンのような種々のポリフェノール又はフラボノイドは、さまざまな量で存在し得る。
【００３８】
ＷＨＭＡ比に関連した態様では、本発明による組成物は、α酸及びβ酸の量又は処理方法若しくは抽出方法に限定されない。例えば、ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２対ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が０．０１３（１：７５）であるホップ抽出物は、処理方法又はα酸、β酸、若しくはエッセンシャルオイルの量にかかわらず本発明の一部である。１つの態様では、上述したように、ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１比が約１：２０、数値では０．０５のホップ粉末を作製することができ、慢性の変形性関節症又は関節リウマチからの良好な疼痛寛解を提供する。そのような組成物は月経困難症又は生理痛、乾癬、及びＣＯＸ−２によって悪影響を受ける他の疾患の治療にも有用であり得る。
【００３９】
実施例
以下の実施例は、現在最もよく知られている本発明の態様を具体的に説明する。しかしながら、以下は単に本発明の原理の適用例又は実例であると理解されるべきである。多くの改変、並びに代替の組成物、方法及びシステムが本発明の精神及び範囲を逸脱することなく当業者によって工夫されることができる。添付の特許請求の範囲は、そのような改変及びアレンジをカバーすることを意図するものである。したがって、本発明は具体的に上述されているが、以下の実施例は、現在何が本発明の最も実践的で好ましい態様であるかに関連して更なる詳細を提供するものである。
【実施例１】
【００４０】
ホップのＣＯＸ−２阻害活性
ホップの超臨界２酸化炭素抽出により、９１重量％のα酸が生じた。その中で、主要なα酸はフムロンであることがＨＰＬＣによって証明された。この抽出物中のβ酸の量は３．２重量％であることが証明され、イソ-α酸の量は約３重量％であった。この抽出物には、典型的なホップの粉末又は抽出物中に通常見られるエッセンシャルオイルが実質的になかった。
【００４１】
ＨＰＬＣによるホップ抽出物成分：
α酸 ８８重量％
β酸 ３．２重量％
イソ−α酸 ３重量％
全α酸 ９１重量％（α及びイソ−α）
この抽出物をＤＭＳＯに溶解し、上記プロトコールにしたがい試験した。試験物質のＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２活性に対する効果を表１〜３に詳述した。表１〜３の結果は％対照として表し、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝４）として示した。これからＩＣ５０値を計算した（表３）。
【００４２】
【表１】
【００４３】
【表２】
【００４４】
説明のため、ｌｏｇＭは試験化合物のモル濃度のｌｏｇを意味する。例えば、１０−９はナノモル濃度のｌｏｇであり、１０−６はマイクロモル濃度のｌｏｇである、など。ホップ抽出物及びイブプロフェンの値は、％対照（これはそこに何も加えていないＤＭＳＯ溶媒である）に基づいている。
【００４５】
表１及び表２からわかるように、ＣＯＸ−１を５０％軽減させるのにやや多量のホップ抽出物が必要である（ＩＣ５０は１０−３〜１０−４である）が、ＣＯＸ−２については、５０％軽減させるのに必要な濃度は１０−６である（ＩＣ５０は１．４×１０−６μＭであった）。この９１重量％のα酸ホップ抽出物がＣＯＸ−１を５０％軽減させるにはＣＯＸ−２活性を５０％軽減させるのに必要な濃度の約１００倍必要である。比較のため、イブプロフェンも含まれている。ホップ抽出物は、イブプロフェンよりもＣＯＸ−２の阻害に関して強力で選択的であった。
【００４６】
【表３】
【００４７】
表３は、超臨界２酸化炭素抽出に由来する９１重量％のα酸を含有するホップ抽出物と、非選択的ＣＯＸインヒビターであるアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン及びインドメタシンに加えて、処方薬ＣＯＸ−２選択的インヒビターであるロフェコキシブ及びセレコキシブを含めた他の公知のＣＯＸインヒビターとの比較である。上記データからわかるように、ＷＨＭＡプロトコールにしたがって試験した場合、ホップ抽出物は選択的で強力なＣＯＸ−２インヒビターである。このホップ抽出物のＩＣ５０ ＣＯＸ−２濃度は約１．４μＭであり、多くの非ステロイド系抗炎症薬の薬理作用の範囲内である。一方、ＩＣ５０ ＣＯＸ−１濃度は約１１０μＭであった。したがって、比は０．０１２７、即ち１：９０であった。
【００４８】
【表４】
【００４９】
表４は、特別なホップ抽出物に関するＩＣ８０データを、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２を非常に低濃度で低下させる強力な非選択的ＮＳＡＩＤであるインドメタシンと比較して含む。上記表４からわかるように、ＣＯＸ−２に対するＩＣ８０は約８５μＭであり、ＩＣ８０ ＣＯＸ−２／１比は約０．０９μＭであり、比は約１：１１である。インドメタシンほど強力ではないが、ＣＯＸ−２に対する選択性は非常に高い。
【００５０】
上記実験に用いた樹脂はＣＯＸ−２酵素を有意に阻害し、ＣＯＸ−１型にはほとんど作用を及ぼさなかったが、このような樹脂は粉末にすることなく医薬剤形に使用するのが困難である。粉末にすると、さまざまな賦形剤を担体として用いることができ、樹脂の効能を希釈する傾向にある。それによってＩＣ５０又はＩＣ８０が約５０％減少し、使用すべきα酸及びイソ-α酸の種々の混合物を可能にする。
【実施例２】
【００５１】
粉末にしたホップ樹脂によるＣＯＸ−２阻害
マルトデキストリン及びケイ酸カルシウムを用いて、ジャケット付強力ミキサー中でホップ樹脂を粉末にする。得られた粉末をＨＰＬＣで解析し、以下の主要成分が生じたことを見出した：
ＨＰＬＣによるホップ粉末成分：
α酸 ２０重量％
イソ−α酸 ９．４重量％
β酸 ８重量％
この粉末を、ＣＯＸ−２をＬＰＳ（リポ多糖）で誘導し、ＣＯＸ−２活性のためにＰＧＥ−２を測定することによって、全血中の細胞株においてＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１阻害について試験した。ＣＯＸ−１活性はＴｘＢ２（トロンボキサンＢ２）を測定することによって評価した。ＣＯＸ−２及びＣＯＸ−１に対するＩＣ５０の結果は以下の通りである：
IC50 COX-2 IC50COX-1 IC50 COX-2/IC50 COX-1
１μｇ／ｍｌ ３０μｇ／ｍｌ ０．０３３（１：３０）
【実施例３】
【００５２】
ホップ製剤対非選択的ＣＯＸインヒビターの胃粘膜びらん
本実施例は、ホップ製剤対アスピリンなどの伝統的な非選択的ＣＯＸインヒビターＮＳＡＩＤによる胃粘膜びらんの軽減を立証するためのものである。３０重量％のα酸（２２５ｍｇのα酸）を含む７５０ｍｇのホップ抽出物粉末を含有する錠剤の経口製剤を、１回の盲目、並行群、多用量試験において４０人の被験者に投与する。患者をホップ単独か又は１日あたり１，０００ｍｇのアスピリンを４日間の治療に無作為に割り当てる。最初の用量後４時間、そして試験第４日の最終投与後３時間行われる胃十二指腸刺激の内視鏡的評価に基づいて評価を行なう。全ての被験者が正常な健常胃十二指腸粘膜をベースラインで有していることを確実にするために、被験者を無作為抽出する前にやはり内視鏡的評価を行なう。
【００５３】
胃及び十二指腸の障害の程度及び重篤度を内視鏡検査を用いて評価する。胃及び十二指腸を内視鏡検査するあいだ、粘膜下出血、びらん、及び潰瘍形成の数及び部位を内視鏡検査医によって決定する。この発見に基づき、出血性損傷をスケール０〜４に格付けし、びらん性損傷を別のスケール０〜４に格付けする。胃と十二指腸は別々に格付けする。上記試験条件下で、内視鏡評価はホップ製剤が実質的に胃粘膜びらんを示さないことが予想されるが、アスピリン製剤は顕著な胃粘膜下出血及び全体的な胃粘膜びらんを示した。２群間の差は統計的に有意であることが予想される。アスピリンと比較したホップ製剤による胃粘膜びらんの軽減は、ＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２への選択性に関連していると考えられる。
【００５４】
本発明を好ましい態様又は具体的な態様に関連して上記しているが、これらの態様は本発明を網羅するもの又は限定するものであることを意図するものではなく、むしろ、本発明は、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれる代替物、改変物、又は等価物をカバーすることを意図するものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬的に有効量のα酸、０．５重量％〜１０重量％のβ酸、及び１重量％未満のエッセンシャルオイルを含んだホップ抽出物を含む、抗炎症組成物。
【請求項２】
α酸及びβ酸がホップコーンフラワーに由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
α酸がフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、ジヒドロアドフムロン、及びそれらの混合物から成る群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン、ジヒドロ−イソ−アドフムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるイソ−α酸を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
イソ−α酸がトランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるメンバーを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
α酸が７５重量％〜９９．５重量％で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ホップ抽出物に実質的にエッセンシャルオイルがない、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
フラボノイド又はポリフェノール化合物を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
ホップ抽出物が８０重量％より多いα酸及び１０重量％以下のイソ−α酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
医薬担体を更に含み、剤形が栄養送達のための錠剤、カプセル、又は坐剤の形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
徐放性製剤である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１２】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０２〜約０．０５である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３のホップ抽出物を含み、ホップ抽出物は１重量％未満のエッセンシャルオイルを含む、抗炎症組成物。
【請求項１５】
ホップ抽出物が、ホップコーンフラワーに由来するα酸及びβ酸を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ホップ抽出物に実質的にβ酸がない、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
α酸がフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、テトラヒドロ−α酸、及びそれらの混合物から成る群より選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるイソ−α酸を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
イソ−α酸が、トランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるメンバーを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
ホップ抽出物が、α酸を約６０重量％〜９９．５重量％の量で含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２１】
ホップ抽出物が、β酸を約０．５重量％〜１０重量％の量で含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２２】
ホップ抽出物に実質的にエッセンシャルオイルがない、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２３】
ホップ抽出物がフラボノイド又はポリフェノール化合物を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２４】
ホップ抽出物が、８０重量％より多いα酸及び１０重量％以下のイソ−α酸を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２５】
医薬担体を含み、剤形が栄養送達のための錠剤、カプセル、又は坐剤の形態である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２６】
徐放性製剤である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
ホップ抽出物が医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２８】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０２〜０．０５である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２９】
温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える方法であって：医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を製剤化すること；及びホップ抽出物を炎症症状が出ている温血動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項３０】
投与工程が経口送達による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
投与工程が経粘膜送達による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
投与工程が非経口送達による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１３〜０．０５である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える方法であって：ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を製剤化すること；及びホップ抽出物を炎症症状が出ている温血動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項３６】
投与工程が経口送達による、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
投与工程が経粘膜送達による、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
投与工程が非経口送達による、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ホップ抽出物が医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項１】
医薬的に有効量のα酸、０．５重量％〜１０重量％のβ酸、及び１重量％未満のエッセンシャルオイルを含んだホップ抽出物を含む、抗炎症組成物。
【請求項２】
α酸及びβ酸がホップコーンフラワーに由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
α酸がフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、ジヒドロアドフムロン、及びそれらの混合物から成る群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン、ジヒドロ−イソ−アドフムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるイソ−α酸を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
イソ−α酸がトランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるメンバーを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
α酸が７５重量％〜９９．５重量％で存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
ホップ抽出物に実質的にエッセンシャルオイルがない、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
フラボノイド又はポリフェノール化合物を更に含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
ホップ抽出物が８０重量％より多いα酸及び１０重量％以下のイソ−α酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
医薬担体を更に含み、剤形が栄養送達のための錠剤、カプセル、又は坐剤の形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
徐放性製剤である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１２】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０２〜約０．０５である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３のホップ抽出物を含み、ホップ抽出物は１重量％未満のエッセンシャルオイルを含む、抗炎症組成物。
【請求項１５】
ホップ抽出物が、ホップコーンフラワーに由来するα酸及びβ酸を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ホップ抽出物に実質的にβ酸がない、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１７】
α酸がフムロン、コフムロン、アドフムロン、ジヒドロフムロン、テトラヒドロ−α酸、及びそれらの混合物から成る群より選択される、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１８】
イソ−フムロン、イソ−コフムロン、イソ−アドフムロン、ジヒドロ−イソ−フムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるイソ−α酸を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１９】
イソ−α酸が、トランス−イソ−フムロン、シス−イソ−フムロン、トランス−イソ−コフムロン、シス−イソ−コフムロン、シス−イソ−アドフムロン、トランス−イソ−アドフムロン、及びそれらの組み合わせから成る群より選択されるメンバーを含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
ホップ抽出物が、α酸を約６０重量％〜９９．５重量％の量で含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２１】
ホップ抽出物が、β酸を約０．５重量％〜１０重量％の量で含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２２】
ホップ抽出物に実質的にエッセンシャルオイルがない、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２３】
ホップ抽出物がフラボノイド又はポリフェノール化合物を更に含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２４】
ホップ抽出物が、８０重量％より多いα酸及び１０重量％以下のイソ−α酸を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２５】
医薬担体を含み、剤形が栄養送達のための錠剤、カプセル、又は坐剤の形態である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２６】
徐放性製剤である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
ホップ抽出物が医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含む、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２８】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０２〜０．０５である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２９】
温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える方法であって：医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含むホップ抽出物を製剤化すること；及びホップ抽出物を炎症症状が出ている温血動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項３０】
投与工程が経口送達による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
投与工程が経粘膜送達による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
投与工程が非経口送達による、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
ホップ抽出物のＷＨＭＡ ＩＣ５０ＣＯＸ−２／ＩＣ５０ ＣＯＸ−１比が約０．０１３〜０．０５である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
温血動物の炎症を軽減させ、胃粘膜びらんを最小限に抑える方法であって：ＷＨＭＡ ＩＣ５０ ＣＯＸ−２対ＣＯＸ−１比が約０．０１１〜約０．３３３であるホップ抽出物を製剤化すること；及びホップ抽出物を炎症症状が出ている温血動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項３６】
投与工程が経口送達による、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
投与工程が経粘膜送達による、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
投与工程が非経口送達による、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】
ホップ抽出物が医薬的に有効量のα酸及び０．５重量％〜１０重量％のβ酸を含む、請求項３５に記載の方法。
【公表番号】特表２００６−５１５６２１（Ｐ２００６−５１５６２１Ａ）
【公表日】平成１８年６月１日（２００６．６．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５００８９３（Ｐ２００６−５００８９３）
【出願日】平成１６年１月９日（２００４．１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０００６１３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６２６１１
【国際公開日】平成１６年７月２９日（２００４．７．２９）
【出願人】（５０５２６１４５０）リポプロテイン・テクノロジーズ・インコーポレーテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年６月１日（２００６．６．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１月９日（２００４．１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０００６１３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６２６１１
【国際公開日】平成１６年７月２９日（２００４．７．２９）
【出願人】（５０５２６１４５０）リポプロテイン・テクノロジーズ・インコーポレーテッド (1)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]