抗老化化粧料
【課題】 加齢皮膚のシワやはり、弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持するのに有用な抗老化化粧料を提供する。
【解決手段】
（１）下記の（Ａ）〜（Ｄ）を含有することを特徴とする抗老化化粧料。
（Ａ）コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物
（Ｂ）エストロゲン様作用剤
（Ｃ）活性酸素消去剤
（Ｄ）抗炎症剤
（２）前記（Ｂ）のエストロゲン様作用剤として、特にダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる１種以上を用い、（Ｃ）の活性酸素消去剤として、特にワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物から選ばれる１種以上を用い、（Ｄ）の抗炎症剤として、特にヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物から選ばれる１種以上を用いる抗老化化粧料。
【解決手段】
（１）下記の（Ａ）〜（Ｄ）を含有することを特徴とする抗老化化粧料。
（Ａ）コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物
（Ｂ）エストロゲン様作用剤
（Ｃ）活性酸素消去剤
（Ｄ）抗炎症剤
（２）前記（Ｂ）のエストロゲン様作用剤として、特にダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる１種以上を用い、（Ｃ）の活性酸素消去剤として、特にワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物から選ばれる１種以上を用い、（Ｄ）の抗炎症剤として、特にヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物から選ばれる１種以上を用いる抗老化化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗老化化粧料に関する。詳しくは、コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物、エストロゲン様作用剤、活性酸素消去剤、及び抗炎症剤を併用することにより、皮膚のシワ（皺）やはり（張り）、弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持する抗老化化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化皮膚では、線維芽細胞の活性低下に伴い、真皮マトリックス成分であるコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の質的、量的な変化が起こり、シワや皮膚弾性の低下といった老化症状が見られる。真皮マトリックスの９０％以上を占めるコラーゲンのシワに対する影響は大きい。これまで、これら老化症状の予防のため、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラーゲン産生促進剤などが検討されてきた（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５参照）。
【０００３】
また、皮膚は常に外界と生体内からの酸化障害に晒されている。紫外線、放射線、化学物質、乾燥などの外的障害と生体内の細胞代謝によって生じる活性酸素・フリーラジカルは、皮膚老化の要因の一つと考えられる。紫外線によって産生された活性酸素・フリーラジカルは、脂質の過酸化、ＤＮＡ障害、蛋白変性、代謝異常などの光酸化障害をもたらすとともに、急逝・慢性炎症、細胞外マトリックスの変性を引き起こし、シワやたるみに繋がると考えられている。これまで、活性酸素消去剤も多数検討されてきた（特許文献６、特許文献７参照）。
【０００４】
一方、エストロゲン及びエストロゲン様作用化合物が、皮膚層の厚みを増加させ、老化する皮膚におけるシワの形成を減少させることが既知である。閉経後に起こる皮膚乾燥、皮膚弾力性及びふくらみの損失のような皮膚における変化は、エストロゲン産生の不足に起因する。エストロゲン療法は、老化する皮膚に関係するこれらの変化の多くを予防するか又は遅らせる。そのため植物抽出物からエストロゲン様作用を有する化合物が検討されてきた（非特許文献１、特許文献８、特許文献９）。
【０００５】
しかしながら、これまで検討されてきた抗老化化粧料は、加齢皮膚のシワやはり、弾力保持作用、うるおいのある若々しい肌を維持するための実際の製品への配合において、効果、配合量、安定性、安全性の面から有効な結果を得るに至っていない。以下に従来の公知文献を挙げる。
【０００６】
【非特許文献１】Creidら、Effect of a conjugated estrogen cream on aging facial skin,Maturitas,１９,P.２１１,１９９４
【特許文献１】特開平１０−４５６１５
【特許文献２】特開２００３−３４６３１
【特許文献３】特開２００１−１５８７２８
【特許文献４】特開２００１−３１６２７５
【特許文献５】特開２００２−２９９２３
【特許文献６】特開２００４−１６８７３２
【特許文献７】特開２００４−２３８３１０
【特許文献８】特開２００２−２９９８０
【特許文献９】特開２００４−６７５９０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、加齢皮膚のシワやはり、弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持するのに有用な抗老化化粧料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、このような状況に鑑みて、皮膚のシワの改善、はり（張り）や弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持する抗老化化粧料について鋭意研究を重ねた結果、（Ａ）高いコラーゲン産生促進作用を有するクロレラ抽出物、（Ｂ）主としてダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物等からから選ばれる１種以上からなるエストロゲン様作用剤、（Ｃ）主としてワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物等からから選ばれる１種以上からなる活性酸素消去剤及び（Ｄ）主としてドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物等からから選ばれる１種以上からなる抗炎症剤を配合した化粧料に優れた抗老化効果を見出し、発明を完成するに至った。
【０００９】
本願発明は下記の請求項１〜請求項４により構成されている。
請求項１： 下記の（Ａ）〜（D）を含有することを特徴とする抗老化化粧料。
（Ａ）コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物
（Ｂ）エストロゲン様作用剤
（Ｃ）活性酸素消去剤
（Ｄ）抗炎症剤
請求項２： エストロゲン様作用剤が、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１記載の抗老化化粧料。
請求項３： 活性酸素消去剤が、ワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
請求項４： 抗炎症剤が、ヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
【発明の効果】
【００１０】
本願発明に係る抗老化化粧料によれば、（Ａ）本発明の高いコラーゲン産生促進作用を有するクロレラ抽出物、（Ｂ）主としてダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物等から選ばれる１種以上のエストロゲン様作用剤、（Ｃ）主としてワレモコウ抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物等からなる１種以上の活性酸素消去剤及び（Ｄ）主としてドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物等からなる１種以上の抗炎症剤を配合したから、これらの相乗効果により、皮膚の老化の防止・改善、弾力のある、しわやたるみのない、若々しい肌の状態を維持することができるという効果を有する。
以下、本発明について詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で使用するクロレラ抽出物とは、緑藻網クロロコックム目クロレラ属、クロレラ（Chlorella vulgaris）の抽出物である。クロレラ抽出物は、クロレラを水で、加温抽出し、濃縮後、活性炭処理し、３０％１，３−ブチレングリコール溶液としたものである。
【００１２】
本発明で使用するエストロゲン様作用剤は、一般に女性ホルモン様作用を有するとして広く使用されているもので良く、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物である。抽出法として、通常イソフラボノイド含有量を高めた抽出物を使用する。抽出方法は、特に限定されないが、以下の方法にて製造したものを使用した。
【００１３】
本発明で使用するダイズ抽出物とは、マメ科（Leguminosae）、ダイズ属（Glycine）ダイズ（Glycine max）の種子の抽出物である。ダイズ抽出物は、ダイジン、ゲニスチンなどのイソフラボノイドを含有し、エストロゲン様作用を有することは、広く知られている。通常カラム処理して、イソフラボン濃度を高めた抽出物を使用する。
【００１４】
本発明で使用するカッコン抽出物とは、マメ科（Leguminosae）、クズ属（Pueraria）、クズ（Pueraria lobata）の根の抽出物である。カッコン抽出物は、プエラリン、ダイゼインなどのイソフラボンを含有し、エストロゲン作用を有することは、広く知られている。通常カラム処理して、イソフラボン濃度を高めた抽出物を使用する。
【００１５】
本発明で使用するプエラリア・ミリィフィカ抽出物とは、マメ科（Leguminosae）、クズ属（Pueraria）、Pueraria milificaの根の抽出物である。プエラリア・ミリィフィカ抽出物は、プエラリン、ダイジン、ダイゼインなどのイソフラボノイドを含有し、エストロゲン作用を有することは、広く知られている。通常カラム処理して、イソフラボン濃度を高めた抽出物を使用する。
【００１６】
本発明において用いるレッドクローバー（Trifolium pretense）とは、マメ科の一種で、日本ではアカツメクサと呼ばれ、その成分にはポリフェノールの一種であるイソフラボンが含まれ、高いエストロゲン様作用を有することが知られているものである。
【００１７】
本発明で使用する活性酸素消去剤は、一般に広く使用されている活性酸素消去作用が期待されるものの中で、効果及び安全性の高い、ワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物である。
【００１８】
本発明で使用するワレモコウ抽出物とは、バラ科（Rosaceae）、ワレモコウ属（Sanguisorba）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis）の根茎の抽出物である。
【００１９】
本発明で使用するボタンピ抽出物とは、ボタン科（Paeoniaceae）、ボタン属（Paeonia）、ボタン（Paeonia suffruticosa）の根皮の抽出物である。
【００２０】
本発明で使用するオリーブ葉抽出物とは、モクセイ科（Oleaceae）、オリーブ属（Olea）、オリーブ（Olea europaea）の葉の抽出物ある。
【００２１】
本発明において用いる茶類としては、緑茶（煎茶、焙じ茶、玉露、かぶせ茶、てん茶等）、ウーロン茶，紅茶等の不発酵茶、半発酵茶、発酵茶を挙げることができる。
【００２２】
本発明で使用する抗炎症剤は、主としてヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物等である。これらは、通常、水抽出後、活性炭処理したものを使用する。
【００２３】
本発明で使用するドクダミ抽出物とは、ドクダミ科（Saururaceae）、ドクダミ属（Houttuynia）、ドクダミ（Houttuynia cordata）の全草の抽出物である。
【００２４】
本発明で使用するアルテア抽出物とは、アオイ科（Malvaceae）、タチアオイ属（Althaea）、ビロードアオイ（Althaea officinalis）の根の抽出物である。
【００２５】
本発明で使用するアロエベラ抽出物とは、ユリ科（Liliaceae）、アロエ属（Aloe）、アロエベラ（Aloe vera L.）の葉の葉肉の抽出物である。
【００２６】
次に製造例を挙げて本発明に使用した抽出物を詳細に説明する。
（製造例１）クロレラ抽出物の製造
クロレラ１００ｇに精製水３０００ｇを加え、７０℃にて５時間抽出し、冷後、ろ過する。ろ液を減圧下、１０００ｇまで濃縮する。濃縮液に活性炭を加え、５０℃にて、脱色脱臭する。ろ過後、ろ液に３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇを加え、更にろ過し、クロレラ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．８％であった。
【００２７】
（製造例２）ダイズ抽出物の製造
ダイズ１００ｇに精製水１０００ｇを加え、１昼夜静置した後、さらに精製水２０００ｇを加え、８０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過する。ろ液を減圧下、１００ｇまで濃縮する。濃縮液を合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填したカラムに通液する。３０vol％エタノール溶液にて洗浄後、５０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固し、５０％１，３−ブチレングリコール溶液１００ｇを加えて溶解した後、ろ過してダイズ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、０．５６％であった。
【００２８】
（製造例３）カッコン抽出物の製造
カッコン１００ｇに無水エタノール２０００ｍＬを加え、室温で５日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下濃縮乾固した後、５０vol％エタノール溶液２００ｍＬに溶解する。溶解液を合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填し、５０vol％エタノールで平衡にしたカラムに通液する。５０vol％エタノール溶液にて洗浄後、７０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固し、５０％１，３−ブチレングリコール溶液３００ｇを加えて溶解した後、ろ過してカッコン抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１.５３％であった。
【００２９】
（製造例４）プエラリア・ミリィフィカ抽出物の製造
プエラリア・ミリィフィカ１００ｇに３０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、室温にて３日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、２００ｇまで濃縮する。濃縮液を合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填したカラムに通液する。３０vol％エタノール溶液にて洗浄後、７０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固し、乾固物を５０％１，３−ブチレングリコール３００ｇに溶解した後、ろ過してプエラリア・ミリィフィカ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．３１％であった。
【００３０】
（製造例５）レッドクローバー抽出物の製法
レッドクローバー１００ｇに３０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を５０％１，３−ブチレングリコール２００ｇに溶解した後、ろ過してレッドクローバー抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．８４％であった。
【００３１】
（製造例６）ワレモコウ抽出物の製法
ワレモコウ１００ｇに５０vol％エタノール溶液１０００ｇを加え、室温にて３日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してワレモコウ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．７４％であった。
【００３２】
（製造例７）ボタンピ抽出物の製法
ボタンピ１００ｇに５０％エタノール溶液２０００ｇを加え、室温にて３日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してボタンピ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．１３％であった。
【００３３】
（製造例８）オリーブ葉抽出物の製法
オリーブ葉１００ｇに５０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してオリーブ葉抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．５２％であった。
【００３４】
（製造例９）茶抽出物の製法
緑茶１００ｇに５０vol％エタノール２０００ｇを加え、室温にて３日間抽出後、これをろ過する。ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後ろ過して茶葉抽出物を得る。製品の蒸発残留物は、１．９５％であった。
【００３５】
（製造例１０）ドクダミ抽出物
ドクダミ１００ｇに水３０００ｇを加え、７０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液に活性炭を加え、５０℃にて処理する。ろ過後、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してドクダミ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．３８％であった。
【００３６】
（製造例１１）アルテア抽出物
アルテア１００ｇに水２０００ｇを加え、７０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液に活性炭を加え、５０℃にて処理する。ろ過後、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してアルテア抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．７５％であった。
【００３７】
（製造例１２）アロエベラ抽出物
アロエベラの生の葉肉を圧搾して得られる液汁に活性炭を加え、アロインを吸着除去した後、減圧下濃縮する。濃縮液にイソプロピルアルコールを加え、アロエベラ多糖類を凝集させる。凝集物をろ取し、乾燥してアロエベラ多糖類粉末を得る。アロエベラ多糖類粉末を３０％１，３−ブチレングリコールに０．５％溶解し、アロエベラ抽出物を製する。
【００３８】
本発明の抗老化化粧料は、皮膚外用剤、浴用剤にも配合できるが、その配合量は特に規定するものではない。配合する製品の種類、性状、品質、期待する効果の程度により異なるが、乾燥固形物に換算して好ましくは、０．０００１％〜０．５％、特に０．００１％〜０．２％が効果の面から好ましい。
【００３９】
本発明の抗老化化粧料は、必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲で、医薬品、医薬部外品、化粧品などに使用される成分や添加剤を併用して製造することができる。例えば、精製水、低級アルコール、多価アルコール、油脂、ロウ、鉱物油、脂肪酸、粉体、金属セッケン、ｐＨ調整剤、界面活性剤、増粘剤、色素、植物・動物・微生物原料由来の抽出物、ビタミン類、アミノ酸類、ホルモン類、殺菌剤、防腐剤、角質溶解剤、酵素、清涼剤、安定化剤、金属イオンキレート剤、血行促進剤、美白剤、紫外線防止剤、抗酸化剤、精油、消臭剤、香料等適宜用いることができる。
【００４０】
本発明の抗老化化粧料は、一般皮膚化粧料に限定されるものではなく、医薬品、医薬部外品、薬用化粧料等を包含するものである。本発明の皮膚外用剤組成物の剤型は、可溶化系、乳化系、粉末分散系等何れでもよく、用途も、化粧水、乳液、クリーム、パック等の基礎化粧料、ファンデーション等のメークアップ化粧料、シャンプー、リンス、石けん、ボディーシャンプーなどのトイレタリー製品、浴用剤等を問わない。
【００４１】
次に本発明で使用する各抽出物の各スクリーニング試験について説明する。
（参考試験１）コラーゲン産生促進作用の評価
クロレラ抽出物のコラーゲン産生促進作用の試験には、製造例１で示した活性炭処理後の状態を凍結乾燥したものをＰＢＳ（−）にて０．０１％溶液としたものを試験試料とした。正常ヒト皮膚線維芽細胞を０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭを用いて、９６穴プレートに２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、２４時間培養後、ＰＢＳ（−）にて洗浄後、試料を添加した無血清培地に交換し、４８時間培養する。培養後、培養上清中に含まれるＩ型コラーゲンをＥＬＩＳＡ法にて定量した。１００μＬの培養上清をＥＬＩＳＡ用プレートに添加し、１８時間室温に保管した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄後、１％スキムミルク／ＰＢＳ−Ｔで２時間ブロッキングした。抗ヒトＩ型コラーゲン抗体、ペルオキシダーゼ標準抗ラットＩｇＧ抗体で処理し、ペルオキシダーゼ用発色キットを用いて発色させた。４５０ｎｍの吸光度から培養上清中に含まれるＩ型コラーゲン量を求め、単位蛋白当たりとして算出した。蛋白定量は、Ｌｏｗｒｙ法を用いた。コントロールのＩ型コラーゲン量を１００とした相対値として評価した。結果は、１５２．３％であった。
【００４２】
（参考試験２）エストロゲン様作用の評価
エストロゲン様作用の測定は、抽出物についてエストロゲン様作用活性をエストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べる方法（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２８Ａ，５９５−６０２，１９９２）で測定した。ヒト乳がん細胞由来のＭＣＦ−７細胞を５％ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含有するＥａｇｌｅｓ ＭＥＭ（フェノールレッド除去）を用いて、５×１０４ ｃｅｌｌ/ｍＬの密度で浮遊させた細胞懸濁液０．１ｍＬを９６穴マイクロカルチャープレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。その後各濃度の試料をカルチャープレートに添加し、６日間培養を行なった。培養後ＭＴＴ還元法にて細胞濃度の測定を行い、エストロゲン様作用とした。本発明で使用するダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物には、高いエストロゲン様作用が確認された。
【００４３】
（参考例３）
活性酸素消去能の測定は、製造例５〜８の抽出物を用いて、ＳＯＤ様活性及びＤＰＰＨラジカル消去能を測定した。ＳＯＤ様活性は、ＮＢＴ法（ＸＯＤ系と組み合わせたBeauchampsらの方法 Anal.Bioche.,４４、２７９〜２８７、１９７１）に従った。ＤＰＰＨラジカル（ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル）消去能の測定は、ＤＰＰＨラジカル（Sigma社）をエタノールに溶解し０．１ｍＭ溶液とし、０．１ｍＭＤＰＰＨラジカル溶液３ｍＬを試験管にとり、各濃度に精製水にて希釈した試験溶液０．５ｍＬを加え、室温で１０分間放置後、波長５１７ｎｍで吸光度を測定する方法で行った。試験結果を表２に示す。
【００４４】
【表１】
【００４５】
（試験例４）ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の評価
ヒアルロニダーゼは、結合組織に分布するヒアルロン酸の加水分解酵素であり、炎症時において活性化され、結合組織のマトリックスを破壊し、炎症系の細胞及び血管の透過性を高める役割を演じると考えられている。また起炎酵素として知られており、抗炎症剤や抗アレルギー剤により阻害されることも知られている。従って、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用は、抗アレルギー活性の一つとされている。陽性対照として、阻害活性が既に知られているクロモグリク酸ナトリウム（藤沢薬品工業製）を試験に用いた。試験方法は、Morgan-Elson法を応用する方法にて行なった。試料の適当量を０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．５に調製）にて希釈した溶液０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ（Sigma社製，TypeIV-Ｓ，最終酵素活性を４００Nfunit/ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃にて２０分間で放置後、活性化剤としてcompound４８/８０（Sigma社製）の酢酸緩衝液溶液（０．１mg/ｍＬ）０．２ｍＬを加え、更に３７℃にて２０分間放置する。これにヒアルロン酸カリウム（和光純薬工業製）溶液（最終濃度０．４mg/ｍＬ）０．５ｍＬを加え、３７℃にて４０分間放置する。次に、氷上にて０．４Ｎ水酸化ナトリウム溶液０．２ｍＬを加えて反応を停止させた後、ホウ酸溶液（ホウ酸４．９５gに水５０ｍＬを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液にてｐＨ９．１に調製した後、水を加えて１００ｍＬとする）０．２ｍＬを加え、混和後沸騰水浴中にて３分間加熱し酵素を失活させる。次に氷上にて室温まで冷却し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド試薬（和光純薬工業製、１０ｇに１０Ｎ塩酸溶液１２．５ｍＬ、酢酸８７．５ｍＬを混合溶解し、使用直前に酢酸にて１０倍に希釈する）６ｍＬを加え、３７℃にて２０分間放置した後、５８５ｎｍにて吸光度を測定する。なお、試料溶液の代わりに酢酸緩衝液を入れたものを対照とし、各資料溶液、対照について酵素を入れないものをブランクとし、次式により阻害活性率を求め、試料濃度を調整することにより５０％阻害活性濃度（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率（％）＝〔１−（試料溶液の吸光度−試料溶液ブランクの吸光度）／（対照溶液の吸光度−対照溶液ブランクの吸光度）〕×１００
本発明にて使用するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物には、高いヒアルロニダーゼ活性阻害作用が確認された。
【００４６】
以下に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がこれら実施例にのみ限定されるものではない。
（実施例１〜２）
以下に示す処方に従って、化粧水を作成した。即ち、処方成分を室温で攪拌し、可溶化して化粧水を得た。
（成分） （重量％）
（１）１，３−ブチレングリコール ６．０％
（２）グリセリン ５．０％
（３）必須成分又は比較成分（表２） ５．０％
（４）ペンチレングリコール ３．０％
（５）フェノキシエタノール ０．５％
（６）精製水 残余
【００４７】
【表２】
【００４８】
（実施例３）
茶色モルモット（３０週齢）を用いた光老化モデルを用いて、実施例１、２及び比較例１〜７の化粧水を検体として、くすみ改善を試験した。茶色モルモット１群５匹の背部を剃毛し、これに０．５×ＭＥＤ（最小紅斑濃度）の紫外線を５日間照射してくすみモデルを作成した。モルモットの背部２cm×２cmの塗布部位を設け、検体０．０１ｍＬ／回／日、これを８週間塗布した。対照例として、実施例化粧水の必須成分を精製水に置換したものを用いた。光老化改善効果は、最後の塗布の２４時間後に対照群の平均のくすみ具合と比較して、＋＋：著しく改善、＋：明らかに改善、±：わずかに改善、−：改善せずの基準で各モルモット毎に判定した。結果を表２に示す。これにより、本発明の抗老化用化粧料である実施例１及び２の化粧水は、比較例の化粧水に比べ、光老化改善効果に優れていることがわかる。
【００４９】
【表３】
【００５０】
（実施例４）皮膚の抗老化試験
皮膚の抗老化効果を調べるために、上記実施例１，２及び比較例２で用いた抽出物を配合したクリームを用いて、以下の方法により、しわに対する改善効果と、肌のはり、たるみに対する改善効果について評価試験を行った。
【００５１】
無作為に抽出した年齢３０〜５０歳の健常な女性８０名を４グループに分け被験者とし、必須成分及び比較成分を含むクリーム及び必須成分の代わりに精製水を含む対照例クリームをそれぞれ顔面皮膚に連日２ケ月使用した後、しわに対する改善効果と肌のはり、たるみに対する改善効果について調べた。
【００５２】
（実施例５〜６）クリーム
下記成分（１）〜（１０）、別に下記成分（１１）〜（１５）を７５℃に加温溶解しそれぞれＡ液及びＢ液とする。Ａ液にＢ液を加えて乳化し、クリームを調製した。
（成分） （重量％）
（１）ホホバ油 ３．０％
（２）スクワラン ２．０％
（３）メチルポリシロキサン ０．５％
（４）ステアリルアルコール ０．５％
（５）セチルアルコール ０．５％
（６）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル １２．５％
（７）モノステアリン酸グリセリル ５．０％
（８）モノステアリン酸ジグリセリル １．５％
（９）モノステアリン酸デカグリセリル ３．０％
（１０）防腐剤 適量
（１１）キサンタンガム ０．１％
（１２）必須成分又は比較成分 ４．０％
（１３）１，３−ブチレングリコール ５．０％
（１４）防腐剤 適量
（１５）精製水 残余
【００５３】
「しわに対する改善効果」
目尻のしわの状態を視覚評価した。
（判定基準）
著効 ：しわがほとんどめだたなくなった。
有効 ：しわがかなり目立たなくなった。
やや有効：しわが以前より目立たなくなった。
効果なし：変化なし。
「肌のはり、たるみに対する改善効果」
肌のはり、たるみを視覚評価した。
（判定基準）
著効 ：使用前に比べ肌に非常にはりがあり、たるみがない。
有効 ：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみがない。
やや有効：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみが減少した。
効果なし：変化なし。
試験の結果を表３に示す。
【００５４】
【表４】
【００５５】
表３から明らかなように、実施例のクリームを用いた場合には、比較例のクリームを用いた場合よりも、目尻のしわ及び肌のはり、たるみの点で改善されていることが認められた。これにより、高いコラーゲン産生促進作用を有するクロレラ抽出物、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物から選ばれる１種以上のエストロゲン様作用剤、ワレモコウ抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物からなる１種以上の活性酸素消去剤及びドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物からなる１種以上の抗炎症剤を配合した化粧料に優れた抗老化効果が確認された。
【００５６】
以下にさらに、本発明の処方実施例を示す。
【００５７】
（実施例７）化粧水
下記成分（８）〜（１０）を混合溶解させＡ液とし、これとは別に下記成分（１）〜（７）及び（１１）を混合溶解させてＢ液とし、Ａ液とＢ液を均等に混合し、化粧水を調整した。
（成分） （重量％）
（１）クインスシードエキス ８．０％
（２）グリセリン ３．０％
（３）１，３−ブチレングリコール ５．０％
（４）クロレラ抽出物（製造例１） ２．０％
（５）カッコン抽出物（製造例３） １．０％
（６）ボタンピ抽出物（製造例７） １．０％
（７）アロエベラ抽出物（製造例１２） １．０％
（８）ポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸エステル １．２％
（９）エチルアルコール ５．０％
（１０） 防腐剤 適量
（１１）精製水 残余
【００５８】
（実施例８）乳液
下記成分（１）〜（１０）、別に（１１）〜（１５）及び（１７）を７５℃で加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１６）を加え、乳液を調製した。
（成分） （重量％）
（１）ホホバ油 １．０％
（２）スクワラン ２．０％
（３）ベヘニルアルコール １．０％
（４）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル ２．０％
（５）テトラグリセリン縮合シリノレイン酸 ０．１％
（６）モノオレイン酸プロピレングリコール ０．５％
（７）モノステアリン酸グリセリン １．０％
（８）モノミレスチン酸ヘキサグリセリル １．０％
（９）モノミリスチン酸デカグリセリル ０．５％
（１０）防腐剤 適量
（１１）クロレラ抽出物（製造例１） ３．０％
（１２）ダイズ抽出物（製造例２） ２．０％
（１３）オリーブ葉抽出物（製造例８） ２．０％
（１４）ドクダミ抽出物（製造例１０） １．０％
（１５）１，３−ブチレングリコール ３．０％
（１６）香料 ０．１％
（１７）精製水 残余
【００５９】
（実施例９）石けん
石けん製造の定法により下記成分を混合し製した。
（成分） （重量％）
（１）石けん素地 ５３．２％
（２）スクロール １９．４％
（３）ホホバ油 ０．２５％
（４）クロレラ抽出物（製造例１） ２．５％
（５）カッコン抽出物（製造例３） ２．０％
（６）ワレモコウ抽出物（製造例６） ２．０％
（７）アルテア抽出物（製造例１１） １．０％
（８）濃グリセリン ６．５％
（９）ヒドロキシエタンジホスホン酸 ０．１５％
（１０）常水 残余
【００６０】
（実施例１０）クレンジングジェル
下記成分（１）〜（３）、別に（４）〜（７）及び（９）を７０℃に加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて均一になるまで攪拌する。攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（８）を加えてクレンジングジェルを製した。
（成分） （重量％）
（１）モノミリスチン酸ヘキサグリセリル ２０．０％
（２）流動パラフィン ５８．８％
（３）防腐剤 適量
（４）クロレラ抽出物（製造例１） １．０％
（５）カッコン抽出物（製造例３） ０．５％
（６）オリーブ葉抽出物（製造例８） ０．５％
（７）アロエベラ抽出物（製造例１２） ０．５％
（８）濃グリセリン ５．９％
（９）ソルビトール ５．０％
（１０）香料 適量
（１１）精製水 残余
【００６１】
上記実施例７〜１０の化粧料は、いずれも皮膚の抗老化効果に優れるものであった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗老化化粧料に関する。詳しくは、コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物、エストロゲン様作用剤、活性酸素消去剤、及び抗炎症剤を併用することにより、皮膚のシワ（皺）やはり（張り）、弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持する抗老化化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化皮膚では、線維芽細胞の活性低下に伴い、真皮マトリックス成分であるコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の質的、量的な変化が起こり、シワや皮膚弾性の低下といった老化症状が見られる。真皮マトリックスの９０％以上を占めるコラーゲンのシワに対する影響は大きい。これまで、これら老化症状の予防のため、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、線維芽細胞増殖促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、コラーゲン産生促進剤などが検討されてきた（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５参照）。
【０００３】
また、皮膚は常に外界と生体内からの酸化障害に晒されている。紫外線、放射線、化学物質、乾燥などの外的障害と生体内の細胞代謝によって生じる活性酸素・フリーラジカルは、皮膚老化の要因の一つと考えられる。紫外線によって産生された活性酸素・フリーラジカルは、脂質の過酸化、ＤＮＡ障害、蛋白変性、代謝異常などの光酸化障害をもたらすとともに、急逝・慢性炎症、細胞外マトリックスの変性を引き起こし、シワやたるみに繋がると考えられている。これまで、活性酸素消去剤も多数検討されてきた（特許文献６、特許文献７参照）。
【０００４】
一方、エストロゲン及びエストロゲン様作用化合物が、皮膚層の厚みを増加させ、老化する皮膚におけるシワの形成を減少させることが既知である。閉経後に起こる皮膚乾燥、皮膚弾力性及びふくらみの損失のような皮膚における変化は、エストロゲン産生の不足に起因する。エストロゲン療法は、老化する皮膚に関係するこれらの変化の多くを予防するか又は遅らせる。そのため植物抽出物からエストロゲン様作用を有する化合物が検討されてきた（非特許文献１、特許文献８、特許文献９）。
【０００５】
しかしながら、これまで検討されてきた抗老化化粧料は、加齢皮膚のシワやはり、弾力保持作用、うるおいのある若々しい肌を維持するための実際の製品への配合において、効果、配合量、安定性、安全性の面から有効な結果を得るに至っていない。以下に従来の公知文献を挙げる。
【０００６】
【非特許文献１】Creidら、Effect of a conjugated estrogen cream on aging facial skin,Maturitas,１９,P.２１１,１９９４
【特許文献１】特開平１０−４５６１５
【特許文献２】特開２００３−３４６３１
【特許文献３】特開２００１−１５８７２８
【特許文献４】特開２００１−３１６２７５
【特許文献５】特開２００２−２９９２３
【特許文献６】特開２００４−１６８７３２
【特許文献７】特開２００４−２３８３１０
【特許文献８】特開２００２−２９９８０
【特許文献９】特開２００４−６７５９０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、加齢皮膚のシワやはり、弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持するのに有用な抗老化化粧料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、このような状況に鑑みて、皮膚のシワの改善、はり（張り）や弾力保持作用に相乗効果を発揮し、うるおいのある若々しい肌を維持する抗老化化粧料について鋭意研究を重ねた結果、（Ａ）高いコラーゲン産生促進作用を有するクロレラ抽出物、（Ｂ）主としてダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物等からから選ばれる１種以上からなるエストロゲン様作用剤、（Ｃ）主としてワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物等からから選ばれる１種以上からなる活性酸素消去剤及び（Ｄ）主としてドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物等からから選ばれる１種以上からなる抗炎症剤を配合した化粧料に優れた抗老化効果を見出し、発明を完成するに至った。
【０００９】
本願発明は下記の請求項１〜請求項４により構成されている。
請求項１： 下記の（Ａ）〜（D）を含有することを特徴とする抗老化化粧料。
（Ａ）コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物
（Ｂ）エストロゲン様作用剤
（Ｃ）活性酸素消去剤
（Ｄ）抗炎症剤
請求項２： エストロゲン様作用剤が、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１記載の抗老化化粧料。
請求項３： 活性酸素消去剤が、ワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
請求項４： 抗炎症剤が、ヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
【発明の効果】
【００１０】
本願発明に係る抗老化化粧料によれば、（Ａ）本発明の高いコラーゲン産生促進作用を有するクロレラ抽出物、（Ｂ）主としてダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物等から選ばれる１種以上のエストロゲン様作用剤、（Ｃ）主としてワレモコウ抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物等からなる１種以上の活性酸素消去剤及び（Ｄ）主としてドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物等からなる１種以上の抗炎症剤を配合したから、これらの相乗効果により、皮膚の老化の防止・改善、弾力のある、しわやたるみのない、若々しい肌の状態を維持することができるという効果を有する。
以下、本発明について詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で使用するクロレラ抽出物とは、緑藻網クロロコックム目クロレラ属、クロレラ（Chlorella vulgaris）の抽出物である。クロレラ抽出物は、クロレラを水で、加温抽出し、濃縮後、活性炭処理し、３０％１，３−ブチレングリコール溶液としたものである。
【００１２】
本発明で使用するエストロゲン様作用剤は、一般に女性ホルモン様作用を有するとして広く使用されているもので良く、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物である。抽出法として、通常イソフラボノイド含有量を高めた抽出物を使用する。抽出方法は、特に限定されないが、以下の方法にて製造したものを使用した。
【００１３】
本発明で使用するダイズ抽出物とは、マメ科（Leguminosae）、ダイズ属（Glycine）ダイズ（Glycine max）の種子の抽出物である。ダイズ抽出物は、ダイジン、ゲニスチンなどのイソフラボノイドを含有し、エストロゲン様作用を有することは、広く知られている。通常カラム処理して、イソフラボン濃度を高めた抽出物を使用する。
【００１４】
本発明で使用するカッコン抽出物とは、マメ科（Leguminosae）、クズ属（Pueraria）、クズ（Pueraria lobata）の根の抽出物である。カッコン抽出物は、プエラリン、ダイゼインなどのイソフラボンを含有し、エストロゲン作用を有することは、広く知られている。通常カラム処理して、イソフラボン濃度を高めた抽出物を使用する。
【００１５】
本発明で使用するプエラリア・ミリィフィカ抽出物とは、マメ科（Leguminosae）、クズ属（Pueraria）、Pueraria milificaの根の抽出物である。プエラリア・ミリィフィカ抽出物は、プエラリン、ダイジン、ダイゼインなどのイソフラボノイドを含有し、エストロゲン作用を有することは、広く知られている。通常カラム処理して、イソフラボン濃度を高めた抽出物を使用する。
【００１６】
本発明において用いるレッドクローバー（Trifolium pretense）とは、マメ科の一種で、日本ではアカツメクサと呼ばれ、その成分にはポリフェノールの一種であるイソフラボンが含まれ、高いエストロゲン様作用を有することが知られているものである。
【００１７】
本発明で使用する活性酸素消去剤は、一般に広く使用されている活性酸素消去作用が期待されるものの中で、効果及び安全性の高い、ワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物である。
【００１８】
本発明で使用するワレモコウ抽出物とは、バラ科（Rosaceae）、ワレモコウ属（Sanguisorba）、ワレモコウ（Sanguisorba officinalis）の根茎の抽出物である。
【００１９】
本発明で使用するボタンピ抽出物とは、ボタン科（Paeoniaceae）、ボタン属（Paeonia）、ボタン（Paeonia suffruticosa）の根皮の抽出物である。
【００２０】
本発明で使用するオリーブ葉抽出物とは、モクセイ科（Oleaceae）、オリーブ属（Olea）、オリーブ（Olea europaea）の葉の抽出物ある。
【００２１】
本発明において用いる茶類としては、緑茶（煎茶、焙じ茶、玉露、かぶせ茶、てん茶等）、ウーロン茶，紅茶等の不発酵茶、半発酵茶、発酵茶を挙げることができる。
【００２２】
本発明で使用する抗炎症剤は、主としてヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物等である。これらは、通常、水抽出後、活性炭処理したものを使用する。
【００２３】
本発明で使用するドクダミ抽出物とは、ドクダミ科（Saururaceae）、ドクダミ属（Houttuynia）、ドクダミ（Houttuynia cordata）の全草の抽出物である。
【００２４】
本発明で使用するアルテア抽出物とは、アオイ科（Malvaceae）、タチアオイ属（Althaea）、ビロードアオイ（Althaea officinalis）の根の抽出物である。
【００２５】
本発明で使用するアロエベラ抽出物とは、ユリ科（Liliaceae）、アロエ属（Aloe）、アロエベラ（Aloe vera L.）の葉の葉肉の抽出物である。
【００２６】
次に製造例を挙げて本発明に使用した抽出物を詳細に説明する。
（製造例１）クロレラ抽出物の製造
クロレラ１００ｇに精製水３０００ｇを加え、７０℃にて５時間抽出し、冷後、ろ過する。ろ液を減圧下、１０００ｇまで濃縮する。濃縮液に活性炭を加え、５０℃にて、脱色脱臭する。ろ過後、ろ液に３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇを加え、更にろ過し、クロレラ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、２．８％であった。
【００２７】
（製造例２）ダイズ抽出物の製造
ダイズ１００ｇに精製水１０００ｇを加え、１昼夜静置した後、さらに精製水２０００ｇを加え、８０℃にて８時間抽出し、冷後、ろ過する。ろ液を減圧下、１００ｇまで濃縮する。濃縮液を合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填したカラムに通液する。３０vol％エタノール溶液にて洗浄後、５０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固し、５０％１，３−ブチレングリコール溶液１００ｇを加えて溶解した後、ろ過してダイズ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、０．５６％であった。
【００２８】
（製造例３）カッコン抽出物の製造
カッコン１００ｇに無水エタノール２０００ｍＬを加え、室温で５日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下濃縮乾固した後、５０vol％エタノール溶液２００ｍＬに溶解する。溶解液を合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填し、５０vol％エタノールで平衡にしたカラムに通液する。５０vol％エタノール溶液にて洗浄後、７０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固し、５０％１，３−ブチレングリコール溶液３００ｇを加えて溶解した後、ろ過してカッコン抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１.５３％であった。
【００２９】
（製造例４）プエラリア・ミリィフィカ抽出物の製造
プエラリア・ミリィフィカ１００ｇに３０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、室温にて３日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、２００ｇまで濃縮する。濃縮液を合成吸着体ダイヤイオンＨＰ−２０を充填したカラムに通液する。３０vol％エタノール溶液にて洗浄後、７０vol％エタノール溶液にて溶出し、溶出液を減圧乾固し、乾固物を５０％１，３−ブチレングリコール３００ｇに溶解した後、ろ過してプエラリア・ミリィフィカ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．３１％であった。
【００３０】
（製造例５）レッドクローバー抽出物の製法
レッドクローバー１００ｇに３０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を５０％１，３−ブチレングリコール２００ｇに溶解した後、ろ過してレッドクローバー抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．８４％であった。
【００３１】
（製造例６）ワレモコウ抽出物の製法
ワレモコウ１００ｇに５０vol％エタノール溶液１０００ｇを加え、室温にて３日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してワレモコウ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．７４％であった。
【００３２】
（製造例７）ボタンピ抽出物の製法
ボタンピ１００ｇに５０％エタノール溶液２０００ｇを加え、室温にて３日間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してボタンピ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．１３％であった。
【００３３】
（製造例８）オリーブ葉抽出物の製法
オリーブ葉１００ｇに５０vol％エタノール溶液２０００ｇを加え、５０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してオリーブ葉抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．５２％であった。
【００３４】
（製造例９）茶抽出物の製法
緑茶１００ｇに５０vol％エタノール２０００ｇを加え、室温にて３日間抽出後、これをろ過する。ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後ろ過して茶葉抽出物を得る。製品の蒸発残留物は、１．９５％であった。
【００３５】
（製造例１０）ドクダミ抽出物
ドクダミ１００ｇに水３０００ｇを加え、７０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液に活性炭を加え、５０℃にて処理する。ろ過後、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してドクダミ抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．３８％であった。
【００３６】
（製造例１１）アルテア抽出物
アルテア１００ｇに水２０００ｇを加え、７０℃にて８時間抽出する。これをろ過し、ろ液に活性炭を加え、５０℃にて処理する。ろ過後、ろ液を減圧下、濃縮乾固する。乾固物を３０％１，３−ブチレングリコール１０００ｇに溶解した後、ろ過してアルテア抽出物を製する。製品の蒸発残留物は、１．７５％であった。
【００３７】
（製造例１２）アロエベラ抽出物
アロエベラの生の葉肉を圧搾して得られる液汁に活性炭を加え、アロインを吸着除去した後、減圧下濃縮する。濃縮液にイソプロピルアルコールを加え、アロエベラ多糖類を凝集させる。凝集物をろ取し、乾燥してアロエベラ多糖類粉末を得る。アロエベラ多糖類粉末を３０％１，３−ブチレングリコールに０．５％溶解し、アロエベラ抽出物を製する。
【００３８】
本発明の抗老化化粧料は、皮膚外用剤、浴用剤にも配合できるが、その配合量は特に規定するものではない。配合する製品の種類、性状、品質、期待する効果の程度により異なるが、乾燥固形物に換算して好ましくは、０．０００１％〜０．５％、特に０．００１％〜０．２％が効果の面から好ましい。
【００３９】
本発明の抗老化化粧料は、必要に応じて、本発明の効果を損なわない範囲で、医薬品、医薬部外品、化粧品などに使用される成分や添加剤を併用して製造することができる。例えば、精製水、低級アルコール、多価アルコール、油脂、ロウ、鉱物油、脂肪酸、粉体、金属セッケン、ｐＨ調整剤、界面活性剤、増粘剤、色素、植物・動物・微生物原料由来の抽出物、ビタミン類、アミノ酸類、ホルモン類、殺菌剤、防腐剤、角質溶解剤、酵素、清涼剤、安定化剤、金属イオンキレート剤、血行促進剤、美白剤、紫外線防止剤、抗酸化剤、精油、消臭剤、香料等適宜用いることができる。
【００４０】
本発明の抗老化化粧料は、一般皮膚化粧料に限定されるものではなく、医薬品、医薬部外品、薬用化粧料等を包含するものである。本発明の皮膚外用剤組成物の剤型は、可溶化系、乳化系、粉末分散系等何れでもよく、用途も、化粧水、乳液、クリーム、パック等の基礎化粧料、ファンデーション等のメークアップ化粧料、シャンプー、リンス、石けん、ボディーシャンプーなどのトイレタリー製品、浴用剤等を問わない。
【００４１】
次に本発明で使用する各抽出物の各スクリーニング試験について説明する。
（参考試験１）コラーゲン産生促進作用の評価
クロレラ抽出物のコラーゲン産生促進作用の試験には、製造例１で示した活性炭処理後の状態を凍結乾燥したものをＰＢＳ（−）にて０．０１％溶液としたものを試験試料とした。正常ヒト皮膚線維芽細胞を０．５％ＦＢＳ含有ＭＥＭを用いて、９６穴プレートに２．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるように播種し、２４時間培養後、ＰＢＳ（−）にて洗浄後、試料を添加した無血清培地に交換し、４８時間培養する。培養後、培養上清中に含まれるＩ型コラーゲンをＥＬＩＳＡ法にて定量した。１００μＬの培養上清をＥＬＩＳＡ用プレートに添加し、１８時間室温に保管した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）で洗浄後、１％スキムミルク／ＰＢＳ−Ｔで２時間ブロッキングした。抗ヒトＩ型コラーゲン抗体、ペルオキシダーゼ標準抗ラットＩｇＧ抗体で処理し、ペルオキシダーゼ用発色キットを用いて発色させた。４５０ｎｍの吸光度から培養上清中に含まれるＩ型コラーゲン量を求め、単位蛋白当たりとして算出した。蛋白定量は、Ｌｏｗｒｙ法を用いた。コントロールのＩ型コラーゲン量を１００とした相対値として評価した。結果は、１５２．３％であった。
【００４２】
（参考試験２）エストロゲン様作用の評価
エストロゲン様作用の測定は、抽出物についてエストロゲン様作用活性をエストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べる方法（Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２８Ａ，５９５−６０２，１９９２）で測定した。ヒト乳がん細胞由来のＭＣＦ−７細胞を５％ＦＢＳ（チャコール・デキストラン処理）、１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含有するＥａｇｌｅｓ ＭＥＭ（フェノールレッド除去）を用いて、５×１０４ ｃｅｌｌ/ｍＬの密度で浮遊させた細胞懸濁液０．１ｍＬを９６穴マイクロカルチャープレートに播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。その後各濃度の試料をカルチャープレートに添加し、６日間培養を行なった。培養後ＭＴＴ還元法にて細胞濃度の測定を行い、エストロゲン様作用とした。本発明で使用するダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物には、高いエストロゲン様作用が確認された。
【００４３】
（参考例３）
活性酸素消去能の測定は、製造例５〜８の抽出物を用いて、ＳＯＤ様活性及びＤＰＰＨラジカル消去能を測定した。ＳＯＤ様活性は、ＮＢＴ法（ＸＯＤ系と組み合わせたBeauchampsらの方法 Anal.Bioche.,４４、２７９〜２８７、１９７１）に従った。ＤＰＰＨラジカル（ジフェニルピクリルヒドラジルラジカル）消去能の測定は、ＤＰＰＨラジカル（Sigma社）をエタノールに溶解し０．１ｍＭ溶液とし、０．１ｍＭＤＰＰＨラジカル溶液３ｍＬを試験管にとり、各濃度に精製水にて希釈した試験溶液０．５ｍＬを加え、室温で１０分間放置後、波長５１７ｎｍで吸光度を測定する方法で行った。試験結果を表２に示す。
【００４４】
【表１】
【００４５】
（試験例４）ヒアルロニダーゼ活性阻害作用の評価
ヒアルロニダーゼは、結合組織に分布するヒアルロン酸の加水分解酵素であり、炎症時において活性化され、結合組織のマトリックスを破壊し、炎症系の細胞及び血管の透過性を高める役割を演じると考えられている。また起炎酵素として知られており、抗炎症剤や抗アレルギー剤により阻害されることも知られている。従って、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用は、抗アレルギー活性の一つとされている。陽性対照として、阻害活性が既に知られているクロモグリク酸ナトリウム（藤沢薬品工業製）を試験に用いた。試験方法は、Morgan-Elson法を応用する方法にて行なった。試料の適当量を０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３．５に調製）にて希釈した溶液０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ（Sigma社製，TypeIV-Ｓ，最終酵素活性を４００Nfunit/ｍＬ）０．１ｍＬを加え、３７℃にて２０分間で放置後、活性化剤としてcompound４８/８０（Sigma社製）の酢酸緩衝液溶液（０．１mg/ｍＬ）０．２ｍＬを加え、更に３７℃にて２０分間放置する。これにヒアルロン酸カリウム（和光純薬工業製）溶液（最終濃度０．４mg/ｍＬ）０．５ｍＬを加え、３７℃にて４０分間放置する。次に、氷上にて０．４Ｎ水酸化ナトリウム溶液０．２ｍＬを加えて反応を停止させた後、ホウ酸溶液（ホウ酸４．９５gに水５０ｍＬを加え、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液にてｐＨ９．１に調製した後、水を加えて１００ｍＬとする）０．２ｍＬを加え、混和後沸騰水浴中にて３分間加熱し酵素を失活させる。次に氷上にて室温まで冷却し、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド試薬（和光純薬工業製、１０ｇに１０Ｎ塩酸溶液１２．５ｍＬ、酢酸８７．５ｍＬを混合溶解し、使用直前に酢酸にて１０倍に希釈する）６ｍＬを加え、３７℃にて２０分間放置した後、５８５ｎｍにて吸光度を測定する。なお、試料溶液の代わりに酢酸緩衝液を入れたものを対照とし、各資料溶液、対照について酵素を入れないものをブランクとし、次式により阻害活性率を求め、試料濃度を調整することにより５０％阻害活性濃度（ＩＣ５０）を求めた。
阻害率（％）＝〔１−（試料溶液の吸光度−試料溶液ブランクの吸光度）／（対照溶液の吸光度−対照溶液ブランクの吸光度）〕×１００
本発明にて使用するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物には、高いヒアルロニダーゼ活性阻害作用が確認された。
【００４６】
以下に、実施例を挙げて本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明がこれら実施例にのみ限定されるものではない。
（実施例１〜２）
以下に示す処方に従って、化粧水を作成した。即ち、処方成分を室温で攪拌し、可溶化して化粧水を得た。
（成分） （重量％）
（１）１，３−ブチレングリコール ６．０％
（２）グリセリン ５．０％
（３）必須成分又は比較成分（表２） ５．０％
（４）ペンチレングリコール ３．０％
（５）フェノキシエタノール ０．５％
（６）精製水 残余
【００４７】
【表２】
【００４８】
（実施例３）
茶色モルモット（３０週齢）を用いた光老化モデルを用いて、実施例１、２及び比較例１〜７の化粧水を検体として、くすみ改善を試験した。茶色モルモット１群５匹の背部を剃毛し、これに０．５×ＭＥＤ（最小紅斑濃度）の紫外線を５日間照射してくすみモデルを作成した。モルモットの背部２cm×２cmの塗布部位を設け、検体０．０１ｍＬ／回／日、これを８週間塗布した。対照例として、実施例化粧水の必須成分を精製水に置換したものを用いた。光老化改善効果は、最後の塗布の２４時間後に対照群の平均のくすみ具合と比較して、＋＋：著しく改善、＋：明らかに改善、±：わずかに改善、−：改善せずの基準で各モルモット毎に判定した。結果を表２に示す。これにより、本発明の抗老化用化粧料である実施例１及び２の化粧水は、比較例の化粧水に比べ、光老化改善効果に優れていることがわかる。
【００４９】
【表３】
【００５０】
（実施例４）皮膚の抗老化試験
皮膚の抗老化効果を調べるために、上記実施例１，２及び比較例２で用いた抽出物を配合したクリームを用いて、以下の方法により、しわに対する改善効果と、肌のはり、たるみに対する改善効果について評価試験を行った。
【００５１】
無作為に抽出した年齢３０〜５０歳の健常な女性８０名を４グループに分け被験者とし、必須成分及び比較成分を含むクリーム及び必須成分の代わりに精製水を含む対照例クリームをそれぞれ顔面皮膚に連日２ケ月使用した後、しわに対する改善効果と肌のはり、たるみに対する改善効果について調べた。
【００５２】
（実施例５〜６）クリーム
下記成分（１）〜（１０）、別に下記成分（１１）〜（１５）を７５℃に加温溶解しそれぞれＡ液及びＢ液とする。Ａ液にＢ液を加えて乳化し、クリームを調製した。
（成分） （重量％）
（１）ホホバ油 ３．０％
（２）スクワラン ２．０％
（３）メチルポリシロキサン ０．５％
（４）ステアリルアルコール ０．５％
（５）セチルアルコール ０．５％
（６）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル １２．５％
（７）モノステアリン酸グリセリル ５．０％
（８）モノステアリン酸ジグリセリル １．５％
（９）モノステアリン酸デカグリセリル ３．０％
（１０）防腐剤 適量
（１１）キサンタンガム ０．１％
（１２）必須成分又は比較成分 ４．０％
（１３）１，３−ブチレングリコール ５．０％
（１４）防腐剤 適量
（１５）精製水 残余
【００５３】
「しわに対する改善効果」
目尻のしわの状態を視覚評価した。
（判定基準）
著効 ：しわがほとんどめだたなくなった。
有効 ：しわがかなり目立たなくなった。
やや有効：しわが以前より目立たなくなった。
効果なし：変化なし。
「肌のはり、たるみに対する改善効果」
肌のはり、たるみを視覚評価した。
（判定基準）
著効 ：使用前に比べ肌に非常にはりがあり、たるみがない。
有効 ：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみがない。
やや有効：使用前に比べ肌にややはりがあり、たるみが減少した。
効果なし：変化なし。
試験の結果を表３に示す。
【００５４】
【表４】
【００５５】
表３から明らかなように、実施例のクリームを用いた場合には、比較例のクリームを用いた場合よりも、目尻のしわ及び肌のはり、たるみの点で改善されていることが認められた。これにより、高いコラーゲン産生促進作用を有するクロレラ抽出物、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物から選ばれる１種以上のエストロゲン様作用剤、ワレモコウ抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物からなる１種以上の活性酸素消去剤及びドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物からなる１種以上の抗炎症剤を配合した化粧料に優れた抗老化効果が確認された。
【００５６】
以下にさらに、本発明の処方実施例を示す。
【００５７】
（実施例７）化粧水
下記成分（８）〜（１０）を混合溶解させＡ液とし、これとは別に下記成分（１）〜（７）及び（１１）を混合溶解させてＢ液とし、Ａ液とＢ液を均等に混合し、化粧水を調整した。
（成分） （重量％）
（１）クインスシードエキス ８．０％
（２）グリセリン ３．０％
（３）１，３−ブチレングリコール ５．０％
（４）クロレラ抽出物（製造例１） ２．０％
（５）カッコン抽出物（製造例３） １．０％
（６）ボタンピ抽出物（製造例７） １．０％
（７）アロエベラ抽出物（製造例１２） １．０％
（８）ポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸エステル １．２％
（９）エチルアルコール ５．０％
（１０） 防腐剤 適量
（１１）精製水 残余
【００５８】
（実施例８）乳液
下記成分（１）〜（１０）、別に（１１）〜（１５）及び（１７）を７５℃で加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて乳化し、攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（１６）を加え、乳液を調製した。
（成分） （重量％）
（１）ホホバ油 １．０％
（２）スクワラン ２．０％
（３）ベヘニルアルコール １．０％
（４）トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル ２．０％
（５）テトラグリセリン縮合シリノレイン酸 ０．１％
（６）モノオレイン酸プロピレングリコール ０．５％
（７）モノステアリン酸グリセリン １．０％
（８）モノミレスチン酸ヘキサグリセリル １．０％
（９）モノミリスチン酸デカグリセリル ０．５％
（１０）防腐剤 適量
（１１）クロレラ抽出物（製造例１） ３．０％
（１２）ダイズ抽出物（製造例２） ２．０％
（１３）オリーブ葉抽出物（製造例８） ２．０％
（１４）ドクダミ抽出物（製造例１０） １．０％
（１５）１，３−ブチレングリコール ３．０％
（１６）香料 ０．１％
（１７）精製水 残余
【００５９】
（実施例９）石けん
石けん製造の定法により下記成分を混合し製した。
（成分） （重量％）
（１）石けん素地 ５３．２％
（２）スクロール １９．４％
（３）ホホバ油 ０．２５％
（４）クロレラ抽出物（製造例１） ２．５％
（５）カッコン抽出物（製造例３） ２．０％
（６）ワレモコウ抽出物（製造例６） ２．０％
（７）アルテア抽出物（製造例１１） １．０％
（８）濃グリセリン ６．５％
（９）ヒドロキシエタンジホスホン酸 ０．１５％
（１０）常水 残余
【００６０】
（実施例１０）クレンジングジェル
下記成分（１）〜（３）、別に（４）〜（７）及び（９）を７０℃に加熱溶解させてそれぞれＡ液及びＢ液とし、Ａ液にＢ液を加えて均一になるまで攪拌する。攪拌しながら５０℃まで冷却し、成分（８）を加えてクレンジングジェルを製した。
（成分） （重量％）
（１）モノミリスチン酸ヘキサグリセリル ２０．０％
（２）流動パラフィン ５８．８％
（３）防腐剤 適量
（４）クロレラ抽出物（製造例１） １．０％
（５）カッコン抽出物（製造例３） ０．５％
（６）オリーブ葉抽出物（製造例８） ０．５％
（７）アロエベラ抽出物（製造例１２） ０．５％
（８）濃グリセリン ５．９％
（９）ソルビトール ５．０％
（１０）香料 適量
（１１）精製水 残余
【００６１】
上記実施例７〜１０の化粧料は、いずれも皮膚の抗老化効果に優れるものであった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の（Ａ）〜（Ｄ）を含有することを特徴とする抗老化化粧料。
（Ａ）コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物
（Ｂ）エストロゲン様作用剤
（Ｃ）活性酸素消去剤
（Ｄ）抗炎症剤
【請求項２】
エストロゲン様作用剤が、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１記載の抗老化化粧料。
【請求項３】
活性酸素消去剤が、ワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
【請求項４】
抗炎症剤が、ヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
【請求項１】
下記の（Ａ）〜（Ｄ）を含有することを特徴とする抗老化化粧料。
（Ａ）コラーゲン産生促進剤であるクロレラ抽出物
（Ｂ）エストロゲン様作用剤
（Ｃ）活性酸素消去剤
（Ｄ）抗炎症剤
【請求項２】
エストロゲン様作用剤が、ダイズ抽出物、カッコン抽出物、プエラリア・ミリィフィカ抽出物、レッドクローバー抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１記載の抗老化化粧料。
【請求項３】
活性酸素消去剤が、ワレモコウ抽出物、茶抽出物、ボタンピ抽出物、オリーブ葉抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
【請求項４】
抗炎症剤が、ヒアルロニダーゼ阻害能を有するドクダミ抽出物、アルテア抽出物、アロエベラ抽出物から選ばれる１種以上からなる請求項１の抗老化化粧料。
【公開番号】特開２００６−２４１０３６（Ｐ２００６−２４１０３６Ａ）
【公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５６９３４（Ｐ２００５−５６９３４）
【出願日】平成１７年３月２日（２００５．３．２）
【出願人】（５９９０９８５１８）株式会社ディーエイチシー (31)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月２日（２００５．３．２）
【出願人】（５９９０９８５１８）株式会社ディーエイチシー (31)
【Ｆターム（参考）】
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