架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、および架橋可能なタンパク質の架橋を誘導する無毒性の物質を含んでなる改良された組成物。該組成物は非リン酸緩衝液溶媒中にて、任意に、かつ好ましく調製される。任意に、かつ好ましくは、該架橋可能なタンパク質は本明細書中に記載されるように、ゼラチン、およびゼラチン変異体または変異体タンパク質のいずれも含む。任意に、かつ好ましくは、無毒性の物質はトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）を含んでなり、このトランスグルタミナーゼは、例えば任意に微生物性トランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）であってよい、カルシウム依存性または非依存性であるいずれの型のトランスグルタミナーゼを任意に含んでなってよい。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
酢酸とクエン酸を組み合わせた緩衝液中において、フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質の架橋を誘導する酵素を含んでなる組成物。
【請求項２】
前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドが酢酸ナトリウム緩衝液中にあり、このとき前記酵素はクエン酸ナトリウム緩衝液中にあり、前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、および前記酵素が、組成物形成のためにそれぞれの緩衝液と共に混合される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドがゼラチンを含んでなる、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ゼラチンが少なくとも２５０ブルームである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
いずれの薬剤的に適合性の塩としてカルシウムをさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
尿素をさらに含んでなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
カルシウムおよび尿素が組み合わされている場合、前記カルシウムおよび前記尿素それぞれの量がカルシウムおよび尿素のそれぞれが別々である場合よりも少ない、請求項５または６に記載の組成物。
【請求項８】
前記酢酸および／またはクエン酸が約０．５Ｍよりも少ない、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記酢酸および／またはクエン酸が少なくとも約０．０１Ｍである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
イオン強度が所望の架橋時間に従って約０．１Ｍないし約０．５Ｍから選択され、ここでイオン強度が増大すると架橋時間が比較的短くなる、請求項８または９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記酵素が一以上のトランスグルタミナーゼまたはマルチ銅オキシダーゼを含んでなる、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記トランスグルタミナーゼが微生物性トランスグルタミナーゼを含んでなる、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質の架橋を誘導する酵素、金属イオン、および変性薬剤を含んでなる組成物。
【請求項１４】
前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドがゼラチンを含んでなる、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ゼラチンが少なくとも２５０ブルームである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記金属イオンがいずれの薬剤的に適合性の塩としてカルシウムを含んでなる、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
前記カルシウム塩が塩化カルシウムまたは水酸化カルシウムの一以上を含んでなる、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記カルシウムが最高１Ｍの量である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記変性薬剤がカオトロープを含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記カオトロープが尿素を含んでなる、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記尿素が最高４Ｍの量である、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
カルシウムおよび尿素が組み合わされている場合、前記カルシウムおよび前記尿素それぞれの量が少ない、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記金属イオンがカルシウムを含んでなる場合、組成物がカルシウム金属イオン封鎖剤をさらに含んでなる、請求項５〜７または１３〜２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質の架橋を誘導するカルシウム非依存性の酵素、およびカルシウム金属イオン封鎖剤を含んでなる組成物。
【請求項２５】
前記カルシウム金属イオン封鎖剤がＥＤＴＡ、クエン酸塩、またはカルゴンの一以上を含んでなる、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記クエン酸塩または前記ＥＤＴＡが約０．０１Ｍないし約２Ｍの量である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記クエン酸塩または前記ＥＤＴＡが約０．０５Ｍないし約０．２Ｍの量である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
前記クエン酸塩または前記ＥＤＴＡが約０．５Ｍないし約２Ｍの量である、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質の架橋を誘導する酵素、ならびにアルギン酸エステル、アラビアゴム、高粘度カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、キサンタンガム、グアーガム、およびＰＶＰからなる群より選択される粘度増強剤を含んでなる組成物。
【請求項３０】
フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質の架橋を誘導する酵素、およびコスモトロープを含んでなる組成物。
【請求項３１】
前記コスモトロープがプロリン、トレハロース、およびグルタミン酸塩からなる群より選択されるか、またはそれらのいずれの二以上の組み合わせである、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
カオトロープをさらに含んでなる、請求項３０または３１に記載の組成物。
【請求項３３】
ゼラチン、トランスグルタミナーゼ、および前記ゼラチンに共有結合できるＰＥＧ（ポリエチレングリコール）誘導体を含んでなる組成物。
【請求項３４】
前記ＰＥＧ誘導体がいずれのアミノ化ＰＥＧ誘導体を含んでなる、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記アミノ化ＰＥＧ誘導体がＰＥＧアミンを含んでなる、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
ゼラチン、トランスグルタミナーゼ、および前記ゼラチンに共有結合できるＰＶＡ（ポリビニルアルコール）誘導体を含んでなる組成物。
【請求項３７】
前記ＰＶＡ誘導体がいずれのアミノ化ＰＶＡ誘導体も含んでなる、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
前記アミノ化ＰＶＡ誘導体がＰＶＡアミンを含んでなる、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
ゼラチン、アミン基質架橋剤、およびカルバミル化阻害剤を含んでなる組成物。
【請求項４０】
前記架橋剤がトランスグルタミナーゼを含んでなる、請求項３９に記載の組成物。
【請求項４１】
前記カルバミル化阻害剤がアミンドナーを含んでなる、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記アミンドナーがグリシンおよびヒスチジンからなる群より選択される、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記アミンドナーが前記架橋剤による前記ゼラチンの架橋を阻害しない量である、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
前記アミンドナーが前記架橋剤による前記ゼラチンの架橋を部分的に阻害する量である、請求項３９〜４２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４５】
尿素をさらに含んでなる、請求項３９〜４４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４６】
少なくとも部分的にサクシニル化されたゼラチン、非サクシニル化ゼラチン、およびアミン基質架橋剤を含んでなる組成物。
【請求項４７】
少なくとも部分的にカルバミル化されたゼラチン、非カルバミル化ゼラチン、およびアミン基質架橋剤を含んでなる組成物。
【請求項４８】
ゼラチン、ジアミン、およびアミン基質架橋剤を含んでなる組成物。
【請求項４９】
前記ジアミンがプトレシンを含んでなる、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
ゼラチン、アミンドナー、およびアミン基質架橋剤を含んでなる組成物。
【請求項５１】
前記アミンドナーがポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を含んでなる、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
前記アミン基質架橋剤がトランスグルタミナーゼを含んでなる、請求項４６〜５１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５３】
発泡ゼラチンおよびトランスグルタミナーゼを含んでなる架橋組成物。
【請求項５４】
前記トランスグルタミナーゼが凍結乾燥されている、請求項５３に記載の組成物。
【請求項５５】
フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質の架橋を誘導するカルシウム非依存性の酵素、変性薬剤、および変性薬剤によるゾルゲル転移点を低下させる効果を逆転させて、前記変性薬剤の効果を逆転させる薬剤を含んでなる組成物。
【請求項５６】
前記変性薬剤が尿素を含んでなり、かつ前記変性薬剤の前記効果を逆転させる前記薬剤がウレアーゼを含んでなる、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
ソルビトールをさらに含んでなる、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５８】
前記ソルビトールが、架橋組成物の柔軟性を増大させるためおよび／または架橋速度を加速するために十分な量である、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
酢酸塩をさらに含んでなる、請求項５７に記載の組成物。
【請求項６０】
可塑剤をさらに含んでなる、請求項１〜５９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記可塑剤が、アラビアゴム、グアーガム、ＰＶＡ、ＰＥＧ６０００、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、クエン酸アルキルエステル、グリセロールエステル、フタル酸アルキルエステル、セバシン酸アルキルエステル、ショ糖エステル、ソルビタンエステル、アセチル化モノグリセリド、グリセロール、脂肪酸エステル、グリコール、プロピレングリコール、ラウリン酸、ショ糖、グリセリルトリアセテート、ポロクサマー、フタル酸ジエチル、食用の脂肪または油のモノ−およびジ−グリセリド、フタル酸ジブチル、セバシン酸ジブチル、ポリソルベート、ポリエチレングリコール２００ないし１２，０００、Ｃａｒｂｏｗａｘポリエチレングリコール、および界面活性剤の濃度がＣＭＣ（臨界ミセル濃度）よりも高い前記界面活性剤からなる群より選択されるか；またはそれらの組み合わせである、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリコールドデシルエーテル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、ラウレス硫酸ナトリウム、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、ポロクサマー、ポロキサミン、アルキルポリグルコシド、脂肪アルコール、脂肪酸塩、コカミドモノエタノールアミン、およびコカミドジエタノールアミンを含んでなる、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】
前記界面活性剤の濃度が、前記架橋可能なタンパク質の約０．１％ないし約５％ｗ／ｗ乾燥重量の範囲である、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
前記ポリオキシエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステルがポリソルベート２０、２１、０、６０、６１、６５、８０または８５の一以上を含んでなる、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
アルギン酸エステル、アラビアゴム、高粘度カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、キサンタンガム、グアーガム、およびＰＶＰからなる群より選択される粘度増強剤をさらに含んでなる、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６６】
シスタミン、システイン、シアン酸塩、またはメラニンの一以上をさらに含んでなる組成物であって、前記酵素がトランスグルタミナーゼを含んでなる、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６７】
アンモニア捕捉剤、封鎖剤、もしくは結合剤、アンモニア代謝の刺激剤、または細胞内アンモニア取り込みの阻害剤をさらに含んでなる、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６８】
前記アンモニア捕捉剤が二糖類ラクツロースを含んでなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項６９】
前記アンモニア結合剤がサポニンを含んでなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項７０】
前記アンモニア捕捉剤が、フェニル酢酸ナトリウムおよび安息香酸ナトリウムを含んでなる溶液を含んでなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項７１】
前記アンモニア代謝の刺激剤が、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸塩、またはそれらの組み合わせを含んでなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項７２】
前記細胞内アンモニア取り込みの阻害剤が、Ｌ−グルタミン、Ｌ−グルタミン酸塩、またはそれらの組み合わせを含んでなる、請求項６７に記載の組成物。
【請求項７３】
コハク酸緩衝液、マレイン酸緩衝液、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン（トリス）、３−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸（ＴＡＰＳ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（ビシン）、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン（トリシン）、２−｛［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸（ＴＥＳ）、３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ジメチルアルシン酸、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、および２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）からなる群より選択される緩衝液をさらに含んでなる、請求項１〜７２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７４】
約６ないし約７の範囲のｐＨを有する、請求項１〜７３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７５】
前記ｐＨが約６である、請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
前記酵素がトランスグルタミナーゼを含んでなる、請求項１〜７５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７７】
前記トランスグルタミナーゼがカルシウム非依存性である、請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
前記トランスグルタミナーゼが微生物性トランスグルタミナーゼである、請求項７７に記載の組成物。
【請求項７９】
前記トランスグルタミナーゼのタンパク質濃度が組成物の約０．０００１％ないし約２％ｗ／ｗの量である、請求項７６〜７８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８０】
前記トランスグルタミナーゼが組成物の約０．０１％ないし約１．３５％ｗ／ｗの量である、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８１】
前記トランスグルタミナーゼが組成物の約０．０５％ないし約０．５％ｗ／ｗの量である、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８２】
前記トランスグルタミナーゼが組成物の約０．１％ないし約０．４％ｗ／ｗの量である、請求項７９に記載の組成物。
【請求項８３】
前記トランスグルタミナーゼの濃度が、組成物全体の約１ないし約１８０酵素単位（Ｕ／ｍＬ）の範囲である、請求項７６〜８２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８４】
前記トランスグルタミナーゼの濃度が、組成物全体の約４ないし約７０酵素単位（Ｕ／ｍＬ）の範囲である、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
前記トランスグルタミナーゼの濃度が、組成物全体の約１０ないし約５５酵素単位（Ｕ／ｍＬ）の範囲である、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
架橋物質：架橋可能なタンパク質溶液の比が約１：１ないし約１：５ｖ／ｖである、請求項１〜８５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８７】
前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドがゼラチンを含んでなり、前記ゼラチンが動物源、組み換え源、またはそれらの組み合わせから産生される、請求項１〜８６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８８】
前記動物源が魚類および哺乳類からなる群より選択される、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
前記哺乳類がブタおよび雌ウシからなる群より選択される、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９０】
前記ゼラチンがタイプＡ（酸処理されたもの）またはタイプＢ（アルカリ処理されたもの）である、請求項８９に記載の組成物。
【請求項９１】
前記ゼラチンが高分子量ゼラチンを含んでなる、請求項９０に記載の組成物。
【請求項９２】
前記ゼラチンが少なくとも約２５０ブルームである、請求項９１に記載の組成物。
【請求項９３】
前記ゼラチンが最初の抽出の間に産生される、請求項８７〜９２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９４】
架橋のための組成物を製造するための方法であって、フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドの架橋のための酵素、および薬剤的に許容されるカルシウム塩の溶液を調製すること；および前記溶液にカルシウム金属イオン封鎖剤を加えることを含んでなる方法。
【請求項９５】
前記カルシウム金属イオン封鎖剤が、ポリリン酸塩およびカルボン酸塩、またはそれらの組み合わせの一以上を含んでなる、請求項９４に記載の方法。
【請求項９６】
前記ポリリン酸塩がピロリン酸塩、トリポリリン酸塩、高次ポリリン酸塩、およびヘキサメタリン酸塩からなる群より選択されるか、またはそれらの組み合わせである、請求項９５に記載の組成物。
【請求項９７】
ピロリン酸塩が、ピロリン酸四ナトリウム、ピロリン酸二水素二ナトリウム、ピロリン酸四カリウム、ピロリン酸二水素二カリウム、およびピロリン酸二ナトリウム二カリウムからなる群より選択されるか、またはそれらの組み合わせである、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９８】
前記トリポリリン酸塩が、トリポリリン酸五ナトリウムおよびトリポリリン酸五カリウムからなる群より選択されるか、またはそれらの組み合わせである、請求項９６に記載の組成物。
【請求項９９】
前記カルボン酸塩が、アルカリ金属クエン酸塩、アルカリ金属酢酸塩、アルカリ金属乳酸塩、アルカリ金属酒石酸塩、アルカリ金属リンゴ酸塩、エチレンジアミン四酢酸のアルカリ金属塩、およびエチドロン酸からなる群より選択されるか、またはそれらの組み合わせである、請求項９６に記載の組成物。
【請求項１００】
前記カルボン酸塩が、エチレンジアミン四酢酸およびクエン酸ナトリウムからなる群より選択されるか、またはそれらの組み合わせである、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
前記ヘキサメタリン酸塩がヘキサメタリン酸ナトリウムを含んでなる、請求項９６に記載の組成物。
【請求項１０２】
架橋のための組成物を製造するための方法であって、フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドの架橋のための酵素、および変性剤の溶液を調製すること；および前記溶液に、変性薬剤によるゾルゲル転移点を低下させる効果を逆転させて、前記変性薬剤の効果を逆転させる薬剤を加えることを含んでなる方法。
【請求項１０３】
前記変性薬剤が尿素を含んでなり、かつ前記変性薬剤の前記効果を逆転させる前記薬剤がウレアーゼを含んでなる、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
架橋のための組成物を製造するための方法であって、フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドの架橋のための酵素、およびカオトロープの溶液を調製すること；および前記溶液にコスモトロープを加えることを含んでなる方法。
【請求項１０５】
前記コスモトロープが、プロリン、トレハロース、およびグルタミン酸塩からなる群より選択されるか、またはそれらのいずれの二以上の組み合わせである、請求項１０４に記載の方法。
【請求項１０６】
架橋のための組成物を製造するための方法であって、フィブリンではないタンパク質またはポリペプチドであることを条件とする架橋可能なタンパク質またはポリペプチド、および前記架橋可能なタンパク質またはポリペプチドの架橋のためのトランスグルタミナーゼの溶液を調製すること；および前記溶液に、シスタミン、システイン、シアン酸塩、またはメラニンの一以上を、前記トランスグルタミナーゼを少なくとも部分的に阻害するために加えることを含んでなる方法。
【請求項１０７】
特異的活性が、ミリグラムあたり＞２５酵素単位、＞９５％電気泳動的純度、グラムあたり＜５エンドトキシン単位、および＜１０ＣＦＵ／ｇである微生物性トランスグルタミナーゼ組成物。
【請求項１０８】
請求項１〜１０６のいずれか一項に記載の架橋剤として提供される、請求項１０７に記載の組成物。

【図１】

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図３Ｅ】

【図３Ｆ】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図８】

【図９】

【公表番号】特表２０１１−５２５１２８（Ｐ２０１１−５２５１２８Ａ）
【公表日】平成２３年９月１５日（２０１１．９．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１４１８４（Ｐ２０１１−５１４１８４）
【出願日】平成２１年６月１８日（２００９．６．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００９／０５２６０５
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１５３７５０
【国際公開日】平成２１年１２月２３日（２００９．１２．２３）
【出願人】（５１０３３２９８１）ライフボンド　リミテッド (2)
【氏名又は名称原語表記】ＬＩＦＥＢＯＮＤ　ＬＴＤ
【Ｆターム（参考）】