新生児Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）結合ポリペプチド改変体、ダイマーＦｃ結合タンパク質、およびそれらに関連する方法
本発明の組成物および方法は、部分的には、Ｆｃ含有ポリペプチドによって媒介されるエフェクター機能が、（例えば、静電最適化によって）ポリペプチド内の１以上のアミノ酸残基を修飾することによって改変することができるという本発明者らの発見に基づく。本発明の方法に従って生じさせることができるポリペプチドは高度に可変的であって、それらは、Ｆｃ領域またはその生物学的に活性な部分を含有する抗体および融合蛋白質を含むことができる。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドであって、ここに、該ポリペプチドは出発ポリペプチドと比較して少なくとも１つの変異を含み、そして、該少なくとも１つの変異は：
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４８における置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４９における置換；
極性アミノ酸またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５１における置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５２における置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５５における置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２５６における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５７における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５８における置換；
ＥＵアミノ酸位置２７７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２７９における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８０における置換；
荷電アミノ酸またはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８２における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８４における置換；
正に荷電したアミノ酸、極性アミノ酸またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５における置換；
グルタミン酸、スレオニン、またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８８における置換；
ＥＵアミノ酸位置２８９における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０４における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０５における置換；
ＥＵアミノ酸位置３０６における置換；
極性または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０８における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０９における置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１０における置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１１における置換；
正に荷電したアミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１２における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１３における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１５における置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１６における置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４０における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４３における置換；
ロイシンでのＥＵアミノ酸位置３４４における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４５における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３７６における置換；
セリンでのＥＵアミノ酸位置３７８における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８３における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８５における置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８９における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２４における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２６における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３０における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３１における置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３２における置換；
リシン、アルギニン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置４３４における置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３６における置換；および
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３８における置換；
からなる群より選択される、改変されたポリペプチド。
【請求項２】
Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｕ結合部分を含む改変されたポリペプチドであって、ここに、該ポリペプチドは出発ポリペプチドと比較して少なくとも１つの変異を含み、そして、該少なくとも１つの変異が：
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４８におけるリシンの置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４９におけるアスパラギン酸の置換；
極性アミノ酸またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５１におけるロイシンの置換；
ＥＵアミノ酸位置２５２におけるメチオニンの置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５５におけるアルギニンの置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２５６におけるスレオニンの置換；
荷電されたアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５７におけるプロリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５８におけるグルタミン酸の置換；
ＥＵアミノ酸位置２７７におけるトリプトファンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２７９におけるバリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８０におけるアスパラギン酸の置換；
荷電アミノ酸またはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１におけるグリシンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８２におけるバリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８４におけるバリンの置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンまたはアラニンの置換；
正に荷電したアミノ酸、極性アミノ酸、またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンまたはアラニンの置換；
グルタミン酸、スレオニンまたはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６におけるアスパラギンまたはリシンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８７におけるアラニンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８８におけるリシンの置換；
ＥＵアミノ酸位置２８９におけるスレオニンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０４におけるセリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０５におけるバリンの置換；
ＥＵアミノ酸位置３０６におけるロイシンまたはバリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０７におけるスレオニンまたはバリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０８におけるバリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０９におけるロイシンの置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１０におけるヒスチジンの置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１１におけるグルタミンの置換；
正に荷電したアミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１２におけるアスパラギン酸またはロイシンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１３におけるアスパラギンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１５におけるアスパラギンの置換；
正に荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１６におけるアスパラギンの置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１７におけるリシンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４０におけるリシンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４３におけるプロリンの置換；
ロイシンでのＥＵアミノ酸位置３４４におけるアルギニンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４５におけるグルタミン酸の置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３７６におけるアスパラギン酸の置換；
セリンでのＥＵアミノ酸位置３７８におけるアラニンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８３におけるセリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８５におけるグリシンの置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８９におけるアスパラギンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２４におけるセリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２６におけるセリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３０におけるグルタミン酸の置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３１におけるロイシンの置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３２におけるヒスチジンの置換；
リシン、アルギニン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置４３４におけるアスパラギンの置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３６におけるチロシンの置換；および
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３８におけるグルタミンの置換
からなる群より選択される、改変されたポリペプチド。
【請求項３】
ＥＵアミノ酸位置２７７、ＥＵアミノ酸位置２８９、ＥＵアミノ酸位置３０６、ＥＵアミノ酸位置３４４またはＥＵアミノ酸位置３７８の少なくとも１つにおけるアミノ酸が、荷電アミノ酸、極性アミノ酸、または非極性アミノ酸で置換された、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項４】
前記荷電アミノ酸が、負に荷電したアミノ酸である、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項５】
前記負に荷電したアミノ酸が、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択される、請求項４に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項６】
前記荷電アミノ酸が、正に荷電したアミノ酸である、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項７】
前記正に荷電したアミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン、およびリシンからなる群より選択される、請求項６に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項８】
前記正に荷電したアミノ酸が、リシンである、請求項７に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項９】
前記極性アミノ酸が、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、スレオニン、チロシン、アスパラギン、グルタミンおよびシステインからなる群より選択される、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１０】
前記非極性アミノ酸が、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、およびプロリンからなる群より選択される、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１１】
前記改変されたポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１２】
前記改変されたポリペプチドが、融合蛋白質である、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１３】
前記Ｆｃ領域またはそのＦｃＲｎ結合部分が、ヒト抗体に由来する、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１４】
完全なＦｃ領域を含む、請求項１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記出発ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１６】
前記Ｆｃ領域またはそのＦｃ結合部分がＩｇＧアイソタイプのものである、請求項１１〜１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１７】
前記ＩｇＧアイソタイプがＩｇＧ１サブクラスのものである、請求項１６に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが、ＶＬまたはＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）における１以上の非ヒトアミノ酸残基を含む、請求項１１〜１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが、（ａ）抗原および（ｂ）ＦｃＲに結合する、請求項１１または１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２０】
前記抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項１９に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが（ａ）リガンドおよび（ｂ）ＦｃＲに結合する、請求項１２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２２】
前記ＦｃＲがＦｃＲｎである、請求項１９または２１に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２３】
前記ポリペプチドが、前記変異を含まない出発ポリペプチドと比較して異なる結合親和性にてＦｃＲに結合する、請求項１９または２１に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２４】
前記改変されたポリペプチドの結合親和性が、前記出発ポリペプチドよりも約１．５倍〜約１００倍大きい、請求項２３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２５】
前記改変されたポリペプチドの結合親和性が、前記出発ポリペプチドよりも約１．５倍〜約１００倍低い、請求項３４に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２６】
前記改変されたポリペプチドが、第一のｐＨにおいてＦｃＲに対して１つの結合親和性を示し、そして第二のｐＨにおいてＦｃＲに対する異なる結合親和性を示す、請求項１９または２１に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２７】
前記改変されたポリペプチドの結合親和性が、前記第二のｐＨよりも前記第一のｐＨにおいて約１．５倍〜約１００倍大きい、請求項２６に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２８】
前記改変された抗体の結合親和性が、前記第二のｐＨよりも前記第一のｐＨにおいて約１．５倍〜約１００倍低い、請求項２７に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２９】
前記改変されたポリペプチドは、患者に投与された場合、前記変異を含まない出発ポリペプチドとは異なる循環半減期を示す、請求項１１〜１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３０】
前記改変されたポリペプチドの半減期が、前記変異を含まない出発ポリペプチドよりも約１時間〜約１週間長い、請求項２９に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３１】
前記改変されたポリペプチドの半減期が、前記変異を含まない出発ポリペプチドよりも約１時間〜約１週間短い、請求項３０に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３２】
前記改変されたポリペプチドが、プロテインＡまたはプロテインＧに結合する、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１または２に記載の改変されたポリペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項３４】
請求項１または２に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項３５】
発現ベクター中に存在する、請求項３４に記載の核酸分子。
【請求項３６】
請求項３５に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３７】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４における置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８６における置換；
グルタミン酸またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８における置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０における置換；および
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４における置換
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも長い循環半減期を示す、方法。
【請求項３８】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４におけるバリンの置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８６におけるアスパラギンの置換；
グルタミン酸またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８におけるリシンの置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０におけるリシンの置換；および
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４におけるセリンの置換
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも長い循環半減期を示す、方法。
【請求項３９】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２４８における置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２４９における置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５０における置換；
アルギニン、リシン、またはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置２５１における置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５２における置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５４における置換；
アルギニン、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５６における置換；
ロイシン、アスパラギン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２５５における置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２６０における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５７における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２７７における置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２７９における置換；
グルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２８２における置換；
アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、プロリン、またはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２８７における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４における置換；
アスパラギン酸またはフェニルアラニンでのＥＵアミノ酸位置２８５における置換；
グルタミン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０における置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４における置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置３０５における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３０６における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０７における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、リシンまたはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０９における置換；
アルギニン、ロイシン、リシンまたはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３１０における置換；
アルギニン、アスパラギン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１２における置換；
アスパラギン酸、アルギニン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１３における置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３１５における置換；
グルタミンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置３４３における置換；
アルギニンまたはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置３４５における置換；
アルギニン、リシン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置３７４における置換；
アスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３７６における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４２６における置換；
アルギニン、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置４２８における置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置４３０における置換；
プロリンでのＥＵアミノ酸位置４３１における置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置４３２における置換；
ロイシンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置４３４における置換；および
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４３８における置換；
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも短い循環半減期を示す、方法。
【請求項４０】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２４８におけるリシンの置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２４９におけるアスパラギン酸の置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５０におけるスレオニンの置換；
アルギニン、リシン、またはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置２５１におけるロイシンの置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５２におけるメチオニンの置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５４におけるメチオニンの置換；
アルギニン、グルタミン酸またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５６におけるスレオニンの置換；
ロイシン、アスパラギン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置アミノ酸位置２５５におけるアルギニンの置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２６０におけるスレオニンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５７におけるプロリンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２７７におけるトリプトファンの置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２７９におけるバリンの置換；
グルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１におけるグリシンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２８２におけるバリンの置換；
アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、プロリン、またはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２８７におけるアラニンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４におけるバリンの置換；
アスパラギン酸またはフェニルアラニンでのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンの置換；
グルタミン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６におけるアスパラギンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８におけるリシンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０におけるリシンの置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４におけるセリンの置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置３０５におけるバリンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３０６におけるロイシンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０７におけるスレオニンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、リシンまたはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０９におけるロイシンの置換；
アルギニン、ロイシン、リシンまたはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３１０におけるヒスチジンの置換；
アルギニン、アスパラギン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１２におけるアスパラギン酸の置換；
アスパラギン酸、アルギニン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１３におけるトリプトファンの置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３１５におけるアスパラギンの置換；
グルタミンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置３４３におけるプロリンの置換；
アルギニンまたはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置３４５におけるグルタミン酸の置換；
アルギニン、リシン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置３７４におけるプロリンの置換；
アスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３７６におけるアスパラギン酸の置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４２６におけるセリンの置換；
アルギニン、グルタミン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置４２８におけるメチオニンの置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置４３０におけるグルタミン酸の置換；
プロリンでのＥＵアミノ酸位置４３１におけるアラニンの置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置４３２におけるロイシンの置換；
ロイシンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置４３４におけるアスパラギンの置換；および
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４３８におけるグルタミンの置換
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも短い循環半減期を示す、方法。
【請求項４１】
請求項１または２に記載の改変されたポリペプチドを生産する方法であって、該方法は：
（ａ）該改変されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を用いて細胞をトランスフェクトする工程；および
（ｂ）該細胞または細胞上清から該改変されたポリペプチドを精製する工程
を包含する、方法。
【請求項４２】
請求項１１または１３に記載の抗体を生産する方法であって、該方法は：
（ａ）該抗体の軽鎖の可変領域（ＶＬ）および定常領域（ＣＬ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第一の核酸分子を提供する工程；
（ｂ）該抗体の重鎖の可変領域（ＶＨ）および定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードするヌクレオチド配列を含む、第二の核酸分子を提供する工程；
（ｃ）該コードされた軽鎖および重鎖を含む改変された抗体の発現を可能とする条件下で、第一の核酸分子および第二の核酸分子を用いて細胞をトランスフェクトする工程；ならびに
（ｄ）該細胞または細胞上清から該抗体を精製する工程
を包含する、方法。
【請求項４３】
前記細胞が２９３細胞である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖を含むダイマーＦｃ結合蛋白質であって、ここで該第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖は、各々、Ｆｃ結合ドメインに作動可能に連結された少なくとも１つのＦｃ領域ドメインを含む、ダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４５】
前記Ｆｃドメインが、ＦｃＲｎへの結合を低下または排除するように変異された、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４６】
前記第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖が、共有結合により連結された、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４７】
前記Ｆｃ結合ドメインが、ＦｃＲｎの細胞外ドメインを含む、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４８】
前記Ｆｃ結合ドメインが、β−２−ミクログロブリンに結合される、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４９】
前記Ｆｃ結合ドメインが、ヒトＦｃＲｎに由来する、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項５０】
前記結合蛋白質が、配列番号１０に示されたアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項５１】
ＦｃＲに対するＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドの結合親和性を測定するための方法であって、該方法は、
Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドを、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質と接触させる工程、および、
相互作用の親和性を測定する工程
を包含する、方法。
【請求項５２】
ポリペプチドのライブラリーをスクリーニングするための方法であって、該ポリペプチドは、ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有するこれらのポリペプチドに対するＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含み、該方法は、
（ａ）該ライブラリーのメンバーと請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質とを接触させる工程；
（ｂ）該ダイマーＦｃ結合蛋白質に対するポリペプチドの結合親和性を測定する工程；および
（ｃ）ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有するこれらのポリペプチドを選択する工程
を包含する、方法。
【請求項５３】
ポリペプチドの混合物から、Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドを精製するための方法であって、該方法は、
請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質を含むアフィニティーカラムに該混合物を適用する工程、
該ポリペプチドが精製されるように、Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドを溶出させる工程
を包含する、方法。
【請求項５４】
前記混合物が、第一のｐＨにおいてアフィニティーカラムに適用され、そして前記ポリペプチドが、第二のｐＨにおいてアフィニティーカラムから溶出される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリペプチドが、精製プロセスの間に変性されない、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
出発ポリペプチドと比較してＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有するポリペプチドを同定するための方法であって、該方法は、
（ａ）出発ポリペプチドのアミノ酸の最適電荷分布と、溶媒中にてＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーの関連する変化との空間的表示を決定する工程；
（ｂ）ＦｃＲｎに結合された場合の出発ポリペプチドの結合自由エネルギーを改変するように修飾された出発ポリペプチドの少なくとも１つの候補アミノ酸残基位置を同定する工程；ならびに
（ｃ）該出発ポリペプチドにおける変異の取り込みが、ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有する改変されたポリペプチドを生じるように、選択されたアミノ酸を該アミノ酸の位置において同定する工程
を包含する、方法。
【請求項５７】
前記選択されたアミノ酸を前記出発ポリペプチドに取り込む工程をさらに包含する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＦｃＲｎに結合された場合の前記出発ポリペプチドと比較して、該ＦｃＲｎに結合された場合の改変されたＦｃ含有ポリペプチドの結合の自由エネルギーの変化を計算する工程をさらに包含する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記計算する工程が、まず、前記出発ポリペプチドにおいて変異をインシリコでモデリングする工程、次いで、結合の自由エネルギーの変化を計算する工程を包含する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記計算する工程が、ポアソン−ボルツマン方程式に基づく方法を用いた静電結合エネルギーの決定、ファンデルワールス結合エネルギーの決定、および溶媒接触可能表面面積に基づく方法を用いた結合エネルギーの決定からなる群より選択される、少なくとも１つの決定を用いる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記変異がアミノ酸置換である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
前記アミノ酸置換が、前記候補アミノ酸とは異なる電荷を有する選択されたアミノ酸の取り込みを生じる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記変異が、溶媒中で結合された場合の改変されたＦｃ含有ポリペプチドとＦｃＲｎとの間の結合の自由エネルギーを増加させ、それにより、ＦｃＲｎに対する該改変されたＦｃ含有ポリペプチドの結合親和性を減少させる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６４】
前記変異が、溶媒中で結合された場合の改変されたＦｃ含有ポリペプチドとＦｃＲｎとの間の結合の自由エネルギーを減少させ、それにより、ＦｃＲｎに対する該改変されたＦｃ含有ポリペプチドの結合親和性を増加させる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６５】
２つの異なるｐＨレベルにおいてＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有する改変されたＦｃ含有ポリペプチドを同定するための方法であって、該方法は：
（ａ）第一のｐＨレベルにおいて、出発ポリペプチドのアミノ酸の最適電荷分布と、溶媒中でＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーの関連する変化との空間的表示を決定する工程；
（ｂ）第二のｐＨレベルにおいて、該出発ポリペプチドのアミノ酸の最適電荷分布と、溶媒中でＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーの関連する変化との空間的表示を決定する工程；
（ｃ）電荷分布の比較に基づいて、該第一のｐＨレベルおよび第二のｐＨレベルにおいて異なる電荷分布を示す残基を同定する工程であって、該出発ポリペプチドの少なくとも１つの候補アミノ酸残基の位置は、ＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーを改変するように修飾される、工程；ならびに
（ｄ）該出発ポリペプチドにおける選択されたアミノ酸取り込みが、ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有する改変されたＦｃ含有ポリペプチドを生じるように、選択されたアミノ酸を該アミノ酸位置において選択する工程
を包含する、方法。
【請求項６６】
前記第一のｐＨが約７．４である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
ポリペプチドの親和性が、第二のｐＨにおけるよりも第一のｐＨにおいて約１．５倍〜約１００倍大きい、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
第一のｐＨにおいてＦｃＲｎに対する親和性を示し、第二のｐＨにおいてＦｃＲｎに対する異なる親和性を示す改変されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、請求項５６に記載の方法によって予測されるアミノ酸配列を含む、改変されたポリペプチド。
【請求項６９】
請求項６８に記載のポリペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項７０】
請求項６８に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１】
Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドであって、ここに、該ポリペプチドは出発ポリペプチドと比較して少なくとも１つの変異を含み、そして、該少なくとも１つの変異は：
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４８における置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４９における置換；
極性アミノ酸またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５１における置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５２における置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５５における置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２５６における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５７における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５８における置換；
ＥＵアミノ酸位置２７７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２７９における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８０における置換；
荷電アミノ酸またはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８２における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８４における置換；
正に荷電したアミノ酸、極性アミノ酸またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５における置換；
グルタミン酸、スレオニン、またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８８における置換；
ＥＵアミノ酸位置２８９における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０４における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０５における置換；
ＥＵアミノ酸位置３０６における置換；
極性または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０８における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０９における置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１０における置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１１における置換；
正に荷電したアミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１２における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１３における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１５における置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１６における置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１７における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４０における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４３における置換；
ロイシンでのＥＵアミノ酸位置３４４における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４５における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３７６における置換；
セリンでのＥＵアミノ酸位置３７８における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８３における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８５における置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８９における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２４における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２６における置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３０における置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３１における置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３２における置換；
リシン、アルギニン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置４３４における置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３６における置換；および
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３８における置換；
からなる群より選択される、改変されたポリペプチド。
【請求項２】
Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｕ結合部分を含む改変されたポリペプチドであって、ここに、該ポリペプチドは出発ポリペプチドと比較して少なくとも１つの変異を含み、そして、該少なくとも１つの変異が：
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４８におけるリシンの置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２４９におけるアスパラギン酸の置換；
極性アミノ酸またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５１におけるロイシンの置換；
ＥＵアミノ酸位置２５２におけるメチオニンの置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５５におけるアルギニンの置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２５６におけるスレオニンの置換；
荷電されたアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５７におけるプロリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２５８におけるグルタミン酸の置換；
ＥＵアミノ酸位置２７７におけるトリプトファンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２７９におけるバリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８０におけるアスパラギン酸の置換；
荷電アミノ酸またはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１におけるグリシンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８２におけるバリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８４におけるバリンの置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンまたはアラニンの置換；
正に荷電したアミノ酸、極性アミノ酸、またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンまたはアラニンの置換；
グルタミン酸、スレオニンまたはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６におけるアスパラギンまたはリシンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８７におけるアラニンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置２８８におけるリシンの置換；
ＥＵアミノ酸位置２８９におけるスレオニンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０４におけるセリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０５におけるバリンの置換；
ＥＵアミノ酸位置３０６におけるロイシンまたはバリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０７におけるスレオニンまたはバリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０８におけるバリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３０９におけるロイシンの置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１０におけるヒスチジンの置換；
正に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１１におけるグルタミンの置換；
正に荷電したアミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１２におけるアスパラギン酸またはロイシンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１３におけるアスパラギンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１５におけるアスパラギンの置換；
正に荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１６におけるアスパラギンの置換；
荷電アミノ酸または極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３１７におけるリシンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４０におけるリシンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４３におけるプロリンの置換；
ロイシンでのＥＵアミノ酸位置３４４におけるアルギニンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３４５におけるグルタミン酸の置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３７６におけるアスパラギン酸の置換；
セリンでのＥＵアミノ酸位置３７８におけるアラニンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８３におけるセリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８５におけるグリシンの置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置３８９におけるアスパラギンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２４におけるセリンの置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４２６におけるセリンの置換；
極性アミノ酸または荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３０におけるグルタミン酸の置換；
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３１におけるロイシンの置換；
極性アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３２におけるヒスチジンの置換；
リシン、アルギニン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置４３４におけるアスパラギンの置換；
負に荷電したアミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３６におけるチロシンの置換；および
荷電アミノ酸でのＥＵアミノ酸位置４３８におけるグルタミンの置換
からなる群より選択される、改変されたポリペプチド。
【請求項３】
ＥＵアミノ酸位置２７７、ＥＵアミノ酸位置２８９、ＥＵアミノ酸位置３０６、ＥＵアミノ酸位置３４４またはＥＵアミノ酸位置３７８の少なくとも１つにおけるアミノ酸が、荷電アミノ酸、極性アミノ酸、または非極性アミノ酸で置換された、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項４】
前記荷電アミノ酸が、負に荷電したアミノ酸である、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項５】
前記負に荷電したアミノ酸が、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群より選択される、請求項４に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項６】
前記荷電アミノ酸が、正に荷電したアミノ酸である、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項７】
前記正に荷電したアミノ酸が、アルギニン、ヒスチジン、およびリシンからなる群より選択される、請求項６に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項８】
前記正に荷電したアミノ酸が、リシンである、請求項７に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項９】
前記極性アミノ酸が、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、セリン、スレオニン、チロシン、アスパラギン、グルタミンおよびシステインからなる群より選択される、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１０】
前記非極性アミノ酸が、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、およびプロリンからなる群より選択される、請求項３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１１】
前記改変されたポリペプチドが、抗体またはそのフラグメントである、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１２】
前記改変されたポリペプチドが、融合蛋白質である、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１３】
前記Ｆｃ領域またはそのＦｃＲｎ結合部分が、ヒト抗体に由来する、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１４】
完全なＦｃ領域を含む、請求項１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１５】
前記出発ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１６】
前記Ｆｃ領域またはそのＦｃ結合部分がＩｇＧアイソタイプのものである、請求項１１〜１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１７】
前記ＩｇＧアイソタイプがＩｇＧ１サブクラスのものである、請求項１６に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが、ＶＬまたはＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）における１以上の非ヒトアミノ酸残基を含む、請求項１１〜１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項１９】
前記ポリペプチドが、（ａ）抗原および（ｂ）ＦｃＲに結合する、請求項１１または１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２０】
前記抗原が、腫瘍関連抗原である、請求項１９に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２１】
前記ポリペプチドが（ａ）リガンドおよび（ｂ）ＦｃＲに結合する、請求項１２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２２】
前記ＦｃＲがＦｃＲｎである、請求項１９または２１に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２３】
前記ポリペプチドが、前記変異を含まない出発ポリペプチドと比較して異なる結合親和性にてＦｃＲに結合する、請求項１９または２１に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２４】
前記改変されたポリペプチドの結合親和性が、前記出発ポリペプチドよりも約１．５倍〜約１００倍大きい、請求項２３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２５】
前記改変されたポリペプチドの結合親和性が、前記出発ポリペプチドよりも約１．５倍〜約１００倍低い、請求項３４に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２６】
前記改変されたポリペプチドが、第一のｐＨにおいてＦｃＲに対して１つの結合親和性を示し、そして第二のｐＨにおいてＦｃＲに対する異なる結合親和性を示す、請求項１９または２１に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２７】
前記改変されたポリペプチドの結合親和性が、前記第二のｐＨよりも前記第一のｐＨにおいて約１．５倍〜約１００倍大きい、請求項２６に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２８】
前記改変された抗体の結合親和性が、前記第二のｐＨよりも前記第一のｐＨにおいて約１．５倍〜約１００倍低い、請求項２７に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項２９】
前記改変されたポリペプチドは、患者に投与された場合、前記変異を含まない出発ポリペプチドとは異なる循環半減期を示す、請求項１１〜１３に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３０】
前記改変されたポリペプチドの半減期が、前記変異を含まない出発ポリペプチドよりも約１時間〜約１週間長い、請求項２９に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３１】
前記改変されたポリペプチドの半減期が、前記変異を含まない出発ポリペプチドよりも約１時間〜約１週間短い、請求項３０に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３２】
前記改変されたポリペプチドが、プロテインＡまたはプロテインＧに結合する、請求項１または２に記載の改変されたポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１または２に記載の改変されたポリペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項３４】
請求項１または２に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項３５】
発現ベクター中に存在する、請求項３４に記載の核酸分子。
【請求項３６】
請求項３５に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項３７】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４における置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８６における置換；
グルタミン酸またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８における置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０における置換；および
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４における置換
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも長い循環半減期を示す、方法。
【請求項３８】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４におけるバリンの置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８６におけるアスパラギンの置換；
グルタミン酸またはアスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８におけるリシンの置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０におけるリシンの置換；および
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４におけるセリンの置換
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも長い循環半減期を示す、方法。
【請求項３９】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２４８における置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２４９における置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５０における置換；
アルギニン、リシン、またはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置２５１における置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５２における置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５４における置換；
アルギニン、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５６における置換；
ロイシン、アスパラギン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２５５における置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２６０における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５７における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２７７における置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２７９における置換；
グルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２８２における置換；
アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、プロリン、またはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２８７における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４における置換；
アスパラギン酸またはフェニルアラニンでのＥＵアミノ酸位置２８５における置換；
グルタミン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８における置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０における置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４における置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置３０５における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３０６における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０７における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、リシンまたはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０９における置換；
アルギニン、ロイシン、リシンまたはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３１０における置換；
アルギニン、アスパラギン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１２における置換；
アスパラギン酸、アルギニン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１３における置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３１５における置換；
グルタミンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置３４３における置換；
アルギニンまたはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置３４５における置換；
アルギニン、リシン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置３７４における置換；
アスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３７６における置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４２６における置換；
アルギニン、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置４２８における置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置４３０における置換；
プロリンでのＥＵアミノ酸位置４３１における置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置４３２における置換；
ロイシンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置４３４における置換；および
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４３８における置換；
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも短い循環半減期を示す、方法。
【請求項４０】
障害に罹う患者を処置するための方法であって、該方法は、
少なくとも１つの変異を含むＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含む改変されたポリペプチドを該患者に投与する工程
を包含し、該少なくとも１つの変異は、
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２４８におけるリシンの置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２４９におけるアスパラギン酸の置換；
アルギニンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５０におけるスレオニンの置換；
アルギニン、リシン、またはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置２５１におけるロイシンの置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５２におけるメチオニンの置換；
セリンまたはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２５４におけるメチオニンの置換；
アルギニン、グルタミン酸またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５６におけるスレオニンの置換；
ロイシン、アスパラギン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置アミノ酸位置２５５におけるアルギニンの置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置２６０におけるスレオニンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２５７におけるプロリンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２７７におけるトリプトファンの置換；
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置２７９におけるバリンの置換；
グルタミンでのＥＵアミノ酸位置２８１におけるグリシンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置２８２におけるバリンの置換；
アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、プロリン、またはスレオニンでのＥＵアミノ酸位置２８７におけるアラニンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８４におけるバリンの置換；
アスパラギン酸またはフェニルアラニンでのＥＵアミノ酸位置２８５におけるヒスチジンの置換；
グルタミン酸またはメチオニンでのＥＵアミノ酸位置２８６におけるアスパラギンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２８８におけるリシンの置換；
アスパラギン酸でのＥＵアミノ酸位置２９０におけるリシンの置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０４におけるセリンの置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置３０５におけるバリンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３０６におけるロイシンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０７におけるスレオニンの置換；
アルギニン、アスパラギン酸、リシンまたはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３０９におけるロイシンの置換；
アルギニン、ロイシン、リシンまたはアスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３１０におけるヒスチジンの置換；
アルギニン、アスパラギン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１２におけるアスパラギン酸の置換；
アスパラギン酸、アルギニン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置３１３におけるトリプトファンの置換；
アスパラギン酸またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置３１５におけるアスパラギンの置換；
グルタミンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置３４３におけるプロリンの置換；
アルギニンまたはグルタミンでのＥＵアミノ酸位置３４５におけるグルタミン酸の置換；
アルギニン、リシン、またはロイシンでのＥＵアミノ酸位置３７４におけるプロリンの置換；
アスパラギンでのＥＵアミノ酸位置３７６におけるアスパラギン酸の置換；
アルギニン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４２６におけるセリンの置換；
アルギニン、グルタミン、またはリシンでのＥＵアミノ酸位置４２８におけるメチオニンの置換；
リシンでのＥＵアミノ酸位置４３０におけるグルタミン酸の置換；
プロリンでのＥＵアミノ酸位置４３１におけるアラニンの置換；
アルギニンでのＥＵアミノ酸位置４３２におけるロイシンの置換；
ロイシンまたはリシンでのＥＵアミノ酸位置４３４におけるアスパラギンの置換；および
グルタミン酸でのＥＵアミノ酸位置４３８におけるグルタミンの置換
からなる群より選択され、ここで該改変されたポリペプチドは、該変異を含まない出発ポリペプチドよりも短い循環半減期を示す、方法。
【請求項４１】
請求項１または２に記載の改変されたポリペプチドを生産する方法であって、該方法は：
（ａ）該改変されたポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を用いて細胞をトランスフェクトする工程；および
（ｂ）該細胞または細胞上清から該改変されたポリペプチドを精製する工程
を包含する、方法。
【請求項４２】
請求項１１または１３に記載の抗体を生産する方法であって、該方法は：
（ａ）該抗体の軽鎖の可変領域（ＶＬ）および定常領域（ＣＬ）をコードするヌクレオチド配列を含む、第一の核酸分子を提供する工程；
（ｂ）該抗体の重鎖の可変領域（ＶＨ）および定常領域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）をコードするヌクレオチド配列を含む、第二の核酸分子を提供する工程；
（ｃ）該コードされた軽鎖および重鎖を含む改変された抗体の発現を可能とする条件下で、第一の核酸分子および第二の核酸分子を用いて細胞をトランスフェクトする工程；ならびに
（ｄ）該細胞または細胞上清から該抗体を精製する工程
を包含する、方法。
【請求項４３】
前記細胞が２９３細胞である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖を含むダイマーＦｃ結合蛋白質であって、ここで該第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖は、各々、Ｆｃ結合ドメインに作動可能に連結された少なくとも１つのＦｃ領域ドメインを含む、ダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４５】
前記Ｆｃドメインが、ＦｃＲｎへの結合を低下または排除するように変異された、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４６】
前記第一のポリペプチド鎖および第二のポリペプチド鎖が、共有結合により連結された、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４７】
前記Ｆｃ結合ドメインが、ＦｃＲｎの細胞外ドメインを含む、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４８】
前記Ｆｃ結合ドメインが、β−２−ミクログロブリンに結合される、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項４９】
前記Ｆｃ結合ドメインが、ヒトＦｃＲｎに由来する、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項５０】
前記結合蛋白質が、配列番号１０に示されたアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質。
【請求項５１】
ＦｃＲに対するＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドの結合親和性を測定するための方法であって、該方法は、
Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドを、請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質と接触させる工程、および、
相互作用の親和性を測定する工程
を包含する、方法。
【請求項５２】
ポリペプチドのライブラリーをスクリーニングするための方法であって、該ポリペプチドは、ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有するこれらのポリペプチドに対するＦｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含み、該方法は、
（ａ）該ライブラリーのメンバーと請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質とを接触させる工程；
（ｂ）該ダイマーＦｃ結合蛋白質に対するポリペプチドの結合親和性を測定する工程；および
（ｃ）ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有するこれらのポリペプチドを選択する工程
を包含する、方法。
【請求項５３】
ポリペプチドの混合物から、Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドを精製するための方法であって、該方法は、
請求項４４に記載のダイマーＦｃ結合蛋白質を含むアフィニティーカラムに該混合物を適用する工程、
該ポリペプチドが精製されるように、Ｆｃ領域の少なくとも１つのＦｃＲｎ結合部分を含むポリペプチドを溶出させる工程
を包含する、方法。
【請求項５４】
前記混合物が、第一のｐＨにおいてアフィニティーカラムに適用され、そして前記ポリペプチドが、第二のｐＨにおいてアフィニティーカラムから溶出される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリペプチドが、精製プロセスの間に変性されない、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
出発ポリペプチドと比較してＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有するポリペプチドを同定するための方法であって、該方法は、
（ａ）出発ポリペプチドのアミノ酸の最適電荷分布と、溶媒中にてＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーの関連する変化との空間的表示を決定する工程；
（ｂ）ＦｃＲｎに結合された場合の出発ポリペプチドの結合自由エネルギーを改変するように修飾された出発ポリペプチドの少なくとも１つの候補アミノ酸残基位置を同定する工程；ならびに
（ｃ）該出発ポリペプチドにおける変異の取り込みが、ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有する改変されたポリペプチドを生じるように、選択されたアミノ酸を該アミノ酸の位置において同定する工程
を包含する、方法。
【請求項５７】
前記選択されたアミノ酸を前記出発ポリペプチドに取り込む工程をさらに包含する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記ＦｃＲｎに結合された場合の前記出発ポリペプチドと比較して、該ＦｃＲｎに結合された場合の改変されたＦｃ含有ポリペプチドの結合の自由エネルギーの変化を計算する工程をさらに包含する、請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記計算する工程が、まず、前記出発ポリペプチドにおいて変異をインシリコでモデリングする工程、次いで、結合の自由エネルギーの変化を計算する工程を包含する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記計算する工程が、ポアソン−ボルツマン方程式に基づく方法を用いた静電結合エネルギーの決定、ファンデルワールス結合エネルギーの決定、および溶媒接触可能表面面積に基づく方法を用いた結合エネルギーの決定からなる群より選択される、少なくとも１つの決定を用いる、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
前記変異がアミノ酸置換である、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
前記アミノ酸置換が、前記候補アミノ酸とは異なる電荷を有する選択されたアミノ酸の取り込みを生じる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記変異が、溶媒中で結合された場合の改変されたＦｃ含有ポリペプチドとＦｃＲｎとの間の結合の自由エネルギーを増加させ、それにより、ＦｃＲｎに対する該改変されたＦｃ含有ポリペプチドの結合親和性を減少させる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６４】
前記変異が、溶媒中で結合された場合の改変されたＦｃ含有ポリペプチドとＦｃＲｎとの間の結合の自由エネルギーを減少させ、それにより、ＦｃＲｎに対する該改変されたＦｃ含有ポリペプチドの結合親和性を増加させる、請求項５６に記載の方法。
【請求項６５】
２つの異なるｐＨレベルにおいてＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有する改変されたＦｃ含有ポリペプチドを同定するための方法であって、該方法は：
（ａ）第一のｐＨレベルにおいて、出発ポリペプチドのアミノ酸の最適電荷分布と、溶媒中でＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーの関連する変化との空間的表示を決定する工程；
（ｂ）第二のｐＨレベルにおいて、該出発ポリペプチドのアミノ酸の最適電荷分布と、溶媒中でＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーの関連する変化との空間的表示を決定する工程；
（ｃ）電荷分布の比較に基づいて、該第一のｐＨレベルおよび第二のｐＨレベルにおいて異なる電荷分布を示す残基を同定する工程であって、該出発ポリペプチドの少なくとも１つの候補アミノ酸残基の位置は、ＦｃＲｎに結合された場合の該出発ポリペプチドの結合自由エネルギーを改変するように修飾される、工程；ならびに
（ｄ）該出発ポリペプチドにおける選択されたアミノ酸取り込みが、ＦｃＲｎに対する改変された結合親和性を有する改変されたＦｃ含有ポリペプチドを生じるように、選択されたアミノ酸を該アミノ酸位置において選択する工程
を包含する、方法。
【請求項６６】
前記第一のｐＨが約７．４である、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
ポリペプチドの親和性が、第二のｐＨにおけるよりも第一のｐＨにおいて約１．５倍〜約１００倍大きい、請求項６５に記載の方法。
【請求項６８】
第一のｐＨにおいてＦｃＲｎに対する親和性を示し、第二のｐＨにおいてＦｃＲｎに対する異なる親和性を示す改変されたポリペプチドであって、該ポリペプチドは、請求項５６に記載の方法によって予測されるアミノ酸配列を含む、改変されたポリペプチド。
【請求項６９】
請求項６８に記載のポリペプチドを含む、薬学的組成物。
【請求項７０】
請求項６８に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２００８−５０４００２（Ｐ２００８−５０４００２Ａ）
【公表日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３９９３６（Ｐ２００６−５３９９３６）
【出願日】平成１６年１１月１２日（２００４．１１．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７９２９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４７３２７
【国際公開日】平成１７年５月２６日（２００５．５．２６）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１１月１２日（２００４．１１．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７９２９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４７３２７
【国際公開日】平成１７年５月２６日（２００５．５．２６）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]