枇杷種子由来エキス、およびその製造方法
【課題】美容健康剤や化粧剤の原材料として好適な枇杷種子由来エキス、およびその製造方法を得る。
【解決手段】抽出工程に先立って、枇杷種子を種子の形態のままで天日にて３日間以上天日干しする。かかる３日以上の天日干しにより、枇杷種子に含まれるアミグダリンをエムルシンにより分解することができる。つまり、３日間以上天日干しすることにより、アミグダリンの分解酵素であるエルムシンを失活させずに機能させることができるので、当該エムルシンによりアミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に分解させて、これらを揮発・除去することができる。エキス中に含まれるシアンの総量は、５５０ｐｐｍ以上、２０００ｐｐｍ以下の範囲にあることが好適である。
【解決手段】抽出工程に先立って、枇杷種子を種子の形態のままで天日にて３日間以上天日干しする。かかる３日以上の天日干しにより、枇杷種子に含まれるアミグダリンをエムルシンにより分解することができる。つまり、３日間以上天日干しすることにより、アミグダリンの分解酵素であるエルムシンを失活させずに機能させることができるので、当該エムルシンによりアミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に分解させて、これらを揮発・除去することができる。エキス中に含まれるシアンの総量は、５５０ｐｐｍ以上、２０００ｐｐｍ以下の範囲にあることが好適である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、枇杷種子由来エキスとその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
この種の枇杷種子由来エキス（以下、適宜に「エキス」と略す。）が、リノール酸、リノレン酸、β−シトステロール、β−シトステロール−３−０−モノグリコシド等の各種有効成分を含有することは、例えば特許文献１ないし４に記載されており公知である。
特許文献１ないし３は、本出願の発明者の一人である西岡豊氏によってなされたものであり、特許文献１では当該エキスを用いて細胞線維化を抑制する組成物を作製している。特許文献２では、当該エキスを用いて体液中の脂肪量を調整するための医薬組成物を作製している。特許文献３では、当該エキスを用いて健康飲食品を作製している。特許文献４では、当該エキスを用いて血糖値上昇抑制等組成物、健康食品、抗糖尿剤を作製している。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−２４０５５３号公報
【特許文献２】特開２００２−１７３４３７号公報
【特許文献３】特開２００３−２４５０５６号公報
【特許文献４】特開２００５−３２５０２９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
枇杷種子由来エキスを美容健康剤に応用する際には、加水分解されると猛毒のシアン化水素を発生するアミグダリンの存在が危惧される。当該アミグダリンの毒性については、Ｃａｔｅｒ．Ｊ．Ｈによる報告があり、ラットにおけるアミグダリンの致死量は６００ｍｇであると報告されている（Ｃａｒｔｅｒ．Ｊ．Ｈ．，Ｍｃｌｅｆｆｅｒｔｙ，Ｍ．Ａ．，Ｇｏｌｄｅｍａｎ，Ｆ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒａｍａｃｏｌ．２９、３０１（１９８０））。また、エキス内におけるアミダリンの含量より、異常とも言える程の大量のエキスを摂取しなければ、青酸中毒などの症状を引き起こすことは無いと考える（特許文献１の段落［００２６］参照）。
【０００５】
しかし、シアンを摂取すると体質等によっては下痢症状などの不具合を引き起こすおそれがあること、およびエキスの応用対象が毎日のように食する美容健康剤であることなどに鑑みると、残留する総シアン量を可及的に低く抑えることが、枇杷種子由来エキスを美容健康剤に応用する際の解決すべき重大な課題となる。
一方、アミグダリンには、遺伝子を傷つけるなど、発ガンのイニシエーターとなり得るハイドロキシラジカル（−ＯＨ）やスーパーオキサイド（Ｏ2 - ）などの生体内ラジカルに対する消去能を備えることも知られている。このため、アミグダリン（シアン）を皆無とすることも、美容健康剤への応用に際して好適であるとは言えない。
【０００６】
本発明は以上のような知見からなされたものであり、ハイドロキシラジカル等の生体内ラジカルに対する良好な消去能を具備しながら、下痢症状などを引き起こすおそれがなく、したがって美容健康剤や化粧剤の原材料として好適な枇杷種子由来エキス、およびその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、枇杷種子から抽出されるエキス（枇杷種子由来エキス）を対象とする。そして、エキス中に含まれるシアンの総量が５５０ｐｐｍ以上、２０００ｐｐｍ以下の範囲にあることを特徴とする。
本発明に係る枇杷種子由来エキスは、これを数十から数百倍に希釈してなる飲料水の形態で服用することができる。また、エキスを固化・粉砕して顆粒状として服用してもよい。
エキスをパウダー状として、化粧剤に含ませることもできる。
【０００８】
エキス中に含まれるプロリンの総量は、９００ｐｐｍ以上の範囲にあることが望ましい。
【０００９】
また本発明は、枇杷種子由来エキスを製造する方法であって、採取した枇杷より果皮および果実を取り除き、得られた枇杷種子を洗浄処理する工程と、洗浄処理後の枇杷種子を、当該種子の形態のままで天日にて３日間以上乾燥させる天日干し工程と、天日干し後の枇杷種子を粉砕し、溶媒で抽出する抽出工程と、減圧処理により溶媒を除去して濃縮液を得る工程とを含むことを特徴とする。なお、天日干し工程においては、７日以上天日干しすることが、より好適である。
【００１０】
前記天日干し工程後、抽出工程に先立って、４０〜６０℃の温度条件下で５時間以上枇杷種子を乾燥させる乾燥工程を含むものとすることができる。
【００１１】
前記抽出工程においては、７０％エタノールを溶媒として抽出処理を行うことが好ましい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る枇杷種子由来エキスによれば、シアンの総量を２０００ｐｐｍ以下の範囲としたので、エキスに含まれる下痢症状等を引き起こすおそれがなく、安全性に優れたエキスを得ることができる。加えて、本発明に係る枇杷種子由来エキスでは、シアンの総量を５５０ｐｐｍ以上としたので、スーパーオキサイドやハイドロラジカルなどの生体内ラジカルに対する良好な消去能を発揮するものとなる。以上より、このエキスは、毎日のように服用される美容健康剤や化粧剤の原材料として好適である。
【００１３】
このように、エキス中のシアンの総量の最適化を図るためには、抽出工程に先立って、枇杷種子を種子の形態のままで天日にて３日間以上、より好ましくは７日以上、天日干しすることが有効である。かかる３日以上の天日干しにより、枇杷種子に含まれるアミグダリンをエムルシンにより分解することができる。つまり、３日間以上天日干しすることにより、アミグダリンの分解酵素であるエルムシンを失活させずに機能させることができるので、当該エムルシンによりアミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に効率的に分解させて、これらを揮発・除去することができる。これに対して、天日干し時間が短いと、枇杷種子中のアミグダリンを効率的に分解することができず、結果として、多くのシアンがエキス中に残留することとなる。
【００１４】
加えて、天日干し工程後、抽出工程に先立って、４０〜６０℃の温度条件下で５時間以上枇杷種子を乾燥させる乾燥工程を行うようにしていると、当該乾燥工程においてもエムルシンのアミグダリンに対する分解能が発揮され、同時に分解後のアミグダリンに対する揮散能が発揮され、したがって、エキス中のシアンの総量をより減少させることができる。かかる乾燥工程においては、種子をスライスしたうえで、乾燥を行うことが好ましい。
【００１５】
エキス中に含まれるプロリンの総量は、９００ｐｐｍ以上の範囲にあることが好ましい。このように表皮細胞増殖促進活性、コラーゲン合成促進活性、角質層保湿作用などの生理活性に優れた、有用アミノ酸の一種であるプロリンを枇杷種子由来エキス中に多く含ませることで、当該エキスは美容健康剤や化粧剤の原材料として有用なものとなる。
【００１６】
エキス中のプロリン等の有効成分の増加を図るとともに、シアン量（アミグダリン）の減少を図るためには、抽出工程における溶媒として７０％エタノールを使用することが最適である。これに対して、例えば水を溶媒として抽出作業を行った場合には、エキス中のプロリン等は僅かであり、得られたエキスは美容健康飲剤や化粧剤としては最適であるとは言えない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明者等は、枇杷種子由来エキス中のシアン化合物の含有量を抑えるためには、いかに、アミグダリンの分解酵素であるエルムシンを失活させずに機能させ、当該エムルシンによりアミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に分解させるとともに、これらをより確実に揮発・除去することが重要であるとの結論に至り、本発明を完成するに至った。枇杷種子由来エキスの具体的製造方法を以下に示す。
【００１８】
図１に示すように、まず、採取した枇杷より果皮及び果実を取去り、得られた枇杷種子を洗浄する（洗浄工程）。ここでは、枇杷種子を水洗いして薄皮等を除去する。
【００１９】
次に、洗浄処理された枇杷種子を水切りし、種子のままで延べ３日以上「天日干し」を行う（天日干し工程）。かかる天日干しにおける約４０℃の温度条件において、アミグダリンの分解酵素であるエムルシンが最も良好な分解能を発揮し、アミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に分解して、これらを揮発・除去することができる。
これに対して、乾燥機等を用いて高温（例えば１００℃）で乾燥処理した場合には、エムルシンは失活し、良好な分解能が得られない。また、種子をスライスさせて急速に乾燥させた場合にも、エムルシンが分解能を発揮するために不可欠な水分が不足するため、好ましくない。
【００２０】
なお、「天日干し」しない夜間等においては、酵素エムルシンを機能させるために、室温以上の温度（２５℃）以上で保存することが好ましい。これに対して、保冷室等の冷所（例えば４℃以下）により保存した場合には、エムルシンの分解能が失活するため好ましくない。
【００２１】
次に、「天日干し」後、乾燥機等を用いて５時間以上乾燥を行う（乾燥工程）。この際の温度条件は４０℃以上、６０℃以下とする。また、以上のような乾燥工程においては、枇杷種子をスライスしたうえで乾燥を行うことが好ましい。
これに対して、乾燥効率を上げるために、６０℃以上の温度で乾燥を行うと、急激な水分の減少により酵素エムルシンが失活あるいは機能しなくなるおそれがある。また、乾燥後、スライスされた種子を保存する際にも室温にて保存することが好ましく、保冷庫等の冷所による保存は不適である。
【００２２】
次に、枇杷種子を粉砕する。粉砕の方法は特に限定されず、ボールミル、ハンマーミル、ローラーミル、ロッドミル、サンプルミル、スタンプミル、ディスインテグレーター、乳鉢、冷却装置付きブレンダーなどの公知の粉砕機を用いることができる。粉砕時における発熱により、各種有効成分が分解することが考えられるため、冷却機付きブレンダーが最適である。なお、本願発明における「粉砕」とはスライスをも含む概念であり、粉砕後の種子の大きさは抽出条件に応じて、適宜に変えることができる。
【００２３】
枇杷種子を粉砕し粉砕物を得た後、各種溶媒に粉砕物を浸漬する（抽出工程）。溶媒としては、エタノール、メタノール、水、ヘキサン、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンなどの極性、非極性溶媒を挙げることができる。より有用アミノ酸を多く含むエキスを得るという観点からは、溶媒としてはメタノール、エタノール等が好適である。
特に、７０％エタノールを用いれば、有効成分の一つであるプロリンを、より多く抽出することができる。
【００２４】
かかる抽出工程においては、穏やかな攪拌下で行うことができる、溶液の状態に応じて攪拌を行い、場合によってはそのまま溶液を放置してもよい。攪拌する場合には、特に限定されないが、５〜１０日間攪拌を持続させることができる。
【００２５】
その後、上清を分取し、これを蒸発乾固或いは濃縮させる（濃縮工程）。これら蒸発乾固或いは濃縮は、エバポレータを用いて、５５℃〜８０℃の温浴上で行うことができる。濃縮液に対して１００℃で３０分間加熱してもよい（加熱工程）。かかる加熱工程により、遊離シアンをさらに揮発・除去することができる。最後に濃縮工程を経た固化或いは濃縮液、又は加熱工程を経た加熱後の濃縮液に対して、水を加えて総量が２００ｍｌとなるようにして、本発明に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【実施例】
【００２６】
〈シアン量の上限値について〉
（実施例１）
（１）天日干し、乾燥工程
枇杷の実を出荷した後の木で枇杷を回収し、手作業で種を外した。得られた枇杷種子に対して、水洗いおよび水切りし、種子形態のままで７日間天日干しを行った。天日干しを行わない夜間等においては、２５℃以上に保たれた室内で保存した。次に、枇杷種子をスライスしたうえで、６０℃の温度条件下で５時間乾燥させた。
【００２７】
（２）抽出工程、濃縮工程
乾燥工程を経た枇杷種子を、冷却機付きブレンダーで２〜３ｍｍ角に粉砕し、粉砕物（１ｋｇ）を７０％エタノールに１０日間浸漬させた。上清を分取し、エバポレータで８０℃の温浴上で溶媒を飛ばして、約１３０ｇに濃縮させた。かかる濃縮液に水を加えて、総量を２００ｍｌとして、実施例１に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００２８】
すなわち、本実施例においては、天日干し工程および乾燥工程を経た粉砕状態の枇杷種子１ｋｇを溶媒に浸漬させて抽出液を得たのちに、抽出液から溶媒を飛ばして約１３０ｇに濃縮し、最後に水を加えて総量を２００ｍｌとしたものを枇杷種子由来エキスとしている。以下においても同様である。
【００２９】
（実施例２）
天日干し工程において、天日干し時間を３日間とした以外は、実施例１と同様にして、実施例２に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３０】
（実施例３）
乾燥工程において、常温で２日間乾燥させた以外は、実施例１と同様にして、実施例３に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３１】
（比較例１）
天日干し工程において、表面付着の水分を乾燥させるため数時間天日干しを行い、その後、冷所にて２週間保存した以外は、実施例１と同様にして、比較例１に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３２】
（比較例２）
天日干し工程を省き、冷所にて４週間保存したこと以外は、実施例１と同様にして、比較例２に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３３】
（比較例３）
天日干し工程において、表面付着の水分を乾燥させるため数時間天日干しを行い、その後、室温にて数日間保存した以外は、実施例１と同様にして、比較例３に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３４】
得られた実施例および比較例に係る枇杷種子由来エキスに含まれる総シアン量の測定結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
【００３６】
表１より、天日干し時間が３日間以上である実施例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスの方が、天日干し時間が数時間、あるいは天日干しを行わない比較例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスよりも総シアン量が少ないことがわかる。以上より、天日干し時間を３日間以上とすることで、エキスに含まれるシアン量を減少させることができることが確認できた。
【００３７】
また、実施例１と実施例２の比較より、天日干し時間を７日間（１週間）とすることで、エキスに含まれる総シアン量をより減少させることできることが確認できた。また、実施例１と実施例３の比較より、抽出工程に先立って枇杷種子の形態のままで６０℃の加温条件下で乾燥させる（実施例１）と、常温で乾燥させた場合（実施例３）よりも、総シアン量をより減少させることができることが確認できた。
【００３８】
次に、実施例１ないし３および比較例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスを１００倍に薄めて美容健康飲料水（１％枇杷種子由来エキス含有飲料水）を作成し、各飲料水を３人のモニターに７日間、朝夕５０ｍｌずつ内服させた。
その結果、比較例１ないし３（エキス中の総シアン量が２０００ｐｐｍを超える）では、それぞれ一人のモニターが軟便・下痢症状を訴え、使用感も不快であったと回答した。これに対して、実施例１ないし３に係るエキス（総シアン量が２０００ｐｐｍ以下）を含む美容健康飲料水では、各３人のモニター全員が軟便等とならず、使用感も良好或いは普通であるとの回答を得た。
【００３９】
〈ラットを用いた急性経口毒性試験〉
上述のように、実施例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスは、人が口にしても軟便・下痢症状を引き起こすことはなかったが、その安全性をより明確にするため、ラットを用いた急性経口毒性試験を行った。なお、当該試験は、財団法人日本食品分析センターに委託した。
【００４０】
試験群には２０００ｍｇ／ｋｇの用量の検体を、対象群には溶媒対象として注射用水を雄雌ラットに単回経口投与し、１４日間観察を行った。具体的には、枇杷種子由来エキス（実施例１）である検体を注射用液で希釈し、１００ｍｇ／ｍｌの試験液を調整した。試験動物としては、５週齢のＢｒｌｈａｎ：ＷＩＳＴ系＠Ｊｃｌ雄雌ラットを日本クレア株式会社から購入し、約１週間の予備飼育を行って一般状態に異常のないことを確認した後、試験に使用した。試験動物は、ポリカーボネート製ゲージに各５匹収容し、室温２３℃±２℃、照明時間１２時間／日に設定した飼育室内において飼育した。飼料「マウス、ラット用固形飼料：ラボＭＲストック、日本農産工業株式会社」および飲料水（水道水）は自由に摂取させた。
【００４１】
検体投与量として２０００ｍｇ／ｋｇを投与する試験群及び溶媒対象として注射用水を投与する対象群を設定し、各群につき雄雌それぞれ５匹を用いた。
投与前に約１７時間試験動物を絶食させた。体重を測定した後、試験群には試験液、対象群には注射用水をそれぞれ２０ｍｌ／ｋｇの投与容量で胃ゾンデを用いて強制単回経口投与した。
観察期間は１４日間とし、投与日は頻回、翌日から１日１回の観察を行った。投与後７日及び１４日に体重を測定し、ｔ−検定により有意水準５％で群間の比較を行った。観察期間終了後に動物すべてを剖検した。
【００４２】
以上のような試験の結果、雄雌ともにいずれの投与群においても、観察期間中に死亡例は認められなかった。また、一般状態として、雄雌ともにいずれの投与群においても、観察期間中に異常は見られなかった。
【００４３】
投与後７日及び１４日の体重測定において、雄雌ともに試験群は対象群と比べ体重値に差は見られなかった。なお表２に体重の変化を示す。また、観察期間終了後の剖検では、雄雌ともに全ての試験動物に異常は見られなかった。
【００４４】
【表２】
【００４５】
以上より、検体のラットにおける単回経口投与によるＬＤ５０値は、雄雌ともに２０００ｍｇ／ｋｇ以上であるとの結論を得た。
【００４６】
〈シアン量の下限値について〉
総シアン量が７００ｐｐｍである枇杷種子由来エキスを約１０倍に薄めて１２ｐｐｍの総シアン量を有するエキスを作製し、当該エキスのラジカル消去能について測定した。まず、実験的ラジカルに対するラジカル消去能を確認することを目的として、比較的安定なフリーラジカルを有するＤＰＰＨ（１、１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）に対して試験を行った。ここでは、ＤＰＰＨのフリーラジカルが半分となるときのエキスの添加量を測定した。また、比較例として、優れたラジカル消去能を有するものとして知られているアスコルビン酸（ビタミンＣ）とエダラボンについても同様の試験を行った。その結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
【００４８】
表３より、１２ｐｐｍの総シアン量を有する本発明の枇杷種子由来エキスが、エダラボンと略同等のＤＰＰＨに対するラジカル消去能を具備することが確認できた。
【００４９】
次に、生体内ラジカルであるスーパーオキサイドに対するラジカル消去能について確認試験を行った。ここでは、枇杷種子由来エキス（１２ｐｐｍ総シアン量）、アスコルビン酸、エダラボン各１００μＭを用いて、スーパーオキサイドのＳＯＤ様活性（％）を測定した。その結果を表４に示す。
【００５０】
【表４】
【００５１】
表４より、１２ｐｐｍの総シアン量を有する本発明の枇杷種子由来エキスが、アスコルビン酸やエダラボンに比べて、格段に優れたスーパーオキサイドに対する消去能を具備することがわかる。
【００５２】
次に、生体内ラジカルであるハイドロキシラジカルに対するラジカル消去能について確認試験を行った。ここでは、枇杷種子由来エキス（１２ｐｐｍ総シアン量）、アスコルビン酸、エダラボン各１００μＭを用いて、ハイドロキシラジカルのＳＯＤ様活性（％）を測定した。その結果を表５に示す。
【００５３】
【表５】
【００５４】
表５より、１２ｐｐｍの総シアン量を含む本発明の枇杷種子由来エキスが、アスコルビン酸やエダラボンに比べて、格段に優れたハイドロキシラジカルに対する消去能を具備することがわかる。
【００５５】
次に、濃度を０ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌの範囲で希釈してなる５種の濃度のエキスを作製し、各エキスのスーパーオキサイドに対する産生抑制率と除去率とを測定した。その結果を図２に示す。図２より、濃度の上昇に伴い、産生抑制率および除去率は上昇傾向にあることがわかる。このことから、少なくとも１２ｐｐｍの総シアン量を含む本発明の枇杷種子由来エキスが、生体内ラジカルに対する優れた産生抑制能および消去能を発揮すること、および当該総シアン量の増加に伴い、これら産生抑制能および消去能が増すことが確認できた。また、当該試験結果、および実施例１の結果より、本発明においては、５５０ｐｐｍを総シアン量の下限値とした。
【００５６】
〈枇杷種子由来エキスに含まれる有効成分について〉
枇杷種子由来エキスに含まれる成分は、枇杷種子を極性の異なる溶媒を用いて抽出することにより、その物性により振り分けられる。したがって、使用した溶媒により、エキス成分の種類および含有量は異なる。
【００５７】
図３は、各種枇杷種子由来エキスの成分を調べるために、各種溶媒を用いて抽出したエキスの薄層クロマトグラムを示す。
【００５８】
この薄層クロマトグラムによれば、溶媒が水であるエキス（以下、水エキスという）は、原点にのみスポットが認められ、したがって、タンパク質、糖類、アミグダリン等の極性の高い化合物を含有すると考えられる。
【００５９】
また、溶媒が７０％エタノールであるエキス（以下、７０％エタノールエキスという）、及び溶媒がメタノールであるエキス（以下、メタノールエキスという）は、薄層クロマトグラムにおいて原点のスポットが水エキスに比較して小さく、タンパク質、糖類、アミグダリン等の極性の高い化合物が少ないと考えられる。７０％エタノールエキス及びメタノールエキスにおいては、薄層クロマトグラムにてＲｆ値が０．６３を示す化合物はリノール酸、Ｒｆ値が０．５３を示す化合物は、β−シトステロール、Ｒｆ値が０．４１を示す化合物はリノール酸、Ｒｆ値が０．２５を示す化合物はβ−シトステロール−３−０−モノグリコシドであることが、構造解析より判明したことにより、これらの化合物を少なくとも含む。
【００６０】
枇杷種子由来エキスのアミノ酸の分析結果を表６に示す。なお、表６では、枇杷種子１ｋｇから得られるアミノ酸量を示す。当該表１より、７０％エタノールを用いて抽出されたエキスが、他の溶媒を用いて抽出されたエキスよりも、プロリンを多く含むことがわかる。
【００６１】
【表６】
【００６２】
表７および図４に、枇杷種子由来エキスのアミノ酸量をより詳しく分析した結果を示す。かかる表７におよび図４は、７０％エタノールを用いて抽出されたエキスの１ｍｌ中に含まれる各アミノ酸量を示している。なお、表７において「＜ＱＬ」は、「ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ：（定量限界よりも少ないこと）」を示す。なお、表７において、遊離プロリン量が総プロリン量を超えているのは誤差であると考える。また、当該測定結果より、このエキス中においては、略全てのプロリンが、遊離プロリンとして存在していることがわかる。
【００６３】
【表７】
【００６４】
また表８に、本発明の他の実施例に係る枇杷種子由来エキスのアミノ酸量の測定結果を示す。当該数値では、特にプロリンの総量が０．９ｍｇ／ｍｌ（９００ｐｐｍ）以上である点が着目される。
【００６５】
【表８】
【００６６】
次に、枇杷種子由来エキスのヒト皮膚生理に対する効果を確かめることを目的として、経皮水分喪失を測定した。具体的には、皮膚に疾患を持たない女性３６名（３０歳、４０歳、５０歳代の各群）を対象として、表８に係る枇杷種子由来エキスを１００倍に薄めてなる美容健康飲料水を朝夕５０ｍｌずつ４週間内服してもらった。内服前、内服２週間、内服終了後に検査を行った。使用機器としては、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒを用いて、前腕屈側を３０回測定し、平均値を得た。その結果を図５に、使用感に関するアンケート（設問式のデータ集計）の結果を図６に示す。
【００６７】
図５より、３０歳代女性では、僅かな経皮水分の損失の増加が見られたが、４０歳代および５０歳代では、減少が見られた。また、図６に示すように、枇杷種子由来エキスを含む美容健康飲料水の４週間内服によって自覚的にカサカサ感が改善したことが確認できた。以上の図４および図５の結果より、本発明に係る枇杷種子由来エキスが、カサカサ感などの改善に有用であることが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】本発明に係る枇杷種子由来エキスの製造方法を示す図である。
【図２】枇杷種子由来エキスのスーパーオキサイドに対する産生抑制率と除去率の測定結果を示す図である。
【図３】各種溶媒を用いた場合の薄層クロマトグラムの結果を示す図である。
【図４】枇杷種子由来エキスのアミノ酸量を示す図である。
【図５】（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は、経皮水分の測定結果を示す図である。
【図６】（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は、枇杷種子由来エキスを含む美容健康飲料水を内服した際の使用感を示すアンケート結果である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、枇杷種子由来エキスとその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
この種の枇杷種子由来エキス（以下、適宜に「エキス」と略す。）が、リノール酸、リノレン酸、β−シトステロール、β−シトステロール−３−０−モノグリコシド等の各種有効成分を含有することは、例えば特許文献１ないし４に記載されており公知である。
特許文献１ないし３は、本出願の発明者の一人である西岡豊氏によってなされたものであり、特許文献１では当該エキスを用いて細胞線維化を抑制する組成物を作製している。特許文献２では、当該エキスを用いて体液中の脂肪量を調整するための医薬組成物を作製している。特許文献３では、当該エキスを用いて健康飲食品を作製している。特許文献４では、当該エキスを用いて血糖値上昇抑制等組成物、健康食品、抗糖尿剤を作製している。
【０００３】
【特許文献１】特開２００１−２４０５５３号公報
【特許文献２】特開２００２−１７３４３７号公報
【特許文献３】特開２００３−２４５０５６号公報
【特許文献４】特開２００５−３２５０２９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
枇杷種子由来エキスを美容健康剤に応用する際には、加水分解されると猛毒のシアン化水素を発生するアミグダリンの存在が危惧される。当該アミグダリンの毒性については、Ｃａｔｅｒ．Ｊ．Ｈによる報告があり、ラットにおけるアミグダリンの致死量は６００ｍｇであると報告されている（Ｃａｒｔｅｒ．Ｊ．Ｈ．，Ｍｃｌｅｆｆｅｒｔｙ，Ｍ．Ａ．，Ｇｏｌｄｅｍａｎ，Ｆ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒａｍａｃｏｌ．２９、３０１（１９８０））。また、エキス内におけるアミダリンの含量より、異常とも言える程の大量のエキスを摂取しなければ、青酸中毒などの症状を引き起こすことは無いと考える（特許文献１の段落［００２６］参照）。
【０００５】
しかし、シアンを摂取すると体質等によっては下痢症状などの不具合を引き起こすおそれがあること、およびエキスの応用対象が毎日のように食する美容健康剤であることなどに鑑みると、残留する総シアン量を可及的に低く抑えることが、枇杷種子由来エキスを美容健康剤に応用する際の解決すべき重大な課題となる。
一方、アミグダリンには、遺伝子を傷つけるなど、発ガンのイニシエーターとなり得るハイドロキシラジカル（−ＯＨ）やスーパーオキサイド（Ｏ2 - ）などの生体内ラジカルに対する消去能を備えることも知られている。このため、アミグダリン（シアン）を皆無とすることも、美容健康剤への応用に際して好適であるとは言えない。
【０００６】
本発明は以上のような知見からなされたものであり、ハイドロキシラジカル等の生体内ラジカルに対する良好な消去能を具備しながら、下痢症状などを引き起こすおそれがなく、したがって美容健康剤や化粧剤の原材料として好適な枇杷種子由来エキス、およびその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、枇杷種子から抽出されるエキス（枇杷種子由来エキス）を対象とする。そして、エキス中に含まれるシアンの総量が５５０ｐｐｍ以上、２０００ｐｐｍ以下の範囲にあることを特徴とする。
本発明に係る枇杷種子由来エキスは、これを数十から数百倍に希釈してなる飲料水の形態で服用することができる。また、エキスを固化・粉砕して顆粒状として服用してもよい。
エキスをパウダー状として、化粧剤に含ませることもできる。
【０００８】
エキス中に含まれるプロリンの総量は、９００ｐｐｍ以上の範囲にあることが望ましい。
【０００９】
また本発明は、枇杷種子由来エキスを製造する方法であって、採取した枇杷より果皮および果実を取り除き、得られた枇杷種子を洗浄処理する工程と、洗浄処理後の枇杷種子を、当該種子の形態のままで天日にて３日間以上乾燥させる天日干し工程と、天日干し後の枇杷種子を粉砕し、溶媒で抽出する抽出工程と、減圧処理により溶媒を除去して濃縮液を得る工程とを含むことを特徴とする。なお、天日干し工程においては、７日以上天日干しすることが、より好適である。
【００１０】
前記天日干し工程後、抽出工程に先立って、４０〜６０℃の温度条件下で５時間以上枇杷種子を乾燥させる乾燥工程を含むものとすることができる。
【００１１】
前記抽出工程においては、７０％エタノールを溶媒として抽出処理を行うことが好ましい。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る枇杷種子由来エキスによれば、シアンの総量を２０００ｐｐｍ以下の範囲としたので、エキスに含まれる下痢症状等を引き起こすおそれがなく、安全性に優れたエキスを得ることができる。加えて、本発明に係る枇杷種子由来エキスでは、シアンの総量を５５０ｐｐｍ以上としたので、スーパーオキサイドやハイドロラジカルなどの生体内ラジカルに対する良好な消去能を発揮するものとなる。以上より、このエキスは、毎日のように服用される美容健康剤や化粧剤の原材料として好適である。
【００１３】
このように、エキス中のシアンの総量の最適化を図るためには、抽出工程に先立って、枇杷種子を種子の形態のままで天日にて３日間以上、より好ましくは７日以上、天日干しすることが有効である。かかる３日以上の天日干しにより、枇杷種子に含まれるアミグダリンをエムルシンにより分解することができる。つまり、３日間以上天日干しすることにより、アミグダリンの分解酵素であるエルムシンを失活させずに機能させることができるので、当該エムルシンによりアミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に効率的に分解させて、これらを揮発・除去することができる。これに対して、天日干し時間が短いと、枇杷種子中のアミグダリンを効率的に分解することができず、結果として、多くのシアンがエキス中に残留することとなる。
【００１４】
加えて、天日干し工程後、抽出工程に先立って、４０〜６０℃の温度条件下で５時間以上枇杷種子を乾燥させる乾燥工程を行うようにしていると、当該乾燥工程においてもエムルシンのアミグダリンに対する分解能が発揮され、同時に分解後のアミグダリンに対する揮散能が発揮され、したがって、エキス中のシアンの総量をより減少させることができる。かかる乾燥工程においては、種子をスライスしたうえで、乾燥を行うことが好ましい。
【００１５】
エキス中に含まれるプロリンの総量は、９００ｐｐｍ以上の範囲にあることが好ましい。このように表皮細胞増殖促進活性、コラーゲン合成促進活性、角質層保湿作用などの生理活性に優れた、有用アミノ酸の一種であるプロリンを枇杷種子由来エキス中に多く含ませることで、当該エキスは美容健康剤や化粧剤の原材料として有用なものとなる。
【００１６】
エキス中のプロリン等の有効成分の増加を図るとともに、シアン量（アミグダリン）の減少を図るためには、抽出工程における溶媒として７０％エタノールを使用することが最適である。これに対して、例えば水を溶媒として抽出作業を行った場合には、エキス中のプロリン等は僅かであり、得られたエキスは美容健康飲剤や化粧剤としては最適であるとは言えない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明者等は、枇杷種子由来エキス中のシアン化合物の含有量を抑えるためには、いかに、アミグダリンの分解酵素であるエルムシンを失活させずに機能させ、当該エムルシンによりアミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に分解させるとともに、これらをより確実に揮発・除去することが重要であるとの結論に至り、本発明を完成するに至った。枇杷種子由来エキスの具体的製造方法を以下に示す。
【００１８】
図１に示すように、まず、採取した枇杷より果皮及び果実を取去り、得られた枇杷種子を洗浄する（洗浄工程）。ここでは、枇杷種子を水洗いして薄皮等を除去する。
【００１９】
次に、洗浄処理された枇杷種子を水切りし、種子のままで延べ３日以上「天日干し」を行う（天日干し工程）。かかる天日干しにおける約４０℃の温度条件において、アミグダリンの分解酵素であるエムルシンが最も良好な分解能を発揮し、アミグダリンをベンズアルデヒドとシアン化水素に分解して、これらを揮発・除去することができる。
これに対して、乾燥機等を用いて高温（例えば１００℃）で乾燥処理した場合には、エムルシンは失活し、良好な分解能が得られない。また、種子をスライスさせて急速に乾燥させた場合にも、エムルシンが分解能を発揮するために不可欠な水分が不足するため、好ましくない。
【００２０】
なお、「天日干し」しない夜間等においては、酵素エムルシンを機能させるために、室温以上の温度（２５℃）以上で保存することが好ましい。これに対して、保冷室等の冷所（例えば４℃以下）により保存した場合には、エムルシンの分解能が失活するため好ましくない。
【００２１】
次に、「天日干し」後、乾燥機等を用いて５時間以上乾燥を行う（乾燥工程）。この際の温度条件は４０℃以上、６０℃以下とする。また、以上のような乾燥工程においては、枇杷種子をスライスしたうえで乾燥を行うことが好ましい。
これに対して、乾燥効率を上げるために、６０℃以上の温度で乾燥を行うと、急激な水分の減少により酵素エムルシンが失活あるいは機能しなくなるおそれがある。また、乾燥後、スライスされた種子を保存する際にも室温にて保存することが好ましく、保冷庫等の冷所による保存は不適である。
【００２２】
次に、枇杷種子を粉砕する。粉砕の方法は特に限定されず、ボールミル、ハンマーミル、ローラーミル、ロッドミル、サンプルミル、スタンプミル、ディスインテグレーター、乳鉢、冷却装置付きブレンダーなどの公知の粉砕機を用いることができる。粉砕時における発熱により、各種有効成分が分解することが考えられるため、冷却機付きブレンダーが最適である。なお、本願発明における「粉砕」とはスライスをも含む概念であり、粉砕後の種子の大きさは抽出条件に応じて、適宜に変えることができる。
【００２３】
枇杷種子を粉砕し粉砕物を得た後、各種溶媒に粉砕物を浸漬する（抽出工程）。溶媒としては、エタノール、メタノール、水、ヘキサン、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンなどの極性、非極性溶媒を挙げることができる。より有用アミノ酸を多く含むエキスを得るという観点からは、溶媒としてはメタノール、エタノール等が好適である。
特に、７０％エタノールを用いれば、有効成分の一つであるプロリンを、より多く抽出することができる。
【００２４】
かかる抽出工程においては、穏やかな攪拌下で行うことができる、溶液の状態に応じて攪拌を行い、場合によってはそのまま溶液を放置してもよい。攪拌する場合には、特に限定されないが、５〜１０日間攪拌を持続させることができる。
【００２５】
その後、上清を分取し、これを蒸発乾固或いは濃縮させる（濃縮工程）。これら蒸発乾固或いは濃縮は、エバポレータを用いて、５５℃〜８０℃の温浴上で行うことができる。濃縮液に対して１００℃で３０分間加熱してもよい（加熱工程）。かかる加熱工程により、遊離シアンをさらに揮発・除去することができる。最後に濃縮工程を経た固化或いは濃縮液、又は加熱工程を経た加熱後の濃縮液に対して、水を加えて総量が２００ｍｌとなるようにして、本発明に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【実施例】
【００２６】
〈シアン量の上限値について〉
（実施例１）
（１）天日干し、乾燥工程
枇杷の実を出荷した後の木で枇杷を回収し、手作業で種を外した。得られた枇杷種子に対して、水洗いおよび水切りし、種子形態のままで７日間天日干しを行った。天日干しを行わない夜間等においては、２５℃以上に保たれた室内で保存した。次に、枇杷種子をスライスしたうえで、６０℃の温度条件下で５時間乾燥させた。
【００２７】
（２）抽出工程、濃縮工程
乾燥工程を経た枇杷種子を、冷却機付きブレンダーで２〜３ｍｍ角に粉砕し、粉砕物（１ｋｇ）を７０％エタノールに１０日間浸漬させた。上清を分取し、エバポレータで８０℃の温浴上で溶媒を飛ばして、約１３０ｇに濃縮させた。かかる濃縮液に水を加えて、総量を２００ｍｌとして、実施例１に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００２８】
すなわち、本実施例においては、天日干し工程および乾燥工程を経た粉砕状態の枇杷種子１ｋｇを溶媒に浸漬させて抽出液を得たのちに、抽出液から溶媒を飛ばして約１３０ｇに濃縮し、最後に水を加えて総量を２００ｍｌとしたものを枇杷種子由来エキスとしている。以下においても同様である。
【００２９】
（実施例２）
天日干し工程において、天日干し時間を３日間とした以外は、実施例１と同様にして、実施例２に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３０】
（実施例３）
乾燥工程において、常温で２日間乾燥させた以外は、実施例１と同様にして、実施例３に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３１】
（比較例１）
天日干し工程において、表面付着の水分を乾燥させるため数時間天日干しを行い、その後、冷所にて２週間保存した以外は、実施例１と同様にして、比較例１に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３２】
（比較例２）
天日干し工程を省き、冷所にて４週間保存したこと以外は、実施例１と同様にして、比較例２に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３３】
（比較例３）
天日干し工程において、表面付着の水分を乾燥させるため数時間天日干しを行い、その後、室温にて数日間保存した以外は、実施例１と同様にして、比較例３に係る枇杷種子由来エキスを得た。
【００３４】
得られた実施例および比較例に係る枇杷種子由来エキスに含まれる総シアン量の測定結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
【００３６】
表１より、天日干し時間が３日間以上である実施例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスの方が、天日干し時間が数時間、あるいは天日干しを行わない比較例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスよりも総シアン量が少ないことがわかる。以上より、天日干し時間を３日間以上とすることで、エキスに含まれるシアン量を減少させることができることが確認できた。
【００３７】
また、実施例１と実施例２の比較より、天日干し時間を７日間（１週間）とすることで、エキスに含まれる総シアン量をより減少させることできることが確認できた。また、実施例１と実施例３の比較より、抽出工程に先立って枇杷種子の形態のままで６０℃の加温条件下で乾燥させる（実施例１）と、常温で乾燥させた場合（実施例３）よりも、総シアン量をより減少させることができることが確認できた。
【００３８】
次に、実施例１ないし３および比較例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスを１００倍に薄めて美容健康飲料水（１％枇杷種子由来エキス含有飲料水）を作成し、各飲料水を３人のモニターに７日間、朝夕５０ｍｌずつ内服させた。
その結果、比較例１ないし３（エキス中の総シアン量が２０００ｐｐｍを超える）では、それぞれ一人のモニターが軟便・下痢症状を訴え、使用感も不快であったと回答した。これに対して、実施例１ないし３に係るエキス（総シアン量が２０００ｐｐｍ以下）を含む美容健康飲料水では、各３人のモニター全員が軟便等とならず、使用感も良好或いは普通であるとの回答を得た。
【００３９】
〈ラットを用いた急性経口毒性試験〉
上述のように、実施例１ないし３に係る枇杷種子由来エキスは、人が口にしても軟便・下痢症状を引き起こすことはなかったが、その安全性をより明確にするため、ラットを用いた急性経口毒性試験を行った。なお、当該試験は、財団法人日本食品分析センターに委託した。
【００４０】
試験群には２０００ｍｇ／ｋｇの用量の検体を、対象群には溶媒対象として注射用水を雄雌ラットに単回経口投与し、１４日間観察を行った。具体的には、枇杷種子由来エキス（実施例１）である検体を注射用液で希釈し、１００ｍｇ／ｍｌの試験液を調整した。試験動物としては、５週齢のＢｒｌｈａｎ：ＷＩＳＴ系＠Ｊｃｌ雄雌ラットを日本クレア株式会社から購入し、約１週間の予備飼育を行って一般状態に異常のないことを確認した後、試験に使用した。試験動物は、ポリカーボネート製ゲージに各５匹収容し、室温２３℃±２℃、照明時間１２時間／日に設定した飼育室内において飼育した。飼料「マウス、ラット用固形飼料：ラボＭＲストック、日本農産工業株式会社」および飲料水（水道水）は自由に摂取させた。
【００４１】
検体投与量として２０００ｍｇ／ｋｇを投与する試験群及び溶媒対象として注射用水を投与する対象群を設定し、各群につき雄雌それぞれ５匹を用いた。
投与前に約１７時間試験動物を絶食させた。体重を測定した後、試験群には試験液、対象群には注射用水をそれぞれ２０ｍｌ／ｋｇの投与容量で胃ゾンデを用いて強制単回経口投与した。
観察期間は１４日間とし、投与日は頻回、翌日から１日１回の観察を行った。投与後７日及び１４日に体重を測定し、ｔ−検定により有意水準５％で群間の比較を行った。観察期間終了後に動物すべてを剖検した。
【００４２】
以上のような試験の結果、雄雌ともにいずれの投与群においても、観察期間中に死亡例は認められなかった。また、一般状態として、雄雌ともにいずれの投与群においても、観察期間中に異常は見られなかった。
【００４３】
投与後７日及び１４日の体重測定において、雄雌ともに試験群は対象群と比べ体重値に差は見られなかった。なお表２に体重の変化を示す。また、観察期間終了後の剖検では、雄雌ともに全ての試験動物に異常は見られなかった。
【００４４】
【表２】
【００４５】
以上より、検体のラットにおける単回経口投与によるＬＤ５０値は、雄雌ともに２０００ｍｇ／ｋｇ以上であるとの結論を得た。
【００４６】
〈シアン量の下限値について〉
総シアン量が７００ｐｐｍである枇杷種子由来エキスを約１０倍に薄めて１２ｐｐｍの総シアン量を有するエキスを作製し、当該エキスのラジカル消去能について測定した。まず、実験的ラジカルに対するラジカル消去能を確認することを目的として、比較的安定なフリーラジカルを有するＤＰＰＨ（１、１−Ｄｉｐｈｅｎｙｌ−２−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）に対して試験を行った。ここでは、ＤＰＰＨのフリーラジカルが半分となるときのエキスの添加量を測定した。また、比較例として、優れたラジカル消去能を有するものとして知られているアスコルビン酸（ビタミンＣ）とエダラボンについても同様の試験を行った。その結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
【００４８】
表３より、１２ｐｐｍの総シアン量を有する本発明の枇杷種子由来エキスが、エダラボンと略同等のＤＰＰＨに対するラジカル消去能を具備することが確認できた。
【００４９】
次に、生体内ラジカルであるスーパーオキサイドに対するラジカル消去能について確認試験を行った。ここでは、枇杷種子由来エキス（１２ｐｐｍ総シアン量）、アスコルビン酸、エダラボン各１００μＭを用いて、スーパーオキサイドのＳＯＤ様活性（％）を測定した。その結果を表４に示す。
【００５０】
【表４】
【００５１】
表４より、１２ｐｐｍの総シアン量を有する本発明の枇杷種子由来エキスが、アスコルビン酸やエダラボンに比べて、格段に優れたスーパーオキサイドに対する消去能を具備することがわかる。
【００５２】
次に、生体内ラジカルであるハイドロキシラジカルに対するラジカル消去能について確認試験を行った。ここでは、枇杷種子由来エキス（１２ｐｐｍ総シアン量）、アスコルビン酸、エダラボン各１００μＭを用いて、ハイドロキシラジカルのＳＯＤ様活性（％）を測定した。その結果を表５に示す。
【００５３】
【表５】
【００５４】
表５より、１２ｐｐｍの総シアン量を含む本発明の枇杷種子由来エキスが、アスコルビン酸やエダラボンに比べて、格段に優れたハイドロキシラジカルに対する消去能を具備することがわかる。
【００５５】
次に、濃度を０ｍｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌの範囲で希釈してなる５種の濃度のエキスを作製し、各エキスのスーパーオキサイドに対する産生抑制率と除去率とを測定した。その結果を図２に示す。図２より、濃度の上昇に伴い、産生抑制率および除去率は上昇傾向にあることがわかる。このことから、少なくとも１２ｐｐｍの総シアン量を含む本発明の枇杷種子由来エキスが、生体内ラジカルに対する優れた産生抑制能および消去能を発揮すること、および当該総シアン量の増加に伴い、これら産生抑制能および消去能が増すことが確認できた。また、当該試験結果、および実施例１の結果より、本発明においては、５５０ｐｐｍを総シアン量の下限値とした。
【００５６】
〈枇杷種子由来エキスに含まれる有効成分について〉
枇杷種子由来エキスに含まれる成分は、枇杷種子を極性の異なる溶媒を用いて抽出することにより、その物性により振り分けられる。したがって、使用した溶媒により、エキス成分の種類および含有量は異なる。
【００５７】
図３は、各種枇杷種子由来エキスの成分を調べるために、各種溶媒を用いて抽出したエキスの薄層クロマトグラムを示す。
【００５８】
この薄層クロマトグラムによれば、溶媒が水であるエキス（以下、水エキスという）は、原点にのみスポットが認められ、したがって、タンパク質、糖類、アミグダリン等の極性の高い化合物を含有すると考えられる。
【００５９】
また、溶媒が７０％エタノールであるエキス（以下、７０％エタノールエキスという）、及び溶媒がメタノールであるエキス（以下、メタノールエキスという）は、薄層クロマトグラムにおいて原点のスポットが水エキスに比較して小さく、タンパク質、糖類、アミグダリン等の極性の高い化合物が少ないと考えられる。７０％エタノールエキス及びメタノールエキスにおいては、薄層クロマトグラムにてＲｆ値が０．６３を示す化合物はリノール酸、Ｒｆ値が０．５３を示す化合物は、β−シトステロール、Ｒｆ値が０．４１を示す化合物はリノール酸、Ｒｆ値が０．２５を示す化合物はβ−シトステロール−３−０−モノグリコシドであることが、構造解析より判明したことにより、これらの化合物を少なくとも含む。
【００６０】
枇杷種子由来エキスのアミノ酸の分析結果を表６に示す。なお、表６では、枇杷種子１ｋｇから得られるアミノ酸量を示す。当該表１より、７０％エタノールを用いて抽出されたエキスが、他の溶媒を用いて抽出されたエキスよりも、プロリンを多く含むことがわかる。
【００６１】
【表６】
【００６２】
表７および図４に、枇杷種子由来エキスのアミノ酸量をより詳しく分析した結果を示す。かかる表７におよび図４は、７０％エタノールを用いて抽出されたエキスの１ｍｌ中に含まれる各アミノ酸量を示している。なお、表７において「＜ＱＬ」は、「ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ：（定量限界よりも少ないこと）」を示す。なお、表７において、遊離プロリン量が総プロリン量を超えているのは誤差であると考える。また、当該測定結果より、このエキス中においては、略全てのプロリンが、遊離プロリンとして存在していることがわかる。
【００６３】
【表７】
【００６４】
また表８に、本発明の他の実施例に係る枇杷種子由来エキスのアミノ酸量の測定結果を示す。当該数値では、特にプロリンの総量が０．９ｍｇ／ｍｌ（９００ｐｐｍ）以上である点が着目される。
【００６５】
【表８】
【００６６】
次に、枇杷種子由来エキスのヒト皮膚生理に対する効果を確かめることを目的として、経皮水分喪失を測定した。具体的には、皮膚に疾患を持たない女性３６名（３０歳、４０歳、５０歳代の各群）を対象として、表８に係る枇杷種子由来エキスを１００倍に薄めてなる美容健康飲料水を朝夕５０ｍｌずつ４週間内服してもらった。内服前、内服２週間、内服終了後に検査を行った。使用機器としては、Ｔｅｗａｍｅｔｅｒを用いて、前腕屈側を３０回測定し、平均値を得た。その結果を図５に、使用感に関するアンケート（設問式のデータ集計）の結果を図６に示す。
【００６７】
図５より、３０歳代女性では、僅かな経皮水分の損失の増加が見られたが、４０歳代および５０歳代では、減少が見られた。また、図６に示すように、枇杷種子由来エキスを含む美容健康飲料水の４週間内服によって自覚的にカサカサ感が改善したことが確認できた。以上の図４および図５の結果より、本発明に係る枇杷種子由来エキスが、カサカサ感などの改善に有用であることが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】本発明に係る枇杷種子由来エキスの製造方法を示す図である。
【図２】枇杷種子由来エキスのスーパーオキサイドに対する産生抑制率と除去率の測定結果を示す図である。
【図３】各種溶媒を用いた場合の薄層クロマトグラムの結果を示す図である。
【図４】枇杷種子由来エキスのアミノ酸量を示す図である。
【図５】（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は、経皮水分の測定結果を示す図である。
【図６】（ａ）、（ｂ）、（ｃ）は、枇杷種子由来エキスを含む美容健康飲料水を内服した際の使用感を示すアンケート結果である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エキス中に含まれるシアンの総量が、５５０ｐｐｍ以上、２０００ｐｐｍ以下の範囲にあることを特徴とする枇杷種子由来エキス。
【請求項２】
エキス中に含まれるプロリンの総量が９００ｐｐｍ以上の範囲にある請求項１記載の枇杷種子由来エキス。
【請求項３】
枇杷種子由来エキスを製造する方法であって、
採取した枇杷より果皮および果実を取り除き、得られた枇杷種子を洗浄処理する工程と、
洗浄処理後の枇杷種子を、当該種子の形態のままで天日にて３日間以上乾燥させる天日干し工程と、
天日干し後の枇杷種子を粉砕し、溶媒で抽出する抽出工程と、
減圧処理により溶媒を除去して濃縮液を得る工程とを含むことを特徴とする枇杷種子由来エキスの製造方法。
【請求項４】
前記天日干し工程後、抽出工程に先立って、４０〜６０℃の温度条件下で５時間以上枇杷種子を乾燥させる乾燥工程を含む請求項３記載の枇杷種子由来エキスの製造方法。
【請求項５】
前記抽出工程において、７０％エタノールを溶媒として抽出処理を行う請求項３又は４記載の枇杷種子由来エキスの製造方法。
【請求項１】
エキス中に含まれるシアンの総量が、５５０ｐｐｍ以上、２０００ｐｐｍ以下の範囲にあることを特徴とする枇杷種子由来エキス。
【請求項２】
エキス中に含まれるプロリンの総量が９００ｐｐｍ以上の範囲にある請求項１記載の枇杷種子由来エキス。
【請求項３】
枇杷種子由来エキスを製造する方法であって、
採取した枇杷より果皮および果実を取り除き、得られた枇杷種子を洗浄処理する工程と、
洗浄処理後の枇杷種子を、当該種子の形態のままで天日にて３日間以上乾燥させる天日干し工程と、
天日干し後の枇杷種子を粉砕し、溶媒で抽出する抽出工程と、
減圧処理により溶媒を除去して濃縮液を得る工程とを含むことを特徴とする枇杷種子由来エキスの製造方法。
【請求項４】
前記天日干し工程後、抽出工程に先立って、４０〜６０℃の温度条件下で５時間以上枇杷種子を乾燥させる乾燥工程を含む請求項３記載の枇杷種子由来エキスの製造方法。
【請求項５】
前記抽出工程において、７０％エタノールを溶媒として抽出処理を行う請求項３又は４記載の枇杷種子由来エキスの製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００９−２３４９５２（Ｐ２００９−２３４９５２Ａ）
【公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−８０３８７（Ｐ２００８−８０３８７）
【出願日】平成２０年３月２６日（２００８．３．２６）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８年度 経済産業省 地域新生コンソーシアム研究開発事業 産業活力再生特別措置法第３０条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１７４１８０）国立大学法人高知大学 (174)
【出願人】（３９１０２９３２５）明星産商株式会社 (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２６日（２００８．３．２６）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成１８年度 経済産業省 地域新生コンソーシアム研究開発事業 産業活力再生特別措置法第３０条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１７４１８０）国立大学法人高知大学 (174)
【出願人】（３９１０２９３２５）明星産商株式会社 (4)
【Ｆターム（参考）】
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