本発明は炎症性疾患の治療のための、下記化学式１の化合物、その立体異性体または互変異性型、またはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物の使用方法に関する。
【化１】


また、本発明は炎症性疾患の治療で使用するためのものであって、化学式１の化合物、および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物に関する。また、本発明は炎症性疾患の治療方法として、治療的有効量の化学式１の化合物をそのような治療を必要とする個体に投与することを含む方法に関する。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は炎症性疾患の治療のための化学式１の化合物(本文中に記載)、その立体異性体または互変異性体、あるいは、その薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は宿主防御および免疫介在性疾患の進行において基本的役割を果たす。その炎症性反応は傷害(例えば、外傷、局所貧血、および異物)、および/または、化学伝達物質 (例えば、サイトカインおよびプロスタグランディン)および炎症性細胞(例えば、白血球)などによる感染(例えば、細菌感染まはたウィルス感染)に反応して開始される。これは組織への血流が増加して、発熱、紅斑、硬結、および痛症を誘発するということに特徴がある。
【０００３】
炎症性反応において、体液性および細胞性の免疫要素間の繊細でバランスの良い相互作用は有害物質の除去、および損傷組織の回復の開始を可能にする。このような繊細にバランスした相互作用が中断する場合、炎症性反応は正常組織に相当な損傷を来たし、その炎症反応を開始した最初の損傷よりも更に有害となることがある。このような制御されない炎症性反応の場合、組織損傷および臓器機能不全を防止するために臨床的介入が要求される。他の臨床状態の中でリウマチ性関節炎、骨関節炎、クローン病、喘息、アレルギー、敗血症性ショック症侯群、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患のような疾患は慢性炎症により特徴される。
【０００４】
幾つかの炎症誘発性サイトカイン、特にＴＮＦ−α（腫瘍壊死因子−α）、およびインターロイキン（ＩＬ−１β，ＩＬ−６，ＩＬ−８）は炎症性過程で重要な役目を果たす。ＩＬ−１およびＴＮＦ−αはいずれも単核細胞および大食細胞から誘導され、炎症性過程に寄与する様々な遺伝子の発現を誘導する。
【０００５】
リウマチ性関節炎（ＲＡ）は自己免疫疾患である。ＲＡは知られていない病因の慢性、全身性関節炎症性疾患である。ＲＡにおいて関節の正常的な薄い滑液内膜は軟骨および骨共に有害な炎症性の高度に血管化した侵入性纎維阿膠質性組織(パンヌス(pannus))に交替される。影響を受けられる部位としては手、手首、首、あご、ヒジ、足、および足首の関節がある。ＲＡにおいて軟骨の破壊は影響を受けた関節において異常サイトカインおよび成長因子発現につながる。
【０００６】
骨関節炎（ＯＡ、退行性関節炎、退行性関節疾患とも知られている)は関節軟骨、およびその次の軟骨下骨(subchondral bone)を含む関節の退化を伴う関節炎の最も一般的な形態である。ＯＡにおいて遺伝的で、発生的で、代謝性で、機械的な様々な要因は関節を柔軟にし、保護する強いタンパク質マトリクスである軟骨の損失につながる過程を開始することができる。骨の表面が軟骨によって十分に保護されない場合、軟骨下骨が露出および損傷しつつ再成長して軟骨損失の中心部位で、象牙のような稠密な反応性骨の増殖につながることがあり、このような過程は象牙質化(eburnation)と知られている。苦痛による運動の減少により、局所的な筋肉が萎縮することがあり、靭帶が更に弛むことがある。ＯＡは関節炎の最も一般的な形態であり、慢性疾患の主な原因である。
【０００７】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は腸の炎症を誘発する疾患のグループである。炎症が長期間持続し通常は再発する。ＩＢＤの２つの主要な形態はクローン病、および潰瘍性結腸炎である。クローン病は腸の内膜および壁に炎症を起こし潰瘍が生じる場合に発生する。クローン病は消化器系の任意の部位で発生することがあるが、結腸に繋がる小腸の下部でよく発生する。潰瘍性結腸炎は大腸を蝕み、世界的で数百万の人が苦しむ病因の慢性自己免疫／炎症性疾患である。正常な胃腸グラムネガティブ細菌の成分を伴う機能疾患免疫反応、炎症誘発性サイトカイン、ケモカイン、内皮細胞付着分子（ＥＣＡＭｓ）の発現の増加、および結腸癲癇(colonic interstitium)への白血球浸透の増加は結腸炎の発病に主な役目をするということがよく知られている。その疾病の過程は連続的または再発し、軽度または重度である。一番初期の疾患は腸線(crypts of Lieberkuhn)のベースで膿瘍が形成する炎症性浸透である。このような膨脹・破裂したクリプト(crypt)の癒着はその血液供給源から下部の粘膜を分離して潰瘍をきたす。その疾病の兆候および症状としてはひきつけ、下部腹痛、直腸出血、および不十分な便(fecal)粒子とともに血液、膿、および粘液から主として構成される頻繁な下痢がある。急性、深刻または慢性である絶え間ない潰瘍性結腸炎の場合は大腸全体の切除が必要となることがある。
【０００８】
乾癬は皮膚および関節で発病する慢性の非伝染性自己免疫疾患である。これは通常、皮膚上で赤い鱗状のパッチ(red scaly patch)を発生させる。このような乾癬で誘発された鱗状のパッチは乾癬性斑と知られており、炎症および過度な皮膚生成の部位である。また、乾癬は乾癬性関節炎と知られている関節の炎症を誘発することができる。乾癬のある人間の１０〜１５％は乾癬性関節炎を有する。多くの治療法が利用されるが、その慢性再発性のため、乾癬は治療し難い。
【０００９】
プレイオトロピック(pleiotropic)サイトカインである腫瘍怪死因子−α（ＴＮＦ−α）は主に大食細胞により生成されるが、他の形態の細胞もこれを生成する。ＴＮＦ−αは利する他にも、病理学的な活性があるものと立証されている。これは成長促進効果および成長抑制特性を有することの他にも自己調節性を有する。ＴＮＦ−αの利する機能としては身体の周期性リズムを調節することで、恒常性を維持し、細菌、ウイルス、真菌、および寄生虫感染に対する免疫反応を開始し、纖維芽細胞成長を促進することで、損傷組織を交替または再構成(remodeling)し、名前が暗示しているように特定の腫瘍を死滅させる。ＴＮＦ−αは単核細胞および大食細胞から誘導され、炎症性疾患のような様々な疾患に寄与する様々な遺伝子を発現させる。
【００１０】
ＴＮＦ−αは先天的および後天的な免疫反応に重要な役目をし、ＴＮＦ−αの不適切な生成は病理学的変化を誘発し慢性炎症および組織損傷をもたらす。ＴＮＦ−αは炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、幼年性リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、骨関節炎、不応性リウマチ関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠状心臓疾患、血管炎、潰瘍性結腸炎、乾癬、大人呼吸困難症侯群、糖尿病、皮膚の遅延型過敏性疾患、およびアルツハイマー疾患のような多くの慢性炎症性疾患の発病に決定的な役目を果たすことが確認されて来た。
【００１１】
ＩＬ−１（インターロイキン１）は適応免疫係の機能を調節する先天免疫係の一部である。局所組織において、ＩＬ−１とＩＬ−１受容体拮抗剤（ＩＬ−１ｒａ）との間の均衡は炎症性疾患およびそれによる構造的損傷の発生に影響をおよぼす。過量のＩＬ−１の存在下で、炎症および自己免疫疾患は関節、肺、胃腸管、中枢神経系（ＣＮＳ）または血管で発生する。
【００１２】
細胞付着分子の細胞間付着分子１（ＩＣＡＭ−１）、血管−細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）、およびＥ−セレクチンは循環系から炎症の部位に好中球、好酸球、およびＴリンパ球のような炎症性細胞の動員(recruitment)の原因となる。白血球の動員および滞留はＲＡのような全ての慢性炎症性疾患の発病において危険な状況である。
【００１３】
炎症性疾患に対する１次的な治療方法はイブプロフェン、ナプロキセンンのような非ステロイド性抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤｓ）を用いて痛症のような症状を緩和する。しかし、ＮＳＡＩＤｓが広範囲に使用されているにもかかわらず、ＮＳＡＩＤｓは胃糜爛(gastric erosion)を誘発するものと知られているため、多くの個体は長期にわたり、その疾患を治療することに必要な投与量を許容することができないでいる。また、ＮＳＡＩＤｓは原因を治療することではなく、炎症性疾患の症状を治療するに過ぎない。患者がＮＳＡＩＤｓに反応しない場合、メトトレキセート (methotrexate)、金塩、Ｄ−ペニシラミン、およびコルチコステロイドのような他の薬物が使用される。このような薬物も重大な副作用がある。
【００１４】
インフリキシマブ(Infliximab)、エタネルセプト(Etanercept)、およびアダリムマブ(Adalimumab)のような単クローン抗体薬物が、抗炎症性薬物として有用であるが、投与経路(非経口のみ)、高コスト、アレルギー誘発、潜在している結核の活性化、癌の危険の増加、および鬱血性心臓疾患のようなデメリットがある。
【００１５】
ホスホジエステラーゼ−４（ＰＤＥ４）抑制剤が喘息、アトピー性皮膚炎、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、およびクローン病の治療用のため開発されてきたが、多重ＰＤＥ４の非選択的な抑制は複雑な生理学的反応につながる。ＰＤＥ４抑制剤の治療効能はシロミラスト(Cilomilast) (SB 207499、Ariflo^TM)の場合のように悪心および嘔吐の投与量制限副作用があるため制限されてきた (Current Opinion in Chemical Biology, 2001, 5, 432-438)。
【００１６】
同様にｐ３８ミトゲン−活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）抑制剤は可能な抗炎症性薬物であるが、この使用に関連する副作用としては胃潰瘍、肝毒性、および腎毒性がある。例えば、２−［２（Ｓ）−アミノ−３−フェニルプロピルアミノ−］−３−メチル−５−（２−ナフチル）−６−（４−ピリジル）ピリミジン−４（３Ｈ）−オン(AMG 548、Amgen)の開発は投与量または露出依存でない無作為の肝酵素の増加により中止された。ｐ３８ＭＡＰキナーゼ抑制剤を用いた長期治療後の安全性プロファイルに対する影響を確認する必要がある(Current Medicinal Chemistry, 2005, 12, 2979-2994)。
【００１７】
US-A-4 900 727は抗炎症剤として、ベンゾピラン−４−オン誘導体を開示している。ジソキシラム-ビネクタリフェラム(Dysoxylum binectariferum)来由の抗炎症性ベンゾピラン−４−オン誘導体が、文献[R.G.Naik など、Tetrahedron, 1988, 44 (7), 2081-2086]に記載されている。
【００１８】
炎症性疾患の治療のための多数の治療法の利用可能性があるにもかかわらず、炎症性疾患の治療のための改善した方案の薬物に対する持続した必要性が、依然として存在している。
【００１９】
米国特許第7,271,193号、公開された米国特許出願US20070015802、および公開されたPCT出願 WO2007148158はいずれも本文に参照として記載されているものであり、様々な形態の癌の治療に有用なＣＤＫ抑制剤としてピロリジン置換フラボンが記載されている。本発明者らは化学式１の化合物として本文で示しているピロリジン置換フラボンが炎症性疾患の治療に使用され得るということを確認した。本発明の範囲は前述したピロリジン置換フラボンの新規な抗炎症使用を提供することである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本発明の一様態により、炎症性疾患の治療のための化学式１(本文で下記に示しているような構造)の化合物、その立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物の使用方法を提供する。
【００２１】
本発明の他の様態により炎症性疾患の治療で使用するための化学式１の化合物、その立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物、および少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物が提供される。
【００２２】
また、本発明は治療的有効量の化学式１の化合物、その立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物を炎症性疾患の治療を必要とする個体(subject)に投与することを含む炎症性疾患の治療方法を提供する。
【００２３】
更に他の様態において、本発明は炎症性疾患の治療のための薬物の製造のための化学式１の化合物、その立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物の使用方法に関するものである。
【００２４】
本発明の更に他の様態により、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）のような１種以上の炎症性サイトカインのレベルの増加、または細胞間付着分子１、血管−細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）およびＥ−セレクチンのような１種以上の細胞付着分子の発現の増加、またはこれらの組み合わせにより媒介する炎症性疾患の治療のための化学式１の化合物（本文中に記載）、その立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物の使用方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】ｐ３８ＭＡＰキナーゼ抑制、およびＩκＢα分解に対する試験管内スクリーニングのためのウェスタンブロット分析を示す図である。
【図２Ａ】代表的な化合物である実施例３の化合物による滑液単核細胞（ＳＦＭＣ）の付着性細胞集団で細胞自殺の誘導を示す図である。
【図２Ｂ】代表的な化合物である実施例３の化合物による滑液単核細胞（ＳＦＭＣ）の非付着性細胞集団で細胞自殺の誘導を示す図である。
【図３】関節炎（ＣＩＡ）ＤＢＡ／１Ｊマウスの後足の和の関節指数に対する、代表的な化合物である実施例３の化合物の治療効果を示す図である。
【図４】関節炎（ＣＩＡ）ＤＢＡ／１Ｊマウスの足厚に対する、代表的な化合物である実施例３の化合物の治療効果を示す図である。
【図５】溶媒(対照区)およびエンブレル(Enbrel)と比較して、代表的な化合物である実施例３の化合物で処理した動物の組織病理学的評価を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
１具体例において本発明は下記の化学式１の化合物またまたの使用方法に関する。
【００２７】
【化１】

【００２８】
前記式において、Arはフェニルまたはヘテロアリール環であり、ここでのフェニルまたはヘテロアリール環はハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシ、カルボキシ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシカルボニル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキレンヒドロキシル、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＲ₁Ｒ₂、ＳＯ₂ＮＲ₁Ｒ₂、シクロアルキル、ＮＲ₁Ｒ₂、およびＳＲ₃から選択された１、２、または３つの同一または異なる置換体で置換または非置換することができ、ここでのＲ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキルカルボニル、およびアリールから選択されるか、またはＲ₁およびＲ₂はこれらが結合される窒素原子とともに少なくとも１つの更なるヘテロ原子を選択的に含むことができる五員環または六員環を形成し、Ｒ₃は水素、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、およびフェニルから選択される。
【００２９】
定義
開示の目的のため、本発明の説明で使用された様々な用語の定義が下記で説明される。この定義は明細書または特許請求の範囲で（この定義が特定の例に制限されない場合）個々にまたはより大きいグループの一部として使用される用語に適用される。この定義は文字通りの意味として解釈されない。この定義は一般の定義ではなく本出願の場合にのみ適当である。
【００３０】
用語“アルキル”は直鎖アルキル基および分枝鎖アルキル基を含む飽和脂肪族基を意味する。 炭素数が１〜４のアルキル基の例としてはメチル、エチル、n-プロピル、n-ブチル、イソプロピル、イソブチル、ｓ-ブチル、およびt-ブチルがある。
【００３１】
用語“シクロアルキル”は炭素数が約３〜７の非芳香族単一または多重環系を意味する。シクロアルキル基の例としてはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどがある。シクロアルキル基はハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシ、カルボキシ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシカルボニル、およびＣＯＮＨ₂から選択された１種以上の異なる置換体で置換または非置換されることができる。
【００３２】
本文で使用される用語“アルコキシ”は酸素基が付着している前記で定義したようなアルキル基を意味する。代表的なアルコキシ基としてはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、 t-ブトキシなどがある。
【００３３】
用語“ハロゲン”は塩素、臭素、フッ素、およびヨウ素を意味する。
【００３４】
本文で使用される用語“ヘテロアリール”は１〜３の同一または異なるヘテロ原子を含む単一環芳香族系を意味する。用語“ヘテロ原子”は窒素、酸素、および硫黄を意味する。ヘテロアリールは例えば、１または２の硫黄原子、１または２の酸素原子、および/または１〜３の窒素原子を環内に有することができる。単一環型基において、ヘテロアリールは３-員、４-員、５-員、または６-員環である。ヘテロアリール基としてはピロール、チオフェン、オキサゾール、フラン、チアゾール、ピラゾール、ピリジンなどがある。
【００３５】
本明細書において、用語“化学式１の化合物”が単独で使用される適切な場合には、これは化学式１の化合物の立体異性体または互変異性体、あるいは薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物を含むことと判断される。
【００３６】
“置換または非置換”はこのような置換が置換された原子および置換体の許容した原子価により行われるという暗黙の条件を含むことの他にも、再配列、環化、または除去によるような望まない変形を容易に受けない安定した化合物を示すことと理解される。
【００３７】
用語"薬学的に許容される"は担体、希釈剤、賦形剤、および/または塩が、製剤の他の成分と両立することができ、その受容者に有害ではないということを意味する。
【００３８】
本文で使用される用語“治療的有効量”は正常な医学的判断の範囲内で調節または治療される状態で、肯定的な変化を有意に誘導することに十分であるが、ある副作用を回避することには十分低い(合理的な利得/リスク)化学式１の化合物の量、または前記化合物を含む組成物の量を意味する。化学式１の化合物、または前記化合物を含む組成物の治療的有効量は治療される特定の炎症性疾患、個体(患者)の年齢および身体状態、治療/予防される状態の深刻性、治療期間、 同時的な療法の特徴、利用される特定化合物または組成物、利用される特定の薬学的に許容される担体などの要因により、変化することになる。
【００３９】
本文で使用される用語“治療する”または“治療”は既存の疾患(例えば、リウマチ性関節炎)の進行を緩和するか、遅延させるか、弱化するか、または治癒することを意味する。
【００４０】
本文で使用される用語“個体”(subject)は動物、 望ましくは哺乳動物、更に望ましくは人間を意味する。
【００４１】
本文で使用される用語“炎症性疾患”(inflammatory disorder)はリウマチ性関節炎、骨関節炎、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、不応性リウマチ性関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症/骨吸収、冠動脈心疾患、血管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、皮膚疾患による遅延型過敏症、敗血症性ショック症侯群、炎症性腸疾患を含むが、それに制限されない慢性炎症により特定される疾患または状態を意味する。
【００４２】
用語“薬学的に許容される塩”は本文で記載された化合物上で確認される特定置換体により、酸または塩基を用いて製造されるものであって、活性化合物、即ち、化学式１の化合物の塩を意味する。薬学的に許容される塩基付加塩の例としてはナトリウム、カリウム、カルシウム、 マグネシウム、アンモニウム、または有機塩基塩がある。薬学的に許容される有機塩基付加塩の例としてはリシン、アルギニン、グアニジン、ジエタノールアミンなどのような有機塩基から誘導したものがある。薬学的に許容される酸付加塩の例としては塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素酸(monohydrogencarbonic acid)、リン酸、リン酸一水素酸(monohydrogenphosphoric acid)、リン酸二水素酸、硫酸、硫酸一水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などのような無機酸から誘導したものの他にも、酢酸、プロピオン酸、イソブチル酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、ベンゼン酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、p-トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、グルクロン酸、またはガラクチュロン酸などのような有機酸から誘導されたものがある。前記化合物の中性形態は、その塩を塩基または酸と接触させ、その母化合物を通常の方法で分離することで再生されることができる。
【００４３】
本文で使用される用語"薬学的に許容される担体"は無毒性でかつ不活性である固体または半固体の希釈剤、カプセル化物質、または製剤化補助剤を意味する。薬学的に許容される担体に利用され得る物質のいくつかの例としてはラクトース、グルコース、およびスクロースのような糖; とうもろこし澱粉、およびじゃがいも澱粉のような澱粉; カルボキシメチルセルロース、 エチルセルロース、およびセルロースアセテートのようなセルロース、およびこの誘導体; モルト、ゼラチン、タルクなどがある。また、ラウリル硫酸塩、およびステアリン酸マグネシウムのようなその他の無毒性の適合な滑沢剤の他にも、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、および芳香剤; 保存剤および抗酸化剤も、製剤者の判断により、組成物で存在することもできる。
【００４４】
化学式１の化合物は本文で参照として記載された米国特許第7,271,193号、米国特許公開第20070015802号、およびPCT特許公報WO2007148158に開示されている方法で製造することができる。下記の反応式１で記載された方法を用いて化学式(VIA)の中間体を製造することができる:
【００４５】
【化２】

【００４６】
化学式IIの化合物から出発して、化学式Ｖの化合物までの製造段階は本文で参照として含まれるUS-A-4900727に記載されている。１−メチル−４−ピペリジン（化学式IIIの化合物）を氷酢酸で溶解された １、３、５−トリメトキシベンゼン（化学式IIの化合物）と反応させて、１−メチル−４−（２、４、６−トリメトキシフェニル）−１、２、３、６−テトラヒドロピリジン（化学式IVの化合物）を得る。化学式IVの化合物はボロントリフルオライド、ジエチルエーテル、水素化ホウ素ナトリウム、およびテトラヒドロフランと反応させて、化学式Ｖの化合物を得る。前記反応式において、化学式Ｖの化合物を化学式VIAの化合物に転換することにおいて、ピペリジン環上のヒドロキシ作用基はトリエチルアミン、ピリジン、炭酸カリウム、または炭酸ナトリウムのような酸素求核試薬の存在下で、ｐ−トルエンスルホニルクロリド、メタンスルホニルクロリド、トリフル酸無水物、または五塩化リンのような適切な試薬で処理した後、イソプロパノール、エタノール、またはプロパノールのようなアルコール溶媒で酢酸ナトリウムまたは酢酸カリウムのような酸素求核体の存在下で環収縮(ring contraction)させて、トシル、メシル、トリフラート、またはハライドのような離脱基に転換することができる。このような段階で伴われる環収縮は前記反応式で示したようにフラボンの形成前に実施するか、所望する置換によりフラボンを製造した後に実施することもできる。
【００４７】
定義された化学式VIAの中間体化合物の光学的に純粋な（−）−トランス鏡像異性体が、定義された化学式１の光学的に純粋な化合物の製造に使用される。この方法では高い鏡像体純度を有する中間体を出発物質として用いることによって、その方法により製造される化学式１で表わされるフラボンに置換されたピロリジンの最終（＋）−トランス鏡像異性体は相応する高い鏡像体純度を有する。
【００４８】
化学式VIAの中間体化合物の分解された光学的に純粋な（−）−トランス鏡像異性体から、化学式Ｉの化合物の光学的に純粋な（＋）−トランス鏡像異性体、あるいはその薬学的に許容される塩の製造方法は、以下の工程からなる。
【００４９】
（ａ）下記の化学式VIAの中間体化合物の分解された光学的に純粋な（−）−トランス鏡像異性体をルイス酸触媒の存在下で酢酸無水物で処理して、下記の化学式VIAの分解されたアセチル化化合物を得る段階と、
【００５０】
【化３】

【００５１】
【化４】

【００５２】
（ｂ）化学式VIIAの分解されたアセチル化化合物を塩基または溶媒の存在下で化学式ＡｒＣＯＯＨの酸、または化学式ＡｒＣＯＣｌの酸塩化物、または化学式（ＡｒＣＯ）₂Ｏの酸無水物、または化学式ＡｒＣＯＯＣＨ₃のエステル（Ａｒは前記で定義している通りである）と反応させて下記の化学式VIIIAの分解された化合物を得る段階と、
【００５３】
【化５】

【００５４】
（ｃ）前記化学式VIIIAの分解された化合物を適当な溶媒で塩基で処理して、下記化学式IXAの相応する分解された(−ジケトン化合物を得る段階と、
【００５５】
【化６】

【００５６】
（式中、Ａｒは前記で定義している通りである）
（ｄ）前記化学式IXAの分解された(−ジケトン化合物を塩酸のような酸で処理して化学式ＸＡの相応する環化した化合物を得る段階と；
【００５７】
【化７】

【００５８】
（ｅ）前記化学式ＸＡの化合物を１２０〜１８０℃範囲の温度で、脱アルキル化剤とともに加熱して脱アルキル化させて化学式１の化合物の（＋）−トランス鏡像異性体を得、この化合物をその薬学的に許容される塩に選択的に転換する段階とを含む。
【００５９】
前記段階（ａ）で用いられるルイス酸触媒はＢＦ₃Ｅｔ₂Ｏ、塩化亜鉛、塩化アルミニウム、および塩化チタンから選択されることができる。
【００６０】
工程段階（ｂ）で用いられる塩基はトリエチルアミン、ピリジン、およびＤＣＣ−ＤＭＡＰ組み合わせ（Ｎ、Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドと4-ジメチルアミノピリジンの組み合わせ)から選択されることができる。
【００６１】
当業者に明らかであるように化学式VIIIAの化合物を対応する化学式IXAの(−ジケトン化合物へ再配列することはベイカーベンカタラマン(Baker-Venkataraman)再配列として知られている(J. Chem. Soc., 1381 (1933) and Curr. Sci., 4, 214 (1933))。
【００６２】
工程段階（ｃ）で使用される塩基はヘキサメチルジシルアジドリチウム、ヘキサメチルジシルアジドナトリウム、ヘキサメチルジシルアジドカリウム、水素化ナトリウム、および水素化カリウムから選択されることができる。更に望ましい塩基はリチウムヘキサメチルジシルアジドである。化学式IXAの化合物の脱アルキル化のための工程段階（ｅ）で使用される脱アルキル化剤はピリジン塩酸塩、三臭化ホウ素、エーテル化三フッ化ホウ素、および三塩化アルミニウムから選択することができる。更に望ましい脱アルキル化剤はピリジン塩酸塩である。
【００６３】
本発明の更に他の様態において、化学式１の化合物は
Ａｒがフェニル環であり、ここでのフェニル環がハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシ、カルボキシ、およびＮＲ₁Ｒ₂から選択された１、２、または３つの同一または異なる置換体で置換または非置換されることができ、ここでのＲ₁およびＲ₂がそれぞれ、独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、およびＣ₁−Ｃ₄−アルキルカルボニルから選択される化合物、またはその立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物から選択される。
【００６４】
本発明の更に他の様態において、化学式１の化合物は
Ａｒがフェニル環であり、ここでのフェニル環がハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、およびトリフルオロメチルから選択された１、２、または３つの同一または異なる置換体で置換または非置換され得るものである化合物、あるいはその立体異性体または互変異性体、あるいはその薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物から選択される。
【００６５】
本発明の更なる様態において、化学式１の化合物は下記のものから選択される。
【００６６】
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オンメタンスルホン酸；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−シアノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、４−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−チオフェン−２−イル−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−（３−ニトロフェニル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（３−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジヒドロキシ−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、３−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；および、
（＋）−トランス−２−（３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩。
【００６７】
本発明の更に他の様態において、前記化学式１の化合物は下記のものから選択される。
【００６８】
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−シアノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、４−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−（３−ニトロフェニル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、３−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；および、
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩。
【００６９】
１具体例において、本発明は治療的有効量の化学式１の化合物を炎症性疾患の治療を必要とする個体に投与することを含む炎症性疾患の治療方法に関する。
【００７０】
本発明により、前記炎症性疾患では１種以上の炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）の水準の増加、または１種以上の細胞付着分子（ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン）の発現の増加、またはこれらの組み合わせにより媒介される疾患がある。
【００７１】
本発明のまた他の具体例において、化学式１の化合物はＴＮＦ−α抑制剤であり、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、不応性リウマチ性関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、クローン病、アテローム性動脈硬化、敗血症性ショック症侯群、冠動脈心疾患、血管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人呼吸窮迫症候群、および皮膚疾患による遅延型過敏症を含む、非正常のＴＮＦ−(活性と関連のある疾患の治療に使用される。
【００７２】
本発明の更に他の具体例において、化学式１の化合物はＩＬ−１β、ＩＬ−６および／またはＩＬ−８抑制剤であり、リウマチ性関節炎、骨関節炎、および多発性硬化症、および様々な形態のループスのようなその他の自己免疫状態を含む、非正常的なＩＬ−１β、ＩＬ−６および／またはＩＬ−８活性と関連のある疾患の治療に使用される。
【００７３】
本発明の更に他の具体例において、化学式１の化合物はＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、およびＥ−セレクチンのような一種以上の細胞付着分子の抑制剤であり、細胞付着分子の発現の増加と関連のある炎症性疾患の治療に使用される。
【００７４】
本発明の１具体例において、治療的有効量の化学式１の化合物を有効成分として含み、少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は炎症性疾患の治療に適合な薬学的組成物が提供される。
【００７５】
現在、炎症性疾患の治療に適合する異なる薬学的組成物は約１〜９９重量％、例えば、約５〜７０重量％、または約１０〜３０重量％の化学式１の化合物、または該当する重量の前記化合物の薬学的に許容される塩を含むと考えられる。
【００７６】
本発明により、前記薬学的組成物に含まれる薬学的に許容される担体は化学式１の化合物の予定投与経路、および標準薬学的実施により選択することができる。
【００７７】
本発明により、前記薬学的組成物は例えば、丸剤、錠剤、コーティング錠剤、カプセル、顆粒またはエリキシル(elixir)の形態で経口投与されることができる。しかし、投与は例えば、座薬の形態で直腸内、または滅菌注射液または懸濁液の形態で非経口、例えば、静脈内、筋肉内または皮下、例えば、溶液または軟膏の形態で局所、またはパッチの形態で経皮、または例えば、エアロゾルまたは鼻腔スプレーの形態で他の経路に投与されることができる。
【００７８】
本発明による薬学的組成物はその自体として知られている方法、または当業者に慣れている方法、例えば、通常的な混合、溶解、顆粒化、糖衣製造、粉砕(levigating)、エマルジョン化、カプセル化、封入(entrapping)、または錠剤化(tabletting)工程により、製造される。
【００７９】
丸剤、錠剤、コーティング錠剤、および軽質ゼラチンカプセルの製造のため、例えば、ラクトース、とうもろこし澱粉、またはこの誘導体、アラビアガム、マグネシア、またはグルコースを使用することができる。軟質ゼラチンカプセル、および座薬用担体は例えば、脂肪、ワックス、天然または硬化油などがある。溶液、例えば、滅菌注射液、またはエマルジョン、またはシロップの製造に適当な担体は例えば、水、生理学的塩化ナトリウム溶液、またはアルコール、例えば、エタノール、プロパノール、またはグリコール、糖溶液、例えば、グルコースまたはマニトール溶液、または前述した様々な溶媒の混合物である。
【００８０】
化学式１の化合物および薬学的に許容される担体の他にも、前記薬学的組成物は例えば、充填剤、抗酸化剤、分散剤、 エマルジョン化剤、消泡剤、香味剤、保存剤、可溶性化剤または着色剤のような添加剤を含有することもできる。
【００８１】
投与される本発明の化合物の投与量は広い範囲を含む。１日投与量は所望する効果に適合するように選択される。約１〜５００ｍｇ／ｍ²の投与量の本発明の化合物が、１日に投与されることができる。必要な場合、より高いまたはより低い投与量が投与されることもある。選択される投与量の水準は利用される化学式１の特定化合物の活性、投与経路、投与時間、利用される特定化合物の分泌率、治療期間、利用される特定化合物と併用されるその他の薬物、化合物および/または物質、治療される個体(患者)の年齢、性別、状態、一般の健康状態および過去の病歴、 および医学分野でよく知られている要因などを含む様々な要因により決定される。
【００８２】
また、本発明は化学式１の化合物を他の薬学的活性化合物と併用することも含む。例えば、化学式１の化合物を含む薬学的組成物は薬学的製剤の形態で、ＮＳＡＩＤｓ、チオリンゴ酸ナトリウム金（ＧＳＴ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、およびデキサメタゾン（ＤＥＸ）のような炎症性疾患を治療することに有用なことと知られている他の薬学的活性化合物とともに個体、特に人間に投与されることができる。
【００８３】
本発明により、化学式１の特定化合物は水和形態を含む溶媒化形態の他にも、非溶媒化形態で存在することができる。化学式１の特定化合物は多重結晶または非結晶形態で存在することがある。一般にすべての物理的形態が、本発明により想定される使用方法に該当し、本発明の範囲に含まれる。
【００８４】
当業者は立体中心が、化学式１の化合物に存在するということを認識することになる。したがって、本発明は化学式１のすべての可能な立体異性体および幾何異性体を含み、ラセミ化合物の他にも、光学活性異性体も含む。化学式１の化合物が、単一鏡像異性体の形態で要求される場合、これは最終化合物の分解(resolution)または異性体的に純粋な出発物質または中間体からの立体特異的の合成により、得ることができる。最終化合物、中間体または出発物質の分解は当業界で知られている任意の方法、例えば、文献 [Chiral reagents for Asymmetric Synthesis by Leo A. Paquette; John Wiley & Sons Ltd (2003)]で知られている方法で実施される。更に化学式１の化合物の互変異性体が可能な場合、本発明はその化合物の全ての互変異性体を含むことになる。
【００８５】
本発明の様々な具体例に実質的に影響しない変形例が、本文で開示されている本発明に含まれることと理解される。
【００８６】
本発明の化合物は添付の実施例で説明しているように標準有機化学により製造され得る。下記の実施例は本発明の数個の特定化合物の合成を説明し、一般の過程を例示するためのものである。本発明は下記の実施例で詳細に説明され、本発明の範囲を制限するものではない。
【００８７】
下記の略語または用語が、本文で使用される。
【００８８】
ＣＤ₃ＯＤ：重水素化メタノール
ＣＤＣｌ₃：重水素化クロロホルム
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＤＭＳＯ−ｄ₆：重水素化ジメチルスルホキシド
ＥＤＴＡ：エチレンジアミンテトラ酢酸
ＦＣＳ：ウシ胎児血清
ＨＣｌ：塩酸
ＮａＨＣＯ₃：重炭酸ナトリウム
Ｎａ₂ＣＯ₃：炭酸ナトリウム
ＮａＨ：水素化ナトリウム
ｎ−ＢｕＬｉ：ｎ−ブチルリチウム
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ＰＢＳ：リン酸塩緩衝食塩水
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
[実施例]
実施例１〜２２に該当する化合物はその全体が本文で参照として記載されている公開された米国特許出願US20070015802、および/または公開されたPCT特許出願WO2007148158に開示されているような方法で製造した。
【００８９】
実施例１:
（−）−トランス−（３−（３−アセチル−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシフェニル）−１−メチルピロリジン−２−イル）メチルアセテート
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例１１、および公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例６に記載された方法で製造した。
【００９０】
実施例２:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシ−メチル−１−メチルピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例４３に記載された方法で製造した。
【００９１】
実施例３：
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例４４に記載された方法で製造した。
【００９２】
実施例４:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例４９に記載された方法で製造した。
【００９３】
実施例５:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例５０に記載された方法で製造した。
【００９４】
実施例６:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例１４、および公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例９に記載された方法で製造した。
【００９５】
実施例７:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例１５、および公開された PCT特許出願WO2007148158の実施例１０に記載された方法で製造した。
【００９６】
実施例８:
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例１４０、および公開されたPCT 特許出願WO2007148158の実施例１５に記載された方法で製造した。
【００９７】
実施例９:
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例１６に記載された方法で製造した。
【００９８】
実施例１０:
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オンメタンスルホン酸；
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例１７に記載された方法で製造した。
【００９９】
実施例１１:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−シアノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例３９に記載された方法で製造した。
【０１００】
実施例１２:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−シアノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開されたPCT特許出願 WO2007148158の実施例４０に記載された方法で製造した。
【０１０１】
実施例１３:
（＋）−トランス−２−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例１００、および公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例３４に記載された方法で製造した。
【０１０２】
実施例１４:
（＋）−トランス−２−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例３５に記載された方法で製造した。
【０１０３】
実施例１５:
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例４２に記載された方法で製造した。
【０１０４】
実施例１６:
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例４３に記載された方法で製造した。
【０１０５】
実施例１７:
（＋）−トランス−２−（２、４−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例３０に記載された方法で製造した。
【０１０６】
実施例１８：
（＋）−トランス−２−（２、４−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開されたPCT特許出願WO2007148158の実施例３１に記載された方法で製造した。
【０１０７】
実施例１９:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
この化合物は公開された米国特許出願US20070015802の実施例２７に記載された方法で製造した。
【０１０８】
実施例２０:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開された米国特許出願 US20070015802の実施例２８に記載された方法で製造した。
【０１０９】
実施例２１：
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−チオフェン−２−イル−クロメン−４−オン
この化合物は公開された米国特許出願 US20070015802の実施例６８に記載された方法で製造した。
【０１１０】
実施例２２：
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−チオフェン−２−イル−クロメン−４−オン塩酸塩
この化合物は公開された米国特許出願 US20070015802の実施例６９に記載された方法で製造した。
【０１１１】
実施例２３:
（＋）−トランス−３−ニトロ−ベンゼン酸 ２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエーテル
３−ニトロベンゼン酸（１．４２ｇ、８．４９ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．９９８ｍＬ、１１．３８ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．５８６ｍＬ、１１．３８ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）に塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
収率: 2.6 g (61.25 %).
【０１１２】
実施例２４:
（＋）−トランス−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−２−（３−ニトロ−フェニル）−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、５．３２ｍＬ、１２．４８ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（２．６３ｍＬ、１２．４８ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例２３の化合物（２．５ｇ、４．９７ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥してトランス−酢酸３−｛２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−３−［３−（３−ニトロ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステスをオイル（２．２ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 1.15 g (52.51 %) ; ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 8.81 (t、 1H)、 8.45 (d、 1H)、 8.35 (d、 1H)、 7.58 (t、 1H)、 6.76 (s、 1H)、 6.47 (s、 1H)、 4.50 (m、 1H)、 4.01 (s、 3H)、 4.02 (s、 3H)、 3.81 (dd、 1H)、 3.41 (m、 2H)、 2.90 (m、 2H)、 2.55 (s、 3H)、 2.19 (m、 2H); MS (ES+): m/z 441 (M+1).
【０１１３】
実施例２５:
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−（３−ニトロフェニル）−クロメン−４−オン
実施例２４の化合物（０．５ｇ、１．１３ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（１．２ｇ、１０．３８ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 0.250 g (53.53 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 12.44 (s、 1H)、 8.86 (s、 1H)、 8.38 (d、 1H)、 8.15 (d、 1H)、 7.72 (t、 1H)、 6.67 (s、 1H)、 6.31 (s、 1H)、 4.39 (dd、 1H)、 4.07 (dd、 1H)、 3.86 (m、 1H)、 3.33 (m、 2H)、 2.85 (m、 1H)、 2.66 (s、 3H)、 2.56 (m、 1H)、 2.01 (m、 1H); MS(ES+): m/z 413 (M+1).
【０１１４】
実施例２６:
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−（３−ニトロフェニル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例２５の化合物（０．２２５ｇ、０．５４５ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の塩を得た。
【０１１５】
収率: 0.225 g (92.21 %); ¹H NMR (DMSO-d₆、 300MHz): ( 12.87 (s、 1H)、 11.63 (s、 1H)、 8.81 (s、 1H)、 8.55 (d、 1H)、 8.42 (d、 1H)、 7.85 (t、 1H)、 7.22 (s、 1H)、 6.47 (s、 1H)、 4.15 (m、 1H)、 3.69 (m、 5H)、 2.92 (s、 3H)、 2.42 (m、 1H)、 2.22 (m、 1H).
MS (ES+): m/z 413 (M+1) (遊離塩基に相当).
【０１１６】
実施例２７:
(＋）−トランス３−ブロモ−２−クロロ−ベンゼン酸２−アセチル−６−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−３，５−ジメトキシ−フェニルエーテル
３−ブロモ−クロロ−ベンゼン酸（２．０ｇ、８．５３ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．９９ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．５８６ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
収率: 3.0 g (66.99 %).
【０１１７】
実施例２８:
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、５．５４ｍＬ、１３．１０ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（２．７６４ｍＬ、１３．１０ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例２７の化合物（３．０ｇ、５．２７ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。の反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（３−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（２．４４ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃で、ｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１１８】
収率: 0.423 g (15.74 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 7.81 (dd、 1H)、 7.62 (dd、 1H)、 7.34 (dd、 1H)、 6.46 (s、 1H)、 6.43 (s、 1H)、 4.27 (m、 1H)、 4.02 (s、 6H)、 3.85 (m、 2H)、 3.74 (m、 2H)、 3.01 (m、 1H)、 2.87 (s、 3H)、 2.48 (m、 1H)、 2.26 (m、 1H); MS(ES+): m/z 509 (M+1).
【０１１９】
実施例２９:
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例２８の化合物（０．２８０ｇ、０．５５０ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（０．７８０ｇ、６．７４ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０の塩基性にした。その反応混合物をろ過しメタノールで洗浄した。その有機層を濃縮しその残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 0.125 g (47.34 %); ¹H NMR (CD3OD、 300MHz): ( 7.92 (dd、 1H)、 7.67 (dd、 1H)、 7.40 (t、 1H)、 6.32 (s、 1H)、 6.13 (s、 1H)、 3.93 (m、 1H)、 3.74 (dd、 1H)、 3.61 (dd、 1H)、 3.44 (m、 1H)、 3.27 (m、 1H)、 3.07 (m、 1H)、 2.71 (s、 3H)、 2.20 (m、 2H);
MS(ES+): m/z 480.
【０１２０】
実施例３０：
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例２９の化合物（０．１２０ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）で懸濁させ、エーテル性塩酸で処理し有機溶媒を蒸発させて標題の塩を得た。
収率：０．１２０（９３．０２％）
【０１２１】
実施例３１:
（＋）−トランス−３−クロロ−ベンゼン酸 ２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエーテル
３−クロロベンゼン酸（１．１５ｇ、７．３９ｍｍｏｌ）をチオニルクロライド（０．８１ｍＬ、１０．９ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（３．８５ｍＬ、２７．７ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（５．０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
収率：３．８ｇ（１００％）
【０１２２】
実施例３２:
（＋）−トランス−２−（３−クロロ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、８．２ｍＬ、１９．２５ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（４．０６ｍＬ、１９．９ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例３１の化合物（３．８ｇ、７．７５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（３−クロロ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（２．７ｇ）として得て、これを濃いＨＣｌ（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１２３】
収率: 0.565 g (16.95 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 8.02 (d、 1H)、 7.82 (d、 1H)、 7.42 (t、 2H)、 6.6 (s、 1H)、 6.42 (s、 1H)、 4.32 (m、 1H)、 3.97 (s、 3H)、 3.95 (s、 3H)、 3.78 (d、 1H)、 3.25 (m、 2H)、 2.75 (m、 2H)、 2.55 (m、 2H)、 2.40 (s、 3H); MS(ES+): m/z 431.1 (M+1).
【０１２４】
実施例３３:
（＋）−トランス−２−（３−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例３２の化合物（０．５６５ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（１．２ｇ、１０．３８ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０の塩基性とした。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 0.150 g (19.96 %) ; ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 7.83 (d、 1H)、 7.71 (d、 1H)、 7.49 (d、 1H)、 7.43 (t、 1H)、 6.53 (s、 1H)、 6.28 (s、 1H)、 4.31 (m、 1H)、 4.05 (d、 1H)、 3.82 (m、 1H)、 3.31 (m、 2H)、 2.85 (m、 3H)、 2.66 (s、 3H); 2.53 (m、 1H)、
2.01 (m、 1H); MS(ES+): m/z 402.1 (M+1).
【０１２５】
実施例３４:
（＋）−トランス−２−（３−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例３３の化合物（０．１４０ｇ、０．３４９ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．１００ｇ（６５．４０％）
【０１２６】
実施例３５:
（＋）−トランス−２−クロロ−３−ニトロ−ベンゼン酸２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエーテル
２−クロロ−３−ニトロ−ベンゼン酸（１．５ｇ、７．４４ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．８３ｍＬ、９．９４５ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物の溶液にトリエチルアミン（２．８０ｍＬ、２０．１９ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：３．８ｇ．
【０１２７】
実施例３６:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−８−（２−（ヒドロキシメチル）−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、８．２ｍＬ、１９．２５ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（４．０２ｍＬ、１９．２５ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例３５の化合物（３．８ｇ、７．１１ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その添下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（２．５ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１２８】
収率: 0.90 g (26.59 %) ; 1H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 7.93 (dd、 1H)、 7.87 (dd、 1H)、 7.54 (t、 1H)、 6.48 (s、 1H)、 6.43(s、 1H)、 4.11 (m、 1H)、 3.978 (s、 3H)、 3.94 (s、 3H)、 3.63 (m、 1H)、 3.29 (m、 2H)、 2.65 (m、 1H)、 2.47 (m、 2H)、 2.29 (s、 3H)、 2.01 (m、 1H); MS (ES+): m/z 475.1 (M+1).
【０１２９】
実施例３７:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例３６の化合物（０．９００ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（０．６００ｇ、５．１ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニア、および４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 0.300 g (35.6 %) ; ¹H NMR (DMSO-d6、 300MHz): ( 8.26 (dd、 1H)、 8.07 (dd 1H)、 7.77 (t、 1H)、 6.56 (s、 1H)、 6.11 (s、 1H)、 3.72 (m、 1H)、 3.47 (d、 2H)、 2.86 (m、 2H)、 2.71(m、 1H)、 2.41(s、 3H)、 2.11 (m、 1H); 2.79 (m、 1H);
MS(ES+): m/z 447.1 (M+1); MS(ES-): m/z 445.1 (M-1).
【０１３０】
実施例３８:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例３７の化合物（０．２５０ｇ、０．５６０ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．２００ｇ（７４．０１％）
【０１３１】
実施例３９:
（＋）−トランス−２−クロロ−３−トリフルオロメチル−ベンゼン酸２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
２−クロロ−３−トリフルオロメチル−ベンゼン酸（１０．０ｇ、４４．５ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（４．６ｍＬ、５０．７ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（６０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（１３．６ｇ、３８．７０ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（７．２ｍＬ、５２．０ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：２５．０ｇ．
【０１３２】
実施例４０:
(+)-トランス-2-(2-クロロ-3-トリフルオロメチル-フェニル)-8-(2-ヒドロキシメチル-1-メチル-ピロリジン-3-イル)-5,7-ジメトキシ-クロメン-4-オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、４．２ｍＬ、９．８ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（２．０６ｍＬ、９．８ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例３９の化合物（２．２ｇ、３．９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（２−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（２．０ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状 ＮａＨＣＯ３でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮して真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 0.560 g (28.89 %); ¹H NMR (MeOD、 300MHz): ( 8.05 (d、 1H)、 7.99 (d、 1H)、 7.72 (dd、 1H)、 6.74 (s、 1H)、 6.41 (s、 1H) 、 4.04 (s、 3H)、 4.01 (s、 3H)、 3.86 (m、 1H)、 3.53 (m、 2H)、 3.33 (m、 1H)、 2.99 (t、 1H)、 2.75 (t、 1H)、 2.36 (s、 3H)、 2.08 (m、 2H).
【０１３３】
実施例４１:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例４０の化合物（０．５６０ｇ、１．１２ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（０．７００ｇ、６．０５ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過紙、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１３４】
収率: 0.100 g (18.96 %); ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 8.04 (d、 1H)、 7.98 (dd、 1H)、 7.70 (t、 1H)、 6.37 (s 1H)、 6.14 (s、 1H)、 3.93 (m、 1H)、 3.72 (d、 1H)、 3.62 (d、 1H)、 3.33 (m、 1H)、 2.68 (s、 3H)、 2.62 (m、 2H); 2.19 (m、 2H); MS(ES-): m/z 468 (M-1).
【０１３５】
実施例４２:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例４１の化合物（０．０９０ｇ、０．１９２ｍｍｏｌ）をメタノール（１．５ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．０８５ｇ（８７．５８％）
【０１３６】
実施例４３:
（＋）−トランス−２−クロロ−３−メチル−ベンゼン酸２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
２−クロロ−３−メチル−ベンゼン酸（１．４２ｇ、８．３ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．８９３ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．２６ｇ、６．４ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．３７ｍＬ、９．６ｍｍｏｌ）を添加した。ここに乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：３．０ｇ
【０１３７】
実施例４４:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
ＮａＨ（０．８４０ｇ、２９．７ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）で懸濁し、１５ｍＬの乾燥ＤＭＦで溶解された実施例４３の化合物（３．０ｇ、５．９５ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その反応物を室温で窒素雰囲気下で２時間撹拌した。その反応混合物をメタノール（１．０ｍＬ）で冷却した。ここに塩化アンモニウム溶液を添加した後、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、溶媒を減圧下で除去して、酢酸３−｛３−［３−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（２．５ｇ、５．６ｍｍｏｌ）として得て、これを濃塩酸（１５ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して、環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（２０×３ｍＬ）で抽出し、水（２０ｍＬ）および塩水（２ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１３８】
収率: 1.5 g (56.9 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 7.37 (dd、 1H)、 7.24 (t、 1H)、 6.39 (s、 1H)、 6.10 (s、 2H)、 3.92 (s、 3H)、 3.84 (m、 1H)、 3.76 (s、 6H)、 3.55 (d、 1H)、 3.33 (m、 1H)、 3.19 (m、 1H)、 2.69 (m、 1H)、 2.58 (m、 2H) 、 2.37 (s、 3H)、 2.20 (m、 1H); MS(ES+): m/z 444.2 (M+1).
【０１３９】
実施例４５:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例４４の化合物（１．０ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（３．０ｇ、２５．９５ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１４０】
収率: 0.300 g (32.12 %) ; ¹H NMR (DMSO-d₆ 300MHz): ( 7.58 (d、 1H)、 7.56 (d 1H)、 7.41 (t、 1H)、 6.41 (s、 1H)、 6.13 (s、 1H) 、 3.71 (m、 1H)、 3.40 (m、 2H)、 2.79 (m、 2H)、 2.40 (m、 1H)、 2.41 (s、 3H)、 2.39 (m、 3H)、 2.10 (m、 1H)、 1.78 (m、 1H); MS(ES+): m/z 416 (M+1).
【０１４１】
実施例４６:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例４５の化合物（０．３００ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をメタノール（１．５ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．２５０ｇ（７６．９％）
【０１４２】
実施例４７:
（＋）−トランス−２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−ベンゼン酸２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−ベンゼン酸（１．６ｇ、７．１５ｍｍｏｌ）をチオニルクロライド（０．７９ｍＬ、１０．７ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（１５ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．１３ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
収率：３．５ｇ（８４．８７％）
【０１４３】
実施例４８:
（＋）−トランス−（２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、６．８５ｍＬ、１５．６ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（３．３６ｍＬ、１５．６ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例４７の化合物（３．５ｇ、６．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（４．０ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１４４】
収率: 0.650 g (22.96 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): 7.23 (d、 1H)、 7.03 (dd、 2H)、 6.46 (s、 1H)、 6.36 (s、 1H)、 4.02 (s、 3H)、 3.97 (s、 3H)、 3.91 (dd、 2H)、 3.8 (dd、 2H)、 3.63 (m、 1H)、 3.40 (m、 4H)、 3.05 (dd、 2H)、 2.82 (m、 1H)、 2.62 (dd、 1H)、 2.46 (m、 2H)、 2.24 (s、 3H)、 1.96 (m、 1H); MS(ES+): m/z 499.2 (M+1).
【０１４５】
実施例４９:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例４８の化合物（０．６５０ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（１．５ｇ、１２．９０ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色固体として標題の化合物を得た。
【０１４６】
収率: 0.075 g (12.0 %); ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 7.32 (d、 1H)、 7.10 (d、 1H)、 7.09 (d、 1H)、 6.98 (s、 1H)、 6.62 (s、 1H)、 4.97 (m、 1H)、 4.25 (m、 1H)、 3.90 (t、 2H)、 3.34 (s、 2H)、 2.90 (m、 2H)、 2.50 (s、 3H)、 2.10 (s、 4H)、 1.33 (s、 4H);
MS(ES+): m/z 471.2 (M+1).
【０１４７】
実施例５０:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例４９の化合物（０．０７５ｇ、０．１５９ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．０７０ｇ（８６．９２％）
【０１４８】
実施例５１:
（＋）−トランス−３−ブロモ−ベンゼン酸 ２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
３−ブロモベンゼン酸（１．３７ｇ、６．８ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．７６ｍＬ、８．８ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（４．０４ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：４．６ｇ
【０１４９】
実施例５２:
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、９．１８ｍＬ、２１．５ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（４．５１ｍＬ、２１．４ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例５１の化合物（４．６ｇ、８．６ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して酢酸３−｛３−［３−（３−ブロモ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（５．０ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１５０】
収率: 1.4 g (35.3 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 9.21 (d、 1H)、 8.90 (d、 1H)、 8.70 (d、 1H)、 8.48 (t、 1H)、 7.72 (s、 1H)、 7.53 (s、 1H ) 5.65 (m、 1H)、 4.14 (s、 3H)、 4.09 (s、 3H)、 4.69 (m、 2H)、 4.33 (m、 2H)、 4.18 (m、 2H)、 3.88 (s、 3H)、 3.36 (m、 2H);
MS(ES+): m/z 474.0 (M+1).
【０１５１】
実施例５３:
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジヒドロキシ−クロメン−４−オン
実施例５２の化合物（１．４０ｇ、３．０４ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（２．０ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１５２】
収率: 0.540 g (39.4 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 8.04 (t、 1H)、 7.78 (d、 1H)、 7.65 (d、 1H)、 7.39 (、m、 1H)、 6.56 (s、 1H)、 6.30(s、 1H)、 4.32 (dd、 1H)、 4.03 (dd、 1H)、 3.84 (dd、 1H)、 3.32 (m、 2H)、 2.91 (m、 1H)、 2.68 (s、 3H)、 2.55 (m、 2H)、 MS(ES+): m/z 447.68 (M+1).
【０１５３】
実施例５４:
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジヒドロキシ−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例５３の化合物（０．５４０ｇ、１．２０９９ｍｍｏｌ）をメタノール（２ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．５００ｇ（８５．６４％）
【０１５４】
実施例５５:
（＋）−トランス−２，３−ジクロロ−ベンゼン酸 ２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル） −６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
２，３−ジクロロベンゼン酸（１．３ｇ、６．８２ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．７６ｍＬ、８．８７ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（４．０４ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：４．３５ｇ
【０１５５】
実施例５６:
（＋）−トランス−２−（２、３−ジクロロ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、８．１５ｍＬ、１９．１ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（４．０ｍＬ、１９．１ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここで温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例５５の化合物（４．３５ｇ、８．２９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して酢酸３−｛３−［３−（２，３−ジクロロ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（４．５ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１５６】
収率: 0.670 (25.47 %) ; ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 8.77 (d、 1H)、 8.66 (d、 1H)、 8.55 (t、 1H)、 7.51 (s、 1H)、 7.56 (s、 1H)、 5.37 (m、 2H)、 5.13 (s、 3H)、 5.11 (s、 3H)、 4.95 (m、 1H)、 4.83 (dd、 3H)、 4.70 (m、 2H)、 3.37 (d、 1H)、 3.84 (s、 3H)、 3.47 (m、 2H); MS(ES+): m/z 464.1 (M+1) .
【０１５７】
実施例５７:
（＋）−トランス−２−（２，３−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例５６の化合物（０．６７０ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（２．０ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１５８】
収率: 0.310 g (49.34 %); ¹H NMR (DMSO-d6、 300MHz): ( 77.78 (d、 1H)、 7.71(d、 1H)、 7.49 (m、 1H)、 6.52 (s、 1H)、 6.38 (s、 1H)、 4.21 (m、 1H)、 3.87 (m、 2H)、 3.68 (m、 1H)、 3.60 (dd、 1H)、 3.37 (m、 1H)、 2.97 (s、 3H)、 2.51 (m、 1H)、 2.27 (m、 1H);
MS(ES-): m/z 434.1 (M -1).
【０１５９】
実施例５８:
（＋）−トランス−２−（２，３−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例５７の化合物（０．３１０ｇ、０．１７４ｍｍｏｌ）をメタノール（１．５ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．３００ｇ（８９．１１％）
【０１６０】
実施例５９:
（＋）−トランス−２−クロロ−３−アイオド−ベンゼン酸 ２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエーテル
２−クロロ−３−ヨウ化−ベンゼン酸（１．９２ｇ、６．８ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．７６ｍＬ、８．８ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（４．０４ｍＬ、２８ｍｍｏｌ）を添加した。ここで乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：５．２ｇ
【０１６１】
実施例６０:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−アイオド−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、９．０１ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（４．４４ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例５９の化合物（５．２ｇ、８．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（４．８ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ３でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
収率: 0.430 g (9.15 %) ; ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 8.04 (d、 1H)、 7.63 (d、 1H)、 7.14 (t、 1H)、 6.40 (s、 1H)、 6.47 (s、 1H)、 4.19 (m、 1H)、 4.02 (s、 3H)、 4.01 (s、 3H)、 3.89 (d、 1H)、 3.50 (m、 2H)、 2.95 (m、 2H)、 2.56 (s、 3H)、 2.25 (m、 2H).
【０１６２】
実施例６１：
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例６０の化合物（０．４３０ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（２．０ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液でクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１６３】
収率: 0.120 g (29.4 %); ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 8.15 (d、 1H)、 7.68 (d、 1H)、 7.23 (t、 1H)、 6.30 (s、 1H)、 6.15 (s、 1H)、 3.94 (m、 1H)、 3.78 (d、 2H)、 3.41 (m、 2H)、 3.05 (m、 1H)、 2.71 (s、 3H)、 2.20 (m、 2H); MS(ES+): m/z 528.0 (M+1); MS(ES-): m/z 526.02 (M-1).
【０１６４】
実施例６２:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例６１の化合物（０．１２０ｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．１１５ｇ（８９．９０％）
【０１６５】
実施例６３:
（＋）−トランス−２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−ベンゼン酸２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−ベンゼン酸（１．８ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．８０ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．４ｇ、６．８ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．８７ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：３．０ｇ
【０１６６】
実施例６４:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃に維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）に溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、５．８５ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（２．８７ｍＬ、１３．７ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここで温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例６３の化合物（３．０ｇ、５．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温に加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（３．０ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１６７】
収率: 1.0 g (37.5 %); ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 7.50 (d、 1H)、 7.67 (d、 1H)、 6.40 (s、 1H)、 6.10 (s、 1H)、 5.95 (s、 1H)、 3.94 (m、 1H)、 3.87 (s、 3H)、 3.89 (s、 3H)、 3.56 (m、 2H)、 3.43 (m、 1H)、 3.23 (m、 2H)、 2.75 (m、 2H)、 2.57 (s、 3H); 2.46 (s、 3H)、 2.44 (s、 3H); MS(ES+): m/z 487.2 (M+1).
【０１６８】
実施例６５:
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例６４の化合物（０．９００ｇ、１．９８ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（２．０ｇ、１７．３０ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１６９】
収率: 0.070 g (8.08 %); ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 7.73 (d、 1H)、 7.05 (d、 1H)、 6.91 (d、 1H)、 6.58 (s、 1H)、 6.37 (s、 1H)、 7.72 (d、 1H)、 7.05 (d、 1H)、 6.93 (d、 1H)、 6.58 (s、 1H)、 6.37 (s、 1H)、 4.39 (m、 1H)、 4.15 (m、1H)、 3.98 (m、1H)、 3.58 (m、 1H)、 2.65 (m、 2H)、 3.50 (m、 2H)、 2.37 (m、 1H)、 3.03 (s、 3H)、 1.30-1.28 (d、 6H);
MS(ES+): m/z 459.2 (M+1); MS(ES-): m/z 457.2 ( M-1).
【０１７０】
実施例６６：
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例６５の化合物（０．０７０ｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて標題の化合物である塩酸塩を得た。
収率：０．０６５ｇ（８５．９１％）
【０１７１】
実施例６７:
（＋）−トランス−３−ヨウ化−ベンゼン酸 ２−（２−アセトキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−６−アセチル−３，５−ジメトキシ−フェニルエステル
３−ヨウ化−ベンゼン酸（１．８３ｇ、７．３７ｍｍｏｌ）をオキサリルクロライド（０．９８ｍＬ、１１．０６ｍｍｏｌ）を用いてその酸塩化物に転換した。乾燥ＤＣＭ（２０ｍＬ）で溶解された実施例１の化合物（２．０ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）の溶液にトリエチルアミン（１．５２ｍＬ、１１．０６ｍｍｏｌ）を添加した。ここに、乾燥ＤＣＭ（１０ｍＬ）で溶解された前記酸塩化物の溶液を滴下し、その反応物を２５℃で２時間撹拌した。その反応混合物を粉砕した氷上に注ぎ、飽和炭酸ナトリウム溶液（ｐＨ１０）で塩基性化し、クロロホルム（３×２００ｍＬ）で抽出し、減圧下で溶媒を除去して標題の化合物を粘着性オイルとして得た。
未精製収率：４．６ｇ
【０１７２】
実施例６８:
（＋）−トランス−２−（３−アイオド−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジメトキシ−クロメン−４−オン
０℃維持された窒素雰囲気下、ＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解されたｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサンで１５％溶液、８．４ｍＬ、１９．７７ｍｍｏｌ）の溶液にヘキサメチルジシラザン（４．１４ｍＬ、１９．７７ｍｍｏｌ）を滴下し、１５分間撹拌した。ここに、温度を０℃に維持しつつＴＨＦ（３０ｍＬ）で溶解された実施例６７の化合物（４．６ｇ、７．９ｍｍｏｌ）の溶液を滴下した。その滴下後、反応物を室温で加温し、２．５時間撹拌した。その反応混合物を希塩酸で酸性化し、１０％重炭酸ナトリウムでｐＨ８〜９に塩基性化した。水性層をクロロホルム（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。その有機層を減圧下で濃縮し、真空下で乾燥して、酢酸３−｛３−［３−（３−ヨウ化フェニル）−３−オキソ−プロピオニル］−２−ヒドロキシ−４，６−ジメトキシ−フェニル｝−１−メチル−ピロリジン−２−イルメチルエステルをオイル（５．０ｇ）として得て、これを濃塩酸（６０ｍＬ）で溶解させ、３時間撹拌して環化を達成した。３時間後、その反応混合物を固体状ＮａＨＣＯ₃でｐＨ８〜９に塩基性化した。その水性層をクロロホルム（５０×３ｍＬ）で抽出し、水（２５ｍＬ）および塩水（２５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を無水Ｎａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、減圧下で濃縮し、真空乾燥した。その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された３％メタノールおよび０．０１％アンモニアを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１７３】
収率: 0.6 g (14.5 %) ; ¹H NMR (CDCl₃、 300MHz): ( 8.39 (d、 1H)、 7.97 (d、 1H)、 7.85 (d、 1H)、 7.25 (t、 1H)、 6.65 (d、 1H)、 6.48 (s、 1H)、 4.46 (m、 1H)、 4.10 (s、 3H)、 4.07 (s、 3H)、 3.94 (d、 1H)、 3.47 (m、 2H)、 2.95 (m、 2H)、 2.60 (s、 3H)、 2.23 (m、 2H).
【０１７４】
実施例６９：
（＋）−トランス−２−（３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン
実施例６８の化合物（０．４ｇ、０．７０ｍｍｏｌ）およびピリジン塩酸塩（０．３２７ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）の混合物を１８０℃で２．５時間加熱した。その反応混合物をメタノール（６０ｍＬ）で希釈し、固体状Ｎａ₂ＣＯ₃を用いてｐＨ１０に塩基性化した。その反応混合物をろ過し、メタノールで洗浄した。その有機層を濃縮し、その残留物を溶離液としてクロロホルムで溶解された０．０１％アンモニアおよび４．５％メタノールを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製して標題の化合物を得た。
【０１７５】
収率: 0.15 g (42.97 %); ¹H NMR (CD₃OD、 300MHz): ( 8.38 (d、 1H)、 8.02 (d、 1H)、 7.94 (d、 1H)、 733 (t、 1H)、 6.65 (s、 1H)、 6.15 (s、 1H)、 4.25 (m、 1H)、 3.75 (d、 2H)、 3.42 (m、 2H)、 3.33 (m、 1H)、 2.80 (s、 3H)、 2.35 (m、 2H); MS(ES+): m/z 494.21 (M+1).
【０１７６】
実施例７０:
（＋）−トランス−２−（３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩
実施例６９の化合物（０．０５０ｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）をメタノール（１ｍＬ）で懸濁し、エーテル性ＨＣｌで処理し、有機溶媒を蒸発させて、標題の塩を得た。
収率：０．０４５ｇ（８４．１４％）
【０１７７】
化合物の生物学的スクリーニング：
腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α、およびインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）を含む炎症性サイトカインを抑制し、および／または細胞間付着分子１（ＩＣＡＭ−１）、血管細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）、およびＥ−セレクチンを含む細胞付着分子の発現を抑制することによる、化学式１の化合物の効能を、当業界において知られている多数の薬物学的分析法により確認した。下記の例示の薬物学的分析法は化学式１の化合物および/またはその塩を用いて行った。
【０１７８】
分析法:
実施例７１:
ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−８の抑制剤を確認するための試験管内スクリーニング
ｈＰＢＭＣｓ（人間末梢血液単核細胞)におけるリポ多糖（ＬＰＳ）によるサイトカイン生成は、文献[Physiol. Res. 2003、 52、 593-598] に記載のように測定された。この言およにより、分析の教示について、前記文献の内容を本文に組み込まれるものとする。
【０１７９】
元気な提供者からカリウムＥＤＴＡ真空採血チューブ(BD vacutainer)内へ血液を採取した。 ＰＢＭＣをＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ−１０７７溶液(Sigma)で勾配遠心分離によって分離した。分離したＰＢＭＣは、１０％胎仔血清（ＦＢＳ）(JRH, USA)、１００Ｕ／ｍＬペニシリン(Sigma Chemical Co. St Louis, MO, USA)、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン(Sigma Chemical Co. St Louis, MO)を含むＲＰＭＩ１６４０(Rosewell Park Memorial Institute)培地（Sigma-Aldrich Fine Chemicals,USA)で懸濁した。細胞濃度は１×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調節した。細胞生存率はトリパンブルー染料排除法(trypan blue dye exclusion)で測定の際、Ｌｙ＞９８％で均一であった。その細胞懸濁液（１００μＬ）を９６−ウェル培養プレートのウェルに添加した。細胞の塗抹後、７９μＬの培地、およびＤＭＳＯ(ジメチルスルホキシド、Sigma, MO, USA)で溶解された１μＬの様々な濃度の試験化合物（化学式１の化合物）（最終濃度０．００１、０．００３、０．００５、０．０１、０．０２５、０．０３、０．０５、０．１、０．２５、０．３、および１μＭ）を細胞に添加した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％に調節した。溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を対照区として使用した。ＰＤＥ４−選択的抑制剤であるＲｏｌｉｐｒａｍ（３００μＭ）(Piramal Life Sciences Limited (PLSL)の Medicinal Chemistry Departmentで合成される)を基準ＴＮＦ−α抑制剤として使用し、ＳＢ２０３５８０（ｐ３８ミトゲン−活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼの抑制剤）（１０μＭ）(Sigma)をＩＬ−１β（インターロイキン−１ベータ）、ＩＬ−６（インターロイキン−６）およびＩＬ−８（インターロイキン−８）の抑制のための基準物として使用した。そのプレートを５％ＣＯ₂の雰囲気下で、３７℃で３０分間、培養した。最後にウェル当り２０μＬ（１０μｇ／ｍＬ）のＬＰＳ(Escherchia coli 0127:B8, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)を培養されたプレートのウェルに１μｇ／ｍＬの最終濃度で添加した。そのプレートを５％ＣＯ₂の雰囲気で、３７℃で５時間、培養した。化学式１の化合物の細胞毒性効果を評価するため、ＭＴＳ（３−（４、５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）試薬を用いて５時間の培養後、細胞生存率試験を行った。上澄み液を収集し、製造会社(OptiEIA ELISA sets、 BD Biosciences、 Pharmingen)の説明通りにＥＬＩＳＡにより、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−８を分析した。５０％抑制濃度（ＩＣ₅₀）値をＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア（Ｐｒｉｓｍ３．０３）を用いて非線形回帰法で計算した。
【０１８０】
下記の表１および１Аは前記実験の結果を示す。
【０１８１】
【表１】

【０１８２】
【表２】

【０１８３】
前記データに基づき、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物はＬＰＳにより促進され、新たに分離した人間末梢血液単核細胞による炎症誘発サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、およびＩＬ−８）の発現を効果的に抑制していることが分かる。
【０１８４】
実施例７２:
ＴＮＦ−α放出の抑制剤を確認するための試験管内方法
滑液組織構成
膝交替手術を受けたリウマチ性関節炎患者から得た滑液細胞で、サイトカイン生成をその開示が本文で参照として含まれる文献[Lancet, 1989, 29, 244-247]に記載された方法で測定した。
【０１８５】
滑液膜組織をペニシリン−Ｇ（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、アムポテリシンＢ（５０ｎｇ／ｍＬ）(GIBCO)、１．３３ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼタイプＩ(Worthington Biochemical Corporation、 New Jersey、USA)、0．５μｇ／ｍＬＤＮＡｓｅタイプＩ（ＳＩＧＭＡ）、および８．３３Ｕ／ｍＬヘパリン(Biological E. Limited、 India)を含むRoswell Park Memorial Institute （ＲＰＭＩ）培地で５％ＣＯ₂の雰囲気で３７℃で３時間、分解した。次に分解された組織を膜（メッシュサイズ：７０ミクロン）(SIGMA)を通じてろ過し、その細胞を３回洗浄し、完全培地（５％ＦＣＳおよび５％人間血清が添加されたＲＰＭＩ）で懸濁した。細胞濃度は１×１０⁶ｃｅｌｌｓ／ｍＬで調節した。トリパンブルー染料排除法で測定した細胞生存率はＬｙ＞９８％で、均一であった。その細胞懸濁液（１００μＬ）を９６−ウェル培養プレートのウェルに添加した。細胞塗抹後、１００μＬの培地、およびＤＭＳＯ(ジメチルスルホキシド、Sigma、MO、USA)で溶解された１μＬの様々な濃度の実施例３の化合物（最終濃度：０．００１、０．００３、０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、および３μＭ）を細胞に添加した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５ ％に調節した。溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を対照区として使用した。ＳＢ ２０３５８０（２０μＭ）を基準物として使用した。そのプレートを５％ＣＯ₂雰囲気で、３７℃で１６時間、培養した。その培養プレートを遠心分離（２，５００ｒｐｍ、１０分）し、その上澄み液を収集し、−７０℃で保存した。その上澄み液において、ＴＮＦ−α、インタルキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、およびインターロイキン−８（ＩＬ−８）の量を製造会社(OptiEIA ELISA sets, BD BioSciences Pharmingen)が推薦したＥＬＩＳＡプロトコルを用いて分析した。５０％抑制濃度（ＩＣ₅₀）値をＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア（Ｐｒｉｓｍ３．０３）を用いて非線形回帰法で計算した。
【０１８６】
下記表２は前記実験の結果を示す。
【０１８７】
【表３】

【０１８８】
前記のデータに基づいて、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物は新たに分離した滑液細胞で炎症誘発サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、およびＩＬ−８）の発現を抑制していることが分かる。
【０１８９】
実施例７３:
付着分子発現の抑制剤を確認するための試験管内スクリーニング
その開示が、本文に参照として含まれる文献[Transplantation, 1997, 63(5), 759-764]に記載されているように分析法をデザインした。
【０１９０】
人間臍帶静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣｓ）をCascade Biologics (Oregon-USA)から得た。細胞を低血清成長補足物（ＬＳＧＳ）(Cascade Biologics)、ペニシリン−Ｇ（１００Ｕ／ｍＬ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）、およびアムポテリシンＢ（５０ｎｇ／ｍＬ）(GIBCO)が添加されたＭ−２００培地(Cascade Biologics)で培養した。９６−ウェルのフィブロネクチンがコートされたプレートで合流(confluent)ＨＵＶＥＣｓをＤＭＳＯ(ジメチルスルホキシド、Sigma、MO、USA)で溶解された様々な濃度の化学式３の化合物（最終濃度：０．００３、０．００５、０．０１、０．０２５、０．０５、０．１、０．３、および１μＭ）で前処理した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％に調節した。溶媒（０．５％ＤＭＳＯ）を対照区として使用した。ＢＡＹ１１−７０８２（サイトカインにより誘発されたＩκＢ−αリン酸化の抑制剤）（０．５および１μＭ）(Calbiochem)を内皮細胞付着分子（ＥＣＡＭｓ）発現の基準抑制剤として使用した。そのプレートを５％ＣＯ₂の雰囲気で３７℃で培養した。５％ＣＯ₂雰囲気で３７℃で４時間、ＴＮＦ−α刺激（１ｎｇ／ｍＬ）(R&D Systems (Minneapolis, MN))後、上澄み液を収集し、ＩＣＡＭ−１（細胞間細胞付着分子）の発現に対して分析し、６時間の刺激後、ＶＣＡＭ−１（血管細胞付着分子）、およびＥ−セレクチンの発現を評価した。化合物の細胞毒性効果を評価するため、ＭＴＳ（３−（４、５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）試薬を用いて細胞生存率試験を行った。ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、およびＥ−セレクチンの細胞表面発現の量を定量的に測定するため、R&D Systems(Minneapolis, MN, USA)から購入した抗−ＩＣＡＭ−１（クローンＢＢＩＧ−Ｉ１）、抗−ＶＣＡＭ−１（クローンＢＢＩＧ−Ｖ１）、抗−Ｅ−セレクチン（クローンＢＢＩＧ−Ｅ４）抗体、イソタイプ対照区マウスＩｇＧ₁（クローン１１７１１．１１）、および２次抗体（抗−マウスＩｇＧ−ＨＲＰ抗体）を用いてＥＬＩＳＡ分析を行った。５０％抑制濃度（ＩＣ₅₀）値をＧｒａｐｈＰａｄソフトウェア（Ｐｒｉｓｍ３．０３）を用いて非線形回帰法で計算した。
【０１９１】
本研究の結果は下記表３で示す。
【０１９２】
【表４】

【０１９３】
前記表３で示した結果によると、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物はＴＮＦ−αにより促進されたＨＵＶＥＣ（ｎ＝２）において、内皮細胞付着分子であるＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、およびＥ−セレクチンの発現を効果的に抑制していることが分かる。
【０１９４】
実施例７４:
p38MAPキナーゼ抑制、およびIκBα分解に対する試験管内スクリーニング
ｐ３８ミトゲン−活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナ−ゼの抑制剤を確認するための方法をその開示が本文で参照として含まれる文献[Journal of Lipid Research, 1999, 40, 1911-1919]に記載されているようにデザインした。
【０１９５】
ＩκＢα分解のための方法をその開示内容が本文で参照として含まれる文献[The Journal of Immunology, 1999, 103, 6800-6809]に記載されているようにデザインした。
【０１９６】
物質
American Type Culture Collection(ATCC)から得た人間 ＪｕｒｋａｔＴ−細胞を９５％空気−５％ＣＯ₂の湿気のある雰囲気で、３７℃で１０％胎仔血清（ＦＢＳ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）が添加されたRosewell Park Memorial Institute （ＲＰＭＩ）培地で培養した。 培地は２−３日毎に交換し、収獲前の２４時間にいつも交換した。ＲＰＭＩ培地、ＦＢＳ、ＣｅｌｌＬｙｔｉｃ、抗−β−アクチン、オルトバナジン酸ナトリウム、およびアニソマイシンはSigma-Aldrich(USA)から購入した。ＴＮＦ−αはR&D Systems(USA)から購入した。完全プロテアーゼ抑制剤カクテルはRocheから購入した。
【０１９７】
方法
ウエスタンブロット法のための細胞質抽出物の製造
Ｊｕｒｋａｔ細胞を３７℃、ＣＯ₂培養器で、１時間、溶媒または実施例３の化合物とともに前培養した。ＭＡＰＫ実験のため、その細胞をアニソマイシン（１０μｇ／ｍＬ）で３０分間刺激した。ＳＢ ２０３５８０を基準物（１μＭ）として使用した。ＩκＢαおよびＩκＢα（ホスホ）の分解に対する研究のため、細胞を０．１ｎＭＴＮＦ−αとし、０、５、１５、３０、６０、および９０分間刺激した。その細胞を収穫し、氷冷却されたＰＢＳで速かに洗浄し、完全プロテアーゼ抑制剤、およびオルトバナジン酸ナトリウムが添加された冷たい細胞破砕性緩衝液で破砕した。１５，０００ｒｐｍで４℃（２０分）で遠心分離後、タンパク質抽出物を得た。得られる抽出物の一定分量のタンパク質含量をＣｏｏｍａｓｓｉｅＰｌｕｓＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＲｅａｇｅｎｔ(Pierce)を用いて製造会社の指針に従い分析した。
【０１９８】
ウエスタンブロット法
一次抗体は下記の通りであった。
【０１９９】
ｐ３８ＭＡＰＫ、ホスホ−ｐ３８ＭＡＰＫ、ＩκＢα、およびホスホ−ＩκＢαはCalbiochem (USA)から購入した。 抗−β−アクチンはSigma(USA)から購入した。
【０２００】
全ての実験において、同一量のタンパク質（１０μｇ）をＳＤＳ／１２．５％−ポリアクリルアミド電気泳動ゲル上にロードし、緩衝液（２４．９ｍＭＴｒｉｓ塩基、２５０ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳ（硫酸ドデシルナトリウム））で、２時間、１５０Ｖで分解した。電気泳動後、タンパク質を伝達緩衝液（４７．９ｍＭＴｒｉｓ塩基、３８．６ｍＭグリシン、０．０３７％ＳＤＳ、２０％メタノール；ｐＨ９．２−９．４）で、２５Ｖで４０分間、ゲルからニトロセルローズ膜(Sigma-Aldrich)に伝達した。ブロットを室温で１時間１５分、５％乾燥脱脂乳(Santa Cruz Biotechnology)を含むＴｒｉｓ−緩衝液（ＴＢＳ）（２０ｍＭＴｒｉｓ塩基、０．９％ＮａＣｌ；ｐＨ７．４）でブロッキングし、ＴＢＳ(Pierce)でSuperBlockブロッキング緩衝液で製造した一次抗体とともに４℃で、一晩中、培養した。膜を洗浄した後、西洋わさびペルオキシダーゼ-（ＨＲＰ）結合二次抗体を用いて検査した。化学発光ペルオキシダーゼ気質(Sigma-Aldrich) および、Kodakイメージングステーションを用いてバンドを視覚化した。ブロットをストリピング緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ６．８、１％ＳＤＳ、および１００ｍＭβ−メルカプトエタノール）を用いて５０℃で２０分間、ストリピングし、洗浄し、ロード対照区として、ハウスキーピングタンパク質であるβ−アクチンに対する一次抗体を用いて再度検査した。
【０２０１】
本研究の結果は図１に示されている。
【０２０２】
前記実験の結果に基づいて、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物はＴＮＦαにより誘発されたＩｋＢαリン酸化および分解を抑制するが、ｐ３８ＭＡＰキナーゼの抑制剤ではないことが分かる。
【０２０３】
実施例７５
試験管内スクリーニング: PDE4抑制
American Type Culture Collectionから得た人間組織構成リンパ種（Ｕ９３７）細胞を９５％空気−５％ＣＯ₂の湿気のある雰囲気で、３７℃で１０％熱不活性化牛胎児血清（ＦＢＳ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ）が添加された Roswell Park Memorial Institute 1640培地(RPMI、Gibco BRL、UK)で、プラスチックフラスコで成長させた。培地は２−３日毎に交換しており、収獲前２４時間にいつも交換した。ＲＰＭＩ培地、ＦＢＳ、およびＳａｌｂｕｔａｍｏｌはSigma-Aldrich(USA)から購入した。RolipramはPiramal Life Sciences Limitedの Medicinal Chemistry Departmentで合成した。
【０２０４】
方法
全ての実験において、培地は遠心分離（２１６×ｇ、５分）で除去しており、細胞は下記組成のＫｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ 緩衝液で懸濁した（ミリモル）：塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、１１８；塩化カリウム（ＫＣｌ）、４．６；重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ₃）、２４．９；リン酸二水素カリウム（ＫＨ₂ＰＯ₄）、１；Ｄ−グルコース、１１．１；塩化ナトリウム（ＣａＣｌ₂）、１；塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ₂）、１．１；４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸、５；（ｐＨ７．４）．ＰＤＥ４活性を誘導するため、細胞（１．０２×１０⁶細胞／ｍＬ）の４９０μＬ一定分量を９５％空気−５％ＣＯ₂の湿気のある雰囲気で、３７℃で１５分間、溶媒または様々な濃度の実施例３の化合物（１、３、および１０μＭ）と共に前培養した後、サルブタモール(salbutamol)（１μＭ）を用いて７分間刺激した。ロリプラム(Rolipram)を基準物として使用した（０．３、１、および３μＭ）。サルブタモールを脱イオン水で溶解し、実施例３の化合物およびロリプラムをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解し、分析の際、ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％を超えないようにした。ｃＡＭＰ分析を９６−ウェルの黒いフラット底プレートでＢｒｉｄｇｅ−ＩｔｃＡＭＰＤｅｓｉｇｎｅｒＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＡｓｓａｙ(Mediomics LLC、 USA)を用いて製造社の指針に従い行った。ＰｏｌａｒｓｔａｒＯｐｔｉｍａ(BMG Labtech-Germany)を用いて蛍光測定値を得た。
データ分析
下記の式を用いて相手蛍光を計算した：
ＲＦ＝相手蛍光、
Ｆ_o＝ブランクまたは緩衝対照区の蛍光強度、
Ｆ＝ｃＡＭＰまたは試料の蛍光：
ＲＦ＝（Ｆ_o−Ｆ）／Ｆ_o
下記表４で示しているようにデータをＲＦ値に転換した。標準曲線は所定の基準物のＲＦ値を用いて作成し、試験化合物に該当するｃＡＭＰの値を標準曲線を用いて測定した。
【０２０５】
【表５】

【０２０６】
前記表４で示している結果から、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物は、ＰＤＥ４抑制剤ではないということが分かる。
【０２０７】
実施例７６:
滑液単核細胞(SFMC)でアポトーシスの誘導
分析法はその開示内容が、本文に参照として含まれる文献[Arthritis and Rheumatism, Vol. 52, No. 1, January 2005]のようにデザインした。
【０２０８】
膝関節呼吸を受けているリウマチ性関節炎患者から滑液を採取した。その滑液は真空採取容器で採取し、採取２時間内に処理した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ溶液(Sigma)を用いた勾配遠心分離によりSFMCを分離した。分離したＳＦＭＣを２０％胎仔血清（ＦＢＳ）(JRH、USA)、１００Ｕ／ｍｌペニシリン(Sigma Chemical Co. St Louis, MO)、および１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン(Sigma Chemical Co. St Louis, MO)を含むＲＰＭＩ１６４０(Rosewell Park Memorial Institute)培地(Sigma-Aldrich Fine Chemicals, USA)で懸濁した。細胞濃度は1×10⁶細胞/mLに調節した。トリパンブルー染料排除法で測定した細胞生存率は＞９８％に均一に維持された。４ｍＬの前記細胞懸濁液を６−ウェルプレートのそれぞれのウェルに添加した。ＳＦＭＣを３〜４時間、培養した。非付着性細胞を除去し、６−ウェルプレートで別に培養した。新規の培地を付着性細胞に添加した。５％ＣＯ₂で、３７℃の湿気のある雰囲気で、２４時間培養後、非付着性細胞を除去し、以前の細胞とともにプールした。これらの細胞をウェル当り２×１０⁶個細胞の密度で塗抹した。付着性細胞集団に新規の完全培地を再度供給した。細胞塗抹後、付着性および非付着性細胞集団をＤＭＳＯ(ジメチルスルホキシド、Sigma、MO、USA)で溶解された5μＭおよび１０μＭの実施例３の化合物で処理した。ＤＭＳＯの最終濃度は０．５％に調節した。そのプレートを５％ＣＯ₂の湿気のある雰囲気で３７℃で２４時間培養した。このように処理された細胞を収穫し、Ａｎｎｅｘｉｎ−Ｖ／ヨウ化プロピジウム(AV/PI)で染色して、アポトーシスの誘発可否を確認した。
【０２０９】
細胞の収獲および染色
細胞を１５ｍＬチューブで収集した。付着性細胞を柔らかく掻いて除去した。ＰＢＳで洗浄後、その細胞ペレットを１Ｘ結合緩衝液(BD Pharmingen Cat#51-66121E)で再度懸濁した。細胞数を１×１０⁶細胞／ｍＬに調節した。１００μＬのこのような細胞懸濁液をＦＡＣＳチューブに移した。５μＬのＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖを添加した後、５μＬの５０μｇ／ｍＬヨウ化プロピジウムを添加した。このような懸濁液を雌牛で１５〜２０分間培養した。結合緩衝液を用いて体積を４００μＬに合わせた。 フローサイトメータを用いて収穫した。
【０２１０】
本研究の結果は図２Аおよび図２Ｂに示されている。
結論:
実施例３の化合物はリウマチ性関節炎患者から獲得した滑液から分離した単核細胞の付着性および非付着性細胞集団のいずれもアポトーシスを誘導する。
【０２１１】
実施例７７:
抗関節炎活性:
化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物の抗関節炎活性を２つの相違する方法を用いて生体内で評価した。
【０２１２】
１．Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて、ＬＰＳにより誘発されたＴＮＦ−α放出
２．マウスにおいて、コラーゲンにより誘発された関節炎
А）Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて、ＬＰＳにより誘発されたＴＮＦ−α放出
分析法をその開示内容が本文に参照として含まれる文献[J. Med. Bio. Res., 1997, 30, 1199-1207] のようにデザインした。
【０２１３】
実験計画:
体重が１８〜２２ｇである雄雌のＢａｌｂ／ｃマウス(Indiaの Hyderabadの National Institute of Nutritionから最初入手)に実施例３の化合物を１２．５、５０、７５、および１００ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与した。全ての懸濁液は０．５％ＣＭＣ新たに製造した。１時間後、滅菌した発熱物質のない塩水で溶解されたＬＰＳ（１ｍｇ／ｋｇ）(Escherchia coli, serotype 0127:B8, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)を対照群、基準物質処理群 (Rolipram, 30 mg/kg, p.o.)、および試験群(実施例３の化合物)に腹膜内投与し、陰性対照群には正常塩水を投与した。
【０２１４】
ＬＰＳ注射後、１．５時間後、抗凝固剤（２５ＩＵ／試料）としてヘパリンを用いて痲酔されたマウスから血液試料を採取した。ついで、これらの試料を１００００ｒｐｍで１０分間、遠心分離し、 血しょう試料を製造社(OptiEIA ELISA sets, BD BioSciences Pharmingen)が説明したようにＥＬＩＳＡにより、ＴＮＦ−αの水準に対して分析した。
【０２１５】
ＴＮＦ−α放出の抑制％は処理群のＴＮＦ−α水準を対照群の水準と比較して計算した。
【０２１６】
本研究の結果は下記表５に示す。
【０２１７】
【表６】

【０２１８】
前記表５から、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物はＢａｌｂ／ｃマウスにおいて、ＬＰＳにより誘発されたＴＮＦ−α放出を投与量依存的に抑制するということが分かる。
Ｂ) マウスにおいて、コラーゲンにより誘発された関節炎
分析法をその開示内容が本文で参照として含まれる文献[J. Exp. Med., 1985, 162, 637-646] のようにデザインした。
【０２１９】
実験計画:
8〜10週齢の雄ＤＢＡ／１Ｊマウス(USAの Jackson Laboratoriesから最初購入)を完全フロイントアジュバント(Freund's Complete Adjuvant)で、２００μｇのタイプIIコラーゲンに該当するエマルジョンをしっぽの基部に皮内注射して免疫させた。２１日後、同じエマルジョンを用いて追加接種した。天然マウスのグループは共に維持した。
【０２２０】
２３日から５６日まで、関節指数および足厚をパラメーターとして用いてマウスをリウマチ性関節炎の兆しに対して、１日に１度検査した。
【０２２１】
関節指数採点は下記の基準を用いて行った：
前肢：０〜３点
０：発赤または膨らみ無し
１：発赤あり、膨らみ無し
２：足の発赤、および膨らみ
３：足の発赤、およびひどい膨らみ
後肢：０〜５点
０：発赤または膨らみ無し
１：足の発赤および弱い膨らみ
２：足の発赤および穏やかな膨らみ、および／または少なくとも１つの足指の膨らみ
３：足の発赤および穏やかな／ひどい膨らみ、足首関節の膨らみ、および／または１以上の足指の膨らみ
４：足、足指、および足首関節の発赤、および膨らみおよび関節の剛性
５：足、足指、および足首関節の発赤、およびひどい膨らみ、関節の剛性、および足指の角度の変わり。
【０２２２】
２の最小の後ろ足点数を有するマウスを研究に使用した。
【０２２３】
マウスを複数の研究グループに無作為に分け、溶媒（０．５％ＣＭＣ，１ｍＬ／ｋｇ）、試験化合物（実施例３の化合物、５０ｍｇ／ｋｇ、１日２回）、および基準化合物（Ｅｎｂｒｅｌ，３ｍｇ／ｋｇ，ｓ．ｃ．，１日１回）を経口投与した。それぞれのグループは最小８匹のマウスであった。化合物の投与は２３日間行った。
【０２２４】
下記のパラメータを毎日観察して記録した。
【０２２５】
１．体重
２．関節指数
３．テンションのないキャリパを用いた足厚
４．動物の状態に関する任意の重要な観察
最後の日（投与の２４日目）に化合物処理後、１時間後、動物から採血し、血しょうを採取して、薬物水準を分析した。また、すべての動物の足を組織病理学的評価のため保管した。
【０２２６】
その結果は図３(処理の日数に対する関節指数)、および図４(処理の日数に対する足厚)においてグラフで示す。本研究過程で得られたデータ(関節指数および足厚)はマンホイットニーのＵ検定を用いて統計的に評価した。
【０２２７】
エンブレル(Enbrel)が処理されたマウスは関節指数および足厚の評価の際、疾病深刻性の有意的な減少を表わした。
【０２２８】
また、化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物は疾病緩和の傾向を表わした。
【０２２９】
組織病理学的分析:
マウスを人間的に安楽死させ、それぞれの動物から前足を収集し、１０％中性緩衝ホルマリンに固定し、５％ギ酸で脱石灰化し、パラフィンに包埋した。切片（μｍ）をヘマトキシリンおよびエオシン、またはサフラニンＯで染色し、顕微鏡を通じて評価した。組織病理学的変化を下記のように採点した：細胞浸潤、骨靡爛、および軟骨損傷のパラメータをそれぞれ個別に評価し、軽度＝１点、中度＝２点、または重度＝３点と採点した。軟骨欠乏はプロテオグリカン基質のサフラニンＯ染色の減少により、視覚的に確認した。その平均合計点を溶媒で治療したグループの平均合計点と比較した。組織学的採点の場合、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ分析後、Ｄｕｎｎ’ｓ多重比較検定を行って、２グループ間の統計的差を評価した。ｐ＜０．０５の値を有意のものと見做した。組織学的評価の結果、関節の炎症、軟骨損傷、および骨破壊減少が確認された。
【０２３０】
図５に示されているような本実験の結果は化学式１の代表的な化合物である実施例３の化合物が、可能な抗関節炎効果を有するというを示している。
【０２３１】
本明細書および特許請求の範囲で使用される単数形 "a," "an," 、および "the"は他に明確に示していない場合、複数形を含むことと理解されるべきである。したがって、例えば、"1つの化合物"を含む組成物に対する言およは２種以上の化合物の混合物を含む。また、用語 "または"は他に明確に示していない場合、"および/または"を含む意味として一般に利用される。
【０２３２】
本明細書での全ての刊行物および特許出願は本発明が属する分野での当業者の水準を示す。
【０２３３】
本発明は様々な特定の望ましい具体例および技術に言およして説明された。しかし、およ本発明の精神と範囲の中で多くの変更および修正がなされてもよいことを理解すべきである。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性疾患の治療に使用するための下記化学式１の化合物、またはその立体異性体または互変異性体、あるいは、その薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物；
【化１】

前記式において、Ａｒはフェニルまたはヘテロアリール環であり、ここでのフェニルまたはヘテロアリール環はハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシ、カルボキシ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシカルボニル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキレンヒドロキシル、ＣＯＮＨ₂、ＣＯＮＲ₁Ｒ₂、ＳＯ₂ＮＲ₁Ｒ₂、シクロアルキル、ＮＲ₁Ｒ₂、およびＳＲ₃から選択された１、２、または３つの同一または異なる置換体で置換または非置換されることができ、ここでのＲ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキルカルボニル、およびアリールから選択されるか、またはＲ₁およびＲ₂はこれらが結合される窒素原子とともに少なくとも１つの更なるヘテロ原子を選択的に含むことができる五員環または六員環を形成し、Ｒ₃は水素、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、およびフェニルから選択される。
【請求項２】
第１項において、
Ａｒはフェニル環であり、ここでのフェニル環はハロゲン、ニトロ、シアノ、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ヒドロキシル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルコキシ、カルボキシ、およびＮＲ₁Ｒ₂から選択された１、２、または３つの同一または異なる置換体で置換または非置換されることができ、ここでのＲ₁およびＲ₂はそれぞれ独立して、水素、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄−アルキルカルボニルから選択されることである、炎症性疾患の治療に使用するための化学式１の化合物、またはその立体異性体または互変異性体、あるいは、その薬学的に許容される塩または薬学的に許容される溶媒和物。
【請求項３】
第１項または第２項において、
前記化学式１の化合物が下記のものからなるグループから選択されるものである、炎症性疾患の治療に使用するための化合物：
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オンメタンスルホン酸；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−シアノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、４−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オンヒドロクロライド；
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−チオフェン−２−イル−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−（３−ニトロフェニル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−２−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（３−クロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ピロリジン−１−イル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（３−ブロモ−フェニル）−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−５，７−ジヒドロキシ−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、３−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；および、
（＋）−トランス−２−（３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩。
【請求項４】
第１項または第２項において、
前記化学式１の化合物が下記のものからなるグループから選択されるものである炎症性疾患の治療に使用するための化合物：
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クルロロフェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−４−シアノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−ブロモ−４−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、４−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−５−フルオロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−２−（３−ニトロフェニル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ニトロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−メチル−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２、３−ジクロロ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−ヨウ化−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩；および、
（＋）−トランス−２−（２−クロロ−３−イソプロピルアミノ−フェニル）−５，７−ジヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシメチル−１−メチル−ピロリジン−３−イル）−クロメン−４−オン塩酸塩。
【請求項５】
第１項乃至第４項のいずれか一項において、
前記炎症性疾患が、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）、およびインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）から選択された１種以上の炎症性サイトカインの水準の増加、または細胞間付着分子１、血管−細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）、および Ｅ−セレクチンから選択された１種以上の細胞付着分子の発現の増加、またはこれらの組み合わせにより媒介されることである、炎症性疾患の治療に使用するための化合物。
【請求項６】
第１項乃至第５項のいずれか一項において、
前記炎症性疾患が、リウマチ性関節炎、骨関節炎、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、不応性リウマチ性関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠動脈心疾患、アテローム性動脈硬化、血管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、皮膚疾患による遅延型過敏症、敗血症性ショック症侯群、炎症性腸疾患から構成されるグループから選択されることである、炎症性疾患の治療に使用するための化合物。
【請求項７】
炎症性腸疾患の治療のための薬物の製造に使用するための、第１項乃至第４項のいずれか一項で定義されたような化学式１の化合物の使用方法。
【請求項８】
第７項において、
前記炎症性疾患が、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）から選択された１種以上の炎症性サイトカインの水準の増加、または細胞間付着分子１、血管−細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）、およびＥ−セレクチンから選択された１種以上の細胞付着分子の発現の増加、またはこれらの組み合わせにより媒介されることである使用方法。
【請求項９】
第７項または第８項において、
前記炎症性疾患が、リウマチ性関節炎、骨関節炎、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、不応性リウマチ性関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠動脈心疾患、アテローム性動脈硬化、血管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、皮膚疾患による遅延型過敏症、敗血症性ショック症侯群、および炎症性腸疾患から構成されるグループから選択されることである使用方法。
【請求項１０】
炎症性疾患の治療方法として、このような治療を必要とする個体に第１項乃至第４項のいずれか一項で定義されたような化学式１の化合物を治療的有効量で投与することを含む方法。
【請求項１１】
第１０項において、
前記炎症性疾患が、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）から選択された１種以上の炎症性サイトカインの水準の増加、または細胞間付着分子１、血管−細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）、および Ｅ−セレクチンから選択された１種以上の細胞付着分子の発現の増加、またはこれらの組み合わせにより媒介されることである方法。
【請求項１２】
第１０項または第１１項において、
前記炎症性疾患が、リウマチ性関節炎、骨関節炎、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、不応性リウマチ性関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症/骨吸収、冠動脈心疾患、アテローム性動脈硬化、血管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、皮膚疾患による遅延型過敏症、敗血症性ショック症侯群、および炎症性腸疾患から構成されるグループから選択されることである方法。
【請求項１３】
第１項乃至第４項のいずれか一項で定義されたような治療的有効量の化学式１の化合物を少なくとも１種の薬学的に許容される担体とともに含む薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は炎症性疾患の治療で使用することに適合なものである薬学的組成物。
【請求項１４】
第１項乃至第４項のいずれか一項で定義されたような治療的有効量の化学式１の化合物、および少なくとも１種の追加の薬学的活性化合物を１種の薬学的に許容される担体とともに含む薬学的組成物であって、前記薬学的組成物は炎症性疾患の治療で使用することに適合なものである薬学的組成物。
【請求項１５】
第１３項または第１４項において、
前記炎症性疾患が、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）から選択された１種以上の炎症性サイトカインの水準の増加、または細胞間付着分子１、血管−細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）、およびＥ−セレクチンから選択された１種以上の細胞付着分子の発現の増加、またはこれらの組み合わせにより媒介されることである薬学的組成物。
【請求項１６】
第１３項乃至第１５項のいずれか一項において、
前記炎症性疾患が、リウマチ性関節炎、骨関節炎、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、骨関節炎、不応性リウマチ性関節炎、慢性非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症/骨吸収、冠動脈心疾患、アテローム性動脈硬化、血管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、クローン病、成人呼吸窮迫症候群、皮膚疾患による遅延型過敏症、敗血症性ショック症侯群、および炎症性腸疾患から構成されるグループから選択されることである薬学的組成物 。

【図１】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図３】

【図４】

【図５】

【公表番号】特表２０１３−５２０４８４（Ｐ２０１３−５２０４８４Ａ）
【公表日】平成２５年６月６日（２０１３．６．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５５４４２８（Ｐ２０１２−５５４４２８）
【出願日】平成２２年２月２６日（２０１０．２．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２０１０／０５０８３７
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／１０４５８４
【国際公開日】平成２３年９月１日（２０１１．９．１）
【出願人】（５１００１２４７４）ピラマル　エンタープライジーズ　リミテッド (4)
【Ｆターム（参考）】