特定の置換スピロ環ラクタムおよび医薬品としてのその使用
本発明は式：
【化１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｍおよびｐは明細書で定義するとおりである）の新規２−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド、その製造法、その医薬品としての使用、およびそれを含有する医薬組成物に関する。
【化１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｍおよびｐは明細書で定義するとおりである）の新規２−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド、その製造法、その医薬品としての使用、およびそれを含有する医薬組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は新規２−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド、その製造法、医薬品としてのその使用、およびそれを含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
さらに特に本発明は遊離塩基形態または酸付加塩形態の式：
【化１】
（式中、
Ｒ１は水素または（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ２は場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ３は−ＣＨ（Ｒｅ）Ｃ（=Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂまたは−（ＣＨ２）ｋＮ（Ｒｃ）Ｒｄ
（式中、
ｋは０、１または２であり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは別個に水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ５−９）ビシクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−４）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１−４）アルキル、４−クロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリン−４−イル、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル、チオクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド,４−イソクロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−４−イル、チオイソクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド、１,１−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]チアジン−４−イル、１,１−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]オキサチン−４−イル、２,２−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]チアジン−４−イルもしくは２,２−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]オキサチン−４−イル基であるか、または
ＲａおよびＲｂ、もしくはＲｃおよびＲｄはそれらが結合する窒素と一緒に場合によっては置換されていてよいピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルまたはピペラジニル基を形成し、そして
Ｒｅは（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキルである）
であり、
Ｒ４は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、（Ｃ３−７）シクロアルコキシ（Ｃ１−４）アルキルまたはアリール基であり、
Ｒ５は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ６は水素、ヒドロキシまたはハロゲンであり、そして
ｍおよびｐは別個に１または２である）
の化合物に関する。
【０００３】
式Ｉの化合物およびその塩に存在する不斉炭素原子のために、化合物は光学的に活性な形態または光学異性体の混合物の形態、例えばラセミ混合物の形態で存在し得る。全ての光学異性体およびラセミ混合物を含むその混合物は本発明の一部である。
【０００４】
さらに、式Ｉの化合物およびその塩はトリチウム、１４Ｃ、１１Ｃまたは１８Ｆのような放射性同位体を含有し得る。全ての放射性標識化合物およびそのバイオマーカー、インビトロもしくはインビボ造影剤としての、または生化学的アッセイ、例えば結合アッセイにおける使用は本発明の一部である。
【０００５】
前記で定義した非芳香族基の置換基はヒドロキシ、ハロゲン、カルバモイル、カルボキシ、ヒドロキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキルスルファニル、（Ｃ１−４）アルコキシカルボニル、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルオキシ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニル、（Ｃ１−４）アルキルスルホニル、シアノ、オキソ、（Ｃ３−７）シクロアルキル、ヘテロ（Ｃ３−７）シクロアルキル、場合によっては置換されていてよいアリールまたは場合によっては置換されていてよいヘテロアリールから選択される。（Ｃ３−７）シクロアルキルまたはヘテロ−（Ｃ３−７）シクロアルキル基はまた別の（Ｃ３−７）シクロアルキル、ヘテロ（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは芳香族もしくはヘテロ芳香環と融合され得る。
【０００６】
前記で定義した芳香族またはヘテロ芳香族基の置換基はハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、ベンジルオキシ、フェノキシ、ＳＯ２ＮＨ２、ＮＨＳＯ２（Ｃ１−３）アルキル、カルボキシ、（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニル、カルバモイル、（Ｃ１−４）アルキルカルバモイル、（Ｃ１−４）アルキルスルホニル、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルオキシ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニル、（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ１−４）アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは場合によっては置換されていてよいアミノ基から選択される。
【０００７】
アミノまたはカルバモイル基の置換基は（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシカルボニル、アリール（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニルまたはヘテロアリール（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニルから選択される１または２個の基でよい。
【０００８】
アリールは場合によってはヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、ハロゲン、カルボキシ、（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−４）アルキルカルバモイル、（Ｃ１−４）アルキルスルホニル、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルオキシ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルアミノ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニル、（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシまたはヒドロキシ（Ｃ１−４）アルキルにより別個に一、二または三置換された芳香族６員環である。アリール基はまた（Ｃ３−７）シクロアルキル、ヘテロ（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは別の芳香族もしくはヘテロ芳香環と（例えばナフチル、キノリニルまたはインドリル基を形成するために）融合され得る。
【０００９】
ヘテロアリールは、１、２または３個の原子がＯ、ＮおよびＳから別個に選択されるヘテロ原子である芳香族５または６員環である。ヘテロアリールは、例えば１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イルまたは１Ｈ−イミダゾール−２−イルである。これはまたシクロアルキルまたは別の芳香族もしくはヘテロ芳香環と（例えばキノリニルまたはインドリル基を形成するために）融合され得る。
【００１０】
ハロゲンはフッ素、臭素、塩素、またはヨウ素を示す。
任意のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコキシ基は直鎖状または分岐している。
別に特記しない場合、炭素含有基および分子は１から８個、好ましくは１から６個、さらに好ましくは１から４個の炭素原子を含有する。
【００１１】
好ましい実施態様では本発明は、Ｒ１が水素である、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１２】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ２がアリール、好ましくはフェニル、さらに好ましくは非置換フェニルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１３】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ３が−ＣＨ（Ｒｅ）Ｃ（=Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂまたは−（ＣＨ２）ｋＮ（Ｒｃ）Ｒｄ（ここでｋは０であり；Ｒａは水素であり；Ｒｂは（Ｃ１−８）アルキルまたはビシクロヘプチルのような（Ｃ５−９）ビシクロアルキルであり；Ｒｃは水素であり；Ｒｄは場合によっては置換されていてよいアリール（Ｃ１−４）アルキル、好ましくはフェニル環で（Ｃ１−４）アルキルにより置換されたベンジルであるか、または場合によっては置換されていてよい（Ｃ３−７）シクロアルキル、好ましくは場合によっては臭素のようなハロゲン置換されていてよいフェニルにより置換されたシクロプロピルであるか、または場合によっては、好ましくはハロゲンおよび／または（Ｃ１−４）アルキルにより置換されていてよい４−クロマニルであり；そしてＲｅは（Ｃ１−４）アルキルである）である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１４】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ４が（Ｃ１−８）アルキルであるか、または（Ｃ３−７）シクロアルキル、好ましくはシクロプロピルにより、フッ素のようなハロゲンにより、（Ｃ１−４）アルコキシにより、もしくはヒドロキシにより置換された、好ましくは一置換された（Ｃ１−８）アルキルであるか、または場合によってはヒドロキシにより置換された、好ましくは一置換された（Ｃ２−６）アルケニルであるか、または（Ｃ２−６）アルキニルであるか、またはアリール、好ましくはフェニル、好ましくは非置換フェニルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１５】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ４が２,２,３,３−テトラトリチオプロピルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１６】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ５が（Ｃ１−８）アルキル、好ましくは（Ｃ１−４）アルキルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１７】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ６が水素またはハロゲン、好ましくは水素またはフッ素である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１８】
別の好ましい実施態様では本発明は、ｍが１である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１９】
別の好ましい実施態様では本発明は、ｐが１である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００２０】
さらなる態様では、本発明は式：
【化２】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記で式Ｉに関して定義したとおりである）
の化合物を式：
【化３】
（式中、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｍおよびｐは前記で式Ｉに関して定義したとおりである）
の酸またはエステルもしくは酸ハロゲン化物のようなその活性形態でアシル化すること、およびそのようにして得られた遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物を回収することの工程を含む式Ｉの化合物およびその塩の調製のための方法に関する。
【００２１】
例えば実施例に記載されるような従来の方法に従って反応を行うことができる。
例えば実施例に記載されるような別の従来の方法により式Ｉの化合物を生成することもできる。
【００２２】
式ＩＩおよびＩＩＩの出発材料は既知であるか、または例えば実施例に記載されるような公知の化合物から出発して従来の手順に従って調製することができる。
【００２３】
反応混合物の後処理およびこのように得られた化合物の精製を公知の手順に従って行うことができる。
【００２４】
公知の様式で遊離塩基から酸付加塩を生成することができ、そして逆も同様である。
【００２５】
以後本発明の試薬として言及される、式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される酸付加塩は、インビトロおよび動物において試験した場合、価値のある薬理学的特性を呈し、そしてしたがって医薬品として有用である。
【００２６】
本発明の試薬はアスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であり、そしてかかる酵素によるプロセシングに関与する障害の処置に用いることができる。特にこれらはベータセクレターゼを阻止し、そしてそのためにベータアミロイドの生成および続くオリゴマーおよび原線維への凝集を阻止する。
【００２７】
加えて、本発明の薬剤はＢＡＣＥ（ベータセクレターゼ切断酵素）の選択的標識のための組織病理学的標識剤、造影剤および／またはバイオマーカー（以後「マーカー」）として価値のある特性を呈する。
【００２８】
さらに特に、本発明の薬剤はインビトロまたはインビボでＢＡＣＥを標識するためのマーカーとして有用である（実施例９および１０参照）。
【００２９】
したがって本発明の薬剤は、例えばＢＡＣＥで作用する薬物の活性部位占有のレベルを決定するため、またはＢＡＣＥに関連する過程の機能不全の結果である疾患の診断目的のため、およびかかる疾患の薬物治療の有効性をモニタリングするために有用である。
【００３０】
前記にしたがって、本発明はまた神経画像処理のためのマーカーとして使用するための本発明の薬剤をも提供する。
【００３１】
さらなる態様では本発明は、インビボおよびインビトロでＢＡＣＥに関与する脳および末梢構造を標識するための、本発明の薬剤を含む組成物を提供する。
【００３２】
なおさらなる態様では、本発明は脳または末梢組織を本発明の薬剤と接触させることを含む、インビトロまたはインビボでＢＡＣＥに関与する脳および末梢構造を標識するための方法を提供する。
【００３３】
本発明の方法は、本発明の薬剤が標的構造を標識したかどうかを決定することを目的とするさらなる工程を含み得る。オートラジオグラフィー、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）または放射線放射の検出を可能にする任意の装置を用いて標的構造を観察することによりさらなる該工程を行うことができる。
【００３４】
試験１：ヒトＢＡＣＥの阻止
０.１％ ＣＨＡＰＳを含有する１００ｍＭ 酢酸塩バッファー（ｐＨ４.５）中、組換えＢＡＣＥ（細胞外ドメイン、バキュロウイルスにおいて発現させ、そして標準的な方法を用いて精製した）を６ｎＭの濃度で種々の濃度の被験化合物と共に室温で１時間インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）を最終濃度３μＭまで加え、そしてマイクロプレート蛍光分光計で３２５ｎｍの励起および４００ｎｍの発光で、２０分間、１分間隔で蛍光の増加を記録する。ＢＡＣＥ活性の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数としてＩＣ５０値を計算する。
【００３５】
試験２：ヒトＢＡＣＥ−２の阻止
０.１％ ＣＨＡＰＳを含有する１００ｍＭ 酢酸塩バッファー（ｐＨ４.５）中、組換えＢＡＣＥ−２（細胞外ドメイン、バキュロウイルスにおいて発現させ、そして標準的な方法を用いて精製した）を２.５ｎＭの濃度で種々の濃度の被験化合物と共に室温で１時間インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）を最終濃度３μＭまで加え、そしてマイクロプレート蛍光分光計で３２５ｎｍの励起および４００ｎｍの発光で、２０分間、１分間隔で蛍光の増加を記録する。ＢＡＣＥ−２活性の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数としてＩＣ５０値を計算する。
【００３６】
試験３：ヒトカテプシンＤの阻止
１００ｍＭ ギ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ３.１）中、組換えカテプシンＤ (ＣａｔｈＤ) （バキュロウイルスにおいてプロカテプシンＤとして発現させ、標準的な方法を用いて精製し、そしてギ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ３.７）中でインキュベートすることにより活性化した）を種々の濃度の被験化合物と共に室温で１時間インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＨ２を最終濃度２μＭまで加え、そしてマイクロプレート蛍光分光計で３２５ｎｍの励起および４００ｎｍの発光で、２０分間、１分間隔で蛍光の増加を記録する。カテプシンＤ活性の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数としてＩＣ５０値を計算する。
【００３７】
試験４：アミロイドペプチド１−４０の細胞放出の阻止
チャイニーズハムスター卵巣細胞をアミロイド前駆体タンパク質の遺伝子でトランスフェクトする。細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート中８０００セル／ウェルの密度で蒔き、そして１０％ ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ細胞培養培地中２４時間培養する。被験化合物を種々の濃度で細胞に加え、そして被験化合物の存在下、細胞を２４時間培養する。上澄を収集し、そしてアミロイドペプチド１−４０の濃度をサンドウィッチＥＬＩＳＡを用いて決定する。アミロイドペプチド放出の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数として化合物の強度を計算する。
【００３８】
前記で示した試験の少なくとも１つで、本発明の薬剤は２０μＭ以下の濃度で活性を示す。
【００３９】
したがって本発明の薬剤は例えば、アルツハイマー病、ダウン症候群、記憶および認識機能障害、認知症、アミロイドニューロパシー、脳の炎症、神経および脳の外傷、血管アミロイドーシス、またはアミロイドーシスを伴う脳出血のような神経変性疾患のようなベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的および血管障害の処置および／または予防のために有用である。
【００４０】
本発明の薬剤には、ＢＡＣＥ２（ベータ部位ＡＰＰ切断酵素２）または、ペプシン型アスパルチルプロテアーゼの緊密な相同体であるカテプシンＤもまた阻止するものもある。ＢＡＣＥ２およびＣａｔｈＤ発現と、腫瘍細胞のさらなる腫瘍形成能および転移能との相関性のために、かかる阻害剤は腫瘍細胞に随伴される転移過程の抑制に有用である。
【００４１】
前記した適応に関して、適切な用量はもちろん、例えば用いる化合物、宿主、投与様式ならびに処置される症状の特性および重篤度に依存して異なる。しかしながら、一般に、動物では約０.１から約１００、好ましくは約１から約５０ｍｇ／ｋｇ動物体重までの１日用量で満足できる結果が得られることが示されている。大型の哺乳動物、例えばヒトでは、本発明の薬剤の指示される１日用量は約１０から約２０００、好ましくは約１０から約２００ｍｇの範囲で、例えば１日４回まで分割して、または徐放形態で投与されるのが都合よい。
【００４２】
本発明の薬剤を任意の慣用される経路により、特に経腸的に、好ましくは経口的に、例えば錠剤もしくはカプセルの形態で、または非経腸的に、例えば注射用溶液もしくは懸濁液の形態で投与することができる。
【００４３】
前記にしたがって本発明はまた、例えばベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための医薬品として使用するための本発明の薬剤を提供する。
本発明はさらに少なくとも１つの医薬用担体または希釈剤に随伴された本発明の薬剤を含む医薬組成物を提供する。かかる組成物を従来の様式で製造することができる。単位投与形態は例えば約１から約１０００、好ましくは約１から約５００ｍｇの本発明の薬剤を含有する。
【００４４】
本発明の薬剤を単独でまたは前記した症状の処置に有効なその他の医薬品と組み合わせて投与することができる。
医薬用の組み合わせは単位投与形態の形態でよく、それにより各単位投与は適当な医薬用担体または希釈剤と混合した予め決定された量の２つの成分を含む。これに代えて、組み合わせは２つの成分を別個に含有するパッケージ、例えばこれらの薬剤が別個に配置されている、２つの活性な薬剤の同時または別個の投与に適合するパックまたはディスペンサーデバイスの形態でよい。
【００４５】
さらに本発明はベータアミロイド生成および／または凝集に関連する任意の神経学的または血管障害の処置のための薬品の製造のための本発明の薬剤の使用を提供する。
なおさらなる態様では本発明は、治療上有効量の本発明の薬剤をかかる処置を必要とする対象に投与することを含む、かかる対象におけるベータアミロイド生成および／または凝集に関連する任意の神経学的または血管障害の処置のための方法を提供する。
【００４６】
以下の実施例は本発明を説明する。
【００４７】
略語：
ＢＯＣ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＯＰ ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム
ＤＡＳＴ 三フッ化（ジエチルアミノ）イオウ
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＰＵ Ｎ,Ｎ'−ジメチルプロピレン尿素
ＥＤＣ. ＨＣｌ 塩酸１−エチル−３−[３−（ジメチルアミノ）プロピル]−カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ｈ 時間
ＨＣｌ 塩酸
ＨＯＢｔ ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＡＨ 水素化アルミニウムリチウム
ｍｉｎ 分
Ｍｐ 融点
ＭＳ 質量分析
Ｒｆ 保持因子（ＴＬＣ）
ｒｔ 室温
ＴＢＡＦ フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＭＥ ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＴＢＴＵ Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロホウ酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
【００４８】
実施例１：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステル １１３ｍｇ（０.４ミリモル）をＴＨＦ １８ｍｌに溶解し、そして０.５Ｎ ＬｉＯＨ水溶液２ｍｌと反応させ、そして室温で４時間攪拌する。反応混合物を５℃まで冷却し、そしてｐＨ４に達するまで１Ｎ ＨＣｌ水溶液と反応させる。溶液をトルエン８０ｍｌを用いる２回連続の共沸蒸発に供し、そして残留物を高真空下で乾燥させ、次いでジクロロメタン ２０ｍｌに取り、そして５−（Ｓ）−アミノ−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド １１７ｍｇ（０.４ミリモル）、ＥＤＣ.ＨＣｌ ８５ｍｇ（０.４４ミリモル）、ＨＯＢｔ ５４ｍｇ（０.４ミリモル）およびトリエチルアミン ０.１７ｍｌ（１.２ミリモル）と共に室温で２０時間攪拌する。氷冷飽和重炭酸ナトリウム水溶液 １０ｍｌで反応混合物をクエンチし、次いでジクロロメタンで２回抽出する。合わせた有機相を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ４９：５９：２）に供して純粋な分画を蒸発させた後、無色の樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：４５３（Ｍ＋１）
【００４９】
本明細書に後記するように出発材料を調製することができる：
ａ） ２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステル
７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ２６０ｍｇ（０.８ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ溶液 ３ｍｌ中、室温で３時間攪拌し、次いで蒸発させる。残留物をトルエン中に取り、そして蒸発乾固させ（２回）、次いでメタノール ６ｍｌ中に取り、イソブチルアルデヒド ０.１４５ｍｌ（１.６ミリモル）、３Å粉末分子ふるい ３００ｍｇおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウム １００ｍｇ（１.６ミリモル）と反応させ、そして室温で一晩攪拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液 ４ｍｌと、そして１０分後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液 ８ｍｌと反応させ、次いでＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機相を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）に供して、対応する分画を蒸発させた後、無色油状物として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＳ＋）：２８３（Ｍ＋１）
【００５０】
ｂ） ７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
２−[２−（１−メトキシカルボニル−エチルアミノ）−（Ｓ）−エチル]−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル ４.３ｇ（１２ミリモル）をキシレン ６０ｍｌに溶解し、そして１５０℃まで２時間加熱する。反応混合物を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル ３：２）に供して７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １.８５ｇ（４６％）および７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １.８ｇ（４５％）を生じる。ジイソプロピルエーテルで再結晶した試料のＸ線により絶対立体化学を確認する。
【００５１】
ｃ） ２−[２−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチルアミノ）−エチル]−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル ２７１ｍｇ（１ミリモル）および塩酸Ｌ−アラニンメチルエステル １５４ｍｇ（１.１ミリモル）をトルエン １０ｍｌに懸濁し、そしてトリエチルアミン ０.０７３ｍｌ（１当量）と反応させる。反応混合物を室温で１０分間攪拌し、そしてロータリーエバポレーター中でゆっくりと蒸発させる。残留物をアセトニトリル １５ｍｌ中に取り、そしてメタノール ２ｍｌ中シアノ水素化ホウ素ナトリウム ９５ｍｇ（１.５ミリモル）を滴加する。反応の完了時に（ＴＬＣ、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル ４：１）反応混合物を蒸発させ、そして残留物を酢酸エチルに取り、そして氷冷飽和塩化アンモニウム水溶液と反応させ、次いで酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させて粗製の望ましい生成物を濃厚な油状物として生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：３５９（Ｍ＋１）
Ｒｆ（ＥｔＯＡｃ）：０.２２
【００５２】
ｄ） ５−（Ｓ）−アミノ−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
[１−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−（Ｓ）−フェニル−エチル]−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ３２ｍｇ（０.１ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ溶液 １ｍｌ中室温で２時間攪拌する。反応混合物を蒸発乾固させ、残留物をトルエン中に取り、そして２回蒸発乾固させた後、高真空下で乾燥させる。残留物をブチルアミン １ｍｌ（過剰）中に取り、そして２５℃で一晩攪拌し、次いで蒸発させ、そして残留物を酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウムで２回抽出する。合わせた有機相を蒸発させ、粗製の望ましい生成物が無色の樹脂として定量的に得られ、そしてさらに精製することなく使用する。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２９３（Ｍ＋１）
【００５３】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例１ａ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５４１（Ｍ＋１）
【００５４】
実施例１ｂ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−プロピル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２９（Ｍ＋１）
【００５５】
実施例１ｃ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−フェニル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５９１（Ｍ＋１）
【００５６】
実施例１ｄ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−フェニル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５９１（Ｍ＋１）
【００５７】
実施例１ｅ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−６−フェニル−ヘキサン酸（２,２−ジメチル−プロピル）−アミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５４３（Ｍ＋１）
【００５８】
実施例１ｆ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ビシクロ[２.２.１]ヘプト−エキソ−２−（Ｒ,Ｓ）−イルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５７９（Ｍ＋１）
【００５９】
実施例１ｇ：５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（２,２−ジメチル−プロピル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５７（Ｍ＋１）
【００６０】
実施例１ｈ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（３−メトキシ−プロピル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００６１】
実施例１ｉ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ビシクロ[２.２.１]ヘプト−エキソ−２−（Ｒ,Ｓ）−イルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５７９（Ｍ＋１）
【００６２】
実施例１ｊ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（３−メトキシ−プロピル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００６３】
実施例１ｋ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−プロピル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２９（Ｍ＋１）
【００６４】
実施例１ｌ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−（２−フルオロエチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５３３（Ｍ＋１）
【００６５】
実施例２：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
塩酸４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド ５２ｍｇ（０.１ミリモル）、炭酸カリウム ２８ｍｇおよび臭化アリル ０.０１ｍｌをＤＭＦ ３ｍｌ中室温で６５時間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃおよび塩類溶液で抽出する（２回）。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィーに供して薄く着色した樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００６６】
本明細書で後記するように出発材料を調製することができる：
ａ） 塩酸４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １７０ｍｇ（０.３３ミリモル）をブチルアミン １.５ｍｌ（過剰）に溶解し、そしてアルゴン下で２時間６５℃まで加熱する。反応混合物を蒸発させ、残留物をトルエン中に取り、そして蒸発乾固させ、イソプロパノール ５ｍｌに再溶解し、イソプロパノール中６Ｎ ＨＣｌ溶液 １ｍｌと反応させ、そして室温で４時間攪拌し、次いで蒸発させ、トルエン中に取り、そして再度蒸発させて望ましい生成物を生じ、それをさらに精製することなく用いる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：４８７（Ｍ＋１）
【００６７】
ｂ） ７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｒ）−（４−（Ｓ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｒ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
７−（１−（Ｓ）−メトキシカルボニル−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ３２６ｍｇ（１ミリモル）をＴＨＦ １５ｍｌに溶解し、１０℃まで冷却し、そしてＬｉＯＨの０.１５Ｎ ＴＨＦ溶液 ７ｍｌ（１.０５当量）と反応させる。室温で２時間攪拌した後、ｐＨ４に達するまで１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加え、そして反応混合物を蒸発させる。残留物をトルエン中に取り、蒸発乾固させ、そして高真空下で乾燥させ、次いでジクロロメタン ２０ｍｌ中に取り、そしてラセミ５−（１−アミノ−２−フェニル−エチル）−３−メチル−ジヒドロ−フラン−２−オン ２３０ｍｇ、ＨＯＢｔ １３５ｍｇ（１ミリモル）、ＥＤＣ.ＨＣｌ ２０８ｍｇ（１.１ミリモル）およびトリエチルアミン０.０３１ｍｌ（２.２５ミリモル）の添加の後、１８時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、合わせた有機分画を塩類溶液で洗浄し、蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ジイソプロピルエーテル ４：１）に供して白色固体である７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、および７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｒ）−（４−（Ｓ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｒ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを生じ、各々収率３３および３０％である。
５−（Ｓ）−（１−（Ｓ）−アミノ−２−フェニル−エチル）−３−（Ｒ）−メチル−ジヒドロ−フラン−２−オンから作られた光学的に純粋な材料と比較することにより絶対立体化学を確認する。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５１４（Ｍ＋１）
【００６８】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例２ａ：５−（Ｒ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（Ｓ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００６９】
実施例２ｂ：５−（Ｒ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（Ｓ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００７０】
実施例２ｃ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００７１】
実施例３：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（４−ヒドロキシ−ブチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−酪酸メチルエステル ３０ｍｇ（０.０６ミリモル）をブチルアミン １ｍｌ中室温で一晩攪拌する。反応混合物を蒸発乾固させ、トルエン中に取り、そして再度蒸発させ、そして残留物をＴＨＦに溶解し、５℃まで冷却し、そして水素化ホウ素リチウム ３ｍｇ（２当量）と反応させる。室温で２時間攪拌した後、反応混合物を１０℃以下に冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液 ２ｍｌおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液 ２ｍｌでクエンチし、そしてさらに１０分間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで抽出する（２回）。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＥｔＯＨ／アンモニア ９０：１０：０.０５）に供して薄く着色した樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００７２】
本明細書に後記するように出発材料を調製することができる：
ａ） ４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−酪酸メチルエステル
４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−ブト−２−エン酸メチルエステル ３０ｍｇ（０.０６ミリモル）をＴＨＦ中水素下で、触媒量の１０％ Ｐｄ／Ｃの存在下２時間攪拌し、次いでセライトを通して濾過し、そして蒸発させて望ましい生成物３０ｍｇを生じ、それをさらに精製することなく用いる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５１４（Ｍ＋１）
【００７３】
ｂ） ４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−ブト−２−エン酸メチルエステル
７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １３０ｍｇ（０.２５ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌに溶解する。９０分後反応混合物を蒸発させ、トルエン中に取り、そして蒸発乾固させる。残留物をジクロロメタン中に取り、そしてヨウ化テトラブチルアンモニウム ９２ｍｇ（１当量）、トランス−４−ブロモブト−２−エン酸メチルエステル ０.０３ｍｌおよびジイソプロピルエチルアミン ０.０９ｍｌ（２当量）の存在下、室温で１８時間攪拌する。反応混合物をジクロロメタンおよび重炭酸塩水溶液で抽出し（２回）、合わせた有機相蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）に供してわずかに褐色がかった樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５１２（Ｍ＋１）
【００７４】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例３ａ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（４−ヒドロキシ−ブチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００７５】
実施例４：４−ヒドロキシ−５−{２−[１−（４−ヒドロキシ−ブト−２−エニル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５７（Ｍ＋１）
実施例１と類似の様式で得られるが、工程１ａで２−[１−（４−ヒドロキシ−ブト−２−エニル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオン酸メチルエステルを用いる。
【００７６】
本明細書に後記するように出発材料を調製することができる：
２−[１−（４−ヒドロキシ−ブト−２−エニル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオン酸メチルエステル
（Ｓ,Ｓ）−７−（１−メトキシカルボニル−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ８２ｍｇ（０.２５ミリモル）を４Ｎ ＨＣｌ ジオキサン溶液１ｍｌ中室温で３時間攪拌し、蒸発させ、次いでトルエン中に取り、そして再度蒸発させる（２回）。残留物をジクロロメタン ２ｍｌ中に取り、そしてヨウ化テトラブチルアンモニウム ７４ｍｇ（０.２ミリモル）、ジイソプロピルエチルアミン ０.０３５ｍｌ（０.２ミリモル）および４−ブロモ−ブト−２−エン−１−オール ３０ｍｇ（０.２ミリモル）の存在下、室温で６５時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、合わせた有機相を塩類溶液で洗浄し、蒸発乾固させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ９：１）に供して濃厚な液体として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２９７（Ｍ＋１）
【００７７】
実施例５：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
この化合物は、２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステルの代わりに（１Ｒ,４Ｓ）−４−フルオロ−２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステルから出発して実施例１に記載するように合成することができる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５４７（Ｍ＋１）
【００７８】
以下のように出発材料を作ることができる：
ａ） （２Ｒ,４Ｓ）−４−フルオロ−２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
（２Ｒ,４Ｓ）−２−アリル−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル １ｇ（３.５ミリモル）をジクロロメタン／メタノール １：１ ６０ｍｌに溶解し、−７８℃まで冷却し、２分間酸素を流し、次いで溶液が薄青色になるまでオゾン流と反応させる。トリフェニルホスフィン １ｇ（１.１当量）を加えた後、溶液を室温まで加温し、さらに５時間攪拌し、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／石油エーテル３：２）に供して透明な油状物として望ましい生成物 ８７０ｍｇを生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２９０（Ｍ＋１）
【００７９】
ｂ） （２Ｒ,４Ｓ）−２−アリル−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
ＤＡＳＴ（１.２当量）０.３９ｍｌをジクロロメタン ３０ｍｌに溶解し、−７８℃まで冷却し、そして（２Ｒ,４Ｒ）−２−アリル−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル １.８ｇ（６.３ミリモル）を含有するジクロロメタン １０ｍｌを滴加して１０分間にわたって反応させる。溶液を２時間にわたって攪拌しながら室温に到達させる。５℃以下に冷却した後、反応混合物を氷冷飽和炭酸ナトリウム水溶液と反応させ、そしてジクロロメタンで抽出する。合わせた抽出物を塩類溶液で洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／石油エーテル １：１）に供して無色の濃厚な油状物として望ましい生成物 １ｇを生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２８８（Ｍ＋１）
【００８０】
ｃ） （２Ｒ,４Ｒ）−２−アリル−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
（２Ｒ,４Ｒ）−（２−アリル−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル ３.３ｇ（８.２７ミリモル）をＴＨＦ ６０ｍｌに溶解し、５℃以下に冷却し、そして攪拌しながらＴＨＦ中１Ｍ ＴＢＡＦ ８.６８ｍｌ（１.０５当量）と反応させる。反応混合物をゆっくりと室温に到達させ、その間さらに４時間攪拌する。氷およびＡｃＯＥｔを加え、混合物を塩類溶液で２回洗浄し、そして有機相を蒸発させて粗製生成物を生じ、それをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／石油エーテル １：１）に供し、無色の濃厚な油状物として望ましい生成物 １.８ｇを生じ、それをそのまま次の工程で用いる。
【００８１】
実施例６：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＣＨ２Ｃｌ２ ５ｍｌ中、二塩酸（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−１−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−４−フェニル−ブタン−２−オール １００ｍｇ、（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸 ７９ｍｇ、ＴＢＴＵ １０２ｍｇおよびＮ−メチルモルホリン ０.１７１ｍｌの溶液を周囲温度で５時間攪拌する。溶液をＤＣＭで希釈し、そして続いて重炭酸塩、塩類溶液、０.１Ｎ ＨＣｌおよび重炭酸塩で洗浄する。ＭｇＳＯ４で乾燥させた後、真空下で全ての揮発性物質を蒸発させ、そして生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５）により精製して望ましい生成物 ５３ｍｇ（３７％）が得られる。
ＭＳ−ＥＳＩ＋：５４９[Ｍ＋]
Ｒｆ：０.２８（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ=９／１）
【００８２】
本明細書以後に記載するように出発材料を調製することができる：
ａ） 二塩酸（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−１−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−４−フェニル−ブタン−２−オール
ＥｔＯＨ １０ｍｌ中ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ−（Ｒ,Ｒ）（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチル）−カルバマート ７００ｍｇ（２.７ミリモル）および３−イソ−プロピルベンジルアミン ４７０ｍｇ（３.３ミリモル）の溶液を５０℃で１５時間加熱する。溶媒を蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９：１）により精製して、無色固体として[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソ−プロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ８２０ｍｇが得られる。この材料をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ １０ｍｌに溶解し、周囲温度で２時間攪拌し、そして真空下で全ての揮発性物質を除去して望ましい化合物 ６４３ｍｇが得られる。
【００８３】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例６ａ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−３−（６−ブロモ−２,２−ジメチル−クロマン−４−イルアミノ）−２−ヒドロキシ−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：６６７,６６９（Ｍ＋１）
【００８４】
実施例６ｂ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５７９（Ｍ＋１）
【００８５】
実施例６ｃ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−プロピル−３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５６７（Ｍ＋１）
【００８６】
実施例６ｄ：（Ｓ）−Ｎ−{（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−３−[１−（３−ブロモ−フェニル）−シクロプロピルアミノ]−２−ヒドロキシ−プロピル}−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：６４１,６４３（Ｍ＋１）
【００８７】
実施例６ｅ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−[（Ｓ）−１−（２−フルオロ−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５３（Ｍ＋１）
【００８８】
実施例６ｆ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５６１（Ｍ＋１）
【００８９】
実施例７：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロプ−２−イニル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
この化合物を実施例６の化合物のように調製することができるが、２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステルの代わりに２−（６−オキソ−１−プロプ−２−イニル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステルから出発する。
【００９０】
以下のように出発材料を調製することができる：
７ａ） ２−（Ｓ）−（６−オキソ−１−プロプ−２−イニル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステル
７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １６３ｍｇ（０.５ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ １.５ｍｌに溶解し、そして室温で３時間攪拌する。反応混合物を蒸発させ、残留物をエタノール／トルエン １：２ １５ｍｌ中に取り、そして蒸発させ（２回）、塩酸２−（Ｓ）−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステルを生じ、それをＤＭＦ １０ｍｌに溶解し、炭酸セシウム ８１５ｍｇ（５当量）および臭化プロプ−２−イニル ０.０４８ｍｌ（１.２５当量）と反応させる。反応混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで抽出し（ＡｃＯＥｔ／水）、塩類溶液で洗浄し、そして合わせた有機分画を蒸発させる。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ）に供して望ましい生成物 ７８ｍｇを生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２６５（Ｍ＋１）
【００９１】
実施例８：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピルベンジルアミノ）プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−（２,２,３,３−テトラトリチオプロピル）−１,７−ジアザ−スピロ[４,４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロプ−２−イニル１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミドを０.９気圧トリチウムガス下、１０％ Ｐｄ／Ｃ上で２時間還元した。反応混合物のＨＰＬＣ精製（カラム：Nucleosil １００−５ Ｃ１８ ＨＤ、５μｍ、２５０×４.９ｍｍ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮおよび０.１％ トリフルオロ酢酸；グラジエント：９：１から１：１、２０分にわたる）の後、望ましい化合物が得られ、エタノール中最終濃度９.９マイクログラム／ｍｌ（特異活性６８.６ＭＢｑ／ｍｌ）に処方した。
ＨＰＬＣ：ＲＴ=１２.８７分
ＭＥ（ＥＳ＋）：５５７（Ｍ＋１）
【００９２】
実施例９：インビトロオートラジオグラフィー
受容体オートラジオグラフィーのために目的の組織をミクロトームクリオスタットで１０マイクロメターの厚さの切片に切断し、そしてシランコートした顕微鏡スライド（Vectabond）上に解凍マウントする。切断面を空気乾燥する。プレインキュベーションはバッファー（５０ｍＭ Tris ｐＨ７.４；２ｍＭ ＥＧＴＡ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０.１ｍＭ バシトラシン、０.２％ ウシ血清アルブミン）中大気温度で１０分間である。リガンド結合は１０ｎＭ トリチウム化化合物（特異活性 ３.８ＴＢｑ／ミリモル）を補充したバッファー中室温で１時間行われる。１０μＭ 冷化合物の存在下、非特異的結合を決定する。バッファーおよび蒸留水中で３回連続して洗浄し、続いて空気乾燥およびオートラジオグラフィー（Biomax ＭＲフィルム（Eastman Kodak Company）に４週間暴露する）を行う。
【００９３】
実施例１０：エクソビボオートラジオグラフィー
トリチウム化した化合物を例えば、適切な処方でｉ.ｖ.投与し、望ましい観察の時点で動物を剖検し、そして目的の組織を例えば実施例９に記載するように分析する。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は新規２−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド、その製造法、医薬品としてのその使用、およびそれを含有する医薬組成物に関する。
【０００２】
さらに特に本発明は遊離塩基形態または酸付加塩形態の式：
【化１】
（式中、
Ｒ１は水素または（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ２は場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ３は−ＣＨ（Ｒｅ）Ｃ（=Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂまたは−（ＣＨ２）ｋＮ（Ｒｃ）Ｒｄ
（式中、
ｋは０、１または２であり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは別個に水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ５−９）ビシクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−４）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１−４）アルキル、４−クロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリン−４−イル、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル、チオクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド,４−イソクロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−４−イル、チオイソクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド、１,１−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]チアジン−４−イル、１,１−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]オキサチン−４−イル、２,２−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]チアジン−４−イルもしくは２,２−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]オキサチン−４−イル基であるか、または
ＲａおよびＲｂ、もしくはＲｃおよびＲｄはそれらが結合する窒素と一緒に場合によっては置換されていてよいピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルまたはピペラジニル基を形成し、そして
Ｒｅは（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキルである）
であり、
Ｒ４は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、（Ｃ３−７）シクロアルコキシ（Ｃ１−４）アルキルまたはアリール基であり、
Ｒ５は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ６は水素、ヒドロキシまたはハロゲンであり、そして
ｍおよびｐは別個に１または２である）
の化合物に関する。
【０００３】
式Ｉの化合物およびその塩に存在する不斉炭素原子のために、化合物は光学的に活性な形態または光学異性体の混合物の形態、例えばラセミ混合物の形態で存在し得る。全ての光学異性体およびラセミ混合物を含むその混合物は本発明の一部である。
【０００４】
さらに、式Ｉの化合物およびその塩はトリチウム、１４Ｃ、１１Ｃまたは１８Ｆのような放射性同位体を含有し得る。全ての放射性標識化合物およびそのバイオマーカー、インビトロもしくはインビボ造影剤としての、または生化学的アッセイ、例えば結合アッセイにおける使用は本発明の一部である。
【０００５】
前記で定義した非芳香族基の置換基はヒドロキシ、ハロゲン、カルバモイル、カルボキシ、ヒドロキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルコキシ、（Ｃ１−４）アルキルスルファニル、（Ｃ１−４）アルコキシカルボニル、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルオキシ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニル、（Ｃ１−４）アルキルスルホニル、シアノ、オキソ、（Ｃ３−７）シクロアルキル、ヘテロ（Ｃ３−７）シクロアルキル、場合によっては置換されていてよいアリールまたは場合によっては置換されていてよいヘテロアリールから選択される。（Ｃ３−７）シクロアルキルまたはヘテロ−（Ｃ３−７）シクロアルキル基はまた別の（Ｃ３−７）シクロアルキル、ヘテロ（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは芳香族もしくはヘテロ芳香環と融合され得る。
【０００６】
前記で定義した芳香族またはヘテロ芳香族基の置換基はハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、ベンジルオキシ、フェノキシ、ＳＯ２ＮＨ２、ＮＨＳＯ２（Ｃ１−３）アルキル、カルボキシ、（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニル、カルバモイル、（Ｃ１−４）アルキルカルバモイル、（Ｃ１−４）アルキルスルホニル、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルオキシ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニル、（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ１−４）アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは場合によっては置換されていてよいアミノ基から選択される。
【０００７】
アミノまたはカルバモイル基の置換基は（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシカルボニル、アリール（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニルまたはヘテロアリール（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニルから選択される１または２個の基でよい。
【０００８】
アリールは場合によってはヒドロキシ、シアノ、トリフルオロメチル、ハロゲン、カルボキシ、（Ｃ１−４）アルキルオキシカルボニル、（Ｃ１−４）アルキルカルバモイル、（Ｃ１−４）アルキルスルホニル、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルオキシ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニルアミノ、（Ｃ１−４）アルキルカルボニル、（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシまたはヒドロキシ（Ｃ１−４）アルキルにより別個に一、二または三置換された芳香族６員環である。アリール基はまた（Ｃ３−７）シクロアルキル、ヘテロ（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは別の芳香族もしくはヘテロ芳香環と（例えばナフチル、キノリニルまたはインドリル基を形成するために）融合され得る。
【０００９】
ヘテロアリールは、１、２または３個の原子がＯ、ＮおよびＳから別個に選択されるヘテロ原子である芳香族５または６員環である。ヘテロアリールは、例えば１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イルまたは１Ｈ−イミダゾール−２−イルである。これはまたシクロアルキルまたは別の芳香族もしくはヘテロ芳香環と（例えばキノリニルまたはインドリル基を形成するために）融合され得る。
【００１０】
ハロゲンはフッ素、臭素、塩素、またはヨウ素を示す。
任意のアルキル、アルケニル、アルキニルまたはアルコキシ基は直鎖状または分岐している。
別に特記しない場合、炭素含有基および分子は１から８個、好ましくは１から６個、さらに好ましくは１から４個の炭素原子を含有する。
【００１１】
好ましい実施態様では本発明は、Ｒ１が水素である、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１２】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ２がアリール、好ましくはフェニル、さらに好ましくは非置換フェニルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１３】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ３が−ＣＨ（Ｒｅ）Ｃ（=Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂまたは−（ＣＨ２）ｋＮ（Ｒｃ）Ｒｄ（ここでｋは０であり；Ｒａは水素であり；Ｒｂは（Ｃ１−８）アルキルまたはビシクロヘプチルのような（Ｃ５−９）ビシクロアルキルであり；Ｒｃは水素であり；Ｒｄは場合によっては置換されていてよいアリール（Ｃ１−４）アルキル、好ましくはフェニル環で（Ｃ１−４）アルキルにより置換されたベンジルであるか、または場合によっては置換されていてよい（Ｃ３−７）シクロアルキル、好ましくは場合によっては臭素のようなハロゲン置換されていてよいフェニルにより置換されたシクロプロピルであるか、または場合によっては、好ましくはハロゲンおよび／または（Ｃ１−４）アルキルにより置換されていてよい４−クロマニルであり；そしてＲｅは（Ｃ１−４）アルキルである）である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１４】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ４が（Ｃ１−８）アルキルであるか、または（Ｃ３−７）シクロアルキル、好ましくはシクロプロピルにより、フッ素のようなハロゲンにより、（Ｃ１−４）アルコキシにより、もしくはヒドロキシにより置換された、好ましくは一置換された（Ｃ１−８）アルキルであるか、または場合によってはヒドロキシにより置換された、好ましくは一置換された（Ｃ２−６）アルケニルであるか、または（Ｃ２−６）アルキニルであるか、またはアリール、好ましくはフェニル、好ましくは非置換フェニルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１５】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ４が２,２,３,３−テトラトリチオプロピルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１６】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ５が（Ｃ１−８）アルキル、好ましくは（Ｃ１−４）アルキルである、遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１７】
別の好ましい実施態様では本発明は、Ｒ６が水素またはハロゲン、好ましくは水素またはフッ素である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１８】
別の好ましい実施態様では本発明は、ｍが１である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００１９】
別の好ましい実施態様では本発明は、ｐが１である遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物に関する。
【００２０】
さらなる態様では、本発明は式：
【化２】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記で式Ｉに関して定義したとおりである）
の化合物を式：
【化３】
（式中、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｍおよびｐは前記で式Ｉに関して定義したとおりである）
の酸またはエステルもしくは酸ハロゲン化物のようなその活性形態でアシル化すること、およびそのようにして得られた遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物を回収することの工程を含む式Ｉの化合物およびその塩の調製のための方法に関する。
【００２１】
例えば実施例に記載されるような従来の方法に従って反応を行うことができる。
例えば実施例に記載されるような別の従来の方法により式Ｉの化合物を生成することもできる。
【００２２】
式ＩＩおよびＩＩＩの出発材料は既知であるか、または例えば実施例に記載されるような公知の化合物から出発して従来の手順に従って調製することができる。
【００２３】
反応混合物の後処理およびこのように得られた化合物の精製を公知の手順に従って行うことができる。
【００２４】
公知の様式で遊離塩基から酸付加塩を生成することができ、そして逆も同様である。
【００２５】
以後本発明の試薬として言及される、式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される酸付加塩は、インビトロおよび動物において試験した場合、価値のある薬理学的特性を呈し、そしてしたがって医薬品として有用である。
【００２６】
本発明の試薬はアスパラギン酸プロテアーゼの阻害剤であり、そしてかかる酵素によるプロセシングに関与する障害の処置に用いることができる。特にこれらはベータセクレターゼを阻止し、そしてそのためにベータアミロイドの生成および続くオリゴマーおよび原線維への凝集を阻止する。
【００２７】
加えて、本発明の薬剤はＢＡＣＥ（ベータセクレターゼ切断酵素）の選択的標識のための組織病理学的標識剤、造影剤および／またはバイオマーカー（以後「マーカー」）として価値のある特性を呈する。
【００２８】
さらに特に、本発明の薬剤はインビトロまたはインビボでＢＡＣＥを標識するためのマーカーとして有用である（実施例９および１０参照）。
【００２９】
したがって本発明の薬剤は、例えばＢＡＣＥで作用する薬物の活性部位占有のレベルを決定するため、またはＢＡＣＥに関連する過程の機能不全の結果である疾患の診断目的のため、およびかかる疾患の薬物治療の有効性をモニタリングするために有用である。
【００３０】
前記にしたがって、本発明はまた神経画像処理のためのマーカーとして使用するための本発明の薬剤をも提供する。
【００３１】
さらなる態様では本発明は、インビボおよびインビトロでＢＡＣＥに関与する脳および末梢構造を標識するための、本発明の薬剤を含む組成物を提供する。
【００３２】
なおさらなる態様では、本発明は脳または末梢組織を本発明の薬剤と接触させることを含む、インビトロまたはインビボでＢＡＣＥに関与する脳および末梢構造を標識するための方法を提供する。
【００３３】
本発明の方法は、本発明の薬剤が標的構造を標識したかどうかを決定することを目的とするさらなる工程を含み得る。オートラジオグラフィー、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）または放射線放射の検出を可能にする任意の装置を用いて標的構造を観察することによりさらなる該工程を行うことができる。
【００３４】
試験１：ヒトＢＡＣＥの阻止
０.１％ ＣＨＡＰＳを含有する１００ｍＭ 酢酸塩バッファー（ｐＨ４.５）中、組換えＢＡＣＥ（細胞外ドメイン、バキュロウイルスにおいて発現させ、そして標準的な方法を用いて精製した）を６ｎＭの濃度で種々の濃度の被験化合物と共に室温で１時間インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）を最終濃度３μＭまで加え、そしてマイクロプレート蛍光分光計で３２５ｎｍの励起および４００ｎｍの発光で、２０分間、１分間隔で蛍光の増加を記録する。ＢＡＣＥ活性の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数としてＩＣ５０値を計算する。
【００３５】
試験２：ヒトＢＡＣＥ−２の阻止
０.１％ ＣＨＡＰＳを含有する１００ｍＭ 酢酸塩バッファー（ｐＨ４.５）中、組換えＢＡＣＥ−２（細胞外ドメイン、バキュロウイルスにおいて発現させ、そして標準的な方法を用いて精製した）を２.５ｎＭの濃度で種々の濃度の被験化合物と共に室温で１時間インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）を最終濃度３μＭまで加え、そしてマイクロプレート蛍光分光計で３２５ｎｍの励起および４００ｎｍの発光で、２０分間、１分間隔で蛍光の増加を記録する。ＢＡＣＥ−２活性の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数としてＩＣ５０値を計算する。
【００３６】
試験３：ヒトカテプシンＤの阻止
１００ｍＭ ギ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ３.１）中、組換えカテプシンＤ (ＣａｔｈＤ) （バキュロウイルスにおいてプロカテプシンＤとして発現させ、標準的な方法を用いて精製し、そしてギ酸ナトリウムバッファー（ｐＨ３.７）中でインキュベートすることにより活性化した）を種々の濃度の被験化合物と共に室温で１時間インキュベートする。合成ペプチド基質Ｍｃａ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ＤＮＰ）−Ｄ−Ａｒｇ−ＮＨ２を最終濃度２μＭまで加え、そしてマイクロプレート蛍光分光計で３２５ｎｍの励起および４００ｎｍの発光で、２０分間、１分間隔で蛍光の増加を記録する。カテプシンＤ活性の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数としてＩＣ５０値を計算する。
【００３７】
試験４：アミロイドペプチド１−４０の細胞放出の阻止
チャイニーズハムスター卵巣細胞をアミロイド前駆体タンパク質の遺伝子でトランスフェクトする。細胞を９６ウェルマイクロタイタープレート中８０００セル／ウェルの密度で蒔き、そして１０％ ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ細胞培養培地中２４時間培養する。被験化合物を種々の濃度で細胞に加え、そして被験化合物の存在下、細胞を２４時間培養する。上澄を収集し、そしてアミロイドペプチド１−４０の濃度をサンドウィッチＥＬＩＳＡを用いて決定する。アミロイドペプチド放出の阻止のパーセンテージから被験化合物濃度の関数として化合物の強度を計算する。
【００３８】
前記で示した試験の少なくとも１つで、本発明の薬剤は２０μＭ以下の濃度で活性を示す。
【００３９】
したがって本発明の薬剤は例えば、アルツハイマー病、ダウン症候群、記憶および認識機能障害、認知症、アミロイドニューロパシー、脳の炎症、神経および脳の外傷、血管アミロイドーシス、またはアミロイドーシスを伴う脳出血のような神経変性疾患のようなベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的および血管障害の処置および／または予防のために有用である。
【００４０】
本発明の薬剤には、ＢＡＣＥ２（ベータ部位ＡＰＰ切断酵素２）または、ペプシン型アスパルチルプロテアーゼの緊密な相同体であるカテプシンＤもまた阻止するものもある。ＢＡＣＥ２およびＣａｔｈＤ発現と、腫瘍細胞のさらなる腫瘍形成能および転移能との相関性のために、かかる阻害剤は腫瘍細胞に随伴される転移過程の抑制に有用である。
【００４１】
前記した適応に関して、適切な用量はもちろん、例えば用いる化合物、宿主、投与様式ならびに処置される症状の特性および重篤度に依存して異なる。しかしながら、一般に、動物では約０.１から約１００、好ましくは約１から約５０ｍｇ／ｋｇ動物体重までの１日用量で満足できる結果が得られることが示されている。大型の哺乳動物、例えばヒトでは、本発明の薬剤の指示される１日用量は約１０から約２０００、好ましくは約１０から約２００ｍｇの範囲で、例えば１日４回まで分割して、または徐放形態で投与されるのが都合よい。
【００４２】
本発明の薬剤を任意の慣用される経路により、特に経腸的に、好ましくは経口的に、例えば錠剤もしくはカプセルの形態で、または非経腸的に、例えば注射用溶液もしくは懸濁液の形態で投与することができる。
【００４３】
前記にしたがって本発明はまた、例えばベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための医薬品として使用するための本発明の薬剤を提供する。
本発明はさらに少なくとも１つの医薬用担体または希釈剤に随伴された本発明の薬剤を含む医薬組成物を提供する。かかる組成物を従来の様式で製造することができる。単位投与形態は例えば約１から約１０００、好ましくは約１から約５００ｍｇの本発明の薬剤を含有する。
【００４４】
本発明の薬剤を単独でまたは前記した症状の処置に有効なその他の医薬品と組み合わせて投与することができる。
医薬用の組み合わせは単位投与形態の形態でよく、それにより各単位投与は適当な医薬用担体または希釈剤と混合した予め決定された量の２つの成分を含む。これに代えて、組み合わせは２つの成分を別個に含有するパッケージ、例えばこれらの薬剤が別個に配置されている、２つの活性な薬剤の同時または別個の投与に適合するパックまたはディスペンサーデバイスの形態でよい。
【００４５】
さらに本発明はベータアミロイド生成および／または凝集に関連する任意の神経学的または血管障害の処置のための薬品の製造のための本発明の薬剤の使用を提供する。
なおさらなる態様では本発明は、治療上有効量の本発明の薬剤をかかる処置を必要とする対象に投与することを含む、かかる対象におけるベータアミロイド生成および／または凝集に関連する任意の神経学的または血管障害の処置のための方法を提供する。
【００４６】
以下の実施例は本発明を説明する。
【００４７】
略語：
ＢＯＣ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ＢＯＰ ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム
ＤＡＳＴ 三フッ化（ジエチルアミノ）イオウ
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＭＦ Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＰＵ Ｎ,Ｎ'−ジメチルプロピレン尿素
ＥＤＣ. ＨＣｌ 塩酸１−エチル−３−[３−（ジメチルアミノ）プロピル]−カルボジイミド
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ｈ 時間
ＨＣｌ 塩酸
ＨＯＢｔ ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィー
ＬＡＨ 水素化アルミニウムリチウム
ｍｉｎ 分
Ｍｐ 融点
ＭＳ 質量分析
Ｒｆ 保持因子（ＴＬＣ）
ｒｔ 室温
ＴＢＡＦ フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＭＥ ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル
ＴＢＴＵ Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウム−テトラフルオロホウ酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
【００４８】
実施例１：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステル １１３ｍｇ（０.４ミリモル）をＴＨＦ １８ｍｌに溶解し、そして０.５Ｎ ＬｉＯＨ水溶液２ｍｌと反応させ、そして室温で４時間攪拌する。反応混合物を５℃まで冷却し、そしてｐＨ４に達するまで１Ｎ ＨＣｌ水溶液と反応させる。溶液をトルエン８０ｍｌを用いる２回連続の共沸蒸発に供し、そして残留物を高真空下で乾燥させ、次いでジクロロメタン ２０ｍｌに取り、そして５−（Ｓ）−アミノ−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド １１７ｍｇ（０.４ミリモル）、ＥＤＣ.ＨＣｌ ８５ｍｇ（０.４４ミリモル）、ＨＯＢｔ ５４ｍｇ（０.４ミリモル）およびトリエチルアミン ０.１７ｍｌ（１.２ミリモル）と共に室温で２０時間攪拌する。氷冷飽和重炭酸ナトリウム水溶液 １０ｍｌで反応混合物をクエンチし、次いでジクロロメタンで２回抽出する。合わせた有機相を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ４９：５９：２）に供して純粋な分画を蒸発させた後、無色の樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：４５３（Ｍ＋１）
【００４９】
本明細書に後記するように出発材料を調製することができる：
ａ） ２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステル
７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ２６０ｍｇ（０.８ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ溶液 ３ｍｌ中、室温で３時間攪拌し、次いで蒸発させる。残留物をトルエン中に取り、そして蒸発乾固させ（２回）、次いでメタノール ６ｍｌ中に取り、イソブチルアルデヒド ０.１４５ｍｌ（１.６ミリモル）、３Å粉末分子ふるい ３００ｍｇおよびシアノ水素化ホウ素ナトリウム １００ｍｇ（１.６ミリモル）と反応させ、そして室温で一晩攪拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム水溶液 ４ｍｌと、そして１０分後、飽和重炭酸ナトリウム水溶液 ８ｍｌと反応させ、次いでＥｔＯＡｃで抽出する。合わせた有機相を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）に供して、対応する分画を蒸発させた後、無色油状物として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＳ＋）：２８３（Ｍ＋１）
【００５０】
ｂ） ７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
２−[２−（１−メトキシカルボニル−エチルアミノ）−（Ｓ）−エチル]−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル ４.３ｇ（１２ミリモル）をキシレン ６０ｍｌに溶解し、そして１５０℃まで２時間加熱する。反応混合物を蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル ３：２）に供して７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １.８５ｇ（４６％）および７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １.８ｇ（４５％）を生じる。ジイソプロピルエーテルで再結晶した試料のＸ線により絶対立体化学を確認する。
【００５１】
ｃ） ２−[２−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチルアミノ）−エチル]−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル ２７１ｍｇ（１ミリモル）および塩酸Ｌ−アラニンメチルエステル １５４ｍｇ（１.１ミリモル）をトルエン １０ｍｌに懸濁し、そしてトリエチルアミン ０.０７３ｍｌ（１当量）と反応させる。反応混合物を室温で１０分間攪拌し、そしてロータリーエバポレーター中でゆっくりと蒸発させる。残留物をアセトニトリル １５ｍｌ中に取り、そしてメタノール ２ｍｌ中シアノ水素化ホウ素ナトリウム ９５ｍｇ（１.５ミリモル）を滴加する。反応の完了時に（ＴＬＣ、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル ４：１）反応混合物を蒸発させ、そして残留物を酢酸エチルに取り、そして氷冷飽和塩化アンモニウム水溶液と反応させ、次いで酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出する。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そして蒸発させて粗製の望ましい生成物を濃厚な油状物として生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：３５９（Ｍ＋１）
Ｒｆ（ＥｔＯＡｃ）：０.２２
【００５２】
ｄ） ５−（Ｓ）−アミノ−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
[１−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−（Ｓ）−フェニル−エチル]−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ３２ｍｇ（０.１ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ溶液 １ｍｌ中室温で２時間攪拌する。反応混合物を蒸発乾固させ、残留物をトルエン中に取り、そして２回蒸発乾固させた後、高真空下で乾燥させる。残留物をブチルアミン １ｍｌ（過剰）中に取り、そして２５℃で一晩攪拌し、次いで蒸発させ、そして残留物を酢酸エチルおよび飽和重炭酸ナトリウムで２回抽出する。合わせた有機相を蒸発させ、粗製の望ましい生成物が無色の樹脂として定量的に得られ、そしてさらに精製することなく使用する。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２９３（Ｍ＋１）
【００５３】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例１ａ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５４１（Ｍ＋１）
【００５４】
実施例１ｂ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−プロピル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２９（Ｍ＋１）
【００５５】
実施例１ｃ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−フェニル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５９１（Ｍ＋１）
【００５６】
実施例１ｄ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−フェニル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５９１（Ｍ＋１）
【００５７】
実施例１ｅ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−６−フェニル−ヘキサン酸（２,２−ジメチル−プロピル）−アミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５４３（Ｍ＋１）
【００５８】
実施例１ｆ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ビシクロ[２.２.１]ヘプト−エキソ−２−（Ｒ,Ｓ）−イルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５７９（Ｍ＋１）
【００５９】
実施例１ｇ：５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（２,２−ジメチル−プロピル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５７（Ｍ＋１）
【００６０】
実施例１ｈ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（３−メトキシ−プロピル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００６１】
実施例１ｉ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ビシクロ[２.２.１]ヘプト−エキソ−２−（Ｒ,Ｓ）−イルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５７９（Ｍ＋１）
【００６２】
実施例１ｊ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（３−メトキシ−プロピル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００６３】
実施例１ｋ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−プロピル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２９（Ｍ＋１）
【００６４】
実施例１ｌ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−（２−フルオロエチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５３３（Ｍ＋１）
【００６５】
実施例２：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
塩酸４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド ５２ｍｇ（０.１ミリモル）、炭酸カリウム ２８ｍｇおよび臭化アリル ０.０１ｍｌをＤＭＦ ３ｍｌ中室温で６５時間攪拌し、次いでＥｔＯＡｃおよび塩類溶液で抽出する（２回）。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィーに供して薄く着色した樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００６６】
本明細書で後記するように出発材料を調製することができる：
ａ） 塩酸４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １７０ｍｇ（０.３３ミリモル）をブチルアミン １.５ｍｌ（過剰）に溶解し、そしてアルゴン下で２時間６５℃まで加熱する。反応混合物を蒸発させ、残留物をトルエン中に取り、そして蒸発乾固させ、イソプロパノール ５ｍｌに再溶解し、イソプロパノール中６Ｎ ＨＣｌ溶液 １ｍｌと反応させ、そして室温で４時間攪拌し、次いで蒸発させ、トルエン中に取り、そして再度蒸発させて望ましい生成物を生じ、それをさらに精製することなく用いる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：４８７（Ｍ＋１）
【００６７】
ｂ） ７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｒ）−（４−（Ｓ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｒ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
７−（１−（Ｓ）−メトキシカルボニル−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ３２６ｍｇ（１ミリモル）をＴＨＦ １５ｍｌに溶解し、１０℃まで冷却し、そしてＬｉＯＨの０.１５Ｎ ＴＨＦ溶液 ７ｍｌ（１.０５当量）と反応させる。室温で２時間攪拌した後、ｐＨ４に達するまで１Ｎ ＨＣｌ水溶液を加え、そして反応混合物を蒸発させる。残留物をトルエン中に取り、蒸発乾固させ、そして高真空下で乾燥させ、次いでジクロロメタン ２０ｍｌ中に取り、そしてラセミ５−（１−アミノ−２−フェニル−エチル）−３−メチル−ジヒドロ−フラン−２−オン ２３０ｍｇ、ＨＯＢｔ １３５ｍｇ（１ミリモル）、ＥＤＣ.ＨＣｌ ２０８ｍｇ（１.１ミリモル）およびトリエチルアミン０.０３１ｍｌ（２.２５ミリモル）の添加の後、１８時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、合わせた有機分画を塩類溶液で洗浄し、蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ジイソプロピルエーテル ４：１）に供して白色固体である７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、および７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｒ）−（４−（Ｓ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｒ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを生じ、各々収率３３および３０％である。
５−（Ｓ）−（１−（Ｓ）−アミノ−２−フェニル−エチル）−３−（Ｒ）−メチル−ジヒドロ−フラン−２−オンから作られた光学的に純粋な材料と比較することにより絶対立体化学を確認する。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５１４（Ｍ＋１）
【００６８】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例２ａ：５−（Ｒ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（Ｓ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００６９】
実施例２ｂ：５−（Ｒ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｒ）−ヒドロキシ−２−（Ｓ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００７０】
実施例２ｃ：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（１−アリル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５２７（Ｍ＋１）
【００７１】
実施例３：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（４−ヒドロキシ−ブチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−酪酸メチルエステル ３０ｍｇ（０.０６ミリモル）をブチルアミン １ｍｌ中室温で一晩攪拌する。反応混合物を蒸発乾固させ、トルエン中に取り、そして再度蒸発させ、そして残留物をＴＨＦに溶解し、５℃まで冷却し、そして水素化ホウ素リチウム ３ｍｇ（２当量）と反応させる。室温で２時間攪拌した後、反応混合物を１０℃以下に冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液 ２ｍｌおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液 ２ｍｌでクエンチし、そしてさらに１０分間攪拌した後、ＥｔＯＡｃで抽出する（２回）。合わせた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＥｔＯＨ／アンモニア ９０：１０：０.０５）に供して薄く着色した樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００７２】
本明細書に後記するように出発材料を調製することができる：
ａ） ４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−酪酸メチルエステル
４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−ブト−２−エン酸メチルエステル ３０ｍｇ（０.０６ミリモル）をＴＨＦ中水素下で、触媒量の１０％ Ｐｄ／Ｃの存在下２時間攪拌し、次いでセライトを通して濾過し、そして蒸発させて望ましい生成物３０ｍｇを生じ、それをさらに精製することなく用いる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５１４（Ｍ＋１）
【００７３】
ｂ） ４−（７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノン−１−イル）−ブト−２−エン酸メチルエステル
７−{１−（Ｓ）−[１−（Ｓ）−（４−（Ｒ）−メチル−５−オキソ−テトラヒドロ−フラン−２−（Ｓ）−イル）−２−フェニル−エチルカルバモイル]−エチル}−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｒ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １３０ｍｇ（０.２５ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ ２ｍｌに溶解する。９０分後反応混合物を蒸発させ、トルエン中に取り、そして蒸発乾固させる。残留物をジクロロメタン中に取り、そしてヨウ化テトラブチルアンモニウム ９２ｍｇ（１当量）、トランス−４−ブロモブト−２−エン酸メチルエステル ０.０３ｍｌおよびジイソプロピルエチルアミン ０.０９ｍｌ（２当量）の存在下、室温で１８時間攪拌する。反応混合物をジクロロメタンおよび重炭酸塩水溶液で抽出し（２回）、合わせた有機相蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ）に供してわずかに褐色がかった樹脂として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５１２（Ｍ＋１）
【００７４】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例３ａ：４−（Ｓ）−ヒドロキシ−５−（Ｓ）−{２−（Ｓ）−[１−（４−ヒドロキシ−ブチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５９（Ｍ＋１）
【００７５】
実施例４：４−ヒドロキシ−５−{２−[１−（４−ヒドロキシ−ブト−２−エニル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオニルアミノ}−２−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５７（Ｍ＋１）
実施例１と類似の様式で得られるが、工程１ａで２−[１−（４−ヒドロキシ−ブト−２−エニル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオン酸メチルエステルを用いる。
【００７６】
本明細書に後記するように出発材料を調製することができる：
２−[１−（４−ヒドロキシ−ブト−２−エニル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオン酸メチルエステル
（Ｓ,Ｓ）−７−（１−メトキシカルボニル−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ８２ｍｇ（０.２５ミリモル）を４Ｎ ＨＣｌ ジオキサン溶液１ｍｌ中室温で３時間攪拌し、蒸発させ、次いでトルエン中に取り、そして再度蒸発させる（２回）。残留物をジクロロメタン ２ｍｌ中に取り、そしてヨウ化テトラブチルアンモニウム ７４ｍｇ（０.２ミリモル）、ジイソプロピルエチルアミン ０.０３５ｍｌ（０.２ミリモル）および４−ブロモ−ブト−２−エン−１−オール ３０ｍｇ（０.２ミリモル）の存在下、室温で６５時間攪拌する。反応混合物をＥｔＯＡｃおよび飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、合わせた有機相を塩類溶液で洗浄し、蒸発乾固させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ９：１）に供して濃厚な液体として望ましい生成物を生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２９７（Ｍ＋１）
【００７７】
実施例５：５−（Ｓ）−[２−（Ｓ）−（３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオニルアミノ]−４−（Ｓ）−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−メチル−６−フェニル−ヘキサン酸ブチルアミド
この化合物は、２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステルの代わりに（１Ｒ,４Ｓ）−４−フルオロ−２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステルから出発して実施例１に記載するように合成することができる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：５４７（Ｍ＋１）
【００７８】
以下のように出発材料を作ることができる：
ａ） （２Ｒ,４Ｓ）−４−フルオロ−２−（２−オキソ−エチル）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
（２Ｒ,４Ｓ）−２−アリル−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル １ｇ（３.５ミリモル）をジクロロメタン／メタノール １：１ ６０ｍｌに溶解し、−７８℃まで冷却し、２分間酸素を流し、次いで溶液が薄青色になるまでオゾン流と反応させる。トリフェニルホスフィン １ｇ（１.１当量）を加えた後、溶液を室温まで加温し、さらに５時間攪拌し、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／石油エーテル３：２）に供して透明な油状物として望ましい生成物 ８７０ｍｇを生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２９０（Ｍ＋１）
【００７９】
ｂ） （２Ｒ,４Ｓ）−２−アリル−４−フルオロ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
ＤＡＳＴ（１.２当量）０.３９ｍｌをジクロロメタン ３０ｍｌに溶解し、−７８℃まで冷却し、そして（２Ｒ,４Ｒ）−２−アリル−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル １.８ｇ（６.３ミリモル）を含有するジクロロメタン １０ｍｌを滴加して１０分間にわたって反応させる。溶液を２時間にわたって攪拌しながら室温に到達させる。５℃以下に冷却した後、反応混合物を氷冷飽和炭酸ナトリウム水溶液と反応させ、そしてジクロロメタンで抽出する。合わせた抽出物を塩類溶液で洗浄し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、蒸発させ、そして残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／石油エーテル １：１）に供して無色の濃厚な油状物として望ましい生成物 １ｇを生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２８８（Ｍ＋１）
【００８０】
ｃ） （２Ｒ,４Ｒ）−２−アリル−４−ヒドロキシ−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
（２Ｒ,４Ｒ）−（２−アリル−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−１,２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル ３.３ｇ（８.２７ミリモル）をＴＨＦ ６０ｍｌに溶解し、５℃以下に冷却し、そして攪拌しながらＴＨＦ中１Ｍ ＴＢＡＦ ８.６８ｍｌ（１.０５当量）と反応させる。反応混合物をゆっくりと室温に到達させ、その間さらに４時間攪拌する。氷およびＡｃＯＥｔを加え、混合物を塩類溶液で２回洗浄し、そして有機相を蒸発させて粗製生成物を生じ、それをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ／石油エーテル １：１）に供し、無色の濃厚な油状物として望ましい生成物 １.８ｇを生じ、それをそのまま次の工程で用いる。
【００８１】
実施例６：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＣＨ２Ｃｌ２ ５ｍｌ中、二塩酸（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−１−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−４−フェニル−ブタン−２−オール １００ｍｇ、（Ｓ）−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロピル−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸 ７９ｍｇ、ＴＢＴＵ １０２ｍｇおよびＮ−メチルモルホリン ０.１７１ｍｌの溶液を周囲温度で５時間攪拌する。溶液をＤＣＭで希釈し、そして続いて重炭酸塩、塩類溶液、０.１Ｎ ＨＣｌおよび重炭酸塩で洗浄する。ＭｇＳＯ４で乾燥させた後、真空下で全ての揮発性物質を蒸発させ、そして生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９５：５）により精製して望ましい生成物 ５３ｍｇ（３７％）が得られる。
ＭＳ−ＥＳＩ＋：５４９[Ｍ＋]
Ｒｆ：０.２８（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ=９／１）
【００８２】
本明細書以後に記載するように出発材料を調製することができる：
ａ） 二塩酸（２Ｒ,３Ｓ）−３−アミノ−１−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−４−フェニル−ブタン−２−オール
ＥｔＯＨ １０ｍｌ中ｔｅｒｔ−ブチル（Ｓ−（Ｒ,Ｒ）（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチル）−カルバマート ７００ｍｇ（２.７ミリモル）および３−イソ−プロピルベンジルアミン ４７０ｍｇ（３.３ミリモル）の溶液を５０℃で１５時間加熱する。溶媒を蒸発させ、そしてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９：１）により精製して、無色固体として[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソ−プロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル ８２０ｍｇが得られる。この材料をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ １０ｍｌに溶解し、周囲温度で２時間攪拌し、そして真空下で全ての揮発性物質を除去して望ましい化合物 ６４３ｍｇが得られる。
【００８３】
類似の手順により以下の化合物を得ることができる：
実施例６ａ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−３−（６−ブロモ−２,２−ジメチル−クロマン−４−イルアミノ）−２−ヒドロキシ−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：６６７,６６９（Ｍ＋１）
【００８４】
実施例６ｂ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５７９（Ｍ＋１）
【００８５】
実施例６ｃ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−プロピル−３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５６７（Ｍ＋１）
【００８６】
実施例６ｄ：（Ｓ）−Ｎ−{（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−３−[１−（３−ブロモ−フェニル）−シクロプロピルアミノ]−２−ヒドロキシ−プロピル}−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−３−（Ｓ）−フルオロ−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：６４１,６４３（Ｍ＋１）
【００８７】
実施例６ｅ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−[（Ｓ）−１−（２−フルオロ−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル]−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５５３（Ｍ＋１）
【００８８】
実施例６ｆ：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−１−シクロプロピルメチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
ＭＳ（ＥＩ＋）：５６１（Ｍ＋１）
【００８９】
実施例７：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロプ−２−イニル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
この化合物を実施例６の化合物のように調製することができるが、２−（Ｓ）−（１−イソブチル−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステルの代わりに２−（６−オキソ−１−プロプ−２−イニル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステルから出発する。
【００９０】
以下のように出発材料を調製することができる：
７ａ） ２−（Ｓ）−（６−オキソ−１−プロプ−２−イニル−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステル
７−（１−メトキシカルボニル−（Ｓ）−エチル）−６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノナン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル １６３ｍｇ（０.５ミリモル）をジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ １.５ｍｌに溶解し、そして室温で３時間攪拌する。反応混合物を蒸発させ、残留物をエタノール／トルエン １：２ １５ｍｌ中に取り、そして蒸発させ（２回）、塩酸２−（Ｓ）−（６−オキソ−１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオン酸メチルエステルを生じ、それをＤＭＦ １０ｍｌに溶解し、炭酸セシウム ８１５ｍｇ（５当量）および臭化プロプ−２−イニル ０.０４８ｍｌ（１.２５当量）と反応させる。反応混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで抽出し（ＡｃＯＥｔ／水）、塩類溶液で洗浄し、そして合わせた有機分画を蒸発させる。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＴＢＭＥ）に供して望ましい生成物 ７８ｍｇを生じる。
ＭＳ（ＥＩ＋）：２６５（Ｍ＋１）
【００９１】
実施例８：（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピルベンジルアミノ）プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−（２,２,３,３−テトラトリチオプロピル）−１,７−ジアザ−スピロ[４,４]ノン−７−イル）−プロピオンアミド
（Ｓ）−Ｎ−[（１Ｓ,２Ｒ）−１−ベンジル−２−ヒドロキシ−３−（３−イソプロピル−ベンジルアミノ）−プロピル]−２−（（Ｓ）−６−オキソ−１−プロプ−２−イニル１,７−ジアザ−スピロ−（Ｓ）−[４.４]ノン−７−イル）−プロピオンアミドを０.９気圧トリチウムガス下、１０％ Ｐｄ／Ｃ上で２時間還元した。反応混合物のＨＰＬＣ精製（カラム：Nucleosil １００−５ Ｃ１８ ＨＤ、５μｍ、２５０×４.９ｍｍ；溶出液：Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮおよび０.１％ トリフルオロ酢酸；グラジエント：９：１から１：１、２０分にわたる）の後、望ましい化合物が得られ、エタノール中最終濃度９.９マイクログラム／ｍｌ（特異活性６８.６ＭＢｑ／ｍｌ）に処方した。
ＨＰＬＣ：ＲＴ=１２.８７分
ＭＥ（ＥＳ＋）：５５７（Ｍ＋１）
【００９２】
実施例９：インビトロオートラジオグラフィー
受容体オートラジオグラフィーのために目的の組織をミクロトームクリオスタットで１０マイクロメターの厚さの切片に切断し、そしてシランコートした顕微鏡スライド（Vectabond）上に解凍マウントする。切断面を空気乾燥する。プレインキュベーションはバッファー（５０ｍＭ Tris ｐＨ７.４；２ｍＭ ＥＧＴＡ、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０.１ｍＭ バシトラシン、０.２％ ウシ血清アルブミン）中大気温度で１０分間である。リガンド結合は１０ｎＭ トリチウム化化合物（特異活性 ３.８ＴＢｑ／ミリモル）を補充したバッファー中室温で１時間行われる。１０μＭ 冷化合物の存在下、非特異的結合を決定する。バッファーおよび蒸留水中で３回連続して洗浄し、続いて空気乾燥およびオートラジオグラフィー（Biomax ＭＲフィルム（Eastman Kodak Company）に４週間暴露する）を行う。
【００９３】
実施例１０：エクソビボオートラジオグラフィー
トリチウム化した化合物を例えば、適切な処方でｉ.ｖ.投与し、望ましい観察の時点で動物を剖検し、そして目的の組織を例えば実施例９に記載するように分析する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離塩基形態または酸付加塩形態の式：
【化１】
（式中、
Ｒ１は水素または（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ２は場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ３は−ＣＨ（Ｒｅ）Ｃ（=Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂまたは−（ＣＨ２）ｋＮ（Ｒｃ）Ｒｄ
（式中、
ｋは０、１または２であり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは別個に水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ５−９）ビシクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−４）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１−４）アルキル、４−クロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリン−４−イル、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル、チオクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド,４−イソクロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−４−イル、チオイソクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド、１,１−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]チアジン−４−イル、１,１−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]オキサチン−４−イル、２,２−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]チアジン−４−イルもしくは２,２−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]オキサチン−４−イル基であるか、または
ＲａおよびＲｂ、もしくはＲｃおよびＲｄはそれらが結合する窒素と一緒に場合によっては置換されていてよいピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルまたはピペラジニル基を形成し、そして
Ｒｅは（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキルである）
であり、
Ｒ４は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、（Ｃ３−７）シクロアルコキシ（Ｃ１−４）アルキルまたはアリール基であり、
Ｒ５は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ６は水素、ヒドロキシまたはハロゲンであり、そして
ｍおよびｐは別個に１または２である）
の化合物。
【請求項２】
式：
【化２】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式Ｉに関して定義したとおりである）
の化合物を式：
【化３】
（式中、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｍおよびｐは式Ｉに関して定義したとおりである）
の酸またはエステルもしくは酸ハロゲン化物のようなその活性形態でアシル化すること、およびそのようにして得られた遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物を回収することの工程を含む請求項１で定義されるような遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物の調製のための方法。
【請求項３】
医薬品として使用するための遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置において使用するための遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
活性成分および医薬用担体または希釈剤として遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項６】
ベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための医薬品としての遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項７】
ベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための薬品の製造のための遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項８】
治療上有効量の遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物をかかる処置を必要とする対象に投与することを含むかかる対象におけるベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための方法。
【請求項９】
同時または逐次的投与のための治療上有効量の遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物および第２の薬物を含む組み合わせ。
【請求項１０】
ベータセクレターゼ切断酵素ＢＡＣＥの選択的標識のための組織病理学的標識剤、造影剤および／またはバイオマーカーとしての遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１】
遊離塩基形態または酸付加塩形態の式：
【化１】
（式中、
Ｒ１は水素または（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ２は場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、
Ｒ３は−ＣＨ（Ｒｅ）Ｃ（=Ｏ）Ｎ（Ｒａ）Ｒｂまたは−（ＣＨ２）ｋＮ（Ｒｃ）Ｒｄ
（式中、
ｋは０、１または２であり、
Ｒａ、Ｒｂ、ＲｃおよびＲｄは別個に水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ５−９）ビシクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−４）アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール（Ｃ１−４）アルキル、４−クロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリン−４−イル、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル、チオクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド,４−イソクロマニル、１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−４−イル、チオイソクロマン−４−イル−１,１−ジオキシド、１,１−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]チアジン−４−イル、１,１−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−１Ｈ−１ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]オキサチン−４−イル、２,２−ジオキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｃ][１,２]チアジン−４−イルもしくは２,２−ジオキソ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−２ラムダ*６*−ベンゾ[ｅ][１,２]オキサチン−４−イル基であるか、または
ＲａおよびＲｂ、もしくはＲｃおよびＲｄはそれらが結合する窒素と一緒に場合によっては置換されていてよいピロリジニル、ピペリジニル、モルホリニルまたはピペラジニル基を形成し、そして
Ｒｅは（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキルまたは（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキルである）
であり、
Ｒ４は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−８）アルキル、（Ｃ１−４）アルコキシ（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル、（Ｃ３−７）シクロアルキル（Ｃ１−４）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、（Ｃ３−７）シクロアルコキシ（Ｃ１−４）アルキルまたはアリール基であり、
Ｒ５は水素または場合によっては置換されていてよい（Ｃ１−４）アルキルであり、
Ｒ６は水素、ヒドロキシまたはハロゲンであり、そして
ｍおよびｐは別個に１または２である）
の化合物。
【請求項２】
式：
【化２】
（式中、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式Ｉに関して定義したとおりである）
の化合物を式：
【化３】
（式中、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、ｍおよびｐは式Ｉに関して定義したとおりである）
の酸またはエステルもしくは酸ハロゲン化物のようなその活性形態でアシル化すること、およびそのようにして得られた遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物を回収することの工程を含む請求項１で定義されるような遊離塩基形態または酸付加塩形態の式Ｉの化合物の調製のための方法。
【請求項３】
医薬品として使用するための遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置において使用するための遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
活性成分および医薬用担体または希釈剤として遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項６】
ベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための医薬品としての遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項７】
ベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための薬品の製造のための遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項８】
治療上有効量の遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物をかかる処置を必要とする対象に投与することを含むかかる対象におけるベータアミロイド生成および／または凝集に関連する神経学的または血管障害の処置のための方法。
【請求項９】
同時または逐次的投与のための治療上有効量の遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物および第２の薬物を含む組み合わせ。
【請求項１０】
ベータセクレターゼ切断酵素ＢＡＣＥの選択的標識のための組織病理学的標識剤、造影剤および／またはバイオマーカーとしての遊離塩基形態または薬学的に許容される酸付加塩形態の請求項１に記載の化合物の使用。
【公表番号】特表２００７−５０９０３８（Ｐ２００７−５０９０３８Ａ）
【公表日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３００８２（Ｐ２００６−５３００８２）
【出願日】平成１６年１０月４日（２００４．１０．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１０５４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３５５３５
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月４日（２００４．１０．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１１０５４
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３５５３５
【国際公開日】平成１７年４月２１日（２００５．４．２１）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
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