甲状腺刺激ホルモン融合タンパク質
本発明者らは、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβを含むＴＳＨ融合タンパク質ならびにＴＳＨアゴニストおよびＴＳＨアンタゴニストの投与が有効であろう疾患を治療するための方法を開示する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甲状腺刺激ホルモン［ＴＳＨ］融合タンパク質、前記融合タンパク質を含む二量体、および前記融合タンパク質の投与が有効であろう疾患を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物学的過程を調節する働きがある生物活性ポリペプチドの例は多い。たとえば、視床下部からの甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）は、甲状腺からの甲状腺ホルモンの放出を刺激する、下垂体からの甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）の放出を調節する。ＴＳＨがＴＳＨ受容体のＧＰＣＲに結合することにより、甲状腺へのヨード取り込み、甲状腺の成長および甲状腺ホルモンのチロキシンおよびトリヨードチロニンの放出が増大する。下垂体機能低下症によるＴＳＨの不足は甲状腺機能低下症を引き起こし、ＴＳＨを分泌する下垂体腫瘍からの過剰なＴＳＨは甲状腺機能亢進症を引き起こす。甲状腺機能亢進症または甲状腺中毒症は、自己抗体がＴＳＨ受容体を刺激するグレーブス病によって引き起こされる可能性がある。甲状腺中毒症の別の共通の原因は、甲状腺が自律性になり、過剰の甲状腺ホルモンを分泌し、その結果としてＴＳＨレベルを抑制する多結節性甲状腺腫である。これは、単一の中毒性甲状腺結節による甲状腺中毒症の患者にも起こる。下垂体腫瘍から過剰のＴＳＨが分泌されるＴＳＨｏｍａによる甲状腺中毒症はまれである。こうした腫瘍は治療が困難であり、患者が罹る甲状腺中毒症は制御されない可能性がある。甲状腺機能低下症は、甲状腺の機能不全が原因であることが最も一般的であり、これは原発性甲状腺機能低下症であり、ＴＳＨレベルが高い。一般的ではないが、甲状腺機能低下症は下垂体からのＴＳＨ欠乏にも関連付けられ、これは続発性甲状腺機能低下症である。
【０００３】
甲状腺癌は全ての年齢層で生じる。その一次治療は甲状腺を完全に切除する手術であるが、ほとんどの場合手術後に小さな甲状腺残遺物が残存する。通常の慣行は、甲状腺残遺物を放射性ヨードによって破壊することである。正常な甲状腺組織および一部の甲状腺癌が放射性ヨードを高度に取り込むことにより、その組織が破壊される。甲状腺残遺物が破壊された後は、放射性ヨードを使用して患者をその甲状腺癌の再発についてスクリーニングすることができる。患者が放射性ヨードを取り込む甲状腺癌に罹患している場合は、放射性ヨードを、癌を治療するための療法として使用することができる。
【０００４】
甲状腺によるヨードならびにテクネチウムなどの他の同位元素の取り込みは、甲状腺へのそれらの取り込みを刺激するＴＳＨ活性の存在に依存する。したがって、ＴＳＨレベルが抑制されている状況は、ヨードまたは関連分子の同位体の取り込みを刺激する上で問題がある。これは、甲状腺中毒性、たとえば、多結節性甲状腺腫の患者および甲状腺癌の外科治療の後に甲状腺ホルモン補充を受けた患者に起こる。ＴＳＨは甲状腺癌再増殖を刺激する可能性があり、したがって、甲状腺癌の甲状腺摘除を受けた患者には甲状腺ホルモンＴ４またはＴ３のいずれかが抑制用量で施されると一般に考えられている。こうした抑制用量ではＴＳＨが抑制され、ヨードまたはテクネチウムまたは任意の同位元素による甲状腺のスキャニングを試みることが不可能である。組換えＴＳＨが利用可能になる以前は、患者は、ＴＳＨレベルを上昇させるために甲状腺補充を止めなければならず、結果として明らかにかつ症候的に甲状腺機能が低下した後にスキャニングを行った。これは不快であり、予測不可能であり、かつ時間がかかるものであった。現在、患者はヨードおよび関連分子の甲状腺への取り込みを増大させる組換えＴＳＨで治療されるので、組換えＴＳＨを用いると患者は、ヨードスキャニングの際に甲状腺ホルモン治療を維持することができる。この組換えＴＳＨ治療の手法を使用して、甲状腺残遺物、甲状腺癌および多結節性甲状腺腫またはヨードもしくは関連化合物を取り込む任意の腫瘍もしくは癌へのヨードまたは関連分子の取り込みを増大させることができる。現行の組換えＴＳＨは、半減期が比較的短く、したがって、ヨード治療前の別々の日に少なくとも２回に分けることが必要とされる。甲状腺、甲状腺癌または他の癌への放射性ヨード同位元素または他の同位元素の取り込みを増大させるなら、長時間作用性のＴＳＨが有利となろう。
【０００５】
ＴＳＨアゴニストを使用して、分子のヨード、放射性ヨード、テクネチウムおよび他の同位元素の甲状腺への取り込みを増大させることができる。これは、甲状腺ホルモンＴ４および／またはＴ３を摂取している患者など、ＴＳＨレベルが抑制されている、もしくはさらには上昇していない、または患者が単一の中毒性甲状腺結節もしくは多結節性甲状腺腫による甲状腺中毒症に罹患している任意の状況で価値がある。グレーブス病では、患者は一般にＴＳＨ刺激抗体を有するが、放射性ヨード療法時のＴＳＨによる一時的な治療がヨード甲状腺への取り込みを選択的に増強し、治療の有効性を改善することが可能となり得る。
【０００６】
ＴＳＨレベルが低い続発性甲状腺機能低下症の治療にＴＳＨアゴニストの別の用途があると考えられる。こうした患者は通常、チロキシン療法を毎日受ける。ＴＳＨアゴニストは、甲状腺ホルモンレベルを正常な範囲に維持することができれば、潜在的に可能な療法となる可能性がある。現在大部分の患者にトリヨードチロニン（Ｔ３）のプロドラッグであるチロキシン（Ｔ４）しか施さないので、この療法の利点は、甲状腺ホルモンをより高い生理的レベルに維持できることであった。ＴＳＨ治療は、甲状腺由来のＴ４とＴ３の生理学的比を刺激するという利点を有すると考えられ、甲状腺は一般に、血中のＴ３の２０％、Ｔ４の１００％に関与する。ＴＳＨはそれ自体、骨などの他の組織の完全性を維持する上でも重要である可能性があり、これはＴＳＨ療法の利点であり得るという証拠がいくつかある。甲状腺機能低下症の患者の最大５０％は健康関連ＱＯＬが低く、潜在的にＴＳＨ療法は適切な場合には有益である可能性がある。
【０００７】
ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、ＴＳＨレベルが上昇し、甲状腺中毒症を引き起こしている状況、またはＴＳＨ受容体がグレーブス病におけるＴＳＨ受容体活性化抗体などの他の分子によって活性化されている状況で使用することができよう。ＴＳＨレベルが高いことによる甲状腺中毒症は、まれであるが治療が困難であり、下垂体のＴＳＨｏｍａが原因である。ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、ＴＳＨが過剰である、またはＴＳＨ受容体が活性化した患者の甲状腺を制御する価値がある可能性がある。グレーブス病では、通常の手法は、カルビマゾール、プロピチオウラシルなどの薬物を使用して甲状腺からの甲状腺ホルモンの放出を遮断することである。ＴＳＨ受容体アンタゴニストを使用して、ＴＳＨ受容体抗体を直接的に阻止し、ＴＳＨ受容体を活性化することによりグレーブス病を治療することができよう。これは、患者の５０％に起こるグレーブス病の再発を低減するという追加の利点を有し得る。グレーブス病において抗原の曝露を低減することができ、その抗原がＴＳＨ受容体であると考えられる場合、グレーブス病の再発を低減する可能性があると考えられている。グレーブス病の合併症としては、眼球突出および眼への損傷を伴うグレーブス眼症、脛骨前粘液水腫、骨減少症および骨粗鬆症、ミオパシー、心筋症、心房細動、ならびに認知症が挙げられる。これらの全部ではないが一部が、眼窩内脂肪、眼の筋肉などの他の組織におけるＴＳＨ受容体の発現に関連付けられる可能性がある。グレーブス病の合併症の状況では、ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、グレーブス病の合併症、具体的には甲状腺眼症を予防または低減することができよう。子宮内の胎児または新生児は、その母親がグレーブス病であり、またはグレーブス病の治療を受けている場合、新生児甲状腺中毒症のリスクがあるおそれがある。グレーブス病の抗体は、胎盤と交差反応し、胎児または幼児において甲状腺中毒症を引き起こすことがある。ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、新生児甲状腺中毒症に対する治療法となることができよう。
【０００８】
治療用ペプチドおよび治療用ポリペプチドに関係する問題は、ペプチド／プロイペプチド作用物質を投与した対象は、この分子を場合によって短時間で取り除くことである。これは、タンパク質分解および腎臓ろ過が一部の原因である。多くの場合、これには、ペプチド作用物質と、投与後のペプチドの放出を調節する第２の作用物質との複合製剤を提供することによって対処する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本開示は、薬学的に有効な量のポリペプチドが低減する、タンパク質分解性切断、腎臓ろ過または任意の他の手段による損失を低減することにより、ポリペプチド治療薬の全身レベルを維持することに関する問題を解決するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一態様によれば、ＴＳＨ受容体の結合ドメインに直接的または間接的に場合によって連結されている甲状腺刺激ホルモンα［ＴＳＨα］および／または甲状腺刺激ホルモンβ［ＴＳＨβ］を含む融合タンパク質が提供される。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質はアゴニストである。
【００１２】
本発明の代替の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質はアンタゴニストである。
【００１３】
本発明の好ましい実施形態において、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβは前記融合タンパク質中の前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記受容体の結合ドメインのアミノ末端に位置している。
【００１４】
本発明の代替の好ましい実施形態において、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβは前記融合タンパク質中の前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記結合ドメインのカルボキシル末端に位置している。
【００１５】
本発明の好ましい実施形態において、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβは、ペプチドリンカー、好ましくは柔軟性ペプチドリンカーによって受容体の結合ドメインに連結している。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチド連結分子は、ペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの少なくとも１コピーを含む。
【００１７】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチド連結分子は、ペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの１〜１０コピーを含む。
【００１８】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチド連結分子は、ペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの２、３、４、５、６、７、８、９および１０コピーを含む。好ましくは、前記ペプチド連結分子は４または７コピーを含む。
【００１９】
本発明の代替の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーは、非柔軟性ヘリックス領域を含む。
【００２０】
本発明の一実施形態において、ペプチドリンカー分子のアミノ末端またはその付近に、柔軟性非ヘリックス領域が位置しており、それによりペプチドリンカー分子のアミノ末端に位置しているＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβを前記ＴＳＨ受容体の結合ドメインに対して方向付けることが可能となる。
【００２１】
本発明の代替の実施形態において、ペプチドリンカー分子のカルボキシル末端またはその付近に、柔軟性非ヘリックス領域が位置しており、それによりペプチドリンカー分子のカルボキシル末端に位置しているＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβを前記ＴＳＨ受容体の結合ドメインに対して方向付けることが可能となる。
【００２２】
本発明のさらなる実施形態において、柔軟性非ヘリックス領域は、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβとＴＳＨ受容体の結合ドメインを連結する、ペプチドリンカー分子のアミノ末端およびカルボキシル末端またはその付近に位置している。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態において、非柔軟性ヘリックス領域は、モチーフＡ（ＥＡＡＡＫ）ｘＡの少なくとも１コピーを含む。
【００２４】
非柔軟性非ヘリックス領域の長さは、このＡ（ＥＡＡＡＫ）ｘＡモチーフの反復の数を増加させることによって延長可能である。
【００２５】
本発明の好ましい実施形態において、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｘＡモチーフ中のｘは、５コピー未満である。さらにより好ましくは、ｘは、１、２、３、４または５コピーから選択される。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態において、前記リンカーは、前記ペプチド結合ドメインと前記受容体の結合ドメインの間にある非柔軟性αヘリックスリンカーからなる。
【００２７】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカー分子は、少なくとも１つの糖部分を付加するための少なくとも１つのモチーフを含むように修飾されている。
【００２８】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカー分子は、モチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフは、グリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含む。
【００２９】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーは、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｓｅｒ３Ｘａａ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｘａａ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｓｅｒ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｘａａ１Ｘａａ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｔｈｒ３Ｘａａ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｘａａ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｔｈｒ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）および
Ｘａａ１Ｘａａ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｔｈｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）
からなる群から選択されるアミノ酸モチーフの少なくとも１コピーを含む。
【００３０】
好ましくは、前記ペプチドリンカーは、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｓｅｒ３Ｇｌｙ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｇｌｙ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｓｅｒ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｇｌｙ１Ｇｌｙ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｔｈｒ３Ｇｌｙ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｇｌｙ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｔｈｒ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）および
Ｇｌｙ１Ｇｌｙ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｔｈｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）
からなる群から選択されるモチーフの少なくとも１コピーを含む。
【００３１】
本発明の代替の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーは、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｓｅｒ３Ｓｅｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｓｅｒ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｓｅｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｓｅｒ１Ｓｅｒ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｔｈｒ３Ｓｅｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｓｅｒ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｔｈｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）および
Ｓｅｒ１Ｓｅｒ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｔｈｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）
からなる群から選択されるモチーフの少なくとも１コピーを含む。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカー分子はモチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフはグリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含み、また前記ペプチドリンカー分子はモチーフ（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）の少なくとも１コピーを含み、前記ペプチドリンカーは５〜５０アミノ酸である。
【００３３】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーはモチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフはグリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含み、また前記ペプチドリンカー分子はモチーフ（ＳｅｒＳｅｒＳｅｒＳｅｒＧｌｙ）の１コピーを含み、前記ペプチドリンカーは５〜５０アミノ酸である。
【００３４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合ポリペプチドリンカーは、マンノース、ガラクトース、ｎ−アセチルグルコサミン、ｎ−アセチルノイラミン酸、ｎ−グリコリルノイラミン酸、ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、グルコース、ラムノース、キシロース、またはたとえば、オリゴ糖または骨格系おける糖の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの糖の付加によって修飾される。
【００３５】
適当な炭水化物部分としては、単糖、オリゴ糖および多糖が挙げられ、さらには天然の糖タンパク質または生体系に存在する任意の炭水化物部分も挙げられる。たとえば、任意選択で保護されているグリコシル誘導体またはグリコシド誘導体、たとえば、任意選択で保護されているグルコシル誘導体、グルコシド誘導体、ガラクトシル誘導体またはガラクトシド誘導体がある。グリコシル基およびグリコシド基は、α基およびβ基を両方含む。適当な炭水化物部分としては、グルコース、ガラクトース、フコース、ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、シアル酸およびマンノース、ならびに少なくとも１つのグルコース、ガラクトース、フコース、ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、シアル酸および／またはマンノース残基を含むオリゴ糖または多糖が挙げられる。
【００３６】
当技術分野で知られている保護基（たとえば、Ｇｒｅｅｎｅら，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，第２版，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１を参照されたい。その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）を使用して、炭水化物部分における任意の官能基を任意選択で保護することもできる。炭水化物部分における任意の−ＯＨ基に対する適当な保護基としては、アセテート（Ａｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、シリル（たとえば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳｉ）およびｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＭＤＰＳｉ））、アセタール、ケタールおよびメトキシメチル（ＭＯＭ）が挙げられる。炭水化物部分をペプチドリンカーに結合させる前またはその後に任意の保護基を除去してもよい。
【００３７】
本発明の好ましい実施形態において、前記糖は保護されていない。
【００３８】
特に好ましい炭水化物部分としては、Ｇｌｃ（Ａｃ）４β−、Ｇｌｃ（Ｂｎ）４β−、Ｇａｌ（Ａｃ）４β−、Ｇａｌ（Ｂｎ）４β−、Ｇｌｃ（Ａｃ）４α（１，４）Ｇｌｃ（Ａｃ）３α（１，４）Ｇｌｃ（Ａｃ）４β−、β−Ｇｌｃ、β−Ｇａｌ、−Ｅｔ−β−Ｇａｌ、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ、Ｅｔ−α−Ｇｌｃ、−Ｅｔ−α−Ｍａｎ、−Ｅｔ−Ｌａｃ、−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）２、−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−α−Ｇｌｃ（Ａｃ）２、−Ｅｔ−α−Ｇｌｃ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−α−Ｇｌｃ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）２、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−α−Ｍａｎ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−α−Ｍａｎ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−β−Ｇａｌ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−β−Ｇａｌ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−Ｌａｃ（Ａｃ）５、−Ｅｔ−Ｌａｃ（Ａｃ）６、−Ｅｔ−Ｌａｃ（Ａｃ）７およびその脱保護された同等物が挙げられる。
【００３９】
好ましくは、天然の糖に由来する炭水化物部分を構成する任意の糖単位は、天然の鏡像異性体の形をとり、これは、Ｄ形（たとえば、Ｄ−グルコースまたはＤ−ガラクトース）またはＬ形（たとえば、Ｌ−ラムノースまたはＬ−フコース）のいずれであってもよい。任意のアノマー結合は、α−結合でもβ−結合でもよい。
【００４０】
本発明のさらなる代替の実施形態において、前記融合タンパク質は、ペプチド連結分子を含まず、ペプチドと受容体の結合ドメインの直接融合物である。
【００４１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、図１で表されるアミノ酸を含むまたはそれからなる。
【００４２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、表２を参照して図２で表されるＴＳＨ受容体の細胞外ドメインを含むまたはそれからなる。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１２．１ａ、１２．２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１３ａ、１３ｂまたは１３．１ｃ、１３．２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１３ａ、１３ｂまたは１３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、タンデムに連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβを含み、好ましくは前記融合タンパク質はＴＳＨαおよびＴＳＨβからなる。
【００９４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドを含む。
【００９５】
本発明の好ましい実施形態において、前記第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドはタンデムに連結されており、前記融合タンパク質は
ｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨα−ＴＳＨβまたは
ｉｖ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ
を含む。
【００９６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１００】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０４】
「調節する」という用語は、受容体の活性化および阻害の両方を包含し、たとえば、ＴＳＨ受容体活性化がある。開示されるＴＳＨ融合タンパク質は、ＴＳＨ受容体活性化が望ましい状態の治療に有用である。たとえば、甲状腺癌および多結節性甲状腺腫または甲状腺中毒症の治療において放射性ヨードを施すべき患者の前治療において有用である。これらの臨床状態ではＴＳＨが抑制されることが多く、ＴＳＨは甲状腺へのヨードの取り込みを刺激するので、放射性ヨードの取り込みが不良となる。さらに、本明細書で開示されるＴＳＨ融合タンパク質は、放射性ヨードの取り込みを増大させることになり、甲状腺に対する放射能の影響が大きくなる。ＴＳＨ融合タンパク質を使用して、下垂体機能不全の甲状腺機能低下症患者である続発性甲状腺機能低下症を治療することができる。ＴＳＨは骨代謝回転に対する同化作用を有し、したがって骨粗鬆症の治療を実現する。
【０１０５】
本発明のさらなる態様によれば、癌に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０６】
本発明のさらなる態様によれば、多結節性甲状腺腫に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０７】
本発明のさらなる態様によれば、甲状腺中毒症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０８】
本発明のさらなる態様によれば、続発性甲状腺機能低下症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０９】
本発明のさらなる態様によれば、骨粗鬆症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１１０】
本発明の一態様によれば、本発明による融合タンパク質をコードする核酸分子が提供される。
【０１１１】
本発明のさらなる態様によれば、本発明による核酸分子を含むベクターが提供される。
【０１１２】
本発明の好ましい実施形態において、前記ベクターは、本発明による核酸分子を発現するように適合された発現ベクターである。
【０１１３】
本発明による（１つまたは複数の）核酸を含むベクターは、特に、核酸を細胞中に導入して安定なトランスフェクションのためのゲノム中への組換えのためにベクターが使用される場合、プロモーターまたは他の調節配列を含む必要はない。好ましくは、ベクター中の核酸は、宿主細胞における転写に適したプロモーターまたは他の調節エレメントと作動可能に連結されている。このベクターは、複数の宿主において機能する二機能性発現ベクターであってもよい。「プロモーター」とは、転写開始部位の上流にあり、転写に必要とされる全ての調節領域を含有するヌクレオチド配列を意味する。適当なプロモーターとしては、真核細胞または原核細胞における発現用の構成的、組織特異的、誘導性、発達または他のプロモーターが挙げられる。「作動可能に連結された」とは、プロモーターから開始される転写に対して適切に位置付けられ、方向付けられた、同一核酸分子の部分として繋がっていることを意味する。プロモーターに作動可能に連結されたＤＮＡは、プロモーターの「転写開始調節下」にある。
【０１１４】
好ましい一実施形態において、プロモーターは、構成的、誘導性または調節可能プロモーターである。
【０１１５】
本発明のさらなる態様によれば、本発明による核酸分子またはベクターでトランスフェクトまたは形質転換された細胞が提供される。
【０１１６】
好ましくは、前記細胞は真核細胞である。あるいは、前記細胞は原核細胞である。
【０１１７】
本発明の好ましい実施形態において、前記細胞は、真菌細胞（たとえば、ピキア属種、サッカロミセス属種、アカパンカビ属種）、昆虫細胞（たとえば、スポドプテラ属種）、哺乳動物細胞（たとえば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞）、植物細胞からなる群から選択される。
【０１１８】
本発明のさらなる態様によれば、本発明によるポリペプチドを含み、添加剤または担体を含む医薬組成物が提供される。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態において、前記医薬組成物は、さらなる治療薬と組み合わせられる。
【０１２０】
投与される場合、本発明の医薬組成物は薬学的に許容される製剤の形で投与される。このような製剤は通常、塩、緩衝剤、保存剤、適合性担体および任意選択で他の治療薬を薬学的に許容される濃度で含有してもよい。
【０１２１】
本発明の医薬組成物は、注射を含めた任意の通常の経路によって投与することができる。投与および適用は、たとえば、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、関節内、皮下、局所（眼）、皮膚（たとえば、皮膚または粘膜へのクリーム脂溶性インサート）、経皮的または鼻腔内であってもよい。
【０１２２】
本発明の医薬組成物は、有効量で投与される。「有効量」は、単独で、またはさらなる用量もしくは相乗作用がある薬物と一緒になって、所望の応答を生じる医薬／組成物の量である。これは、疾患の進行を一時的に遅らせることだけを含み得るが、より好ましくは、これは、疾患の進行を永久に停止することも含む。これは、常法によってモニタリングすることができ、または診断方法に従ってモニタリングすることができる。
【０１２３】
対象に投与される医薬組成物の用量は、様々なパラメータに従って、特に、使用される投与方法および対象の状況（すなわち、年齢、性別）に従って選択することができる。投与される場合、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される量で薬学的に許容される組成物として適用される。医薬品に使用される場合、塩は、薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、好都合には、薬学的に許容されるその塩を調製するのに使用してもよく、本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的に、また薬学的に許容される塩としては、それだけには限定されないが、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから調製されるものが挙げられる。薬学的に許容される塩はまた、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類塩として調製することもできる。
【０１２４】
医薬組成物は、所望の場合、薬学的に許容される担体と組み合わせることもできる。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、ヒトへの投与に適した、１種または複数の適合性の固体もしくは液体充填剤、賦形剤またはカプセル化物質を意味する。「担体」という用語は、適用を容易にするために有効成分と組み合わせられる、天然または合成の有機または無機の成分を示す。医薬組成物の構成成分は、所望の薬学的有効性を実質的に損なうことになる相互作用が生じないような形で、本発明の分子と、また互いに混合することもできる。
【０１２５】
医薬組成物は、酢酸の塩、クエン酸の塩、ホウ酸の塩およびリン酸の塩を含めた、適当な緩衝剤を含有することもできる。
【０１２６】
医薬組成物は、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン、チメロサールなどの適当な保存剤を任意選択で含有することもできる。
【０１２７】
医薬組成物は、好都合には、単位剤形として提示することもでき、薬学の分野でよく知られている方法のいずれかによって調製することもできる。全ての方法は、活性剤を、１種または複数の副成分を構成する担体と結びつけるステップを含む。一般に、組成物は、活性化合物を液体担体、微粉化された固体担体、または両方と均一かつ密接に結びつけ、次いで、必要に応じて生成物を造形することによって調製される。
【０１２８】
経口投与に適した組成物は、それぞれ所定量の活性化合物を含有するカプセル剤、錠剤、ロゼンジなどの別個の単位として提示することもできる。他の組成物としては、シロップ剤、エリキシル剤または乳剤などの、水性液体または非水液体中の懸濁剤が挙げられる。
【０１２９】
非経口投与に適した組成物は、好都合には、レシピエントの血液と好ましくは等張である無菌の水性または非水性製剤を含む。この製剤は、既知の方法に従って、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して製剤化することもできる。無菌の注射用製剤は、たとえば、１，３−ブタンジオール溶液のような、非毒性の非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の無菌の注射剤または懸濁剤であってもよい。使用することができる許容される溶媒の中には、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油が溶媒または懸濁化媒体として従来使用されている。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含めた任意の無刺激性の固定油を使用することもできる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射剤の調製に使用することができる。経口、皮下、静脈内、筋肉内などの投与に適した担体製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出すことができる。
【０１３０】
本発明のさらなる態様によれば、対象において疾患または状態を治療する方法であって、有効量の本発明による融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１３１】
本発明の一態様によれば、癌に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１３２】
本明細書の説明および特許請求の範囲を通じて、「含む（comprise）」および「含有する（contain）」という語およびその語の変化形、たとえば「含むこと（comprising）」および「含む（comprises）」は、「含むが、それだけには限定されない（including but not limited to）」ことを意味し、他の部分、追加物、構成成分、完全体またはステップを除外することを意図するものではない（除外しない）。
【０１３３】
本明細書の説明および特許請求の範囲を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単数形は複数形を包含する。特に、不定冠詞が使用される場合、本明細書は、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単数だけでなく複数も企図していると理解されたい。
【０１３４】
本発明の特定の態様、実施形態または実施例と合わせて記載されている特徴、完全体、特性、化合物、化学的部分または化学的基は、それと適合しない場合を除き、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態または実施例に適用できると理解されたい。
【０１３５】
以下、本発明の実施形態をほんの一例として以下の表および図を参照して説明する。
【０１３６】
表１は、完全長ＴＳＨαのドメインおよび完全長アミノ酸配列を示す。
【０１３７】
表２は、完全長ＴＳＨ受容体のドメインおよび完全長アミノ酸配列を示す。
【０１３８】
表３は、完全長ＴＳＨβのドメインおよび完全長アミノ酸配列を示す。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】図１ａは、プロセシングされていないヒトＴＳＨβのアミノ酸配列である。図１ｂは、プロセシングされたヒトＴＳＨβのアミノ酸配列である。図１ｃは、プロセシングされていないヒトＴＳＨαのアミノ酸配列である。図１ｄは、プロセシングされたヒトＴＳＨαのアミノ酸配列である。
【図２】ヒトＴＳＨ受容体のアミノ酸配列である。
【図３】ヒトＴＳＨ受容体のスプライス変異体を示す図である。
【図４】図４ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨβ−α−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５】図５ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨα−β−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図６】図６ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨβ−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図７】図７ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨα−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図８】図８ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨβ−α融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図９】図９ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨα−β融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１０】図１０ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１１】図１１ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨα融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１２】図１２ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨα−ＴＳＨ受容体−ＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１３】図１３ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨβ−ＴＳＨ−受容体−ＴＳＨα融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５４】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５５】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５６】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５７】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５８】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図６０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図６１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図６２】ＴＳＨバイオアッセイにおいてクローニング、発現および試験された３種の構築物の概要および名称を示す図である。
【図６３】ＴＳＨ構築物を発現する細胞由来の培養物のプールをスクリーニングするための概要データを示す図である。ＥＬＩＳＡにより、全ての構築物を０．５から２μｇ／ｍｌのレベルで発現させる。
【図６４】ＴＳＨ構築物を発現する細胞由来の培養物のウエスタンブロットを示す図である。左図はＴＳＨに対するウエスタンブロットであり、右図はＴＳＨ受容体に対するウエスタンブロットである。全ての構築物は、ウエスタンブロットによって表され、バンドはおよその予測サイズである。全ての構築物から、それらはＴＳＨおよびＴＳＨ受容体の両方を有することが示される。
【図６５】バイオアッセイにおける初期スクリーニングを示す図である。全ての構築物は、ＢＳＴＲｓａを除き、陰性対照と比較して陽性の生物反応性を示す。
【図６６ａ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｂ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｃ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｄ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｅ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｆ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を示すことを示すグラフである。
【０１４０】
材料および方法
細胞系発達
異なる５’ＵＴＲを有する２つの別個の哺乳動物発現ベクター中にＴＳＨ構築物をクローニングした。各構築物をＣＨＯ細胞に３連でトランスフェクトした。ヌクレオチドを含まない培地中で細胞を「事前選択」にかけ、安定化すると、ＭＴＸの存在下でさらに選択を行った。
【０１４１】
クローンのスクリーニングおよび選択
無血清培地で実施したＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロッティングにより、個々のＣＨＯクローンをＴＳＨ構築物の発現についてスクリーニングした。ＥＬＩＳＡについては、ＴＳＨに対するポリクローナル抗体およびＴＳＨに対するモノクローナル抗体の両方によって検出を行った。ウエスタンブロッティングについては、ＴＳＨに対するポリクローナル抗体およびＴＳＨ受容体に対するポリクローナル抗体の両方を用いてタンパク質を同定した。ＴＳＨに対するポリクローナル抗体は、α鎖およびβ鎖の両方を検出するが、ＴＳＨのα鎖についてより高いシグナルが得られる。
【０１４２】
ＴＳＨバイオアッセイ
ｈＴＳＨＲおよびルシフェラーゼレポーターを安定に発現するＣＨＯ細胞系においてＴＳＨバイオアッセイを実施した。このアッセイのために、標準ＴＳＨは通常、ＢＳＡを含有するハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）で希釈される。このＴＳＨ／ＨＢＳＳ／ＢＳＡ溶液は細胞に添加されて６時間インキュベートされた後、ルシフェラーゼが測定される。ＣＨＯ細胞由来の培養物を試験するために、マトリックス干渉の可能性を調べた。そのために、ＴＳＨを０．４μｇ／ｍＬで馴化培地および非馴化培地に添加した。これにより、培地マトリックスの阻害作用は軽度であることが確認され、したがって全てのアッセイにおいて培地を陰性対照とした。試料を無希釈、およびＨＢＳＳ／ＢＳＡによる１：２、１：４希釈で試験した。
【０１４３】
ＴＳＨ構築物のＰＫおよびＰＤを測定するための方法
基本的に、２つの方法を使用してＰＫおよびＰＤを測定する。これは、甲状腺が抑制されていないラットおよびマウス内在性のＴＳＨがＴ３ペレットで抑制されているマウスにおいて行われる。ラットは徐放製剤評価に使用される。１群当り６匹のラットにＴＳＨ構築物を０．５ｍｇ／ｋｇで投与し、構築物をＰＫについてのＥＬＩＳＡによって測定する。７つの時点を使用する（０、１、２、４、６、８、２４時間）。さらに、各時点でＴ３およびＴ４をＰＤについて測定する。マウスモデルをＴＳＨの放出試験時に予め使用し、ＰＫの目的に応じて新たに改変した。マウスにＴ３ペレットを植え付けてＴ４を抑制し、４〜６日後、ＴＳＨまたはＴＳＨ構築物の１用量を１群当り１０匹のマウスに０．４ｍｇ／ｋｇで施し、Ｔ４を３つの時点（０、６、２４）で測定する。
【０１４４】
融合タンパク質の組換え産生
リガンドまたは受容体にアニーリングし、標的ベクター中にクローニングするのに適した制限部位を導入するように設計されたプライマーを使用して、ＰＣＲによって融合タンパク質の構成成分を生成した。ＰＣＲ用の鋳型は標的遺伝子を含み、ＩＭＡＧＥクローン、ｃＤＮＡライブラリーまたは特注で合成された遺伝子から得た。両端に適切な制限部位が隣接するリガンドおよび受容体の遺伝子を合成すると、これらを標的ベクター中のリンカー領域のいずれかの側にライゲートした。次いで、リンカー領域のそれぞれの側の２つの独特の制限部位の間に特注で合成したある長さのＤＮＡを挿入すること、ｓｓＤＮＡ修飾法によるリンカー領域の突然変異、適当な制限部位間へのプライマー二重鎖／多重鎖の挿入、またはＰＣＲ修飾により、この構築物を、両端に制限部位が隣接しない適切なリンカーを含有するように改変した。
【０１４５】
あるいは、最適なリガンドまたは受容体ドメインにアニーリングするように設計された、フランキング配列を有するリンカーを、オリゴヌクレオチド二重鎖を作製することにより初めに合成し、これをプロセシングして二本鎖ＤＮＡを生成した。次いで、リンカー配列を、リガンドおよび受容体の反対端に対して設計されるプライマーである「メガプライマー」として使用し、「メガプライマー」を、鋳型としてのリガンドおよび受容体に対して、またそれとアニーリングさせることによってＰＣＲを実施した。末端のプライマーを、最適な発現ベクター中へのライゲーションに適した制限部位を有するように設計した。
【０１４６】
融合タンパク質の発現および精製
適当な系（たとえば、哺乳動物ＣＨＯ細胞、大腸菌（E.coli））で発現を実施し、これは、融合遺伝子が生成されるベクターに依存していた。次いで、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥ、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡの１つまたは複数を含むことができる種々の方法を使用して発現を分析した。
【０１４７】
適当なレベルの発現が実現されると、精製およびその後の分析を行うのに十分なタンパク質を産生するために融合物をよりラージスケールで発現させた。
【０１４８】
精製は、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、硫安沈殿、ゲルろ過、サイズ排除および／またはアフィニティークロマトグラフィー（ニッケル／コバルト樹脂、抗体固定化樹脂および／またはリガンド／受容体固定化樹脂を使用）などの１つまたは複数のクロマトグラフィー操作の適当な組合せを使用して実施した。
【０１４９】
精製されたタンパク質は、ブラッドフォードアッセイ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥ、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡの１つまたは複数を含むことができる種々の方法を使用して分析した。
【０１５０】
融合物の特徴付け
変性ＰＡＧＥ、ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥゲルおよびウエスタンブロッティングを使用して融合ポリペプチドを分析し、融合物に対して非立体構造的に感受性の高い抗体を用いてウエスタンブロッティングを実施した。天然溶液状態分子量情報は、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ Ｇ２００分析カラムを使用したサイズ排除クロマトグラフィーおよび超遠心分析法などの技法によって得ることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、甲状腺刺激ホルモン［ＴＳＨ］融合タンパク質、前記融合タンパク質を含む二量体、および前記融合タンパク質の投与が有効であろう疾患を治療するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物学的過程を調節する働きがある生物活性ポリペプチドの例は多い。たとえば、視床下部からの甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）は、甲状腺からの甲状腺ホルモンの放出を刺激する、下垂体からの甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）の放出を調節する。ＴＳＨがＴＳＨ受容体のＧＰＣＲに結合することにより、甲状腺へのヨード取り込み、甲状腺の成長および甲状腺ホルモンのチロキシンおよびトリヨードチロニンの放出が増大する。下垂体機能低下症によるＴＳＨの不足は甲状腺機能低下症を引き起こし、ＴＳＨを分泌する下垂体腫瘍からの過剰なＴＳＨは甲状腺機能亢進症を引き起こす。甲状腺機能亢進症または甲状腺中毒症は、自己抗体がＴＳＨ受容体を刺激するグレーブス病によって引き起こされる可能性がある。甲状腺中毒症の別の共通の原因は、甲状腺が自律性になり、過剰の甲状腺ホルモンを分泌し、その結果としてＴＳＨレベルを抑制する多結節性甲状腺腫である。これは、単一の中毒性甲状腺結節による甲状腺中毒症の患者にも起こる。下垂体腫瘍から過剰のＴＳＨが分泌されるＴＳＨｏｍａによる甲状腺中毒症はまれである。こうした腫瘍は治療が困難であり、患者が罹る甲状腺中毒症は制御されない可能性がある。甲状腺機能低下症は、甲状腺の機能不全が原因であることが最も一般的であり、これは原発性甲状腺機能低下症であり、ＴＳＨレベルが高い。一般的ではないが、甲状腺機能低下症は下垂体からのＴＳＨ欠乏にも関連付けられ、これは続発性甲状腺機能低下症である。
【０００３】
甲状腺癌は全ての年齢層で生じる。その一次治療は甲状腺を完全に切除する手術であるが、ほとんどの場合手術後に小さな甲状腺残遺物が残存する。通常の慣行は、甲状腺残遺物を放射性ヨードによって破壊することである。正常な甲状腺組織および一部の甲状腺癌が放射性ヨードを高度に取り込むことにより、その組織が破壊される。甲状腺残遺物が破壊された後は、放射性ヨードを使用して患者をその甲状腺癌の再発についてスクリーニングすることができる。患者が放射性ヨードを取り込む甲状腺癌に罹患している場合は、放射性ヨードを、癌を治療するための療法として使用することができる。
【０００４】
甲状腺によるヨードならびにテクネチウムなどの他の同位元素の取り込みは、甲状腺へのそれらの取り込みを刺激するＴＳＨ活性の存在に依存する。したがって、ＴＳＨレベルが抑制されている状況は、ヨードまたは関連分子の同位体の取り込みを刺激する上で問題がある。これは、甲状腺中毒性、たとえば、多結節性甲状腺腫の患者および甲状腺癌の外科治療の後に甲状腺ホルモン補充を受けた患者に起こる。ＴＳＨは甲状腺癌再増殖を刺激する可能性があり、したがって、甲状腺癌の甲状腺摘除を受けた患者には甲状腺ホルモンＴ４またはＴ３のいずれかが抑制用量で施されると一般に考えられている。こうした抑制用量ではＴＳＨが抑制され、ヨードまたはテクネチウムまたは任意の同位元素による甲状腺のスキャニングを試みることが不可能である。組換えＴＳＨが利用可能になる以前は、患者は、ＴＳＨレベルを上昇させるために甲状腺補充を止めなければならず、結果として明らかにかつ症候的に甲状腺機能が低下した後にスキャニングを行った。これは不快であり、予測不可能であり、かつ時間がかかるものであった。現在、患者はヨードおよび関連分子の甲状腺への取り込みを増大させる組換えＴＳＨで治療されるので、組換えＴＳＨを用いると患者は、ヨードスキャニングの際に甲状腺ホルモン治療を維持することができる。この組換えＴＳＨ治療の手法を使用して、甲状腺残遺物、甲状腺癌および多結節性甲状腺腫またはヨードもしくは関連化合物を取り込む任意の腫瘍もしくは癌へのヨードまたは関連分子の取り込みを増大させることができる。現行の組換えＴＳＨは、半減期が比較的短く、したがって、ヨード治療前の別々の日に少なくとも２回に分けることが必要とされる。甲状腺、甲状腺癌または他の癌への放射性ヨード同位元素または他の同位元素の取り込みを増大させるなら、長時間作用性のＴＳＨが有利となろう。
【０００５】
ＴＳＨアゴニストを使用して、分子のヨード、放射性ヨード、テクネチウムおよび他の同位元素の甲状腺への取り込みを増大させることができる。これは、甲状腺ホルモンＴ４および／またはＴ３を摂取している患者など、ＴＳＨレベルが抑制されている、もしくはさらには上昇していない、または患者が単一の中毒性甲状腺結節もしくは多結節性甲状腺腫による甲状腺中毒症に罹患している任意の状況で価値がある。グレーブス病では、患者は一般にＴＳＨ刺激抗体を有するが、放射性ヨード療法時のＴＳＨによる一時的な治療がヨード甲状腺への取り込みを選択的に増強し、治療の有効性を改善することが可能となり得る。
【０００６】
ＴＳＨレベルが低い続発性甲状腺機能低下症の治療にＴＳＨアゴニストの別の用途があると考えられる。こうした患者は通常、チロキシン療法を毎日受ける。ＴＳＨアゴニストは、甲状腺ホルモンレベルを正常な範囲に維持することができれば、潜在的に可能な療法となる可能性がある。現在大部分の患者にトリヨードチロニン（Ｔ３）のプロドラッグであるチロキシン（Ｔ４）しか施さないので、この療法の利点は、甲状腺ホルモンをより高い生理的レベルに維持できることであった。ＴＳＨ治療は、甲状腺由来のＴ４とＴ３の生理学的比を刺激するという利点を有すると考えられ、甲状腺は一般に、血中のＴ３の２０％、Ｔ４の１００％に関与する。ＴＳＨはそれ自体、骨などの他の組織の完全性を維持する上でも重要である可能性があり、これはＴＳＨ療法の利点であり得るという証拠がいくつかある。甲状腺機能低下症の患者の最大５０％は健康関連ＱＯＬが低く、潜在的にＴＳＨ療法は適切な場合には有益である可能性がある。
【０００７】
ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、ＴＳＨレベルが上昇し、甲状腺中毒症を引き起こしている状況、またはＴＳＨ受容体がグレーブス病におけるＴＳＨ受容体活性化抗体などの他の分子によって活性化されている状況で使用することができよう。ＴＳＨレベルが高いことによる甲状腺中毒症は、まれであるが治療が困難であり、下垂体のＴＳＨｏｍａが原因である。ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、ＴＳＨが過剰である、またはＴＳＨ受容体が活性化した患者の甲状腺を制御する価値がある可能性がある。グレーブス病では、通常の手法は、カルビマゾール、プロピチオウラシルなどの薬物を使用して甲状腺からの甲状腺ホルモンの放出を遮断することである。ＴＳＨ受容体アンタゴニストを使用して、ＴＳＨ受容体抗体を直接的に阻止し、ＴＳＨ受容体を活性化することによりグレーブス病を治療することができよう。これは、患者の５０％に起こるグレーブス病の再発を低減するという追加の利点を有し得る。グレーブス病において抗原の曝露を低減することができ、その抗原がＴＳＨ受容体であると考えられる場合、グレーブス病の再発を低減する可能性があると考えられている。グレーブス病の合併症としては、眼球突出および眼への損傷を伴うグレーブス眼症、脛骨前粘液水腫、骨減少症および骨粗鬆症、ミオパシー、心筋症、心房細動、ならびに認知症が挙げられる。これらの全部ではないが一部が、眼窩内脂肪、眼の筋肉などの他の組織におけるＴＳＨ受容体の発現に関連付けられる可能性がある。グレーブス病の合併症の状況では、ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、グレーブス病の合併症、具体的には甲状腺眼症を予防または低減することができよう。子宮内の胎児または新生児は、その母親がグレーブス病であり、またはグレーブス病の治療を受けている場合、新生児甲状腺中毒症のリスクがあるおそれがある。グレーブス病の抗体は、胎盤と交差反応し、胎児または幼児において甲状腺中毒症を引き起こすことがある。ＴＳＨ受容体アンタゴニストは、新生児甲状腺中毒症に対する治療法となることができよう。
【０００８】
治療用ペプチドおよび治療用ポリペプチドに関係する問題は、ペプチド／プロイペプチド作用物質を投与した対象は、この分子を場合によって短時間で取り除くことである。これは、タンパク質分解および腎臓ろ過が一部の原因である。多くの場合、これには、ペプチド作用物質と、投与後のペプチドの放出を調節する第２の作用物質との複合製剤を提供することによって対処する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本開示は、薬学的に有効な量のポリペプチドが低減する、タンパク質分解性切断、腎臓ろ過または任意の他の手段による損失を低減することにより、ポリペプチド治療薬の全身レベルを維持することに関する問題を解決するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の一態様によれば、ＴＳＨ受容体の結合ドメインに直接的または間接的に場合によって連結されている甲状腺刺激ホルモンα［ＴＳＨα］および／または甲状腺刺激ホルモンβ［ＴＳＨβ］を含む融合タンパク質が提供される。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質はアゴニストである。
【００１２】
本発明の代替の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質はアンタゴニストである。
【００１３】
本発明の好ましい実施形態において、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβは前記融合タンパク質中の前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記受容体の結合ドメインのアミノ末端に位置している。
【００１４】
本発明の代替の好ましい実施形態において、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβは前記融合タンパク質中の前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記結合ドメインのカルボキシル末端に位置している。
【００１５】
本発明の好ましい実施形態において、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβは、ペプチドリンカー、好ましくは柔軟性ペプチドリンカーによって受容体の結合ドメインに連結している。
【００１６】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチド連結分子は、ペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの少なくとも１コピーを含む。
【００１７】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチド連結分子は、ペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの１〜１０コピーを含む。
【００１８】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチド連結分子は、ペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの２、３、４、５、６、７、８、９および１０コピーを含む。好ましくは、前記ペプチド連結分子は４または７コピーを含む。
【００１９】
本発明の代替の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーは、非柔軟性ヘリックス領域を含む。
【００２０】
本発明の一実施形態において、ペプチドリンカー分子のアミノ末端またはその付近に、柔軟性非ヘリックス領域が位置しており、それによりペプチドリンカー分子のアミノ末端に位置しているＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβを前記ＴＳＨ受容体の結合ドメインに対して方向付けることが可能となる。
【００２１】
本発明の代替の実施形態において、ペプチドリンカー分子のカルボキシル末端またはその付近に、柔軟性非ヘリックス領域が位置しており、それによりペプチドリンカー分子のカルボキシル末端に位置しているＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβを前記ＴＳＨ受容体の結合ドメインに対して方向付けることが可能となる。
【００２２】
本発明のさらなる実施形態において、柔軟性非ヘリックス領域は、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβとＴＳＨ受容体の結合ドメインを連結する、ペプチドリンカー分子のアミノ末端およびカルボキシル末端またはその付近に位置している。
【００２３】
本発明の好ましい実施形態において、非柔軟性ヘリックス領域は、モチーフＡ（ＥＡＡＡＫ）ｘＡの少なくとも１コピーを含む。
【００２４】
非柔軟性非ヘリックス領域の長さは、このＡ（ＥＡＡＡＫ）ｘＡモチーフの反復の数を増加させることによって延長可能である。
【００２５】
本発明の好ましい実施形態において、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｘＡモチーフ中のｘは、５コピー未満である。さらにより好ましくは、ｘは、１、２、３、４または５コピーから選択される。
【００２６】
本発明の好ましい実施形態において、前記リンカーは、前記ペプチド結合ドメインと前記受容体の結合ドメインの間にある非柔軟性αヘリックスリンカーからなる。
【００２７】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカー分子は、少なくとも１つの糖部分を付加するための少なくとも１つのモチーフを含むように修飾されている。
【００２８】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカー分子は、モチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフは、グリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含む。
【００２９】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーは、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｓｅｒ３Ｘａａ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｘａａ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｓｅｒ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｘａａ１Ｘａａ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｔｈｒ３Ｘａａ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｘａａ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｔｈｒ４Ｘａａ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）および
Ｘａａ１Ｘａａ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｔｈｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）
からなる群から選択されるアミノ酸モチーフの少なくとも１コピーを含む。
【００３０】
好ましくは、前記ペプチドリンカーは、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｓｅｒ３Ｇｌｙ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｇｌｙ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｓｅｒ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｇｌｙ１Ｇｌｙ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｔｈｒ３Ｇｌｙ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｇｌｙ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｔｈｒ４Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）および
Ｇｌｙ１Ｇｌｙ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｔｈｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）
からなる群から選択されるモチーフの少なくとも１コピーを含む。
【００３１】
本発明の代替の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーは、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｓｅｒ３Ｓｅｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｓｅｒ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｓｅｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｓｅｒ１Ｓｅｒ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｓｅｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ａｓｎ１−Ｘａａ２−Ｔｈｒ３Ｓｅｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ２は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）、
Ｓｅｒ１Ａｓｎ２−Ｘａａ３−Ｔｈｒ４Ｇｌｙ５（式中、Ｘａａ３は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）および
Ｓｅｒ１Ｓｅｒ２Ａｓｎ３−Ｘａａ４−Ｔｈｒ５（式中、Ｘａａ４は、プロリンを除く任意のアミノ酸である。）
からなる群から選択されるモチーフの少なくとも１コピーを含む。
【００３２】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカー分子はモチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフはグリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含み、また前記ペプチドリンカー分子はモチーフ（ＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒ）の少なくとも１コピーを含み、前記ペプチドリンカーは５〜５０アミノ酸である。
【００３３】
本発明の好ましい実施形態において、前記ペプチドリンカーはモチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフはグリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含み、また前記ペプチドリンカー分子はモチーフ（ＳｅｒＳｅｒＳｅｒＳｅｒＧｌｙ）の１コピーを含み、前記ペプチドリンカーは５〜５０アミノ酸である。
【００３４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合ポリペプチドリンカーは、マンノース、ガラクトース、ｎ−アセチルグルコサミン、ｎ−アセチルノイラミン酸、ｎ−グリコリルノイラミン酸、ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、グルコース、ラムノース、キシロース、またはたとえば、オリゴ糖または骨格系おける糖の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの糖の付加によって修飾される。
【００３５】
適当な炭水化物部分としては、単糖、オリゴ糖および多糖が挙げられ、さらには天然の糖タンパク質または生体系に存在する任意の炭水化物部分も挙げられる。たとえば、任意選択で保護されているグリコシル誘導体またはグリコシド誘導体、たとえば、任意選択で保護されているグルコシル誘導体、グルコシド誘導体、ガラクトシル誘導体またはガラクトシド誘導体がある。グリコシル基およびグリコシド基は、α基およびβ基を両方含む。適当な炭水化物部分としては、グルコース、ガラクトース、フコース、ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、シアル酸およびマンノース、ならびに少なくとも１つのグルコース、ガラクトース、フコース、ＧｌｃＮＡｃ、ＧａｌＮＡｃ、シアル酸および／またはマンノース残基を含むオリゴ糖または多糖が挙げられる。
【００３６】
当技術分野で知られている保護基（たとえば、Ｇｒｅｅｎｅら，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，第２版，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１を参照されたい。その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。）を使用して、炭水化物部分における任意の官能基を任意選択で保護することもできる。炭水化物部分における任意の−ＯＨ基に対する適当な保護基としては、アセテート（Ａｃ）、ベンジル（Ｂｎ）、シリル（たとえば、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳｉ）およびｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＭＤＰＳｉ））、アセタール、ケタールおよびメトキシメチル（ＭＯＭ）が挙げられる。炭水化物部分をペプチドリンカーに結合させる前またはその後に任意の保護基を除去してもよい。
【００３７】
本発明の好ましい実施形態において、前記糖は保護されていない。
【００３８】
特に好ましい炭水化物部分としては、Ｇｌｃ（Ａｃ）４β−、Ｇｌｃ（Ｂｎ）４β−、Ｇａｌ（Ａｃ）４β−、Ｇａｌ（Ｂｎ）４β−、Ｇｌｃ（Ａｃ）４α（１，４）Ｇｌｃ（Ａｃ）３α（１，４）Ｇｌｃ（Ａｃ）４β−、β−Ｇｌｃ、β−Ｇａｌ、−Ｅｔ−β−Ｇａｌ、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ、Ｅｔ−α−Ｇｌｃ、−Ｅｔ−α−Ｍａｎ、−Ｅｔ−Ｌａｃ、−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）２、−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−α−Ｇｌｃ（Ａｃ）２、−Ｅｔ−α−Ｇｌｃ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−α−Ｇｌｃ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）２、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−β−Ｇｌｃ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−α−Ｍａｎ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−α−Ｍａｎ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−β−Ｇａｌ（Ａｃ）３、−Ｅｔ−β−Ｇａｌ（Ａｃ）４、−Ｅｔ−Ｌａｃ（Ａｃ）５、−Ｅｔ−Ｌａｃ（Ａｃ）６、−Ｅｔ−Ｌａｃ（Ａｃ）７およびその脱保護された同等物が挙げられる。
【００３９】
好ましくは、天然の糖に由来する炭水化物部分を構成する任意の糖単位は、天然の鏡像異性体の形をとり、これは、Ｄ形（たとえば、Ｄ−グルコースまたはＤ−ガラクトース）またはＬ形（たとえば、Ｌ−ラムノースまたはＬ−フコース）のいずれであってもよい。任意のアノマー結合は、α−結合でもβ−結合でもよい。
【００４０】
本発明のさらなる代替の実施形態において、前記融合タンパク質は、ペプチド連結分子を含まず、ペプチドと受容体の結合ドメインの直接融合物である。
【００４１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、図１で表されるアミノ酸を含むまたはそれからなる。
【００４２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、表２を参照して図２で表されるＴＳＨ受容体の細胞外ドメインを含むまたはそれからなる。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００４９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１２．１ａ、１２．２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１３ａ、１３ｂまたは１３．１ｃ、１３．２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１３ａ、１３ｂまたは１３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００５９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００６９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００７９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８５】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００８９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９０】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、タンデムに連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβを含み、好ましくは前記融合タンパク質はＴＳＨαおよびＴＳＨβからなる。
【００９４】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドを含む。
【００９５】
本発明の好ましい実施形態において、前記第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドはタンデムに連結されており、前記融合タンパク質は
ｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨα−ＴＳＨβまたは
ｉｖ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ
を含む。
【００９６】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９７】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９８】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【００９９】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１００】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０１】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０３】
本発明の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、
ｉ）図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される。
【０１０４】
「調節する」という用語は、受容体の活性化および阻害の両方を包含し、たとえば、ＴＳＨ受容体活性化がある。開示されるＴＳＨ融合タンパク質は、ＴＳＨ受容体活性化が望ましい状態の治療に有用である。たとえば、甲状腺癌および多結節性甲状腺腫または甲状腺中毒症の治療において放射性ヨードを施すべき患者の前治療において有用である。これらの臨床状態ではＴＳＨが抑制されることが多く、ＴＳＨは甲状腺へのヨードの取り込みを刺激するので、放射性ヨードの取り込みが不良となる。さらに、本明細書で開示されるＴＳＨ融合タンパク質は、放射性ヨードの取り込みを増大させることになり、甲状腺に対する放射能の影響が大きくなる。ＴＳＨ融合タンパク質を使用して、下垂体機能不全の甲状腺機能低下症患者である続発性甲状腺機能低下症を治療することができる。ＴＳＨは骨代謝回転に対する同化作用を有し、したがって骨粗鬆症の治療を実現する。
【０１０５】
本発明のさらなる態様によれば、癌に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０６】
本発明のさらなる態様によれば、多結節性甲状腺腫に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０７】
本発明のさらなる態様によれば、甲状腺中毒症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０８】
本発明のさらなる態様によれば、続発性甲状腺機能低下症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１０９】
本発明のさらなる態様によれば、骨粗鬆症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１１０】
本発明の一態様によれば、本発明による融合タンパク質をコードする核酸分子が提供される。
【０１１１】
本発明のさらなる態様によれば、本発明による核酸分子を含むベクターが提供される。
【０１１２】
本発明の好ましい実施形態において、前記ベクターは、本発明による核酸分子を発現するように適合された発現ベクターである。
【０１１３】
本発明による（１つまたは複数の）核酸を含むベクターは、特に、核酸を細胞中に導入して安定なトランスフェクションのためのゲノム中への組換えのためにベクターが使用される場合、プロモーターまたは他の調節配列を含む必要はない。好ましくは、ベクター中の核酸は、宿主細胞における転写に適したプロモーターまたは他の調節エレメントと作動可能に連結されている。このベクターは、複数の宿主において機能する二機能性発現ベクターであってもよい。「プロモーター」とは、転写開始部位の上流にあり、転写に必要とされる全ての調節領域を含有するヌクレオチド配列を意味する。適当なプロモーターとしては、真核細胞または原核細胞における発現用の構成的、組織特異的、誘導性、発達または他のプロモーターが挙げられる。「作動可能に連結された」とは、プロモーターから開始される転写に対して適切に位置付けられ、方向付けられた、同一核酸分子の部分として繋がっていることを意味する。プロモーターに作動可能に連結されたＤＮＡは、プロモーターの「転写開始調節下」にある。
【０１１４】
好ましい一実施形態において、プロモーターは、構成的、誘導性または調節可能プロモーターである。
【０１１５】
本発明のさらなる態様によれば、本発明による核酸分子またはベクターでトランスフェクトまたは形質転換された細胞が提供される。
【０１１６】
好ましくは、前記細胞は真核細胞である。あるいは、前記細胞は原核細胞である。
【０１１７】
本発明の好ましい実施形態において、前記細胞は、真菌細胞（たとえば、ピキア属種、サッカロミセス属種、アカパンカビ属種）、昆虫細胞（たとえば、スポドプテラ属種）、哺乳動物細胞（たとえば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞）、植物細胞からなる群から選択される。
【０１１８】
本発明のさらなる態様によれば、本発明によるポリペプチドを含み、添加剤または担体を含む医薬組成物が提供される。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態において、前記医薬組成物は、さらなる治療薬と組み合わせられる。
【０１２０】
投与される場合、本発明の医薬組成物は薬学的に許容される製剤の形で投与される。このような製剤は通常、塩、緩衝剤、保存剤、適合性担体および任意選択で他の治療薬を薬学的に許容される濃度で含有してもよい。
【０１２１】
本発明の医薬組成物は、注射を含めた任意の通常の経路によって投与することができる。投与および適用は、たとえば、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、腔内、関節内、皮下、局所（眼）、皮膚（たとえば、皮膚または粘膜へのクリーム脂溶性インサート）、経皮的または鼻腔内であってもよい。
【０１２２】
本発明の医薬組成物は、有効量で投与される。「有効量」は、単独で、またはさらなる用量もしくは相乗作用がある薬物と一緒になって、所望の応答を生じる医薬／組成物の量である。これは、疾患の進行を一時的に遅らせることだけを含み得るが、より好ましくは、これは、疾患の進行を永久に停止することも含む。これは、常法によってモニタリングすることができ、または診断方法に従ってモニタリングすることができる。
【０１２３】
対象に投与される医薬組成物の用量は、様々なパラメータに従って、特に、使用される投与方法および対象の状況（すなわち、年齢、性別）に従って選択することができる。投与される場合、本発明の医薬組成物は、薬学的に許容される量で薬学的に許容される組成物として適用される。医薬品に使用される場合、塩は、薬学的に許容されるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、好都合には、薬学的に許容されるその塩を調製するのに使用してもよく、本発明の範囲から除外されない。このような薬理学的に、また薬学的に許容される塩としては、それだけには限定されないが、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸などから調製されるものが挙げられる。薬学的に許容される塩はまた、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類塩として調製することもできる。
【０１２４】
医薬組成物は、所望の場合、薬学的に許容される担体と組み合わせることもできる。本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、ヒトへの投与に適した、１種または複数の適合性の固体もしくは液体充填剤、賦形剤またはカプセル化物質を意味する。「担体」という用語は、適用を容易にするために有効成分と組み合わせられる、天然または合成の有機または無機の成分を示す。医薬組成物の構成成分は、所望の薬学的有効性を実質的に損なうことになる相互作用が生じないような形で、本発明の分子と、また互いに混合することもできる。
【０１２５】
医薬組成物は、酢酸の塩、クエン酸の塩、ホウ酸の塩およびリン酸の塩を含めた、適当な緩衝剤を含有することもできる。
【０１２６】
医薬組成物は、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベン、チメロサールなどの適当な保存剤を任意選択で含有することもできる。
【０１２７】
医薬組成物は、好都合には、単位剤形として提示することもでき、薬学の分野でよく知られている方法のいずれかによって調製することもできる。全ての方法は、活性剤を、１種または複数の副成分を構成する担体と結びつけるステップを含む。一般に、組成物は、活性化合物を液体担体、微粉化された固体担体、または両方と均一かつ密接に結びつけ、次いで、必要に応じて生成物を造形することによって調製される。
【０１２８】
経口投与に適した組成物は、それぞれ所定量の活性化合物を含有するカプセル剤、錠剤、ロゼンジなどの別個の単位として提示することもできる。他の組成物としては、シロップ剤、エリキシル剤または乳剤などの、水性液体または非水液体中の懸濁剤が挙げられる。
【０１２９】
非経口投与に適した組成物は、好都合には、レシピエントの血液と好ましくは等張である無菌の水性または非水性製剤を含む。この製剤は、既知の方法に従って、適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して製剤化することもできる。無菌の注射用製剤は、たとえば、１，３−ブタンジオール溶液のような、非毒性の非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の無菌の注射剤または懸濁剤であってもよい。使用することができる許容される溶媒の中には、水、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、無菌の固定油が溶媒または懸濁化媒体として従来使用されている。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含めた任意の無刺激性の固定油を使用することもできる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸も注射剤の調製に使用することができる。経口、皮下、静脈内、筋肉内などの投与に適した担体製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡに見出すことができる。
【０１３０】
本発明のさらなる態様によれば、対象において疾患または状態を治療する方法であって、有効量の本発明による融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１３１】
本発明の一態様によれば、癌に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の本発明によるＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法が提供される。
【０１３２】
本明細書の説明および特許請求の範囲を通じて、「含む（comprise）」および「含有する（contain）」という語およびその語の変化形、たとえば「含むこと（comprising）」および「含む（comprises）」は、「含むが、それだけには限定されない（including but not limited to）」ことを意味し、他の部分、追加物、構成成分、完全体またはステップを除外することを意図するものではない（除外しない）。
【０１３３】
本明細書の説明および特許請求の範囲を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単数形は複数形を包含する。特に、不定冠詞が使用される場合、本明細書は、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、単数だけでなく複数も企図していると理解されたい。
【０１３４】
本発明の特定の態様、実施形態または実施例と合わせて記載されている特徴、完全体、特性、化合物、化学的部分または化学的基は、それと適合しない場合を除き、本明細書に記載の任意の他の態様、実施形態または実施例に適用できると理解されたい。
【０１３５】
以下、本発明の実施形態をほんの一例として以下の表および図を参照して説明する。
【０１３６】
表１は、完全長ＴＳＨαのドメインおよび完全長アミノ酸配列を示す。
【０１３７】
表２は、完全長ＴＳＨ受容体のドメインおよび完全長アミノ酸配列を示す。
【０１３８】
表３は、完全長ＴＳＨβのドメインおよび完全長アミノ酸配列を示す。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】図１ａは、プロセシングされていないヒトＴＳＨβのアミノ酸配列である。図１ｂは、プロセシングされたヒトＴＳＨβのアミノ酸配列である。図１ｃは、プロセシングされていないヒトＴＳＨαのアミノ酸配列である。図１ｄは、プロセシングされたヒトＴＳＨαのアミノ酸配列である。
【図２】ヒトＴＳＨ受容体のアミノ酸配列である。
【図３】ヒトＴＳＨ受容体のスプライス変異体を示す図である。
【図４】図４ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨβ−α−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５】図５ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨα−β−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図６】図６ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨβ−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図７】図７ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨα−ＴＳＨ受容体融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図８】図８ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨβ−α融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図９】図９ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨα−β融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１０】図１０ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１１】図１１ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨ受容体−ＴＳＨα融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１２】図１２ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨα−ＴＳＨ受容体−ＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１３】図１３ａ〜ｃは、ヒトＴＳＨβ−ＴＳＨ−受容体−ＴＳＨα融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図１９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図２９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図３９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４４】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４５】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４６】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４７】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４８】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図４９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５２】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５３】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβ融合タンパク質のアミノ酸配列である。
【図５４】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５５】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５６】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５７】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５８】ＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図５９】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図６０】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図６１】グリコシル化モチーフを含むペプチドリンカーを介して連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβタンデム融合ポリペプチドのアミノ酸配列である。
【図６２】ＴＳＨバイオアッセイにおいてクローニング、発現および試験された３種の構築物の概要および名称を示す図である。
【図６３】ＴＳＨ構築物を発現する細胞由来の培養物のプールをスクリーニングするための概要データを示す図である。ＥＬＩＳＡにより、全ての構築物を０．５から２μｇ／ｍｌのレベルで発現させる。
【図６４】ＴＳＨ構築物を発現する細胞由来の培養物のウエスタンブロットを示す図である。左図はＴＳＨに対するウエスタンブロットであり、右図はＴＳＨ受容体に対するウエスタンブロットである。全ての構築物は、ウエスタンブロットによって表され、バンドはおよその予測サイズである。全ての構築物から、それらはＴＳＨおよびＴＳＨ受容体の両方を有することが示される。
【図６５】バイオアッセイにおける初期スクリーニングを示す図である。全ての構築物は、ＢＳＴＲｓａを除き、陰性対照と比較して陽性の生物反応性を示す。
【図６６ａ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｂ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｃ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｄ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｅ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を呈することを示すグラフである。
【図６６ｆ】バイオアッセイにおいて全ての構築物が生物活性を示すことを示すグラフである。
【０１４０】
材料および方法
細胞系発達
異なる５’ＵＴＲを有する２つの別個の哺乳動物発現ベクター中にＴＳＨ構築物をクローニングした。各構築物をＣＨＯ細胞に３連でトランスフェクトした。ヌクレオチドを含まない培地中で細胞を「事前選択」にかけ、安定化すると、ＭＴＸの存在下でさらに選択を行った。
【０１４１】
クローンのスクリーニングおよび選択
無血清培地で実施したＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロッティングにより、個々のＣＨＯクローンをＴＳＨ構築物の発現についてスクリーニングした。ＥＬＩＳＡについては、ＴＳＨに対するポリクローナル抗体およびＴＳＨに対するモノクローナル抗体の両方によって検出を行った。ウエスタンブロッティングについては、ＴＳＨに対するポリクローナル抗体およびＴＳＨ受容体に対するポリクローナル抗体の両方を用いてタンパク質を同定した。ＴＳＨに対するポリクローナル抗体は、α鎖およびβ鎖の両方を検出するが、ＴＳＨのα鎖についてより高いシグナルが得られる。
【０１４２】
ＴＳＨバイオアッセイ
ｈＴＳＨＲおよびルシフェラーゼレポーターを安定に発現するＣＨＯ細胞系においてＴＳＨバイオアッセイを実施した。このアッセイのために、標準ＴＳＨは通常、ＢＳＡを含有するハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）で希釈される。このＴＳＨ／ＨＢＳＳ／ＢＳＡ溶液は細胞に添加されて６時間インキュベートされた後、ルシフェラーゼが測定される。ＣＨＯ細胞由来の培養物を試験するために、マトリックス干渉の可能性を調べた。そのために、ＴＳＨを０．４μｇ／ｍＬで馴化培地および非馴化培地に添加した。これにより、培地マトリックスの阻害作用は軽度であることが確認され、したがって全てのアッセイにおいて培地を陰性対照とした。試料を無希釈、およびＨＢＳＳ／ＢＳＡによる１：２、１：４希釈で試験した。
【０１４３】
ＴＳＨ構築物のＰＫおよびＰＤを測定するための方法
基本的に、２つの方法を使用してＰＫおよびＰＤを測定する。これは、甲状腺が抑制されていないラットおよびマウス内在性のＴＳＨがＴ３ペレットで抑制されているマウスにおいて行われる。ラットは徐放製剤評価に使用される。１群当り６匹のラットにＴＳＨ構築物を０．５ｍｇ／ｋｇで投与し、構築物をＰＫについてのＥＬＩＳＡによって測定する。７つの時点を使用する（０、１、２、４、６、８、２４時間）。さらに、各時点でＴ３およびＴ４をＰＤについて測定する。マウスモデルをＴＳＨの放出試験時に予め使用し、ＰＫの目的に応じて新たに改変した。マウスにＴ３ペレットを植え付けてＴ４を抑制し、４〜６日後、ＴＳＨまたはＴＳＨ構築物の１用量を１群当り１０匹のマウスに０．４ｍｇ／ｋｇで施し、Ｔ４を３つの時点（０、６、２４）で測定する。
【０１４４】
融合タンパク質の組換え産生
リガンドまたは受容体にアニーリングし、標的ベクター中にクローニングするのに適した制限部位を導入するように設計されたプライマーを使用して、ＰＣＲによって融合タンパク質の構成成分を生成した。ＰＣＲ用の鋳型は標的遺伝子を含み、ＩＭＡＧＥクローン、ｃＤＮＡライブラリーまたは特注で合成された遺伝子から得た。両端に適切な制限部位が隣接するリガンドおよび受容体の遺伝子を合成すると、これらを標的ベクター中のリンカー領域のいずれかの側にライゲートした。次いで、リンカー領域のそれぞれの側の２つの独特の制限部位の間に特注で合成したある長さのＤＮＡを挿入すること、ｓｓＤＮＡ修飾法によるリンカー領域の突然変異、適当な制限部位間へのプライマー二重鎖／多重鎖の挿入、またはＰＣＲ修飾により、この構築物を、両端に制限部位が隣接しない適切なリンカーを含有するように改変した。
【０１４５】
あるいは、最適なリガンドまたは受容体ドメインにアニーリングするように設計された、フランキング配列を有するリンカーを、オリゴヌクレオチド二重鎖を作製することにより初めに合成し、これをプロセシングして二本鎖ＤＮＡを生成した。次いで、リンカー配列を、リガンドおよび受容体の反対端に対して設計されるプライマーである「メガプライマー」として使用し、「メガプライマー」を、鋳型としてのリガンドおよび受容体に対して、またそれとアニーリングさせることによってＰＣＲを実施した。末端のプライマーを、最適な発現ベクター中へのライゲーションに適した制限部位を有するように設計した。
【０１４６】
融合タンパク質の発現および精製
適当な系（たとえば、哺乳動物ＣＨＯ細胞、大腸菌（E.coli））で発現を実施し、これは、融合遺伝子が生成されるベクターに依存していた。次いで、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥ、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡの１つまたは複数を含むことができる種々の方法を使用して発現を分析した。
【０１４７】
適当なレベルの発現が実現されると、精製およびその後の分析を行うのに十分なタンパク質を産生するために融合物をよりラージスケールで発現させた。
【０１４８】
精製は、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、硫安沈殿、ゲルろ過、サイズ排除および／またはアフィニティークロマトグラフィー（ニッケル／コバルト樹脂、抗体固定化樹脂および／またはリガンド／受容体固定化樹脂を使用）などの１つまたは複数のクロマトグラフィー操作の適当な組合せを使用して実施した。
【０１４９】
精製されたタンパク質は、ブラッドフォードアッセイ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、Ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥ、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡの１つまたは複数を含むことができる種々の方法を使用して分析した。
【０１５０】
融合物の特徴付け
変性ＰＡＧＥ、ｎａｔｉｖｅ ＰＡＧＥゲルおよびウエスタンブロッティングを使用して融合ポリペプチドを分析し、融合物に対して非立体構造的に感受性の高い抗体を用いてウエスタンブロッティングを実施した。天然溶液状態分子量情報は、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ Ｇ２００分析カラムを使用したサイズ排除クロマトグラフィーおよび超遠心分析法などの技法によって得ることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＳＨ受容体の結合ドメインに直接的または間接的に場合によって連結している甲状腺刺激ホルモンα［ＴＳＨα］および／または甲状腺刺激ホルモンβ［ＴＳＨβ］を含む融合タンパク質。
【請求項２】
ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβが前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記融合タンパク質中の前記受容体の結合ドメインのアミノ末端に位置する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβが前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記融合タンパク質中の前記結合ドメインのカルボキシル末端に位置する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβがペプチドリンカーによって受容体の結合ドメインに連結している、請求項１から３のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項５】
前記ペプチド連結分子がペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの少なくとも１コピーを含む、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
発明前記ペプチド連結分子がペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの１〜１０コピーを含む、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
前記ペプチドリンカー分子が、少なくとも１つの糖部分を付加するための少なくとも１つのモチーフを含むように修飾されている、請求項１から６のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項８】
前記ペプチドリンカー分子がモチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフがグリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含む、請求項７に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
前記融合タンパク質がペプチド連結分子を含まず、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβと受容体の結合ドメインの直接融合物である、請求項１から３のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
ｉ）図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
ｉ）図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ｉ）図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
ｉ）図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
ｉ）図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
ｉ）図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
ｉ）図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
ｉ）図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
ｉ）図１２．１ａ、１２．２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
ｉ）図１３．１ａ、１３．２ａ、１３ｂまたは１３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１３ａ、１３ｂまたは１３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
ｉ）図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
ｉ）図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
ｉ）図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
ｉｉｉ）図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｖ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
ｉ）図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
ｉ）図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
ｉ）図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
ｉ）図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
ｉ）図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
ｉ）図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
ｉ）図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
ｉ）図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
ｉ）図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
ｉ）図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
ｉ）図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
ｉ）図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
ｉ）図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
ｉ）図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
ｉ）図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３９】
ｉ）図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
ｉ）図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
ｉ）図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４２】
ｉ）図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４３】
ｉ）図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４４】
ｉ）図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４５】
ｉ）図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４６】
ｉ）図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４７】
ｉ）図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４８】
ｉ）図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４９】
ｉ）図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５０】
ｉ）図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５１】
ｉ）図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５２】
ｉ）図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５３】
ｉ）図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５４】
ｉ）図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５５】
ｉ）図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５６】
ｉ）図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５７】
ｉ）図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５８】
ｉ）図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５９】
ｉ）図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６０】
タンデムに連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６１】
第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドを含む、請求項６０に記載の融合タンパク質。
【請求項６２】
前記第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドがタンデムに連結されており、前記融合タンパク質が
ｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨα−ＴＳＨβまたは
ｉｖ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ
を含む、請求項６１に記載の融合タンパク質
【請求項６３】
ｉ）図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６４】
ｉ）図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６５】
ｉ）図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６６】
ｉ）図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６７】
ｉ）図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６８】
ｉ）図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６９】
ｉ）図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項７０】
ｉ）図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項７１】
請求項１から７０のいずれかに記載の融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項７２】
請求項７１に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項７３】
請求項７１または７２に記載の核酸分子またはベクターをトランスフェクトした、またはそれで形質転換した細胞。
【請求項７４】
請求項１から７０のいずれかに記載のポリペプチドを含み、添加剤または担体を含む医薬組成物。
【請求項７５】
前記ポリペプチドを治療薬と組み合わせた、請求項７４に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
甲状腺癌に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項７７】
多結節性甲状腺腫に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項７８】
甲状腺中毒症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項７９】
続発性甲状腺機能低下症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項８０】
骨粗鬆症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項１】
ＴＳＨ受容体の結合ドメインに直接的または間接的に場合によって連結している甲状腺刺激ホルモンα［ＴＳＨα］および／または甲状腺刺激ホルモンβ［ＴＳＨβ］を含む融合タンパク質。
【請求項２】
ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβが前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記融合タンパク質中の前記受容体の結合ドメインのアミノ末端に位置する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβが前記受容体の結合ドメインに連結しており、前記融合タンパク質中の前記結合ドメインのカルボキシル末端に位置する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβがペプチドリンカーによって受容体の結合ドメインに連結している、請求項１から３のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項５】
前記ペプチド連結分子がペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの少なくとも１コピーを含む、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
発明前記ペプチド連結分子がペプチドＧｌｙＧｌｙＧｌｙＧｌｙＳｅｒの１〜１０コピーを含む、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
前記ペプチドリンカー分子が、少なくとも１つの糖部分を付加するための少なくとも１つのモチーフを含むように修飾されている、請求項１から６のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項８】
前記ペプチドリンカー分子がモチーフ（Ｘａａ１Ｘａａ２Ｘａａ３Ｘａａ４Ｘａａ５）の少なくとも１コピーを含み、前記モチーフがグリコシル化モチーフＡｓｎ−Ｘａａ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘａａ−Ｔｈｒを含む、請求項７に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
前記融合タンパク質がペプチド連結分子を含まず、ＴＳＨαおよび／またはＴＳＨβと受容体の結合ドメインの直接融合物である、請求項１から３のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
ｉ）図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４ａ、４ｂまたは４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
ｉ）図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５ａ、５ｂまたは５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
ｉ）図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６ａ、６ｂまたは６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
ｉ）図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図７ａ、７ｂまたは７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
ｉ）図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図８ａ、８ｂまたは８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
ｉ）図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図９ａ、９ｂまたは９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
ｉ）図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１０ａ、１０ｂまたは１０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
ｉ）図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１１ａ、１１ｂまたは１１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
ｉ）図１２．１ａ、１２．２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１２ａ、１２ｂまたは１２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
ｉ）図１３．１ａ、１３．２ａ、１３ｂまたは１３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１３ａ、１３ｂまたは１３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
ｉ）図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１４ａ、１４ｂまたは１４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
ｉ）図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１５ａ、１５ｂまたは１５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
ｉ）図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１６ａ、１６ｂまたは１６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
ｉｉｉ）図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｖ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１７ａ、１７ｂまたは１７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
ｉ）図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１８ａ、１８ｂまたは１８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
ｉ）図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図１９ａ、１９ｂまたは１９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
ｉ）図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２０ａ、２０ｂまたは２０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
ｉ）図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２１ａ、２１ｂまたは２１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
ｉ）図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２２ａ、２２ｂまたは２２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
ｉ）図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２３ａ、２３ｂまたは２３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
ｉ）図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２４ａ、２４ｂまたは２４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
ｉ）図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２５ａ、２５ｂまたは２５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
ｉ）図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２６ａ、２６ｂまたは２６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
ｉ）図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２７ａ、２７ｂまたは２７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
ｉ）図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２８ａ、２８ｂまたは２８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
ｉ）図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図２９ａ、２９ｂまたは２９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
ｉ）図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３０ａ、３０ｂまたは３０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
ｉ）図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３１ａ、３１ｂまたは３１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
ｉ）図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３２ａ、３２ｂまたは３２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３９】
ｉ）図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３３ａ、３３ｂまたは３３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
ｉ）図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３４ａ、３４ｂまたは３４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
ｉ）図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３５ａ、３５ｂまたは３５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４２】
ｉ）図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３６ａ、３６ｂまたは３６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４３】
ｉ）図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３７ａ、３７ｂまたは３７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４４】
ｉ）図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３８ａ、３８ｂまたは３８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４５】
ｉ）図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図３９ａ、３９ｂまたは３９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４６】
ｉ）図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４０ａ、４０ｂまたは４０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４７】
ｉ）図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４１ａ、４１ｂまたは４１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４８】
ｉ）図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４２ａ、４２ｂまたは４２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４９】
ｉ）図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４３ａ、４３ｂまたは４３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５０】
ｉ）図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４４ａ、４４ｂまたは４４ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５１】
ｉ）図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４５ａ、４５ｂまたは４５ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５２】
ｉ）図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４６ａ、４６ｂまたは４６ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５３】
ｉ）図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４７ａ、４７ｂまたは４７ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５４】
ｉ）図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４８ａ、４８ｂまたは４８ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５５】
ｉ）図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図４９ａ、４９ｂまたは４９ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５６】
ｉ）図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５０ａ、５０ｂまたは５０ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５７】
ｉ）図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５１ａ、５１ｂまたは５１ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５８】
ｉ）図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５２ａ、５２ｂまたは５２ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５９】
ｉ）図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５３ａ、５３ｂまたは５３ｃに示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６０】
タンデムに連結されたＴＳＨαおよびＴＳＨβを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項６１】
第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドを含む、請求項６０に記載の融合タンパク質。
【請求項６２】
前記第１および第２のＴＳＨαポリペプチドおよびＴＳＨβポリペプチドがタンデムに連結されており、前記融合タンパク質が
ｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨβ−ＴＳＨαまたは
ｉｉｉ）ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨα−ＴＳＨβまたは
ｉｖ）ＴＳＨα−ＴＳＨβ−ＴＳＨα−ＴＳＨβ
を含む、請求項６１に記載の融合タンパク質
【請求項６３】
ｉ）図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５４に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６４】
ｉ）図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５５に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６５】
ｉ）図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５６に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６６】
ｉ）図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５７に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６７】
ｉ）図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５８に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６８】
ｉ）図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図５９に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項６９】
ｉ）図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６０に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項７０】
ｉ）図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、
ｉｉ）少なくとも１つのアミノ酸残基の付加または欠失または置換によって修飾されており、ＴＳＨ受容体活性を調節する、図６１に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質
からなる群から選択される、請求項６０から６２のいずれかに記載の融合タンパク質。
【請求項７１】
請求項１から７０のいずれかに記載の融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項７２】
請求項７１に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項７３】
請求項７１または７２に記載の核酸分子またはベクターをトランスフェクトした、またはそれで形質転換した細胞。
【請求項７４】
請求項１から７０のいずれかに記載のポリペプチドを含み、添加剤または担体を含む医薬組成物。
【請求項７５】
前記ポリペプチドを治療薬と組み合わせた、請求項７４に記載の医薬組成物。
【請求項７６】
甲状腺癌に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項７７】
多結節性甲状腺腫に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項７８】
甲状腺中毒症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項７９】
続発性甲状腺機能低下症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【請求項８０】
骨粗鬆症に罹患した対象を治療する方法であって、有効量の請求項１から７０のいずれかに記載のＴＳＨ融合タンパク質を投与することを含む方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６ａ】
【図６６ｂ】
【図６６ｃ】
【図６６ｄ】
【図６６ｅ】
【図６６ｆ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６ａ】
【図６６ｂ】
【図６６ｃ】
【図６６ｄ】
【図６６ｅ】
【図６６ｆ】
【公表番号】特表２０１１−５１６０４３（Ｐ２０１１−５１６０４３Ａ）
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５００２９１（Ｐ２０１１−５００２９１）
【出願日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０００７４２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１１５８０９
【国際公開日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【出願人】（５０２４５２９７８）アステリオン・リミテッド (13)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年５月２６日（２０１１．５．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１９日（２００９．３．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００９／０００７４２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１１５８０９
【国際公開日】平成２１年９月２４日（２００９．９．２４）
【出願人】（５０２４５２９７８）アステリオン・リミテッド (13)
【Ｆターム（参考）】
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