発毛抑制剤
【課題】新規な発毛抑制剤を提供する。
【解決手段】ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する発毛抑制剤。
【解決手段】ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する発毛抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、発毛抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
頭髪や手足の体毛は本来、頭部、胸部、手足等の重要な器官を保護するためのものであるが、現代では生活環境の変化や技術の進歩発展とともに、保護機能という側面の重要性は薄れつつある。体毛本来の保護機能が衣服等の保護手段によって代替されたり、生活環境の変化に伴い身体を損傷しうる外的な危険性が薄れたこと等によるものである。
これらに加え、最近では手足の体毛は美的外観上できるだけ少ない方が好まれる傾向にあり、特に女性においては、手足等の体毛を除去することが盛んに行われている。また、男性においても、従来から髭処理が一般的に行われている。
体毛を除去する除毛・脱毛方法としては、シェーバー等の器具を用いるもの、電気やレーザー等を用いるもの、皮膚に脱毛剤を塗布して化学的に処理するものが一般的である。しかし、これらの方法では、皮膚表面を傷つける、皮膚に炎症が起こる、薬剤によって皮膚がかぶれる等の弊害がある。また、処理に痛みを伴うという問題もある。
このような背景から、発毛抑制効果を謳った発毛抑制剤や化粧料等が提案されているが、効果等の面で十分とは言い難く、発毛抑制効果を有する素材のさらなる探索が望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、新規な発毛抑制剤を提供することを課題とする。
近年、中性エンドペプチターゼ活性を阻害すれば体毛の成長を抑制出来ることが報告されている（特開2000-351716号公報参照）。皮膚組織内における中性エンドペプチダーゼ活性の上昇は、毛包形成およびその成長に重要な影響を及ぼしており、皮膚組織内の中性エンドペプチダーゼ活性を抑えることで、体毛の成長を抑制することができる。
しかし、現在のところ中性エンドペプチダーゼ阻害活性が報告されている物質は、安全性が疑問視されているものが多く、その阻害効果も十分とはいえない。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
そこで本発明者等は上記課題に鑑み、新たな発毛抑制剤を得るため、中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有する新規物質について鋭意検討を行った。その結果、ヤマモモ抽出物が高い中性エンドペプチダーゼ活性阻害作用を有することを見い出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成させたものである。
【０００５】
すなわち、本発明は、ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する発毛抑制剤に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、高い中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有する発毛抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられるヤマモモ抽出物は、高い中性エンドペプチダーゼ阻害効果を奏する。そのため、ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する本発明の発毛抑制剤は、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害することで、体毛の成長を抑えることができる。
【０００８】
本発明に用いられるヤマモモとは、ヤマモモ科ヤマモモ属に属する植物で、学名はMyrica rubra Sieb. et Zucc.である。ヤマモモにはタンニンが豊富に含まれ、止瀉作用や整腸作用があることが知られている。しかし、ヤマモモ抽出物が中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有することについては全く知られていなかった。
【０００９】
本発明のヤマモモ抽出物を得るためには、植物の全ての任意の部分、例えば、全草、葉、樹皮、枝、果実または根などが使用可能である。中でも、ヤマモモの樹皮を用いるのが好ましい。
本発明において、ヤマモモ抽出物の調製に、上記植物の各部位をそのまま、又は乾燥粉砕して用いることもできるが、その水蒸気蒸留物又は圧搾物を用いることもでき、これらは精油等、より精製したものを用いることもでき、また市販品を利用することもできる。上記植物の部位又はその水蒸気蒸留物若しくは圧搾物は、いずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１０】
本発明に用いるヤマモモ抽出物を得る方法は特に限定されず、適当な溶媒を用いた常法の抽出方法によって調製することができる。
抽出に用いる溶媒としては、通常植物成分の抽出に用いられるもの、例えば水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；及びピリジン類等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。本発明において、抽出溶媒としては、水性アルコールが好ましく、９５質量％エタノールを用いることが特に好ましい。
また抽出条件も通常の条件を適用でき、例えば上記植物を３〜１００℃で数時間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましく、室温付近の温度で１日〜３週間浸漬するのが特に好ましい。
【００１１】
このようにして得られたヤマモモ抽出物は、そのまま本発明の発毛抑制剤の有効成分として使用できるが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により分画して用いることもできる。また、前記抽出物を希釈、濃縮または凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。本発明において、ヤマモモ抽出物とは、前記のような抽出方法で得られた各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を含むものである。
【００１２】
本発明の発毛抑制剤は、その形態としては特に限定されず、前記ヤマモモ抽出物をそのまま発毛抑制剤として用いてもよい。また、本発明の発毛抑制剤は、その多くは人や動物に適用されるものであるため、人や動物の皮膚、毛髪等に適用されうるすべての形態を含みうる。
なかでも、本発明の発毛抑制剤は皮膚外用剤として用いることが好ましく、除毛、脱毛または髭剃り関連化粧料とすることが特に好ましい。本発明の発毛抑制剤を皮膚へ直接塗布することで、発毛を抑制したい部位のみに効果的に作用させることができる。
【００１３】
このような皮膚外用剤または化粧料としては、水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。例えば、ペースト状、クリーム状、エアゾール状等の除毛剤、ワックス状、ジェル状、シート状等の脱毛剤、除毛または脱毛の後処理に用いるローション、クリーム等の後処理料、プレシェーブローション等の髭剃り前処理料、シェービングクリーム等の髭剃り料、アフターシェーブローション等の髭剃り後処理料などが挙げられる。
【００１４】
本発明の発毛抑制剤における前記ヤマモモ抽出物の配合量は特に限定されないが、発毛抑制効果等の観点から、固形分換算で０．００００１〜５０重量％が好ましく、０．００１〜１０重量％程度が特に好ましい。
【００１５】
本発明の発毛抑制剤には、前記抽出物の他に、本発明の効果を損なわない範囲において通常の皮膚外用剤、化粧料等に用いられる各種任意成分を適宜配合することができる。このような任意成分としては、例えば精製水、アルコール、界面活性剤、油性物質、保湿剤、皮膚老化防止剤、美白剤、高分子化合物、防腐剤、増粘剤、乳化剤、薬効成分、紛体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤、pH調整剤等を適宜配合できる。
【００１６】
皮膚外用剤または化粧料として使用する場合の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１cm2当たり１〜２０ｍｇ、液状製剤の場合、同じく１〜２０ｍｇ使用するのが好ましい。
【実施例】
【００１７】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１８】
（製造例）ヤマモモ抽出液の調製
ヤマモモ樹皮（楊梅皮（広東省）：新和物産製）４０ｇに９５％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間浸漬した。これをろ過し、ヤマモモ抽出液を得た。このヤマモモ抽出液を濃縮したところ、その固形分は６．２０ｇであった。抽出液の固形分濃度は１．５５％であった。調製したヤマモモ抽出液０．１ｍＬに９５％エタノール水溶液０．２４４ｍＬを加え、評価サンプルとした。
【００１９】
（実施例）培養ヒト線維芽細胞由来の中性エンドペプチダーゼ活性抑制試験
Cell System社より市販されている正常ヒト線維芽細胞を用いて、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥ培地で継体培養し、以下の試験に供した。試験方法は、The Journal of Biological Chemistry, 266(34), 23041-23047(1991)に記載の方法を参照した。
ラバーポリスマンを用いてシャーレから剥がした細胞を、リン酸緩衝食塩水中に浮遊させ、低速の遠心分離器を使って細胞を集めた後、同生理食塩水で３回洗浄した。得られた細胞を０．１％ Triton X−100／０．２Ｍ Tris−HClバッファー（pH8.0）に浮遊させ、超音波粉砕し、これをヒト線維芽細由来酵素液とした。酵素活性測定の基質には、１０ｍＭグルタリル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−４−メトキシ−β−ナフチルアミンを用いた。酵素液１００μＬに対し、所定の濃度に希釈した前記ヤマモモ抽出物（評価サンプル）を２μＬまたは０．６μＬ、基質を２μＬ添加し、３７℃で１時間反応させ、基質を分解した。その後、ホスホラミドン（Phosphoramidone）を最終濃度１μＭとなるように添加して、基質分解反応を停止させた。この酵素分解反応により、ヒト線維芽細由来酵素液に含まれる中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）が基質をＡｌａ−Ｐｈｅ間で切断、分解する。
コントロールとして、上記酵素反応系において、評価サンプル２μＬまたは０．６μＬのかわりに９５％エタノール水溶液を同量加えた以外は上記と同様にした試料を作成した。
さらに、反応系にロイシンアミノペプチダーゼ（Leucine aminopeptidase）を最終濃度が０．５０ｍＵ／ｍＬとなるように添加し、３７℃で１時間反応させた。これにより、ＮＥＰ分解産物がロイシンアミノペプチダーゼによってさらに切断、分解され、４−メトキシ−２−ナフチルアミンを生じる。生成した４−メトキシ−２−ナフチルアミン量を、蛍光分光光度計で励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４２５ｎｍにて蛍光強度を測定した。
得られた測定値をもとに、下記の式からヤマモモ抽出物（評価サンプル）の中性エンドペプチダーゼ活性阻害率を求めた。結果を表１に示す。
中性エンドペプチダーゼ活性阻害率(％)＝100−｛(評価サンプル添加時の4-メトキシ‐2-ナフチルアミン量)／(コントロール添加時の4‐メトキシ-2-ナフチルアミン量)｝×100
【００２０】
【表１】
【００２１】
表１から明らかなように、ヤマモモ抽出物が優れた中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有することが認められた。
前述のように、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害すると体毛の成長が抑制されることが知られている。したがって、表１の結果から、本発明のヤマモモ抽出物は中性エンドペプチダーゼ活性を阻害することで、発毛を抑制できることがわかる。
【００２２】
（処方例）
前記製造例で得られたヤマモモ抽出液を有効成分として、下記に示す組成のローション、クリーム、エアゾール、パック剤、ファンデーション、化粧水、ジェルを常法により各々調製した。
【００２３】
１．発毛抑制ローションの調製
下記Ａの成分を混合した溶液Ａを調製した。これとは別に、下記Ｂの成分を混合した溶液Ｂを調製した。溶液Ａに溶液Ｂを添加して均一に撹拌混合し、ローションを得た。
（組成） （配合：質量％）
Ａ ポリオキシエチレン硬化ひまし油 ０．８
エタノール ３０．０
Ｂ ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
ドデシル硫酸ナトリウム ０．１２
ドデシルメチルアミンオキシド ０．１８
イソプロピルアルコール １５．０
ベンジルアルコール １５．０
グリセリン ２．０
精製水 残部
【００２４】
２．発毛抑制クリームの調製
下記Ａの成分を混合した溶液Ａを調製した。これとは別に、下記Ｂの成分を混合した溶液Ｂを調製した。溶液Ａに溶液Ｂを添加して均一に撹拌混合し、乳化後、冷却して、クリームを得た。
（組成） （配合：質量％）
Ａ 流動パラフィン １０．０
スクワラン ７．０
ホホバ油 ３．０
固形パラフィン ３．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル ２．０
ソルビタンセスキオレエート １．０
水酸化カリウム ０．１
Ｂ ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
グリセリン ３．０
エチルパラベン ０．１
精製水 残部
【００２５】
３．エアゾールの調製
下記Ａの成分を均一に混合して容器に入れ、Ｂの液化石油ガス（噴射剤）を常法により容器に充填してエアゾールを製造した。
（組成） （配合：質量％）
Ａ ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
セタノール １．２
プロピレングリコール ４．０
エタノール ８．０
精製水 残部
Ｂ 液化石油ガス（噴射剤） ４．０
【００２６】
４．発毛抑制パック剤の調製
下記の組成のパック剤を常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ヤマモモ抽出物 ３．０（乾燥固形分）
ポリビニルアルコール ２０．０
グリセリン ５．０
エタノール １６．０
香料 微量
色素 微量
精製水 残部
【００２７】
５．ファンデーションの調製
下記の組成のファンデーションを常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
球状シリカビーズ ２０．０
シリカ被覆セリサイト ４５．０
超微粒子酸化チタン １０．０
黄酸化鉄 ３．０
タルク ５．０
マイカ ５．０
ベンガラ １．０
グンジョウ １．０
パラベン ０．２
流動パラフィン ４．８
スクワラン ４．０
【００２８】
６．発毛抑制化粧水の調製
下記の組成の化粧水を常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ヤマモモ抽出物 ５．０（乾燥固形分）
グリセリン １５．０
ジプロピレングリコール ５．０
精製水 残部
【００２９】
７．発毛抑制ジェルの調製
下記の組成のジェルを常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ポリアクリル酸 ０．５
水酸化カリウム ０．１５
グルカム １０．０
グリセリン １０．０
グリシンベタイン ３．０
ヤマモモ抽出物 ２．０（乾燥固形分）
コハク酸 １．５
精製水 残部
【技術分野】
【０００１】
本発明は、発毛抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
頭髪や手足の体毛は本来、頭部、胸部、手足等の重要な器官を保護するためのものであるが、現代では生活環境の変化や技術の進歩発展とともに、保護機能という側面の重要性は薄れつつある。体毛本来の保護機能が衣服等の保護手段によって代替されたり、生活環境の変化に伴い身体を損傷しうる外的な危険性が薄れたこと等によるものである。
これらに加え、最近では手足の体毛は美的外観上できるだけ少ない方が好まれる傾向にあり、特に女性においては、手足等の体毛を除去することが盛んに行われている。また、男性においても、従来から髭処理が一般的に行われている。
体毛を除去する除毛・脱毛方法としては、シェーバー等の器具を用いるもの、電気やレーザー等を用いるもの、皮膚に脱毛剤を塗布して化学的に処理するものが一般的である。しかし、これらの方法では、皮膚表面を傷つける、皮膚に炎症が起こる、薬剤によって皮膚がかぶれる等の弊害がある。また、処理に痛みを伴うという問題もある。
このような背景から、発毛抑制効果を謳った発毛抑制剤や化粧料等が提案されているが、効果等の面で十分とは言い難く、発毛抑制効果を有する素材のさらなる探索が望まれている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、新規な発毛抑制剤を提供することを課題とする。
近年、中性エンドペプチターゼ活性を阻害すれば体毛の成長を抑制出来ることが報告されている（特開2000-351716号公報参照）。皮膚組織内における中性エンドペプチダーゼ活性の上昇は、毛包形成およびその成長に重要な影響を及ぼしており、皮膚組織内の中性エンドペプチダーゼ活性を抑えることで、体毛の成長を抑制することができる。
しかし、現在のところ中性エンドペプチダーゼ阻害活性が報告されている物質は、安全性が疑問視されているものが多く、その阻害効果も十分とはいえない。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
そこで本発明者等は上記課題に鑑み、新たな発毛抑制剤を得るため、中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有する新規物質について鋭意検討を行った。その結果、ヤマモモ抽出物が高い中性エンドペプチダーゼ活性阻害作用を有することを見い出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成させたものである。
【０００５】
すなわち、本発明は、ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する発毛抑制剤に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、高い中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有する発毛抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いられるヤマモモ抽出物は、高い中性エンドペプチダーゼ阻害効果を奏する。そのため、ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する本発明の発毛抑制剤は、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害することで、体毛の成長を抑えることができる。
【０００８】
本発明に用いられるヤマモモとは、ヤマモモ科ヤマモモ属に属する植物で、学名はMyrica rubra Sieb. et Zucc.である。ヤマモモにはタンニンが豊富に含まれ、止瀉作用や整腸作用があることが知られている。しかし、ヤマモモ抽出物が中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有することについては全く知られていなかった。
【０００９】
本発明のヤマモモ抽出物を得るためには、植物の全ての任意の部分、例えば、全草、葉、樹皮、枝、果実または根などが使用可能である。中でも、ヤマモモの樹皮を用いるのが好ましい。
本発明において、ヤマモモ抽出物の調製に、上記植物の各部位をそのまま、又は乾燥粉砕して用いることもできるが、その水蒸気蒸留物又は圧搾物を用いることもでき、これらは精油等、より精製したものを用いることもでき、また市販品を利用することもできる。上記植物の部位又はその水蒸気蒸留物若しくは圧搾物は、いずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１０】
本発明に用いるヤマモモ抽出物を得る方法は特に限定されず、適当な溶媒を用いた常法の抽出方法によって調製することができる。
抽出に用いる溶媒としては、通常植物成分の抽出に用いられるもの、例えば水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類；スクワラン、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；及びピリジン類等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。本発明において、抽出溶媒としては、水性アルコールが好ましく、９５質量％エタノールを用いることが特に好ましい。
また抽出条件も通常の条件を適用でき、例えば上記植物を３〜１００℃で数時間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましく、室温付近の温度で１日〜３週間浸漬するのが特に好ましい。
【００１１】
このようにして得られたヤマモモ抽出物は、そのまま本発明の発毛抑制剤の有効成分として使用できるが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により分画して用いることもできる。また、前記抽出物を希釈、濃縮または凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。本発明において、ヤマモモ抽出物とは、前記のような抽出方法で得られた各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を含むものである。
【００１２】
本発明の発毛抑制剤は、その形態としては特に限定されず、前記ヤマモモ抽出物をそのまま発毛抑制剤として用いてもよい。また、本発明の発毛抑制剤は、その多くは人や動物に適用されるものであるため、人や動物の皮膚、毛髪等に適用されうるすべての形態を含みうる。
なかでも、本発明の発毛抑制剤は皮膚外用剤として用いることが好ましく、除毛、脱毛または髭剃り関連化粧料とすることが特に好ましい。本発明の発毛抑制剤を皮膚へ直接塗布することで、発毛を抑制したい部位のみに効果的に作用させることができる。
【００１３】
このような皮膚外用剤または化粧料としては、水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、ゲル系、軟膏系、クリーム、水−油２層系、水−油−粉末３層系など、幅広い形態をとり得る。例えば、ペースト状、クリーム状、エアゾール状等の除毛剤、ワックス状、ジェル状、シート状等の脱毛剤、除毛または脱毛の後処理に用いるローション、クリーム等の後処理料、プレシェーブローション等の髭剃り前処理料、シェービングクリーム等の髭剃り料、アフターシェーブローション等の髭剃り後処理料などが挙げられる。
【００１４】
本発明の発毛抑制剤における前記ヤマモモ抽出物の配合量は特に限定されないが、発毛抑制効果等の観点から、固形分換算で０．００００１〜５０重量％が好ましく、０．００１〜１０重量％程度が特に好ましい。
【００１５】
本発明の発毛抑制剤には、前記抽出物の他に、本発明の効果を損なわない範囲において通常の皮膚外用剤、化粧料等に用いられる各種任意成分を適宜配合することができる。このような任意成分としては、例えば精製水、アルコール、界面活性剤、油性物質、保湿剤、皮膚老化防止剤、美白剤、高分子化合物、防腐剤、増粘剤、乳化剤、薬効成分、紛体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤、pH調整剤等を適宜配合できる。
【００１６】
皮膚外用剤または化粧料として使用する場合の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１cm2当たり１〜２０ｍｇ、液状製剤の場合、同じく１〜２０ｍｇ使用するのが好ましい。
【実施例】
【００１７】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１８】
（製造例）ヤマモモ抽出液の調製
ヤマモモ樹皮（楊梅皮（広東省）：新和物産製）４０ｇに９５％エタノール水溶液４００ｍＬを加え、常温で７日間浸漬した。これをろ過し、ヤマモモ抽出液を得た。このヤマモモ抽出液を濃縮したところ、その固形分は６．２０ｇであった。抽出液の固形分濃度は１．５５％であった。調製したヤマモモ抽出液０．１ｍＬに９５％エタノール水溶液０．２４４ｍＬを加え、評価サンプルとした。
【００１９】
（実施例）培養ヒト線維芽細胞由来の中性エンドペプチダーゼ活性抑制試験
Cell System社より市販されている正常ヒト線維芽細胞を用いて、１０％牛胎児血清を含むＤＭＥ培地で継体培養し、以下の試験に供した。試験方法は、The Journal of Biological Chemistry, 266(34), 23041-23047(1991)に記載の方法を参照した。
ラバーポリスマンを用いてシャーレから剥がした細胞を、リン酸緩衝食塩水中に浮遊させ、低速の遠心分離器を使って細胞を集めた後、同生理食塩水で３回洗浄した。得られた細胞を０．１％ Triton X−100／０．２Ｍ Tris−HClバッファー（pH8.0）に浮遊させ、超音波粉砕し、これをヒト線維芽細由来酵素液とした。酵素活性測定の基質には、１０ｍＭグルタリル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−４−メトキシ−β−ナフチルアミンを用いた。酵素液１００μＬに対し、所定の濃度に希釈した前記ヤマモモ抽出物（評価サンプル）を２μＬまたは０．６μＬ、基質を２μＬ添加し、３７℃で１時間反応させ、基質を分解した。その後、ホスホラミドン（Phosphoramidone）を最終濃度１μＭとなるように添加して、基質分解反応を停止させた。この酵素分解反応により、ヒト線維芽細由来酵素液に含まれる中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）が基質をＡｌａ−Ｐｈｅ間で切断、分解する。
コントロールとして、上記酵素反応系において、評価サンプル２μＬまたは０．６μＬのかわりに９５％エタノール水溶液を同量加えた以外は上記と同様にした試料を作成した。
さらに、反応系にロイシンアミノペプチダーゼ（Leucine aminopeptidase）を最終濃度が０．５０ｍＵ／ｍＬとなるように添加し、３７℃で１時間反応させた。これにより、ＮＥＰ分解産物がロイシンアミノペプチダーゼによってさらに切断、分解され、４−メトキシ−２−ナフチルアミンを生じる。生成した４−メトキシ−２−ナフチルアミン量を、蛍光分光光度計で励起波長３４０ｎｍ、蛍光波長４２５ｎｍにて蛍光強度を測定した。
得られた測定値をもとに、下記の式からヤマモモ抽出物（評価サンプル）の中性エンドペプチダーゼ活性阻害率を求めた。結果を表１に示す。
中性エンドペプチダーゼ活性阻害率(％)＝100−｛(評価サンプル添加時の4-メトキシ‐2-ナフチルアミン量)／(コントロール添加時の4‐メトキシ-2-ナフチルアミン量)｝×100
【００２０】
【表１】
【００２１】
表１から明らかなように、ヤマモモ抽出物が優れた中性エンドペプチダーゼ活性阻害効果を有することが認められた。
前述のように、中性エンドペプチダーゼ活性を阻害すると体毛の成長が抑制されることが知られている。したがって、表１の結果から、本発明のヤマモモ抽出物は中性エンドペプチダーゼ活性を阻害することで、発毛を抑制できることがわかる。
【００２２】
（処方例）
前記製造例で得られたヤマモモ抽出液を有効成分として、下記に示す組成のローション、クリーム、エアゾール、パック剤、ファンデーション、化粧水、ジェルを常法により各々調製した。
【００２３】
１．発毛抑制ローションの調製
下記Ａの成分を混合した溶液Ａを調製した。これとは別に、下記Ｂの成分を混合した溶液Ｂを調製した。溶液Ａに溶液Ｂを添加して均一に撹拌混合し、ローションを得た。
（組成） （配合：質量％）
Ａ ポリオキシエチレン硬化ひまし油 ０．８
エタノール ３０．０
Ｂ ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
ドデシル硫酸ナトリウム ０．１２
ドデシルメチルアミンオキシド ０．１８
イソプロピルアルコール １５．０
ベンジルアルコール １５．０
グリセリン ２．０
精製水 残部
【００２４】
２．発毛抑制クリームの調製
下記Ａの成分を混合した溶液Ａを調製した。これとは別に、下記Ｂの成分を混合した溶液Ｂを調製した。溶液Ａに溶液Ｂを添加して均一に撹拌混合し、乳化後、冷却して、クリームを得た。
（組成） （配合：質量％）
Ａ 流動パラフィン １０．０
スクワラン ７．０
ホホバ油 ３．０
固形パラフィン ３．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル ２．０
ソルビタンセスキオレエート １．０
水酸化カリウム ０．１
Ｂ ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
グリセリン ３．０
エチルパラベン ０．１
精製水 残部
【００２５】
３．エアゾールの調製
下記Ａの成分を均一に混合して容器に入れ、Ｂの液化石油ガス（噴射剤）を常法により容器に充填してエアゾールを製造した。
（組成） （配合：質量％）
Ａ ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
セタノール １．２
プロピレングリコール ４．０
エタノール ８．０
精製水 残部
Ｂ 液化石油ガス（噴射剤） ４．０
【００２６】
４．発毛抑制パック剤の調製
下記の組成のパック剤を常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ヤマモモ抽出物 ３．０（乾燥固形分）
ポリビニルアルコール ２０．０
グリセリン ５．０
エタノール １６．０
香料 微量
色素 微量
精製水 残部
【００２７】
５．ファンデーションの調製
下記の組成のファンデーションを常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ヤマモモ抽出物 １．０（乾燥固形分）
球状シリカビーズ ２０．０
シリカ被覆セリサイト ４５．０
超微粒子酸化チタン １０．０
黄酸化鉄 ３．０
タルク ５．０
マイカ ５．０
ベンガラ １．０
グンジョウ １．０
パラベン ０．２
流動パラフィン ４．８
スクワラン ４．０
【００２８】
６．発毛抑制化粧水の調製
下記の組成の化粧水を常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ヤマモモ抽出物 ５．０（乾燥固形分）
グリセリン １５．０
ジプロピレングリコール ５．０
精製水 残部
【００２９】
７．発毛抑制ジェルの調製
下記の組成のジェルを常法により調製した。
（組成） （配合：質量％）
ポリアクリル酸 ０．５
水酸化カリウム ０．１５
グルカム １０．０
グリセリン １０．０
グリシンベタイン ３．０
ヤマモモ抽出物 ２．０（乾燥固形分）
コハク酸 １．５
精製水 残部
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する発毛抑制剤。
【請求項１】
ヤマモモ抽出物を有効成分として含有する発毛抑制剤。
【公開番号】特開２０１０−２１５５４９（Ｐ２０１０−２１５５４９Ａ）
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−６２７８５（Ｐ２００９−６２７８５）
【出願日】平成２１年３月１６日（２００９．３．１６）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月３０日（２０１０．９．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月１６日（２００９．３．１６）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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