白内障および緑内障を診断および治療するための、ｓｇｋ遺伝子ファミリーの使用
本発明は、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための医薬品製造における、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３遺伝子負の転写調節因子の使用に関する。本発明のその他の形態は、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害の形成に対する素因の診断における、登録番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列もしくはそのフラグメントの１つを含む、または、登録番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列もしくはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用に関し、それに加えて、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害の形成に対する素因を診断するための、上述の核酸を含むキットに関する。本発明はさらに、複数の試験物質の中から、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害から選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するための治療上有効な物質を同定し、特徴付けるための様々なスクリーニング方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための医薬を生産するための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用に関する。
【０００２】
その他の形態において、本発明は、白内障、緑内障、および／または、糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列を包含する一本鎖または二本鎖核酸、またはそのフラグメントの１つ、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列を包含する一本鎖または二本鎖核酸、もしくはそのフラグメントの１つの使用に関し、同様に、白内障、緑内障、および／または、糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するためのキット（本キットは、上述の核酸を含む）に関する。
【０００３】
その上、本発明は、多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるための様々なスクリーニング方法に関し、前記治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害から選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられる。
【背景技術】
【０００４】
血清および糖質コルチコイド誘導性キナーゼｈｓｇｋ１は、もともと、糖質コルチコイド感受性遺伝子としてクローニングされた［Ｗｅｂｓｔｅｒ等．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｇｋ，ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９３年；１３：２０３１−２０４０］。
【０００５】
それに続く観察により、ｈｓｇｋ１は、多数の刺激の影響下にあることが明らかになっており［Ｌａｎｇ Ｆ，Ｃｏｈｅｎ Ｐ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｓｏｆｏｒｍｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ＳＴＫＥ．２００１年１１月１３日；２００１年（１０８）：ＲＥ１７］、このような刺激としては、特に、鉱質コルチコイドの刺激が挙げられる［Ｃｈｅｎ等．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｇｋ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９９年；９６：２５１４〜２５１９，Ｎａｒａｙ−Ｆｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈ等．ｓｇｋ ｉｓ ａｎ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｎａｌ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｄｕｃｔ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ+ ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９９年；２７４；１６９７３〜１６９７８；Ｓｈｉｇａｅｖ等．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｇｋ ｂｙ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０００年；２７８：Ｆ６１３〜Ｆ６１９；Ｂｒｅｎａｎ ＦＥ，Ｆｕｌｌｅｒ ＰＪ．Ｒａｐｉｄ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ｓｇｋ）ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０００年；３０；１６６：１２９〜３６；Ｃｏｗｌｉｎｇ ＲＴ，Ｂｉｒｎｂｏｉｍ ＨＣ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ｓｇｋ）ｍＲＮＡ ｉｓ ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＧＭ−ＣＳＦ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．２０００年：６７：２４０〜２４８］。
【０００６】
ｈｓｇｋ１は、インスリン様成長因子ＩＧＦ１によって、インスリンによって、ならびに、シグナルカスケードを経た、ホスホイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）、および、ホスホイノシトール依存性キナーゼＰＤＫ１による酸化的ストレスによってによって刺激される［Ｐａｒｋ等．Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ（ＳＧＫ）ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｔｈｅ ＰＩ３−ｋｉｎａｓｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ，ＥＭＢＯ Ｊ １９９９年；１８：３０２４〜３０３３；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９９９年；３４４：１８９〜１９７］。ＰＤＫ１によるｈｓｇｋ１活性化は、４２２位のセリンのリン酸化を伴う。このセリンからアスパラギン酸への突然変異（S422DＳＧＫ１）により、構成的に活性なキナーゼが生じる［Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｔ，Ｃｏｈｅｎ Ｐ：Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｂｙ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｔｈａｔ ａｃｔｉｖａｔｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｉｄｅ ３−ｋｉｎａｓｅ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ３−ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ−１（ＰＤＫｌ）ａｎｄ ＰＤＫ２．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１９９９年；３３９：３１９〜３２８］。
【０００７】
初期の研究が示すように、ｈｓｇｋ１は、腎臓上皮性Ｎａ+チャネルの協力な刺激物質である［Ｄｅ ｌａ Ｒｏｓａ等．Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｋｉｎａｓｅ ｓｇｋ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ Ｘｅｎｏｐｕｓ ｏｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９９年；２７４：３７８３４〜３７８３９；Ｂｏｅｈｍｅｒ等．Ｔｈｅ Ｓｈｒｉｎｋａｇｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｎａ+Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ ｏｆ Ｒａｔ
Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｉｔｓ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｒＥＮａＣ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０００年；１０：１８７〜１９４；Ｌａｎｇ等．Ｄｅｒａｎｇｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｋｉｎａｓｅ ｈｓｇｋ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０００年；９７：８１５７〜８１６２］。ｈｓｇｋ１は、上皮性Ｎａ+チャネルＥＮａＣを発現しない多数の組織で見出されているため、ｈｓｇｋ１の機能を、Ｎａ+チャネルを調節する機能に限定すべきではない［Ｋｌｉｎｇｅｌ等．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｈ−ｓｇｋ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔ．Ｌｉｖｅｒ−Ｐｈｙｓｉｏｌ．）２０００年；２７９：Ｇ９９８〜Ｇ１００２；Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ａｎｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｎｄ ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９７年：９４：４４４０〜４４４５；Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．ｈ−ｓｇｋ Ｓｅｒｉｎｅ−Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ａｓ ｅａｒｌｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ＴＧＦ−β ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １９９９年；１１６：１０８１〜１０８８］。
【０００８】
ｈｓｇｋ１は、まだ解明されていない様式で、その他の多数のシグナル伝達経路またはこれら経路の構成要素を調節する可能性があるということから、ｈｓｇｋ１およびそのヒト相同体は、多数の病気を診断するかなりの可能性を有すると予測される。特にＤＥ１９７０８１７３（Ａ１）により、ｈｓｇｋ１は、多くの病気（例えば高ナトリウム血症、低ナトリウム血症、糖尿病、腎機能不全、過剰代謝、肝性脳症、および、細菌またはウイルス感染、この場合、細胞容量の変化が、重要な病態生理学的な役割を果たす）に関する診断に用いることができることは明らかである。
【０００９】
ＷＯ００／６２７８１では、ｈｓｇｋ１は、内皮性Ｎａ+チャネルを活性化し、それにより、腎臓のＮａ+再吸収の増加が起こることが報告されている。この腎臓のＮａ+再吸収の増加は高血圧を伴うため、この文献において、ｈｓｇｋ１の発現の増加が高血圧をもたらし、一方、ｈｓｇｋ１の発現の減少が最終的には低血圧をもたらすと予想されていた。
【００１０】
ＤＥ１００４２１３７はまた、ヒト相同体ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の過剰発現または過剰活性、ＥＮａＣの過活性化、それにより生じる腎臓のＮａ+再吸収の増加、および、それにより発症する高血圧に、同様の関連性があることを報告している。その上、この文献では、ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３キナーゼが、動脈性高血圧に関して診断上の可能性があることをすでに論じている。
【００１１】
ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２は、ｈｓｇｋ１遺伝子における個々のヌクレオチドの２つの異なる多型（単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ））の存在と、遺伝学的に決定された高血圧に関する素因との関連を開示している。これら多型は、ｈｓｇｋ１遺伝子において、イントロン６における多型（Ｔ→Ｃ）と、エキソン８における多型（Ｃ→Ｔ）である。
【００１２】
ｓｇｋ１は多数の組織で発現され、ｓｇｋ１は多数の未知の基質を有すると推測されるため、ｓｇｋファミリーのヒト相同体、特にｈｓｇｋ１遺伝子（ＮＭ００５６２７）、ｈｓｇｋ２遺伝子およびｈｓｇｋ３遺伝子（ＡＦ１６９０３５）の機能と、その他の病気の発症との間には、さらなる相関性があると予測することができる。これらｓｇｋ１が関与するその他の特定の病気の相関を発見することにより、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の遺伝子の多型領域を含む核酸が得られる可能性があり、このような領域は、対応するｓｇｋタンパク質の機能または発現に影響を与え、これらその他の病気に関する素因を診断するのに用いられる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
それゆえに、本発明の目的は、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の機能と、新しい病気との間のさらなる相関性を発見することであり、これにより、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の遺伝子の多型領域を含む核酸の診断的な使用に関する新規な可能性を提供することができる。
【００１４】
この目的は、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３が、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１を強力に刺激するという驚くべき発見によってによって達成された（図１を参照）。特に、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１は、特に眼の様々な細胞へのグルコースの取り込みを介在する［Ｂｕｓｉｋ等．Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｎｅｒ ａｎｄ ｏｕｔｅｒ ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００２年；４３：２３５６〜６３；Ｔａｋａｔａ Ｋ，Ｋａｓａｈａｒａ Ｔ，Ｋａｓａｈａｒａ Ｍ，Ｅｚａｋｉ Ｏ，Ｈｉｒａｎｏ Ｈ．Ｕｌｔｒａｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ／ＨｅｐＧ２−ｔｙｐｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ（ＧＬＵＴ１）ｉｎ ｔｈｅ ｃｉｌｉａｒｙ ｂｏｄｙ ａｎｄ ｉｒｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｅｙｅ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃ．１９９１年；３２：１６５９〜６６］。浸透圧により水分がグルコースと一緒に取り込まれるが、これは、Ｇｌｕｔ１活性の増加が、細胞の膨張に至ることを意味する。その結果として、Ｇｌｕｔ１活性の増加は、白内障の発症に至る可能性がある［Ｇｏｎｇ等．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｔａｒａｃｔｏｕｓ ｍａｃｒｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｉｎ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａｎ ａｃｔｉｖｅ ＭＥＫ１ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｎｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００１年：４２：５３９〜４８］。これに加えて、Ｇｌｕｔ１の過剰発現は、結合組織のタンパク質の形成と沈着を促進することが示されている［Ａｙｏ等．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｉｎ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｈｉｇｈ−ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｄｉｕｍ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９１年；２６０：Ｆ１８５〜１９１；Ｈｅｉｌｉｇ等．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｉｎ ｒａｔ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ａ ｎｏｒｍａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｉｌｉｅｕ ｍｉｍｉｃｓ ｔｈｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５年；９６：１８０２〜１８１４］。このような結合組織のタンパク質の沈着は、眼の流体の流通を妨害し、眼内の圧力の増加に至り、その結果として網膜にダメージを与える［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｙｏｃｉｌｉｎ（ＭＹＯＣ）ｇｌａｕｃｏｍａ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｏｎｋｅｙ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｒｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００１年：４２（１）：１４５〜５２，Ｕｅｄａ等．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｃｉｌｉｎ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｊｕｘｔａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｙｅｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００２年：４３：１０６８〜７６］。実際に、糖質コルチコイドは、ＳＧＫ１の発現を刺激し（上記を参照）、同時に緑内障の発症を引き起こす［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．２００１年］。しかしながら、これまで、ｈｓｇｋ１が原因となる役割を有すると考えられることは決してなかった。
【００１５】
上述の妨害は、ｈｓｇｋ１活性が増加したあらゆる状況において、すなわち上述のホルモンのいずれかが過剰に存在する場合に生じると予想される。血圧の増加と相互関係を示すｈｓｇｋ１遺伝子の特定の多型［Ｂｕｓｊａｈｎ等．Ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ＳＧＫ１）ｇｅｎｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ４０（３）：２５６〜２６０，２００２年］は、同時に、白内障および緑内障の発症の増加をもたらす可能性がある。また、同じ遺伝子改変が、早期に出現する白内障および／または緑内障と関連性を示すはずである。
【００１６】
本発明の発見により、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の調節における全く新規なメカニズムが明らかになる。それゆえに、ｈｓｇｋ１活性の増加は、細胞へのグルコースの取り込みの増加をもたらすと予測される。ｈｓｇｋ１の転写は、以下のものによって刺激される：血清［Ｗｅｂｓｔｅｒ等．１９９３年］、糖質コルチコイド［ＢｒｅｎａｎおよびＦｕｌｌｅｒ ２０００年，Ｗｅｂｓｔｅｒ等．１９９３年］、鉱質コルチコイド［Ｃｈｅｎ等．１９９９年，Ｎａｒａｙ−Ｆｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈ等．１９９９年，Ｓｈｉｇａｅｖ等．２０００年，ＢｒｅｎｎａｎおよびＦｕｌｌｅｒ ２０００年，ＣｏｗｌｉｎｇおよびＢｉｒｎｂｏｉｍ ２０００年］、ゴナドトロピン［Ａｌｌｉｓｔｏｎ等．Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ／ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｒａｔ ｏｖａｒｉａｎ ｇｒａｎｕｌｏｓａ ｃｅｌｌｓ：ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｐ１ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９７年；１１：１９３４〜１９４９；Ａｌｌｉｓｔｏｎ等．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ／ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｏｖａｒｙ：ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２０００年：１４１：３８５〜３９５；Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｒｏｂａｙｎａ等．Ｆｏｌｌｉｃｌｅ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ（ＦＳＨ）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｂ（ＰＫＢ／Ａｋｔ）ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｎａｓｅ（Ｓｇｋ）：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ａ ｋｉｎａｓｅ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ＦＳＨ ｉｎ ｇｒａｎｕｌｏｓａ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０００年；１４：１２８３〜１３００，Ｒｉｃｈａｒｄｓ等．Ｏｖａｒｉａｎ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ：ａ ｃａｓｃａｄｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｏｒｍｏｎｅｓ，ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌｓ，ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ．Ｒｅｃｅｎｔ Ｐｒｏｇ Ｈｏｒｍ Ｒｅｓ．１９９５年：５０：２２３〜２５４］、および、多数のサイトカイン［ＬａｎｇおよびＣｏｈｅｎ ２００１年］、特にＴＧＦ−β［Ｆｉｌｌｏｎ Ｓ．等．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｅｒｉｎｅ／Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｈｓｇｋ１ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２年：１２：４７〜５４：Ｌａｎｇ等．２０００年，Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．１９９９年，Ｗａｅｒｎｔｇｅｓ Ｓ等．Ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ ｈｓｇｋ１ ｉｎ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２年，１２：１３５〜１４２］。これに加えて、Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．１９９７年の論文（上記ですでに引用した）によって示されるように、ｈｓｇｋ１の転写は、細胞の収縮によって増加する。糖尿病で生じるように、グルコース濃度が増加すると、細胞の収縮、および／または、ＴＧＦ−βの産生の増加によってｈｓｇｋ１の発現が刺激される［Ｌａｎｇ等．２０００年］。発現されたｈｓｇｋ１は、インスリン様成長因子ＩＧＦ１、インスリンまたは酸化的ストレスによって活性化される［ＫｏｂａｙａｓｈｉおよびＣｏｈｅｎ １９９９年，Ｐａｒｋ等．１９９９年，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等．１９９９年］。
【００１７】
本発明に係る発見によれば、増加したｈｓｇｋ１の発現は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を増加させる。結果として、より多くのグルコースが細胞へ取り込まれ、それに続いて浸透性によって取り込まれた水が、細胞の膨潤の原因となる。これは、水が高いレベルで角膜とレンズに取り込まれる様式であり、それにより、透明度が減少し、白内障が起こる［Ｇｏｎｇ等．２００１年］。
【００１８】
緑内障はまた、同様の様式で発症する可能性があり、それに加えて、結合組織の取り込みによって発症する可能性がある［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．２００１年］。
【００１９】
また、細胞の膨張は、糖尿病性神経障害における原因であるとも疑われている［Ｂｕｒｇ等，Ｓｏｒｂｉｔｏｌ，ｏｓｍｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９８８；８１：６３５〜４０］。しかしながら、Ｇｌｕｔ１活性の増加は、糖尿病においてだけでなく、糖質コルチコイドの影響下でも、または、遺伝学的に決定されたｈｓｇｋ１の過剰活性を示す患者においても起こると予測される［Ｂｕｓｊａｈｎ等，Ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ＳＧＫ１）ｇｅｎｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ４０（３）：２５６〜２６０，２００２年］。実際に、糖質コルチコイドは、緑内障を発生させる［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．２００１年］。糖質コルチコイド投与に関連する緑内障の発症に関与するメカニズムは、これまでわかっていない。特に、ｈｓｇｋ１がこのメカニズムにおいて役割を果たし、それゆえに、緑内障を診断および治療するための標的タンパク質として使用するのに適していることは、これまでわかっていない。
【００２０】
その結果として、驚くべきことに、本発明に係る観察は、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３は、非上皮性のグルコース輸送を増加させ、同様に、上皮性Ｎａ+チャネルを増加させることを実証する。結果として、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３は、重要な診断および治療／予防の結果を伴うはずの、全く新規な病態生理学的な意義を有することが明らかになった。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
従って、本発明は、細胞の膨張を減少させるための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用に関する。
【００２２】
その上、本発明は、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害を治療および／または予防するための医薬を製造するための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用に関する。
【００２３】
この、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の正常な生理活性を阻害する性質のいずれかを有する化学物質であり得る。ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、好ましくは、低分子量の化学物質（「小分子」）、または、タンパク質もしくはペプチドである。特に、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、これら酵素のアンタゴニストであることが可能であり、このようなアンタゴニストは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の基質結合部位をブロックするが、同時に、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３によるいかなる触媒的な変換も受けない。このような場合に適切なアンタゴニストは、好ましくは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の天然基質に構造的に類似している分子、すなわち、特に、リン酸化可能なアミノ酸のセリンおよびスレオニンに構造的に類似している分子である。
【００２４】
スタウロスポリンおよびケレリトリンは、ｈｓｇｋ１の２種の既知の機能的な阻害剤である。それゆえに、特に好ましい実施形態において、スタウロスポリンまたはケレリトリンのいずれかが、病気（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の少なくとも１つの治療および／または予防のためのｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３の機能的な阻害剤として用いられる。
【００２５】
ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子は、転写レベルでｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の発現を活性化する物質と定義される。
【００２６】
実際の活性化合物、すなわちｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３の転写の負の調節因子に加えて、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための本発明に係る医薬はまた、安定剤および／またはキャリアー物質を含んでもよく、これらとして、例えば、スターチ、ラクトース、ステアリン酸、脂肪、ワックス、アルコール またはその他の添加剤、例えば保存剤、色素または矯味矯臭剤が挙げられる。
【００２７】
本医薬は、あらゆる様式で投与することができ、特に、錠剤、顆粒またはカプセルの形態で、または、溶液として経口投与することができる。その他の特に適切な投与形態は、軟膏、チンキまたはスプレーの形態での直接投与（例えば皮膚または眼への）、または、あらゆるタイプの注射（例えば皮下または静脈内）、または、点滴に関する。
【００２８】
その上、本発明は、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列、またはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸が包含し得るｈｓｇｋ１フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に、少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対である。
【００２９】
これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸は、好ましくは、ｈｓｇｋ１遺伝子の少なくとも１つの多型ヌクレオチド、特に、ｈｓｇｋ１遺伝子の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を包含する。
【００３０】
特に好ましい実施形態において、一本鎖または二本鎖核酸は、これに関連して、少なくとも１つの以下のｈｓｇｋ１遺伝子のＳＮＰを包含する：
−ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入、
−ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン６における２０７１位でのＴ／Ｃ置換（ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２）、
−ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソン８における２６１７位でのＴ／Ｃ置換（ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２）。
【００３１】
上述の一本鎖または二本鎖核酸は、好ましくは、以下の方法によって、患者のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡにおける上記ｈｓｇｋ１遺伝子のＳＮＰを検出するのに用いることができる：
−上記核酸を用いてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを直接配列解析すること、
−ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡと上記核酸とを特異的にハイブリダイズさせること、
−ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析、または、ライゲーション分析。
【００３２】
これに関連して、患者のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡは、好ましくは、患者から、特に唾液、血液、組織または細胞から採取された生体サンプルから単離される。
【００３３】
発現されたｈｓｇｋ１遺伝子の活性は、患者のｈｓｇｋ１遺伝子におけるこの多型のバージョンに依存すること、および、その結果として、これら多型の少なくとも１つを含む核酸は、特に、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するのによく適していること、が考えられる。
【００３４】
その上、本発明は、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列、またはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸が包含し得るｈｓｇｋ３フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に、少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対である。
【００３５】
これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸は、好ましくは、ｈｓｇｋ３遺伝子の少なくとも１つの多型ヌクレオチド、特に、ｈｓｇｋ３遺伝子の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を包含する。
【００３６】
上述の一本鎖または二本鎖核酸に加えて、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質、特にｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３の基質に対する特定の抗体も、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の少なくとも１つを発症させる素因を診断するのに適している。これら診断用の抗体は、好ましくは、基質のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含む、ｓｇｋファミリーの（特に、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３の）ヒト相同体のエピトープに対するものである。
【００３７】
例えば、ｈｓｇｋ１遺伝子の個々の遺伝学的な構成によって起こるｈｓｇｋ１タンパク質の過剰発現により、ｈｓｇｋの基質の変換の増加、すなわちｈｓｇｋ１による基質の酵素的リン酸化の増加が起こる可能性がある。同時に、ｈｓｇｋ１タンパク質の過剰発現により、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の刺激が起こると予想され、それにより、最終的に、眼の細胞への高レベルのグルコース取り込み、それに続く浸透性による高レベルの水の取り込みが引き起こされ、結果として、最終的に、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害を発症させる素因が生じる。ｈｓｇｋ１のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型）を含む対象の基質の領域に対する抗体によって、ｈｓｇｋ１基質のより高頻度のリン酸化を検出することは、結果として、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断する代表的な方法ともいえる。
【００３８】
好ましい実施形態において、ユビキチンタンパク質リガーゼＮｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）が、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質として用いられる。このユビキチンタンパク質リガーゼは、ｓｇｋファミリーのヒト相同体によって特異的にリン酸化されたタンパク質である［Ｄｅｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ等，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｄｄ４−２ ｂｙ Ｓｇｋ１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＥＭＢＯ Ｊ．，２００１年；２０：７０５２〜７０５９；Ｓｎｙｄｅｒ等，Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｎｅｄｄ４−２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２年，２７７：５〜８］。ｈｓｇｋ１のリン酸化部位は、コンセンサス配列（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）を有し、式中、Ｒはアルギニン、Ｓはセリン、Ｔはスレオニン、Ｘはいずれかの任意のアミノ酸である。Ｎｅｄｄ４−２２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）において、上述のコンセンサス配列とマッチする２つの可能性のあるｈｓｇｋ１のリン酸化部位、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および、アミノ酸位置４６８におけるセリンが存在する。
【００３９】
それゆえに、上述の、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の少なくとも１つを発症させる素因を診断するための抗体は、好ましくは、基質Ｎｅｄｄ４−２、特に好ましくは、ｈｓｇｋ１の可能性のあるリン酸化部位の配列、すなわちコンセンサス配列（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）を有するＮｅｄｄ４−２タンパク質の領域に対するものである。特に、これらの抗体は、２つの可能性のあるリン酸化部位の少なくとも１つ、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および／または、アミノ酸位置４６８におけるセリンを包含するＮｅｄｄ４−２タンパク質領域に対するものである。
【００４０】
その上、本発明は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の一つを診断するためのキットに関し、本キットは、少なくとも１つの以下の構成要素を含む：
−ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３に対して向けられた抗体、
−一本鎖または二本鎖核酸（ストリンジェントな条件下で、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子とハイブリダイズできる）；特に、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に「ＳＮＰ」を包含する一本鎖または二本鎖核酸、
−ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体；好ましくは、この基質のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型）に対する抗体；特に、Ｎｅｄｄ４またはＮｅｄｄ４−２のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型）に対する抗体。
【００４１】
本発明はまた、多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法に関し、前記治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、本方法は、以下の工程を含む：
ａ）以下を細胞中で異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つを培養する工程（前記少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、および、試験物質の非存在下で、コントロール細胞のアリコートＢを培養すること、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して測定すること。
【００４２】
「多様な試験物質」として、物質ライブラリー、好ましくは小分子ライブラリー、またはタンパク質ライブラリーなどを用いることができる。
【００４３】
工程ａ）において、適切な細胞、好ましくは哺乳動物細胞または細胞系、特にヒト細胞または細胞系は、標準的な方法（例えばエレクトロポレーション、ＣａＰＯ4沈殿、リポフェクションなど）を用いて、Ｇｌｕｔ１ならびにｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３を発現させるのに適した発現カセットを含む適切な発現ベクターでトランスフェクトされる。このような発現カセットは、対象の細胞型において活性であり、標的遺伝子を適切な量で発現することができる適切なプロモーターの制御下で、関連のある標的遺伝子（Ｇｌｕｔ１、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３）のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを含む。発現ベクターは、選択マーカーをさらに含んでもよい。
【００４４】
次に、トランスフェクトされた細胞は、標的遺伝子ｉ）およびii）が発現可能な条件下で培養される。
【００４５】
工程ｂ）において、ａ）のトランスフェクトされた細胞は、異なる細胞のアリコートＡ1〜Ａx、および、コントロール細胞のアリコートＢに分配される。細胞のアリコートＡ1〜Ａxは、それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で培養される。それぞれの場合において細胞のアリコートＡ1〜Ａxに加えられる試験物質は、互いに異なる（それぞれの細胞のアリコートＡ1〜Ａxのインデックス１〜Ｘに対応して）。その一方で、コントロール細胞のアリコートＢは、試験物質の非存在下で培養される。
【００４６】
工程ｃ）において、細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性は、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して定量的に測定される。Ｇｌｕｔ１活性に関して、コントロール細胞のアリコートＢで測定される値より顕著に低い値が測定される細胞のアリコートＡ1〜Ａxには、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３を機能的に阻害することができる試験物質、または、それらの発現を減少させることができる試験物質が加えられていることとなる。このような物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の少なくとも１つを治療するのに適する可能性がある。
【００４７】
その代わりの実施形態は、多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるための、本発明に係るスクリーニング方法であり、前記治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つの治療および／または予防するのに用いられ、本方法は、以下の工程を含む：
ｄ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つにおいて、以下を異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
および、
細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの少なくとも１つにおいて、以下を異種発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、
ｅ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜ＡxおよびＢ1〜Ｂxを培養する工程（前記少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、
ｆ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を比較して測定する工程。
【００４８】
個々の工程ａ）〜ｃ）に関して記載された説明は、本発明に係るその代わりのスクリーニング方法の対応する工程ｄ）〜ｆ）の様式にも適応する。
【００４９】
以下の図１によって、本発明をより詳細に説明する。
【００５０】
２−デオキシグルコースの取り込み（ピコモル／ｌ／１０分／卵母細胞）（相加平均±ＳＥＭ）を、図１の縦座標Ａにプロットする。アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵母細胞に、ＳＧＫ１、ＳＧＫ２、ＳＧＫ３またはタンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ）ｃＲＮＡと共に、または、それらを含まないで、Ｇｌｕｔ１のｃＲＮＡを注入した（実施例１を参照）。
【００５１】
図１は、Ｇｌｕｔ１だけを発現する卵母細胞と比較して、Ｇｌｕｔ１に加えてｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３を発現する卵母細胞で生じる２−デオキシ−グルコースの取り込みの増加を示す。これにより、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３の機能は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を効率的に刺激することが実証される。類似の効果は、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３の代わりにｈｓｇｋ２またはＰＫＢｍｕｔを発現する卵母細胞では観察されない。
【００５２】
以下の実施例によって、本発明をより詳細に説明する。
【００５３】
〔実施例〕
実施例１：アフリカツメガエルの卵母細胞における発現、および、二電極式ボルテージクランプ
正常なＳＧＫ１ ｃＲＮＡ［Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ Ｓ，Ｂａｒｔｈ Ｐ，Ｒａｂｅｒ Ｇ，Ｌａｎｇ Ｆ：Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ａｎｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｎｄ ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９７年；９４：４４４０〜４４４５］、および、構成的に活性なＳＧＫ１（S422DＳＧＫ１）ｃＲＮＡ［ＫｏｂａｙａｓｈｉおよびＣｏｈｅｎ １９９９年］、同様に、正常なＧｌｕｔ１ ｃＲＮＡ［Ｉｓｅｒｏｖｉｃｈ Ｐ，Ｗａｎｇ Ｄ，Ｍａ Ｌ，Ｙａｎｇ Ｈ，Ｚｕｎｉｇａ ＦＡ，Ｐａｓｃｕａｌ ＪＭ，Ｋｕａｎｇ Ｋ，Ｄｅ Ｖｉｖｏ ＤＣ，Ｆｉｓｃｈｂａｒｇ Ｊ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｔ３１０Ｉ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｌｕｔ１ ａｒｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｗｏ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｐｅｒ ｍｏｎｏｍｅｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００２年；２７７：３０９９１−７］をインビトロで合成した。アフリカツメガエルの卵巣の切開、ならびに、卵母細胞の回収および処理は、すでに詳細に説明されている［Ｗａｇｎｅｒ ＣＡ，Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ Ｂ，Ｓｅｔｉａｗａｎ Ｉ，Ｌａｎｇ Ｆ，Ｂｒｏｅｅｒ Ｓ：Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ ｏｏｃｙｔｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２０００年；１０：１〜１２］。卵母細胞に、ヒトＧｌｕｔ１（５ｎｇ）、ヒトS422DＳＧＫ１（７．５ｎｇ）、および／または、アフリカツメガエルのＮｅｄｄ４−２（５ｎｇ）を注入した。コントロール卵母細胞に、水を注入した。それぞれのｃＲＮＡを注射した後、室温で２日間、放射標識したグルコースの取り込みを測定した。コントロールバスの溶液は、９６ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ2、１ｍＭのＭｇＣｌ2、および、５ｍＭのＨＥＰＥＳを含む、ｐＨ７．４。全ての物質は、所定の濃度で用いた。最終溶液をＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ７．４に滴定した。
【００５４】
計算
データは、相加平均±ＳＥＭとして示される；ｎは、試験された卵母細胞の数である。全ての実験は、少なくとも３つの異なる卵母細胞群で行われた。その結果は、スチューデントのｔ検定を用いて有意差に関して試験された。Ｐ＜０．０５の結果だけを、統計学的に有意とみなした。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】Ｇｌｕｔ１だけを発現する卵母細胞と比較して、Ｇｌｕｔ１に加えてｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３を発現する卵母細胞で生じる２−デオキシ−グルコースの取り込みの増加を示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための医薬を生産するための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用に関する。
【０００２】
その他の形態において、本発明は、白内障、緑内障、および／または、糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列を包含する一本鎖または二本鎖核酸、またはそのフラグメントの１つ、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列を包含する一本鎖または二本鎖核酸、もしくはそのフラグメントの１つの使用に関し、同様に、白内障、緑内障、および／または、糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するためのキット（本キットは、上述の核酸を含む）に関する。
【０００３】
その上、本発明は、多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるための様々なスクリーニング方法に関し、前記治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害から選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられる。
【背景技術】
【０００４】
血清および糖質コルチコイド誘導性キナーゼｈｓｇｋ１は、もともと、糖質コルチコイド感受性遺伝子としてクローニングされた［Ｗｅｂｓｔｅｒ等．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｇｋ，ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９３年；１３：２０３１−２０４０］。
【０００５】
それに続く観察により、ｈｓｇｋ１は、多数の刺激の影響下にあることが明らかになっており［Ｌａｎｇ Ｆ，Ｃｏｈｅｎ Ｐ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｉｓｏｆｏｒｍｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ＳＴＫＥ．２００１年１１月１３日；２００１年（１０８）：ＲＥ１７］、このような刺激としては、特に、鉱質コルチコイドの刺激が挙げられる［Ｃｈｅｎ等．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｇｋ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９９年；９６：２５１４〜２５１９，Ｎａｒａｙ−Ｆｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈ等．ｓｇｋ ｉｓ ａｎ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｎａｌ ｃｏｌｌｅｃｔｉｎｇ ｄｕｃｔ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ+ ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９９年；２７４；１６９７３〜１６９７８；Ｓｈｉｇａｅｖ等．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｇｋ ｂｙ ａｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０００年；２７８：Ｆ６１３〜Ｆ６１９；Ｂｒｅｎａｎ ＦＥ，Ｆｕｌｌｅｒ ＰＪ．Ｒａｐｉｄ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ｓｇｋ）ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０００年；３０；１６６：１２９〜３６；Ｃｏｗｌｉｎｇ ＲＴ，Ｂｉｒｎｂｏｉｍ ＨＣ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ｓｇｋ）ｍＲＮＡ ｉｓ ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＧＭ−ＣＳＦ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．２０００年：６７：２４０〜２４８］。
【０００６】
ｈｓｇｋ１は、インスリン様成長因子ＩＧＦ１によって、インスリンによって、ならびに、シグナルカスケードを経た、ホスホイノシトール−３−キナーゼ（ＰＩ３キナーゼ）、および、ホスホイノシトール依存性キナーゼＰＤＫ１による酸化的ストレスによってによって刺激される［Ｐａｒｋ等．Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ（ＳＧＫ）ｉｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｔｈｅ ＰＩ３−ｋｉｎａｓｅ−ｓｔｉｍｕｌａｔｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ，ＥＭＢＯ Ｊ １９９９年；１８：３０２４〜３０３３；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｎｏｖｅｌ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９９９年；３４４：１８９〜１９７］。ＰＤＫ１によるｈｓｇｋ１活性化は、４２２位のセリンのリン酸化を伴う。このセリンからアスパラギン酸への突然変異（S422DＳＧＫ１）により、構成的に活性なキナーゼが生じる［Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｔ，Ｃｏｈｅｎ Ｐ：Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｂｙ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｔｈａｔ ａｃｔｉｖａｔｅ ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｉｄｅ ３−ｋｉｎａｓｅ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ３−ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ−１（ＰＤＫｌ）ａｎｄ ＰＤＫ２．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．１９９９年；３３９：３１９〜３２８］。
【０００７】
初期の研究が示すように、ｈｓｇｋ１は、腎臓上皮性Ｎａ+チャネルの協力な刺激物質である［Ｄｅ ｌａ Ｒｏｓａ等．Ｔｈｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｋｉｎａｓｅ ｓｇｋ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｏｆ Ｘｅｎｏｐｕｓ ｏｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９９年；２７４：３７８３４〜３７８３９；Ｂｏｅｈｍｅｒ等．Ｔｈｅ Ｓｈｒｉｎｋａｇｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｎａ+Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ ｏｆ Ｒａｔ
Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｉｔｓ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｒＥＮａＣ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０００年；１０：１８７〜１９４；Ｌａｎｇ等．Ｄｅｒａｎｇｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｋｉｎａｓｅ ｈｓｇｋ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２０００年；９７：８１５７〜８１６２］。ｈｓｇｋ１は、上皮性Ｎａ+チャネルＥＮａＣを発現しない多数の組織で見出されているため、ｈｓｇｋ１の機能を、Ｎａ+チャネルを調節する機能に限定すべきではない［Ｋｌｉｎｇｅｌ等．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｈ−ｓｇｋ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｔｉｓｓｕｅ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ（Ｇａｓｔｒｏｉｎｔ．Ｌｉｖｅｒ−Ｐｈｙｓｉｏｌ．）２０００年；２７９：Ｇ９９８〜Ｇ１００２；Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ａｎｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｎｄ ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９７年：９４：４４４０〜４４４５；Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．ｈ−ｓｇｋ Ｓｅｒｉｎｅ−Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ａｓ ｅａｒｌｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ＴＧＦ−β ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ １９９９年；１１６：１０８１〜１０８８］。
【０００８】
ｈｓｇｋ１は、まだ解明されていない様式で、その他の多数のシグナル伝達経路またはこれら経路の構成要素を調節する可能性があるということから、ｈｓｇｋ１およびそのヒト相同体は、多数の病気を診断するかなりの可能性を有すると予測される。特にＤＥ１９７０８１７３（Ａ１）により、ｈｓｇｋ１は、多くの病気（例えば高ナトリウム血症、低ナトリウム血症、糖尿病、腎機能不全、過剰代謝、肝性脳症、および、細菌またはウイルス感染、この場合、細胞容量の変化が、重要な病態生理学的な役割を果たす）に関する診断に用いることができることは明らかである。
【０００９】
ＷＯ００／６２７８１では、ｈｓｇｋ１は、内皮性Ｎａ+チャネルを活性化し、それにより、腎臓のＮａ+再吸収の増加が起こることが報告されている。この腎臓のＮａ+再吸収の増加は高血圧を伴うため、この文献において、ｈｓｇｋ１の発現の増加が高血圧をもたらし、一方、ｈｓｇｋ１の発現の減少が最終的には低血圧をもたらすと予想されていた。
【００１０】
ＤＥ１００４２１３７はまた、ヒト相同体ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の過剰発現または過剰活性、ＥＮａＣの過活性化、それにより生じる腎臓のＮａ+再吸収の増加、および、それにより発症する高血圧に、同様の関連性があることを報告している。その上、この文献では、ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３キナーゼが、動脈性高血圧に関して診断上の可能性があることをすでに論じている。
【００１１】
ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２は、ｈｓｇｋ１遺伝子における個々のヌクレオチドの２つの異なる多型（単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ））の存在と、遺伝学的に決定された高血圧に関する素因との関連を開示している。これら多型は、ｈｓｇｋ１遺伝子において、イントロン６における多型（Ｔ→Ｃ）と、エキソン８における多型（Ｃ→Ｔ）である。
【００１２】
ｓｇｋ１は多数の組織で発現され、ｓｇｋ１は多数の未知の基質を有すると推測されるため、ｓｇｋファミリーのヒト相同体、特にｈｓｇｋ１遺伝子（ＮＭ００５６２７）、ｈｓｇｋ２遺伝子およびｈｓｇｋ３遺伝子（ＡＦ１６９０３５）の機能と、その他の病気の発症との間には、さらなる相関性があると予測することができる。これらｓｇｋ１が関与するその他の特定の病気の相関を発見することにより、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の遺伝子の多型領域を含む核酸が得られる可能性があり、このような領域は、対応するｓｇｋタンパク質の機能または発現に影響を与え、これらその他の病気に関する素因を診断するのに用いられる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
それゆえに、本発明の目的は、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の機能と、新しい病気との間のさらなる相関性を発見することであり、これにより、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の遺伝子の多型領域を含む核酸の診断的な使用に関する新規な可能性を提供することができる。
【００１４】
この目的は、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３が、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１を強力に刺激するという驚くべき発見によってによって達成された（図１を参照）。特に、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１は、特に眼の様々な細胞へのグルコースの取り込みを介在する［Ｂｕｓｉｋ等．Ｇｌｕｃｏｓｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｉｎｎｅｒ ａｎｄ ｏｕｔｅｒ ｂｌｏｏｄ−ｒｅｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００２年；４３：２３５６〜６３；Ｔａｋａｔａ Ｋ，Ｋａｓａｈａｒａ Ｔ，Ｋａｓａｈａｒａ Ｍ，Ｅｚａｋｉ Ｏ，Ｈｉｒａｎｏ Ｈ．Ｕｌｔｒａｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ／ＨｅｐＧ２−ｔｙｐｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ（ＧＬＵＴ１）ｉｎ ｔｈｅ ｃｉｌｉａｒｙ ｂｏｄｙ ａｎｄ ｉｒｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔ ｅｙｅ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃ．１９９１年；３２：１６５９〜６６］。浸透圧により水分がグルコースと一緒に取り込まれるが、これは、Ｇｌｕｔ１活性の増加が、細胞の膨張に至ることを意味する。その結果として、Ｇｌｕｔ１活性の増加は、白内障の発症に至る可能性がある［Ｇｏｎｇ等．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｔａｒａｃｔｏｕｓ ｍａｃｒｏｐｈｔｈａｌｍｉａ ｉｎ ｍｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａｎ ａｃｔｉｖｅ ＭＥＫ１ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅｎｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００１年：４２：５３９〜４８］。これに加えて、Ｇｌｕｔ１の過剰発現は、結合組織のタンパク質の形成と沈着を促進することが示されている［Ａｙｏ等．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｍＲＮＡ ｉｎ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｇｒｏｗｎ ｉｎ ｈｉｇｈ−ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｄｉｕｍ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９１年；２６０：Ｆ１８５〜１９１；Ｈｅｉｌｉｇ等．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｉｎ ｒａｔ ｍｅｓａｎｇｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ａ ｎｏｒｍａｌ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｉｌｉｅｕ ｍｉｍｉｃｓ ｔｈｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９５年；９６：１８０２〜１８１４］。このような結合組織のタンパク質の沈着は、眼の流体の流通を妨害し、眼内の圧力の増加に至り、その結果として網膜にダメージを与える［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｙｏｃｉｌｉｎ（ＭＹＯＣ）ｇｌａｕｃｏｍａ ｇｅｎｅ ｉｎ ｍｏｎｋｅｙ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｓｔｅｒｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｃｕｌａｒ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００１年：４２（１）：１４５〜５２，Ｕｅｄａ等．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｃｉｌｉｎ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｊｕｘｔａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｙｅｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００２年：４３：１０６８〜７６］。実際に、糖質コルチコイドは、ＳＧＫ１の発現を刺激し（上記を参照）、同時に緑内障の発症を引き起こす［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．２００１年］。しかしながら、これまで、ｈｓｇｋ１が原因となる役割を有すると考えられることは決してなかった。
【００１５】
上述の妨害は、ｈｓｇｋ１活性が増加したあらゆる状況において、すなわち上述のホルモンのいずれかが過剰に存在する場合に生じると予想される。血圧の増加と相互関係を示すｈｓｇｋ１遺伝子の特定の多型［Ｂｕｓｊａｈｎ等．Ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ＳＧＫ１）ｇｅｎｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ４０（３）：２５６〜２６０，２００２年］は、同時に、白内障および緑内障の発症の増加をもたらす可能性がある。また、同じ遺伝子改変が、早期に出現する白内障および／または緑内障と関連性を示すはずである。
【００１６】
本発明の発見により、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の調節における全く新規なメカニズムが明らかになる。それゆえに、ｈｓｇｋ１活性の増加は、細胞へのグルコースの取り込みの増加をもたらすと予測される。ｈｓｇｋ１の転写は、以下のものによって刺激される：血清［Ｗｅｂｓｔｅｒ等．１９９３年］、糖質コルチコイド［ＢｒｅｎａｎおよびＦｕｌｌｅｒ ２０００年，Ｗｅｂｓｔｅｒ等．１９９３年］、鉱質コルチコイド［Ｃｈｅｎ等．１９９９年，Ｎａｒａｙ−Ｆｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈ等．１９９９年，Ｓｈｉｇａｅｖ等．２０００年，ＢｒｅｎｎａｎおよびＦｕｌｌｅｒ ２０００年，ＣｏｗｌｉｎｇおよびＢｉｒｎｂｏｉｍ ２０００年］、ゴナドトロピン［Ａｌｌｉｓｔｏｎ等．Ｆｏｌｌｉｃｌｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ／ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｒａｔ ｏｖａｒｉａｎ ｇｒａｎｕｌｏｓａ ｃｅｌｌｓ：ａ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｐ１ ｆａｍｉｌｙ ｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１９９７年；１１：１９３４〜１９４９；Ａｌｌｉｓｔｏｎ等．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ／ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ ｏｖａｒｙ：ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２０００年：１４１：３８５〜３９５；Ｇｏｎｚａｌｅｚ−Ｒｏｂａｙｎａ等．Ｆｏｌｌｉｃｌｅ−Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ（ＦＳＨ）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｂ（ＰＫＢ／Ａｋｔ）ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−Ｉｎｄｕｃｅｄ ｋｉｎａｓｅ（Ｓｇｋ）：ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ Ａ ｋｉｎａｓｅ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ＦＳＨ ｉｎ ｇｒａｎｕｌｏｓａ ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０００年；１４：１２８３〜１３００，Ｒｉｃｈａｒｄｓ等．Ｏｖａｒｉａｎ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ：ａ ｃａｓｃａｄｅ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｈｏｒｍｏｎｅｓ，ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌｓ，ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ．Ｒｅｃｅｎｔ Ｐｒｏｇ Ｈｏｒｍ Ｒｅｓ．１９９５年：５０：２２３〜２５４］、および、多数のサイトカイン［ＬａｎｇおよびＣｏｈｅｎ ２００１年］、特にＴＧＦ−β［Ｆｉｌｌｏｎ Ｓ．等．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｅｒｉｎｅ／Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｈｓｇｋ１ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｖｉｒａｌ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２年：１２：４７〜５４：Ｌａｎｇ等．２０００年，Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．１９９９年，Ｗａｅｒｎｔｇｅｓ Ｓ等．Ｅｘｃｅｓｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ ｈｓｇｋ１ ｉｎ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２年，１２：１３５〜１４２］。これに加えて、Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等．１９９７年の論文（上記ですでに引用した）によって示されるように、ｈｓｇｋ１の転写は、細胞の収縮によって増加する。糖尿病で生じるように、グルコース濃度が増加すると、細胞の収縮、および／または、ＴＧＦ−βの産生の増加によってｈｓｇｋ１の発現が刺激される［Ｌａｎｇ等．２０００年］。発現されたｈｓｇｋ１は、インスリン様成長因子ＩＧＦ１、インスリンまたは酸化的ストレスによって活性化される［ＫｏｂａｙａｓｈｉおよびＣｏｈｅｎ １９９９年，Ｐａｒｋ等．１９９９年，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等．１９９９年］。
【００１７】
本発明に係る発見によれば、増加したｈｓｇｋ１の発現は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を増加させる。結果として、より多くのグルコースが細胞へ取り込まれ、それに続いて浸透性によって取り込まれた水が、細胞の膨潤の原因となる。これは、水が高いレベルで角膜とレンズに取り込まれる様式であり、それにより、透明度が減少し、白内障が起こる［Ｇｏｎｇ等．２００１年］。
【００１８】
緑内障はまた、同様の様式で発症する可能性があり、それに加えて、結合組織の取り込みによって発症する可能性がある［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．２００１年］。
【００１９】
また、細胞の膨張は、糖尿病性神経障害における原因であるとも疑われている［Ｂｕｒｇ等，Ｓｏｒｂｉｔｏｌ，ｏｓｍｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９８８；８１：６３５〜４０］。しかしながら、Ｇｌｕｔ１活性の増加は、糖尿病においてだけでなく、糖質コルチコイドの影響下でも、または、遺伝学的に決定されたｈｓｇｋ１の過剰活性を示す患者においても起こると予測される［Ｂｕｓｊａｈｎ等，Ｓｅｒｕｍ− ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（ＳＧＫ１）ｇｅｎｅ ａｎｄ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ４０（３）：２５６〜２６０，２００２年］。実際に、糖質コルチコイドは、緑内障を発生させる［Ｆｉｎｇｅｒｔ等．２００１年］。糖質コルチコイド投与に関連する緑内障の発症に関与するメカニズムは、これまでわかっていない。特に、ｈｓｇｋ１がこのメカニズムにおいて役割を果たし、それゆえに、緑内障を診断および治療するための標的タンパク質として使用するのに適していることは、これまでわかっていない。
【００２０】
その結果として、驚くべきことに、本発明に係る観察は、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３は、非上皮性のグルコース輸送を増加させ、同様に、上皮性Ｎａ+チャネルを増加させることを実証する。結果として、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３は、重要な診断および治療／予防の結果を伴うはずの、全く新規な病態生理学的な意義を有することが明らかになった。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
従って、本発明は、細胞の膨張を減少させるための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用に関する。
【００２２】
その上、本発明は、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害を治療および／または予防するための医薬を製造するための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用に関する。
【００２３】
この、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の正常な生理活性を阻害する性質のいずれかを有する化学物質であり得る。ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、好ましくは、低分子量の化学物質（「小分子」）、または、タンパク質もしくはペプチドである。特に、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、これら酵素のアンタゴニストであることが可能であり、このようなアンタゴニストは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の基質結合部位をブロックするが、同時に、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３によるいかなる触媒的な変換も受けない。このような場合に適切なアンタゴニストは、好ましくは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の天然基質に構造的に類似している分子、すなわち、特に、リン酸化可能なアミノ酸のセリンおよびスレオニンに構造的に類似している分子である。
【００２４】
スタウロスポリンおよびケレリトリンは、ｈｓｇｋ１の２種の既知の機能的な阻害剤である。それゆえに、特に好ましい実施形態において、スタウロスポリンまたはケレリトリンのいずれかが、病気（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の少なくとも１つの治療および／または予防のためのｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３の機能的な阻害剤として用いられる。
【００２５】
ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子は、転写レベルでｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の発現を活性化する物質と定義される。
【００２６】
実際の活性化合物、すなわちｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３の転写の負の調節因子に加えて、白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための本発明に係る医薬はまた、安定剤および／またはキャリアー物質を含んでもよく、これらとして、例えば、スターチ、ラクトース、ステアリン酸、脂肪、ワックス、アルコール またはその他の添加剤、例えば保存剤、色素または矯味矯臭剤が挙げられる。
【００２７】
本医薬は、あらゆる様式で投与することができ、特に、錠剤、顆粒またはカプセルの形態で、または、溶液として経口投与することができる。その他の特に適切な投与形態は、軟膏、チンキまたはスプレーの形態での直接投与（例えば皮膚または眼への）、または、あらゆるタイプの注射（例えば皮下または静脈内）、または、点滴に関する。
【００２８】
その上、本発明は、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列、またはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸が包含し得るｈｓｇｋ１フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に、少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対である。
【００２９】
これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸は、好ましくは、ｈｓｇｋ１遺伝子の少なくとも１つの多型ヌクレオチド、特に、ｈｓｇｋ１遺伝子の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を包含する。
【００３０】
特に好ましい実施形態において、一本鎖または二本鎖核酸は、これに関連して、少なくとも１つの以下のｈｓｇｋ１遺伝子のＳＮＰを包含する：
−ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入、
−ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン６における２０７１位でのＴ／Ｃ置換（ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２）、
−ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソン８における２６１７位でのＴ／Ｃ置換（ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２）。
【００３１】
上述の一本鎖または二本鎖核酸は、好ましくは、以下の方法によって、患者のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡにおける上記ｈｓｇｋ１遺伝子のＳＮＰを検出するのに用いることができる：
−上記核酸を用いてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを直接配列解析すること、
−ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡと上記核酸とを特異的にハイブリダイズさせること、
−ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析、または、ライゲーション分析。
【００３２】
これに関連して、患者のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡは、好ましくは、患者から、特に唾液、血液、組織または細胞から採取された生体サンプルから単離される。
【００３３】
発現されたｈｓｇｋ１遺伝子の活性は、患者のｈｓｇｋ１遺伝子におけるこの多型のバージョンに依存すること、および、その結果として、これら多型の少なくとも１つを含む核酸は、特に、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するのによく適していること、が考えられる。
【００３４】
その上、本発明は、白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列、またはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸が包含し得るｈｓｇｋ３フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に、少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対である。
【００３５】
これに関連して、一本鎖または二本鎖核酸は、好ましくは、ｈｓｇｋ３遺伝子の少なくとも１つの多型ヌクレオチド、特に、ｈｓｇｋ３遺伝子の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を包含する。
【００３６】
上述の一本鎖または二本鎖核酸に加えて、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質、特にｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３の基質に対する特定の抗体も、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の少なくとも１つを発症させる素因を診断するのに適している。これら診断用の抗体は、好ましくは、基質のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含む、ｓｇｋファミリーの（特に、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３の）ヒト相同体のエピトープに対するものである。
【００３７】
例えば、ｈｓｇｋ１遺伝子の個々の遺伝学的な構成によって起こるｈｓｇｋ１タンパク質の過剰発現により、ｈｓｇｋの基質の変換の増加、すなわちｈｓｇｋ１による基質の酵素的リン酸化の増加が起こる可能性がある。同時に、ｈｓｇｋ１タンパク質の過剰発現により、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の刺激が起こると予想され、それにより、最終的に、眼の細胞への高レベルのグルコース取り込み、それに続く浸透性による高レベルの水の取り込みが引き起こされ、結果として、最終的に、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害を発症させる素因が生じる。ｈｓｇｋ１のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型）を含む対象の基質の領域に対する抗体によって、ｈｓｇｋ１基質のより高頻度のリン酸化を検出することは、結果として、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断する代表的な方法ともいえる。
【００３８】
好ましい実施形態において、ユビキチンタンパク質リガーゼＮｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）が、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質として用いられる。このユビキチンタンパク質リガーゼは、ｓｇｋファミリーのヒト相同体によって特異的にリン酸化されたタンパク質である［Ｄｅｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ等，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｄｄ４−２ ｂｙ Ｓｇｋ１ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＥＭＢＯ Ｊ．，２００１年；２０：７０５２〜７０５９；Ｓｎｙｄｅｒ等，Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｎｅｄｄ４−２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００２年，２７７：５〜８］。ｈｓｇｋ１のリン酸化部位は、コンセンサス配列（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）を有し、式中、Ｒはアルギニン、Ｓはセリン、Ｔはスレオニン、Ｘはいずれかの任意のアミノ酸である。Ｎｅｄｄ４−２２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）において、上述のコンセンサス配列とマッチする２つの可能性のあるｈｓｇｋ１のリン酸化部位、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および、アミノ酸位置４６８におけるセリンが存在する。
【００３９】
それゆえに、上述の、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の少なくとも１つを発症させる素因を診断するための抗体は、好ましくは、基質Ｎｅｄｄ４−２、特に好ましくは、ｈｓｇｋ１の可能性のあるリン酸化部位の配列、すなわちコンセンサス配列（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）を有するＮｅｄｄ４−２タンパク質の領域に対するものである。特に、これらの抗体は、２つの可能性のあるリン酸化部位の少なくとも１つ、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および／または、アミノ酸位置４６８におけるセリンを包含するＮｅｄｄ４−２タンパク質領域に対するものである。
【００４０】
その上、本発明は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の一つを診断するためのキットに関し、本キットは、少なくとも１つの以下の構成要素を含む：
−ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３に対して向けられた抗体、
−一本鎖または二本鎖核酸（ストリンジェントな条件下で、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子とハイブリダイズできる）；特に、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に「ＳＮＰ」を包含する一本鎖または二本鎖核酸、
−ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体；好ましくは、この基質のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型）に対する抗体；特に、Ｎｅｄｄ４またはＮｅｄｄ４−２のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型）に対する抗体。
【００４１】
本発明はまた、多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法に関し、前記治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、本方法は、以下の工程を含む：
ａ）以下を細胞中で異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つを培養する工程（前記少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、および、試験物質の非存在下で、コントロール細胞のアリコートＢを培養すること、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して測定すること。
【００４２】
「多様な試験物質」として、物質ライブラリー、好ましくは小分子ライブラリー、またはタンパク質ライブラリーなどを用いることができる。
【００４３】
工程ａ）において、適切な細胞、好ましくは哺乳動物細胞または細胞系、特にヒト細胞または細胞系は、標準的な方法（例えばエレクトロポレーション、ＣａＰＯ4沈殿、リポフェクションなど）を用いて、Ｇｌｕｔ１ならびにｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３を発現させるのに適した発現カセットを含む適切な発現ベクターでトランスフェクトされる。このような発現カセットは、対象の細胞型において活性であり、標的遺伝子を適切な量で発現することができる適切なプロモーターの制御下で、関連のある標的遺伝子（Ｇｌｕｔ１、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３）のゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを含む。発現ベクターは、選択マーカーをさらに含んでもよい。
【００４４】
次に、トランスフェクトされた細胞は、標的遺伝子ｉ）およびii）が発現可能な条件下で培養される。
【００４５】
工程ｂ）において、ａ）のトランスフェクトされた細胞は、異なる細胞のアリコートＡ1〜Ａx、および、コントロール細胞のアリコートＢに分配される。細胞のアリコートＡ1〜Ａxは、それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で培養される。それぞれの場合において細胞のアリコートＡ1〜Ａxに加えられる試験物質は、互いに異なる（それぞれの細胞のアリコートＡ1〜Ａxのインデックス１〜Ｘに対応して）。その一方で、コントロール細胞のアリコートＢは、試験物質の非存在下で培養される。
【００４６】
工程ｃ）において、細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性は、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して定量的に測定される。Ｇｌｕｔ１活性に関して、コントロール細胞のアリコートＢで測定される値より顕著に低い値が測定される細胞のアリコートＡ1〜Ａxには、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３を機能的に阻害することができる試験物質、または、それらの発現を減少させることができる試験物質が加えられていることとなる。このような物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害の病気の少なくとも１つを治療するのに適する可能性がある。
【００４７】
その代わりの実施形態は、多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるための、本発明に係るスクリーニング方法であり、前記治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つの治療および／または予防するのに用いられ、本方法は、以下の工程を含む：
ｄ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つにおいて、以下を異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
および、
細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの少なくとも１つにおいて、以下を異種発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、
ｅ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜ＡxおよびＢ1〜Ｂxを培養する工程（前記少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、
ｆ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を比較して測定する工程。
【００４８】
個々の工程ａ）〜ｃ）に関して記載された説明は、本発明に係るその代わりのスクリーニング方法の対応する工程ｄ）〜ｆ）の様式にも適応する。
【００４９】
以下の図１によって、本発明をより詳細に説明する。
【００５０】
２−デオキシグルコースの取り込み（ピコモル／ｌ／１０分／卵母細胞）（相加平均±ＳＥＭ）を、図１の縦座標Ａにプロットする。アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵母細胞に、ＳＧＫ１、ＳＧＫ２、ＳＧＫ３またはタンパク質キナーゼＢ（ＰＫＢ）ｃＲＮＡと共に、または、それらを含まないで、Ｇｌｕｔ１のｃＲＮＡを注入した（実施例１を参照）。
【００５１】
図１は、Ｇｌｕｔ１だけを発現する卵母細胞と比較して、Ｇｌｕｔ１に加えてｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３を発現する卵母細胞で生じる２−デオキシ−グルコースの取り込みの増加を示す。これにより、ｈｓｇｋ１およびｈｓｇｋ３の機能は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を効率的に刺激することが実証される。類似の効果は、ｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３の代わりにｈｓｇｋ２またはＰＫＢｍｕｔを発現する卵母細胞では観察されない。
【００５２】
以下の実施例によって、本発明をより詳細に説明する。
【００５３】
〔実施例〕
実施例１：アフリカツメガエルの卵母細胞における発現、および、二電極式ボルテージクランプ
正常なＳＧＫ１ ｃＲＮＡ［Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ Ｓ，Ｂａｒｔｈ Ｐ，Ｒａｂｅｒ Ｇ，Ｌａｎｇ Ｆ：Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ａｎｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｎｄ ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｖｏｌｕｍｅ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９７年；９４：４４４０〜４４４５］、および、構成的に活性なＳＧＫ１（S422DＳＧＫ１）ｃＲＮＡ［ＫｏｂａｙａｓｈｉおよびＣｏｈｅｎ １９９９年］、同様に、正常なＧｌｕｔ１ ｃＲＮＡ［Ｉｓｅｒｏｖｉｃｈ Ｐ，Ｗａｎｇ Ｄ，Ｍａ Ｌ，Ｙａｎｇ Ｈ，Ｚｕｎｉｇａ ＦＡ，Ｐａｓｃｕａｌ ＪＭ，Ｋｕａｎｇ Ｋ，Ｄｅ Ｖｉｖｏ ＤＣ，Ｆｉｓｃｈｂａｒｇ Ｊ．Ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｔ３１０Ｉ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｌｕｔ１ ａｒｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｗｏ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｐｅｒ ｍｏｎｏｍｅｒ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００２年；２７７：３０９９１−７］をインビトロで合成した。アフリカツメガエルの卵巣の切開、ならびに、卵母細胞の回収および処理は、すでに詳細に説明されている［Ｗａｇｎｅｒ ＣＡ，Ｆｒｉｅｄｒｉｃｈ Ｂ，Ｓｅｔｉａｗａｎ Ｉ，Ｌａｎｇ Ｆ，Ｂｒｏｅｅｒ Ｓ：Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ ｏｏｃｙｔｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２０００年；１０：１〜１２］。卵母細胞に、ヒトＧｌｕｔ１（５ｎｇ）、ヒトS422DＳＧＫ１（７．５ｎｇ）、および／または、アフリカツメガエルのＮｅｄｄ４−２（５ｎｇ）を注入した。コントロール卵母細胞に、水を注入した。それぞれのｃＲＮＡを注射した後、室温で２日間、放射標識したグルコースの取り込みを測定した。コントロールバスの溶液は、９６ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ2、１ｍＭのＭｇＣｌ2、および、５ｍＭのＨＥＰＥＳを含む、ｐＨ７．４。全ての物質は、所定の濃度で用いた。最終溶液をＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ７．４に滴定した。
【００５４】
計算
データは、相加平均±ＳＥＭとして示される；ｎは、試験された卵母細胞の数である。全ての実験は、少なくとも３つの異なる卵母細胞群で行われた。その結果は、スチューデントのｔ検定を用いて有意差に関して試験された。Ｐ＜０．０５の結果だけを、統計学的に有意とみなした。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】Ｇｌｕｔ１だけを発現する卵母細胞と比較して、Ｇｌｕｔ１に加えてｈｓｇｋ１またはｈｓｇｋ３を発現する卵母細胞で生じる２−デオキシ−グルコースの取り込みの増加を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の膨張を減少させるための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用。
【請求項２】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防用医薬を生産するための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用。
【請求項３】
ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、スタウロスポリンまたはケレリトリンであることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子を含む医薬。
【請求項５】
白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列、もしくはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項６】
一本鎖または二本鎖核酸は、少なくとも１つのｈｓｇｋ１遺伝子の多型ヌクレオチド、特にｈｓｇｋ１遺伝子の「ＳＮＰ」を包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ｈｓｇｋ１遺伝子のＳＮＰは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン６における２０７１位でのＴ／Ｃ置換、および、ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソン８における２６１７位でのＴ／Ｃ置換からなるＳＮＰの群より選択されることを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列を包含する一本鎖または二本鎖核酸、もしくはそのフラグメントの一つの使用。
【請求項９】
一本鎖または二本鎖核酸は、ｈｓｇｋ３遺伝子、特にｈｓｇｋ１遺伝子の「ＳＮＰ」の少なくとも１つの多型ヌクレオチドを包含することを特徴とする、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
疾病（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の少なくとも１つを発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体の使用（該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである）。
【請求項１１】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質は、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）であることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
疾病（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の一つを診断するためのキットであって、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３に対する抗体を含む、または、ストリンジェントな条件下で、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、もしくは、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子とハイブリダイズできる核酸を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、上記キット。
【請求項１３】
核酸は、ストリンジェントな条件下で、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に「ＳＮＰ」を包含する、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子のＤＮＡ領域とハイブリダイズできることを特徴とする、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ａ）以下を細胞中で異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、および、いずれの試験物質の非存在下で、コントロール細胞のアリコートＢを培養すること、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【請求項１５】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ｄ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つにおいて、以下を異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
および、
細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの少なくとも１つにおいて、以下を異種発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、
ｅ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜ＡxおよびＢ1〜Ｂxを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、
ｆ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防用医薬を製造するための、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニストの使用（該アンタゴニストは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の天然基質に構造的に類似している）、または、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用。
【請求項２】
アンタゴニストは、リン酸化可能なアミノ酸のセリンまたはトレオニンに構造的に類似している、請求項２に記載のｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニストの使用。
【請求項３】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニスト（該アンタゴニストは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の天然基質に構造的に類似している）を含む、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子を含む医薬。
【請求項４】
アンタゴニストは、リン酸化可能なアミノ酸のセリンまたはトレオニンに構造的に類似している、請求項３に記載のｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニストを含む医薬。
【請求項５】
白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、ｈｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列、もしくはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項６】
一本鎖または二本鎖核酸は、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子の配列、もしくはそのフラグメントの一つを包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ｈｓｇｋ１遺伝子は、少なくとも１つの多型ヌクレオチド、特にｈｓｇｋ１遺伝子の「ＳＮＰ」を包含することを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
ｈｓｇｋ１遺伝子の多型ヌクレオチドは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン６における２０７１位でのＴ／Ｃ置換、および、ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソン８における２６１７位でのＴ／Ｃ置換からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
一本鎖または二本鎖核酸は、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子の配列、またはそのフラグメントの一つを包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項１０】
ｈｓｇｋ１遺伝子は、少なくとも１つのｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に“ＳＮＰ”を包含することを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
疾病（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の少なくとも１つを発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体の使用であって、該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである、上記使用。
【請求項１２】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質は、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）であることを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
病気（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の一つを診断するためのキットであって、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３に対する抗体を含む、または、ストリンジェントな条件下で、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、もしくは、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子とハイブリダイズできる核酸を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、上記キット。
【請求項１４】
核酸は、ストリンジェントな条件下で、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に“ＳＮＰ”を包含する、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子のＤＮＡ領域とハイブリダイズできることを特徴とする、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ａ）以下を細胞中で異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、インデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、および、いずれの試験物質の非存在下で、コントロール細胞のアリコートＢを培養する工程、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【請求項１６】
工程ａ）において、ｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１に加えて、または、その代わりに付随して共発現され、工程ｃ）において、細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）のリン酸化の程度は、コントロール細胞のアリコートＢと比較して測定される、請求項１５に記載のスクリーニング方法。
【請求項１７】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ａ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つにおいて、以下を異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
および、
細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの少なくとも１つにおいて、以下を異種発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜ＡxおよびＢ1〜Ｂxを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【請求項１８】
工程ａ）において、ｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１に加えて、または、その代わりに、細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの両方で付随して共発現され、工程ｃ）において、細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）のリン酸化の程度は、細胞のアリコートＢ1〜Ｂxと比較して測定される、請求項１７に記載のスクリーニング方法。
【請求項１】
細胞の膨張を減少させるための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用。
【請求項２】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防用医薬を生産するための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用。
【請求項３】
ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤は、スタウロスポリンまたはケレリトリンであることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質の機能的な阻害剤、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子を含む医薬。
【請求項５】
白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１配列、もしくはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項６】
一本鎖または二本鎖核酸は、少なくとも１つのｈｓｇｋ１遺伝子の多型ヌクレオチド、特にｈｓｇｋ１遺伝子の「ＳＮＰ」を包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ｈｓｇｋ１遺伝子のＳＮＰは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン６における２０７１位でのＴ／Ｃ置換、および、ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソン８における２６１７位でのＴ／Ｃ置換からなるＳＮＰの群より選択されることを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３配列を包含する一本鎖または二本鎖核酸、もしくはそのフラグメントの一つの使用。
【請求項９】
一本鎖または二本鎖核酸は、ｈｓｇｋ３遺伝子、特にｈｓｇｋ１遺伝子の「ＳＮＰ」の少なくとも１つの多型ヌクレオチドを包含することを特徴とする、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
疾病（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の少なくとも１つを発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体の使用（該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである）。
【請求項１１】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質は、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）であることを特徴とする、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
疾病（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の一つを診断するためのキットであって、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３に対する抗体を含む、または、ストリンジェントな条件下で、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、もしくは、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子とハイブリダイズできる核酸を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、上記キット。
【請求項１３】
核酸は、ストリンジェントな条件下で、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に「ＳＮＰ」を包含する、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子のＤＮＡ領域とハイブリダイズできることを特徴とする、請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ａ）以下を細胞中で異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、および、いずれの試験物質の非存在下で、コントロール細胞のアリコートＢを培養すること、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【請求項１５】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ｄ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つにおいて、以下を異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
および、
細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの少なくとも１つにおいて、以下を異種発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、
ｅ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜ＡxおよびＢ1〜Ｂxを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、
ｆ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防用医薬を製造するための、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニストの使用（該アンタゴニストは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の天然基質に構造的に類似している）、または、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子の使用。
【請求項２】
アンタゴニストは、リン酸化可能なアミノ酸のセリンまたはトレオニンに構造的に類似している、請求項２に記載のｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニストの使用。
【請求項３】
白内障、緑内障または糖尿病性神経障害の治療および／または予防のための、ｈｓｇｋ１タンパク質もしくはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニスト（該アンタゴニストは、ｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質の天然基質に構造的に類似している）を含む、または、ｈｓｇｋ１遺伝子もしくはｈｓｇｋ３遺伝子の転写の負の調節因子を含む医薬。
【請求項４】
アンタゴニストは、リン酸化可能なアミノ酸のセリンまたはトレオニンに構造的に類似している、請求項３に記載のｈｓｇｋ１タンパク質またはｈｓｇｋ３タンパク質のアンタゴニストを含む医薬。
【請求項５】
白内障、緑内障および／または糖尿病性神経障害を発症させる素因を診断するための、ｈｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列、もしくはそのフラグメントの一つを包含する一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項６】
一本鎖または二本鎖核酸は、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子の配列、もしくはそのフラグメントの一つを包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
ｈｓｇｋ１遺伝子は、少なくとも１つの多型ヌクレオチド、特にｈｓｇｋ１遺伝子の「ＳＮＰ」を包含することを特徴とする、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
ｈｓｇｋ１遺伝子の多型ヌクレオチドは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン６における２０７１位でのＴ／Ｃ置換、および、ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソン８における２６１７位でのＴ／Ｃ置換からなる群より選択されることを特徴とする、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
一本鎖または二本鎖核酸は、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子の配列、またはそのフラグメントの一つを包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項１０】
ｈｓｇｋ１遺伝子は、少なくとも１つのｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に“ＳＮＰ”を包含することを特徴とする、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
疾病（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の少なくとも１つを発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体の使用であって、該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである、上記使用。
【請求項１２】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質は、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）であることを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
病気（白内障、緑内障および糖尿病性神経障害）の一つを診断するためのキットであって、ｈｓｇｋ１もしくはｈｓｇｋ３に対する抗体を含む、または、ストリンジェントな条件下で、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、もしくは、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子とハイブリダイズできる核酸を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、上記キット。
【請求項１４】
核酸は、ストリンジェントな条件下で、ｈｓｇｋ１遺伝子またはｈｓｇｋ３遺伝子の多型ヌクレオチド、特に“ＳＮＰ”を包含する、受託番号ＮＭ００５６２７に記載のｈｓｇｋ１遺伝子、または、受託番号ＡＦ１６９０３５に記載のｈｓｇｋ３遺伝子のＤＮＡ領域とハイブリダイズできることを特徴とする、請求項１３に記載のキット。
【請求項１５】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ａ）以下を細胞中で異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、インデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、および、いずれの試験物質の非存在下で、コントロール細胞のアリコートＢを培養する工程、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を、コントロール細胞のアリコートＢにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性と比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【請求項１６】
工程ａ）において、ｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１に加えて、または、その代わりに付随して共発現され、工程ｃ）において、細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）のリン酸化の程度は、コントロール細胞のアリコートＢと比較して測定される、請求項１５に記載のスクリーニング方法。
【請求項１７】
多数の試験物質のなかから、治療活性を有する物質を同定し、特徴付けるためのスクリーニング方法であって、該治療活性を有する物質は、白内障、緑内障および糖尿病性神経障害からなる群より選択される病気の少なくとも１つを治療および／または予防するのに用いられ、以下の工程：
ａ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxの少なくとも１つにおいて、以下を異種的に共発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、および、
ii）ｈｓｇｋ１および／またはｈｓｇｋ３、
および、
細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの少なくとも１つにおいて、以下を異種発現させる工程、
ｉ）グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１、
ｂ）それぞれの場合において、少なくとも１種の試験物質の存在下で、細胞のアリコートＡ1〜ＡxおよびＢ1〜Ｂxを培養する工程（該少なくとも１種の試験物質は、それぞれの場合において、細胞のアリコートのインデックス１〜Ｘに対応して異なっている）、
ｃ）細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxにおけるグルコース輸送体Ｇｌｕｔ１の活性を比較して測定する工程、
を含む、上記方法。
【請求項１８】
工程ａ）において、ｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２は、グルコース輸送体Ｇｌｕｔ１に加えて、または、その代わりに、細胞のアリコートＡ1〜Ａxと細胞のアリコートＢ1〜Ｂxの両方で付随して共発現され、工程ｃ）において、細胞のアリコートＡ1〜Ａxにおけるｈｓｇｋ１基質Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）のリン酸化の程度は、細胞のアリコートＢ1〜Ｂxと比較して測定される、請求項１７に記載のスクリーニング方法。
【公表番号】特表２００６−５１９１８９（Ｐ２００６−５１９１８９Ａ）
【公表日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０１７３７（Ｐ２００６−５０１７３７）
【出願日】平成１６年２月５日（２００４．２．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００１０４８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９２５８
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０１４９６６０３）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年８月２４日（２００６．８．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年２月５日（２００４．２．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００１０４８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９２５８
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０１４９６６０３）
【Ｆターム（参考）】
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