精神疾患の発症を予防するための組成物、および精神疾患の発症可能性の評価方法
【課題】精神疾患の発症を予防するための組成物、および精神疾患の発症可能性の評価方法を提供する。
【解決手段】不飽和脂肪酸、または少なくとも一つの不飽和脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでいる組成物を提供する。この組成物は、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されている。また、個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅し、該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドと、不飽和脂肪酸との間の結合力を測定して、該結合力に基づいて、該個体の精神疾患の発症可能性を評価する。さらに、個体から単離したゲノムＤＮＡ上のＦａｂｐ７遺伝子の塩基配列を決定して、該塩基配列に基づいて、該個体の精神疾患の発症可能性を評価する。
【解決手段】不飽和脂肪酸、または少なくとも一つの不飽和脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでいる組成物を提供する。この組成物は、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されている。また、個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅し、該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドと、不飽和脂肪酸との間の結合力を測定して、該結合力に基づいて、該個体の精神疾患の発症可能性を評価する。さらに、個体から単離したゲノムＤＮＡ上のＦａｂｐ７遺伝子の塩基配列を決定して、該塩基配列に基づいて、該個体の精神疾患の発症可能性を評価する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精神疾患の発症を予防するための組成物、および精神疾患の発症可能性の評価方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
統合失調症は、思春期以降に発症し、幻聴や妄想など多彩な精神症状を呈する精神疾患の１つであり、世界中で人口の約１％が罹患すると言われている。
【０００３】
また、両親の何れかが統合失調症を発症した場合、その子供の発症率は約１０％となる。このように、統合失調症の発症には遺伝的要因が存在していると考えられる。ただし、一卵性双生児の一方が発症した場合でも、他方の４０％は統合失調症を発症しない。このように、完全に遺伝的な要因によって統合失調症の発症が決まるわけではなく、遺伝的要因と環境的要因の両方が存在していると考えられる。
【０００４】
また、統合失調症の患者は、精神症状の他に周囲の不必要な雑音などを意識外にシャットアウトする感覚フィルター機能が弱まっていることが知られており、このことが集中困難を引き起こす原因の一つと考えられている。感覚フィルター機能は、プレパルス抑制という基準を用いて生理学的に検査することができる。統合失調症やその家族の一部ではプレパルス抑制が低下しており、プレパルス抑制は、統合失調症の発症可能性に関係すると考えられる。なお、プレパルス抑制の障害は、双極性感情障害（躁うつ病）、強迫性障害（強迫神経症）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、およびハンチントン病にも関与していることが知られており、多くの精神疾患に共通することが示唆されている（非特許文献１および４参照）。
【０００５】
さらに、ダッチハンガーウィンターおよび中国における痛ましい事件を通じて、妊娠中の母親が飢饉にさらされると、子供の統合失調症の発症率が２倍に増加することが知られている。しかしながら、妊娠中の母親において、具体的にどの栄養素が欠乏すると、子供の統合失調症の発症率が悪化するのかについての知見は全くなかった。
【０００６】
統合失調症を治療するための薬剤としては、ドーパミンの作用を阻害するとされる向精神薬が一般的であり、近年では、セロトニンまたはグルタミン酸を標的とする薬剤も開発されている。
【非特許文献１】Swerdlow NR, Geyer MA. (1998). Using an animal model of deficient sensorimotor gating to study the pathophysiology and new treatments of schizophrenia. Schizophr Bull. 24: 285-301.
【非特許文献２】Coti Bertrand P, O’Kusky JR, Innis SM (2006) Maternal dietary (n-3) fatty acid deficiency alters neurogenesis in the embryonic rat brain. J Nutr 136: 1570-1575.
【非特許文献３】Xu LZ, Sanchez R, Sali A, Heintz N (1996) Ligand specificity of brain lipid-binding protein. J Biol Chem 271: 24711-24719.
【非特許文献４】Perry W, Minassian A, Feifel D, Braff DL. (2001). Sensorimotor gating deficits in bipolar disorder patients with acute psychotic mania. Biol Psychiatry 50: 418-24.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、従来の薬剤では、統合失調症の症状を完全に回復させることはできない。さらに、統合失調症の発症を予防するための技術は全く知られていなかった。また、統合失調症を初めとする精神疾患の発症の予防の要否を判定するための技術も求められている。
【０００８】
本発明は上記課題に鑑みてなされたものであり、統合失調症を初めとする精神疾患の発症を予防する技術、および精神疾患の発症可能性を評価する技術を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行い、まず、Ｆａｂｐ７（ＢＬＢＰとも称される）遺伝子がプレパルス抑制に関与する遺伝子であることを見出した。プレパルス抑制は、周囲の不必要な雑音などを意識外にシャットアウトする感覚フィルター機能の指標であり、これを改善することで、集中力の向上を導くこともできる。また、プレパルス抑制は、上述したようにさまざまな精神疾患の指標となっており、これを改善することは、精神疾患の治療または予防に繋がる蓋然性が高い。
【００１０】
そして、さらに検討を行った結果、本発明者らは、プレパルス抑制を改善するためには、脳組織が未成熟な段階、特に、脳が完成されていない胎児の段階においてより多くのＦＡＢＰ７タンパク質が機能していることが好ましいことを見出した。ＦＡＢＰ７タンパク質は、長鎖脂肪酸と結合してその機能を示すことが知られている（非特許文献２および３参照）。
【００１１】
本発明者らは、以上の知見に基づき、脳組織が未成熟な段階で長鎖脂肪酸が体内に供給されれば精神疾患の発症を予防し得ることを見出し、本発明を完成させた。
【００１２】
本発明に係る組成物は、精神疾患の発症を予防するための組成物であって、（ａ）長鎖脂肪酸、または（ｂ）少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴としている。上記長鎖脂肪酸は、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００１３】
妊娠中の母体が脂肪酸を摂取することにより、脂肪酸が胎児に供給され得ることが知られている（非特許文献２参照）。すなわち、長鎖脂肪酸が妊娠中の母体に投与されれば、長鎖脂肪酸が胎児に供給されて胎児の生後における精神疾患の発症が予防され得る。このように、本発明に係る組成物は、経胎盤投与される態様（母体を介して胎児に供給される態様）に調製されていてもよい。
【００１４】
本発明に係る組成物は、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患の発症を予防するために好適に用いることができる。
【００１５】
本発明に係る組成物は、プレパルス抑制を改善するための組成物であって、（ａ）長鎖脂肪酸、または（ｂ）少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴としている。上記長鎖脂肪酸は、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００１６】
上述したように、長鎖脂肪酸が妊娠中の母体に投与されれば、長鎖脂肪酸が胎児に供給されるので、胎児の（およびその生後においても）プレパルス抑制が改善され得る。このように、本発明に係る組成物は、経胎盤投与される態様（母体を介して胎児に供給される態様）に調製されていてもよい。
【００１７】
本発明に係る評価方法は、精神疾患の発症可能性の評価方法であって、個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅する工程と、増幅した該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを生成する工程と、該ポリペプチドと長鎖脂肪酸との間の結合力を測定する工程と、測定された該結合力に基づいて、該個体の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含することを特徴としている。
【００１８】
本発明に係る評価方法は、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患の発症可能性の評価方法として好適に用いることができる。
【００１９】
本発明に係る評価方法では、上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００２０】
本発明に係る評価方法はまた、個体から単離したゲノムＤＮＡ上に存在するＦａｂｐ７遺伝子の少なくとも一部の塩基配列を決定する工程と、決定された該塩基配列に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含するものであってもよい。
【００２１】
本発明に係る組成物はまた、精神疾患の発症を予防するための組成物であって、（ａ）長鎖脂肪酸、または（ｂ）少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、本発明に係る評価方法により精神疾患の発症可能性が高いと評価された個体に対して、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されているものであってもよい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるので、精神疾患の発症を予防することができる。特に、本発明に係る組成物が妊娠中の母体に投与される場合は、胎児の生後における精神疾患の発症を予防することができる。
【００２３】
本発明に係る組成物はまた、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるので、プレパルス抑制を改善することができる。特に、本発明に係る組成物が妊娠中の母体に投与される場合は、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することができる。
【００２４】
また、本発明に係る評価方法を用いれば、精神疾患の発症可能性を評価することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
（１：組成物）
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでいる。本明細書において、用語「組成物」は、各種成分が一物質中に含有されている形態を指す。
【００２６】
本明細書において、長鎖脂肪酸とは炭素数が８以上の脂肪酸を指し、パルミチン酸、ステアリン酸等の飽和脂肪酸、およびドコサヘキサエン酸、アラキドン酸等の不飽和脂肪酸を含む。これらの長鎖脂肪酸は、メチル化等の修飾を受けていてもよい。また、遊離形態であってもよいし、エステル化されていてもよい。すなわち、少なくとも一つの長鎖脂肪酸がグリセリドとエステル結合してなる、長鎖脂肪酸を構成脂肪酸の少なくとも一つとする油脂の形態であってもよい。このような油脂は、生体内において容易に加水分解され、所定の不飽和脂肪酸を供給することができる。なお、油脂には、トリグリセリドおよびリン脂質が含まれる。
【００２７】
長鎖脂肪酸の中でも、不飽和脂肪酸、特にドコサヘキサエン酸等のω３不飽和脂肪酸を好適に用いることができる。ω３不飽和脂肪酸は、ＦＡＢＰ７タンパク質に対する親和性が高いことが知られている（非特許文献３参照）。なおω３不飽和脂肪酸とは、脂肪酸末端から最も近い二重結合を有する炭素までの炭素数（脂肪酸末端の炭素を含む）が３である不飽和脂肪酸を指す。
【００２８】
本発明に係る組成物は、脳組織が未成熟な段階で体内に供給される。これにより、プレパルス抑制（ＰＰＩ）の改善、または精神疾患の発症の予防を行うものである。
【００２９】
プレパルス抑制とは、上述したように感覚フィルター機能の指標である。ヒトでも動物でも大きな音刺激を与えると驚愕反射が起こるが、大きな音刺激（パルス）の直前（例えば０．１秒直前）に小さな音刺激（プレパルス；それ自身では驚愕反射を引き起こさない程度の小さな音）を与えると、大きな音刺激に伴う驚愕反射が抑制される。この現象をプレパルス抑制と呼び、プレパルスを与えなかった場合の驚愕反射の大きさをａとし、プレパルスを与えた場合の驚愕反射の大きさをｂとしたときに、（ａ−ｂ）／ａ×１００（％）として与えられる値である（図１参照）。
【００３０】
本発明に係る組成物を、長鎖脂肪酸を脳が完成されていない胎児に対して供給することができる。そして、脳が完成されていない胎児に対して長鎖脂肪酸を供給することにより、胎児のＦＡＢＰ７タンパク質の機能を亢進する。後述する実施例において示すように、Ｆａｂｐ７は、プレパルス抑制に関与する遺伝子であり、脳が完成されていない時期にその作用を亢進させることにより、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することができる。そして、プレパルス抑制の悪化は、統合失調症、双極性感情障害（躁うつ病）、強迫性障害（強迫神経症）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、およびハンチントン病等の精神疾患の指標となり得ることから、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することは、胎児に対するこれらの精神疾患の予防となり得る。本発明に係る組成物は、上記精神疾患のうち、特に統合失調症を予防するために好適に用いることができる。
【００３１】
本明細書において、脳組織が未成熟な段階とは、脳細胞の数が変化し得る段階を意味する。例えば、ヒトの脳であれば、受精後２週間から脳の形成が始まり、受精後４０日後に大脳、小脳、脳幹等への分化が開始される。そして受精後９ヶ月には外観が成人の脳とほぼ同様になり、出生後１〜２ヶ月以降は、脳細胞の数は増加しない。
【００３２】
なお、本発明に係る組成物を、脳組織が未成熟な段階で体内に供給するためには、例えば、胎児に対して、妊娠中の母体を介して、経胎盤投与することが好ましい。また、生後１〜２ヶ月までの乳児に対して、経口または非経口により投与することもできる。具体的には、例えば、ミルクに混ぜて投与すればよい。
【００３３】
妊娠中の母体を介した経胎盤投与は、具体的には、母体に対して経口または非経口により本発明に係る組成物を投与することによって行うことができる。本発明に係る組成物が母体に投与すれば、母体内で消化吸収されて、胎盤を介して胎児の体内に供給することができる。
【００３４】
また、本発明に係る組成物は、後述する本発明に係る個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する方法を用いた結果、該発症可能性が高いと評価された個体に対して投与されるように調製されていることがさらに好ましい。
【００３５】
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、かつ、経口投与または非経口投与が都合よく行われるものであればどのような形態のものであってもよい。すなわち、本発明に係る組成物の形態としては、例えばパン類、ケーキ類、クッキー類、パイ類、パスタ類などの固形食品、ジュース等の飲料等の食品形態であってもよいし、注射液、輸液、シロップ剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、トローチ等の薬品形態であってもよい。
【００３６】
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂以外に他の成分を含有してもよい。目的に応じて、食品または医薬の製剤技術分野において通常使用し得る公知の添加剤を添加することができる。このような添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤、安定化剤等を挙げることができるが、特に限定されるものではない。より具体的には、上記組成物が固形状の場合には、例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニットなどの賦形剤；澱粉、アルギン酸ソーダなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤；ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤；脂肪酸エステルなどの界面活性剤；グリセリンなどの可塑剤などの添加剤を上記組成物中に含有させることができる。
【００３７】
また、上記組成物が液体の場合には、例えば、水、ショ糖、ソルビット、果糖などの糖類；ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類；ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤などの添加剤を製剤中に含有させることができる。
【００３８】
上記組成物の投与経路は特に限定されるものではなく、経口投与または非経口投与のいずれでもよい。服用の容易性の点から経口投与が可能であることが好ましい。また、上記組成物の投与量は、投与経路、該組成物の形態、上記母体の年齢もしくは体重などによって適宜設定されるものであり特に限定されるものではない。
【００３９】
上記長鎖脂肪酸、または長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂は、植物油脂、動物油脂中に多く含まれる。特にイワシ、アジ、サバ、サケ、ニシン等の魚油は、ω３不飽和脂肪酸、およびω３不飽和脂肪酸を構成脂肪酸とする油脂を多く含むことが知られており、本発明に好適に用いることができる。また、上述したような長鎖脂肪酸は市販されており、これらを購入してもよい。すなわち、長鎖脂肪酸を取得し得ればよいのであって、その方法は特に限定されない。
【００４０】
（２：評価方法）
本発明はまた、精神疾患の発症可能性の評価方法を提供する。本発明に係る評価方法は、個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅する工程と、増幅した該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを生成する工程と、該ポリペプチドと長鎖脂肪酸との間の結合力を測定する工程と、測定された該結合力に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含している。
【００４１】
上記個体は、ヒト、および非ヒトを含む動物を指し、生体、胎児、受精卵等を含む。個体からのゲノムＤＮＡの単離は、常法に従えばよく、組織、血液、細胞等を採取してＤＮＡを抽出すればよい。
【００４２】
単離したゲノムＤＮＡを鋳型にしたＦａｂｐ７遺伝子の増幅は、例えば、周知慣用のＰＣＲ法を用いればよい。例えば、ヒトのＦａｂｐ７遺伝子のアクセッション番号はＮＭ＿００１４４６であり、配列番号１に示す塩基配列を有している。また、マウスのＦａｂｐ７遺伝子のアクセッション番号はＮＭ＿０２１２７２であり、配列番号２に示す塩基配列を有している。これらの情報に基づけば、当業者は容易にＦａｂｐ７遺伝子を増幅するための適切なプライマーを設計するができる。具体的には、例えば、各生物のＦａｂｐ７遺伝子の両端付近の１５〜３０ｂｐに対応する塩基配列からなる一本鎖オリゴヌクレオチドを、上記プライマーとして好適に用いることができる。
【００４３】
上記増幅したＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドの生成は、例えば、該Ｆａｂｐ７遺伝子を組換え発現ベクターに組み込んだ後、公知の方法により発現可能な宿主に導入し、宿主内で翻訳されて得られるポリペプチドを精製すればよい。発現ベクターは、外来ポリヌクレオチドを発現するように宿主内で機能するプロモーターを組み込んであることが好ましい。組換え的に産生されたポリペプチドを精製する方法は、用いた宿主、ポリペプチドの性質によって異なるが、周知の方法（例えば、硫安沈殿またはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィー）を用いることができる。
【００４４】
生成したポリペプチドと、長鎖脂肪酸との間の結合力の測定は、例えば、増幅したＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを合成して、長鎖脂肪酸とともにインキュベートし、これを、ＦＡＢＰ７タンパク質と長鎖脂肪酸とが結合したものと、遊離した長鎖脂肪酸とに分離して、それぞれのモル濃度を測定することにより、質量作用の法則に基づいて結合定数Ｋａを求めることにより行い得る（非特許文献３参照）。
【００４５】
本発明に係る評価方法において用いる長鎖脂肪酸は、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ＦＡＢＰ７タンパク質との親和性が高いことが知られているω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ＦＡＢＰ７タンパク質の天然のリガンドとして考えられているドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００４６】
ＦＡＢＰ７タンパク質と長鎖脂肪酸とが結合したものと、遊離した長鎖脂肪酸との分離は、例えば、脂質のみを吸着するカラムを用いればよく、例えば、Ｌｉｐｉｄｅｘ１０００等のヒドロキシアルキル基を有するセファデックスカラムを通し、ＦＡＢＰ７タンパク質と長鎖脂肪酸とが結合したものをＫＰｉバッファー等の溶出バッファーにより溶出し、遊離した長鎖脂肪酸をメタノール等で溶出することにより、該分離を行うことができる。
【００４７】
上記結合力の測定はまた、周知慣用のアクリロダン標識脂肪酸結合腸タンパク質（ＡＤＩＦＡＢ）、または周知慣用の等温滴定熱量測定法を用いて行うこともできる。
【００４８】
測定された結合力に基づいた、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性の評価は、該結合力が高いほど、ＦＡＢＰ７の活性が高まっていると考えられるので、プレパルス抑制も高く、精神疾患の発症可能性は低いと評価することができる。一方、上記結合力が低い場合は、ＦＡＢＰ７の活性が弱くいと考えられるので、プレパルス抑制が低く、精神疾患の発症可能性が高いと評価することができる。この評価は、例えば、上記のように求めた結合定数Ｋａに基づいて、定性的または定量的に行うことができる。また、本発明に従って、一個体において精神疾患の発症可能性が高いと評価した場合、その子孫においても精神疾患の発症可能性が高いと評価することができる。
【００４９】
本発明に係る評価方法は、統合失調症、双極性感情障害（躁うつ病）、強迫性障害（強迫神経症）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、およびハンチントン病等の精神疾患の発症可能性の評価に用いることができるが、特に、統合失調症の発症可能性の評価に好適に用いることができる。
【００５０】
本発明に係る他の評価方法として、個体から単離したゲノムＤＮＡ上に存在するＦａｂｐ７遺伝子の少なくとも一部の塩基配列を決定する工程（ａ）と、決定された該塩基配列に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程（ｂ）とを包含する評価方法を挙げることができる。
【００５１】
工程（ａ）では、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価するための塩基配列の情報を得られればよく、具体的には、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量、またはＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸のような長鎖脂肪酸との間の結合力を予測するための情報を得られればよく、さらに具体的には、これに限定されるものではないが、ＦＡＢＰタンパク質とドコサへキサエン酸との結合力を変化させる、ＦＡＢＰ７タンパク質の６１番目のスレオニンを置換し得るＳＮＰ部位を含む塩基配列の情報を得られればよい。
【００５２】
また、工程（ａ）において用いる手法は特に限られないが、周知慣用の塩基配列決定手法を用いればよく、ダイレクトシーケンス法その他の塩基配列を決定する定法を用いることができる。なお、上記評価を特定の遺伝子多型を指標に行う場合には、該遺伝子多型を含む近傍の配列のみを決定すればよい。また、インベーダー法、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法等の一塩基多型（ＳＮＰ）その他の遺伝子多型の検出をする定法を採用することもできる。
【００５３】
工程（ｂ）において、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性の評価は、工程（ａ）において得た塩基配列情報に基づいて、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量、またはＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸のような長鎖脂肪酸との間の結合力を予測して、その予測に基づいて、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する。具体的には、健常者と比較して、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量が変化している場合（例えば、脳が未成熟な段階において発現量の減少している場合、もしくは成人において発現量が増加している場合等）、またはＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）との間の結合力が低下する場合には、該個体又は該個体を親とする後代の精神疾患の発症可能性が高いと評価される。
【００５４】
Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量を予想する方法は特に限定されるものではないが、具体的には例えば、その遺伝子の発現に影響を与える遺伝子多型の有無にて予想をする方法を例示することが出来る。なお、例えば遺伝子のイントロン領域、エンハンサー領域等における遺伝子多型はタンパク質のアミノ酸配列自体に変異を生じさせないものの、その産生量（遺伝子の発現量）を大きく変化させる例があることは周知の事実である。
【００５５】
また、ＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）との間の結合力を予測する方法としては、例えば、前述の方法により野生型並びに変異型のＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）との間の結合力を実測したデータを蓄積し、そのデータテーブル並びに工程（ａ）にて決定した塩基配列情報を参照することにより行うことが出来る。また、実施例にて後述するように、遺伝子の変異がある場合に、ＦＡＢＰ７タンパク質の立体構造情報を参照して、その変異がＦＡＢＰ７タンパク質におけるＤＨＡとの結合領域の構造変化を引き起こすものであるかどうかを指標として行うことができる。
【００５６】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【００５７】
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【００５８】
以下、実施例によって本発明をさらに詳しく説明するが、これは本発明を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００５９】
〔実施例１：プレパルス抑制に関するＱＴＬ解析〕
プレパルス抑制を指標としたマウスのＱＴＬ解析を行った。
【００６０】
マウスのプレパルス抑制（ＰＰＩ）は、図１に示すように測定した。すなわち、プラットフォーム上に固定したマウスに対して音刺激を与え、該音刺激に対する該マウスの体動（筋反射）の大きさを測定した。このとき、プレパルスを与えなかった場合の驚愕反射の大きさをａとし、プレパルスを与えた場合の驚愕反射の大きさをｂとしたときに、（ａ−ｂ）／ａ×１００（％）としてプレパルス抑制を測定した。測定器具は、Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社から購入した。
【００６１】
図２は、プレパルス抑制の測定についてのさらに詳しい説明図である。図２に示すように、プレパルス抑制の測定は、１０分の順応期間をおいた後開始する。５０ミリ秒の無音の後、２０ミリ秒のプレパルス音（０（プレパルスなし）、７２、７４、７８、８２、または８６ｄＢ）を与え、１００ミリ秒おいてから、４０ｍｓのパルス音（１２０ｄＢ）を与えた。その後の１００ミリ秒間、驚愕反射の測定を行った。このときのパルス音から驚愕反射までの時間を以後潜時と称する。以上を一回のトライアルとし、１０〜２０秒開けて、複数回トライアルを行った。
【００６２】
まず、複数のマウス系統に対し、プレパルス抑制を計測して、系統として、プレパルス抑制の値が安定している系統のうち、プレパルス抑制が大きい系統Ｂ６（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌＣｒｌｊ、日本チャールズリバー研究所）およびプレパルス抑制が小さい系統Ｃ３（Ｃ３Ｈ／ＨｅＮＣｒｌＣｒｊ、日本チャールズリバー研究所）を得た。図３に示すように、Ｂ６およびＣ３は、生後７週間後および生後１２週間後の両方でほぼ同様のプレパルス抑制を示しており、生後７週間後〜生後１２週間後の期間において、プレパルス抑制が安定していると考えられる。そのため、以後のプレパルス抑制の測定は、生後８〜９週間後において実施した。
【００６３】
次に、Ｂ６のメスとＣ３のオスとを掛け合わせ、１０１０のＦ２個体を得た（４９７匹のオスおよび５１３匹のメス）。これらのＦ２個体に対し、プレパルス抑制を測定するとともに、各Ｆ２個体の遺伝子型を、Dietrich WF, Miller J, Steen R, Merchant MA, Damron-Boles D et al. (1996) A comprehensive genetic map of the mouse genome. Nature 380: 149-152.に基づいた公知のマイクロサテライトマーカーにより判別して、ＱＴＬ解析を行った。遺伝子型の判別には、３７３０ｘｌＤＮＡアナライザー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）および蛍光標識されたプライマーによるＰＣＲ法を用いた。なお、上記ＱＴＬ解析では、プレパルス音の大きさを変化させたときの結果に加えて、驚愕反射そのものの大きさ（ＡＳＲ）および潜時（Ｌａｔｅｎｃｙ）についても解析を行った。
【００６４】
ＱＴＬ解析は、まず、ＣＩＭ（ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｍａｐｐｉｎｇ）法を用いて第１段階のＱＴＬ解析を行った後、第１段階において有意なロッドスコアを示した染色体（染色体１、３、７、１０、および１３）について、第２段階のＱＴＬ解析を行った。
【００６５】
第２段階のＱＴＬ解析では、ＭＩＭ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｍａｐｐｉｎｇ）法を用いて、オスのマウスと、メスのマウスとでデータを分けて解析を行った。メスについての結果を図４に、オスについての結果を図５に示す。
【００６６】
図４に示すように、メスにおいては、染色体１０にピークが存在することが判るが、その位置についてはあいまいな結果しか得られなかった。一方、図５に示すように、オスについて解析を行ったことによって、鋭いピークが得られた。
【００６７】
ピーク内に存在した３０の遺伝子の中から、本発明者らは、独自の観点に基づきＦａｂｐ７について解析を進めた。Ｆａｂｐ７遺伝子は、コード領域においてＣ３マウスとＢ６マウスとで配列に差がなく、プレパルス抑制の責任遺伝子ではない可能性が高かったが、本発明者らは、独自の直感に基づいて解析を進めたところ、後述するように、相補性試験によって、Ｆａｂｐ７がプレパルス抑制の責任遺伝子であることを立証した（図１０）。
【００６８】
〔実施例２：Ｆａｂｐ７の発現の解析〕
Ｆａｂｐ７遺伝子について、さまざまな脳部位および発達段階について発現を測定した。結果を図６に示す。なお、図中、ＣＸは大脳皮質、ＦＣは前頭葉、ＨＰは海馬、ＣＥは小脳、ＯＢは嗅脳、Ｅ１６は胎生１６日目、Ｐ０は生後直後、Ｐ７は生後７日目、Ａｄｕｌｔ（８Ｗ）は生後８週齢、＊は統計的な有意差（Ｐ＜０．０５）を示す。図６に示すように、前頭葉において、生後７日目にはＣ３系統のマウスよりもＢ６系統のマウスの方が、Ｆａｂｐ７の発現量が多くなるが、生後８週齢では、Ｃ３系統のマウスの方が多くなる。
【００６９】
前頭葉は統合失調症に関与していることが知られており、Ｂ６系統のマウスと、Ｃ３系統のマウスとのプレパルス抑制の違いも、生後７日目におけるＦａｂｐ７の発現量の違いに起因する蓋然性が高い。
【００７０】
なお、マウスは脳が完成していない状態で出産されるので、脳の発達段階の観点からみれば、生後７日目はヒトではまた胎内にいる状態に対応する。
【００７１】
したがって、上記事実は、不飽和脂肪酸を胎児に供給することにより、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することができるという本発明者らの考えを支持するものである。
【００７２】
図７は、胎生１６日目（Ｅ１６）、および生後直後（Ｐ０）の脳の前額断切片を、ＦＡＢＰ７タンパク質の抗体で染色したものを示す図である。図７に示すように、胎生１６日目および生後直後においてＦＡＢＰ７タンパク質が多量に発現しており、特に、脳室周囲（神経新生が盛んな場所）に多くみられる。
【００７３】
図８は、胎生１５日目（Ｅ１５）、生後直後（Ｐ０）、および生後７０日目（Ｐ７０）における脳でのＦａｂｐ７ｍＲＮＡの発現をノーザンブロット解析により解析した結果を示す図である。Ｇａｐｄｈはコントロールを示す。図８に示すように、Ｆａｂｐ７ｍＲＮＡの発現は、次第に減少し、生体では殆ど見られない。
【００７４】
以上のように、ＦＡＢＰ７タンパク質は、神経新生に関わっていることが示唆される。このことは、未完成の脳において、ＦＡＢＰ７タンパク質が働くことが特に有用であるという本発明者らの考えと矛盾しない。
【００７５】
〔実施例３：Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスの解析〕
Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスをＢ６系統のマウスから周知慣用の方法により作成した。上記ノックアウトマウスのプレパルス抑制（ＰＰＩ）を測定し、野生型Ｂ６系統のマウスと比較した結果を図９に示す。図９に示すように、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスは、プレパルス抑制が減少していた。
【００７６】
次に、Ｆａｂｐ７が確かに、上記ＱＴＬ解析におけるピークの責任遺伝子であったことを確かめるために、相補性試験を実施した。具体的には、野生型のＢ６系統のマウス（Ｑ／Ｑと表記）、野生型のＢ６系統のマウスとＣ３系統のマウスとを掛け合わせたもの（Ｑ／ｑと表記）、野生型のＢ６系統のマウスとＦａｂｐ７ノックアウトマウスとを掛け合わせたもの（Ｑ／−と表記）、およびＣ３系統のマウスとＦａｂｐ７ノックアウトマウスとを掛け合わせたもの（ｑ／−と表記）を準備し、プレパルス抑制（ＰＰＩ）を測定した。このとき、［（Ｑ／Ｑ）のＰＰＩ−（Ｑ／−）のＰＰＩ］が、［（Ｑ／ｑ）のＰＰＩ−（ｑ／−）のＰＰＩ］と有意に異なれば、Ｆａｂｐ７が上記ピークに関与していると判断できる。図１０に結果をしめす。図１０に示すように、有意な差が見られ、Ｆａｂｐ７が確かに上記ピークに関与していることが立証された。
【００７７】
なお、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスは、図１１に示すように、潜時についても、野生型に比べ有意な差を有していた。
【００７８】
統合失調症の病態仮説として、ＮＭＤＡ受容体介する神経伝達が低下しているとする「ＮＭＤＡ低下仮説」がある。その根拠の１つは、ＮＭＤＡ受容体拮抗作用をもつフェンサイクリジンが、特に反復摂取により統合失調症症状を引き起こし、また統合失調症患者が摂取すると病状が悪化するという事実がある。そこで、フェンサイクリジンと同じ作用を有するＭＫ−８０１をＦａｂｐ７ノックアウトマウスに反復投与して結果を観察した。図１２にその結果を示す。図１２の縦軸は誘発行動量を示し、横軸はＭＫ−８０１投与後の時間を示す。図１２に示すように、その結果、誘発行動量が野生型マウスに比較して増強した。このことはＦａｂｐ７ノックアウトマウスがヒト統合失調症同様、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬に感受性が高いということを示し、Ｆａｂｐ７が統合失調症に関与しているという本発明者らの考えを支持する。
【００７９】
Ｃ３系統のマウスでは、生後７日目という脳の完成前段階にある前頭葉でＦａｂｐ７遺伝子の発現が下がっていたが、このことが成体期におけるプレパルス抑制の低下にどのように結びつくのかを調査した。
【００８０】
Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスを用いて神経新生の程度を評価したところ、Ｆａｂｐ７遺伝子の破壊によって脳における神経新生は低下していることが判明した。図１３は、野生型と、ノックアウトマウスとの脳の各部位の比較を示す図である。Ａ〜Ｃは、生後４週間目の海馬歯状回の様子を示す写真であり、ＡではＧＦＡＰ（神経幹細胞／初期前駆細胞のマーカー）の発現を示し、ＢではＰＳＡ−ＮＣＡＭ（後期前駆細胞のマーカー）の発現を示す。何れも、ノックアウトマウスにおいて発現が減少している。また、Ｃでは、ＢｒｄＵ（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン、新生細胞のマーカー）の発現を示し、Ｄは、ＢｒｄＵを発現している細胞の数を示す。Ｃ〜Ｄに示すように、ノックアウトマウスにおいて新生細胞の減少が見られる。
【００８１】
以上の結果から、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現が脳の発達期に低下していると、神経細胞の増殖の低下をきたし、成長後の神経ネットワークに変化をきたし、その変化が基盤となってプレパルス抑制の低下が生じることが示唆された。
【００８２】
〔実施例４：ヒトにおけるＦａｂｐ７の解析〕
図１４は、統合失調症を発症したアメリカ人の死後脳におけるＦａｂｐ７遺伝子の発現を示す。３つのグラフは、Ｆａｂｐ７に対するコントロールをそれぞれＧＡＰＤ、ＡＣＴＢ、またはＰＧＫ１に換えて表したものである。図１４に示すように、成人の統合失調症の患者の脳では、Ｃ３系統のマウスがそうであったように、Ｆａｂｐ７の発現が増加していた。このことは、マウスとヒトとで同様の機構が働くことを示唆している。
【００８３】
なお、上記Ｆａｂｐ７の発現の増加が、服用していた薬による影響かどうか検討するために、マウスに向精神薬ハロリドベール（統合失調症の治療薬：主たる薬理作用は、神経伝達物質であるドーパミンの受容体の阻害である）を慢性に投与してＦａｂｐ７遺伝子の発現を調べたが、薬によって発現が増加することはなかった（図１５）。したがって、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現変化は疾患によるものと考えられる。
【００８４】
次に、Ｆａｂｐ７遺伝子のゲノム上の個人差が統合失調症の発症に影響するかどうかを、Ｆａｂｐ７遺伝子のＳＮＰを調べることによって検討した。その結果、アミノ酸変化を伴うＳＮＰを含むＦａｂｐ７遺伝子の領域が、日本人の統合失調症の発症に関連していることが分かった（図１６）。
【００８５】
図１６の上図は、Ｆａｂｐ７遺伝子のゲノム構造とＳＮＰの位置を表している。下図は、Ｆａｂｐ７遺伝子のゲノム領域のうち、ＳＮＰ３、ＳＮＰ４、ＳＮＰ５、およびＳＮＰ６からなるＢｌｏｃｋ２が統合失調症に関連していることを示す。ＳＮＰ３は、６１番目のスレオニンがメチオニンに置換するＳＮＰで、特に関連が強い。図１７は、Ｆａｂｐ７タンパク質の結晶構造を示す模式図である。図１７に示すように、６１番目のスレオニンは、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が結合する部位の近くにあり、そのアミノ酸が変化すると、ＤＨＡに対する親和性が変化する可能性がある。
【００８６】
以上のように、日本人統合失調症の場合、ＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸との結合の強さの違いが疾患感受性に影響を与えている可能性が考えられる。以上のことから、Ｆａｂｐ７遺伝子は脳での発現レベルの変化やゲノム上のＳＮＰによって、統合失調症のなりやすさに効果を及ぼしていると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明は、食品および薬品の製造分野および遺伝子診断の分野において利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】マウスのプレパルス抑制の測定方法を説明する図である。
【図２】プレパルス抑制の測定方法を詳細に説明する図である。
【図３】Ｂ６系統のマウスと、Ｃ３系統のマウスのプレパルス抑制を比較するグラフである。
【図４】メスのマウスについてのＱＴＬ解析の結果を示す図である。
【図５】オスのマウスについてのＱＴＬ解析の結果を示す図である。
【図６】Ｆａｂｐ７遺伝子の、さまざまな脳部位および発達段階における発現の測定結果を示すグラフである。
【図７】脳の前額断切片を、ＦＡＢＰ７タンパク質の抗体で染色したものを示す写真である。
【図８】脳でのＦａｂｐ７ｍＲＮＡの発現を示す写真である。
【図９】プレパルス抑制について、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスとＢ６系統のマウスとを比較するグラフである。
【図１０】相補性試験の結果を示す図である。
【図１１】潜時について、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスとＢ６系統のマウスとを比較するグラフである。
【図１２】ＭＫ−８０１投与後の誘発行動量について、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスとＢ６系統のマウスとを比較するグラフである。
【図１３】野生型と、ノックアウトマウスとの脳の各部位の比較を示す図である。
【図１４】統合失調症を発症したアメリカ人の死後脳におけるＦａｂｐ７遺伝子の発現を示すグラフである。
【図１５】マウスに向精神薬を投与した結果を示すグラフである。
【図１６】統合失調症の日本人患者におけるＦａｂｐ７遺伝子のＳＮＰを示す図である。
【図１７】ＦＡＢＰ７タンパク質の結晶構造を示す模式図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、精神疾患の発症を予防するための組成物、および精神疾患の発症可能性の評価方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
統合失調症は、思春期以降に発症し、幻聴や妄想など多彩な精神症状を呈する精神疾患の１つであり、世界中で人口の約１％が罹患すると言われている。
【０００３】
また、両親の何れかが統合失調症を発症した場合、その子供の発症率は約１０％となる。このように、統合失調症の発症には遺伝的要因が存在していると考えられる。ただし、一卵性双生児の一方が発症した場合でも、他方の４０％は統合失調症を発症しない。このように、完全に遺伝的な要因によって統合失調症の発症が決まるわけではなく、遺伝的要因と環境的要因の両方が存在していると考えられる。
【０００４】
また、統合失調症の患者は、精神症状の他に周囲の不必要な雑音などを意識外にシャットアウトする感覚フィルター機能が弱まっていることが知られており、このことが集中困難を引き起こす原因の一つと考えられている。感覚フィルター機能は、プレパルス抑制という基準を用いて生理学的に検査することができる。統合失調症やその家族の一部ではプレパルス抑制が低下しており、プレパルス抑制は、統合失調症の発症可能性に関係すると考えられる。なお、プレパルス抑制の障害は、双極性感情障害（躁うつ病）、強迫性障害（強迫神経症）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、およびハンチントン病にも関与していることが知られており、多くの精神疾患に共通することが示唆されている（非特許文献１および４参照）。
【０００５】
さらに、ダッチハンガーウィンターおよび中国における痛ましい事件を通じて、妊娠中の母親が飢饉にさらされると、子供の統合失調症の発症率が２倍に増加することが知られている。しかしながら、妊娠中の母親において、具体的にどの栄養素が欠乏すると、子供の統合失調症の発症率が悪化するのかについての知見は全くなかった。
【０００６】
統合失調症を治療するための薬剤としては、ドーパミンの作用を阻害するとされる向精神薬が一般的であり、近年では、セロトニンまたはグルタミン酸を標的とする薬剤も開発されている。
【非特許文献１】Swerdlow NR, Geyer MA. (1998). Using an animal model of deficient sensorimotor gating to study the pathophysiology and new treatments of schizophrenia. Schizophr Bull. 24: 285-301.
【非特許文献２】Coti Bertrand P, O’Kusky JR, Innis SM (2006) Maternal dietary (n-3) fatty acid deficiency alters neurogenesis in the embryonic rat brain. J Nutr 136: 1570-1575.
【非特許文献３】Xu LZ, Sanchez R, Sali A, Heintz N (1996) Ligand specificity of brain lipid-binding protein. J Biol Chem 271: 24711-24719.
【非特許文献４】Perry W, Minassian A, Feifel D, Braff DL. (2001). Sensorimotor gating deficits in bipolar disorder patients with acute psychotic mania. Biol Psychiatry 50: 418-24.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、従来の薬剤では、統合失調症の症状を完全に回復させることはできない。さらに、統合失調症の発症を予防するための技術は全く知られていなかった。また、統合失調症を初めとする精神疾患の発症の予防の要否を判定するための技術も求められている。
【０００８】
本発明は上記課題に鑑みてなされたものであり、統合失調症を初めとする精神疾患の発症を予防する技術、および精神疾患の発症可能性を評価する技術を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行い、まず、Ｆａｂｐ７（ＢＬＢＰとも称される）遺伝子がプレパルス抑制に関与する遺伝子であることを見出した。プレパルス抑制は、周囲の不必要な雑音などを意識外にシャットアウトする感覚フィルター機能の指標であり、これを改善することで、集中力の向上を導くこともできる。また、プレパルス抑制は、上述したようにさまざまな精神疾患の指標となっており、これを改善することは、精神疾患の治療または予防に繋がる蓋然性が高い。
【００１０】
そして、さらに検討を行った結果、本発明者らは、プレパルス抑制を改善するためには、脳組織が未成熟な段階、特に、脳が完成されていない胎児の段階においてより多くのＦＡＢＰ７タンパク質が機能していることが好ましいことを見出した。ＦＡＢＰ７タンパク質は、長鎖脂肪酸と結合してその機能を示すことが知られている（非特許文献２および３参照）。
【００１１】
本発明者らは、以上の知見に基づき、脳組織が未成熟な段階で長鎖脂肪酸が体内に供給されれば精神疾患の発症を予防し得ることを見出し、本発明を完成させた。
【００１２】
本発明に係る組成物は、精神疾患の発症を予防するための組成物であって、（ａ）長鎖脂肪酸、または（ｂ）少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴としている。上記長鎖脂肪酸は、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００１３】
妊娠中の母体が脂肪酸を摂取することにより、脂肪酸が胎児に供給され得ることが知られている（非特許文献２参照）。すなわち、長鎖脂肪酸が妊娠中の母体に投与されれば、長鎖脂肪酸が胎児に供給されて胎児の生後における精神疾患の発症が予防され得る。このように、本発明に係る組成物は、経胎盤投与される態様（母体を介して胎児に供給される態様）に調製されていてもよい。
【００１４】
本発明に係る組成物は、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患の発症を予防するために好適に用いることができる。
【００１５】
本発明に係る組成物は、プレパルス抑制を改善するための組成物であって、（ａ）長鎖脂肪酸、または（ｂ）少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴としている。上記長鎖脂肪酸は、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００１６】
上述したように、長鎖脂肪酸が妊娠中の母体に投与されれば、長鎖脂肪酸が胎児に供給されるので、胎児の（およびその生後においても）プレパルス抑制が改善され得る。このように、本発明に係る組成物は、経胎盤投与される態様（母体を介して胎児に供給される態様）に調製されていてもよい。
【００１７】
本発明に係る評価方法は、精神疾患の発症可能性の評価方法であって、個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅する工程と、増幅した該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを生成する工程と、該ポリペプチドと長鎖脂肪酸との間の結合力を測定する工程と、測定された該結合力に基づいて、該個体の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含することを特徴としている。
【００１８】
本発明に係る評価方法は、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患の発症可能性の評価方法として好適に用いることができる。
【００１９】
本発明に係る評価方法では、上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００２０】
本発明に係る評価方法はまた、個体から単離したゲノムＤＮＡ上に存在するＦａｂｐ７遺伝子の少なくとも一部の塩基配列を決定する工程と、決定された該塩基配列に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含するものであってもよい。
【００２１】
本発明に係る組成物はまた、精神疾患の発症を予防するための組成物であって、（ａ）長鎖脂肪酸、または（ｂ）少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、本発明に係る評価方法により精神疾患の発症可能性が高いと評価された個体に対して、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されているものであってもよい。
【発明の効果】
【００２２】
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるので、精神疾患の発症を予防することができる。特に、本発明に係る組成物が妊娠中の母体に投与される場合は、胎児の生後における精神疾患の発症を予防することができる。
【００２３】
本発明に係る組成物はまた、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるので、プレパルス抑制を改善することができる。特に、本発明に係る組成物が妊娠中の母体に投与される場合は、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することができる。
【００２４】
また、本発明に係る評価方法を用いれば、精神疾患の発症可能性を評価することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
（１：組成物）
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでいる。本明細書において、用語「組成物」は、各種成分が一物質中に含有されている形態を指す。
【００２６】
本明細書において、長鎖脂肪酸とは炭素数が８以上の脂肪酸を指し、パルミチン酸、ステアリン酸等の飽和脂肪酸、およびドコサヘキサエン酸、アラキドン酸等の不飽和脂肪酸を含む。これらの長鎖脂肪酸は、メチル化等の修飾を受けていてもよい。また、遊離形態であってもよいし、エステル化されていてもよい。すなわち、少なくとも一つの長鎖脂肪酸がグリセリドとエステル結合してなる、長鎖脂肪酸を構成脂肪酸の少なくとも一つとする油脂の形態であってもよい。このような油脂は、生体内において容易に加水分解され、所定の不飽和脂肪酸を供給することができる。なお、油脂には、トリグリセリドおよびリン脂質が含まれる。
【００２７】
長鎖脂肪酸の中でも、不飽和脂肪酸、特にドコサヘキサエン酸等のω３不飽和脂肪酸を好適に用いることができる。ω３不飽和脂肪酸は、ＦＡＢＰ７タンパク質に対する親和性が高いことが知られている（非特許文献３参照）。なおω３不飽和脂肪酸とは、脂肪酸末端から最も近い二重結合を有する炭素までの炭素数（脂肪酸末端の炭素を含む）が３である不飽和脂肪酸を指す。
【００２８】
本発明に係る組成物は、脳組織が未成熟な段階で体内に供給される。これにより、プレパルス抑制（ＰＰＩ）の改善、または精神疾患の発症の予防を行うものである。
【００２９】
プレパルス抑制とは、上述したように感覚フィルター機能の指標である。ヒトでも動物でも大きな音刺激を与えると驚愕反射が起こるが、大きな音刺激（パルス）の直前（例えば０．１秒直前）に小さな音刺激（プレパルス；それ自身では驚愕反射を引き起こさない程度の小さな音）を与えると、大きな音刺激に伴う驚愕反射が抑制される。この現象をプレパルス抑制と呼び、プレパルスを与えなかった場合の驚愕反射の大きさをａとし、プレパルスを与えた場合の驚愕反射の大きさをｂとしたときに、（ａ−ｂ）／ａ×１００（％）として与えられる値である（図１参照）。
【００３０】
本発明に係る組成物を、長鎖脂肪酸を脳が完成されていない胎児に対して供給することができる。そして、脳が完成されていない胎児に対して長鎖脂肪酸を供給することにより、胎児のＦＡＢＰ７タンパク質の機能を亢進する。後述する実施例において示すように、Ｆａｂｐ７は、プレパルス抑制に関与する遺伝子であり、脳が完成されていない時期にその作用を亢進させることにより、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することができる。そして、プレパルス抑制の悪化は、統合失調症、双極性感情障害（躁うつ病）、強迫性障害（強迫神経症）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、およびハンチントン病等の精神疾患の指標となり得ることから、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することは、胎児に対するこれらの精神疾患の予防となり得る。本発明に係る組成物は、上記精神疾患のうち、特に統合失調症を予防するために好適に用いることができる。
【００３１】
本明細書において、脳組織が未成熟な段階とは、脳細胞の数が変化し得る段階を意味する。例えば、ヒトの脳であれば、受精後２週間から脳の形成が始まり、受精後４０日後に大脳、小脳、脳幹等への分化が開始される。そして受精後９ヶ月には外観が成人の脳とほぼ同様になり、出生後１〜２ヶ月以降は、脳細胞の数は増加しない。
【００３２】
なお、本発明に係る組成物を、脳組織が未成熟な段階で体内に供給するためには、例えば、胎児に対して、妊娠中の母体を介して、経胎盤投与することが好ましい。また、生後１〜２ヶ月までの乳児に対して、経口または非経口により投与することもできる。具体的には、例えば、ミルクに混ぜて投与すればよい。
【００３３】
妊娠中の母体を介した経胎盤投与は、具体的には、母体に対して経口または非経口により本発明に係る組成物を投与することによって行うことができる。本発明に係る組成物が母体に投与すれば、母体内で消化吸収されて、胎盤を介して胎児の体内に供給することができる。
【００３４】
また、本発明に係る組成物は、後述する本発明に係る個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する方法を用いた結果、該発症可能性が高いと評価された個体に対して投与されるように調製されていることがさらに好ましい。
【００３５】
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂を含んでおり、かつ、経口投与または非経口投与が都合よく行われるものであればどのような形態のものであってもよい。すなわち、本発明に係る組成物の形態としては、例えばパン類、ケーキ類、クッキー類、パイ類、パスタ類などの固形食品、ジュース等の飲料等の食品形態であってもよいし、注射液、輸液、シロップ剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、腸溶剤、トローチ等の薬品形態であってもよい。
【００３６】
本発明に係る組成物は、長鎖脂肪酸、または少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂以外に他の成分を含有してもよい。目的に応じて、食品または医薬の製剤技術分野において通常使用し得る公知の添加剤を添加することができる。このような添加剤としては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味剤、安定化剤等を挙げることができるが、特に限定されるものではない。より具体的には、上記組成物が固形状の場合には、例えば、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニットなどの賦形剤；澱粉、アルギン酸ソーダなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤；ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチンなどの結合剤；脂肪酸エステルなどの界面活性剤；グリセリンなどの可塑剤などの添加剤を上記組成物中に含有させることができる。
【００３７】
また、上記組成物が液体の場合には、例えば、水、ショ糖、ソルビット、果糖などの糖類；ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類；ごま油、オリーブ油、大豆油などの油類；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類などの防腐剤などの添加剤を製剤中に含有させることができる。
【００３８】
上記組成物の投与経路は特に限定されるものではなく、経口投与または非経口投与のいずれでもよい。服用の容易性の点から経口投与が可能であることが好ましい。また、上記組成物の投与量は、投与経路、該組成物の形態、上記母体の年齢もしくは体重などによって適宜設定されるものであり特に限定されるものではない。
【００３９】
上記長鎖脂肪酸、または長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂は、植物油脂、動物油脂中に多く含まれる。特にイワシ、アジ、サバ、サケ、ニシン等の魚油は、ω３不飽和脂肪酸、およびω３不飽和脂肪酸を構成脂肪酸とする油脂を多く含むことが知られており、本発明に好適に用いることができる。また、上述したような長鎖脂肪酸は市販されており、これらを購入してもよい。すなわち、長鎖脂肪酸を取得し得ればよいのであって、その方法は特に限定されない。
【００４０】
（２：評価方法）
本発明はまた、精神疾患の発症可能性の評価方法を提供する。本発明に係る評価方法は、個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅する工程と、増幅した該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを生成する工程と、該ポリペプチドと長鎖脂肪酸との間の結合力を測定する工程と、測定された該結合力に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含している。
【００４１】
上記個体は、ヒト、および非ヒトを含む動物を指し、生体、胎児、受精卵等を含む。個体からのゲノムＤＮＡの単離は、常法に従えばよく、組織、血液、細胞等を採取してＤＮＡを抽出すればよい。
【００４２】
単離したゲノムＤＮＡを鋳型にしたＦａｂｐ７遺伝子の増幅は、例えば、周知慣用のＰＣＲ法を用いればよい。例えば、ヒトのＦａｂｐ７遺伝子のアクセッション番号はＮＭ＿００１４４６であり、配列番号１に示す塩基配列を有している。また、マウスのＦａｂｐ７遺伝子のアクセッション番号はＮＭ＿０２１２７２であり、配列番号２に示す塩基配列を有している。これらの情報に基づけば、当業者は容易にＦａｂｐ７遺伝子を増幅するための適切なプライマーを設計するができる。具体的には、例えば、各生物のＦａｂｐ７遺伝子の両端付近の１５〜３０ｂｐに対応する塩基配列からなる一本鎖オリゴヌクレオチドを、上記プライマーとして好適に用いることができる。
【００４３】
上記増幅したＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドの生成は、例えば、該Ｆａｂｐ７遺伝子を組換え発現ベクターに組み込んだ後、公知の方法により発現可能な宿主に導入し、宿主内で翻訳されて得られるポリペプチドを精製すればよい。発現ベクターは、外来ポリヌクレオチドを発現するように宿主内で機能するプロモーターを組み込んであることが好ましい。組換え的に産生されたポリペプチドを精製する方法は、用いた宿主、ポリペプチドの性質によって異なるが、周知の方法（例えば、硫安沈殿またはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィー）を用いることができる。
【００４４】
生成したポリペプチドと、長鎖脂肪酸との間の結合力の測定は、例えば、増幅したＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを合成して、長鎖脂肪酸とともにインキュベートし、これを、ＦＡＢＰ７タンパク質と長鎖脂肪酸とが結合したものと、遊離した長鎖脂肪酸とに分離して、それぞれのモル濃度を測定することにより、質量作用の法則に基づいて結合定数Ｋａを求めることにより行い得る（非特許文献３参照）。
【００４５】
本発明に係る評価方法において用いる長鎖脂肪酸は、不飽和脂肪酸であることがより好ましく、ＦＡＢＰ７タンパク質との親和性が高いことが知られているω３不飽和脂肪酸であることがさらに好ましく、ＦＡＢＰ７タンパク質の天然のリガンドとして考えられているドコサヘキサエン酸であることがなおさらに好ましい。
【００４６】
ＦＡＢＰ７タンパク質と長鎖脂肪酸とが結合したものと、遊離した長鎖脂肪酸との分離は、例えば、脂質のみを吸着するカラムを用いればよく、例えば、Ｌｉｐｉｄｅｘ１０００等のヒドロキシアルキル基を有するセファデックスカラムを通し、ＦＡＢＰ７タンパク質と長鎖脂肪酸とが結合したものをＫＰｉバッファー等の溶出バッファーにより溶出し、遊離した長鎖脂肪酸をメタノール等で溶出することにより、該分離を行うことができる。
【００４７】
上記結合力の測定はまた、周知慣用のアクリロダン標識脂肪酸結合腸タンパク質（ＡＤＩＦＡＢ）、または周知慣用の等温滴定熱量測定法を用いて行うこともできる。
【００４８】
測定された結合力に基づいた、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性の評価は、該結合力が高いほど、ＦＡＢＰ７の活性が高まっていると考えられるので、プレパルス抑制も高く、精神疾患の発症可能性は低いと評価することができる。一方、上記結合力が低い場合は、ＦＡＢＰ７の活性が弱くいと考えられるので、プレパルス抑制が低く、精神疾患の発症可能性が高いと評価することができる。この評価は、例えば、上記のように求めた結合定数Ｋａに基づいて、定性的または定量的に行うことができる。また、本発明に従って、一個体において精神疾患の発症可能性が高いと評価した場合、その子孫においても精神疾患の発症可能性が高いと評価することができる。
【００４９】
本発明に係る評価方法は、統合失調症、双極性感情障害（躁うつ病）、強迫性障害（強迫神経症）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、およびハンチントン病等の精神疾患の発症可能性の評価に用いることができるが、特に、統合失調症の発症可能性の評価に好適に用いることができる。
【００５０】
本発明に係る他の評価方法として、個体から単離したゲノムＤＮＡ上に存在するＦａｂｐ７遺伝子の少なくとも一部の塩基配列を決定する工程（ａ）と、決定された該塩基配列に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程（ｂ）とを包含する評価方法を挙げることができる。
【００５１】
工程（ａ）では、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価するための塩基配列の情報を得られればよく、具体的には、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量、またはＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸のような長鎖脂肪酸との間の結合力を予測するための情報を得られればよく、さらに具体的には、これに限定されるものではないが、ＦＡＢＰタンパク質とドコサへキサエン酸との結合力を変化させる、ＦＡＢＰ７タンパク質の６１番目のスレオニンを置換し得るＳＮＰ部位を含む塩基配列の情報を得られればよい。
【００５２】
また、工程（ａ）において用いる手法は特に限られないが、周知慣用の塩基配列決定手法を用いればよく、ダイレクトシーケンス法その他の塩基配列を決定する定法を用いることができる。なお、上記評価を特定の遺伝子多型を指標に行う場合には、該遺伝子多型を含む近傍の配列のみを決定すればよい。また、インベーダー法、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法等の一塩基多型（ＳＮＰ）その他の遺伝子多型の検出をする定法を採用することもできる。
【００５３】
工程（ｂ）において、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性の評価は、工程（ａ）において得た塩基配列情報に基づいて、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量、またはＦａｂｐ７遺伝子によってコードされるＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸のような長鎖脂肪酸との間の結合力を予測して、その予測に基づいて、個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する。具体的には、健常者と比較して、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量が変化している場合（例えば、脳が未成熟な段階において発現量の減少している場合、もしくは成人において発現量が増加している場合等）、またはＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）との間の結合力が低下する場合には、該個体又は該個体を親とする後代の精神疾患の発症可能性が高いと評価される。
【００５４】
Ｆａｂｐ７遺伝子の発現量を予想する方法は特に限定されるものではないが、具体的には例えば、その遺伝子の発現に影響を与える遺伝子多型の有無にて予想をする方法を例示することが出来る。なお、例えば遺伝子のイントロン領域、エンハンサー領域等における遺伝子多型はタンパク質のアミノ酸配列自体に変異を生じさせないものの、その産生量（遺伝子の発現量）を大きく変化させる例があることは周知の事実である。
【００５５】
また、ＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）との間の結合力を予測する方法としては、例えば、前述の方法により野生型並びに変異型のＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）との間の結合力を実測したデータを蓄積し、そのデータテーブル並びに工程（ａ）にて決定した塩基配列情報を参照することにより行うことが出来る。また、実施例にて後述するように、遺伝子の変異がある場合に、ＦＡＢＰ７タンパク質の立体構造情報を参照して、その変異がＦＡＢＰ７タンパク質におけるＤＨＡとの結合領域の構造変化を引き起こすものであるかどうかを指標として行うことができる。
【００５６】
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【００５７】
また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。
【００５８】
以下、実施例によって本発明をさらに詳しく説明するが、これは本発明を何ら限定するものではない。
【実施例】
【００５９】
〔実施例１：プレパルス抑制に関するＱＴＬ解析〕
プレパルス抑制を指標としたマウスのＱＴＬ解析を行った。
【００６０】
マウスのプレパルス抑制（ＰＰＩ）は、図１に示すように測定した。すなわち、プラットフォーム上に固定したマウスに対して音刺激を与え、該音刺激に対する該マウスの体動（筋反射）の大きさを測定した。このとき、プレパルスを与えなかった場合の驚愕反射の大きさをａとし、プレパルスを与えた場合の驚愕反射の大きさをｂとしたときに、（ａ−ｂ）／ａ×１００（％）としてプレパルス抑制を測定した。測定器具は、Ｍｅｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ社から購入した。
【００６１】
図２は、プレパルス抑制の測定についてのさらに詳しい説明図である。図２に示すように、プレパルス抑制の測定は、１０分の順応期間をおいた後開始する。５０ミリ秒の無音の後、２０ミリ秒のプレパルス音（０（プレパルスなし）、７２、７４、７８、８２、または８６ｄＢ）を与え、１００ミリ秒おいてから、４０ｍｓのパルス音（１２０ｄＢ）を与えた。その後の１００ミリ秒間、驚愕反射の測定を行った。このときのパルス音から驚愕反射までの時間を以後潜時と称する。以上を一回のトライアルとし、１０〜２０秒開けて、複数回トライアルを行った。
【００６２】
まず、複数のマウス系統に対し、プレパルス抑制を計測して、系統として、プレパルス抑制の値が安定している系統のうち、プレパルス抑制が大きい系統Ｂ６（Ｃ５７ＢＬ／６ＮＣｒｌＣｒｌｊ、日本チャールズリバー研究所）およびプレパルス抑制が小さい系統Ｃ３（Ｃ３Ｈ／ＨｅＮＣｒｌＣｒｊ、日本チャールズリバー研究所）を得た。図３に示すように、Ｂ６およびＣ３は、生後７週間後および生後１２週間後の両方でほぼ同様のプレパルス抑制を示しており、生後７週間後〜生後１２週間後の期間において、プレパルス抑制が安定していると考えられる。そのため、以後のプレパルス抑制の測定は、生後８〜９週間後において実施した。
【００６３】
次に、Ｂ６のメスとＣ３のオスとを掛け合わせ、１０１０のＦ２個体を得た（４９７匹のオスおよび５１３匹のメス）。これらのＦ２個体に対し、プレパルス抑制を測定するとともに、各Ｆ２個体の遺伝子型を、Dietrich WF, Miller J, Steen R, Merchant MA, Damron-Boles D et al. (1996) A comprehensive genetic map of the mouse genome. Nature 380: 149-152.に基づいた公知のマイクロサテライトマーカーにより判別して、ＱＴＬ解析を行った。遺伝子型の判別には、３７３０ｘｌＤＮＡアナライザー（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）および蛍光標識されたプライマーによるＰＣＲ法を用いた。なお、上記ＱＴＬ解析では、プレパルス音の大きさを変化させたときの結果に加えて、驚愕反射そのものの大きさ（ＡＳＲ）および潜時（Ｌａｔｅｎｃｙ）についても解析を行った。
【００６４】
ＱＴＬ解析は、まず、ＣＩＭ（ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｍａｐｐｉｎｇ）法を用いて第１段階のＱＴＬ解析を行った後、第１段階において有意なロッドスコアを示した染色体（染色体１、３、７、１０、および１３）について、第２段階のＱＴＬ解析を行った。
【００６５】
第２段階のＱＴＬ解析では、ＭＩＭ（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｍａｐｐｉｎｇ）法を用いて、オスのマウスと、メスのマウスとでデータを分けて解析を行った。メスについての結果を図４に、オスについての結果を図５に示す。
【００６６】
図４に示すように、メスにおいては、染色体１０にピークが存在することが判るが、その位置についてはあいまいな結果しか得られなかった。一方、図５に示すように、オスについて解析を行ったことによって、鋭いピークが得られた。
【００６７】
ピーク内に存在した３０の遺伝子の中から、本発明者らは、独自の観点に基づきＦａｂｐ７について解析を進めた。Ｆａｂｐ７遺伝子は、コード領域においてＣ３マウスとＢ６マウスとで配列に差がなく、プレパルス抑制の責任遺伝子ではない可能性が高かったが、本発明者らは、独自の直感に基づいて解析を進めたところ、後述するように、相補性試験によって、Ｆａｂｐ７がプレパルス抑制の責任遺伝子であることを立証した（図１０）。
【００６８】
〔実施例２：Ｆａｂｐ７の発現の解析〕
Ｆａｂｐ７遺伝子について、さまざまな脳部位および発達段階について発現を測定した。結果を図６に示す。なお、図中、ＣＸは大脳皮質、ＦＣは前頭葉、ＨＰは海馬、ＣＥは小脳、ＯＢは嗅脳、Ｅ１６は胎生１６日目、Ｐ０は生後直後、Ｐ７は生後７日目、Ａｄｕｌｔ（８Ｗ）は生後８週齢、＊は統計的な有意差（Ｐ＜０．０５）を示す。図６に示すように、前頭葉において、生後７日目にはＣ３系統のマウスよりもＢ６系統のマウスの方が、Ｆａｂｐ７の発現量が多くなるが、生後８週齢では、Ｃ３系統のマウスの方が多くなる。
【００６９】
前頭葉は統合失調症に関与していることが知られており、Ｂ６系統のマウスと、Ｃ３系統のマウスとのプレパルス抑制の違いも、生後７日目におけるＦａｂｐ７の発現量の違いに起因する蓋然性が高い。
【００７０】
なお、マウスは脳が完成していない状態で出産されるので、脳の発達段階の観点からみれば、生後７日目はヒトではまた胎内にいる状態に対応する。
【００７１】
したがって、上記事実は、不飽和脂肪酸を胎児に供給することにより、胎児の生後におけるプレパルス抑制を改善することができるという本発明者らの考えを支持するものである。
【００７２】
図７は、胎生１６日目（Ｅ１６）、および生後直後（Ｐ０）の脳の前額断切片を、ＦＡＢＰ７タンパク質の抗体で染色したものを示す図である。図７に示すように、胎生１６日目および生後直後においてＦＡＢＰ７タンパク質が多量に発現しており、特に、脳室周囲（神経新生が盛んな場所）に多くみられる。
【００７３】
図８は、胎生１５日目（Ｅ１５）、生後直後（Ｐ０）、および生後７０日目（Ｐ７０）における脳でのＦａｂｐ７ｍＲＮＡの発現をノーザンブロット解析により解析した結果を示す図である。Ｇａｐｄｈはコントロールを示す。図８に示すように、Ｆａｂｐ７ｍＲＮＡの発現は、次第に減少し、生体では殆ど見られない。
【００７４】
以上のように、ＦＡＢＰ７タンパク質は、神経新生に関わっていることが示唆される。このことは、未完成の脳において、ＦＡＢＰ７タンパク質が働くことが特に有用であるという本発明者らの考えと矛盾しない。
【００７５】
〔実施例３：Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスの解析〕
Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスをＢ６系統のマウスから周知慣用の方法により作成した。上記ノックアウトマウスのプレパルス抑制（ＰＰＩ）を測定し、野生型Ｂ６系統のマウスと比較した結果を図９に示す。図９に示すように、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスは、プレパルス抑制が減少していた。
【００７６】
次に、Ｆａｂｐ７が確かに、上記ＱＴＬ解析におけるピークの責任遺伝子であったことを確かめるために、相補性試験を実施した。具体的には、野生型のＢ６系統のマウス（Ｑ／Ｑと表記）、野生型のＢ６系統のマウスとＣ３系統のマウスとを掛け合わせたもの（Ｑ／ｑと表記）、野生型のＢ６系統のマウスとＦａｂｐ７ノックアウトマウスとを掛け合わせたもの（Ｑ／−と表記）、およびＣ３系統のマウスとＦａｂｐ７ノックアウトマウスとを掛け合わせたもの（ｑ／−と表記）を準備し、プレパルス抑制（ＰＰＩ）を測定した。このとき、［（Ｑ／Ｑ）のＰＰＩ−（Ｑ／−）のＰＰＩ］が、［（Ｑ／ｑ）のＰＰＩ−（ｑ／−）のＰＰＩ］と有意に異なれば、Ｆａｂｐ７が上記ピークに関与していると判断できる。図１０に結果をしめす。図１０に示すように、有意な差が見られ、Ｆａｂｐ７が確かに上記ピークに関与していることが立証された。
【００７７】
なお、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスは、図１１に示すように、潜時についても、野生型に比べ有意な差を有していた。
【００７８】
統合失調症の病態仮説として、ＮＭＤＡ受容体介する神経伝達が低下しているとする「ＮＭＤＡ低下仮説」がある。その根拠の１つは、ＮＭＤＡ受容体拮抗作用をもつフェンサイクリジンが、特に反復摂取により統合失調症症状を引き起こし、また統合失調症患者が摂取すると病状が悪化するという事実がある。そこで、フェンサイクリジンと同じ作用を有するＭＫ−８０１をＦａｂｐ７ノックアウトマウスに反復投与して結果を観察した。図１２にその結果を示す。図１２の縦軸は誘発行動量を示し、横軸はＭＫ−８０１投与後の時間を示す。図１２に示すように、その結果、誘発行動量が野生型マウスに比較して増強した。このことはＦａｂｐ７ノックアウトマウスがヒト統合失調症同様、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬に感受性が高いということを示し、Ｆａｂｐ７が統合失調症に関与しているという本発明者らの考えを支持する。
【００７９】
Ｃ３系統のマウスでは、生後７日目という脳の完成前段階にある前頭葉でＦａｂｐ７遺伝子の発現が下がっていたが、このことが成体期におけるプレパルス抑制の低下にどのように結びつくのかを調査した。
【００８０】
Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスを用いて神経新生の程度を評価したところ、Ｆａｂｐ７遺伝子の破壊によって脳における神経新生は低下していることが判明した。図１３は、野生型と、ノックアウトマウスとの脳の各部位の比較を示す図である。Ａ〜Ｃは、生後４週間目の海馬歯状回の様子を示す写真であり、ＡではＧＦＡＰ（神経幹細胞／初期前駆細胞のマーカー）の発現を示し、ＢではＰＳＡ−ＮＣＡＭ（後期前駆細胞のマーカー）の発現を示す。何れも、ノックアウトマウスにおいて発現が減少している。また、Ｃでは、ＢｒｄＵ（５−ブロモ−２’−デオキシウリジン、新生細胞のマーカー）の発現を示し、Ｄは、ＢｒｄＵを発現している細胞の数を示す。Ｃ〜Ｄに示すように、ノックアウトマウスにおいて新生細胞の減少が見られる。
【００８１】
以上の結果から、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現が脳の発達期に低下していると、神経細胞の増殖の低下をきたし、成長後の神経ネットワークに変化をきたし、その変化が基盤となってプレパルス抑制の低下が生じることが示唆された。
【００８２】
〔実施例４：ヒトにおけるＦａｂｐ７の解析〕
図１４は、統合失調症を発症したアメリカ人の死後脳におけるＦａｂｐ７遺伝子の発現を示す。３つのグラフは、Ｆａｂｐ７に対するコントロールをそれぞれＧＡＰＤ、ＡＣＴＢ、またはＰＧＫ１に換えて表したものである。図１４に示すように、成人の統合失調症の患者の脳では、Ｃ３系統のマウスがそうであったように、Ｆａｂｐ７の発現が増加していた。このことは、マウスとヒトとで同様の機構が働くことを示唆している。
【００８３】
なお、上記Ｆａｂｐ７の発現の増加が、服用していた薬による影響かどうか検討するために、マウスに向精神薬ハロリドベール（統合失調症の治療薬：主たる薬理作用は、神経伝達物質であるドーパミンの受容体の阻害である）を慢性に投与してＦａｂｐ７遺伝子の発現を調べたが、薬によって発現が増加することはなかった（図１５）。したがって、Ｆａｂｐ７遺伝子の発現変化は疾患によるものと考えられる。
【００８４】
次に、Ｆａｂｐ７遺伝子のゲノム上の個人差が統合失調症の発症に影響するかどうかを、Ｆａｂｐ７遺伝子のＳＮＰを調べることによって検討した。その結果、アミノ酸変化を伴うＳＮＰを含むＦａｂｐ７遺伝子の領域が、日本人の統合失調症の発症に関連していることが分かった（図１６）。
【００８５】
図１６の上図は、Ｆａｂｐ７遺伝子のゲノム構造とＳＮＰの位置を表している。下図は、Ｆａｂｐ７遺伝子のゲノム領域のうち、ＳＮＰ３、ＳＮＰ４、ＳＮＰ５、およびＳＮＰ６からなるＢｌｏｃｋ２が統合失調症に関連していることを示す。ＳＮＰ３は、６１番目のスレオニンがメチオニンに置換するＳＮＰで、特に関連が強い。図１７は、Ｆａｂｐ７タンパク質の結晶構造を示す模式図である。図１７に示すように、６１番目のスレオニンは、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が結合する部位の近くにあり、そのアミノ酸が変化すると、ＤＨＡに対する親和性が変化する可能性がある。
【００８６】
以上のように、日本人統合失調症の場合、ＦＡＢＰ７タンパク質とドコサヘキサエン酸との結合の強さの違いが疾患感受性に影響を与えている可能性が考えられる。以上のことから、Ｆａｂｐ７遺伝子は脳での発現レベルの変化やゲノム上のＳＮＰによって、統合失調症のなりやすさに効果を及ぼしていると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明は、食品および薬品の製造分野および遺伝子診断の分野において利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１】マウスのプレパルス抑制の測定方法を説明する図である。
【図２】プレパルス抑制の測定方法を詳細に説明する図である。
【図３】Ｂ６系統のマウスと、Ｃ３系統のマウスのプレパルス抑制を比較するグラフである。
【図４】メスのマウスについてのＱＴＬ解析の結果を示す図である。
【図５】オスのマウスについてのＱＴＬ解析の結果を示す図である。
【図６】Ｆａｂｐ７遺伝子の、さまざまな脳部位および発達段階における発現の測定結果を示すグラフである。
【図７】脳の前額断切片を、ＦＡＢＰ７タンパク質の抗体で染色したものを示す写真である。
【図８】脳でのＦａｂｐ７ｍＲＮＡの発現を示す写真である。
【図９】プレパルス抑制について、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスとＢ６系統のマウスとを比較するグラフである。
【図１０】相補性試験の結果を示す図である。
【図１１】潜時について、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスとＢ６系統のマウスとを比較するグラフである。
【図１２】ＭＫ−８０１投与後の誘発行動量について、Ｆａｂｐ７ノックアウトマウスとＢ６系統のマウスとを比較するグラフである。
【図１３】野生型と、ノックアウトマウスとの脳の各部位の比較を示す図である。
【図１４】統合失調症を発症したアメリカ人の死後脳におけるＦａｂｐ７遺伝子の発現を示すグラフである。
【図１５】マウスに向精神薬を投与した結果を示すグラフである。
【図１６】統合失調症の日本人患者におけるＦａｂｐ７遺伝子のＳＮＰを示す図である。
【図１７】ＦＡＢＰ７タンパク質の結晶構造を示す模式図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精神疾患の発症を予防するための組成物であって、
長鎖脂肪酸、または
少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂
を含んでおり、
脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴とする組成物。
【請求項２】
母体を介して供給されるように調製されていることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記精神疾患が、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患であることを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項１〜３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項５】
上記不飽和脂肪酸が、ω３不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
上記ω３不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
プレパルス抑制を改善するための組成物であって、
長鎖脂肪酸、または
少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂
を含んでおり、
脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴とする組成物。
【請求項８】
母体を介して供給されるように調製されていることを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
上記不飽和脂肪酸が、ω３不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
上記ω３不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸であることを特徴とする請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅する工程と、
増幅した該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを生成する工程と、
該ポリペプチドと長鎖脂肪酸との間の結合力を測定する工程と、
測定された該結合力に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含することを特徴とする精神疾患の発症可能性の評価方法。
【請求項１３】
上記精神疾患が、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患であることを特徴とする請求項１２に記載の評価方法。
【請求項１４】
上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項１２または１３に記載の評価方法。
【請求項１５】
上記不飽和脂肪酸が、ω３不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項１４に記載の評価方法。
【請求項１６】
上記ω３不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸であることを特徴とする請求項１５に記載の評価方法。
【請求項１７】
個体から単離したゲノムＤＮＡ上に存在するＦａｂｐ７遺伝子の少なくとも一部の塩基配列を決定する工程と、
決定された該塩基配列に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含することを特徴とする精神疾患の発症可能性の評価方法。
【請求項１８】
精神疾患の発症を予防するための組成物であって、
長鎖脂肪酸、または
少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂
を含んでおり、
請求項１２〜１７の何れか一項に記載の評価方法により精神疾患の発症可能性が高いと評価された個体に対して、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴とする組成物。
【請求項１】
精神疾患の発症を予防するための組成物であって、
長鎖脂肪酸、または
少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂
を含んでおり、
脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴とする組成物。
【請求項２】
母体を介して供給されるように調製されていることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記精神疾患が、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患であることを特徴とする請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項１〜３の何れか一項に記載の組成物。
【請求項５】
上記不飽和脂肪酸が、ω３不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
上記ω３不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
プレパルス抑制を改善するための組成物であって、
長鎖脂肪酸、または
少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂
を含んでおり、
脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴とする組成物。
【請求項８】
母体を介して供給されるように調製されていることを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項７または８に記載の組成物。
【請求項１０】
上記不飽和脂肪酸が、ω３不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
上記ω３不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸であることを特徴とする請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
個体から単離したゲノムＤＮＡを鋳型にＦａｂｐ７遺伝子を増幅する工程と、
増幅した該Ｆａｂｐ７遺伝子によってコードされるポリペプチドを生成する工程と、
該ポリペプチドと長鎖脂肪酸との間の結合力を測定する工程と、
測定された該結合力に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含することを特徴とする精神疾患の発症可能性の評価方法。
【請求項１３】
上記精神疾患が、統合失調症、双極性感情障害、強迫性障害、注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、およびハンチントン病からなる群より選ばれる精神疾患であることを特徴とする請求項１２に記載の評価方法。
【請求項１４】
上記長鎖脂肪酸が、不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項１２または１３に記載の評価方法。
【請求項１５】
上記不飽和脂肪酸が、ω３不飽和脂肪酸であることを特徴とする請求項１４に記載の評価方法。
【請求項１６】
上記ω３不飽和脂肪酸が、ドコサヘキサエン酸であることを特徴とする請求項１５に記載の評価方法。
【請求項１７】
個体から単離したゲノムＤＮＡ上に存在するＦａｂｐ７遺伝子の少なくとも一部の塩基配列を決定する工程と、
決定された該塩基配列に基づいて、該個体またはその子孫の精神疾患の発症可能性を評価する工程とを包含することを特徴とする精神疾患の発症可能性の評価方法。
【請求項１８】
精神疾患の発症を予防するための組成物であって、
長鎖脂肪酸、または
少なくとも一つの長鎖脂肪酸を構成脂肪酸としている油脂
を含んでおり、
請求項１２〜１７の何れか一項に記載の評価方法により精神疾患の発症可能性が高いと評価された個体に対して、脳組織が未成熟な段階で体内に供給されるように調製されていることを特徴とする組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図７】
【図８】
【図１３】
【図１７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図７】
【図８】
【図１３】
【図１７】
【公開番号】特開２００９−１２０５０１（Ｐ２００９−１２０５０１Ａ）
【公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２９３７６２（Ｐ２００７−２９３７６２）
【出願日】平成１９年１１月１２日（２００７．１１．１２）
【出願人】（５０３３５９８２１）独立行政法人理化学研究所 (1,056)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月１２日（２００７．１１．１２）
【出願人】（５０３３５９８２１）独立行政法人理化学研究所 (1,056)
【Ｆターム（参考）】
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