細胞分離用流路、細胞分離装置および細胞分離方法
【課題】生体組織から生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができる細胞分離用流路、細胞分離装置および細胞分離方法を提供する。
【解決手段】一方から他方へ向けて生体由来細胞Ｄを含有する生体組織Ｂを内部に流動させ、内部に生体組織Ｂを分解する分解酵素Ａが固定された流路３を備える細胞分離用流路１を提供する。本発明の細胞分離用流路１を用いることにより、流路３内に生体組織Ｂを流動させるだけで生体組織Ｂの分解処理が行われ、さらに、流路３から分解酵素Ａが混在しない生体由来細胞Ｄの細胞懸濁液を得ることができる。
【解決手段】一方から他方へ向けて生体由来細胞Ｄを含有する生体組織Ｂを内部に流動させ、内部に生体組織Ｂを分解する分解酵素Ａが固定された流路３を備える細胞分離用流路１を提供する。本発明の細胞分離用流路１を用いることにより、流路３内に生体組織Ｂを流動させるだけで生体組織Ｂの分解処理が行われ、さらに、流路３から分解酵素Ａが混在しない生体由来細胞Ｄの細胞懸濁液を得ることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離用流路、細胞分離装置および細胞分離方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、生体から採取された脂肪組織から生体由来細胞を分離し、これを再生医療などに用いる研究が行われている（例えば、特許文献１参照。）。脂肪組織を消化酵素で分解すると脂肪組織から生体由来細胞が分離されて細胞懸濁液を得る。その後、遠心分離により消化酵素の含まれた上清と生体由来細胞とに分離して上清のみを排出し、再び洗浄液を注入して遠心分離するという作業を繰り返すことにより消化酵素を除去し、純度の高い生体由来細胞を得ることができる。
【０００３】
【特許文献１】特表２００７−５２４３９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、遠心分離による酵素の洗浄は、洗浄液の注入、遠心分離および排出と多段階で行われ、さらにこれを繰り返して細胞懸濁液に含まれる消化酵素を段階的に除去するため、非常に多くの時間と労力を要するという不都合がある。また、生体由来細胞を得るための全工程において、酵素洗浄に要する時間の割合が大きく、全処理時間を短縮するためには、酵素洗浄に要する時間を短縮することが要求される。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、生体組織から生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができる細胞分離用流路、細胞分離装置および細胞分離方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路を備える細胞分離用流路を提供する。
【０００７】
本発明によれば、生体組織を流路内に流動させると、生体組織は流路内の分解酵素と接触して分解されながら流動させられる。そして、細胞が生体組織から分離されて浮遊した細胞懸濁液を得ることができる。この場合に、分解酵素は流路内において固定されているので、細胞懸濁液内に混在することがない。
したがって、本発明によれば、生体組織を流路内に流動させた後に回収するだけで、分解酵素が含まれない細胞懸濁液が得られ、分解酵素を洗浄して除去するための処理が不要となる。これにより、生体組織から細胞を抽出する処理時間を短縮することができる。
【０００８】
上記発明においては、前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されていてもよい。
このようにすることで、流路が直線状に形成される場合と比べ、流路全体の寸法を小さく抑えながら流路を長く形成して生体組織と分解酵素との接触面積を拡大させることができる。また、流路内において乱流が生じやすくなり生体組織が撹拌されながら流動させられる。これにより、生体組織を分解酵素に効率良く接触させて生体組織の分解を促進し、生体組織から得られる生体由来細胞の収率を向上させることができる。
【０００９】
また、コイル形状の中心に筒状のヒータを挿入することにより、チューブとヒータとの接触面積が広く確保され、効率良く均一に流路内を加温することができる。また、このようにして流路内を約３７℃に加温することにより、分解酵素の活性が高められ、生体組織を効率良く分解させることができる。
【００１０】
また、上記発明においては、前記流路が、前記分解酵素が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備えることとしてもよい。
このようにすることで、流路の構造を簡易にし、製造を容易にすることができる。また、複数の平板状部材を厚さ方向に積層することで、全体の寸法を小さく抑えながら複数の流路が形成され、一度に流動させることができる生体組織の量を増加させることができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記流路の両端に他の流路と接続可能なコネクタを備えることとしてもよい。
このようにすることで、本発明に係る細胞分離用流路を他の流路や装置と接続して使用することができる。また、このようにして使用される場合でも、細胞分離用流路のみを取り外して分解酵素の活性が保持される環境、例えば、冷凍で保存することができる。また、細胞分離用流路をディスポーザブルとして使用し、これのみを交換することが可能である。
【００１２】
また、本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、該収容容器に一端が接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路と、該流路の他端に接続された回収容器と、前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記流路内に前記生体組織を送液させる送液手段とを備える細胞分離装置を提供する。
【００１３】
本発明によれば、送液手段により収容容器内の生体組織を流路内に送液させると、生体組織は流路内において分解酵素と接触して分解される。ここで回収容器内に得られた、酵素処理された生体組織を含む細胞懸濁液を、所定時間静置させて層分離させた後、さらに別容器へ送液する等により、生体由来細胞を含む細胞懸濁液を、生体組織から分離して得ることができる。この所定時間としては、例えば、１０分程度でよい。
この場合に、回収容器内の懸濁液内には分解酵素が混在しないので、分解酵素を洗浄して除去する工程が不要となり、生体由来細胞の分離に要する処理時間を短縮することができる。
【００１４】
上記発明においては、前記流路内の温度を制御する温度制御部を備えることとしてもよい。
また、上記発明においては、前記温度制御部が、筒状のヒータであり、前記流路が、前記ヒータの外部にコイル状に巻かれていてもよい。
【００１５】
また、本発明は、一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路を備える細胞分離用流路を提供する。
上記発明においては、前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されていてもよく、また、前記流路が、前記吸着剤が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備えていてもよい。
【００１６】
更に本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、該収容容器に一端が接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路と、該流路の他端に接続された回収容器と、前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記生体組織を前記流路内に送液させる送液手段と、前記流路の途中位置において前記分解酵素を注入する酵素注入部とを備える細胞分離装置を提供する。
【００１７】
本発明によれば、酵素注入部から流路内へ分解酵素を注入すると、分解酵素が流路内の吸着剤によって吸着される。そして、そこへ送液された生体組織は分解酵素によって分解され、回収容器には分解酵素が混在しない細胞懸濁液が回収される。このようにすることで、分解酵素の洗浄が不要となり、生体由来細胞を分離するための処理時間を短縮することができる。
【００１８】
また、流路内に吸着剤のみを設け、生体組織を送液させる直前に分解酵素を流路内に注入して吸着させる構成にすることで、分解酵素のみを別に保存し、また、交換することが可能となる。これにより、保存期限が短い分解酵素であっても、活性が高い状態の分解酵素を使用することができ、生体組織が分解される効率の低下やばらつきを防ぎ、安定して生体組織を分解させることができる。
上記発明においては、前記流路内の温度を制御する温度制御部を備えることとしてもよく、また、前記温度制御部が筒状のヒータを備え、前記流路が前記ヒータの外部にコイル状に巻かれていることとしてもよい。
【００１９】
また、上記発明においては、前記流路内を洗浄する洗浄液を前記流路内へ注入する洗浄液注入部と、該洗浄液注入部から注入され前記流路内を流動した前記洗浄液を排出する排出部とを備えることとしてもよい。
【００２０】
流路内に過剰な量の分解酵素が注入されると、吸着剤によって吸着されなかった分解酵素がその後送液される生体組織とともに回収容器に回収されることが予想される。しかし、分解酵素を注入した後に、洗浄液注入部から洗浄液を注入して排出部から排出することにより、流路内が洗浄されて過剰な分解酵素が除去され、細胞懸濁液に分解酵素が混入することを防ぐことができる。
【００２１】
また、本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を、該生体組織を分解する分解酵素が固定された流路内に流動させる流動ステップを備える細胞分離方法を提供する。上記発明においては、前記流動ステップの後に、得られた生体由来細胞を含有する細胞懸濁液を回収する回収ステップを備えることとしてもよい。
本発明によれば、流動ステップにおいて生体組織を流動させると、生体組織が分解酵素によって分解される。その後、回収ステップにおいては、得られた酵素処理された生体組織を含む懸濁液を、所定時間静置させて層分離させた後、更に別容器へ送液する等によって、生体由来細胞を含む細胞懸濁液を分離して得ることができる。
【００２２】
このようにすることで、分解酵素が混在しない細胞懸濁液が回収されるので、分解酵素を除去するための洗浄工程が不要となり、生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができる。
上記発明においては、前記流動ステップの前に前記分解酵素を加温する加温ステップを備えることとしてもよい。
【００２３】
また、本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路に、前記分解酵素を流動させて前記吸着剤に吸着させる吸着ステップと、該吸着ステップにおいて前記分解酵素が吸着された前記流路を加温する加温ステップと、該加温ステップにおいて加温された前記流路内に前記生体組織を流動させる流動ステップとを備える細胞分離方法を提供する。上記発明においては、前記流動ステップの後に、前記生体由来細胞を含有する懸濁液を回収する回収ステップを備えることとしてもよい。
【００２４】
本発明によれば、吸着ステップにおいて分解酵素が内部に吸着された流路内を加温ステップにより加温する。そして、流動ステップにおいて、生体組織が分解酵素と接触して分解されながら流動させられる。その後、回収ステップにおいて、得られた酵素処理された生体組織を含む細胞懸濁液を、所定時間静置させて層分離させた後、更に別容器へ送液する等によって、生体由来細胞を含む細胞懸濁液を、生体組織から分離して得ることができる。このようにすることで、生体由来細胞の分離に要する処理時間を短縮することができる。
【００２５】
上記発明においては、前記流動ステップの前に、前記流路内に洗浄液を流動させて洗浄する洗浄ステップを備えることとしてもよい。
このようにすることで、吸着剤によって吸着されなかった過剰な分解酵素を流路内から除去し、分解酵素の細胞懸濁液への混入を防ぐことができる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明によれば、生体組織から生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明の第１の実施形態に係る細胞分離用流路１、これを備えた細胞分離装置２ならびに細胞分離方法について、図１〜図３を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離用流路１は、図１に示されるように、内壁３ａに分解酵素Ａが固定されたチューブ（流路）３と、該チューブ３の両端に設けられたコネクタ４とを備えている。分解酵素Ａは、例えば、包括法や共有結合法など、従来使用されている蛋白質の固定方法を用いて内壁３ａに固定されている。
【００２８】
本実施形態に係る細胞分離装置２は、図２に示されるように、細胞分離用流路１と、脂肪組織（生体組織）Ｂを収容する収容容器５と、収容容器５から細胞分離用流路１に脂肪組織Ｂを送液する送液ポンプ（送液手段）６と、脂肪由来細胞Ｄを含有する細胞懸濁液を回収する回収容器７と、細胞分離用流路１内を加温するヒータ８とを備えている。
【００２９】
細胞分離用流路１は、円筒状のヒータ８の外周に沿ってコイル状に巻きつけられ、コネクタ４を介して収容容器５および回収容器７と接続されている。収容容器５内には、洗浄液Ｃで懸濁されてほぐされた脂肪組織Ｂが収容されている。
送液ポンプ６を作動させると、収容容器５内の脂肪組織Ｂが、分解酵素Ａによって分解されながら細胞分離用流路１内を流動させられる。そして、脂肪組織Ｂから分離された脂肪由来細胞Ｄを含む細胞懸濁液が回収容器７内に回収されるようになっている。
【００３０】
このように構成された細胞分離用流路１および細胞分離装置２を用いた細胞分離方法について、図３を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離方法は、ヒータ８によりチューブ３内を約３７℃に加温する加温ステップＳ１と、加温されたチューブ３内に脂肪組織Ｂを流動させる流動ステップＳ２と、流動させられた脂肪組織Ｂから分離された脂肪由来細胞Ｄを含む細胞懸濁液を回収する回収ステップＳ３とを備えている。
【００３１】
加温ステップＳ１において約３７℃に加温されたチューブ３内へ、流動ステップＳ２において収容容器５内の脂肪組織Ｂが流動させられると、回収ステップＳ３において回収容器７内に脂肪由来細胞Ｄおよび分解された脂肪組織Ｂを含む懸濁液が回収される。そして、例えば、これを静置して脂肪組織Ｂが分解されて生じた脂肪分の上層と、細胞懸濁液の下層とに層分離させ、下層のみを別容器へ送液する等することにより、分離された脂肪由来細胞Ｄを含む細胞懸濁液を得ることができる。
【００３２】
このように、本実施形態によれば、分解酵素Ａが内壁３ａに固定されたチューブ３内に脂肪組織Ｂを流動させるだけで、分解酵素Ａが混在しない脂肪由来細胞Ｄの懸濁液が得られる。これにより、分解酵素Ａを除去するための洗浄工程が不要になるので、従来に比べ短い処理時間で脂肪由来細胞Ｄを得ることができるという利点がある。
また、分解酵素Ａをチューブ３の内壁３ａに固定させる構成にすることにより、脂肪組織Ｂが流動させられる流路の断面積が広く維持され、脂肪組織Ｂがチューブ３内で詰まるのを防いで円滑に流動させることができる。
【００３３】
また、円筒形状のヒータ８にチューブ３を巻きつける構成にすることにより、細胞分離用流路１の寸法を小さく抑えながらチューブ３が長く確保され、また、チューブ３内において乱流が生じやすくなる。これにより、脂肪組織Ｂがチューブ３内において撹拌されながらより長い時間流動させられるので、脂肪組織Ｂを効率良く分解酵素Ａに接触させて分解させ、より多くの脂肪由来細胞Ｄを得ることができる。また、ヒータ８とチューブ３との接触面積が広く確保されるので、チューブ３内を均一に効率良く加温して分解酵素Ａの活性を高めることができる。
【００３４】
また、コネクタ４により細胞分離用流路１を収容容器５および回収容器７と接続する構成にすることで、細胞分離用流路１のみを別に保管することができる。これにより、細胞分離用流路１を使用しないときは分解酵素Ａの保存に適した環境で保管し、また、これのみをディスポーザブルとして使用して交換することが可能となる。
【００３５】
本発明の第２の実施形態に係る細胞分離用流路１、細胞分離装置２および細胞分離方法について図４〜図６を参照して以下に説明する。
なお、第１の実施形態と共通する構成については同一の符号を付して説明を省略する。
【００３６】
本実施形態に係る細胞分離用流路１は、図４（ａ）に示されるように、チューブ３の内壁３ａに分解酵素Ａを吸着する吸着剤Ｅが固定されている。
吸着剤Ｅとしては、例えば、ビオチン、プロテインＡまたは分解酵素Ａに対する抗体などが用いられる。また、吸着剤Ｅは、第１の実施形態と同様の方法でチューブ３の内壁３ａに固定されている。
【００３７】
本実施形態に係る細胞分離装置２は、図５に示されるように、収容容器５とコネクタ４との間に配置された酵素注入部９および洗浄液注入部１０と、コネクタ４と回収容器７との間に配置された排出部１１とをさらに備えている。酵素注入部９、洗浄液注入部１０および排出部１１は、それぞれ３方弁１２を介して細胞分離用流路１ならびに収容容器５または回収容器７と接続され、流路が切り替えられるようになっている。
【００３８】
酵素注入部９は、チューブ３内に分解酵素Ａを注入する。
洗浄液注入部１０は、チューブ３内を洗浄するための洗浄液Ｃ、例えば、ＬＲ液をチューブ３内に注入する。また、洗浄液注入部１０から注入されてチューブ３内を流動させられた洗浄液Ｃは排出部１１から排出される。
【００３９】
このように構成された細胞分離装置２を用いた細胞分離方法について、図６を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離方法は、第１の実施形態に係る細胞分離方法の前に、チューブ３内に分解酵素Ａを注入して吸着剤Ｅに吸着させる吸着ステップＳ２１と、分解酵素Ａが注入されたチューブ３内を洗浄液Ｃにより洗浄する洗浄ステップＳ２２とを備えている。
【００４０】
吸着ステップＳ２１において酵素注入部９から分解酵素Ａが注入されると、図４（ｂ）に示されるように、分解酵素Ａが吸着剤Ｅを介してチューブ３の内壁３ａに固定される。そして、洗浄ステップＳ２２を行い、洗浄液注入部１０から排出部１１へ洗浄液Ｃを送液すると、吸着剤Ｅに吸着されなかった過剰な分解酵素Ａが排出部１１から排出されチューブ３内が洗浄される。以下、第１の実施形態と同様にして加温ステップＳ１、送液ステップＳ２および回収ステップＳ３を行うと、回収容器７内に分解酵素Ａが混在しない脂肪由来細胞Ｄの細胞懸濁液を得ることができる。
【００４１】
このように、本実施形態においては、細胞分離用流路１の使用時に分解酵素Ａを内壁３ａに固定させる構成にすることで、一般に活性が十分に保持される保存期間が短い分解酵素Ａであっても、分解酵素Ａのみ新しいものに交換して毎回活性の高い状態で使用することができる。また、分解酵素Ａと細胞分離用流路１との好適な保管条件が異なることからも、本実施形態のように使用時に分解酵素Ａを吸着させるのが好ましい。これにより、より安定した条件で脂肪組織Ｂを分解させることができる。
また、分解酵素Ａが注入されたチューブ３内を洗浄液Ｃで洗浄することにより、吸着剤Ｅに吸着されなかった分解酵素Ａが細胞懸濁液に混入することを防ぐことができる。
【００４２】
上述した第１および第２の実施形態においては、細胞分離用流路が、コイル状に巻かれたチューブを備えることとしたが、これに代えて、図７に示されるように、分解酵素Ａまたは吸着剤Ｅが固定された表面１３ａを対向させて配置された複数の平板状部材１３を備えることとしてもよい。この場合、プレート状のヒータ８が用いられる。
このようにすることで、細胞分離用流路１の構成を簡易にし、製造を容易にすることができる。また、複数の平板状部材１３を厚さ方向に積層して流路を複数形成することにより、同時に流動させることができる脂肪組織Ｂの量を増加させ、処理時間をより短縮することができる。
【００４３】
また、上述した第１および第２の実施形態において、脂肪由来細胞Ｄには、血管内皮細胞、繊維芽細胞、造血幹細胞、血球系の細胞、脂肪由来の幹細胞などが含まれる。ここで、幹細胞は、細胞治療などの目的で脂肪組織から採取される細胞であり、多分化能、自己再生能を有する細胞を指す。また、脂肪組織Ｂとして、ヒト由来の皮下脂肪組織、内臓脂肪組織、白色脂肪組織、褐色脂肪組織等でよく、ヒト等の脂肪部位をハサミ等の鋭利な器具で採取されたもの、脂肪吸引等の方法によって採取されたものなどであってもよい。
【００４４】
また、上述した第１および第２の実施形態のほか、各実施形態等を部分的に組み合わせて形成されるものであってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】第１の実施形態に係る細胞分離用流路の構成を示す図である。
【図２】第１の実施形態に係る細胞分離装置を示す全体構成図である。
【図３】図１の細胞分離用流路および図２の細胞分離装置を用いた細胞分離方法を示すフローチャートである。
【図４】第２の実施形態に係る細胞分離用流路の構成を示す図である。
【図５】第２の実施形態に係る細胞分離装置を示す全体構成図である。
【図６】図４の細胞分離用流路および図５の細胞分離装置を用いた細胞分離方法を示すフローチャートである。
【図７】図１および図４の細胞分離用流路の変形例である。
【符号の説明】
【００４６】
１ 細胞分離用流路
２ 細胞分離装置
３ チューブ（流路）
３ａ 内壁
４ コネクタ
５ 収容容器
６ 送液ポンプ（送液手段）
７ 回収容器
８ ヒータ
９ 酵素注入部
１０ 洗浄液注入部
１１ 排出部
１２ ３方弁
１３ 平板状部材
１３ａ 表面
Ａ 分解酵素
Ｂ 脂肪組織（生体組織）
Ｃ 洗浄液
Ｄ 脂肪由来細胞（生体由来細胞）
Ｅ 吸着剤
Ｓ１ 加温ステップ
Ｓ２ 流動ステップ
Ｓ３ 回収ステップ
Ｓ２１ 吸着ステップ
Ｓ２２ 洗浄ステップ
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞分離用流路、細胞分離装置および細胞分離方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、生体から採取された脂肪組織から生体由来細胞を分離し、これを再生医療などに用いる研究が行われている（例えば、特許文献１参照。）。脂肪組織を消化酵素で分解すると脂肪組織から生体由来細胞が分離されて細胞懸濁液を得る。その後、遠心分離により消化酵素の含まれた上清と生体由来細胞とに分離して上清のみを排出し、再び洗浄液を注入して遠心分離するという作業を繰り返すことにより消化酵素を除去し、純度の高い生体由来細胞を得ることができる。
【０００３】
【特許文献１】特表２００７−５２４３９６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、遠心分離による酵素の洗浄は、洗浄液の注入、遠心分離および排出と多段階で行われ、さらにこれを繰り返して細胞懸濁液に含まれる消化酵素を段階的に除去するため、非常に多くの時間と労力を要するという不都合がある。また、生体由来細胞を得るための全工程において、酵素洗浄に要する時間の割合が大きく、全処理時間を短縮するためには、酵素洗浄に要する時間を短縮することが要求される。
【０００５】
本発明は上述した事情に鑑みてなされたものであって、生体組織から生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができる細胞分離用流路、細胞分離装置および細胞分離方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明は以下の手段を提供する。
本発明は、一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路を備える細胞分離用流路を提供する。
【０００７】
本発明によれば、生体組織を流路内に流動させると、生体組織は流路内の分解酵素と接触して分解されながら流動させられる。そして、細胞が生体組織から分離されて浮遊した細胞懸濁液を得ることができる。この場合に、分解酵素は流路内において固定されているので、細胞懸濁液内に混在することがない。
したがって、本発明によれば、生体組織を流路内に流動させた後に回収するだけで、分解酵素が含まれない細胞懸濁液が得られ、分解酵素を洗浄して除去するための処理が不要となる。これにより、生体組織から細胞を抽出する処理時間を短縮することができる。
【０００８】
上記発明においては、前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されていてもよい。
このようにすることで、流路が直線状に形成される場合と比べ、流路全体の寸法を小さく抑えながら流路を長く形成して生体組織と分解酵素との接触面積を拡大させることができる。また、流路内において乱流が生じやすくなり生体組織が撹拌されながら流動させられる。これにより、生体組織を分解酵素に効率良く接触させて生体組織の分解を促進し、生体組織から得られる生体由来細胞の収率を向上させることができる。
【０００９】
また、コイル形状の中心に筒状のヒータを挿入することにより、チューブとヒータとの接触面積が広く確保され、効率良く均一に流路内を加温することができる。また、このようにして流路内を約３７℃に加温することにより、分解酵素の活性が高められ、生体組織を効率良く分解させることができる。
【００１０】
また、上記発明においては、前記流路が、前記分解酵素が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備えることとしてもよい。
このようにすることで、流路の構造を簡易にし、製造を容易にすることができる。また、複数の平板状部材を厚さ方向に積層することで、全体の寸法を小さく抑えながら複数の流路が形成され、一度に流動させることができる生体組織の量を増加させることができる。
【００１１】
また、上記発明においては、前記流路の両端に他の流路と接続可能なコネクタを備えることとしてもよい。
このようにすることで、本発明に係る細胞分離用流路を他の流路や装置と接続して使用することができる。また、このようにして使用される場合でも、細胞分離用流路のみを取り外して分解酵素の活性が保持される環境、例えば、冷凍で保存することができる。また、細胞分離用流路をディスポーザブルとして使用し、これのみを交換することが可能である。
【００１２】
また、本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、該収容容器に一端が接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路と、該流路の他端に接続された回収容器と、前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記流路内に前記生体組織を送液させる送液手段とを備える細胞分離装置を提供する。
【００１３】
本発明によれば、送液手段により収容容器内の生体組織を流路内に送液させると、生体組織は流路内において分解酵素と接触して分解される。ここで回収容器内に得られた、酵素処理された生体組織を含む細胞懸濁液を、所定時間静置させて層分離させた後、さらに別容器へ送液する等により、生体由来細胞を含む細胞懸濁液を、生体組織から分離して得ることができる。この所定時間としては、例えば、１０分程度でよい。
この場合に、回収容器内の懸濁液内には分解酵素が混在しないので、分解酵素を洗浄して除去する工程が不要となり、生体由来細胞の分離に要する処理時間を短縮することができる。
【００１４】
上記発明においては、前記流路内の温度を制御する温度制御部を備えることとしてもよい。
また、上記発明においては、前記温度制御部が、筒状のヒータであり、前記流路が、前記ヒータの外部にコイル状に巻かれていてもよい。
【００１５】
また、本発明は、一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路を備える細胞分離用流路を提供する。
上記発明においては、前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されていてもよく、また、前記流路が、前記吸着剤が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備えていてもよい。
【００１６】
更に本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、該収容容器に一端が接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路と、該流路の他端に接続された回収容器と、前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記生体組織を前記流路内に送液させる送液手段と、前記流路の途中位置において前記分解酵素を注入する酵素注入部とを備える細胞分離装置を提供する。
【００１７】
本発明によれば、酵素注入部から流路内へ分解酵素を注入すると、分解酵素が流路内の吸着剤によって吸着される。そして、そこへ送液された生体組織は分解酵素によって分解され、回収容器には分解酵素が混在しない細胞懸濁液が回収される。このようにすることで、分解酵素の洗浄が不要となり、生体由来細胞を分離するための処理時間を短縮することができる。
【００１８】
また、流路内に吸着剤のみを設け、生体組織を送液させる直前に分解酵素を流路内に注入して吸着させる構成にすることで、分解酵素のみを別に保存し、また、交換することが可能となる。これにより、保存期限が短い分解酵素であっても、活性が高い状態の分解酵素を使用することができ、生体組織が分解される効率の低下やばらつきを防ぎ、安定して生体組織を分解させることができる。
上記発明においては、前記流路内の温度を制御する温度制御部を備えることとしてもよく、また、前記温度制御部が筒状のヒータを備え、前記流路が前記ヒータの外部にコイル状に巻かれていることとしてもよい。
【００１９】
また、上記発明においては、前記流路内を洗浄する洗浄液を前記流路内へ注入する洗浄液注入部と、該洗浄液注入部から注入され前記流路内を流動した前記洗浄液を排出する排出部とを備えることとしてもよい。
【００２０】
流路内に過剰な量の分解酵素が注入されると、吸着剤によって吸着されなかった分解酵素がその後送液される生体組織とともに回収容器に回収されることが予想される。しかし、分解酵素を注入した後に、洗浄液注入部から洗浄液を注入して排出部から排出することにより、流路内が洗浄されて過剰な分解酵素が除去され、細胞懸濁液に分解酵素が混入することを防ぐことができる。
【００２１】
また、本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を、該生体組織を分解する分解酵素が固定された流路内に流動させる流動ステップを備える細胞分離方法を提供する。上記発明においては、前記流動ステップの後に、得られた生体由来細胞を含有する細胞懸濁液を回収する回収ステップを備えることとしてもよい。
本発明によれば、流動ステップにおいて生体組織を流動させると、生体組織が分解酵素によって分解される。その後、回収ステップにおいては、得られた酵素処理された生体組織を含む懸濁液を、所定時間静置させて層分離させた後、更に別容器へ送液する等によって、生体由来細胞を含む細胞懸濁液を分離して得ることができる。
【００２２】
このようにすることで、分解酵素が混在しない細胞懸濁液が回収されるので、分解酵素を除去するための洗浄工程が不要となり、生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができる。
上記発明においては、前記流動ステップの前に前記分解酵素を加温する加温ステップを備えることとしてもよい。
【００２３】
また、本発明は、生体由来細胞を含有する生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路に、前記分解酵素を流動させて前記吸着剤に吸着させる吸着ステップと、該吸着ステップにおいて前記分解酵素が吸着された前記流路を加温する加温ステップと、該加温ステップにおいて加温された前記流路内に前記生体組織を流動させる流動ステップとを備える細胞分離方法を提供する。上記発明においては、前記流動ステップの後に、前記生体由来細胞を含有する懸濁液を回収する回収ステップを備えることとしてもよい。
【００２４】
本発明によれば、吸着ステップにおいて分解酵素が内部に吸着された流路内を加温ステップにより加温する。そして、流動ステップにおいて、生体組織が分解酵素と接触して分解されながら流動させられる。その後、回収ステップにおいて、得られた酵素処理された生体組織を含む細胞懸濁液を、所定時間静置させて層分離させた後、更に別容器へ送液する等によって、生体由来細胞を含む細胞懸濁液を、生体組織から分離して得ることができる。このようにすることで、生体由来細胞の分離に要する処理時間を短縮することができる。
【００２５】
上記発明においては、前記流動ステップの前に、前記流路内に洗浄液を流動させて洗浄する洗浄ステップを備えることとしてもよい。
このようにすることで、吸着剤によって吸着されなかった過剰な分解酵素を流路内から除去し、分解酵素の細胞懸濁液への混入を防ぐことができる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明によれば、生体組織から生体由来細胞を分離する処理時間を短縮することができるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本発明の第１の実施形態に係る細胞分離用流路１、これを備えた細胞分離装置２ならびに細胞分離方法について、図１〜図３を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離用流路１は、図１に示されるように、内壁３ａに分解酵素Ａが固定されたチューブ（流路）３と、該チューブ３の両端に設けられたコネクタ４とを備えている。分解酵素Ａは、例えば、包括法や共有結合法など、従来使用されている蛋白質の固定方法を用いて内壁３ａに固定されている。
【００２８】
本実施形態に係る細胞分離装置２は、図２に示されるように、細胞分離用流路１と、脂肪組織（生体組織）Ｂを収容する収容容器５と、収容容器５から細胞分離用流路１に脂肪組織Ｂを送液する送液ポンプ（送液手段）６と、脂肪由来細胞Ｄを含有する細胞懸濁液を回収する回収容器７と、細胞分離用流路１内を加温するヒータ８とを備えている。
【００２９】
細胞分離用流路１は、円筒状のヒータ８の外周に沿ってコイル状に巻きつけられ、コネクタ４を介して収容容器５および回収容器７と接続されている。収容容器５内には、洗浄液Ｃで懸濁されてほぐされた脂肪組織Ｂが収容されている。
送液ポンプ６を作動させると、収容容器５内の脂肪組織Ｂが、分解酵素Ａによって分解されながら細胞分離用流路１内を流動させられる。そして、脂肪組織Ｂから分離された脂肪由来細胞Ｄを含む細胞懸濁液が回収容器７内に回収されるようになっている。
【００３０】
このように構成された細胞分離用流路１および細胞分離装置２を用いた細胞分離方法について、図３を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離方法は、ヒータ８によりチューブ３内を約３７℃に加温する加温ステップＳ１と、加温されたチューブ３内に脂肪組織Ｂを流動させる流動ステップＳ２と、流動させられた脂肪組織Ｂから分離された脂肪由来細胞Ｄを含む細胞懸濁液を回収する回収ステップＳ３とを備えている。
【００３１】
加温ステップＳ１において約３７℃に加温されたチューブ３内へ、流動ステップＳ２において収容容器５内の脂肪組織Ｂが流動させられると、回収ステップＳ３において回収容器７内に脂肪由来細胞Ｄおよび分解された脂肪組織Ｂを含む懸濁液が回収される。そして、例えば、これを静置して脂肪組織Ｂが分解されて生じた脂肪分の上層と、細胞懸濁液の下層とに層分離させ、下層のみを別容器へ送液する等することにより、分離された脂肪由来細胞Ｄを含む細胞懸濁液を得ることができる。
【００３２】
このように、本実施形態によれば、分解酵素Ａが内壁３ａに固定されたチューブ３内に脂肪組織Ｂを流動させるだけで、分解酵素Ａが混在しない脂肪由来細胞Ｄの懸濁液が得られる。これにより、分解酵素Ａを除去するための洗浄工程が不要になるので、従来に比べ短い処理時間で脂肪由来細胞Ｄを得ることができるという利点がある。
また、分解酵素Ａをチューブ３の内壁３ａに固定させる構成にすることにより、脂肪組織Ｂが流動させられる流路の断面積が広く維持され、脂肪組織Ｂがチューブ３内で詰まるのを防いで円滑に流動させることができる。
【００３３】
また、円筒形状のヒータ８にチューブ３を巻きつける構成にすることにより、細胞分離用流路１の寸法を小さく抑えながらチューブ３が長く確保され、また、チューブ３内において乱流が生じやすくなる。これにより、脂肪組織Ｂがチューブ３内において撹拌されながらより長い時間流動させられるので、脂肪組織Ｂを効率良く分解酵素Ａに接触させて分解させ、より多くの脂肪由来細胞Ｄを得ることができる。また、ヒータ８とチューブ３との接触面積が広く確保されるので、チューブ３内を均一に効率良く加温して分解酵素Ａの活性を高めることができる。
【００３４】
また、コネクタ４により細胞分離用流路１を収容容器５および回収容器７と接続する構成にすることで、細胞分離用流路１のみを別に保管することができる。これにより、細胞分離用流路１を使用しないときは分解酵素Ａの保存に適した環境で保管し、また、これのみをディスポーザブルとして使用して交換することが可能となる。
【００３５】
本発明の第２の実施形態に係る細胞分離用流路１、細胞分離装置２および細胞分離方法について図４〜図６を参照して以下に説明する。
なお、第１の実施形態と共通する構成については同一の符号を付して説明を省略する。
【００３６】
本実施形態に係る細胞分離用流路１は、図４（ａ）に示されるように、チューブ３の内壁３ａに分解酵素Ａを吸着する吸着剤Ｅが固定されている。
吸着剤Ｅとしては、例えば、ビオチン、プロテインＡまたは分解酵素Ａに対する抗体などが用いられる。また、吸着剤Ｅは、第１の実施形態と同様の方法でチューブ３の内壁３ａに固定されている。
【００３７】
本実施形態に係る細胞分離装置２は、図５に示されるように、収容容器５とコネクタ４との間に配置された酵素注入部９および洗浄液注入部１０と、コネクタ４と回収容器７との間に配置された排出部１１とをさらに備えている。酵素注入部９、洗浄液注入部１０および排出部１１は、それぞれ３方弁１２を介して細胞分離用流路１ならびに収容容器５または回収容器７と接続され、流路が切り替えられるようになっている。
【００３８】
酵素注入部９は、チューブ３内に分解酵素Ａを注入する。
洗浄液注入部１０は、チューブ３内を洗浄するための洗浄液Ｃ、例えば、ＬＲ液をチューブ３内に注入する。また、洗浄液注入部１０から注入されてチューブ３内を流動させられた洗浄液Ｃは排出部１１から排出される。
【００３９】
このように構成された細胞分離装置２を用いた細胞分離方法について、図６を参照して以下に説明する。
本実施形態に係る細胞分離方法は、第１の実施形態に係る細胞分離方法の前に、チューブ３内に分解酵素Ａを注入して吸着剤Ｅに吸着させる吸着ステップＳ２１と、分解酵素Ａが注入されたチューブ３内を洗浄液Ｃにより洗浄する洗浄ステップＳ２２とを備えている。
【００４０】
吸着ステップＳ２１において酵素注入部９から分解酵素Ａが注入されると、図４（ｂ）に示されるように、分解酵素Ａが吸着剤Ｅを介してチューブ３の内壁３ａに固定される。そして、洗浄ステップＳ２２を行い、洗浄液注入部１０から排出部１１へ洗浄液Ｃを送液すると、吸着剤Ｅに吸着されなかった過剰な分解酵素Ａが排出部１１から排出されチューブ３内が洗浄される。以下、第１の実施形態と同様にして加温ステップＳ１、送液ステップＳ２および回収ステップＳ３を行うと、回収容器７内に分解酵素Ａが混在しない脂肪由来細胞Ｄの細胞懸濁液を得ることができる。
【００４１】
このように、本実施形態においては、細胞分離用流路１の使用時に分解酵素Ａを内壁３ａに固定させる構成にすることで、一般に活性が十分に保持される保存期間が短い分解酵素Ａであっても、分解酵素Ａのみ新しいものに交換して毎回活性の高い状態で使用することができる。また、分解酵素Ａと細胞分離用流路１との好適な保管条件が異なることからも、本実施形態のように使用時に分解酵素Ａを吸着させるのが好ましい。これにより、より安定した条件で脂肪組織Ｂを分解させることができる。
また、分解酵素Ａが注入されたチューブ３内を洗浄液Ｃで洗浄することにより、吸着剤Ｅに吸着されなかった分解酵素Ａが細胞懸濁液に混入することを防ぐことができる。
【００４２】
上述した第１および第２の実施形態においては、細胞分離用流路が、コイル状に巻かれたチューブを備えることとしたが、これに代えて、図７に示されるように、分解酵素Ａまたは吸着剤Ｅが固定された表面１３ａを対向させて配置された複数の平板状部材１３を備えることとしてもよい。この場合、プレート状のヒータ８が用いられる。
このようにすることで、細胞分離用流路１の構成を簡易にし、製造を容易にすることができる。また、複数の平板状部材１３を厚さ方向に積層して流路を複数形成することにより、同時に流動させることができる脂肪組織Ｂの量を増加させ、処理時間をより短縮することができる。
【００４３】
また、上述した第１および第２の実施形態において、脂肪由来細胞Ｄには、血管内皮細胞、繊維芽細胞、造血幹細胞、血球系の細胞、脂肪由来の幹細胞などが含まれる。ここで、幹細胞は、細胞治療などの目的で脂肪組織から採取される細胞であり、多分化能、自己再生能を有する細胞を指す。また、脂肪組織Ｂとして、ヒト由来の皮下脂肪組織、内臓脂肪組織、白色脂肪組織、褐色脂肪組織等でよく、ヒト等の脂肪部位をハサミ等の鋭利な器具で採取されたもの、脂肪吸引等の方法によって採取されたものなどであってもよい。
【００４４】
また、上述した第１および第２の実施形態のほか、各実施形態等を部分的に組み合わせて形成されるものであってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】第１の実施形態に係る細胞分離用流路の構成を示す図である。
【図２】第１の実施形態に係る細胞分離装置を示す全体構成図である。
【図３】図１の細胞分離用流路および図２の細胞分離装置を用いた細胞分離方法を示すフローチャートである。
【図４】第２の実施形態に係る細胞分離用流路の構成を示す図である。
【図５】第２の実施形態に係る細胞分離装置を示す全体構成図である。
【図６】図４の細胞分離用流路および図５の細胞分離装置を用いた細胞分離方法を示すフローチャートである。
【図７】図１および図４の細胞分離用流路の変形例である。
【符号の説明】
【００４６】
１ 細胞分離用流路
２ 細胞分離装置
３ チューブ（流路）
３ａ 内壁
４ コネクタ
５ 収容容器
６ 送液ポンプ（送液手段）
７ 回収容器
８ ヒータ
９ 酵素注入部
１０ 洗浄液注入部
１１ 排出部
１２ ３方弁
１３ 平板状部材
１３ａ 表面
Ａ 分解酵素
Ｂ 脂肪組織（生体組織）
Ｃ 洗浄液
Ｄ 脂肪由来細胞（生体由来細胞）
Ｅ 吸着剤
Ｓ１ 加温ステップ
Ｓ２ 流動ステップ
Ｓ３ 回収ステップ
Ｓ２１ 吸着ステップ
Ｓ２２ 洗浄ステップ
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路を備える細胞分離用流路。
【請求項２】
前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されている請求項１に記載の細胞分離用流路。
【請求項３】
前記流路が、前記分解酵素が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備える請求項１に記載の細胞分離用流路。
【請求項４】
前記流路の両端に他の流路と接続可能なコネクタを備える請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞分離用流路。
【請求項５】
生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、
該収容容器に一端が接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路と、
該流路の他端に接続された回収容器と、
前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記流路内に前記生体組織を送液させる送液手段とを備える細胞分離装置。
【請求項６】
前記流路内の温度を制御する温度制御部を備える請求項５に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
前記温度制御部が、筒状のヒータを備え、
前記流路が、前記ヒータの外部にコイル状に巻かれている請求項６に記載の細胞分離装置。
【請求項８】
一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路を備える細胞分離用流路。
【請求項９】
前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されている請求項８に記載の細胞分離用流路。
【請求項１０】
前記流路が、前記吸着剤が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備える請求項８に記載の細胞分離用流路。
【請求項１１】
生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、
一端が前記収容容器に接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路と、
該流路の他端に接続された回収容器と、
前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記生体組織を前記流路内に送液させる送液手段と、
前記流路の途中位置において前記分解酵素を注入する酵素注入部とを備える細胞分離装置。
【請求項１２】
前記流路内の温度を制御する温度制御部を備える請求項１１に記載の細胞分離装置。
【請求項１３】
前記温度制御部が、筒状のヒータを備え、
前記流路が、前記ヒータの外部にコイル状に巻かれている請求項１２に記載の細胞分離装置。
【請求項１４】
前記流路内を洗浄する洗浄液を前記流路内へ注入する洗浄液注入部と、
該洗浄液注入部から注入され前記流路内を流動した前記洗浄液を排出する排出部とを備える請求項１１から請求項１３のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項１５】
生体由来細胞を含有する生体組織を、該生体組織を分解する分解酵素が固定された流路内に流動させる流動ステップを備える細胞分離方法。
【請求項１６】
前記流動ステップの後に、得られた生体由来細胞を含有する懸濁液を回収する回収ステップを備える請求項１５に記載の細胞分離方法。
【請求項１７】
前記流動ステップの前に前記流路内を加温する加温ステップを備える請求項１５または請求項１６に記載の細胞分離方法。
【請求項１８】
生体由来細胞を含有する生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路内に、前記分解酵素を流動させて前記吸着剤に吸着させる吸着ステップと、
該吸着ステップにおいて前記分解酵素が吸着された前記流路内を加温する加温ステップと、
該加温ステップにおいて加温された前記流路内に前記生体組織を流動させる流動ステップとを備える細胞分離方法。
【請求項１９】
前記流動ステップの後に、得られた生体由来細胞を含有する懸濁液を回収する回収ステップを備える請求項１８に記載の細胞分離方法。
【請求項２０】
前記流動ステップの前に、前記流路内に洗浄液を流動させて洗浄する洗浄ステップを備える請求項１８または請求項１９に記載の細胞分離方法。
【請求項１】
一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路を備える細胞分離用流路。
【請求項２】
前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されている請求項１に記載の細胞分離用流路。
【請求項３】
前記流路が、前記分解酵素が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備える請求項１に記載の細胞分離用流路。
【請求項４】
前記流路の両端に他の流路と接続可能なコネクタを備える請求項１から請求項３のいずれかに記載の細胞分離用流路。
【請求項５】
生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、
該収容容器に一端が接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素が固定された流路と、
該流路の他端に接続された回収容器と、
前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記流路内に前記生体組織を送液させる送液手段とを備える細胞分離装置。
【請求項６】
前記流路内の温度を制御する温度制御部を備える請求項５に記載の細胞分離装置。
【請求項７】
前記温度制御部が、筒状のヒータを備え、
前記流路が、前記ヒータの外部にコイル状に巻かれている請求項６に記載の細胞分離装置。
【請求項８】
一方から他方へ向けて生体由来細胞を含有する生体組織を内部に流動させ、前記内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路を備える細胞分離用流路。
【請求項９】
前記流路が、チューブをコイル状に巻いて形成されている請求項８に記載の細胞分離用流路。
【請求項１０】
前記流路が、前記吸着剤が固定された表面を対向させて配置された複数の平板状部材を備える請求項８に記載の細胞分離用流路。
【請求項１１】
生体由来細胞を含有する生体組織を収容する収容容器と、
一端が前記収容容器に接続され、内部に前記生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路と、
該流路の他端に接続された回収容器と、
前記収容容器から前記回収容器へ向けて前記生体組織を前記流路内に送液させる送液手段と、
前記流路の途中位置において前記分解酵素を注入する酵素注入部とを備える細胞分離装置。
【請求項１２】
前記流路内の温度を制御する温度制御部を備える請求項１１に記載の細胞分離装置。
【請求項１３】
前記温度制御部が、筒状のヒータを備え、
前記流路が、前記ヒータの外部にコイル状に巻かれている請求項１２に記載の細胞分離装置。
【請求項１４】
前記流路内を洗浄する洗浄液を前記流路内へ注入する洗浄液注入部と、
該洗浄液注入部から注入され前記流路内を流動した前記洗浄液を排出する排出部とを備える請求項１１から請求項１３のいずれかに記載の細胞分離装置。
【請求項１５】
生体由来細胞を含有する生体組織を、該生体組織を分解する分解酵素が固定された流路内に流動させる流動ステップを備える細胞分離方法。
【請求項１６】
前記流動ステップの後に、得られた生体由来細胞を含有する懸濁液を回収する回収ステップを備える請求項１５に記載の細胞分離方法。
【請求項１７】
前記流動ステップの前に前記流路内を加温する加温ステップを備える請求項１５または請求項１６に記載の細胞分離方法。
【請求項１８】
生体由来細胞を含有する生体組織を分解する分解酵素を吸着する吸着剤が固定された流路内に、前記分解酵素を流動させて前記吸着剤に吸着させる吸着ステップと、
該吸着ステップにおいて前記分解酵素が吸着された前記流路内を加温する加温ステップと、
該加温ステップにおいて加温された前記流路内に前記生体組織を流動させる流動ステップとを備える細胞分離方法。
【請求項１９】
前記流動ステップの後に、得られた生体由来細胞を含有する懸濁液を回収する回収ステップを備える請求項１８に記載の細胞分離方法。
【請求項２０】
前記流動ステップの前に、前記流路内に洗浄液を流動させて洗浄する洗浄ステップを備える請求項１８または請求項１９に記載の細胞分離方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公開番号】特開２０１０−１０４２５７（Ｐ２０１０−１０４２５７Ａ）
【公開日】平成２２年５月１３日（２０１０．５．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２７７０７０（Ｐ２００８−２７７０７０）
【出願日】平成２０年１０月２８日（２００８．１０．２８）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年５月１３日（２０１０．５．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月２８日（２００８．１０．２８）
【出願人】（００００００３７６）オリンパス株式会社 (11,466)
【Ｆターム（参考）】
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